Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Гидролизаты животных белков - основа питательных сред для промышленного производства биопрепаратов

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Гидролизаты животных белков - основа питательных сред для промышленного производства биопрепаратов"

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ им. Я. Р. КОВАЛЕНКО РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК

На правах рукописи

СКИЧКО Николай Данилович

ГИДРОЛИЗАТЫ ЖИВОТНЫХ БЕЛКОВ-ОСНОВА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ ПРОМЫШЛЕННОГО ПРОИЗВОДСТВА БИОПРЕПАРАТОВ

03.00.06 — вирусология 03.00.07 — микробиология

Диссертация в виде паучного доклада па сонскапие ученой степени доктора биологических наук

Москва — 1992

Работа выполнена на Государственном Щелковском бнокомбииатс, во Всероссийском Государственном научно-контрольном институте ветпрепа-ратов, Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии им.Я. Р. Коваленко, Всероссийском научно-исследовательском и технологическом институте биологической промышленности.

Официальные оппоненты:

1. Доктор ветеринарных наук Белоусова Р. В.

2. Доктор ветеринарных наук Сухарев О. И.

3. Доктор биологических наук Ярцев М. Я.

Ведущая организация—Научно-исследовательский ветеринарный институт нечерноземной зоны Российской Федерации.

Защита состоится „_ 1992 г. в .Аг " часов

на заседании специализированного Совета Д.020.28.02 во Всероссийском научпо-нсследовательском институте экспериментальной ветеринарии им. Я. Р. Коваленко, по адресу: 10Э472, Москва, Кузьминки, ВИЭВ.

С диссертацией в виде научного до.слада можно ознакомиться в библиотеке ВИЭВ. -

"Научный доклад разослан . "7 * I/о_1992 г.

Ученый секретарь специаднзпрованного Совета,

кандидат ветеринарных наук Ф. Г. Терешков

Подписано в печать 10.07.92 Зак. 626

Формат 60x84/16 Тираж ПО

Москва. Типография РАСХН

РОССИЙСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ _БИБЛИОТЕКА

т-,, I I. ОЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОШ

!1.1. Актуальность проблемы.

Постоянный рост ассортимента и объем выпускаем« вакцин, диягностикунов, внршпивяние микроорганизмов-продуцентов, а такие клеточных культур требует значительного расхода питательных сред и ингредиентов, в том числе высокочистых реагентов и веществ импортного производства.

В начале 50-х годов ученые разработали ыетод выращивания изолированных из тканей клеток in vitro. В частности,R.Dulbecco (1952), А.Кг-эсоса (1952) .R.Dulbecco и Н.Toßt (1954) доказали возможность размножения клеток ткани эмбрионов, л A.Frich и T.Geatorto (1953) - меток тестикул обезьяны в однослойной культуре.

Рлчадсд eoücis питательных сред, удовгетворяга^х питятелыш" потребности пзолировшигих от тканей меток in vitro , учете ходили кэ того, что пультпвяруеиие in vitro клетки потребляют дли ссозй : t' "л!! 2 д ея г е л ь' ID с т и те .те вецестга, что имеются и в ор-

Парим солввнм раствором для тканесга культур был использо-гаи раствор ТггродаШ. Tyrodo , ¡940), затем Эрла (f/.Eorla, 1943) п Хешгеа (J.Hancfoj -и КЛа11оса,1949).

A.?iooher (1946) впервые разработал питательную среду на основе буферного раствора с добавлением синтетических аиглокислот дгя гкрацягання культур меток. Для вулиюзирозанпя ялетоя предложены среды: 199 (J.Morgan et al. , 1950), Игла (H.Eagle, R.Hobel ,1956), гвдролизаты лактальбугяша ( J.Helnick, J.Hiordan ,1952). Вопрос замены отдельных ккпортгаос ком-

понентов на отечественные при производстве ряда биопрепаратов я

и других целях в биотехнологии решали.многие ученые нашей страш С Бабич Ы.А., 1947-1970; Плоскирев H.B., 1967; Раскин £.М.,1976; Осидзе Д.Ф. о соавт.,IS82; Сергеев В.А. с соавт.,19Ь2; Сергеев В.А. с соавт.,1983; Малышева K.M. с соавт., 19БЗ; Курносов А.Н. с соавт.,1965; Дьяконов Д.П.,1985; Простяков А.П. с соавт., 1986; Оковытый A.C. с соавт.,1986 и другие).

Многие предложения завершились внедрением в промышленное производство, однако и в настоящее время биологическая промышленность продолжает закупать импортные гидролизаты для конструирования питательных сред для производства биопрепаратов. В частности, это относится к изготовлению противояцурной вакцины из вируса, репродуцированного по методу Френкеля, вакцинам против болезней Нарека птиц, ркнопневмонии лошадей, тейлериоза крупного рогатого скота и др.

Поэтому возникла необходимость проведения исследований по разработке промышленной технологии изготовления ряда биопрепаратов с использованием отечественных ингредиентов.

Изложенное, а также наличке исходного сырья, отходов производства и послужили основной предпосылкой для проведения нами многолетних исследований по осеспечэнию промышленного производства питательными средами на основе отечественных гидролизатов и ингредиентов.

1.2. Цель и задачи исследований. Целью наших исследований являлась - разработка технологии изготовления питательных сред на основе гидролизатов для бактериальных и клеточных культур, а также получение других ингредиентов для научных исследований и промышленного изготовления биопрепаратов на биофабриках и Сио-комбинагах, требующих большого количества культур клеток, вирус-

шос или бактериалышх антигенов.

В связи с этим необходимо было репить следующие задачи:

- Определить исходное непищевое Оелоксодержощее сырье, пригодное для производства гидролизатньнс основ питательных сред, показатели и величины их стандартизации.

- Разраоотать прокшлениую технологию получения гвдролиэатов белкового происхождения для питательных сред бактериальных и хлеточных культур.

В связи с этим:

- определить оптимальные условия подготовки сырья и проведения гидролиза белков в лабораторных условиях и в производстве о использованием промышленного технологического оборудования, имеющегося на оиопредприктиях;

- изучить ф1эико-хиыические и ростобеспечивасдае свойства бактериальных питательных сред, конструированных на основе гид-ролизатов вторичного белонсодержащего сырья с цельп замени мяса пищевых категорий при изготовлении вакцин;

- изучить свойства питательных сред для клеточных культур, изготовленных на основе гидролизата мышечных бёлков крупного рогатого скота (КРС) - взамен гидролизата лактальбушна (Г1А), производимого фирмами"Дифко"(США), "Иерк'Ч Германия) и др.

- Изучить культурально-морфодогические свойства первичных, перевиваемых и переживающих тканевых культур, выращенных в питательных средах на основе ферментативного гидролизата мышечных белков ($ГН-С), а также среды для транспортировки переживающей ткани (эксплантатов слизистой оболочки языка крупного рогатого скота).

- Определить культурально-*ор$ологические и антигенные

ь

свойства производственных штаммов, предназначенных для изготовления вакцин против бактериальных инфекций.

- Внедрить в прошшленну» технологию изготовления оиопрепа-ратов питательные среды на основе гидролизатов, ингредиентов и химреактивов.

- Использовать в промышленном производстве отечественные питательные среды не основе гидролизатов и другие компоненты при выращивании первичных и перевиваемых клеточных культур в качест ве биологических систем для получения антигенного материала.

- Оценить стандартность и стабильность биопрепаратов, изготовленных с использованием отечественных питательных сред, ингредиентов и химреактивов.

- Разраоотать нормативно-техническую документами», дополнения и изменения к ней на новые Оиопрепараты с учетом изменений в технологии.

1.3. Научная новизна результатов исследования. Определены виды исходного сырья, пригодного для получения полноценных гидролизатов в качестве основ питательных сред для оактериалышх и клеточных культур, проведена его стандартизация но физико-химическим и биологическим показателям. Установлено, что гидролизам животных белков содержат 18-19 аминокислот, в том числе во! незаменимые, с сохранением циклических и триптофана.

- Разработаны спосоон подготовки сырья и определены оптимальные условия проведения гидролиза: экспозиция, температура, рН среды, концентрация фермента, фецыенг-суостратние огшпие-нил, коэффициенты протеолнза и глубины гидролиза.

Впервые сформулированы и представлены в ввдо чрюоьа--

нмя,предъявляемые к гидролизатаы по физико-химическим сноПотичы:

б

качественному н количественному составу яшногаслсг, составу ПСИТВДОВ, УРЛСВОДОП, ЛИПГДОВ, р'Л, ИО!11'.->й ("Л,"? суди и сг мглгр-

KOCT'.l.

Ка основа изучения истабслических npcurccca ш;*шо обоснована замена импэртимх гидролязптов, кнгр*днгнтсв и хтар^.зктиЕСБ нл отечостЕсннно при времкгяеннои производстве Fiiaysi против инфекционных и лрогоэейнкх болезней.

Научная новизна рзЗотв подтверждена îibicî;ck;î:v,i сг;i-T'"-"ьстir»-

ш :

- ff 1025722 "Питательная среда для к;,льтур кд--тол живогнкх" ;

- S 1081853 "Способ изготовления прстиеоп.тур-п.'х ¡ша:ии";

- I? 277124 "Способ изготовлагая в»*«дпдаый кгчткпвгхг"' Я гакичны";

- 3 273465 "Калюнтрироппнизл протизглсуркая

- !f 1554375 "Способ счистки и ксшсервйроБ»»кия гпрусч пцуря*' ;

- J5 1610610 "Способ вакцинации крутого рогатого скота";

- ? 4022739/13 ( 052633) "Способ изготовления гатаинк против теЯлериспа";

- Я 226429 "Адаптация вируса пцуря с исг.ользорзние.ч питательно tî среды с 5ГМ-С".

Т.ч. Практическое значение- результатов исследований Гл основлнии результатов исследования рззработянп и внедри:" » производство ррогкпленная технология изготовления Смковкх глч-рэлизатоп л гытагельнтх еррд нэ основе для внраслЕзния бакте-рпальнкх и клетсчи."х культур, а тяетэ предложен« отечественны'?

шлц.пии!«.' и для промышленного производства бпопре-

РизриЗогиы угвср&дет 1УВ ЦСХ СССР нормативно-техьмческая ^..куиентецик н&:

- 51еп".ч;н "ь" сукой для бактериологически целей;

- гьпзтопсы'он сухой для бактериологических целей;

- гидролмзбт кшачиых белков ферментативный сухой Ш"Ы-С);

- вакцина против тейлериоза крупного рогатого скота жидки; ьультуральная;

- вирус-вакцина против ршопневмонии лошадей.

