Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Геногеография и концепция профилактики молекулярно-генетических вариантов бета-талассемии в Азербайджане

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Геногеография и концепция профилактики молекулярно-генетических вариантов бета-талассемии в Азербайджане"

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УКРАИНЫ КИЕВСКИП ИНСТИТУТ УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ВРАЧЕЙ

На правах рукописи РАСУЛОВ ЭЛЬХАН МАМЕД РАСУЛ оглы

ГЕНОГЕОГРАФИЯ И КОНЦЕПЦИЯ ПРОФИЛАКТИКИ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ ВАРИАНТОВ ТАЛАССЕМИИ В АЗЕРБАЙДЖАНЕ

Специальность — 03.00.15 — Генетика

Автореферат диссертации на сомсхание ученей степени доктора биологических наук

Киев — 1992

Работа выполнена в Научно-исследовательском Институте акушерства и гинекологии Минздрава Азербайджанской Республики.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук профессор Р. Ф. Гарькавцева.

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

НИИ детской гематологии МЗ Российской Федерации.

заседании специализнров . . 4.44.04 при Киевском Госу-

дарственном Институте Усовершенствования врачей МЗ Украины. Адрес: 252112, Киев, ул. Дорогожицкая, 9

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Киевского Государственного Института Усовершенствования врачей МЗ Украины.

доктор биологических наук Стародуб Н. Ф, доктор медицинских наук Гречанина Е. Я.; доктор биологических наук Козьмин С. Д.

Защита диссертации

1992 г. в 13 часов на

Автореферат разослан

1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат медицинских наук

Н. Г. ГОРОВЕНКО

Тип. КВВАИУ. 2,75 печ. л. Зак. 633

г

ot» -

'■j

■-KS» :Л

ВВЕДЕНИЕ

^ "^^УУ&ность проблемы. В настоящее время под эгидоа ВОЗ

широко развернулись исследования по изучению молекулярных основ патогенеза, методов диагностики, лечения и профилактики группы наследственных анемия (с\- и ji-тулаисемия, серповидно-клеточная анемия) ( Cac^-eieLj9?C, 1991,1592) .

Изучение jb-талассемии на молекулярном уровнз показало, что данная группа наследственна анемия связана с дефектом экспрессии ^>-глоб .мовогэ г^п. т.е. нарушением синтеза Ji-цепея глобина на четырех уровнях: транскрипционном, поеттранехрал-цконном, трансляционном и посттрансляционном (HciafcttiO. dül,IS90).

Эти нарушения приводят к частичному детицигу проекция (Jb+-) ^-"и полному отсутств»о (у>°-) уЬ-цэпей глобина (Р. !>.Гарь-кавцгва с соавт. ,1974,1976; С. А.Лимборская с соавт1976,1983, 1907; Ю.Н.Токарев с соавт. ,1583; fUüázKi в. it ed., 1590).

Пристальное внимание иссл-доват'зл:,'; к группе наследственных анемия вызвано их широким распространением в мире (ежегодно рождаются более 22С С ГС гомозигот только по J» -талассемии), в ток числе и в СНГ (Р. Гарькавцева, 1977; С. А.Лкмбооская, IS83; ПК. Токарев, 1983; K.M. Мовсум-заде с соавт. ,19 85,1986).

Особый интерес представляет население Агербаяджана, где частота jb -талассемии самая высокая и достигает в некоторых регионах республики 15^ гетерозиготного носительства (А.М.Ахун-доез ,1565,1972; Р.Ш.Рустамов с соавт., 1981; к. М. Мовсум-заде с ссавт., 1981,1985). Ежегодно в республике рождается около 500 новорожденных с гомозиготно! fop.v:c,'i ^-талассемии (анемия Кули). Их число растет за счет кровнородственных браков, широко распространенных ? республике.

йлассемия в эндемичных районах является причиной материнской смертности (3-5/5). Смертельные гемолитические кризы нередко развиваются у женаин - гетерозигот или компаундов в гвриод 55ре.мзнности и родов.

Известно более ICO мутация Jb -глобикового гена, способ-гтвучшие раззэти-о данного заболеганля. Составление геногеогра-j-ических карт молекулярно-генетических вариантов ¿ -талассемии здя населения конкретного региона имеют как теоретическое зна-ietíие для понимания особенностей геногеогра?ии ыутацй! & -талас-

сеиии, так и для решения практических вопросов, связанных с генетическим скрш'.чкгом -талассе мии в период беременности и новорожден ноет и, модекулярно-гене тической диагностики, ^о повышает эАктивность генетического консультирования и прена-тальной диагностики плода в семьях с р:;скок рождения больного толассемией (ебекка.

Исключительно важно выработать концепц^ профилактики ?а-ласезмий ыя населения Азербайджана, включашую скрининг в период беременности йХн^л; 1; у новорожденных, генетическое консультирование, пре на та ль ну ч диагностику и лечение. Однако, до настоящего времени из-за отсутствия диагностических значений для использусмих тосгоп заявления -талассемии с учетом наличия в популяции таких патологических генов, как сх -талаесемия, недостаточность ^ермзнта Г61Д, аномальные гемоглебшш 3 и Д> & также железоде ;[ ицктпая анемия, изыеням^ке картину крови, массовое выявление -талассеый1 среди беременных и новорожденных не проводилось, что затрудняло проведение квалифицированной профилактической помощи родителям и детям.

Изучение (енотиптесксго полиморфизма мутаций -талассе-иии в Азербайджане интересно и тем, что здесь выявляется высокие частоты СХ -талассемии, недостаточности Г6*Д, аномальных гемоглобинов 5 к Л, а также ьелезодефицигнод анемии (А. М. Ахундова, 1972; I- Г.Начарли с соавт.,1583; К- М. Мовсуи-эаде с со-авт.,1&83). "!охучен-1ь;£ результаты помогут правильно лечить Сольных детйП с ге>.,оглобикопатиями.

Упрошена' мслзкудярно-генетнчоск'« методов исследования и забора биологис 7КОГ0 материала (ворсин хориона) делает воз-иог/нь'м раан'.т диагностику (&-Ю недель) гемоглобинопатия (ЛЫ-кЛ &<х1-11Чс1'). Поэтому исключительно важно разработать псдохгие, а также нерадиоактивные ^кспресс-изтоди диаглостнки нутаций -глобинового гена на англкфицировгнных образцах ДНК, зддзлешшх из ворсин хориона.

Создание концепции про плакгихи /Ь-талассе мил позволит снизить роадаемость и смертность бсльнь-х детей и повысит эффективность скрининга, генетического консультирования, проведения пренаталькой диагностики и лечения.

Учитывая вышеизложенное, цель») ргботы явилось изучение молекулярно-генетической характеристики и генсге'ографии в Азербайджане, кула входят административно-территориальные, зональные и этко-терригориальные особенности распределения мутаций р -глобинового гена у населения, а также выработка концепции профилактики, включаотей разработку нерадиоактивннх, экспресс-методов и диагностических тестов для скрининга женщин в период беременности и новорожденных, генетическое консультирование и пренатальную диагностику.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

I. изучить типы и частоты мутаций ^-глобинового гена; со., .¿вить геногеогрг^ическуп карту для мутация талассемии;

3. изучить' фенотипические проявления отдельных мутация и их сочетаний;

4. установить информативность диагностических тестов для скрининга талассемкй в период беременности;

5. рассчитать теоретически ожидаемую частоту мутантных фенотипов у гомозигот по ^-талассем:пи серповидноклеточной анемии и компаундов (у$Т~/Нв,$) для населения Азербайджана;

6. разработать экслресс-!.етод для массовой диагностики р -талассемии у новорожденных;

7. разработать нерадиоактивный метод дэдгиостихи мутация р -глобинового гена.

Научная новизна - результатов. Впервые моле кул яри о-ге нет и-ческая характеристика и геногеография мутация ^-глобинового ■гена у населения Азербайджана.

Идентифицировано восемь мутаций -глобинсеого гена:^ делециенкые мутацки, приводящие к сдвигу рамхи считывания, делеция динуклеотида АА'в кодоне Р; делецая нуклеотида Г на гренкце кмдонов 82 и 83; вставка нуклеотида Г па границ; ко-донов 8 и 9. Все эти мутации приводят к образование термини-руюших кодонов с фенотипом уЬ°_галассемии. Остальные мутации имели нуклеотидкые замены, нарушавшие ГНК-процессинг с фенотип-ом ^Ь+-талассемии, исключение составляет стация -

Установлены частоты восьми мутация, четыре из которых (^>06, ^Ь+-Г-ПО и составляв 75,81,ос-

тальные ( у>°82/еэ, ^0/9, уЬ+-30 и у?,+-1-130) - 6,2б£ всех идентифицированных мутаций. Расшифровано 66,мутация Ь -глобинозого гена у населения Азербайджана.

Составлена геногеографическая карта для 552 аллелей ( и +-) и восьми мутаций ^&-глобинового гена в 162 хромосомах, вкл^ча^шая административно-территориальные, зональные и экстерриториальные особенности их распределения. Установлено, что пять из восьми мутаций: ^-Г-ПО, у>°-2-1, _>&+-1-б, £ +-30 и Ь 1—130 - обнаружены ранее и широко распространены в странах средиземноморского бассейна, Р/9 - в азиатских странах. Две мутации - /Ь°82/83 и являются эндемичными ия населения Азербайджана. (Мутация ^>°82/83 обнаружена впервые. 06-сужгдются пути миграции мутации - £>°8 в популяциях Европы и Малой Азии.

Впервые описаны фенотипические проявления (гематологические и биохимические показатели) мутаций £-глобкнового гена и их сочетаний. ""

Установлены четыре информативных теста (осмотическая резистентность эритроцитов - ОРЭ, средний объем эритроцитов -СОЭ, среднее содержание гемоглобина в эритроците - ССГЗ и Нв Ар и пределы колебания их значения при носительстве гена р -талассемии во время беременности. Выявлена частота встре-чаемосги гена £ -талассемии среди беременных г. Баку -4,6207^. В (£лом частота гемоглобинопатии составила 5,56^. Приблизительно 6 из 100 обследованных.гемоглобинопатии имели носительство наследственных гемоглобинопатии

Для массовос, диагностики гемоглобинопатия у новороаден-ных, разработан и внедрен экспресс-метод изоэлектрофокусирова-. ния цепей .глобина, экстрагированных из высушзнных пятен крови на ультратонких полиакриламидно-амфолиновых пластинках с рН 6-8.

Разработан и использован способ диагностики мутации 8 ко-дона (-АА) ^-глобинозого гена. На этот метод автором получено положительное ресЕние ВНЯ.1ГПЭ на выдачу патента на изобретение (заявка М5368П/14 41704).

Научно-практическая значимость работы. Значимость частоящего исследования заключается в разработке программ генети-

ческого скрининг беременных и новорожденных о целью выявления брачных пар, имеющих риск рождения детей, а также новорожденных о различными формами и сочетаниями гемоглобинопатия, что позволит своевременно лечить больных детея и ретроспективно выявлять семьи, имеющие риск повторного рождения больного гемоглобинопатией ребенка.

