Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Генетические последствия интеграции эписомной плазмиды в дрожжевые хромосомы
ВАК РФ 03.00.15, Генетика
Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Булат, Сергей Алексеевич
ВВЕДЕНИЕ.
1. Актуальность проблемы.
2. Цель и задачи исследования
3. Научная новизна и практическая ценность
4. Апробация работы.
5. Структура и объем работы
Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Рекомбинация плазмид с дрожжевыми хромосомами
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Штаммы дрожжей S. cerevisiae.
2.2. Культуральные среды.
2.3. Характеристика использованных пяазмид
2.4. Трансформация дрожжей.
2.5. Методы генетического анализа.
2.5.1. Анализ митотической стабильности трансформантов и интегрантов
2.5.2. Селекция /с±г+/ трансформанта на высокую нестабильность и отбор интегрантов
2.5.3. Определение частоты хромосомной интеграции плазмиды (флуктуационный тест).
2.5.4. Эффективность споруляции гибридов
2.5.5. Получение споровых сегрегантов и метод тетрадного анализа
2.5.6. Анализ митотической стабильности гибридов
2.5.7. Получение дрожжевых штаммов /с±г°/ генотипа.
2.6. Методы биохимического анализа.
2.6.1. Тест на бета-лактамазную активность
2.6.2. Определение 2 мкм ДНК.
2.7. Анализ нуклеотидных последовательностей ДНК
Глава 3. ПОВЕДЕНИЕ ЭШСОМНОЙ Ш1АЗМИДЫ В ТРАНСФОШАНТАХ
И ИНТЕГРАНТАХ.
3.1. Стабильность трансформантов по плазмидному маркеру.
3.2. Экстрахромосомное наследование илазмиды pYP9i.
3.3. Интеграция эписомной плазмиды pYP9i в дрожжевые хромосомы.
3.3.1. Эффективность интеграции эписомной плазмиды.
3.3.2. Специфичность хромосомной интеграции эписомной плазмиды.
3.3.2.1. Идентификация хромосом, в которые произошла интеграция плазмиды
3.3.2.2. Картирование сайтов интеграции плазмиды в химерных хромосомах
А. Картирование сайтов интеграции плазмиды в Ш химерной хромосоме . 56 Б. Картирование сайтов интеграции плазмиды в других химерных хромосомах
3.3.3. Экспрессия и наследование бактериального гена в составе интегрированной плазмиды.
3.3.4. Стабильность химерных хромосом в гаплоидных интегрантах.
Глава 4. МЕЙОТИЧЕСКАЯ РЕКОМБИНАЦИЯ У ДИШЩЦОВ, СОДЕРЖАЩИХ
ИНТЕГРИРОВАННУЮ ПЛАЗМИДУ.
4.1. Выживаемость спор в тетрадах гибридов, содержащих интегрированную плазмиду.
4.2. Нерегулярное расщепление по плазмидным и хромосомным маркерам.•.
4.3. Влияние интегрированной плазмиды на мейотический кроссинговер
Глава 5. МИТОТИЧЕСКАЯ ДЕСТАБИЛИЗАЦИЯ ХИМЕРНЫХ ХРОМОСОМ В
ДИПЛОИДАХ.
5.1. Дестабилизация химерных хромосом в гибридах интегрантов по Ш хромосоме.
5.2. Дестабилизация химерных хромосом в гибридах интегрантов по I, 1У и У хромосомам.
5.2.1. Дестабилизация I химерной хромосомы
5.2.2. Дестабилизация 1У химерной хромосомы
5.2.3. Дестабилизация У химерной хромосомы
5.3. Дестабилизация неидентифицированяых химерных хромосом.
5.4. Дестабилизация химерных хромосом в Rad" диплоидах.
Глава 6. ОБСУЖДЕНИЕ.
ВЬВОДЫ.
Введение Диссертация по биологии, на тему "Генетические последствия интеграции эписомной плазмиды в дрожжевые хромосомы"
I. Актуальность проблемы
Достижения технологии рекомбинантных молекул ДНК открыли неограниченные возможности в конструировании векторов, содержащих фрагменты ДНК самого различного происхождения. Особый интерес вызывают химерные, челночные векторы, включающие ДНК про- и эукариотов. Это связано с тем, что с их помощью возможно введение в эукариотическую клетку чужеродной генетической информации, что позволяет конструировать химерные геномы и, в конечном счете, новые, не встречающиеся в природе организмы. Очевидно, что такие организмы с искусственно совмещенными свойствами могут оказаться полезными и с хозяйственной точки зрения.