А теюка девять изменений и дополнений к инструкциям но изготовлению и государственному контролю вакцин против:

- болезни Ыарека кур;

- ньвкаслской болезни птиц;

- ринопневмонии лошадей;

- тейлериоза крупного рогатого скота;

- 3-х валентной, биьалентной и моновалентных противожцурных ыщин из штаммов вируса ящура типов А,О,С.

Эффективность ог внедрения разработок, связанных с использованием отечественных гидролизатов только на Щелковском блоком-илнате па расчетам планово-экономической службы составляет 250-Х-зкс.рублей в год в ценах 19У0 года.

1.5. Основные положения, которые выносятся на-защиту.

1.5.1. Препараты и НЗД на "Гепатопептон сухой для бактериологических целей", "Пептон "Б" сухой для бактериологических ць» лей, Гидролизат мышечных белков ферментативный сухой (СШ-С) для питательных сред тканевых культур и У дополнений к ЬТД на изготовление и контроль ьакцин-против болезнг-Н животных вирус •

ной, бактериальной и протозойной этиологии.

1.5.2. Результата вирусологических, микробиологических и биохимических исследований ростобеспечивпгл^х свойств предлагаемых питательных сред, схонструированн'гх на пеноге пи1ролиз!>тоя животных Оелнов.

1.5.3. Научное обоснование возможности замены иотюртнкх сред на основе гкдролизатов, ингредиентов и химрсактивов, используемых при производстве биопрепаратов на отечествнип'е,

1.5.4. Результаты исследований по селекции, адаптации, выращиванию и использованию штаммов вирусов (гяура, ринопневконии лошадей, вируса герпеса индеек) в качестве антигенного'катерил-ла при производстве вакцин против инфекционных.болезней и изучения ншуногенности и стабильности производственных вакцин.

1.6. Апробация работа. Материалы диссертации в вэде тучного доклада доложены и обсуждены на: Всесоюзных конференциях по научным основам технологии промышленного производства ветеринар-ннх биологических препаратов, 1978, 1981, 1987 гг. БНИиТИБП, на ветеринарной секции научно-технического совета НСХ СССР, конференции, посвященной 50-летии ВГНКИ ветпрепаратов, Ы., 1901; заседаниях Ученых Советов ВГНКИ ветпрепаратов 1978-1987 гг. и ВНИиТЙБП - 1976-1992 гг.; научной конференции, посвященной ТО-летию Великой Октябрьской социалистической революции, 1987, Владимир. Материалы докладывались и полупили положительную оценку на совещаниях Главного управления биологической прокышленнос-ти Госагропроиа СССР в 1983, 1986, 19В7, 1988, 1989 гг.

Разработки по катериалаы диссертационной работы демонстрировались на ВДНХ СССР и удостоены Диплома Почета, трех серебрян-иых и одной бронзовой медалей /удостоверения 9 11321, Щ 12192, % 12272 и П 4У947/.

3., jfiuüci'Ky г>.х;юлсп:и изготовления вакцины протпь тсйде^иоаа ьруяиого рогатого скота автору присвоено почбраое оше Лвдк&-Государственной прслиш.

1.У. публикация результатов исследований. lío шторлакаы даа-е^:тации оьуЗдикэьыю 20 рибот, помещенных в материалах Ьсосскл--mtx научна ко^ереэдай, трудах Bií3B, ВГшЛ, Bitóill, BlirfaTiHl, :;.y¡:ucj:e "Вопроси вирусологии" и других изданиях, где вздожыш ссновиие во положения.

l.b. внедрение результатов исследований.

lía основании результатов исследований раэр&бС1«.ш и внедрена б производство про.млишнная технология изготовления Оелкоьш гидролазатое и гцдролиэативс сред для выращивания й&етериалшяс и клеточных культур, предложены отечественные ингредиенты и хи>.:-рьактиЕа вместо импортных, используеше при производство протн-вовирусшлс, проаивоОактервйшлс, противоиротоэойннх бионрепаразог-(Целковский, Алма-Атинский биокомбинатн, Днепропетровская, Приволжская, Армавирская, Курская, Гожульская, Сумская, Омская tíno-фабрики, Покровский завод биопрепаратов, ШШ, ЬШпТЖП),

1.9. Объем и структура научного доклада. г1аучиый доклад изложи та 4У страницах, содержит 12 таблиц, I рисунок н включает «дедуяцие раздели: обцая характеристика раОоти, материалы и методы исследований, результаты исследований, выводи, практически;-; предложения, список работ, опубликованных по теме диссертационно го доклада.

2. сошжзашк иссл-г^вд^а

2.1. Материалы и меговд

Основной объем исследовании вглолнеп ъ 1973-ÍVíjü ir. i.a ю-сударственноы Щелковском биокомбинате, во ШШИ-ветпракцжтоь,

ВНйиТИБП, ВГОВ и нп отдельных оиопредприятиях ГлавОиогфома Гсс-агролроиа СССР, часть исследований проведена во ВНИИ и ВНИИЕЕиU,

Отдельные этапы исследования входили » зпдягио 12ГЗ ВПЖИ еегпрепярагов и тему W 9 ВНИиТИБД.

2.1.2, Животные. Непосредст эонио в огз.*тсix, з тдяжр для контроля экспериментальных серий 2скц;::ш било использовяно 115-10 голов крупного рогатого скота (К?С) в возрасте 1,5-2 лет массой наивнее 250 кг, 63 жеребенка б-23-меспчкого возраста, клинически здоровых, не подвергавшихся обработке антигельминтикэми; МО подсвинкоэ 2-4-месячного гоэраста, неикмуниэированных против гспура и неоораоотанных антигельминтиками; 37840 ксрских евино?; мессой 400-500 г, которые перед введением з опыт яярантинировп-лись 21 день; 160 сирийских хомяков в возрасте 1-1,5 мссгцев. 35ö0 белых килей массой 18-22 г; 3900 сдааоутачк:« и "50 15-су-точннк цыплят, получении^ инкубационным спосоОом из яиц здоровой nvitrn, иевакцинированной против бодрзкк Марека.

2.1.3. Сырье для получения гидролизятов. Печеночный отжим после экстрагирования фарта печени (гепатоггептон); туши овец из хозяйств, благополучных по инфекциокнъа заболеваниям после извлечения мозга для получения сухой мозговой вякциш против бо-иенства (пептон "Б"). В качестве ферментов использовали пепсин, панкреатин, трипсин и как источник фермента - поджелудочную железу. При кислотном гидролизе применяли HCl в разных концентрациях. Гидролиз проводили сначала в лабораторных условиях, а затем в производственных, используя стандартное промышленное оборудование.

В белковых гвдролизатах для приготовления питательных сред с цель» культивирования бактерий, сразу после изготовления их

(ухой формы истодом распылительной сушки определяли: вневший сад, цвет, запах, растворимость, наличие посторонних примесей, рН 1% раствора, фракции азота, зольный остаток, ростобеспечиваю-цие свойства по требованиям ГОСТ I 1380576 на "Пептон сухой ферментативный дет бактериологических целей".

Биохимические показатели такие как общий, остаточный и амин-ш'Я азот определяли общепринятыми методами Къельдаля, Несслера, белок по погоду Доури, качественный и количествешшЙ состав аминокислот на автоматическом анализаторе КЬА-5 фирмы Хитачи, пептидов - методом колоночной хроматографии на сефадексе и по биуретовой реакции в лаборатории биохимических методов контроля и стандартизации ветпрег.аратов ВГНКИ под руководством профессора А.П.Простякова.

Способность сред поддерживать рост бактерий определяли с использованием тест-культур, рекомендованных комитетом ВОЗ по питательные средам Staphylococcus aureus "Ласманов", Escherichia coli ит.675,St, iaocalia шт.6783 и дополнительно St. puro-genas bicte, Corynebacteriua diphteroidee 1911.'

На испытуемых средах выращивали производственные штаммы ■ Vaeteurolla nrulfcocida, Bact rlmoiopathias suis, Br.abortus jut. » IS и Ш 82, Clostridium chauvoei.

Из антигенсодеряащего материала готовили экспериментальные серки вакцин: против пастереллеза, рожи свиней, эмфизематозного карбункула и сухую вакцину против бруцеллеза из штамиов 1У и 82. После проведения госконтроля экспериментальных серий вакцин было изготовлено 105 промышленных серий вакцины против бруцеллеза кз штаммов 19 и 82 ка Щелковском биокомбинате, 20 серий вакцины против пастереллеза ш Днепропетровской биофабрике, 31 серия

вакцины против эмфизематозного карбункула на Армавирской биофабрике.

Все вакцины готовились согласно деЯствутацих инструкций по их изготовлению и контроле.

2.1.4. Культуры тканей. В работе использованы: эксплантаты эпителия языка крупного рогатого скота, клетки куриных эмбрионов (ККЭ), эмбрионов перепелов (КПЗ), почки свиней (ПС), клетки лим-фоидннх органов крупного рогатого скота.

Питательные среды для тканевых культур готовились на основе импортны* гидролизатов лаитальбумина (Г1А) фирм "Дифко" (США) и "Мерк" (ФРГ), с ними сравнивалась ростобеспечиваицая эффективность сред ка основе предлагаемого ферментативного гидролизата мышечных белков -^ПИ-С. В отдельных опытах использовались синтетические среды Игла и 199.

Сырьем для получения гидролизатов при конструировании питательных сред тканевых культур служила ткань скелетных ншц круп ного рогатого скота. Ее получали от животных зыпе среднеЯ упи-танностьг в возрасте до 5 лет и не подвергали замораживания, В гидролизата* срезу после изготовления их сухой формы методом распылительной сушки определяли: внешний вид, цвет, запах, растворимость, наличие посторонних примесей, рН 1% раствора, фракций азота, зольный- остаток, качественный и количественный состав аминокислот и пептидов. Ростобеспечиваицие свойства ферментативного мышечного гидролизата в составе питательной среды оценивали путем выращивания в ней перевиваемой линии клеток почки поросенка (ПП) согласно требованиям, разработанных нами в соавторстве (17 46-12-20-00) /В.А.Сергеев, Л.П.Дьяконов и др./.

Для определения способности питательной среда на основе

1ГМ-С обеспечивать рост клеточных культур применяли первичные культуры почки свиньи (ПС), бычьей почки (Ell) и почки крольчонка (крП), а также перевиваемые линии клеток BHK-2I, клон 13 и "ЯП".

Параду с этим испытывали среду с ФШ-С для перекивания ткани эпителия языка крупного рогатого скота. Контролем служили среды на основе ГЛА фирм "Дифко", "Мерк" и"$ерак".

Критерием оценки качества среды на основе ЙГМ-С слукило время формирования сплошного монослоя (4-5 сутки), индекс пролиферации, морфология клеток и сохранение монослоя (до 10 суток),

В лабораторных, а затем в производственных условиях были проведены опыты по выращиванию на клеточных культурах вирусов ящура (по Френкелю типов О,А,С), вируса герпеса индеек и вирус:, ринопневмонш лошадей. В последующей зтот вируссодержащий материал был использован в качестве антигена для составления ткци:; согласно инструкциям по их изготовлению и контролю.