разработан и использован нерадиоактивный электрофоретичес-кий метод диагностики мутаций кодона 6 (-АА) £ -глоб инового гена, что делает метод доступный для многих медицинских цзнтров, эаниыаюшихся проблемой гемоглобинопатия. Кроме того, на основе составленных геногеографических карт (подбор необходимых аллель-специфичесхих олигонуклеотидных зондов) проведено квалифицированное генетическое консультирование семей о последуюией прена-тальной диагностикой гиода, направленное на онижение частоты рождаемости детей с гемоглобинопатией у населения Азербайджана.

Апробация работы, Кзультатн исследования были представлены и обсуждены: I (Баку,19 65), П (Баку,1950) Республиканских съездах гематологов и тренсфузиологов Азербайджана, Каучно-прак-тической конференции "Актуальные вопросы медицинской диагностики" (Баку,1990), П Республиканской съезде акупвров и гинекологов (Махачкала, 1966) , Юбилейной научной конференции, посвященной 50-ти летию образования НИИ Г и ПК Республики Грузия (Тбилиси, 1985), 1У Всесоюзной с1езде акуивров и гинекологов (Махачкала, 1&Е9), 1У1Всесоюзном съезде генетиков и селекционеров (Кишинев, 1982), П Всесоюзной съезде медицинских генетиков'(Алма-Ата, 1990), 16 (Москва, 1980 и 20 (Будапешт,ВР, 1950) *едарациях Европейских Биохимических Сбшеств, 12 Всемирно» симпозиуме "Структур и функция эритроидных клеток" (Берлин,Германия, 1990) < У Всемирном конгрессе "Пренатальная диагностика плода" (Прьга, ЧС?Р,1990). 71 Конгрессе Европейских Обпястэ акусеров в гинекологов (Москва, 1991), УШ Всемирной конгрессе издкцикских- генетиков (Вашингтон,США, 1991) , П Национальной конгрессе акуоер-гинекологов и генетиков (Стамбул,Турция,1991) .

Структура работы. Диссертация офоршопа на 235 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы; описгйня материалов и использованных методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, обшзго заключения, вы-

водов и описка цитируемой литературы, содержащего 259' источников, из них 63 отечественных и 156 иностранных авторов.

Диссертация иллюстрирована • 22 таблицами и 46 рисунками.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Для выявления.генетической гетерогенности гена J> -талас-семии на уровне фенотипа с использованием методов аналитического изозлектроф.ок/сирования и биосинтеза цепей глобина обследовано 5068 человек, среди которых выявлено 418 гомозигот и 116 компаундов. Материал собран во время экспедиция в 17 административных регионах республики. Идентифицированы две фенотипи-ческие формы и гена ^-талассемии.

Шлекулярно-генетяческую характеристику мутацкй jb-глоби-. нового гена изучали на 188 хромосомах полученных от 79 гомозигот, 20 гетерозигот (10 брачных пар) и 10 компаундов с различными фенотипическими формзми. Идентифицировано восемь мутаций ^»-глобинового гена.

• -Для 75 больных описаны фе нотигическпе проявления (гематологические и биохимические показатели) отдельных мутация и их . сочетаний, что позволило определить связь между мутациями и фйнотигшческими проявлениями болезни.

С целью выявления семей, имевших риск родить больного гемоглобинопатией ребенка; и для установления информативности диагностических тестов на выявление носителей гена' р -талас-сеиии обследовано I0I50 беременных г. Баку. У 569 беременных выявлено носительство патологических генов: о<-, -талассе-ыкя, серпозидноклеточностн и НвД.

Ге этическому консультированию были подвергнуты 824 мужчины, небе ре иен кие женпины и беременные, обратившиеся в медико-генетическую лаборатории НИИ акушерства' и гинзкологии^КЗ 'Азербайджансксй Республики с целью прогноза потомства. В результате обследования данного контингента выявлено 185 семей ':,мя проведения преметальной диагностики плода. /. .. Прэзздан скринингу 46SO новорожденных из различных родил]

них домов г. Баку и трех регионов геспубл.ки (Кабула ,Агдаш « .•Гескчав), с цзлью.выявления семей репродуктивного возраста,

- 7 -

имевших риск родить повторно йл:ьного лассемией ребенка, Скр-и-нинг проведен оке пресс-методом, разрао^-анкыи нами для массовой ' диагностики талассе мий у новоролденных. С помощью данного метода диагностировано 9 случаев гомзь пгог'.эго состояния уЬ-талассе,-уии.

Проведено 24 случая пренатальноя диагностики плода в различна срок и ¿ерзм-мно.т;:, при этом использовались белковые и и сле-кулярно-генетические методч диагностики. Четерналом для исследования этих семей служила пуповикная кровь плода и новорожденного, клетка ворсин хориона, фкброблесты амниотической яидкостк и ткань еоортуса.

Таким образом, путем генетического скрининга dervчгиных жен-шин, новоролденных, брачных пар, обратившихся в медико-генегичес-кую лзбораторич, /. в экспедиционных условиях, обследовано ?0932 человека. Среди них выявлено более ?5О семей с гечетичеекч» риской - гемоглобинопатией, 418 гомозигот по J5 -талассе мии, 116 компаундов и 't серпов иднокле г очной анемией.

В работе использовались еле душ не методы исследования:

1. Молекулярно-ге:(ет'.г;°сх!Р. м-.хеды диагностики;

- аллель-сгв цифическая слигонуклеотидная дот-гибридизация амп-ли' аиггем кнкх и гр ампл ифицированных образцов фрагмента ДНК (ASO), аллель-сгйци|ическэя амлли;ихат;ия ¿AR4S), нерсд/сактимый - тз-гоксидазныа метод диагностики (MuivA-ctú^, мх^чИс-н-) , не радио- , активный - электрогоретичгская .узгод диагностики мутации кодона 8 1 (-АА) Jb -глобинового гена, субгаплотипирование и секвенирова-ние ГКК.

2. Анализ состава гемоглобина и,глобинов (биосинтез if.пей глобина, изоэлектрофокусированиг на ПААГ с рН 3,5-9,5 и 6-8. электрофорез и количественное опре деле кие*-¡«тельного гембглобгаь).

3. /¿учение гематологических и биохимических показателей (определение ¡ерэит.лна, еывороточного железа, активности фермента Г5"Д, осмотической резистентности эритроцитов, среднего объема эгиг.роцитов, среднего содержания гемоглобина в отдельном эритроците, цветового показателя, пробы на серповидность эритроцитов, пробы на растворимость гемоглобина).

Рэссчет гп:нсй чсстоти гемоглобинопатия проводили н^ основан::!; учета ::>. дг-ух ^еногипических частот,

Для обработки мате риалов использовали общепринятые статис-тн'.е сложенные в руководствах по статистике.

- а

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Типы и честстк, геногеогра}ия мутаций J> -глоб инового гена у населения Азербайджана.

Предварительные иоследо^аиия генетической гетерогенности гена Jb -талассеиии на большом экспериментальном материале (531 бо.чышх - 952 талассемических генов) показали наличке двух {е-нотипических юрм этого гена л уУ-). соотношение которых составило 7 32/220 соответственно, приблизительно 3,5/1.

Полученные результаты легли в осноеу дальнейших молекуляр-но-гене тиче ских исследований по иде нтитикацки генных мутаций J>-талассе мин.

Тестирование проводили с использованием олигонуклеотидных зондов на слсдуоаие мутации: jb°39 (С-Т), (Г-А), />°б

(-А) , />°-2-1 (А-Г), Jb° 6 (-АА) , jcs^-I-IIO (Г-А). jb* -87 (С-Г). Д^-Т-6 (Т-С). Проведенный генетический скрининг позволил выя-вигь четыре мутации (ь°8, JbP-2-I, ^>+-1-П0 и jf>+-I-6) в I5C хромосомах (79, f?).

Секвенировано 12 образцов ДНК, для которых раннее не были идентифицированы мутации. Результаты секвенировакия показали наличие следующих мутаций: Ь°8/9 (+Г) , fc°82/83 (-Г), -30 (Т-А), JV-I-130 (Г-С).

Результаты генетического скрининга мутаций J> -талассемии у населения Азербайджана предсгзэлоны в га'л.ие " I.

П'зультаты генетического скрининга j/утапий ^&-талассе

мии

у населения Азербайджан скоп PC о

Таблица 9 I,

Название цутации Количе ство Частота

хромосом гена (£)

(-АА) 66 35,11

jb°_2-I (Г-А) 43 22.87

Р M-IIO (Г-А) 24 12,77

Jb +-1-6 (Т-С) 17

■f>° е/ 9 ( +Г) 6 3,15

J>° 82/ РЗ (-Г) 3 1,59

f> + -30 (Т-А) 2 I.C6

£+-1-]зо ■ (Г-С) г Г,53

Не идентифицировано 26 13,83

- 9 -

Таким образом, генетически скрипшг о использовании четырех олигонуклеотидных зондов (/Ь^Р. ¿>*-1-1ТС и^!>+-1-б) позволяет диагностировать 79,66 всех мутаций ^ -талассеикя у населения Азербайджана; 6,38? иде нти'ипированн'ых мутация соо-тавлякт - />° 62/83, ^* -30 и ^>*-1-1Э0. Всего иден-ги'ицчрозано всех мутация.

При геногеографич соком исследовании распространения 552 аллелся и р^-) по регионам проживания бальных, учитывали миграцию родителей и место ровдения больного ребенка. Г>но1чог-ра "веское исследованга аллелея -талассемичс ского гена у населения Азербайджана показало их нерззнокгриое распределение о преобладанием клике ^'•"-яллелей, а также »»ояоаллельиым

их распределен ¡ем. Например и регионах: Кабала, Изучала, Кахи, Закатали, "изули, Зардоб, Агддабедн, Нагорная часть Кфчбмуч и Нахичеванская АР встречается только Гераабояг/.ом регионе

а в остальных регионах оба аллелл з разных соотнесениях. Полученные результаты легли в основу наших дальне и с их исследования по составлению молекулярнс-генетическнх карг стации ^-глоб илового гена у населен т Азербайджана.

Все идентифицированные ¡о^ачин Об"1 хромосом) рас предала ни по административно-территориальным, зональный регионам республики, а т-№.'г лз 'пно-территориальному признаку (Таблиц 2,3,<0.

Как видно из таблицы 2, наблюдается неравномерное ро.спрэ-деленке мутация ^г>°8 (-АА) у населени.» .. иинистративннх регионов, обглоуюиих 1С зон.

9 !'!•?:<и-Эи"пг£льской зоне <У1), } хлюч-.юсеп северные административно-территориальные рая сны, раз иные на Рольаоа Кавказском хребте: Пеки, Закатали, Кахи, Кабала из 22 обследованных хромосом РС хмели иутац;п В другся зоне - в Нагорнся части Карабаха (X). оаополлгтьнсз в горах !Злого Кавказа, кз 1С хрочоггм все 1С (1СС*) имели ">ту (г/тацкю. В семой лольпоя -Кура-Л?: ксп.скоя зоне (3), охватывающей всю нейтральную часть ре спублжк, у обследованных хрг'оссы - 27- имели цутаигэ "0-дона 8 с неравномерным распределением пнутрл золы.