Для разрешения подобной задачи важным условием является разработка методов стабилизации чужеродной ДНК в клетках используемого организма. Удобным объектом для исследования этой проблемы
МОГуТ СЛУЖИТЬ ДРОЖЖИ Saccharomyces cerevisiae, ЧТО обусловлено их хорошей генетической изученностью, особенностями биологии и использованием в производстве. Стабильное наследование чужеродной ДНК, вводимой в клетки дрожжей в составе векторов, может быть достигнуто в результате либо хромосомной интеграции вектора, либо его стабилизации в виде автономно реплицирующейся единицы. Нам представляется, что встраивание векторов в дрожжевой геном -более легкий и перспективный путь, чем разработка способов стабилизации автономных векторов. Однако, работы, в которых рассматривались бы генетические последствия рекомбинации между векторной (плазмидной) и хромосомной дрожжевой ДНК, малочисленны и до недавнего времени проводились с использованием плазмид лишь одного, интегративного типа. Автономно реплицирующиеся плазмщцы
- 6 в этом отношении практически не были изучены.
В связи с этим нам казалось своевременным исследовать возможность встраивания в дрожжевой геном автономно реплицирующихся химерных ялазмид эписомного типа и, в случае успеха, изучить генетические последствия интеграции. Результаты исследования представлялись важными также и дня разработки общей проблемы генетических последствий встраивания чужеродной ДНК в эукариотические хромосомы.
Заключение Диссертация по теме "Генетика", Булат, Сергей Алексеевич
ВЫВОДЫ
1. Химерные плазмиды эписомного типа, т.е. содержащие в своем составе фрагмент 2 мкм ДНК дрожжей, могут интегрироваться в хромосомы дрожжей-сахаромицетов. С использованием разработанного метода отбора интегрантных субклонов у /о±т°/ штаммов, содержащих эписомную химерную плазмиду pYF9i, создана коллекция интегрантов, в различных хромосомах которых содержится данная плазмида.
2. Эписомная плазмида pYF9i интегрируется в дрожжевой геном с частотой не ниже, чем 3,6 х 10"® на клетку на деление.
3. Эписомная плазмида pYF9i предпочтительно встраивается в гомологичную область 1еи2 локуса в Ш хромосоме (48% случаев). Вместе с тем, интеграция плазмиды может происходить в другое плечо Ш хромосомы (10% случаев) и в I, 1У, У и ряд других не-вдентифицированных хромосом.
4. Бактериальная ДНК с маркером Арг в составе интегрированной плазмиды экспрессируется и стабильно наследуется как менде-левская единица в интегрантах и их гибридах.
5. Выделенные гаплоидные интегранты безотносительно мест хромосомной интеграции плазмиды чрезвычайно стабильно наследуют плазмидный LEU2 маркер в митозе, теряя его менее чем в 0,1% клеток при росте в селективных условиях.
6. Диплоидные гибриды интегрантов проявляют высокую митотическую нестабильность, выражающуюся в частой гомозиготизации маркеров, расположенных в хромосоме, гомологичной химерной, вследствие дестабилизации последней.
- 168
7. Гибриды интегрантов по Ш хромосоме характеризуются тремя типами митотической дестабилизации химерных хромосом, отличающимися частотами выщепления маркеров гомологичной хромосомы и их сочетанием и зависящими в основном от сайта интеграции плазмиды в этой хромосоме. Гибридам интегрантов с посадкой плазмццы в область 1еи2 локуса свойственны два различных типа митотической нестабильности.
Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Булат, Сергей Алексеевич, Ленинград
1. Алиханян С.И. Успехи и перспективы генной инженерии. -Генетика, 1976, т.12, & 7, с.150-173
2. Баев А.А., Таняшин В.И., Фодор И. Генетическая инженерия (Общие представления, рестрицирующие эндонуклеазы, векторы). -В кн.: Молекулярная биологин. М.: ВИНИТИ, 1979, т.12, ч.1,с. I-I79
3. Бирс Р. Введение. В кн.: Рекомбинантные молекулы: значение для науки и практики. - М.: Мир, 1980, с.9-14
4. Булат С.А. Генетический контроль споруляции и расщепление маркеров в межлинейных гибридах дрожжей-сахаромицетов. -Известия Северо-Кавказского научного центра высшей школы. Естественные науки, 1984, в печати
5. Булат С.А., Захаров И.А. Генетическое изучение интеграции плазмид в дрожжевые хромосомы Сообщение П. Анализ нерегулярного мейотического расщепления. Генетика, 1984, т.20, № 2, с.205-211
6. Готтесмая М., Вейсберг Р. Интеграция и исключение профага. -В кн.: Фаг лямбда. М.: Мир, 1975, с.148-181
7. Захаров И.А. Анализ скрещиваний у микроорганизмов при половом и бесполом размножении. В кн.: Генетика и селекция микроорганизмов. -М.: Наука, 1964, с.61-81
8. Захаров И.А. Спонтанный мутационный процесс в клонах хлореллы на примере мутаций устойчивости к бета-аланину. Труды МОИП, 1966, т.22, с.140-142
9. Захаров И.А. Курс генетики микроорганизмов. Минск: Вышэй-шая школа, 1978, с.39^3
10. Захаров И.А., Симаров Б.В. Мутации в локусе типа спаривания И выведение ВЫСОКОГОМОЗИГОТНЫХ ЛИНИЙ Saccharomyces сеге-visiae. Генетика, 1966, Jfc 3, с.118-122
11. Инге-Вечтомов С.Г. Новые генетические линии дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Вестник Л1У, 1963, № 21, серия БИОЛОГИЯ, вып.4, с.117-125
12. Инге-Вечтомов С.Г. Идентификация некоторых групп сцепленияу Петергофских генетических линий дрожжей. Генетика, 1971, т.7, № 9, с.ПЗ-124
13. Карбон Дж., Кларк Л., Илген К., Рацкин Б. Создание и использование коллекции гибридных плазмид в клетках е. coii.
14. В кн.: Рекомбинантные молекулы: значение для науки и практики. -М.: Мир, 1980, с.414-441
15. Кожина Т.Н. К вопросу о генетическом контроле споруляции у дрожжей-сахаромицетов. Генетика, 1978, т. 14, 2,с.334-339
16. Кэмпбелл А. Генетическая структура. В кн.: Фаг лямбда. -М.: Мир, 1975, с.21-22
17. Ларионов В.Л., Куприна Н.Ю., Трауготт М.Н. Исследование вне-хромосомной ДНК у дрожжей-сахаромицетов. Молекулярная биология, 1983, т.17, вып.5, с.983-991
18. Ларионов В.Л., Трауготт М.Н. Изучение свойств гибридных плазмид, содержащих рибосомальную ДНК дрожжей-сахаромицетов. Докл.АН СССР, 1982, т.265, № I, с.235-238
19. Ларионов БД., Шубочкина Е.А. Конструирование гибридных плазмид, содержащих репликатор дрожжей. Молекулярная биология, 1982, т.16, вып.5, с.948-955
20. Сборник методик по генетике дрожжей-сахаромицетов (Захаров И. А., Кожин С.А., Кожина Т.Н., Федорова И.В.). Ленинград: Наука, 1976, с.1-112
21. Стрижев Н.И., Тихомирова Л.П., Баев А.А. Рекомбинантная плазмида RSF2i24-jiCD способна самостоятельно интегрировать в хромосому Е. coli. Докл.АН СССР, 1979, т.244, В 4, с.1001-100422а.Хесин Р.Б. Непостоянство генома. М.: Наука, 1984, с.116-139
22. Andreadis A., Hsu Y-P., Kohlhaw G.B., Schimmel P. Nucleotide sequence of yeast LEU2 shows 5'- noncoding region has sequences cognate to leucine. Cell, 1982, v.31» pp.319-325- 174
23. Ballario P., Filetici P., Junakovic N., Pedone P. Ту I extrachromosomal circular copies in Saccharomyces cerevisiae -PEBS Letters, 1983, v.155, pp.225-229