Особый раздел составили исследования по. культивированию ши фоидных клеточных культур и выращиванию в них вакцинного штамма Iheilexia anmilata для изготовления живой вакцины против гейяе-риоза крупного рогатого скота.

Статистическую обработку результатов экспериментов проводил; в лаборатории экономики ВНКиТИБП на ЭВМ Ш-4 по стандартным программам пакета статистического анализа данных (Ыаслак A.A.).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ 1ШЩЦОВАНИ0 3.1. Сырье, его стандартизация, подготовка и гидролиз Печеночный отжим - отход, накапливающийся на биопредприятш« при изготовлении печеночного экстракта. В нем содержится в среднем 67$ води и ЗЗЗр сухого остатка, в состав которого входит боле

753}, белка, есть сл~ди .тир» к около I,"* в«,сг"ал;»с? г^лышй сс • тотох.

Отходи прсизвогссткл сухой козгосой вппклг пяитиа безенстич

Для ее изготовления используют голог-нсЛ л сгашной мозг oj»«.«' кассой 25-30 кг поело эарпкя'ил их вируссм ^сгяжетсд. Гуди и все внутренние органы после отбора мозгороС. тк?.ш; утг.липируптс \ или перерабатываются на нясокостнув муку. В таких производств':-: ■ них отходах содержится до 30J сухого сст-атха с ГШ болт, IC& жира и более I% золы.

Печеночный отяш и туга молодняка овеч - отходы про из и оде т энтирабичеекой вакцинн были взяты наш з качество «сходного с; л - -при получении падролизагов для бактерлпльккт сигятелтж. срез, взамен перевара Хоттянгера.

Снрьеи для изготовления гситателышх сред тсаиегкх культур еяужяял мышечная ткань крупно го рогатого скота, специально подготавливаемая для гидролиза, яаж указано с разделе 2.1.4.

Основнюя этапами получения гвдролизатоа из бллохсодеркадр:. сурья являптся: подготовка его г гидролизу, сиеяипяшв а зодоЛ -добавление прогеоллтнчэсетх' феряонтов - лроведтгниэ гидролиза -отделение от негидролизогакаайся части cjaScrpsra - фильтрован".; гидролизата - концентрированна методсм кгпаряЕашя - распиаатвл* ■ нал супга - расфасовка - контроль.

Более детально процесс прокызлешоЯ технологии на приявр» СП1-С представлен на схеме (рад. I).

Пря ферментативной гидролизе часть печеночного ijajm и баранина остается нерасщепленной. Для полного его расщепления применяли кислотный гидролиз. Готовый кислотный гидроляэат смешивали с ферментативным в соотношении 1:2 и использовали в составе бак-

трриальшх питательных сред meato псреьпгл Яегмнгеи»

При получении гадролмзата для п;пг>гг\шяяс cr-д г как- г.ч ку.-н -тур условия ферментативного гидролиза ргсюшго стла-ятоеь. Со;;г -ношение измельченного сырья и воды ссс?аг>лл.-о 1:2, Kcií»i»:«Tjrnf:«t панкреатина 4% или 46% поджелудочной «елки» IíFC, p'I cy6crpj3 7,6-7,8, продолжительность гвдролкзэ nj" .{2-15*0 - та со г. Коэффициент протеолиза нэ менее 0,£Л,

3.1.1. Физико-химические своПстаг га'.тпгчи-

ithx сред бактериальных культур.

¡Ферментативные гвдролиз&тя печеночного от?ааст и бара;:.',1": после их отделения от осадка представляют собой прозрачную х'.п-кость светло-коричневого цвета со специфическим naías'.nt, <Л -6,8-7,2.

Результаты определения общего, остаточного г, аиикедго ллк, аминокислотного и пептидного состава в гидролиэатсх пгтгттгг? отжима и баранины приведет в таблице I.

Как видно из таблицы I, ферментативные гидролиза«: пл сг;д;р-жанив фракций азота, в основном, аналогичны перегару лотгингер. но в них несколько ниже уровень аыинного азота" я аияноккомг п вше содержание полипептидов.

Кислотные гидролиэаты нерасцепленных ферментов субстратен представляют собой темно-коричневуп жидкость, содержат 5fc(M" общего, 520+42 остаточного, 176+21 ашнного, 120+40 азота аминокислот и 126+11 ю% полилептвдов, триптофан в такта гедг".*«-..--тах отсутствует.

Н^слотныв гидролизати содержали только слад?.' гистядша, «г™ • лина, тирозина и фенилаланина, а триптофан отсугстговал. Конц«;-: рация остальных аминокислот, кроме асгарагиноаоХ, с Я-13

ЛОТТИИГс^

федошз&тадоьас годроли

ТьОлица I

азотистых компонентов в гадрол дх нечетких стоиков и баранины (п=10)

в

г;., г.

i идролизаты

i-s'saft ajот Остаточный

■-30?

¿¡-.пнный азсг Триптофан Аминокислс IL1

Гипсиоп^л;

Пептон "Б"'

$ермйн-гативн. М1±

кислотно- фермен- кислотно-

Неревар Хогтин

теркнч.

тагивн. теркич э- 3

гера

lic+ а.

j

¿пептиды

939+I-! 537+9 123&+29 705+21

902+16 521+9 1172+33 681+21

546+14 176+6 527+27 263*7

216+12 - 235+14

362+18 II1+4 29U+II 1УЗ+6

219+6 102+4 230+13 I2&+3

1089+40

999+39 726+16 224±12 563+16 154+10

Технология ферментативного и кислотного гидролиза неодинакова. Первый более продолжителен, но обеспечивает высокое качество улдролкзатов, Еторой - занимает всего 2 часа, ¡¡о вызывает рачруление циклических аминокислот, особенно триптофана, которые играет важную роль в метаболизме бактериальных культур. Смешива-ндв двух частей ферментативного и одной части кислотного гидро-дааатов обеспечивает одинаковый рост тест-культур как и на средах с пере юром Хоттингера.

3.1.2. Ростобеспечивашцие свойства питательных сред на основе гидролизатов печеночного оташма и баранины.

Для определения ростобесиечивающих свойств питательных сред ка основе предлагаемых гидролизатов использовали 3 тест-кульгу-

u

1В

рн и 2 производственных отчима бруцелл.

Результаты этих исследований представлены в таблице 2.

Таблица 2

Рост тест-культур и бруцелл на средах с г?потопептоном и притоном "Ь (в единицах оптической плотности при п =15)

13ТГ

ГНерЬ. Го«св11я В-со11 _Вг. еЪог^в • .

аигеия тт.6703 вт.675 шгЛУ тт. У 2

0,722+0,010 0,661+0,007 1,040^,120 0,223+0,008 0,254*0,013

МПБ с пепго.нои_ЧЗ"

0,641+0,007 0,635+0,007 0,824+0,008 0,230+0,005 0,233+0,003

МПБ с Семипалатинским пептоном

0,467+0,010 0,272+0,004 " 0,5.1410,00!3 0,15/4+0,002 0,242+0,001

МПБ с пептоном "ДтЕко"

0,616+0,002 0,420+0,008 0,557+0,010 0,156+0,001 0,240+0,008

Приведенная з таблице 2 результаты свидетельствуют о том, что среди на основе гидролизатов вторичного белок-содержаиего сврьл я сухой форме по способности обгспечяяпть роет бактериальны* культур не уступают отечественному и ичторгкоку пептону

Важным является определение счтгимрлшгос условий сушки гяд-ролизатов и исключения их микробной контявдггации.

Установлено, что оптимэльнмод услоиотст сушки на отечественной установке СУБ-25 или РС-10 гчдролияягов с относительной влэ-костьп 1,12-1,38 является подячч его на та мер при температуре воздуха на входе в распылительную кям<?ру 141<_+5°С и на выходе 80+5°С.

Остаточная их влажность при этих условиях не превышает 6%, растворимость составляет не менее

и ч, "<-"-;> йак'г-гр.юлсгичесх'сц Сежпалкткпглего завода

.«д'фгпяратою кияробн&я коцтаонацая колебалась от 189 тыс. ,г,о сплвлюго рос«. из. £П& 8 I г сухого вещества.

&:крзйггя слгамеинацка препаратов, изготовленных яо роэрс-5^-х..4»ной технологии, из преет» ла 750 микробных тел на I р

сухо гс ВйЦОСТВа.

Это соответствует тр^баьаиияа Комитета по питательным сред«.;-, ЬОЗ и ГОСТ 13ЬС5-7о.

В г&5ллцк 3 пред-таияам физико-химические и биологические показатели гепатпг.сптона к пептона "В", вогсгдаиа в нсрштивко-'1<: хнич е с ку ю до куие нт ац и я.

Таблица 3

Физико-химические к Отологические показатели гвдролизатов

Наименование показатсг-. Й

Характеристика и норки Гепатопептоя Пептон ЯБИ

Внешний вид Цвет

Зигйл

тг;

«¡ржание нерастворимых веществ не бо—1

Аморфный однородный порошок

От белого до светло-желтого

Характерный, без гнилостного

Концентрация в:-дсродыа ионов (рИ) 6,5-7,0

5олоо

Содержание влаги, % на более

Содердацно ос."и сульфированной, % не более

Содержание исъвшш; гептонав, % но менее

Содержание орлего азота, % не иг нее

Содержа чи* &;>1,т& аминогрупп аыико-" кгеяот а пептидов, % не

лОКС-.-

Г,Б

б

6,5

65 12

Аморфный одно-род.пороаок

От белого до светло-желто:;

Характерный, без гнилостного

6,6-7,0 .

1,5

б

6Ь 12

продолжение г^Аллцн О

Содержание .триптофана, % не более 1,5 1,5

Содержание свободного белка, ед.оптической плотности не более 0,25 0,25

Содержание хлорцдов, % нз иене о 5,0 5,0 , •

Наличие свободного индола Не допус- Не допус-

каитсл' кается

Наличие солей тяжелых иетеллоЕ

Способность поддерживать рост ьяяройоя, оптическая плотность не менее

Staphylococcus aureus 0,40 0,40

Escherichia coli et.675 0,5U 0,5U

Streptococcus foecalie et.6?t3 0,30 0,30

3.1.3. Производственное испытание питательных сред на основе гепатопептона и пептона "Б".

После испытаний гепатопептона и пептона "Б" в составе питательных сред в 4 лабораториях ВГНКИ ветпрЁЛтаратов, на Щелковском биокоибинате и ВНИиТИБП несколько серий гадролизатов а сухой фор не было передано на биопредприятия Главагробиопрсма.