В Гяндте-Казахской зоне (П) нз 16 идентифицированных '^ута-3 имели - ''та мутация не выявлена в Апсгроысксл (I), Ленкорань-АстаринскоП (У) зонах. Наиболее высок кз частоты - 65 из 88 идентифицированных (35,112) ииели делен!» Двух нуклеоги-

дов (-АА) в кодоне 8 jb-глобинового гена. Называется нутация -турецкой, потону, что впервые эта мутация выявлена у турка, а затем спорадически в тех регионах средиземноморского бассейна, которые несколько веков были под игой Османской Империи. Популя-ционные исследования в 1Урции показали, что данная мутация имеет частоту - 6,55/? и значгаельно уступает нашим результатам - 35,IIi. Можно высказать гипотезу о том, что этот ген в турецкую популяцию попал из Азербайджана.

Вторая по чс.стоте встречаемости мутация - замена нуклеотида Г-А в первом пукле отиде второго большого интрона и составляет -22,в7% (43 хромосом из 188).

Как видно из таблиц 3, мутация - обнаружена в зо-

нах . - I, А, Ш, 1У, У, УП с неравномерным распределением. В зоне Ш - К>ра-Араксинской, явля«иейся самой информативной по количеству обследованных хромосом, частота J>°-2~1 составила - 23.5$, однако эта мутация не обнаружена в зонах У1 и X.

В Апшерснской и Гянджа-Казахской зонах, наблюдаются довольно высоки частоты этой нутации 46,и 31,2?, соответственно. Анализ родословных показал, что 6 из 7 мутаций в Апшеронском районе принадлежат азербайджанцам из Армении, в Гяндха-Казахской зоне 3 из 5 - азербайджанки, мигрировавшим из Грузии.

Третья мутация - J3>+-I-IIG (Г-А) иизет частоту встречаемости 12.775'. Ее наблюдали в зонах: П - 5С£, ' Ш - 10,%. 1У - 752, УП - Il.IIi. Эта мутация довольно часто встречается в странах орсдиземноморского бассейна в таких странах, как Греция, Иг ал «я, Кипр и Турция.

.Четвертая мутация - замена Т-С в 6 позиции ш$ого интроиа • ji-глоб адового гена у населения Азербайджана встречается с частот«! - 9,0$ и неравномерно распределена у населения республики." Выявлена в зонах - I (26,&), И (II,250 и УП (II.Il£). В ос-талыих зонах эта мутация отсутствовала.

По литературным данный известно, что все эти четыре мутации ^>-глобикового гена встречаются у населения 'Турции и отсутствуют у населения Исламской Ргспубликн Иран, имеюиеи общую границу о Азербайджанской Республикой.

Пятой по частоте встречаемости является мутация -Jb°E/9 (+Г), выявленная раннее у населения №дии с фана. Данная мутация надюна также у васелекия южных регионов республик: в Ленко-рань-А«срансхой зоне (У) а у Азербайджану в - выходов из Ген о-

ного Азербайджана (ИРИ). Частота этой гации для данного региона составила - 60,С^.

3 таблицз 4 представлены результаты этно-территориального распределения мутация р -глобинового гена у населения республики. Как видно из таблиц, все азербайджанцы были разделены на пять групп и различались только по регионам проживания. У азербайджанце из Грузки выявле ны.мутации: р°-2-1 и jE>*-I-TIO, тогда как у азербайджанца из Армении выявлена только одна мутация - jb°-2-l. У азербайджанцез из ЯРИ Есе ц хромосомы имеля Jb°fc/9 (+Г). Данная мутация также иденти тииирована у двух талы-сей, пропивающих на юго-воссже республики.

Штересные данные получены для малых этнических групп, проживающих в Азербаядггзне. Грузины-ингило?.цы, проживавшие на севере ре спубл кхи (Закаталы) , удины, проживающие в Кабалинском, аврцы из Кахскогэ района, относящиеся к '¿еки-Закатальской зоне (У1) имели мутацию - р°е (-АА). У лезгин Куба-ХачмасскоЯ зоны ( 1У) 75% мутаций также составила данная мутация. 10 обследованных хромосом от пяти гомозигот армянской национальности из нагорной части Карабаха имели эту же мутацию.

Наличие мутации кодона 8 (-АА) г высоких частотах - 35,1 Е£ у народностей, проживающих "в Азербайджане, свидетельствует о том, что эта мутация не ганесена в данный регион, а наоборот, путем миграции из этого региона попала в Малую Ази^ (нынешняя Ту-рция), а затем и в европейские популяции.

На рисунках I и 2 представлены геногеографическая карта мутаций jb-глобинового гена у населения Азербайджанской Взспуб-лики и сравнительная геногеографическая карта основных мутация Jb-глобиноЕОго гена s странах средиземноморского бассейна. Ближнего Зостока и Азербалджанскся Республики, соответственно.

Таким образом, геногеогра^ическке исследования мутаций, идентифицированных у населения Азербайджана, говорят об их неоднородна/ распространенности. Отмечается этко-территориальная связь отдельных мутаций. Составлена ген oreогра*иче екая карта мутацкя, идентифицированных у населения Азербайджана. включая административно-территориальные, зенальнуе к этно-территсриаль-ные-особенности их распределения, что поможет в созгании кои->«пции профилактики, вклп«агдей пренатальную диагностику тала iceu.i: в Аа?г'бйджане.

АгШЕПЕтративно-террЕторгальисе распределение оснозных иутацтП Ь-т ала сеет-! у населены

__Азербайджанской Рзсдублид. *_Таблица X 2-

Название _мутации ;ъ -г л о с и к о б о г . гена

региона ~8 ^-2-1 .ьМ-ПО Е>М-б Е>°У9 Остальн. Неиденти?. _Кол-во Част Кол-во част Кохич.Чзст Колич.Част Колич.Час-Кол.Част .Кол-во Част.

ГЬ окчай 2 18,1 I 9.05 2 18.1 8 45,4 - - - - I 9,С5

Удгар 2 20.0 - - - I 1С.0 2 20.0 - - ■ - - 5 5С.0

Агдаи 3 30.0 5 50.0 2 20.0 - - ______

Кврдаыир 7 58,3 2 16.6 I 6.3 2 16.5 ______

Агдап б 22.2 4 15.3 I 3.4 3 11,1 - " - - - 12 44.4

Джебраш! - I 25.0 - ___ - - - - 3 75,0

$изули I 25,0 2 50.0 - - I 25,0

Евлах - I 20,0 4 60.0 - - ______

Юекаха 4 75,5 - I 25,0 - - -

Хачмас - I 50.0 - - - - - - I 50.0

Аякроп - I 12.3 4 53.0 - - 3 37,5 _

Закатали 5 87,5 - _ ___ _ - _ _ I 1?,5

Не+тчала I 50.0 - - - ___ ____! 50,0

Кабала 8 ТСС, О - - _ ___ ______

Шеки ' 3 50,0 - - - ___ 3 50.0 -

бронзой - _ _ 0 100.0 - - ______

Сабирсба д, 2 40.0 2 4С.0 - _ _ _ _ _ _ _ I до,О

Эардоб." .3 50.0 3 50.0 - ___ ______

Камкир' V? 50.0 2 50.0 - ___ ______

Карабах /10 100,0 - - - ___ _______

Кгзип- - ' - - 2 100.0 - ___ ______

Агдхабедя г 1СС.С - __. ______

Сальяны I 25,0 - 2 75.0 - - - -

Исмаилды ? 50,0 I 25,С I 25,0 - - - -____

Куба 8 1СС.0 - - __ ______

Кахи 5 3 8,4 4 X, 8 4 30. 8 - ______

Ленкорань - - I 2С.С - 4 80,0 -

"О О Г 0-55-357П-4!> 22. У/ ' 24-12.77 IV У,С4-Ь 3,19 Ь ЗЛУ '¿Ь 13, КЗ-

ю I

Еональноз рзспрзггдетз основных ну та па ь -глобинозого гена у населения Азербайджана. ___£_§_Таблица 3 3

Еаэяансз зоны Ц утаи ад Л-глобмнсзого гена_

J!>02-I jb+1-IIC jb+I-б р°0/9 Остальа. Иеидьитиф.

Кол- Час- Кол- Час-Хол- Час- Кол- час- Код-Час- Кол- Чзс- Кол- Час-во тста го тога во тота во тота во тота во тота во тста

ЬАпгсронксая - - 7 Чб.б 4 ¿6,6 1 2Ь. б -

П. Гяндга-Казахсзад 3 10.7 5 31.2 О -'«9.9 - - - -- --

I.Kjrpa-Apascaiicsaa 27 25.2 25 23.3 II 10.3 12 II. 2 - - - 24 23.3

ХУ.КУСа-Хачкасехгл 3 75.С - - ' - - - - I 25,0

Т..Ленксраць-Астар;лас£Д I 20,0 - - - - 4 ST.С - - -

У1.2£ки-сзпагальскал 33 SC.C I А,5 - - , - _ ___ _ i

УП.Liîiaxa-Севанаiîd;кал б ^,7 1 ll.II I ИЛ I H.II -----УЕ.Кгдбадгар-ЕЗгбамнзсзал

И.Нахвчеьазсгая АР ---X. НКЛО 10 1СЮ.О ----- - - - -

ИТОГО 66 35.11 A3 22.87 24 12.8 17 f>,04 6 .3,2 6 3.2 25 13.83

Эти о-территориальное распределение нутаций ^»-глобинового геЕа у населения Азербайджана.

Таблица * <1

Название этни- Регион Количество ыутаций А-глобинавсго гена

ческой групп: проживания со ^>2-1 У-ПО -30 ^82/83 ^130 Не иде к. ти*.аллели

Азербайджану Азербайдаак 38 34 20 13 - 3 I 26

Азербайджану Груз кя ,1 3 1 _ - -

Азербайджану Армения - 6 - - -

Азе рбайдтанцы Иран - - и - -

Та ты-мусульмане Агпиерон - - 4 - -

Грузины ИНГ ил ой да Закаталы и, _ _ — — - — _ _

Аомяне из ИКАО Карабах 10 - _ _ - _

Удины Кабала 8 - - - -

Карачаевка г. Баку - - - ' 2 - -

Лезгины Хачмас . 2 2 _ - -

Аварцы Кахи 3 ' I - - -

йлыши Ленкорань - - 2 - -

ИТОГО

66 О 24 17 6 2 3 I 26

ЕВРОПА

АФРИКА

АЗИЯ

Рис. р . ГЪногесгрзтическая карта основных мутецпя ^-ГГ в странах Сгехиземнсыорсадго бассейна. Ближнего Востока и Азербайджанской Г^спублизе. Т. Португалия, 2. Испания, 3. ГГ «ратли. <». о-в Сзрмикп (Италия), 5. Тунге, 6. Италия, 7. Греция, Р. Турция. 5.о-в Кипр,

ТС. Ирак, (Курдистан). II. Ливан, 1?. Азербайджан, 1Э.П-Рславия. 1«. Болгария.

^ -/г-т. Ц|-'/>П-НС. Ф-/1-6. хрлтта^и.

О

- не икнтитииигювзшшг.

:зиотапзчвск<* проявление отдельных иутаца ^Ь-глсбвао-зого 1«ка в их осчетания.