24. Beach D., Piper M., Shall S. Isolation of chromosomal origins of replication in yeast. Nature, 1980, v.284,pp.185-187
25. Beach D., Piper M., Shall. Isolation of eukaryote DNA replication origins. ION-UCLA Symp.Mol.Cell.Biol., AP,Inc., 1980, v.I9, pp.359-368
26. Beggs J.D. Transformation of yeast by a replicating hybrid plasmid. Nature, 1978, v.275, pp.I04-I09
27. Birnboim H.C., Doly J. A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA. Nucl.Acids Res., 1979, v.7, pp.1513-1523
28. Blanc H., Gerbaud C., Slonimski P.P., Guerineau M. Stable yeast transformation with chimeric plasmids using a 2Jjcal-circular DNA-less strain as a recipient. Mol.Gen.Genet., 1979, v.I76, pp.335-342
29. Bolivar P., Rodriguez R.L., Betlach M.C., Boyer H.W. Construction and characterization of new cloning vehicles. I. Ampicillin-resistant derivatives of the plasmid pMB9. -Gene, 1977, v.2, pp.75-93
30. Bolivar P., Rodriguez R.L., Greene P.J., Betlach M.C., Heyneker H.L., Boyer H.W. Construction and characterization of new cloning vehicles. IE. A multipurpose cloning system. -Gene, 1977, v.2, pp.95-H3
31. Breunig K.D., Mackedonski V., Hollenberg C.P. Transcription of the bacterial ^-lactamase gene in Saccharomyces cerevisiae. Gene, 1982, v.20, pp.I-IO
32. Broach J.R. The yeast plasmid 2Jj circle. In: Molecular biology of the yeast Saccharomyces: life circle and inheritance. - Cold Spring Harbor, N.Y., Cold Spring Harbor Lab., 1981, pp.445-470
33. Broach J.R., Guarascio V.R., Jayaram M. Recombination within the yeast plasmid 2jj circle is site-specific. -Cell, 1982, v.29, pp.227-234
34. Broach J.R., Hartley J. Replication functions associated with the yeast plasmid, 2 JU circle. ICN-UCLA Symp.Mol. Cell.Biol., AP,Inc., 1980, v.19, pp.389-398
35. Broach J.R., Hicks J.B. Replication and recombination functions associated with the yeast plasmid, 2 Jj circle. -Cell, 1980, v.21, pp.501-508
36. Broach J.R., Li Y.-Y., Jayaram M. Control of replicationof the yeast plasmid 2 micron circle. J.Cell.Biochemistry, Suppl.7B, 1983, p.I28
37. Calderon I.L., Contopoulou C.R., Mortimer R.K. Isolation and characterization of yeast ША repair genes. IE. Isolation of plasmids that complement the mutations rad50-I, rad5I-I, rad54-3, and rad55-3. Current Genet., 1983, v.7, pp.93-ЮО
38. Cameron J.R., Loh E.Y., Davis R.W. Evidence for transposition of dispersed repetitive ША families in yeast. -Cell, 1979, v.16, pp.739-752
39. Cameron J.R., Philippsen P.,Davis R.W. Analysis of chromosomal integration and deletions of yeast plasmids. Nucl. Acids Res., 1977, v.4, pp.I429-I448- 176
40. Chan C.S.M., Maine G., Туе В.-К. Functional componentsof the Saccharomyces cerevisiae chromosomes replication origins and centromeric sequences. - ICN-UCLA Symp.Mol.Cell. Biol., AP,Inc., 1981, v.20, pp.455-471
41. Chevallier M.R., Aigle M. Qualitative detection of penicillinase produced by yeast strains carrying chimeric yeast-coli plasmids. FEBS Letters, 1979, v.108, pp.179-180
42. Chevallier M.R., Bloch J.C., Lacroute F. Transcriptional and translational expression of a chimeric bacterial-yeast plasmid in yeasts. Gene, 1980, v.II, pp.II-I9
43. Clarke L., Carbon J. Isolation of the centromere-linked CDCIO gene by complementation in yeast. Proc.Nat.Acad. Sci. USA, 1980, v.77, pp.2173-2177
44. Devenish R.J., Newlon C.S. Isolation and characterization of yeast ring chromosome III by a method applicable to other circular DNAs. Gene, 1982, v.18, pp.277-288