На 4- биофабриках и 2 биокомОикатах на таких питательных средах, сконструированных на основе гепатопептона,было изготовлено около ЗОО серий я 15 наииенований вакцин против болезни бактериальной этиологии. Все серии этих вакцин проали государственный контроль, как и вакцины, изготовленные с использованием срс на основе ЫПБ и перевара 1оттингера.

Результаты этих испытаний представлены э таблице 4. По разрешению ГУВ Госагропрома СССР было проведено аироксо производственное испытание сред.

Испытания показали, что предлагаемые нами основы питательных сред по своей способности обеспечивать питательные потрей-

пост бактериальных культур не уступают нентону отечественному, а гепатопеятон - бакгопелтону фирмы "Ди$ко", что свидетельствует о их пригодности для промышленного использования.

Таблица 4

Испытание сухих форм гидролизатов бе/пив взамен пептона по ГОСТ 13605-76 щш изгоговлении бактериальных вакцин

Еиопредприятия и вакцины

Накопление микроб-1 Типич.

К-во пых тал (млрд/ш) клеток

серий----------и соот-

л,,. „ , 110 инструк- ветств.

онычнье щы ** нтд

Днепропетровская биофабрика

I. ПрОТИВ рОЖИ СЬИНсй II 0,50-0,74 0,5-0,7

2. Пастереллеза овец и свиней (прецигштир.) 22 7,8-10,6 6,0-10,0

3. Пастереллеза крс и буйволов (полутор.) 20 6,7-11,7 6,7-10,0

4. Пастереллеза уток и гусей (эмульгиров.) 36 20,6-27,9 20,6-25,0

5. Пастереллеза крс, буйволов и овец (эмульгиров.) 12 16,3-21,2 Ш-20 г

6. Против рожи свиней (,депон,)20 0,35-0,45 0,3-1,0 +

Сумская био^абрика

7. Против рожи свиней из шт. 5 0,5-0,8 0,5

8. Пастереллеза кур и ивдеек 6 20-25 20-25

Херсонская биойабрика

9. Диплококковой септицемии телят, поросят, ягнят I 1,8-1,Ш 1,4 1

Алма-Атинский Сиокомбинат

Ю.Иротив пастереллеза свиней 2 16-17 1В-20

П.Колипротектан БЮВ 2 35-40 35-40 +

12.Брадзога, инфекционной зн-теротокоимии, злокачестве.т ного о теш овец и дизентерии ягнят 9 5-7 5-7

Омская биофабрика

13.Рожи свиней (депониров.) ЬО 0,4-0,5 0,3-1,0 »

14.Паратифа телят 15 40-41 40-41 ч

Щелковский биокомбинат

16.Против бруцеллеза КРС из шт.Ь2 30 160 1Ш *

бруцеллеза КРС из 30 170 170 1

3.2, Ферментативный гидролизат мышечнцх белков сухой (ЁГ^гв)взамен гидролизата лактальбушна _(ГЛА)

В медицинских и ветеринарных няущгвх уирогдениях, я тякге на биопредприятиях, для изготовления гидролизятннх питательных српд традиционно использовали импортный ГЛЛ производства ффм "Д'фко" (США), "Мерк" (®РГ), "Реанял" (ВНР) и др.

Технология производства ГЛА до настоящего времени не опубликована, так как она составляет секрет фирмы. Предложении? гидролизата белков сыворотки крови куриных эмбрионов, казеина, гидролизат сыворотки молока, дроаяей, белков сои, гороха и др. (Л.П. Дьяконов, 1986, Н.В.Гияитдинов, 19УЭ; А.П.Простяков, С.П.Сергеева, 1990, И.В.Иванов, 1991), у нас з стране не шали за рамки экспериментов или опгшшх производств, поэтому отечественное гидролизата в проидпленнон шситабе изготавливались в недостаточном количестве, несмотря на острую их необходимость и большум потребность для прошилегшой микробиологии.

3.2.1. Разработйа промкпленной технологии получения ФГМ-С.

Наиболее удачнне результаты получен« при использовании в качестве сырья для гидролиза мышечной ткани КРС,- полученной от животных средней и выше средней упитанности в возрасте не более 5 лет, не подвергавшейся замораживании,

Основшдаи этапяш получения ФГМ-С являются: заготовка сырья от туи, прошедших созревание - очистка его от жира, сухожилий и хрящей - грубое и тонкое измельчение - смешивание с водой - ферментативный гидролиз - очистка гидролизата - сушка - распасовка -- этикетировка - контроль.

С учетом особенностей осуществления какого этапа нами создана технологггчесяяя линия с соответствующий включением оборудования и контрольно-измерительных приборов. Она представляет со-

бой закрытую систему и позволяет осуществлять все этапы производства от подготовки субстрата и его гидролиза до получения сучой формы гидролизата.

При серийном производство ФШ-С особое внимание необходимо уделять качеству сырья, режиму гидролиза л распиши^ иьной сушке. Мышечную ткань подвергают грубому и тонкому мзмеяьчеыш, пропускал через электромясорубку, а далее гомогенизирует и коллоидной мелыпще. Гомогенат смешивают с водой 1:2.

Оггашилышй реши распылительной сушки гидролизата на отечественных установках предусматривает I'buacpu'i'ypy на и ¿оде в камеру Т45_1_Ь°С и на выходе из нее Ш+5°С. Высушенный методой распыления гидролизат представляет собой мелкодисперсный светло-кремо-вого цвета порошок со специфическим запахом. Он очень гигроскопичен, поэтому его сразу после выгрузки из камеры необходимо расфасовывать и герметизировать в полиэтиленовые пакеты.

Исследование образцов серий 41Ы-С в сравнении с ГЛА фирм "Дифко" (США), "Ферак" ($РГ) методом гельфильтрации показало, что высокомолекулярная фракция (42000-67000Д) составляла до 34+3$; среднеыолекуларшя (ВООО-1ШООД) - 2I+5&; низкоиояакуляр-ная (от -2000-3000) - 41+10%.

В образцах ГЛА содержание первек двух фракций было в 1,5-2 р^за ниже, чем в Ф1Ы-С, а третья фракция была на одинаковом ' уровне.

В готовом препарате ФГМ-С содержится не менее 18 ццентифи-цируемше аминокислот. Качественный и количественный их состав представлен в таблице 5, в сравнении с ГЛА фирмы "Дифко".

Для роста и размножения клеток илекопитаицпх иирокого спектра требуется не менее 13 аминокислот. { Cooper Р.В.,¡959, 1973).

Кроме восьми аминокислот, необходимых организму (нзолейцин,

т?йцин, лизин. «гтиогпт, {внилалтшн, треонин, триптофан и впили), клетун триппитчпцих дни рязмноке+шл в культуре нуждаются гте в пят!» "мтчкие.чгугах; аргинине, цистине, глютямине, гистиди-

11? .утп^пчтте аминокислот для размножения большинства длительно чучмк^чруемнх клеток только глютямип подвергался' активному пр«г^ч'ппгч!К1. Осталыме ямннокислоты главным образом вкдю чаются в структурой клеточ+мй белок, Глотямин участвует в образовании протеина и нукяриновнх кислот. Он превращается в глютя-миновую и аегтарагиновую аминокислота, вспярагин, пролин и в меньшей степени - в серии и аленин ( Еа^Хв П., 1У55).

Таблица 5

Качественный и количественный состав аминокислот в »Ш-С и ГЛА

Аминокислоты

1. Лизин

2. Гистидин

3. Аргинин

4. Треонин

5. Валин

6. ИзолеЙцин

7. Лейцин

8. Фенилаланин:

9. Метионнн

Сумма незаменимых акинпгп^япт Ю.Аспврагин П.Серин

12.Глютамин

13.Пролин •

14.Глиции

15.Алании

16.Тирозин

Суша заменимых аминокислот Сумма всех аминокислот

Количество масс М+ ш

гГтГсТГЛяГ ~7'ллТп =?)

6,7+0,4 4,820,3

2,5+0,2 ' 1,5+Р, 2

3,5+0,2 2,4+0,2

2.9+0,2 1,0+0,01

3,920.2 1,9+0,1

3,6+0,2 1,0+0,2

6,0+0.3 5.9+0,2

1.140,1 1,2+0,2

1,7,0Д 1,2+0,2

33,4+1,6 23,6+1,3

•2,97(1,1 0,9+0,1

3,-гм-0,2 0,9+0,Г

7,020.3 1,42.0,2

2, [~|0,2 0, ¡5+0.2

2,4^,1 1,6;^),2

3,^20,3 1,1+0,1

1.320,3 1,1+0,1

23.1+0,9 а.), !>+?„ 5 7,510.3 31, о

кЬ

Ии таблицы Ь видно, что содержание заыьнииых аминокислот в Ш.1--С почт« в 3 раза превышает юс наличие в ГДА фирмы "Дифко". НаиОольши разница отмечается по содержание аспарагина, серина, ¡'льгашна и аланина, играющих в питании клеточных культур значительную роль.

Учитывая большую концентрацию основных аминокислот, питательная среда при использовании ИМ-С готовится в концентрации препарата 0,£5-0,Зй,

В таблице 6 приводятся величины физико-хицических и биологических показателей, на основа которых разработаны ТУ 46-1220-Ш.

Таблица б

Требования к качеству ФШ-С при его контроле и стандартизации

Наименование показателей Характеристика и норьш

Внешний вид Тонко-дисперсный сыпучий порошок

Цвет От белого до светло-кремового

Запах Характерный, без гнилостного

Концентрация водородных ионов (рН) ЦЬ-ного раствора 6,2-7,2

Растворимость, % не менее 5,0

Массовая доля влаги, % ье более 4,0

Массовая доля золы, % не более 13,0

"ассовая доля аминного азота, Та не менее 6,0

Аыиниый коэффициент соотношения аминного азота к общему 0,50

Массовая доля остаточного азота, % не менез 10,0

Коэффициент протеолиза (отношение остаточ.азота к общему) 0,9-1,0

Способность обеспечивать В 3-х пассажах ср«да доила ооес-рост перевиваемой линии кле- печиаать образование монослоя с ток почки поросенка СПЯ) сохранением исходной морфологии . _клеток__________

После создания технологической линии и налаживания производ--

сгва ШГУ-С в значительных количествах (объем серий -- -и) кг) для широкого производственного испытания н практического иет>;П. сования гидролизат бш передан 3 биокоцбинатаы и б био^аорик-.ч Главагробиопрош СССР. Перечень этих биопредп{шктиИ и бпоцра.-!.-. -ты, при изготовлении которых был использован 6Ш-С, пред с г а »л (..,...>; в таблице 7.•

Питательную среду, на основе ЗП1-С в концентрации 0,^5- 0,':,.£

готовили на сбалансированном солевом растворе Хенкса или Орла

по методика«, описанным а соответсгвуицкх руководствах по нрнп., -

товдению питательных сред для культур меток. Среда предотаьлй'л-

собой прозрачную жидкость красноваго-ораняевого цвета. Пцрсд -

пользованием ее добавляли 5-10% стерильной сыворотки ироьи КЫ

и устанавливали рН на требуемом уровне.