Для описания котнпвческюг проявления (геиатологйческн а бвохпгачесхсз показателя крозн) ыутаца ^?>-глобинового гена а а оочетанпл обследозано 75 Солышх (30 гоиозягот я вошауя-доз). Зсзраст больн>.'* варьировал ст 9 иесяцзв до 20 ¿эт. Для аглдсго больного описана гвьптологкческсз д бкохстооигэ псха-пагвлз вроза, представленные э таблаф 5.

Некболев тягглое течение болязна среди гоиозггот вабл^да-егол пря гснотппе - *-Т-1Ю/£>М-П0. Этиц болыши требуется еяэ^сячнм ггрелкзаняо хрози. Болезнь сопровождается гносапп звачзиг.ил дуального геиоглэбина {НзО - Кй, {эррствка -7С0 аг/»и в относительно нпзхпа значенидиа СОЗ (74 «и-3), ССГЭ (22 пг).

К т.тмлоя трэнс^узпя-заэяскуся ^орьэ так.-э относится дгз гр7пп г01,*азагот о иутац:гшя: ^°82/33 я пзрзал гз

которах описывается згзрЕые.

3 средня групгя тягести - гоиозиготн о гэпогяпоы - ¿Ре/^Рй, Срэдз. обслздоганвых васлвдала выссзгэ значения 1ЙГ (93-100? э орздсзи нззкга значения ^вррвтип (220 кг/цл), свгдзтзлъ-

стзуе? о дэпйЧЕтельнсч пиолкэе эритроцит оз. Этт больтш про-¡ззодсля перзлсгаисз зрозп 3-5 раз в год.

Лля ?рэг гзнотдвоз о гз1аэсгс?й0сгм цггацпя: -2-1,^1-6 яр* -23-харзкторзо стзртез точено болззпз н раэогл оизгсд-п^з гзрэлкгаапл а роз и. К даннся группа отнооасл ззросяил коа-гпгзз? Сольных (э орздизц 20 ¿зт). Слздогало бы опзтпть, что дгз гоисзпготи э зсзрзстз 25 я 24 года о мно?ягпиз:^>+Т-б/^ь+1-б а £ + -ГО родяла дпух дзэст - гзтерозиго?.

Срзда сзсга групп зоупуадоэ обваругзгу дгз группу болыш со срдгзя а стертоп кашизсл богззпа. 1С орзд!гзя групп? ?пзэстя бе.-23йя стаосгтся лс^ о ссявтагапия иута^Д: »

а £+-1-П0, получаслгз 3-5 гзрзлпзапсл з год.

Стэртуо 2ля=зу гузля аснгаунды:^СфМ-б а^-2-1/^+1-6, болъа'Э пз солучалз сзрздггзпвл крози (орэдкаа зезрае? 10,5 сэ?). Из (--асвол^доэокая таела стиооггелько аор'злыгыэ эп--чгзя гзгагологстесаах позазата^зл зрозв.

Лая гае по составу г^иоглсбага з плггсмсгпоса гсзаздтз-7 100 ззрсздз с аосстельстзсл 5-?ахзссеип

•Хевотишпеског описание Сольных талассеиией из Азербайджана.

Таблида X 5

Гбнотип Кол- Возраст Течение

во в сред- болезни

нем (трансфузия)

СОЭ ССГЭ UCHC Цвет. НвГ

^ показ, cg %

3

мкм пг

НвА2 • %

Ферритин нг/мл

jS°2-I/Jb°2-I 6

j,+IIO/h+IIO 2

f+I-6/p*l-6 3

р+ -Э0/|>+ -30 I j,0a2/83/jb°62/83 I

jbVjbVi* iß

£°а<упо io

fe/p+r-б з

^°2-i/?>+II0 8

ji°2-I/jb+I-6 6

KU0/jS+I-6 2

$>ae/9/p°&9 3

II

14 8

22

24 3

14 с

18 5

19

16 5

Средняя; ++ 98

мягкая; + 83

тянелая; +++ 74

Мягкая; - 83

мягкая; - 81

тяжелая; +++ 70

средняя; ++ 76

средняя; ++ 75

мягкая; - III

средняя; ++ 72

мягкая; - £5

средняя; + средняя; ++

ГО 55

П Я 0,81 98 3.12 220

27 32 0,80 60 2.93 402

22 22 0.50 83 2,76 700

26 24 0,55 12 2.58 303

27 25 0.72 44 2.60 220 21 23 0.65 75 3,05 8Э0

24 24 0,70 63 2.96 550

23 24 0.71 34 3.10 310 27 26 0.79 33 2.98 250

26 24 0,63 41 3,0 410

27 25 0.7 6 5 8 3,25 118

26 28 С, 81 22 2.80 28D

25 26 0,70 30 3,15 ' 430

cd I

Чн" - переливание крови :• год; переливание

ливание не проводилось;

через каждые 3-5 недель; "++" - переливание крови от 3 до 5 раз крови зщж раз в год, провоцируемое вирусной инфекцией; - пере.

* - одна из больных и^ела сочетание -талассеиического гена.

Дании г состава гемоглобина а гематологически па-азатела у взрослых азербайдаанц'з

с носаггльствс:! Jb -тал ас ся ¡ли. Таблаца 3 6

Mj тацил Кол-зо На г/л СОЭ 3 M км ссгэ пг НвЛ2 На F *

J°9 33 И,70 (il. 9) 69.5' (16.3 22.4 (11.9) 5.0 (10.7) 2.5 (12.®

jS°2-I 2'í 11,05 (+1,73) 72.0 (Ä.G) 2D.7 (-1.6) 4,0 (Ю.а) 3.1 • (И.2)

j/I-IIO 19 Ю,Ш (¿1.0) 60,9 (¿6.Q 20.9 (12.0) 4.5 (Ю.6) 1.6 (11.25) ' i

16 12.05 (-2, 3) 74,0 (-6.5) 23.4 ■ (¿1.9) З.б •• (+1.2) I ¿7 (II. II) i—i 0 1

7 10. ГО (¿1.65) 613,5 (15.6) 21.5 • (12.1) 4,5 (И.05) 2.0 (il. 2)

J?02/03 2 II.63 . 11.05 72.5 71,0 21.0 20.0 5,91 6,20 2.3 2,6

tí - Я 2 12.05 76.0 23.4 4.31 2.1

j 11,51 75.6 23,0 4.25 2.4

представлена в таблиц! б. &го. в основной родители больных детей. Наиболее низкие значил - статистическв достоверно от личачхия ся от нормальных РС0.С5 я 1«3,31СбО. Р*0,05) получ«-ч

ны для гетерозкгот с мутацией - ^°8/9 я ^>+-1-Н0: наиболее рысоккз - ближе к нормальным для (1 -Т.0С6. Р>С,05).

Установление типа мутации я изучение тенотипического проявления у больных гомозигот имеет болыое практическое значение для правильного лечения банных. Это позволит практический врачам точно рассчитать количество и частоту перелигой крови,дозу хелаторов в показания к смен октопии у больного, если ?го необходимо. При лечении необходимо тахяе учесть наличие у конкретного больного сочетание других наиболее часто встреча»)шихся у населения республики патология ^ритрона («-талассемия, ген серповид-ноклеточностя и аелезодефи^ггкая анемия).

Профилактика гемоглобкюпатвя ( -талассе м га).

Но сегодняшняя день из-за отсутствия эффективного леченЕЯ гемоглобинопатия у нас > стране я за рубежом, большое внимание уделяется вопросам профилактики наследственных гемоглобин о пат га.

Важным эвеном в системе про тактики является просвещение веселения, массовый скрининг, с цглыз вцявлеюя групп о генетическим рмсксм у беременных и новорожденных, генетическое консультирована в пренатальная'диагностика.

В данной главе представлены методы скрининга гетерозигот в период беременнооти и новорожденное?*, г«нетг1гсксе консультирование к пренатальная диагностики. Также описывается новый, не радиоактивный - электрофоретическия метод диагностики цутацга кодов» 8 (-АА) £ -глобйнового гена.

Скрининг гемоглобинопатия у беременных г. Баку.

Скрининг гетерозкгот во время беременности наиболее вироко применяется для выявления супружеских пар с риской рождения ребенка с гемоглобинопатией. !£льт) исследования было не тс/ько гнявление брачных пар с риском но и оказание конкретной помоип этим семьям в виде прёнатьльнод дкагисстити. Также было необходимо установить информативность диагностических тестов для скрининга тслзссрыиЯ в гвриод беременности, учитывая налив: таких патологий эритрона как: а-таласссмия, аномальные г^мсглобиан й и Д, железодефицитная анемия, недостаточность активноств ГбЬЙ

7 иасзления ре<з[1".1ики, влнядаке отрицательно на формулу кроьи и увеличташдкз ложьо-лоложмтльныв результаты схринипга.

С ис польз овен и огата гедуанх фнтор иира по лро»илс*тикв каследственкых гемогяойинэпат 'Л, *;<э поуьл&мо отобрать наиболее ин^орматавные иеходы и создать единуп схему скрининга та-лдссемка во время беременности (си.рисунок 3).

Наеболее информативный тестой является ОРЭ, положительные результаты которой наблглачтея у гетерозигот по ^-талассемни а у лиц с сзрповидноыеточностьч. Уровни 00Э н ССГЭ при гетерозиготном носякльстез 6ыез*гг меньоо 74 их и3 я 23 пг, соответственно. Анализ литературных данных показывает, что тест на ОРЭ не зо зезх популяциях дает положительные результаты при гетерози-пЛасу ноентельотгэ £-талассемин, и значения СОЭ я ССГЭ счстает'с я рз дуцирсваннымя пр» уровнях мвньсэ 76-80 икм-3 а 26-20 пг, соответственно, Однако существует работы, где описываегол случаи гзтзроэиготного аосагельства о нормальными а увеличенными эпачо-яеяцц уроэнл НзА2« Нормально значения наблюдается у гэт«~ реэкгот с мутацией (-Т э позиция -530) э промоторам регсоиз.

Пркчвкол ккзкпх значен«? НвА£ з группа обследованных бэрэ-ц"ых с гз13сзнныия ОРЭ, СОЗ, ССГЭ, спиктвльствучзнмя о гзтз-рсзпгогноста ^-^ласезмии, яэл^тся аелезоде^ищтиал аквынл (1ДА). Уросзнь КэА2 а группе - ^.-талассемия ♦ Мк были отатяо-ткческя не.« 0,852!) (Р> 0,05) по сравкзнка о гатерояиго-

тзив по ^-т8лаосэма (5,4^ 0,65£), без Ш..

Днагноотичвохая значимость количественного определения НаА2 з групп о сочэтаяиы ^»-тзласозмяи я Ш снижается, Срзда обследованных берзионних из г.Еаяу ято группа соотавила 25,Ц1?, ерзаа езбзрзизиных 23;^(гонтрольаая группа), Следует отизгкть, что 7рсгзнь фзррсткаа был изпьсе пормзльных значена на 21,П? ерзда иузчза агэрбайкзссзся яацяснальэооти. 2тй результата евк-дзгвльстаув? а дольэу эпммячнеоти г ДА для аасзлзися Азербаядяа-сз.

-Урезки ПзА? у бзрэмзниыа а сочетании ^-талассяис! а Ш аезззала, что иориальккз значения ¡йАд отизчастся у гзтвро-

асгот.