45. Dieckmann C.L., Pape L.K., Tzagoloff A. Identification and cloning of a yeast nuclear gene (CBPI) involved in expression of mitochondrial cytochrome b. Proc.Nat. Acad. Sci. USA, 1982, v.79, pp.1805-1809
46. Dobson M.J., Putcher А.В., Cox B.S. Control of recombination within and between plasmids of Saccharomyces cerevisiae. -Current Genetics, 1980, v.2, pp.193-200
47. Dobson M.J., Putcher А.В., Cox B.S. Loss of 2^m DNA from Saccharomyces cerevisiae transformed with the chimeric plasmid pJDB2I9. Current Genet., 1980, v.2, pp.201-205
48. Dobson M.J., Kingsman S.M., Kingsman A.J. Sequence variation in the LEU2 region of the Saccharomyces cerevisiae genome. Gene, 1981, v.16, pp.133-139
49. Duncan C.H., Wilson G.A., Young P.E. Mechanism of integrating foreign DNA during transformation of Bacillus sub-tilis. Proc.Nat.Acad.Sci. USA, 1978, v.75, pp.3664-3668
50. Eibel H., Philippsen P. Identification of the cloned S. cerevisiae LYS2 gene by an integrative transformation approach. Mol.Gen.Genet., 1983, v.191, pp.66-7355a. Erhart Е., Hollenberg С.P. The presence of a defective
51. Perrari P.A., Nguyen A., Lang D., Hoch J.A. Construction and properties of an integrable plasmid for Bacillus sub-tilis. J.Bacteriol., 1983, v.154, pp.I5I3-I5I5- 179
52. Fincham J.R.S., Day P.R., Radford A. Fungal genetics. -Edinburgh: Blackwell Sci.Pub.,Inc., 1979, pp.88-121, 527
53. Fink G., Farabaugh P.,Roeder G., Chaleff D. Transposable elements (Ту) in yeast. Cold Spring Harbor Symp.Quant. Biol., v.45. Cold Spring Harbor, N.Y., Cold Spring Harbor Lab., 1981, pp.575-580
54. Fried H.M., Warner J.R. Cloning of yeast gene for tricho-dermin resistance and ribosomal protein L3. Proc.Nat. Acad.Sci. USA, 1981, v.78, pp.238-242
55. Futcher А.В., Cox B.S. Maintenance of the 2J)m circle plasraid in populations of Saccharomyces cerevisiae. -J.Bacterid., 1983, v.154, pp.612-622
56. Galizzi A., Scoffone F., Milanesi G., Albertini A.M. Integration and excision of a plasmid in Bacillus subtilis.-Mol.Gen.Genet. , 1981, v.182, рр.99-Ю5
57. Gerbaud C., Fournier P., Blanc H., Aigle M., Heslot H., Guerineau M. High frequency of yeast transformation by plasmids carrying part or entire 2,-Jim yeast plasmid. -Gene, 1979, v.5, pp.233-253
58. Hicks J., Fink G.R. Identification of chromosomal location of yeast ША from hybrid plasmid pYeleuIO. Nature, 1977, v.269, pp.265-267- 180
59. Hicks J.В., Hinnen A., Pink G.R. Properties of yeast transformation. Cold Spring Harbor Symp.Quant.Biol., v.43. Cold Spring Harbor, N.Y., Cold Spring Harbor Lab., 1979, pp.I305-1313
60. Hinnen A., Hicks J.В., Pink G.R. Transformation of yeast. -Proc.Nat.Acad.Sci. USA, 1978, v.75, pp.I929-I933
61. Hollenberg C.P. Cloning with 2-^m DNA vectors and the expression of foreign genes in Saccharomyces cerevisiae.-In: Current topics in microbiology and immunology, v.96. Berlin, Heidelberg, N.Y.: Springer Verlag, 1982, pp.II9-I44
62. Hollenberg C.P., Kustermann-Kuhn В., Mackedonski V., Erhart E. The expression of bacterial antibiotic resistance genes in the yeast Saccharomyces cerevisiae. A.Benzon Symp., v.l6. Munksgaard, Copenhagen, 1981, pp.341-354
63. Holm C. Clonal lethality caused by the yeast plasmid 2^DNA. Cell, 1982, v.29, pp.585-59470a. Holmberg S., Petersen L.J.G., Nilsson-Tillgren Т.,
64. Kielland-Brandt M.C. Molecular characterization of a Saccharomyces cerevisiae plasmid containing the HIS4 gene. -Carlsberg Res.Commun., 1979, v.44, pp.269-282
65. Hsiao C.-L., Carbon J. High-frequency transformation of yeast by plasmids containing the cloned yeast ARG4 gene. -Proc.Nat.Acad.Sci. USA, 1979, v.76, pp.3829-3833