Разработка промышленной технологии изготовления протиьиьирА- -них вакцин с использованием ДГМ-С и отечественных химреактицо-

Промышленное производство вакцины из вируса ящура, репродуцц рованного на эксплантатах эпителия языка крупного рогатого скит, включает следующие этапы: селекция афтозного вируса яац'ра е использованием монослойной культура клеток свшасх почек, адыпацш! полученного манна вируса к эксплантатам эпителия языка ЮС, получение ыатриксннх штаьшо«, промышленное культивирование ьируса яи(ура, его очистка, инактивация, изготовление ыоношлешчшх ы»-цин, составление и расфасовка ютовых моно-,бм- и трехвалентная нротнвоящурных вакцин.

Изучение процессов с^.ы и адаптации вируса я.цура уипов культивируемого в экс 1 • ;а птатах яакка КРС на^пытгалс_,с£2да*

.............о'агы-с

Одним иа важных ^г-. и прл производства иц&вдешрчвашихл

1>:инв<1К1дур«и« икцчн 1! 1 *'£ сезеацал и адаити;:1.:: ».»руса

1> от-чг г. с?.:-! V ..■• 1м сл

Таблица 7

Использование ФГМ-С э производстве биопрепаратов против заболеваний вирусной этиологии (вместо импортного Г'ДА)

Еиопредприятия

Передано'

т

(кг)

Биопрепараты

Культу- йз готов-

серий доз

24 1253,0

15 "167., 0

63 2650,0

28 967,0

2 ~ 5,7

I 360,0

г 1575,0

Результата гос-контссля

1. Армавирская биофаб- 40,0

риха , ..

2. Алма-Атинский б-т 25,0

3. Курская биофабрика 45,0

4. Приволжская биофаб. 60,0

5. Омская биофабрика 10,0

6. Омский биокомбинат 10,0

7.' Ставропольская био- 90,0 фабрика

8. Сумская биофабрика 50,0

9. Щелковский биоком- 616,0 бинат

Вакцина против болезни Марека (жидкая)

Евкцина против болез- КЗ ни Ауески, свиней,КРС

Вакцина против болез- П8 ни Марека

Вакцина против болезни Ауески (концентрированная)

Вакцина против чумы свиней из шт."К" 03

2 60

Вакцина претив болея- ПФ ни Марека

Вакцина противоящур- эпителий 103 НВЯ 3-х валентная КГС

2,7 75000,0

50000,0

Выпущено 24 серии

Выпущено'25 серий Выпушено 63 серии Выпущено 27 серий

Выпущена 2 серии Выпущена I серия

Выпущено 2 серии

Выпущено 2 серии Выпущено бОсерий

Выпущено 103 серии

ПФ - перепелиные фибробласты;

ПС - почки свиней;

КФ - куриные фиброблаоты.

адаптации вируса ящура типов 1,0,С к эксплантатам эпителия я ¿им ЦРС при промышленной производстве инактивированных вакцин а сры-дах, содержащих отечественные ингредиенты.

Состав контрольной и опытной питательных сред для культивирования вируса ящура на эксплантатах эпителия языка КРС (расчет на 1000 л)

Наименование химреактиво»

Чд.

изм.

Среды

контрольная

опытная

1 М- едкий натр I - аргишш

I - ГВС'Х'ИДИН

Д - лейцлн Л - триптофан ДЛ - йетиония £ - треонин Л - фенилалашш Л - цистеин Л - лизин НС1 ЗГУ-С

Пантотенат кальция

Глстатион

Ниацин

Инсулин

Геман 0,01$-ный Тироксин 0,01^-ный Глюкоза (С6Н1206'Н20)

мл

г

ед. ил

'/50 41,0 30,5 130,0 50,0 200,0 42,0 25,0 96,0 ГОУ.Э

0,25 10,0 1.0 900 360 90 П00

750

600 о.га 10,0 10 9(Х) 360 90 1100

Для изготовления питательных сред использовали соли, антибиотики, экстракт дрожкей и ФГМ-С. В качестве контроля использовали питательные среды, содержащие в своем составе импортные хиц-рьэнтивц. Культивирование вируса яцура проводили параллельно в I л реакторах в трех поыорносгях.

Для селекции и адаптации вируса ящура к эксплантаты »ли^ыи нзика КРС мы исн0Л1Э0Ь,чЛ11 один и то? афтозный ьирус. Кошшй-

г

(-' нтсЕЯЗнващая активность (определе)шая стандартным способом) г.нруса, репродуцированного на культуре клеток свиных почек в течение двух пассажей, существенно не отличалась по сравнению с контролен, В PQC титры были 20-50 ед,, а ТЦЦэдд^ на уровне 6-71s.

При дальнейшей адаптации вируса, репродуцированного на куль-туро клеток свиных почек к эксплантатам эпителия языка КРС, получили результаты, которые свидетельствуют о том, что комплеыент-свяэиващая активность вируса ящура типов А и 0 резко повышается к третьему пассаяу с 204-211 ед., до 371-487 ед. (на "Техниконе"), при этом тенденция к дальнейшему повыаенш титра лучше сохранялась у вируса ящура типа А. Комплементсвязьгващая активность вируса ящура типа С более плавно увеличивалась до шестого пассата с 253 до 441 ед. В последующей существенного увеличения титра не няблцдали. Вирулентность и серологическая активность вируса ящура, полученного при культивировании на эксплантатах эпителия языка КРС в питательной среде, содержащей отечественные химреактиви, не отличилась от контроля.

Таким образом, можно заключить, что вирус ящура типов А,0 и G можно селекционировать и адаптировать к эксплантатам эпителия языка КРС с использованием питательных сред, изготовленных из отечественных ингредиентов.

Свойство катриксних штаммов вируса ящура, полученных с использованием питательных сред, содержащих отечественные ингредиенты

В работе использовали вирус ящура типов А,0 и С, адаптирован-¡шй к эксплантатам эпителия языка КРС. При приготовлении катрик-енкх штаммов вируса ящура ■ культивирование проводили в питательной среде, изготовленной на основе 5ТМ-С. В качестве контроля служили штаммы, полученные в питательной среде, приготовленной

из импортных ингредиентов. Исследовании подвергали штаммы 3- |ч> пассажа, замороженные при минус 70°С и лиофилизированни» ыгамии 5-го пассам.

При изучении свойств иатриксньк шта+шов 3-го пассака, ■ ченкшсс использованием питательной средь, содержащий отечествен ныв ингредиенты, наблвдали восстановление исходных антагеинш свойств, в 5 пассаже его подвергали лнсфишэации. В нонтрольнш. образцах получены практически идентичнее результаты (таблица и).

Таблица Ь

Вирулентность и кошшементсвнзывищая активность шTiJiiiiciu.ro вируса ящура, хранившегося 12 месацев при шшус 70°С (и -У)

"Г

Коыплеыентсвязывающая активность в ед.

------

КОНГ-| опыт- конт- опыг-рольн} ННЙ I рольн| ный

1--1----г

■131+221439+23 {378+19} 3?и,19 333+161367+32I277+27I307+31 437+21 {427+281356+21} 3-16+19

' 146 Б

конт- Гонит- [К0НТ-- ! иНЫЧ'~ рольн, )1ШЙ ¡рольн. I ни А

!---1----------?----------

7, ЬО, 4 {7, , 4} в, Ъ±0,4010,3¿0, си

7,4+0,5!7,7+0,416,5+0, ЗЫ 6,7,0, 4Ы

7,7+0,3} 7,7+р, 3} 0, 3^0,55[ 0, ¡¿¡О, Ы

*РСК - по показанию прибора "Техшшон*.

Лио$илиз ированные штаыш вируса яцура 5-го пасса мл, полученные с использованием питательной среды, содержащей отечостьсшц.ъ-ингредиенты, как и контрольные, восстанавливали свои исходник свойства к 7-ому и 8-ому пассажам (таблица 9).

Штаммы вируса ящура, репродуцированные на эксплантатах пни •^елия языка КРС с использованием питательной среди, социржи^уй отечественные ингредиенты, по своим ангигешшы свойствам щакли чески не отличаются от штаммов, полученных о использованием >.ш -портных, компонентов питательных сред.

Таблица 9

Я;Тгг:ипя,кя и ко<лмементсвязываичак активность лиофилизг

V -"г"'н-с мрлриксного вируса $плура (с =9)

¡Гс.шяен-зи:'свлзывййй8я активность >р,ш . ';. ____________________________ЩЪ0/ул

-------------------------;- КОНТРОЛЬ- -„„-„.,■

опытный ^"1Р°те-опитинй тй

¡; ' '37+21 427+28 356+21 346+19 7,740,3 7,7+0,3

Г' Г.7-1±24 283426 232418 237+19 7,1+0,3 7,2+0,4

;?:-е±£6 364+21 318+19 321+22 7,5+0,4 7,6+0,3

■ ^3+23 456+23 361+20 366+23 7,7+0,3 7,7+0,2

Вэссшюгяеиие биологических свойств замороженных и лиофки-г;>"рог''.т/чк птсшов в опытных образцах, ялк и в контрольных, про-.\рпт чсргз 1-2 пассяжа, что делает возможным использовать юс в I' чсстае шгр'-ксных дж получения высокоактивного вируса ящура

проык.пленних объемах. ' •

Использование отечественных химреактивов и ¡ВГМ-С в составе

питательной среды для транспортировки опителия языка КРС .

Дли изучения качества зтатели" языка КРС последний поставля-...) с 26 мясокомбинатов в питательной среде, изготовленной из отечественных химреактивов и 2П.!-С, а в качестве контроля служила г.итятелыгая среда из импортных ингредиентов.

Показано, что вп/.телий, транспортированный в питательной

• : :-;перикентальной среде, лучше сохраняет свои качества: процент шгх клеток был вше на и накопление антигена вируса ящура п(-л его культивировании (п=33) в среднем по данным комплемент-:-тлпмвдеЯ активности (240+9,0; 219+10) и содержанию 146В. : ¡.5;\(0,02; 4,05+0,2) антигена на 9-11?. Среднее значение рН

1; 7,'14.0,1) и бакобсемененноеги были в пределах техноло--.^•кик д- г:упг'}<: аг ;$?.•; лл существенных различий.

