Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом
ВАК РФ 03.02.02, Вирусология
Автореферат диссертации по теме "Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом"
На правах рукописи
Дзагурова Тамара Казбековна
ГЕМОРРАГИЧЕСКАЯ ЛИХОРАДКА С ПОЧЕЧНЫМ СИНДРОМОМ (этиология, специфическая лабораторная диагностика, разработка диагностических и вакцинных препаратов)
03.02.02 - вирусология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук
Москва - 2014
Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов имени М.П.Чумакова» Российской академии медицинских наук
Научный консультант:
РАН, директор ФГБУ «Институт вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова» РАМН
доктор медицинских наук, профессор, член-корр. Урываев Леонид Викторович РАН, заместитель директора ФГБУ «НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского» Минздрава РФ
доктор медицинских наук, профессор, главный Шалунова Нина Васильевна эксперт ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздрава РФ
Ведущая организация: Федеральное бюджетное учреждение науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера" Роспотребнадзора
Защита состоится 10 октября 2014 г. в 10 часов 00 минут на заседании диссертационного совета Д 001.026.01 на базе ФГБУ «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им.М.П.Чумакова» РАМН по адресу: 142782, город Москва, поселение Московский, поселок Института полиомиелита, 27 км. Киевского шоссе.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им.М.П.Чумакова» РАМН и на сайте организации http://poliomyelit.ru
доктор медицинских наук, профессор Александрович
Ткаченко Евгений
Официальные оппоненты:
доктор биологических наук, профессор, академик Зверев Виталий Васильевич
Автореферат разослан
И.о. Ученого секретаря диссертационного совета, доктор биологических наук
Ожерелков Сергей Викторович
' 'i-i ■■■■•< 3
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы
Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС) - вирусный нетрансмиссивный зооноз, широко распространенный в Евразии, а в России занимающий первое место по заболеваемости среди природно-очаговых инфекций. По данным Роспотребнадзора только за 14 лет XXI века было зарегистрировано более 96 тысяч случаев ГЛПС в 7 из 8 Федеральных округах, включая около 2,5 тысяч детей в возрасте до 14 лет. У более 430 больных тяжёлое клиническое течение болезни закончилось летальным исходом. При этом социально-экономические потери усугубляются ещё и тем, что из числа заболевших ГЛПС до 85% составляют мужчины в возрасте от 20 до 50 лет, то есть, самая трудоспособная часть населения. Из всего комплекса мер неспецифической профилактики ГЛПС наиболее часто применяемой остается дератизация. Вместе с тем, дератизационные мероприятия обходятся довольно дорого, обеспечивают лишь кратковременное снижение численности грызунов на обработанных территориях и вовсе не могут решить проблему полной ликвидации природного резервуара возбудителя ГЛПС. Наиболее эффективным методом борьбы с ГЛПС является вакцинопрофилактика, что было продемонстрировано на протяжении последних 20 лет в Китае, Южной и Северной Корее. Однако вакцины против ГЛПС, производимые в этих странах на основе вирусов Hantaan и Seoul, не обладают защитным действием против вируса Puumala - основного возбудителя ГЛПС у жителей Европейской части России, на которую приходится более 98% всей заболеваемости, регистрируемой в России.
Отсутствие тенденции к снижению заболеваемости ГЛПС, расширение ареала инфекции, участившиеся случаи вспышек ГЛПС, ассоциированных с новыми, ранее не известными в России хантавирусами, свидетельствует о возрастающей медицинской и социальной значимости проблемы ГЛПС.
Открытию возбудителя ГЛПС предшествовал более чем 40-легний период поисков, успешно завершившийся в конце 70-х годов, когда впервые вирус-
возбудитель ГЛПС был выделен в Южной Корее от полевой мыши Apodemus agrarius coreae. (Lee et al., 1978).
К моменту начала наших исследований (1980 г.) было известно о существовании лишь одного возбудителя ГЛПС (штамм Hantaan 76-118), а также его природного резервуара и источника заражения людей - полевой мыши. Единственным лабораторным методом для выявления антигена хантавируса и антител к нему был непрямой метод флуоресцирующих антител (МФА) с использованием препаратов криостатных срезов лёгочной ткани полевых мышей. Отсутствие эффективных, высокочувствительных и специфичных методов исследований хантавирусов существенно тормозило изучение особенностей этиологии, иммунологии, эпидемиологии ГЛПС, а также применение специфической диагностики этой инфекции в широкой практике.