Нзлсстатсчногть ГбтД часто сопркяядаател азиоквнпм таяв* пезагатедза креза, ваз ООО з ОСГО (7<*-7б ии3 Л 24-20 ПГ, 00«-пэтетазяно). Учвтиаая высокую частоту зотрзчаеиэсти (6.Й2), а

А

1 f СЧ1

а

& 4

Si о

а m « я я Q П

S8& &

ю

a +

tí,.

о m «Ц

cd

8 О.

S

«ч fi

в

д

s: î;

I

i

MO Cía

OJ rt

< i ♦ o

a

S

« в o

& Q, Sí

J „ O^-N O O BV»

o,» o ¡rt

S ra p- »

£ s

sfê

о. » о<л

а V

гу <

+

»1

<м

С

V -с

01 «с

f; ei

3

I л

SSfc

О (ч О

о, Г) о,

sjS-gg

С.) D,Öc Ш fí m О

J. ""Г5 « -в L.

0.0 ,, QUBL.

О

С) «>

►»

1>

M

g в

S 8:

и

Q,

о w

а

f-

О <5 •< « VI

fees S g

«о

а о

ÜJ к

Et

S

и «) ь*

• Й'—Ч

сз м

» я m

=3

п

tн

« к

ы «

О я

¿ im о

.»SS

+ Ц я

л ►н к

гз

В'

«п

. &

ЧгЯ le^fí

- KS-.

0 it; о 0 >Ч з

Й8

1

a &

гз t* о о

н.

(Ч

о я

П ?

О

о о

ß

П

S

о, Ü

«i X

о

»J

изменен основ,щх псязэатллея (ООЗ я ССГЗ), являющихся на ибо'« о

J ср La та ним и пра таласс* п схему скрининга вклпчила

определен акт кз поста ГбтЛ.

Тахим образок, диагностику р -талассемии проводили при ыед/паих значениях: ОРЭ ( f), СОЭ 74 юи3, ССГ-Ч 23 пг о повиси и-пына значениями НвА./> 3,3t) , а при ¿¡LA с .нормальным а значениям.': ИзА2 <ао э.^).

Скрининг гетерозсгот среда I0I50 береизнннх г. Баку сиязкл у ЧС9 бзрзизщм (4,fi2CZ>) гетерозиготное посольство ^-талзо-се!•'"•:. Частота пнсглдышх ггиоглобстоз тяга д и $ составило оо-стгетстгеино С.3440 л 0,5613. Всего частота гемоглобинопатия 7 бзртенпых - 3.5С-. Приблизительно б ^з 1СЮ обследовашшх Сэркгпных :з.'еля кос:п9льстзо яаследетгениых гемсглобшюппгпя. Для прогноэпро изнля сбтзг-1, про*-!"2::т:г!Лс"сл помета рзссчп-теоротгчесхя сдк^етл частота рзядаеностя гоюзягог по • JS-тзлассзига, сзрпээЕ'-Дноклетсчнея ai»u:a я сочетания -тглао-с?1«а о геаси серпсзкдисхлзтсчкостя.

Гззультпти теорзтгческггх подсчете:) похсзалп, что елзгодно по рспуб'л:~э с*и"з?сл рогдсеиость 370 гсиоззго'г по ^Ь-талзо-с:.чп (оредняя пояудлцио'Ч'ая пзсгэтз оредч !ю?орсчдзгт::ид 1:5С0), ~зстп новорожденных о серпоа:иноя;!точ«оп аг.энкея (1:30000). 43 ксипАундоэ - Jb -Т/Нп 5 (1:^00).

Ain.i:a скряшглга бэрзь-енгах позэолпз? планировать сбтям, a vaKie повисать китче сто (йЛйо-гзгагичесхгзс мероприятия по npofimxtrrc гемсглсбмотпя, з чаотносга з прогздгига гепетн-".зсксго зсиоультарогаигл з прэиагзльно.ч Д!пг'.ост:'.к'л геноглобп-з о гг.? г л у ¡тсз.гигпя гзспублгса.

"кспро сс-1'5тод дузгзоспзя г2пзг".гб~::эпт,:я у ноаорсзгл■ П иастслг.эз зрсмл т.о »Herat странах разрзботага прсг-~v-< сгряш'нгз'гзмсглсбпиептия у позорзадягшх, г, готорым пргдгг^ллзтсл ряд трзбогзнгя - ¡'зг,злпос?ь, точность, гиостя чуэсгэ.чтзлъность к сйц:!?:л!!ос?ь.

О ¡^льо зипзлэглл бел г. г.:: г, ги.'.сглсбглог.з^гзп ксзерс-ивгдих, з такзе брзчяых глр о pncv.cu псзтосного рс~.г.ет.'Я большого ро-i-irm, нам:: рззрзбетпя экегрез-^тол. дгагнсет«»я геиоглобачо-глт.'М у когорелдеяных, оглгласяихся с? ракнзэ ;1згзoi:;:JX. Усопзр-

сенствованкий метод изоэлектрофскусироваывя ( игпзй глобина, экстрогироганних га'гь'сушьнных пятен к ров вр новорожденных, исключает использование антикоагулянтов и обесжчквает сохранность, транспортировку прв ксшатной температуре. Изменен!« состава и трлшииы полиакрила^ндно-ги'олинсвн;;. гелей (ПААГ), модификация состава {ихснруэиего и отмывание го растворов, уо-•ЛОВИ1 окрашивания сделали i/етод более экономичным в скоростным.

Преысгенкым методом обследована кровь от 4690 новорожденных и выявлено 9 гОиозигот по J>-талассешш, 17 новоронденных - гетерозигот о «I- « 02-талассемкей и 3 о серпозвдноклеточ-поотыо.

Верификацию результатов проводили s возрасте гости меся-ips к одного года.

Таким образом, прсдлоаенный чк о пресс-из год ИЗ} цепей глобина, экстрагированных о высушенных шггец крови на ультратон-свх ПААГ. с pH 5-0, позволил в клинически условиях провеотв постиатальнуо диагностику различных *орм в оочетани наследственных гемоглобинопатия.

Г Способ дкагвоствкв мутацнв 8 кодонс (-АА) ^5>-глоб:шо-вого гена.

Разработан и внедрен нерадисюктивный - адектрофоретЕчес-RC1 иетод выявления мутации в кодона (-АА) ^-глобкпового гева.

1£льч изобретения явилось быстрое в упрощенное керадио-актввное "исктро;ореткческоз определение мутация 6 кодона (-АА) Ь-глоб«нового гена. В сзхастном способе определения цутацив О кодона Jb-глобииового 1«ва ам'пли^икат подвергался одзктро-$ораткческо^ разгеленкэ на S' полкакрядамидном гехз (ПАГ) пра сопряжении 150 В, окно тока 22 ui. Скраску разделенных ípüтентов амили'юсата производят зодшч ростворои этпдкум броюдо, что дзлает istoä безопасный в простым я исполнении.

Супкость взосретеывл заключается о той, что ¡я бвологсчзс-сото объекта выделяя клеточную ДКХ. 8лтеы о поиооы» полшзрза-oofl сР пноя реакцЕВ проводят амплвфюапиэ учаотка мутацвз Jb -глебкэового гена. • *

Лмши^ххат у гетерозигс» с мутацюв 6 «одона состовт из дяух гошиеыентадьвых +рагиевтов ДНК, одви кэ хоторих иа джа 'иутдооткьа (-¿А) корсча другого; у гомозкго* «Ja фрагювга

короче на два нуклеотида по сравнению . ормсл. Наличие выпадения двух нуклеотидоз (-АА) влияет на мо-.окуляриый вес. а таккв на заряд грсгменга гена - ДНК, что легко выявляется путем злек-тро'ггега на 11АГ.

Упразднение процедур в прототипа: перенос амплифицироваиного фрагмента ДНК на нейлоновый "кльтр, предгвЗридиззция, гибридизация с радиоактивны олкгонуклеотидным зондом, приготовлен® этого зонда, ауторадиография энвчктельно сокра^ет т?ремт опрегэ-ления мутации 8 кодона (-АА) ^-глоб инопсго гена от 5-6 дней до 1-2 Д№я. При этом вьс?сСсжд/,егея бс-тьвое количество приборов а химических реактивов при сохранении точности определения,

1*.к им отрезом, гредлагаешй способ с сохранением точности значительно ускорит и упростит диагностику вышеописанной мутации для работы ыедико-геквтических консультаций.

Пренатальная диагностика гемоглобикопагиа.

*-ра отсутствия элективного лечения, единственным правильным путец борьбы с патологией является пренагальная диагностика плода. Производисл она в семьях, име-таих генетический риск роя-инил большого '.'Сглобинопатиея ребенка.'В случае выявления наследственнсл пзтолегня у плода с согласия супругзз протают беременность. Для проведения пренатальней диагносткхи нами использованы белковые и иолекулярнс-генетическке методы. В первом ел? чае обтекгем для исследования явилась пуповидная крепь плода, получаемая кэрдоцрнтезом. Забор тмойкнной крови производили при сроках 20-?ч недели беременности. Для анализа пуповинней крег/ /.г .!.-/< д]-а метода белковой диагностики: биосинтез цепеД глобина и гО? гемоглобинов. Молекулягнэ-генеттезчгр исследования проводили на молекулах ЖЧ, выделенных из клеток ворсин хориона и •:?'*рсу.-сстс*> ^ч::?': <ческоЯ жидкости, забер которые осуществлялся при сроках Р-ТО и 16-20 недель бе ре \е нн ост и, соответственно (см, рис. к).

Следует отметить, что пред посвег-пли пренатальноа дпг-

I

нссткхи плода исследуется семья. 3 зависимости от применяемой процедуры пренатальной диагностики ис~ледсвалась кревь бречных яэр,. ба'ьяых и эло-овых 1<'тея на бчосинтез ц»пей глобина или ее на наличие мутаций /> -г.* об кневого ге не. Тзхг.г определяли гематологические к :'исхямиче« -й показатели об«1°дуеье.,х.

.1ук овь плода педвергала селективному гемолизу:

КОРД О Щ H ТЕЗ (gC-34 вед) I

Селективный геиолпэ зрптроцятоа

а) иЭи геют-лобпноз п

№ гея гло-0И1Г5.

1*2чепье Н3 лещине! б)БЦО

I

Приготовлзпгз rei-олкзата

Bu геле в гз t?rsn глобяш Хрсузтсгрз^тя

I

Подсчет иштульеос па степ гае

ХОРИОГЕНТЕЗ се-ю вед) AMHforjHlES (IS-gC аед) Ваюлениз £НК

в) ПЛР5

Ампдитякадая - ПЦР 1

Лот-гябрн двзаця/i

ЙстряЕция г)15|етпая реакцзя

Электрофорез па ПАГ

е) гибркдя- п)3лек-

загяя с тро-

олиго- topes

нуклэо- (иовия

тигси. 1ятод)

Д) ASA - АЕУ5

i

Si

Рве- 1 . Crem прогемния ИЗ плои пря геиоглобииопатнях. Лспоньэовалв белковья ir: то ли дяагностпк:

а) и б) БЦГ, в таксе иолекулярпо-гекетвче екг;: в) ЦДРТ и аллель-спецяфвческая

олкг очуклеотмдяая дот-гибрндизацяя с использовании е) радиоактивных, г) цмтичх зон-гов ( uatfuOh- ), е) прегДтаенкым пакз -»лектрсУТоргтЕческки иетозом о

s) еллель-сгопкгкческап олягонуклеотгдкзя внплкфикацяя - AÇUS .