66. Hyman B.C., Cramer J.H., Rownd R.H. Properties of a Saccharomyces cerevisiae mtDNA segment conferring high-frequency-yeast transformation. Proc.Nat.Acad.Sci. USA, 1982, v.79» pp.I578-I582- 181
67. Ilgen С., Farabaugh P.J., Hinnen A., Walsh J.M., Fink G.R. Transformation of yeast. In: Genetic engineering, v.I. N.Y., London : Plenum Press, 1979, pp.II7-I32
68. Johnston J., Higer F., Mortimer R. Variation in frequency of transformation by plasmid YRp7 in Saccharomyces cerevi-siae. Gene, 1981, v.l6, pp.325-329
69. Kielland-Brandt M.C., Nilsson-Tillgren Т., Holmberg S., Petersen L.J.G., Svenningsen B.A. Transformation of yeast without the use of foreign DNA. Carlsberg Res.Commun., 1979, v.44, pp.77-87
70. Kielland-Brandt M.C., Nilsson-Tillgren Т., Petersen L.J.G., Hoimberg S. Transformation in yeast without the involvement of bacterial plasmids. A.Benzon Symp., v.l6. Munksgaard, Copenhagen, 1981, pp.369-381
71. Kingsman A.J., Clarke L., Mortimer R.K., Carbon J. Replication in Saccharomyces cerevisiae of plasmid pBR3I3 carrying DNA from the yeast trpl region. Gene, 1979, v.7, pp.141-152- 182 79» Kingsman A.J., Gimlich R.L., Clarke L. , Chinault A.C.,
72. Carbon J. Sequence variation in dispersed repetitive sequences in Saccharomyces cerevisiae. J.Mol.Biol., 1981, v.I45, pp.619-632
73. Klein H.L., Petes T.D. Intrachromosomal gene conversion in yeast. Nature, 1981, v.289, pp.144-148
74. Larkin J.C., Woolford J.L.,Ir. Molecular cloning and analysis of the CRYI gene: a yeast ribosomal protein gene. -Nucl.Acids Res.,1983, v.II, pp.403-420
75. Losson R., Lacroute P. Cloning of a eukaryotic regulatory gene. Mol.Gen.Genet., 1981, v.184, pp.394-399
76. Luria S.E., Delbriick M. Mutations of bacteria from virus sensitivity to virus resistance. Genetics, 1943, v.28, pp.491-511
77. McClintock B. Chromosome organization and genio expression.-Cold Spring Harbor Symp.Quant.Biol., v.16. Cold Spring Harbor, N.Y., Cold Spring Harbor Lab., 1951, pp.13-47
78. McNeil J.В., Storms R.K., Priesen J.D. High frequency recombination and the expression of genes cloned on chimeric yeast plasmids: identification of a fragment of 2-^m circle essential for transformation. Current Genet., 1980, v.2, pp.17-25- 183
79. Mortimer R.K., Contopoulou R. , Schild D. Mitotic chromosome loss in a radiation-sensitive strain of the yeast Saccharomyces cerevisiae. Proc.Nat.Acad.Sci. USA, 1981, v.78,pp.5778-5782
80. Mortimer R.K., Hawthorne D.C. Genetic mapping in yeast. -In: Methods in cell biology, v.II. N.Y., London, San Fran-siscou, AP,Inc., 1975, pp.221-233
81. Mortimer R.K., Schild D. Genetic map of Saccharomyces cerevisiae. Microbiol.Rev., 1980, v.44, pp.519-571
82. Nagylaki Т., Petes T.D. Intrachromosomal gene conversion and the maintenance of sequence homogeneity among repeated genes. Genetics, 1982, v.100, pp.315-337
83. Nasmyth K.A. Molecular genetics of yeast mating type. -Ann.Rev.Genet., 1982, v.l6, pp.439-500
84. Nasmyth K.A., Reed S.I. Isolation of genes by complementation in yeast: molecular cloning of a cell-cycle gene. -Proc.Nat.Acad.Sci. USA, 1980, v.77, pp.2II9-2I23
85. Navas J., De la Gruz P., Rodriguez J.C., Andres I.,
86. Pulgar G., Ortiz J.M. Incompatibility properties of the IncPm/F IY haemolytic plasmid pSU3l6 when integrated in the Escherichia coli chromosome. J.Gen.Microbiol., 1983, v.129, pp.2277-2283
87. Newlon C.S., Devenish R.J., Suci P.A., Roffis C.J. Replication origins used in vivo in yeast. ICN-UCLA Symp. Mol.Cell.Biol., AP,Inc., 1981, v.20, pp.501-516