Настоящая работа посвящена выяснению этиологических аспектов изучения ГЛПС и тесно связанных с этиологией клинико-эпидемиологических особенностей, а также разработкой методов и препаратов для специфической диагностики и вакцинопрофилактики хантавирусной инфекции. Степень разработанности темы исследования
Научно обоснованы и практически реализованы все этапы исследований. Работа открывает новое направление в исследовании хантавирусов и этиологически обусловленной ими хантавирусной инфекции - ГЛПС; в работе решены научные фундаментальные и прикладные проблемы, имеющие важное народнохозяйственное значение. Цель и задачи исследования
Целью наших исследований было выяснение этиологических и клинико-эпидемиологических характеристик ГЛПС, уточнение нозоареала инфекции, а также разработка методов и препаратов для специфической диагностики и вакцинопрофилактики ГЛПС.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
1. Разработать и усовершенствовать методы специфической лабораторной диагностики ГЛПС; провести сравнительную оценку эффективности их применения на практике; унифицировать систему лабораторного обследования различных материалов на ГЛПС.
2. Выделить и идентифицировать штаммы хантавирусов от мышевидных грызунов, больных и погибших от ГЛПС людей, определить их таксономическое положение в составе рода «Hantavirus».
3. Изучить динамику образования антител к хантавирусам у больных ГЛПС; определить соотношение показателей клинической и серологической диагностики; установить существование лёгких и стёртых форм клинического течения инфекции.
4. Провести сравнительный анализ клинико-эпидемиологических особенностей ГЛПС, вызванной разными видами хантавирусов.
5. Уточнить ареал и видовое разнообразие хантавирусов, а также нозоареал ГЛПС на территории России.
6. Осуществить научно-обоснованную разработку технологии экспериментального и промышленного изготовления диагностикумов ГЛПС и внедрить их в практику здравоохранения.
7. Разработать основные биотехнологические параметры конструирования инактивированной культуральной вакцины против ГЛПС, включая методы контроля специфической активности, остаточной инфекционности (безопасности), иммуногенности.
8. Приготовить лабораторные серии культуральной инактивированной вакцины ГЛПС и аттестовать их на соответствие требованиям, предъявляемым к медицинским иммунобиологическим препаратам, вводимым людям.
Научная новизна
1. Впервые выявлены и изучены природные очаги ГЛПС в лесостепной зоне Центрально-Черноземных областей России и в субтропической зоне Краснодарского края.
2. Выделено и идентифицировано 76 штаммов и более 70 РНК-изолятов
ханавирусов от 9 видов грызунов и одного вида птиц, а также из крови больных ГЛПС и секционных материалов погибших от ГЛПС людей; выявлены и изучены новые виды хантавирусов - "Khabarovsk" (от дальневосточной полёвки, Microtus fortts), "Taimyr-Topografov" (от сибирского лемминга, Lemmus sibiricus) и "Adler" (от кустарниковой полёвки, Terrícola majori), а также два новых подтипа вируса Dobrava/Belgrad - "DOB-Ap" (от кавказской лесной мыши, Apodemus ponticus) и "DOB-Aa" (от полевой мыши, Apodemus agrarius).
3. Экспериментально обосновано опубликованное (Klempa et al., 2013) предложение в Международный комитет таксономии вирусов о выделении 4-х самостоятельных генотипов вируса Dobrava/Belgrad (.Dobrava, Kurkino, Sochi, Saaremá).
4. Доказано существование новых этиологически самостоятельных хантавирусных инфекций, эпидемиологически и клинически отличающихся от ранее известных.
5. Установлена достоверность существования стёртых и атипичных форм клинического течения ГЛПС, о которых ранее сведений не имелось.
6. Уточнен нозоареал ГЛПС по результатам определения показателей естественного иммунитета к хантавирусам у населения, проживающего в различных регионах России и бывших республик СССР.
7. Разработаны научные основы изготовления и биологического контроля культуральной инактивированной вакцины против ГЛПС.