удаляли эритроциты материнскол крови при загрязнении еч кропи плода. В зависимости от .v от ода диагностики выбирали тактику исследования образца.

Как в и;.'но из рисунка моле кул ярно-ге нет ические исследования включали прямые и косвенные методы диагностики. Ц прямым методам относятся: аллель-спйнн'ическая олигонуклеотидная гибридизация с использованием радиоактивных и цветных зондов, аллель-специрщеская ампли гикация, а также предложи hhi/Я ньмк способ выявления мутац!-.! кодона 8 (-АА) fi -глобинового гено. К косвенным методам относится полии.ортизм длин рестриекцнеиных .фрагментов.

Ниже приводим результаты пристальней диагностики нескольких семел с риском рождения больного талассемдап и одного случая с серповидноклетсчноп анемиел ребенка.

Вереженная Ч.Н. IS64 года р о* гения и.ее мук М.Н. 11.60 года рождения не состоят в кровном родстве, выявлены путем скрининга гетероаигот во время беременности. й«г)Т дочь 5 лет с клиническая кэртинол большой J> -талассе мии (анемия Кули). Левочка получает саемесячные переливания крови. Настоящая беременность у женщины - шестая. to шти предылущих оцнз закончилась родами, четыре последу'ouих - искусственными абортами, я последняя беременность'протекает без осложнения. При ультразвуковом исследовании пледа видимой патологии не обнаружено, фотометрические показатели соответствовали ¿3-не дельном беременность. Плацента располагалась на "о or ик; м^гки л на дне.

KpcFb из пуповинно.! вены в количестве 0.5 мл была получена с помо:аь») спинолэзгороЯ иглы G "" пгд контролем секторного датчика на ультразвуковом аппарате "Тошиба 38S". КК помешали в растьор ^РТА г.мял/: провали на автоматическом счетчике.

В результате гемотолегического обследования родителеп была выярленг гмпехра'ная микрогитарная анемия о погноенным уровнем Hi?А^ и подтверждено нолтельство гена уь-талпеевмии.

fia рису иге 5 приведены рез"льтат1» хрома тогра 'J ич- ск его рая-д°.ген!1- 1 с if:it .тбина ::г крови плода. Зидно, что у плод/» .;"нте..

п я Ь ~\t:v.\- глобина. Зосг (•-■щч'л y>/¡ р^С ,СС7Р ссмрст-. С1?;-ст : п-оэиглнол лг.ны?о ^»-л'пей

глобина, • • c:t''*p-jr;".iioi v?. ¡f - ;« jb_!j*Jcon, отсутс.тгйв

- 2S -

; Рм.5. ХроыдтрА+мчесмо« (шсхом r¿o¿M»o*Ni мм* u ■чамяяхоА в (Леи *.к».м • rtwM M IU шт «»i*—ь- • M И 4 t« «n

lénan — мч| —

fmi.C. M¿64«CMt atari tu

«рем m с с f*m»**tw*i

tte ч «мгщ — цлииш иц m— »»«•I*1»

- 29 -

двипах о пссэ пя у (Гольиса дочер . потребовали провзотп

асадочаиый анализ и ей, чтобы исключить гетерозвготнооть 8 олучаэ ^°-талассемки. D результате исследования у девЬчки выявлена бсльсая^-толассеии;< о соотношением новосинтезироганиых хргяа гловина v//Jb-5,15 н <у/нес* -1.62 (рис.6), что свидетельствовало о излечил у плода ^^-тгдасссиви.

Беременность была прерваиа в 3 нед. В случае наступления следугсзя беременности семье рекомендовано повторное обрасенгг с tf льп пренаталььсй диагностики в тряси тргшестрз для апзлгза ЛНК .о ворсин хсркона молекулярно-генетическими истодами.

Тг.к::м оСрвгсм, с ппхсып кордо^нтеза а нетодоз биохиикчео-дкегностеяя, осуществлена лренатальная д га гностика гси-юзкготнсЯ Р *-талпссеипз, что позволило предотвратить рождение ребенка о тгзелсд васледстгенной паталогжЛ.

Прэдстав.вднньй случая язлгьтся первой успзснол попыткой пре-патзльнся диагностики d стране и свидетельствует о дкагяостпчзо-ксл ценности бгосивтеткческих исследования п пренатальноя даг-яостгтке JS^-Ttíaccejio, распространенной в даннся популяции.

"Легирование мутация J>-глобинового гена в семье показал, что отец М.Ч.(ствц) явдгетсл гетероэиготнся по мутации -сать - Li. Н. -гетерозкготоя по иутацлл « I, еж дера тел ьио,

больной ргбенех является компауньои с.генотипом: ß+»I-IIO//5°-2-I.

• » v

Приблизительно, гс-д с^стя сеиья и. повторно обратялась а «дкко-геиетстескуз лаСораторич Шстстута для прогноза потомства. П иг мент обрасения П. Н. киела беременность 8 недель. 8ная иута-цгэ Jb-глобгаоаого гена у супругов ре с или протест я прэнатальпуо диагностику плода с использованием прямого «года оонаругенгя мутации на уроьне ДН", Еыделенноа о зорезн хориона.

Ълель-специ^ическая aiкгенуклеотндгтая дст-гкбрядгаацкя о ..спельзлч pisu двух иечегах радиоактивным (Р^ олигонукгеотид-нкх зечдов: а J}*-T-ITC. а также иерадиоактггеяыи мето-

дом показало стс/тстэг: сягнала х отгм'шескса окраски на рзнт-генпленке л тильтр", с.отггтетгенко. ПолучеяньЯ результат свяде-те льстгогал. о том, "то плод ска?ался не больным, но и даг.е пз ю::гг л'-ч-. т.е. плсД смел здогорня генотип: у*

- 'Для ъ?гх1кхягця рзрнее полученного результата Ч. Н. была гсс изирована в родильное отделение института для родоэ я

родила в срок девочку. При ролах из пуповины новорожденнся взяли кровь для диагностики патологии. Тбстирсгшние :#тации jb°-n-I и р +-Т-Т10 не показало соответствупиих сигналов на рентгенпленке и не сформировало голубого цепа на фильтрах.

Больная "'.Т.. 27 лет, мужу 30 лет, жители г. Баку, состоят в кровно-родст!епно:.; Cpt.Ke. Выявлены путем скрининга гетерози-гот во время беременности. Беременность пятая, две предадут:® закончились рождением »¿ергвых детей, одна - рождением ребенка с пороками развития кистей и стоп, последняя _ самопроизвольным абортом в первом триместре бережен пост к. При ультразвуковом исследований плода, вид.-лол патологии не обнаружено, развитие сос1гсгствсгслс неделям беременности, плацента на пе-реднеп стенке матки на 10 см выше внутреннего зега Епе::кн шткл.

Для идентификации аномального гемогло'лил " ведите лей ис-пользопали пробу на серповвдность эритроцитов и растворимость гемоглобина, '¡то дг;1() .ioj.(>глельные результаты, свидетельству-тше о наличии гемоглобина £ .

Кровь из пуповины получали сп:шо:.:о:<:ч?пй иглой 20С,под контролем секторного ¿ачнкй к" у.птразвук .-"ом аппарате "Тошиба 385". Fwo гк лучено 0,5 мл крови, котог,^ помеиали в раствор ЭДТА и a i!f.r из яр era J- и на автоматическом счетчике для определения принадлежности ее плоду. Установлено, что в получении; образце крови имелось до 4С$ плоаноЛ крови (ОО4 в образце полученной крови 105 мкм^ по cp?Bnei!nt> с образцом крови матери - 85 мкм-').

После предварительного гемолиза эритроцитов матери проводили блоеннтез rfnet: глобина. &атем разделена меченых Н3-дей-цином (200 мкКп,- новосинтезированных глоЗинових

if пег осуществляли ионообменной хромат огрз у пей на КЧ?3-грллпло-зе в нелинейном градиенте концентрации иуза«единого Фосфата натрия от 0,00't М (300 мл) До 0,02? М (150 мл), приготовленном на 8 М мочевине и О,ОТ М мтиоэр'итролите рН 6,7. Ленситомстри-ческип «н:.лио v.",.ia проводили в проточной кювете на спектро;о-Toj-eTjie Увикорд П при 2(0 нм. Радиоактивность измеряли л-. сцин-тиляиконном счетччке Л1—70. Разделен я? лропдаы в присутствии неисченного (.елка-носителя, полученного от матери для более точно;' маркировки пиксв.

На рисус? 7 пп иве деки результаты хрсмстогрз *1гческого раз-деленкл r.:(KHH0Ft'x 'рпей ю крови плода. Как видно из рисунка,

и »9

РкГ

»ыи miIMIWI 1ым и lyNMiNi

синтез нормальных ^-глобиновых цзпея практически отсутствует. Незначительная остаточный синтез ^гепея являетоя следствием неполного гемолиза материнских клеток, которых оставалось, как показали цитологические исследования, до 10?. На основании выявленного соотношения J^Vp^. составляла го в крови плода 0,0082, a -0,ОЭ, был поставлен пренэтальний ди-

агноз серповидноклеточная анемия. Рззультаты анализа подтвер-дмнсь при I0î гегопгобкнов хрови плода.

Беременность прервали пря сроке 27 иедель. При исследо-ваапи крови плода, подучеккоя аз сердца, диагноз был подтир-ядзв.

Таким образом, прсзедзна пренатальная диагностика серпо-зкдпсклоточноа анеааи на основании кордогйнтеэа и биоскнтетв-чесхпх исследования, что поэзолидо предотвратить родденкз ' бодрого р;бенпа у родителей - гетерозпгот по Нэ£.

Год спустя, после первых прошдур пренатальноя диагностика, супруги Q..E. я Г, повторно обратились по поводу прогноза потсистза. 3 iiousHT обращения Е.Т. га^ла беременность 9 яедель. При сроке 10 недель произвели забор ворсиа хорвока. После ооотитсгвуоЕеа обработки рестриктаэоЯ Mit fl Ш1С» виде-

ленной из ворсин хориона, расщепленные ее фрагменты длиной 66, 203,?18 и 247 п.н. свидетельствовали о нормальном состоянии плода. В 22 недельном периоде развития произвели забор крови плода, и осушествили анализ игтодом биосинтеза цепей глобина. Гйзультаты показали отсутствие ^-цепей глобина, что свидетельствовало об отсутствии серповидноклеточноа анемии,и плод был оохранен.

Лля веригикации результатов, полученных на различных стадиях развития плода (I триместр - картирование -глоб«нового гена и 2 триместр - биооинтез цзпей глобина), Ш.Т. была госпитализирована в родильное отделение -института.