С"' wxyun --яносуи lij аишлсшмх м - ;_____. ;. ;. • i.,

Изучение ¡««уногенной ааг-ивноетк на КС иу^гаыщ t

ц:лгзлешшх ct.'ijiifl, ¡¡а готовленных с г.опольэоыишеи va ли:л i. i. ..: -стис:;!»-« .хиир'-актиао» и tvaíi .«екгов nv'jüímuo «;>яу [■■ , .и..:.., í¡r.v;r/f;is.4eí-:!:i:-j а таблица 10.

*i...o.,.;.,< ; j

'íy _r.iT'.j ко*:грана шодногенноП £.::г-аьнссил «i».uiti,w»4rj ли ьакцин на КРС

К-eu ' Йшуко!t-:ttti&a актлььость ti.» W'C 1'<фусиян. ----------------------------- ----

i.... i \ in доз КОЯ DO ia аа- í и » p (.".

вып. qiiTtt a ( Il )

, 1 2 3 ~I0U fb í .с.'. i

O ív. ' 4 азьб Г) ICO í.qO. !

0 I 8 "12ГГ" V 100 1 , ^ ' í

o О 3 ICO 13 i ,Vi-; -

.....í" ~~2ü 29Î3 г ICO .vo s

- 0 21 .1 1Ш :ю • I

I lit 1 ! ICO ' J.fjO

4 21 J 100 ■Л) I.Ó:;; 1

-...... ~ г ~£4 - ICO W 1 ; '..4 0 i

A 0 £3 Г,.'. Л) 3 ICO ь 1

í 24 го.з 3 ICO Iii í.'";.;>

.J 0 L5 3 100 IJ 1 . ; J

I 21 ¿ ••' О 3 ICO lù i ,'.•*/;

2 25 ;. 3 ICO ! .

т~г ря.юпша, лаг о тс -ли'нтл с поп, г. :■ :: .. i

;; стеч№- i : -"i's'.'jx X-iiî.J.pe а >: i : •. в il ;

2 - к>.аюр1ч»п. < ii Í'.L'.

Íj.Lir.u hiViHO, ч.ч. . >.• .v.ïiyiiat'iiiMv')3 ..... . ..

. . :H;i.!;e С .H.'lKllll.J'.Ji ÍKÍ-C И ¿„HV : .... . ..

>

..í.'VíUi^.Ub u: ¡;.i.u\¡hi, ., ,-iv ¡cmeih^x r.o V :! : ........ ■

.'..MO^l.a'V^ i !::'.< :í i'.ríi.V

Ви~ и трсхтолwrmip мкцины,- изготовленные с использованием оточественных хтр^.чктивоп (.промышленные образцы), хранившиеся пти 4nG в трчецие го,добили повторно проверены на имцуюгеннув активность. Хитры антител в СН были соответственно 1,4+0,2 и I.«iO,I и rW56 защита г дозе при заражении.

лошадей сухая культураль--И.эгдтопленнпя с использованием отечественной ¡»•л'птслыюй среды

В разработпннпй типологии изготовления этой вакцины (предложенной К.П.Юровнм, Н.Н.Крюковым, Н.Д.Скичко, 1985) использовали питательную сроду, в состав которой входят импортные химреактивы.

Цель наших исследований заключалась:

- в изучении возможности использования ФГК-С в составе питательной среды для роллерного выращивания монослоя первичной культуры клеток СП в 5-ти литровых бутылях, вместо импортного лак-тальбумшю:

- изучение качества ионослоя по морфологическим свойствам;

- изучение качества полученного вируса р готовой вакцины.

Проведенные исследования показали, что питательная среда с

0,25% $ГЫ-С в солевом растворс Зрла позволяет выращивать шнослой первичной культуры клеток в 5-и литровых бутылях на роллерных ап-гпрчтах с посевной концентрацией 150-200 тыс.клеток в I мл.

В течение 5-ти дней на стенках емкости, помещенной в роллер, обрпзуотся сплошной монослой с клетками, характерными для данной культуры клеток.

IIa контрольной среде с ГЛА не всегда удавалось роллершш методом получить хороший моноолой.

Контроль качества вируса и опытных серий вакцины проводили по технологии, изложенной в НЧД, утвержденной 5 января 1985 г. ГУБ мг:х СССР.

С использованием питауельиой cpc.",u, naiv: •л.- • ьенных ингредиентов, было изготовлено К! с<.^..Р ' ¡:,;;wv. г.. с.пуяпли б серий вакцины, пригочсплнишх о г.[;й:«г.<чш-и !•

состав которой вошли импортные компон^гп:. И:1- се^.ш ьиицач-. стерильны и безвредны для жеребят б-Хб-ичСл'-.нлх-о возрчс-ia а у и: ков массой 80-100 г в возрасте 1-1,5 иьснца. При опр-дыоыи *•. логической активности вакцины на культуре ¡слг.т'.к СП в ими;«,. .• . ^feo/мл сред'ше титры с использованием от-'ч<-с-.|»еннеЙ i:.iw -т i. среды бши 6,5+0,16 (а-26), в контроле C,V3*0,'Jb 1 g (и-<,).

Вируснейтрализуьсря активность сньсртегн i:t ч ми -it. : . цитированных в дозе 0,2*10'" '-ЭДД^у/мч л

г. г;

2,0*10 " ЩДвд/ была одинаковой (0.У1-0.СЗ :: \v .

Все вакцинированные жеребята поел-? 3a[.-rr.--..t.!.>< ------ i .

русом оставались клинически здоровыми, а конгро.; ? симптомами лихорадки, ршшта и угнетении.

Обогащенная питательная среда гл cetoss И:д v ......

ет осуществлять технологи» производства вакцины за си-.-, г. ■ .-■ вания роллерных аппаратов и тем самш повысить произы;.;!; ti . груда, снизить себестоимость вакцины, достигая выссксы о а* ь.ч. ства.

Вакцина для профилактики болезни Марзка птиц, из гот; ■ ь^!;! 1 !_•' • с использованием отечественных химреактивов

Известны вакцины для профилактики болезни Марека и enoeunj их изготовления (A.C. № '792643 и Н 1034232; Хорьков 11.Л. с со»,,.-. Г904г.), включающие выращивание на монослое клеток вируса п.р:ь еа индеек, адаптированного к культуре клеток эмбрионов: кур -8 ¡0 дневного, уток - ГО-12-дневного и перепелов - Ö-У -дц«;1! «oi.. К' циста, до получения определенного количества »ируеси ¡"[•.г.ь их

илгок'Мйшш вирус-вакцины против болезни кареха вкмс-" 1 с- юнослоя клеток, адаптацию и репродукцию вируса

• объемах с использованием питательных сред Игла и

•': *п РлД. яггоуомеют только на импортных химреактивов, что ее »усокуи стоимость. Л'^гя кзгах исследований являлась разработка способа прокш-ироиоводства вакцина против болеэка Марека с нспольэова-? еггчегтвеинмх ингредиентов.

П -зхйБзсннад цель достигалась тем, что на всех этапах получе-; ■ т.' Г'угл герпеса иццеек, включая и его промышленное производ-1йбота проводилась с использованием питательных сред, со-• - р.п.тд только отечественные ингредиенты. При изготовлении сре-• г:- Г|ого;си Лгла вместо 13 аминокислот использовали СГН-С. При >* '::сг;'еяии гидролязагной среды вместо О,0& ГЛА фирмы "Дифко* .-.-^гядялл 0,25$ ЕГМ-С производства Щелковского биокомбиката, исследованиях определяли инфекционную актов-;г> Г';;;-, сгдй.рзлгдегося в вакцине при титровании на культуре " прчледокн с таблице II),

Таблица II

. . 0ц?ЙК8 серИй вакцины против болезни Иарека ; . > .••учешаж £ питательных средах с отечественными и

импортными компонентами

г п.-.пояьэошшйш питательных сред, изготовленных из

' ______

Огеадствеиак Импортных

Лэз,кя ЮЕ/чх Доз, мл

Я о 4 5

370 6,В'Ю5 340

т г« *' 7,8'Ю5 390

г "»Л { и 7,2-Ю5 360

•т.) 7,0-Ю5 350

Q 7K

была стерильна, активна (титр 10 ' +0,2 ЭВДздду,), Оозвр-д}..!, инмуногенна и полностью растворяется в фенологическом pie.T); ^ ■ . Высокая сохранность активности вакцины в течение 1,5 ги.ц.д (ср .; наблюдения) при температуре +4-6°С, позволила ГУВ продлить с-; срок годности с 6 до 9 месяцев, расфасованную во флаконих и до 12 месяцев в ампулах.

Гидролизатные питательные среды, содержащие добавки отечественного производства, испытаны при получении антигенного мати • риала для изготовления 7 вакцин против болезней бактериальной и б вакцин вирусной этиологии.

Обобщая результаты многолетних исследований, представляь1е;1 возможным заключить, что для промышленного изготовления Споила-паратов ветеринарного назначения расходуете)! значительное количество мяса высшей категории и больше суммы валюты для зьк>Ш'.и ?я рубежом питательных сред, их компонентов и химреактнвов.

В результате проведенных нуин исследований обоснована ы.з -подлость использования вторичных отходов производства биопрепаратов для получения гидролиза«)». Это сырье стандартизировано а разработана технология его переработки в азотсодержащие оензьн бактериальных питательных сред. Это один из моментов бозеггп;;!",-го производства биопромышленности.

О'феделена стандартизация сырья и предложена (п-хполо! a i 1ш.. гонг.-« - ля сухой формы гидролизата для питательных ергд кл о точны*: ку.^л/р.

: ¡комевдемые гвдролизатше питадельныо среди и химре.актньи еАг*.tcéjet&setsttx*

iif ■ . .i после оксil г разработки широкие ироизводстьчн-

I» ■ :пнтен.'.я на био.{абрияах и биокоибшитах Главагробиощ ош,

41

ВЫВОДЫ

I. I е.ориОи'тнг,. промышленная технология изготовления гидроли-белков кыгщ, почени и других внутренних органов крупного рогатого скота и огец, позволяющая получить основы питательных сред ддп культивирования микроорганизмов, клеток животных к вирус: ой.

Г!. $арп и мышцы овечьих туп, являющиеся отходами

^ряпгк биспрсизьодотв, могут быть использованы в качестве исходит о для изготовления тадролиэато» - основ баягериологиче-

• п;,!. шгатогьиых сред, наряду с аналогичным сырьем от убойных

3. Промысленный способ изготовления гидролизатов для бакте-; ".здыгл культур из вторлчных отходов биопроизводства, включая

. -.чгатогку скрьк к гидролизу, проведение {ернентативного н ккс-я.;гного гидролизе, сушку гидролизатов, их расфасовку н контроль, (•■,"'спсчисает максимальный выход продукта высокого качества.

4. Установлено, что для получения основы питательных сред

культур - ферментативного гидролизата кишечных белков ■ •:-Л/.одима использовать не подвергавшуюся эамораживаш-а шпечнузэ крупного рогатого скота клинически здоровых животных в воз; те 2-3 дет.