Практическая значимость и внедрение результатов исследований в практику
1. Впервые, применительно к хантавирусам, разработан комплекс лабораторных методов исследования материалов от больных ГЛПС и мелких млекопитающих, позволивших существенно повысить эффективность специфической диагностики ГЛПС и получить новые данные, имеющие приоритетное значение в изучении хантавирусных лихорадок в нашей стране и за рубежом.
2. Результаты сравнительной оценки эффективности клинической и специфической лабораторной диагностики ГЛПС позволили установить истинные размеры заболеваемости, расширить представление о диапазоне клинических проявлений инфекции.
3. Получены экспериментальные данные, которые составили основу технологии изготовления иммунобиологических препаратов, предназначенных для специфической лабораторной диагностики и вакцинопрофилактики ГЛПС.
4. В широкую практику здравоохранения внедрены два диагностических препарата: «Диагносгикум ГЛПС культуральный, поливалентный для непрямого метода иммунофлюоресценции» и «Иммуноферментная тест-система «Хантагност» для определения антигенов хантавирусов». Применение первого диагностикума позволило существенно повысить эффективность специфической диагностики ГЛПС, что способствует, в свою очередь, своевременной госпитализации, а также выбору правильной тактики ведения и лечения больных. Практическое применение иммуноферментной тест-системы для определения инфицированное™ хантавирусами мелких млекопитающих открыло перспективу для оценки напряжённости эпизоотического процесса у грызунов - основного фактора, используемого для прогнозирования эпидемической ситуации и обусловливающего показания к проведению соответствующих противоэпидемических мероприятий в природных очагах инфекции.
5. Впервые в мире разработана технология изготовления и биологического контроля культуральной инактивированной вакцины против ГЛПС на основе хантавирусов Риита1а и БоЬгауа/Ве^гас1е (далее ОоЬгауа). Лабораторные серии вакцины успешно прошли аттестацию на соответствие требованиям, предъявляемым к медицинским вакцинам.
Основные положения, выносимые на защиту
1. Разработаны и усовершенствованы методы специфической диагностики ГЛПС;
проведена сравнительная оценка эффективности их практического применения.
2. Разработаны технологии промышленного изготовления и контроля иммунобиологических препаратов для лабораторной диагностики ГЛПС и осуществлено их внедрение в [фактику здравоохранения.
3. Выделены и идентифицированы штаммы хантавирусов от мышевидных грызунов, больных и погибших от ГЛПС людей; определены иммунологические и генотипические взаимосвязи между хантавирусами и установлено существование новых ранее не известных видов хантавирусов, принадлежащих к роду «Hantavirus».
4. Уточнён нозоареал ГЛПС на территории России; проведен сравнительный анализ клинико-эпидемиологических особенностей ГЛПС, этиологически обусловленной разными видами хантавирусов; определено соотношение показателей клинической и серологической диагностики, установлено существование лёгких и стёртых форм клинического течения инфекции; доказано существование новых этиологически самостоятельных хантавирусных инфекций, имеющих существенные клинико-эпидемиологические отличия.
5. Разработаны основные биотехнологические параметры конструирования экспериментальной цельновирионной убитой вакцины против ГЛПС, а также методы её контроля; приготовлены лабораторные серии культуральной инактивированной вакцины ГЛПС и аттестованы на соответствие требованиям, предъявляемым к медицинским иммунно-биологическим препаратам, вводимым людям.
Степень достоверности и апробация результатов
Достоверность полученных в ходе работы данных обеспечивается представительностью и достоверностью анализируемых выборок (более 20 ООО обследованных образцов полевых материалов от людей и мелких млекопитающих), проведением экспериментальной части работы на сертифицированном оборудовании, определяется достаточным числом исследований, длительным сроком наблюдений, комплексным подходом к проведению исследований, выполненных с использованием современных методов и статистической обработкой полученных результатов. Таким образом,
обоснованность и достоверность результатов определяется высоким научно-методическим уровнем работы и большим объемом материалов исследования.
Способ и технология изготовления препаратов для диагностики и профилактики ГЛПС защищены 4-мя авторскими свидетельствами, 1-м патентом на полезную модель и 3-мя патентами на изобретение.
В Государственной коллекции вирусов НИИ вирусологии им.Д.И.Ивановского Минздрава РФ депонировано 18 штаммов хантавирусов, выделенных от диких грызунов и больных ГЛПС людей.