Родила в срок девочку. Пуповинная кровь, которая подверглась обычному электроЮретическоку разделение но ацетет-иеллч-лоэкых пленках и. ИЭф> проявила на электрофоре грамме и кзоэлек.. трофореграммз отсутствие фракция аномального гемоглобина, что подтвердило раннее поставленный диагноз на стадии внутриутробном развитии плода,

В таблице 7, представлены результаты пренатальной диагностики 17 пациенток, для которых проведены 24 биопсии: 10 кордо-, 2 амнио- и 12 хориоцектеза. Использованы современные методы белковоп диагностики талассемий, а таксе ноеыЯ разра-

ботанный ^амк неръдисактивныЯ ">лектрофоретическкя метод офеде-ленкя му5?ацга кодоьа 8 (-АА) £> -глобинового гена.

Для'12 процедур хорио- и 2 ашшоцгитеза проведено 15 оли-

нигс зонли, суигашиткиг.ри^ниси и с •электро^ореаои ашин-фиц/рогг.ги:х ^рг^т-ов ДНК о мутацией кодона 8, 3 методом ад-лель-спвцифической амплификации. 1йентикицировано 8 нормальных, 10 гетерозигот, 5 гомозигот пс ^ -тг.ЛЕссецлк и I серповидно-клеточной анешея.

Анализ ¿езульхатов лренатальнй! диагностики показываеу, " что к лзух случаях анализа биосинтепа д'пга глобина тс£и»:ли соиненвл в виду того, что .их модно было сткести х юриге или же ге терез ггет ному носвтельству. Результаты веря^ихапия подтвердили в одном случае .норьу, в другом - гетерозиготное кгцтель-ство ^ -талассе мпа.

Виг. б icr:":, "-""•„'груспк методы а полученные результаты пре катальней диагностики талассеиия и СКА

"Л б лица 7

паци-

Км и-чеотво

Вид биопсии используемые

т о д и

полученные рез-ты

поР" ¿íí?H~n?o И3® ASO Пера;- ЛШ5 Э? Гап- Нор- Гете- Гакэ-

до- оцен-рио-ifiH- тез :цен-

тез тез

М.Н. I + + +

э + 4

г. и. I + +

Р. А. т + +

А. Г. I + 4

М.Э. I + +

и. А. I + +

э +

Í + 4

2 + 4

Дж. J¡. I + 4

А.С. I ♦ ♦

1L» С» I 4 +

? +

3 + +

+

U.C. I + +

х.к. I 4 4

Р.1. I ■ + +

и. и. I + 4

г. с. I + 4

А. П. I + 4

К. К. I + 4 '

зндаз. гетод

ДНК

лот и- мз пиро-раьие

рози-гога

,.? или ♦?

+" - диагностика' на уровне ткан;: аб'эртуса

з ¿го-га

CJ

и>

+

п

4

4-

4

+

+

4

Данная неточность объясняется тсь, что у каселенкя Азербайджана 1/3 талаосемических генов падает на дол<п ^уь^-таласосм*-чоских генов с различной степень*) угнетения синтеза Jb-пепей глсхЗина.

К-чк ив сгно, у веселения нап;ея республики выявлены мутации: jÍ3+-I-6, Jb + -30, jb+-I-I30 * y>+-I-IIC, отл ича«иие ся отсггнь-) Экспрессии талассемических генов. Более иеэи;.-¿тельной нарушение связано с треш пер?чхм случал.м. Поэтому результаты биосинтеза цепей г;обина у гетсрозлют по ^/Ъ*-тсласоемка, иногда не отличачтсл от нор«;.

Учитывая срок биопсии (хорио'рнтез Т г. >•.!.;«j, кордо- и амниоцзнтеэ 2 триместр беременности) н спв[ш;ику популяции (природу _^>+-талассемического гена) по отношения к талаосеми-чсско)^ ;ену у »¡.селения Азербайджана, црлесообразно проводить прямую молекулярно-генетическу»! диагностику в I триместре при известности мутации у супругов. Предпочтение отдается ^радиоактивным методам: аллель-сгрци?ическей ампл .гикаи-и и перокси-адэному методу. При мутации 6 кодона (-АА) -гдобинового гена здесь следует использовать подложенный нами способ диагностики мутации Р кодона, а при неизвестности мутач-ш Jbоб a¡o-чогэ :*Mia - субгаплотипированв; рестриктазоЯ Н>л<1 1L.

Таким образом, используя комплекс молскулярно-гтигткчгс-ких 1ВТ0Д0В диагностики, изучена характеристика и геногеогра-фия мутация /Ь -глобинового гена у паселлия Азербайджана. Просветительская работа среди населсв(я, внедрение разработанных ^кспресс-иегодов и диагностических тестов лля скрининга галассемий во вреш беременности, ногерелдеш ости и пгенаталь-ноя диагностики плода, примененные в работе ыодкко-генетичео-кого консультирования, позволили разработать концепции их профилактики.

3 У 8 О Д У

1'. Используя комплекс молеку.;ярно-ген«тических методов

д/~гьост нкл, нууч! на х^рплерисгика и геногеограгтия мутаций ^ -гло?и нового гена у населения Азербайджана. Просветительская работа среди нетления, внедрение разработанных экс-пресс-мегодов и диагностических гестов для скрининга талао-семил во время беременности, нозорожденности и пренат^льней Д1Ягностп;и плода, примененные в работе мед;:ко-генетическо-го консультирования, позволили разработать концзпцию их профилактика,

2. Иаенти[ицировано восемь мутаций /ь -гловинового гена: делеционные мутации, приводящие х сдвигу райки считывания -двлеция динуклеотида АА в кодоне 8, дглеция нуклеотида Г

на границе 32 и 83 кодонов; вставка нуклеотида Г на грани-гр 8 и 9 кодонов - все они приводят к образование термини-ру^их кодонов о фенотипом ^Ь°~талассемиа. Остальные генные мутации ^ели нуклеотидные замены о фенотипом ^Ь^-та-лассемии, за исключением мутации -

Установлены частоты восьми мутация, четыре га которых Сб°8 - 35,112, - ^ЪМ-ПО - 12,772, А+-1-5

- составляет - 79,8?, остальные ( °8/Р - 3

^ °РУ83 - 1,5ГДГ, ¿>+-30 - 1,061!.. ^+-1~Т30 - 0,532) - 6,30« всех идентифицированных мутация. Расшифровано 66,^ мутацШ ^з -глобкнового гена у населения Азербайджана.

3. Составлена геногеографическая карта для 952 аллелей ( я и восьии мутаций -глобинового гена в 162 хромосомах, зхлючаюиая административно-территориальные, зс-цальныз, а тзтеге •зтно-территоргальнка особенности ихрзопределения. Установлено, что Ь из'8 мутаций: ^ +-1-1Т0,

^ +1-6, *-30 н ^>+-1-130 - ранее обнаружены я широко распространены в странах средиземноморского бассейна, °8/9 - з азтеких странах. Две мутации -^ °82/83 * °0 являются эндемичными для населения Азербайджана, пор-сал пз которых обнаружена впервые. Обоуздаютоя пути миграция мутации - э популяциях Европы и Чалой Азии.

4. Впертые описаны фенотипиче екгз проявлена )гзиатслогане ехке а биохимические показатели) мутация ^ -глобинового гена п их осчетания. Наиболее низкие значения показателей

. крова (ССЭ и ССГЭ) получены для гетзрозигот и гомозигот о

- 36 -

+ ,■»

■мутацией —1—110. Гомозиготы с мутацией - ^ -1-ПС являются трансфузия-зависимыми и требуют ежемесячного переливания крови, а. также систематического лечения хелаторами. Наиболее високив показатели крови (ближе к нормальным значениям) выявлены у га-терозиго? с мутациями ^>-30 и 1-6.

5, Разработан набор диагностических тестов для скрининга ге-терозигот по ^-талассемии во время беременности с использованием комплекса 13 клинических и биохимических показателей с учетом, высокой частоты нарушения эритрона среди населения республики, таких как: дефицит фермента Г6ФД (6,89%), «елеэодефицитная аномия (25,11%), талассемия (0,35%) и наличие гена серповиднокле-точности (0,58%), влияющие на диагностику ^-талассемии. Частота встречаемости гена ^ -талассемии среди беременных г. Баку оказалась .равной - 4,6207%. В целом частота гемоглобинопатий составила 5,582. Приблизительно 6 из 100 обследованных беременных имели носительство наследственных гемоглобинопатий.

■6. Для массовой диагностики различных форм и сочетаний наследственных гемоглобинопатий у новорожденных разработан и внедрен экспресс-метод изоэлектрофокусирования цепей глобина, экстрагированных из высушенных пятен крови, на ультратонких полиакри-ламидно-амфоликомух пластинках с РН 6-6.

7, Теоретически оиидаамая частота муталтных фенотипов: гомозигот по ч/3-талапсочш1, серловидноклеточной анемии и компаундов

) соответственно составила 370, 4 и 40 человек. Ежегодно по республике рождается более 400 больных детей с гсмоглоби-нопатиями. Полученные результаты позволят планировать обьем мз-дико-гонетических и лечебно-профилактических мероприятий, ны-рдвленных на снижение уровня заболевания в изучаемой регионе.

6, Разработан и использован нерадиоактивный электрофоретичос-

• кий метод диагностики мутаций 8 кодона (-АА) -глобинового гена, вклеч&ший выделение ДИК от больных, ее амплификацию и элоктро-форатическоа разделение. Этот метод повшает безопасность работы и в 3-4 раза сокращает время диагностики. Использование данного ыотода высвобождает большое количество приборов и химических реактивов с сохранением точности определения.

Впервые, применяя этот метод, проведена пренатальная диагностика плода и предотврЕ^сно рождение больного талассемиай ребенка.

СПИСОК работ, оггублшсовашшх по теме диссертации:

1. js-талассемия у новорожденных / Мопсум-заде K.M., Аскерова Т.А., Расулов Э.М. и др. // Материалы П-го роспубл. съезда акушеров л гинекологов. - Махачкала. - 1985. - С.28.

2. Биохимический полиморфизм белков кропи / Мовсум-заде K.M., Цаликова Т.П., Тургиева Д.А., Расулов Э.М. и др. // Мате риалы У-го Зсосоюзн. съезда биохимиков. - toen. - 1986. - С.285-286.

3. Maccomif; скрининг беременных для выявления генов гемоглобино-патиЛ с целью профилактики и с1.севрег.'енного лечения //Расулов Э.М., Ифраимова З.Н., Магерамова С.Т. я др. 3// Материалы П-го съезда гематол. и трансфуз. Азербайджана. - Баку. - Г990. - С.70.

4. Мзссошй скрининг беременных женшин для выявления носителей гонов гемоглобинопатии с целью профилактики и лечеши / Расулов Э.М., Ифраимова З.Н., Магерамова С.Т. и др. // Материалы П-го Всесопзн.съезда медицинских генетиков. - 1990. - Алма-Ата. -

С.275.

5. Медико-генетическоо консультирование наследственных гемоглоби-нспати,": / Расулов Э.М., Мамедов К.Ю., Ибрагимова Г.А. и др. // Азмеджурнал. - 1989. - .«8. - С.26-31.

6. Мовсум-заде K.M., Расулов Э.М., Пятакова Т.П. Влияние компоунд-них состояний родителе?, по генам jb -талассемии и аллеля на выживаемость потомства // Материалы 1У-го Всессюзн. съезда генетиков и селекционеров. - Кп-линев. - 1982. - С.90.