88. Nilsson-Tillgren Т., Holmberg S., Kielland-Brandt M.C., Petersen J.G.L. Repair of extensive chromosome damagecaused by integrated 2-micron DNA. Abstr. IIth Int.Conf. on Yeast genetics and molecular biology. Montpellier, Prance, 1982, p.169- 184
89. Orr-Weaver Т., Rothstein R., Szostak J. Initiation of recombination by double-strand breaks. Abstr. II^*1 Int.Conf.on Yeast genetics and molecular biology. Montpellier, Prance, 1982, p.171
90. Orr-Weaver T.L., Szostak J.W., Rothstein R.J. Yeast transformation: a model system for the study of recombination. -Proc.Nat.Acad.Sci. USA, 1981, v.78, pp.6354-6358
91. Perkins D.D. Biochemical mutants in the smut fungus Usti-lago maydis. Genetics, 1949, v.34, pp.607-626
92. Petes T.D. Unequal meiotic recombination within tandem arrays of yeast ribosomal DNA genes. Cell, 1980, v.19, pp.765-774
93. Reipen G., Erhart E., Breunig K.D., Hollenberg C.P. Nonselective transformation of Saccharomyces cerevisiae. -Current Genetics, 1982, v.6, pp.189-193
94. Ia.Roeder G.S. Unequal crossing-over between yeast transpo-sable elements. Mol.Gen.Genet., 1983, v.190, pp.II7-I2I
95. Roeder G.S., Parabaugh P.J., Chaleff D.T., Pink G.R.
96. The origins of gene instability in yeast. Science, 1980, v.209, pp.1375-13801.2a.Roeder G.S., Pink G.R. DNA rearrangements associated with a transposable element in yeast. Cell, 1980, v.21, pp.239249
97. Roggenkamp R., Kustermann-Kuhn В., Hollenberg С.P. Expression and processing of bacterial^-lactamase in the yeast Saccharomyces cerevisiae. Proc.Nat.Acad.Sci. USA, 1981, v.78, pp.4466-4470
98. Rubin E.M., Wilson G.A., Young F.E. Expression of thymidy-late synthase activity in Bacillus subtilis upon integration of a cloned gene from Escherichia coli. Gene, 1980, v.10, pp.227-235
99. Scherer S., Davis R.W. Recombination of dispersed repeated DNA sequences in yeast. Science, 1980, v.209, pp.13801384
100. Schild D., Konforti В., Perez C., Gish W., Mortimer R. Isolation and characterization of yeast DNA repair genes. -I. Cloning of the RAD52 gene. Current Genet., 1983, v.7, pp.85-92
101. Scott J.F., Brajkovich C.M. Replication properties of TrpI-RI-circle: a high copy number yeast chromosomal DNA plasmid. ICN-UCLA Symp.Mol.Cell.Biol., AP,Inc., 1981, v.20, pp.517-527
102. Sherman F., Fink G.R., Lawrence C.W. Laboratory manual for a course methods in yeast genetics. Cold Spring Harbor, N.Y., Cold Spring Harbor Lab., 1972, pp.9-16
103. Shortle D., Haber J.E., B»tstein D. Lethal disruptionof the yeast actin gene by integrative DNA transformation. Science, 1982, v.217, pp.371-373
104. Snow R. Maximum likelihood estimation of linkage and interference from tetrad data. Genetics, 1979, v.92, pp.231-245- 186
105. Stinchcomb D.T., Mann C., Selker E. , Davis R.W. DNA sequ- ' ences that allow the replication and segregation of yeast chromosomes. ICN-UCLA Symp.Mol.Cell.Biol.,AP,Inc., 1981, v.20, pp.473-488
106. Stinchcomb D.T., Struhl K., Davis R.W. Isolation and characterization of a yeast chromosomal replicator. -Nature, 1979, v.282, pp.39-43
107. Storms R.K., McNeil J.В., Khandekar P.S., An G., Parker J., Priesen J.D. Chimeric plasmids for cloning of deoxyribonucleic acid sequences in Saccharomyces cerevisiae. -J.Bacteriol., 1979, v.140, pp.73-82
108. Strathern J., Hicks J., Herskowitz I. Control of cell type in yeast by the mating type locus. The o<2 hypothesis. J.Mol.Biol., 1981, v.147, pp.357-372