На основании результатов проведенных исследований разработано 7 нормативно регламентирующих документов, включая 5 методических рекомендаций, 1 методическое указание, 1 учебно-методическое пособие, 1 санитарные правила.
Основные результаты работы полностью отражены в печати. По теме диссертации опубликовано 72 статьи в рецензируемых журналах, в том числе в российских журналах, входящих в Перечень, рекомендованный ВАК - 49, в зарубежных журналах, индексируемых в международных системах цитирования (библиографических базах - Web of Science, Scopus, PubMed) - 23.
Материалы диссертации были представлены на 35 симпозиумах, конференциях и конгрессах, включая 20 международных. Структура и объём диссертации
Диссертация изложена на 235 страницах машинописного текста, состоит из введения, основной части (обзор литературы, собственные исследования), заключения, включая выводы, а также списка сокращений, списка литературы, содержащего 228 источников, иллюстрирована 28 таблицами и 49 рисунками. Приложение к диссертации содержит полный список научно-технической документации на «Диагностикум геморрагической лихорадки с почечным синдромом, культуральный, поливалентный для непрямого метода иммунофлюоресценции"; диагностическую тест-систему «Хантагност»; кандидатную вакцину «Комби-ГЛПС-Вак»; список патентов и авторских свидетельств, методических рекомендаций, МУК и СП.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
1 РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ И ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ГЛПС
В процессе исследований с участием автора диссертации было разработано и усовершенствовано применительно к хантавирусам 23 метода, апробированных на большом количестве биологических материалов разного происхождения.
В конечном результате, был сформирован и широко используется в настоящее время комплекс методов, наиболее эффективных и значимых для исследований в области хантавирусологии, а также для диагностических целей. Если вирусологические (изоляция и идентификация вирусов в культуре клеток) и молекулярно-генетические (ПЦР и сиквенирование генома) методы полностью в первоначальном виде вошли в этот комплекс, то среди иммунологических методов наибольшие преимущества получили четыре метода: непрямой МФА с использованием культурального антигена - для выявления антител к хантавирусам у людей и животных; прямой метод ИФА - для выявления хантавирусного антигена в органах мелких млекопитающих и секционных материалах погибших от ГЛПС людей; непрямой метод ИФА с использованием рекомбинантных антигенов хантавирусов - для выявления и 1{>С антител к хантавирусам - для серодиагностики ГЛПС у больных людей; а также два метода ИФА с использованием моноклональных антител "Ханта-ПУУ" и "Ханта-Ы" для определения нуклеокапсидного и поверхностного белков хантавирусов при изготовлении инакгивированных вакцинных препаратов против ГЛПС.
При сравнении эффективности применения иммунологических методов принимали во внимание не только их высокие чувствительность и специфичность, но и доступность для широкого использования в условиях практического здравоохранения. Кроме того, учитывали перспективность технологии их промышленного производства.
1.1 Разработка технологии промышленного производства культурального, поливалентного диагностикума ГЛПС для непрямого МФА
С 1983 г для приготовления культуральных антигенов использовали отечественные штаммы хантавирусов Puumala и Hantaan, выделенные нами в европейском и дальневосточном регионах СССР. Вначале готовили и применяли моновалентные антигены (отдельно для каждого хантавируса), а затем комбинированный двухвалентный препарат культурального диагностикума ГЛПС для непрямого МФА (далее диагноста кум ГЛПС). Двухвалентный диагностикум ГЛПС прошёл широкую апробацию (около 20 ООО больных из 20 административных районов СССР), прежде чем технология его изготовления была передана в 1986 г. для промышленного освоения. Широкая апробация препарата в европейских и дальневосточных эндемичных по ГЛПС районах позволила определить реальные потребности практического здравоохранения в диагностикуме ГЛПС.
Когда было установлено, что в остром периоде болезни титры антител в сыворотках крови больных ГЛПС, ассоциированной с вирусами Hantaan, Seoul и Dobrava в 2-4 раза выше с гомологичным антигеном, для повышения чувствительности диагностикум ГЛПС был усовершенствован: в состав комбинированного двухвалентного антигена были дополнительно включены культуральные антигены, приготовленные на основе штаммов вирусов Seoul и Dobrava.