7. Мовсум-заде K.M., Аскерова Т.А., Расулов Э.М. Популяционло-го-нетические исследования гемоглосинопатиЛ методом аналитического пзоэлектрофокусировакля // Известия АН Азерб.ССР. - сория биол. наук. - 1985. - .':j5. - C.I07-II3.

8. Молекулярно-генетичеекая диагностика наследственных болвзне" человека / Расулов D.M., Гаджи-зате Б.Р., Мзликоза Л.А. и др. // Материалы научно-ггрпкт.конф, "Актуальные вопр. медицинскоЛ диагностики". - Баку. - 1990. - С.158-759.

9. Молекулярные формы jb—талассемии у населения Агдасского раЛ-'бнз Азерса.: дт.акскс.": СС? / расулов Э.М., Ифраимова З.Н., Магеро-

' мова С.Т. и др. // Лзмедт.урнал. - 1990. - .?4.-С.33-35.

ГО. Нева,'биоактивная пгепатзльная Д1К диагностика бетп-талассемии и серповиднсклсточноЛ анемии ь перьем триместре и ее вери£::кзцяя с использованием ЦП? (цепной лолж.'ерззно/ реакции)/ Мазурова 0.JI.

за -

Гольцов A.A., Колесникова Л., Расулов Э.М. и др. // Материалы Всесоюзн.научно-практ.конф. - Харьков. - 1990. - С.25.

XI. Первый случай пренатальной диагностики серповидноклеточной анемии в СССР / Кулиев A.M., Мазурова О.Л., Бирюков В.Б., Ро-сулов Э.М. и др. // Гематология и трансфузиология. - 1990. -КЗ. - С.8-9.

12. Цренатальная диагностика j!>-талассемни / Кулиев A.M., Мазурова О.Л., Бирюков В.Б., Матвеева Е.В., Расулов Э.М. и др. // Аку— шарство и гинекология. - 1991. - 07. - С.16-18.

13. Пронатальная диагностика "гемоглобинопатии / Мазурова О.Л., Бирюков В.Б., Матвеева Л.В., Расулов Э.М. и др. // Материалы П-го Всесоюзн.съезда медицинских генетиков. - Алма-Ата. - 1990. -

С.275.

14. Разделение и идентификация цепей глобина человека катодом изо-элоктрофокусирсвания / Расулов Э.М., Мовсум-заде K.M.и др. // Лабораторное дело. - 1935. - №. - С.527-530.

15. Разделение цепей глобина человека при гемоглобинопатиях на ультратонких ПААГ с помощью изоэлектрофокусирования / Расулов Э.М., Назарли А.Г., Мовсум-заде K.M. и др. // Материалы Юбилейной науч.сессии поев. 50-летию обр.НИИ ГиПК МЗ Гр.ССР. - Тбилиси. -1985, - С.72.

16. Расулов Э.М., Мовсум-зада K.M., Гарькавцева Р.Ф. Выявлегакз и генетические основы клишгческого полиморфизма гемоглобинопатия // Материалы 1-го Реснубл. съезда гематол. и транс!. AuopCoü-

джана. - Баку. -.1985. - С.58.

17. Расулов Э.М., Мехтиев Н.Х., МоБсум-заде K.M. Гемоглобинопатии

в Тоузском районе Азербайджанской ССР // Известия АН лзерб.ССР, серия биол.наук. - 1981. - йб. -'С.98-100.

18. Расулов Э.М., Мовсум-заде K.M., Гарькавцева Р.Ф. Генетическая гетерогенность и распространение гемоглобинопатия в Кюрдамир-ском районе Азербайджанской ССР // Извести Ail Аз.ССР, серия биол.наук. - 1983. - Js5. - С.95-100.

19. Расулов Э.М., Мамедова P.A. Медико-генетическое консультирование семей с гемоглобинопатиями // Материалы У1-го Всесоюзн. съезда акушеров и гинекологов. - Махачкала. - 1989. - С.218.

20. Расулов Э.М. Методы пренатальной диагностики гемоглобинопатий на уровне ДНК // Депонировано во ВШВД МЗ СССР. - 1989. -

Т.18. - гёД-17646.

21. Расулов Э.М. Методы пренатальной диагностики гемоглобинопати'.',

на уровне балка // Депонировано во ВШЕШ МЗ СССР. - 1990. -

• . й ГШ81. -

22. Расулов Э.М. Молекуляртле формы jb-талэссемии у населения Азербайджана // Материала ЗЗ-ti лауч.конф. "теор. и практические проблемы медицины". - Баку. - I98SS - С.93.

23. Расулов Э.М.» Ифраимова З.Н., Ширинова И.Л. Молекулярные формы талассемии у населения двух регионов Азербайджанской ССР // Аэмодаурнал. - I99Ö. - »9. - С.28-31.

24. Расулов Э.М., Гарькавцэва Р.Ф., Мовсум-заде K.M. Полиморфизм эмбрионального гемоглобина Fi у лиц с гемоглобином тиями // Материалы Юбилейной научн.сессии поев. 50-ле.тию обр,НИИ ГиПК Мз. Гр.СС'Р. - Тбилиси. - 1985. - С.203.

25. Расулов Э.М., Мовсум-заде K.M., Мэхтиев И.Х. Приме не ime метода изоэлектрофокуспровакия в ПААГ длл выявления генетической гетерогенности Jb -талассемии // Рукопись депонирована во ВШШИ МЗ СССР. - 1982. - №5343-82. С.Ц..

28. Расулов Э.М,, Магерамова С.Т.. Скригашг беремзннше .и новорожденных с целью профилактики гемоглобинопатий // Депонировано во ВННШ МЗ СССР. - 1990. - J5 18680.

27. Расулов Э.М.,, Мамедоа 'К.Ю. Способ выявления мутации 8-го кодона (-АА) Jb -глобинового гена // ^Получено положительное решение

на лцдачу патента на изобретений. - $ 4936811/I44I704. - от 30. 01.92. - , ■

28. Раоулов Э.М., Ифраимова З.Н., Магерамова С.Т. Усовершенствованный метод аналитического изоэлектрофокусироваши белков крови // Материалы научно-практ.конф. —Баку. - 1990. - С.17-18.

29. Расулов Э.М., Магерамова С.Т., Ифраимова З.Н. Усовершенствован-нкй метод выделения клеточкой ДНК из ворсия хориона и фиброблас-тов амниотической жидкости -// Материалы научно-практ.конф. Баку. - 1990. - C.5I-5£.

30. Расулов Э.М. Экспресс-метод .диагностики гемоглоо'инопатий у поворошенных // Молекулярная диагностика, микробиология и вирусология -- 1990. - .'Я. - С.27-29.

31. Способ определения структурно-аномальных гемоглобшюв / Расулоа Э.М., Мовсум-заде K.M., Аскерова Т.Д. и др. // Авторская справка на изобретение. - 1903. - ,'¡1027616.

32. Тестирование мутаций Г-А в IIG положениях малого нитрона глоС?.-, нового гена у больных талассомией из Азербайджана // Фодо/юа

А.П., Расулов Э.М., Орецкая н. и др. // Молекулярная гокетака .

f

микробиология и вирусология. - 1990. - HI. - C.27-2S.

33. Федоров А.П., Расулов Э.М., Ивановская Н. Определение мутации . в Jb-глобкновом гене с помощью олигонуклеотидных зондов //

Материалы 1-го Всесоюз.съезда "Геном человека". - Пареславль-Залесский. - 1990. - С.186.

34. Analysis of biosynthetic globin chains ratio for prenatal diagnosis (PD) of haemoglobinopathiee in the USSR/( Матвеева E,B. Мазурова О.Л..Бирюков Б.Б., Росулов Э.М., и др. )Matve-

eva Е.В., Mazurova O.L., Birjukov V.B., Rasulov E.M.et al. // 5 th International Congress on Early Fetal Diagnosis. - Czechol lovakia,Prague. - July. - P.175«

35. Beta-glob'in gene genogsography mutations in the population of Azerbaijan SSR/( Рпсулоз Э.М., Машдов К.Ю., Седоров А.П.) Raauloy E.M., Mamedov K.Yu., Fyodorov A.P. et al. //FEB0-20. -Hungarian Republic,Budapest.

36» Characterization of Jb -globin gene nutations in the Azerbaijan population/(Федоров А.П., Расулов Э.М., Ивановская H. и др) Pyodorov А.P., Rasulov Е.М.,, Ivanovskaya N. et al. //XII th International' Symposium on Struoture and Funotion of Erythroid Cells. - GDR,Berlin. - 1989. - P.23.

37» Mass-soreening during the pregnancy for revealing and therapy of hemoglobinopathies^ Расулов Э., Щраимова 3.H., Магерамо-ва С.Т. И Др, )Raavlov Е.М., Ifraimova Z.N..Mageramova 3.T., et al.//5 th International Congress on Early Fetal Diagnosis. -Czechoslovakia,Prague. -^Jiily. - 1990. - P.219. "

33, Molecular analysis of J> -thalassemia in two Soviet populations . Л Федоров А.П., Расулов Э.М., Назирова Ф. др) Pyodorov A.,Rasui

lov E.M. .Nasyrova P., et al.// (3 th World Congress on Human " Genetics. - USA,Washington. - 1991.

39«( ыоьсуы-зяде к.М..Расулов Э.Е. > Movsum-zade к.и.,Нави1оу Е., 'f Tealikova Т.Н. Hews in hemoglobino and enzymopathies //FEB0-16. - Uoecow. - 1984. - P.552.

40. Ron-rad i о ao t ive DNA prenatal diagnosis of beta-thalasseaia

and siokle oell disease in the 1 et trimester and its verification using PGR /( Мазурова 0., Гольцов А., Колесникова Т.Н. И др ) Mazurova О.Ъ. ,Coltzov A.A. .Kolesnikova I.K, et, al. '// 5 th 'International Congress on Early Petal Diagnosis. -"CsechoSlovakia,Presae. - P. 177.

41. The prophylaxis of hemoglobinopathies in Azerbaijan population /(MawesoB K.D. .PacyjioB 3.M. .HfipamroBa r.A. h jip. ) Mamedov K.Yu, Rasulov 3.M., Ibragimova G.I. ot al. // 5 th Interna-' tional Congress on Early Petal Diagnosis. - Czechoslovakia, Prague. - 1990. - P.173.

42. ( PacyjiOB 3.M. ) Raaulov E.U., Genogeography of A-and

i

Jb - thalaasemio genea in the population of Azerbaijan SSR // XII th International Symposium on Structure and Function of Erythrcid Cell. - GDH,Berlin. - 1989. - P.24.

43-(PacyjlOB S.KyjnieB A.) Raaulov B.M., Kuliev A.M. Jb-thaloasemi gsninin Azerbaycan cujnurietinindekl heterogeneteai vo gen oografyaoi // Ginekoloji vo Obatatrio. - 1992. - Sayi 6,N.1.-S.125.

44. Thalaasemio mutant, gene geographical distribution in Azerbaijan population /( PacyjioB 3.M.,MaM9A0B K.trarom-3a;ne B.h ^p.) Rasulov E.M., Manedov K., Hajy-zade 3. et al. // European Association of Gynaecologists and 0betetrians,6 th Meeting.

-Moscow. - 1991. - P.101-102. . ••