' £•. Опрздеягйо, что для по лучения полноценных гвдролнзатов -.•зчтас; белков - основ питательных сред культур клеток гидролиз ' ■■ слл:\г,1:чо проводить с использованием протеолитических ферментов > ¡пн,-ф-:лткп, трипсин, ноджгдудочныя иелеза). Кислотный гидролиз

• • > погг.оляст получить гцдролжзйты требуемого качества.

и. Газрлбскш метод распылительной сушки для получения сухой г.сфолтатоз (хчгпатопептона, пептона "Б" и ФГИ-С) на оте-■т- г; здтелышх установках СУВ-25 или РС-Ю при темпе-

paiype на вхоце в рлспылительнуи камеру Ml¿¡b'4,', нч >.'-• 80+5°С.

Сухие ({ормы гцдролиэаюв представляют собой «(лшидмлкц ««;» порошок с остаточной влажностью но вике и ристворшоить» !»• менее

7. В состав $Ш-С входят не пенсе 18 амшюшслсг, в том ч.а-лк все июамениш? - 33,C6_tO,57, зашикше 23, II¿0,fúS, я ипачительнсе количество встши» .'; с •

таву аминокислот 51 '1.1—С содержит их на 20,% 6ícis.a-., 1! 1 ;Н "Дифсо". Среди, содержащий 0,2b-U, 3Ü/Ó 5-1'М-С, i ó'o.,r. -лл.;.; i.;.. ■ -тельше потребности ммаг><х i>;i;o;!í пормпшгт ;> > \ •■'\u\¡;al¡маточных .yübüthux культур.

0. Культуры клеток, идоз'.ниьъ ь с;одл:г ;¡ i и'М'и C,;V.-0,«*

■1-1"1-С, при культивировании II видои вируссз цг. ч. ......л

ир отличались от аналогичны* культур илочок, иэа; :» ¡..ч о е •.. зеванием импортных питательных ср.-.-д (1ЛА к ¡l№.i>. •.¡n i. •• ве 1Ш-С внедрена для транскортирсьча сис:!/ла.^, .ь .;:;.¡ :>.иы языка крупного рогатого скога.

9. Вакпшшио т\«яш вируса n::¡¿-pa 0,А,С, ырус ьр.л.оо „и ;<••• ик, вирус рлнепневьшши шташ CB/G9, »ш|с>ндш:а кас-it-.i, шф.г .-рпвшиэкз теЯлериями, адаптировашшо к и^гин и ¡«к.- ;г.л . ровинаfW!re лшшй, гнрпценным ь nirra'i'ü;:! í-i'Oii ер.-до ... i ,-r.ii. ..„• i¡ :¡ no своим биологическим свойствам не смипз.'.«::!» <л i.!(- .-•..) о . •1')лл,н1к кдуток, получениях в средах m осноьо ГлА или ¡>i;.». •■'. свядсгельству&т о полноценное»! этих гндролизагмя: nnvíi'i > -у..г cpoi; и юзмотлости полной з&м-лш Г'ЛД iu SI И С в биидог.гкеш.а пронл.илонностн.

10. Ин^екционнне и антигенные свойства вируса гацури 3-х типов С,А,С, выращенного на эпителии языка крупного рогатого скота

с: использованием питательной среды на основе ФШ-С без внесения импортных аминокислот были такими же, как и при получении их на роде, йренкеля. В обоих вирусе од ержащих материалах накопление 146 8 компонента, активность антигена в РСК с 100% гемолизом, поличина рН и содержание белка были одинаковыми.

11. Трехвалентные ГОА-формолвакцины против ящура, изготовление в прсмдалешшх условиях с использованием питательной среды на

; :ове С1М-С и добавок к ней компонентов отечественного производ-Vг.-'. ^ пвирулентны, безвредны й ^ммуногенкы. По срокам сохранения ""луногениости вакцин при испытании продолжительности хранения ! гид (срок наСлодения) они были идентичны сериям, изготовленным г использованием импортного ГЛА и других компонентов.

12. Использование питательной среды на основе ЙГМ-С для вы-рггдивания меток и вируса риношевмоншгпламм СВ/69 пой во ли л о усовершенствовать технологии получения антигена этого вируса и заменить стационарное культивирование в 1,5 литровых емкостях роллерным культивированием клеток и вируса в 5-ти литровых флаконах.

13. Впервые'разработана и предложена технология промышленного изготовления вакцины против тейлериоэа крупного рогатого скота реакторным методом. Показана возможность получения катриксной ¡--.спдодга лиыфоадных ¡исток, трансформированных тейлершом, для длительного использования при промышленном изготовлении вакцины "г:гст юГшорпоза крупного рогатого скота.

] .1, Использование ЕГМ-С в качестве стабилизатора сухой вирус-иа ггамт "БОР-74 ВГНКИ" против кьвкаслокой болезни , -ттг'чпглет сохранность вирусного антигена, способствует у луч— гу'о-'Ч?!':'! г'.п/. и рлсгворгаостИ| продлению срока использо-

вания в ампулах до 12 месяцев, во флаконах до V ¡лг„с>щ.:ь i:j изготовления без снижения качества.

15, Применение в биопроиэводстве и в биотехнологии г;■ л.. тона, пептона "Б" и ffiTí-C позволяет полностью или в эпл'мге'пи-л мере обеспечить потребности научных, диагностические учр^д-лиЛ и предприятий биологической промышленности в основах питатель:;..', сред, не прибегая к импорту гидролизата лактальбумшш u C'.^.i^ пептона.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРВДЛОЖЕЛШ

1. Разработана я внедрена промышленная технолошд u,aj4*~-¡u:>s из печеночного отжима, баранины и мышечной ткани круптд-о р.л^к. го скота сухих гидролизатов: генатопептонд, пептона "В" и >5Ш '

Эта технология обеспечивает высоку» производительность и и. • обходимое качество пептонов и гидролизатов. Етагодаря замкнутой системе технологической линии исключается контаминация готиьей продукции посторонними микроорганизмами.

2. Материалы исследований включены в разработаннуы и /.Ьср.а-денную ГУВ МСХ СССР нормативно-техническою доиумеот-ица« т ;игь-товление, контроль и применение гидролизатов в ч-ехаолоьш щ.^ио водства биопрепаратов:

- "Пептон "Б" сухой дли бактериологичьских п.... Л" ( ГУ V -16 -21-355-77);

- "Гепагонйптсн сухой для бактериологических ÍTJ У 46--2I-354-77); .

-- *Гцири*ат цишечшк Осяков |c{«siu'»?»isiií;i: -уд- а (11 :i <■'') для niiiareüLüu". ерчд тканевых культур" (Г/ S -16 - i

~ "1:;1Кл.инэ. против тейлериоза крутил о рсгч-.-л>л о t;c:¡.. -u ; ; *>льг/р* atusa" ('0 Í 46-21-1479-64).

- "lii!|'jcнргч'ив ринзгшекчм:' .1 .!■ --y- ц • ¿ -

<-;•"« /IV № te-CI-l?.:«.^),

.'¡, ¡Ьмгнашк к инструкциям по изготовлению вакцин в связи с :-:к.л!ой импортных гидролизатных сред, ингредиентов и химреакти-' >», утверздешше ГУВ Госагропрома СССР в период с 1УЬ4 по г''.4 гг., включительно;

"Инструкции по изготовлению и контролю трехвалентной прот.:~ риоП ^ормолвакцины из вируса щуря "О-А-С, культивируемого ' -натолка-шика крупного рогатого скота";

- "¡¿¡сгрукции по приготовлению и контролю вакцины из вируса . г.;ч Ар<>, культивируемого на эпителии кзкка крупного рогатого

- "Инструкции по изготовлению и контролю вакцины из вируса

- з 0Т, культивируемого на апителии языка крупного рогато". скота";

-- "Инструкции по изготовлении и контролю вакцины из вируса •••цп типа. С, культивируемого на спателии языка крупного рогатого

- "Шструкция пс изготовлению и контролю протнвоящуриой вак-5."!;.т из вируси ддур! "О-А", культивируемого на эпителии языка

•!.. .•; I гогатеге ехал*";

- инструкция да изготовление и контролю вирус-вак-:.'•• •: (¿'лиа ркнвшкимздш дождей сухо Я кудьтуральной (СВ/69)";

- "Г;.о:.:;;нпой шструкила яэ изготовления в контролю сухой куль; •; •)' >,". т-.рус.-ьакци;"^ крет»» болезни Карека из итокма 1С-126

• ;•,•<.• ч : ^рч. ее ш'дсек".

- "1г.'.гщ.чц'»! я.зготор.те«иш и контролю вирус-вдЕ-г* пьзд-аслспой болезш птпц из втамма "БОР-74

':;'.'.'.' '¡" 07-1,1) г. ггссизденая по ее применению".

. ' Г. •_•■• 'м:^пуук",:;;! по изготовления и контролю вакцины ■ 1,'Л' V! : / кр;тиого рогатого скота жидко;":, кул'ту-

СЯШОК РАБОТ, ОТУВШКСВШШ ПО тш

1. Скичко Н.Д., Нередереев 11.И. Ош:т получения ^ерьалп'а ю...^ го и солянокислотного гепатогидролизина. // Тезисы докладов t но-пронэводственной конференции ВГНКИ, М., 1У74, с.1С2-1с4.

2. Скичко 11.Д., Простяков А..П,, Лгапоьл З.А., Тскацш Пептон из отходов производства аитирпбичсский htutuiiiu // Тру^и ВГНКИ, том № 25, 197?, с.216-219.

3. Скичко Н.Д., Простяков АЛ1., Хорьков vi.Л., Аыц.а-а '¿.it., Токарик Э.Ф. Разработка технологии иромла'йшюго ир.чк-ыдотва гепатогидролизина и гепатопептона //Труди ВП5Ш; l'.'V?,

с.143-148.

4. Агапова З.А., Простяков А.П., Таваркададо-.. Н.Л., Ci..i>„ .• 1!.Д. Определение возможности и епоссоа соэдшшл "кемошюр..,е-елл го" пептона. Ветеринарная ^армлдия. для пр'омьоол.лаюг^ s;;nc uwiw \ ства // Материалы докладов Бессоюзной ку^ер-л.г;««. Гша, ГУЛ', с.255-256.

5. Скичко Н.Д., Соболев D.B., Сг.му,гя<.-ы:о А.Я., i!o,i:-i.; л i .Т... Казаков М.А., Соколов В.Д., Еаикина 'Г.А., t-, ц В.!!. Иодл.л , ная активность вакцин, изготоеленных из ьируся .ч-'ур.ч, п ыуч* им

г о при культивировании в среде, содерголей ^¡«.»мьин« .1 }„•„• -.ч яый гидролтат. Научные основы д-хшмигш! iipt до^-н« i j :ч ••,-. .л cj'bö ветеринарных' биологических нрепароалл; // 'jv. aTopoü Всесоюзно!! конкуренции, 'Л., 1УЫ, с.1и>-1;л).