109. Strathern J.N., Newlon C.S., Herskowitz I., Hicks J.B. Isolation of a circular derivative of yeast chromosome Ш: implications for the mechanism of mating type interconver-sion. Cell, 1979, v.18, pp.309-320
110. Szostak J.W., Wu R. Insertion of a genetic marker into the ribosomal DNA of yeast. Plasmid, 1979, v. 2, pp.536-554
111. Szostak J.W., Wu R. Unequal crossing over in the ribosomal DNA of Saccharomyces cerevisiae. Nature, 1980, v.284, pp.426-430
112. Tabak H.F. Absence of 2J)m DNA sequences in Saccharomyces cerevisiae Y379-5D. FEBS Letters, 1977, v.84, pp.67-70
113. Thompson R. Plasmid and phage MI3 cloning vectors.1.: Gehetic engineering, v.3. N.Y., London, AP,Inc., 1982, pp.1-52
114. Toh-E A., Guerry-Kopecko P., Wickner R.B. A stable plasmid carrying the yeast LEU2 gene and containing only yeast deoxyribonucleic acid. J.Bacterid., 1980, v.141, pp.413-416
115. Toh-E A., Wickner R.B. Curring of the 2^DNA plasmid from Saccharomyces cerevisiae. J.Bacterid., 1981, v.I45, pp.1421-1424
116. Tschumper G., Carbon J. Delta sequences and double symmetry in a yeast chromosomal replicator region. -J.Mol.Biol., 1982, v.I56, pp.293-307
117. Warren G.J. Mitotic segregation of 2Jjm-pBR322 chimaeric plasmids in yeast. Current Genet., 1983, v.7, pp.235-237
118. Whitehouse H.L.K. Mapping chromosome centromeres by the analysis of unordered tetrads. Nature, 1950, v.165, p.8931.5a.Y/illiamson V.M. Transposable elements in yeast. Int. Rev.Cytology, 1983, v.83, pp.1-25
119. Yasui A., Chevallier M.R. Cloning of photoreactivation repair gene and excision repair gene of the yeast Saccharomyces cerevisiae. Current Genet., 1983, v.7, pp.I9I-I94
120. Zakian V.A., Scott J.P. Construction, replication, and chromatin structure of TRPI RI circle, a multiple-copy sinthetic plasmid derived from Saccharomyces cerevisiae chromosomal DNA. Mol.Cell.Biol., 1982, v.2, pp.221-232
121. Zamir A., Maine C.V., Pink G.R., Szalay A.A. Stable chromosomal integration of the entire nitrogen fixation gene cluster from Klebsiella pneumoniae in yeast. Proc.Nat. Acad.Sci. USA, 1981, v.78, pp.3496-3500- 189 -Благодарности
122. Выражаем глубокую признательность лицам и учреждениям, предоставившим в наше распоряжение плазмиды и штаммы дрожжей требуемого генотипа и принявшим участие в обсуждении результатов настоящей работы.
123. Особо благодарим сотрудников и лаборантов Сектора радиационной генетики ЛМРБ ЛШФ АН СССР, которые делом, словом, отношением способствовали разработке и выполнению опытов.
124. За выполнение биохимической части работы благодарим сотрудников В.Т.Пешехонова, А.ИДишанскую и А.А.Гольцова.
125. За работу на ЭВМ, составление программы и ее проработку благодарим В.С.Никифорова.
126. Лично благодарю профессора И.А.Захарова за постоянное внимание и заботу о диссертационной работе.
- Булат, Сергей Алексеевич
- кандидата биологических наук
- Ленинград, 1984
- ВАК 03.00.15
- Изучение последствий интеграции плазмиды в дрожжевые хромосомы методом пульс-электрофореза
- Регуляция экспрессии генов и генетические перестройки при САЙТ-специфической рекомбинации в дрожжах SACCHAROMYCES CEREVISIAE
- Конструирование штаммов-реципиентов дрожжей Saccharomyces cerevisiae и анализ в их клетках митотической стабильности рекомбинантных плазмид и уровня экспрессии гетерологичных генов
- Конструирование модельных систем дляселекции генноинженерных штаммовBacillus subtilis - продуцентов рибофлавина
- Геномная нестабильность и пролиферативное старение при образовании иммортальных соматических гибридов человек-мышь