6. Скичко Н.Д., Павленко B.C., Волостш.к C.ii., С:. м1.". п.;.. И.И., Кузнецов П.Ц., Иванов B.C., ¿етикова Л.ii., 1. t~t, -и. '..'Л. Цопольаование питательной сродн m исоочоо ^{ги-толт-н-гл in..j . дязята юдаочного белка для внрощшлния юоруоа ;!л|.лоол ыг i л • „ нотрахеита крушмго рогатого скота и о'еденгтьа. ¡Ддооо.- го.» i ,

ТЕХНОЛОГИИ npcfWlCHHOrO ISP'OilO ЬЛДС ОВЛ EeiVpoli .{ HLOi CO,.' е.Олл;, '

apoiiiparou // Точней докладов ьторлй Ьо-лч "Л. ö о л! <.;р. о.д.о, л,,

V. Ооо о/Г' '¡-яка Л,л. , С болев В.В., Ci'.: :г , Л.Д., > > lJ (иСГЛИЛ Л.В, ¡¡лл'еп.лооло.к ОДООШЮОО ХЛОД» О л О..--о 0|<.,

лол ор-люпоргорчоки oiiinvoiot алгол крупп.>ь. |.'лел... лсл-и // i' Л!ОИ ДОК 010,: О й,лС0!ЛЛ!ч(> НОуЧО( Ü К01фД • 0.0.1.i "! ЛД.чЧ,,, чл,.Д:.а ОДП Ii ГчД'ДЛ р,"пи НИ!.'!! Ii иЩ. -ЛЬ !>■ Т'.ртпр.НГУ. 01 • | •, ь'Д л. -я...

!<-'( Г, л.VI.

' /У Авторское свидетельство * 1025722 1/3-Г963. Панкова Т.Е., '■..p'i'wu U.A., Дьяконов Ji.Г1., Осадзе Д.Ф., Простяков А.П., Скичко

, Ж'-стгрев В.И., Сергеев С.П., Коломыцев A.A.

"Способ изготовления противояцурной вакцины" // Авторское ' тдегельсгЕо S 10Ы853 1/6-2983. Самуйленко А.Я., [Панкина Т.А., Адбулов А,И., Соколов В.Д., Соболев В.В., Скичко И.Д., Казаков К.А., Поляков D.B., Костина A.B.

10. Скичко Н.Д., Самуйленко А.Я. // Эффективность противо-ксурных вакцин, изготовленных с использованием питательных сред, содержащих отечественные ингредиенты. Бюллетень Всесоюзного ор-ж?ня Ленина научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им.Я.Р.Коваленко. Выпуск 55, 1984, с.112-117.

11. Скичко Н.Д., Самуйленко А.Я., Использование питательной среда, содержащей отечественные ингредиенты для транспортировки агштелия языка крупного рогатого скота // Тезисы докладов научной конференции ВИШИ "Актуальные проблемы ветеринарной вирусологии", Владимир, 1986, с.43-44.

12. Скичко Н.Д., Самуйленко А.Я. Лротективная активность вируса ящура, полученного при промышленной культивировании на эпителии языка крупного рогатого скота с использованием питательных сред, содертащих ферментативный мышечный гидролизат (ФГМ-С) // Тезисы докладов научной конференции ВНШй, ст. "Актуальные проблемы ветеринарной вирусологии", 1986, с.44-46.

13. Скичко Н.Д., Самуйленко А.Я. Селекция и адаптация вируса ящура типов А,О,С для производства инактивкрованных вакцин в средах, содержащих ингредиенты отечественного производства // Еолле-тонь ВИЭВ, 1985, вып.5У, с.33-34.

14. Скичко Н.Д., Самуйленко А.Я., Зенов Н.И., Перелыатейн

.'. Г. Использование в промышленном производстве сухой культуряль-> ■ -вакцины против болезни Марека альбумина, изготовленного из :гходов, образущихся при изготовлении неспецифического 1%мма-г-лобулина. Научные основы технологии промышленного производства лотсринарных биологических препаратов // Тезисы докладов третьей г'-есоганой конференции, 2987, с.24-25. -

15. Еремец В.И., Самуйленко А.Я., Скичко Н.Д., Албулой А.И., К\»-»шв М.А., Поляков В.В., Ольхов В.В., Нелтов В.В. Эффектив-¡хгь трехвалентной противояаурной вакцины. Научные основы тех-•-•¡>>гяи промувдеппогс производства ветеринарных биологически^

препаратов // Тлзиси докладов третьей Всесоюзной кон^ропц.и;, I9ti7, с.37-38.

16, Скичко П. Д., Самуйлинко Л,Я., Зенов IL П., Перельет..-йл

л.Г., Гребешв Г.И. Эффективность вирус-вакцшш против рннопнсь-ионии логадей сухой кудьтуральной - СВ/69, наготовленной с пели ni. зеванием отечественной питательной среди. Научные основы технологии яронкаяашого производства ветеринарных биологических пр» ыэрэтов // Тс-зпсы докладов третьей Всесоюзной конференции, 1Ш>, с. 4 3-44.

17. Поляков А .В., Саыуйленко А.Я., Скичко 11.Д., '¿рема* B.il., Казаков 'Л.А. Использование реа1!цци иммуноферминтного анализа (¡¡ФА) для оценки ишуногенносги противоящурлих вакцин и прогнозирования напряженности и длительности поствакциналышго иммуни тета у крупного рогатого скота. Научные основы технологии промасленного производства ы-туринарюл биологических препаратов // 'IV знси докладов треп »-Я Всьсовзной конференции, 19U7, c,,'-03--;.i0-l.

10. Скнчш H .Д., Самуйлеико А.Я, Иромш*ен1Ьо лрилз¡л. лл ; ¡. бис-прегорятов с использованием питательных сред, 1;.н-.-гл>пми.п.\ из отечествешяас аш-р-у-нентов. Актуплш» цробхми ветеран ;j.> вирусологии // Тезиси докладов юулюй хшфрешям Bî:;îlit, ыч: вяцгпимв 70-летию Великой Октябрьской Социчлис« ич'.-m-i! pt«-»л»-.! i 1УЬ7, с.47-19.

19. Самуйлишо A.il., Скичко Н.Д,, Ер-н-.ц 13.1!., Сл...-..;; В .V , ¿лализ состава питательных ср»д, изготсы.йншг. и .¡чг","- .i : i л белковых гидролпзатов. Актуллыше проблей! в«-1ч р.:и . ;, . й ¡.л. л огни и бактериологии // Труди BiDB тем С4, РА/?, с.СО -йл.

ПО. Сдыуйленкс А.Я., Скичко Н.Д., Ь>.и-.ц В. П., О.:к,. . I Жэйтов В.В. // Авторское свццйтельстйо № оi- '.> п.л t

концентрированная противоящуршя ткциня .

21. Самуйлс-нко А.Н., Скичко И.Д., Дуц пиков л, П. , р::■ ji. , ¡¡ангина Т.Л., ьр?м*-ц В.И., Поляков Ю, // /л- ; ■ рс,., -лл

(ЛВС » Г/712-î ОГ I июля 19««.

'¿Z. l'vopoua Н.Н., H'-iyia А.й., •»«■»». !>£.> ¡¡.. ,

Pn-TiiniiTt ЛР.ЛЯЯ счлка ОСНОВ Я K-'.;.i:!t'ii--inoli . >.■ Л:Л ¡Г:; ,

П1Л; (лллл'л ОГНИ промышленного Пролоеодл! ол 1. : ; ,:t:

нр паратов // Те-шлп д.оллл"' н m-л.: t .-л:-..i :. .

■}t р- ,щш!, М. , 19<Л, с ,П7-Пь,

;-3. Cc-prous 1>.А., Жеечл-роь В,II., Сд|,ч>,-ь Г. А,, •",.. • i.

¿■'р.ь.'нтс-тнвний гидролиза? мышечных белков как основа питатель-

с.рсд для клеточных культур // Ж. Вопросы вирусология К 5, 1!Л\ с.623-627.

?:4, Скичко Н.Д, Эффективность вирус-вакцины против ринопнев-,'нш лошадей сухой культуральной СВ/6У, изготовленной по усо-1 сраенстповэнной технологии. Научные основы производства ветери-!'>тн"х препаратов // Сборник научных трудов ВГНКИ, 1980, с.9-11.

25. Способ очистки или консервирования вируса ящура // Автор-си»; свидетельство № 1554375, 1У8У, Еремец В.И., Скичко НдД., С'■•'/йленко А.Я., Салажор £.Л., Соколов В.Д.

£6. Способ вакцинации крупного рогатого скота // Авторское гыдетельство X 1610610, 1990, Скичко Н.Д., Самуйленко А.Я., Стишювэ п.И., Заблоцхий В.Т., Келтов В.В., Еремец В.И., Зенов ¡¡.И,

27. Скичко Н.Д., Самуйленко А.Я., Соколов В.Д., Соболев В.Б., К:стина Л.В., Еремец В.й., Поляков В.В., Казаков М.А. Адаптация тшммэь вируса ящура с использованием питательной среды с АГМ-С ;/ Авторское свидетельство 1? £26-129 от 1.10.85.

20. Положительное рекенке по заявке 4822739/13 (052633) от 26.4.91 // Способ изготовления вакцины против тейлериоза кругщог.. рогатого скота. Скичко Н.Д., Самуйленко А,Я., Соловьев Б.В., Губан Е.А., Степанова Н,И., Заблоцкнй В.Т., Васько В.Е., Гребе-н?р ГЛ1.

2У. Скичко Н.Д. Использование ферментативного мышечного гид-релпзата (ЙГЫ-С) в технологии производства вакцины против тейле-I аоза крупного рогатого скота // Тезисы 4-й Всесоюзной конферен-Научные основы технологии производства ветеринарных биологи-аппаратов. М., 1УУ1, с.147-149. 30. Соловгев Б.В., Скичко Н.Д., Степанова Н.И., Заблоцкий 1^рсбенев Г.Ы. Культивирование лимфоцитов те-шшазированинхТЬе1Х«г1а.аягшЗаЛ*в ферментере объемом 25 .• -тр-1' г. применением АСУТП // Тезисы 4-й Всесоюзной конференции, основы технологии производства ветеринарных биологиче-г?гепа(-втов, М., 1У91, оЛО-1л.

;Ь;у:ж:шо в почать 10.07.93. Заказ 626 :<.;тт 60x64/16 Тираж ПО

Типография РДСХН