Несомненным достоинством диагностикума ГЛПС является то, что в антигенном поливалентном препарате имеется весь набор присущих хантавирусу антигенных детерминант, представленных в цитоплазме клеток в составе зрелых вирионов, а также компонентов сборки вирусных частиц: белка нуклеокапсида, гликоэилированного белка наружной оболочки и его предшественников, вирусной РНК. Именно поэтому непрямой МФА остается стандартом при сравнении специфичности и чувствительности вновь создаваемых диагностических препаратов для серодиагностики ГЛПС.
1.2 Разработка технологии промышленного производства иммуноферментной тест-системы «Хантагност» для определения антигенов хантавирусов
(Основной разработчик: длш. АЛИванов, Ангораюе свидетельство № 1639245. -1990; соавторы Ткаченко ЕЛ, Резапкин ГВ, Гасанова ТА, Башкирцев ВН, Днгурова TIC, Дровдов СТ.).
Технологический цикл промышленного изготовления иммуноферментной тест-системы «Хантагност» для определения антигенов хантавирусов (далее тест-система «Хантагност») предусматривает выделение IgG из сыворотки крови реконвалесцентов после ГЛПС (не ранее 2 месяцев от начала заболевания) с титрами антител к хантавирусу Puumala не менее 1:64 ООО в непрямом МФА, а также препарат "нормального" IgG (контроль специфичности) из сыворотки крови доноров, не содержащих антитела к хантавирусам. Пероксидазный конъюгат готовят путём конъюгирования пероксидазы хрена с анти-Пуумала IgG. Тест-система "Хантагност" рассчитана на определение антигенов большинства известных хантавирусов в грубых суспензиях органов диких животных и обеспечивает быстрый скрининг сотен образцов (один комплект рассчитан на обследование 47 образцов). Коммерческая тест-система представляет собой полный диагностический набор для прямого варианта ИФА (12-ти компонентный), состоящий из специфических компонентов (специфический и "нормальный" IgG для сенсибилизации иммунопанели, пероксидазный специфический конъюгат, контрольный антиген) и неспецифических - концентраты буферов, ферментный субстрат, иммунопанель).
2 ВЫДЕЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ ХАНТАВИРУСОВ 2.1 Выделение штаммов хантавирусов
В результате наших исследований по отработке оптимальных параметров выделения и культивирования хантавируса в клетках VERO-E6 была разработана схема обследования полевых материалов от мелких млекопитающих, больных ГЛПС и погибших от этой инфекции людей. Так, в первых опытах при обследовании животных образцы лёгочной ткани (препараты криостатных срезов
лёгких) были предварительно исследованы прямым методом ИФА на присутствие хантавирусного антигена. Клетки УЕЯО-Еб заражали только образцами лёгочной ткани, в которых предварительно был выявлен хантавирусный антиген. Субкультивирование инфицированных клеток проводили с 10-12 дневным интервалом. Начиная со 2-го пассажа, часть инфицированных клеток от каждого материала исследовали непрямым МФА на присутствие специфического антигена. Количество антигенположительных клеток возрастало от пассажа к пассажу и составляло 70-100% к 5-му субкультивированию. При этом было установлено преимущество субкультивирования с перевивкой инфицированных клеток по сравнению с методом субкультивирования, при котором инфицированные клетки смешивали с нормальными свежими клетками. Доказательство специфичности люминисцентного свечения и принадлежности выделенных штаммов к хантавирусу было подтверждено в результате исследования сывороток крови от больных ГЛПС в разные сроки от начала заболевания непрямым МФА с использованием культуральных антигенов вновь выделенных штаммов.
Таким образом, нам удалось определить подходы и разработать оптимальные условия выделения и культивирования хантавирусов, которые не утратили и до настоящего времени своей методической значимости и используются нами лишь с небольшими модификациями.
Всего за период с 1983 г. по 2013 г. для выделения хантавирусов в клетках УЕЯО-Еб было обследовано более 300 образцов крови, взятой в остром периоде болезни, а также около 80 проб 10% суспензий органов (лёгкое, печень, селезёнка, почка, сердце, бронхи, разные отделы головного мозга, лимфоузлы) от 9 погибших от ГЛПС больных. При изоляции штаммов в культуре клеток УЕЯО-Е6 использовали только образцы 10% суспензий лёгочной ткани мелких млекопитающих, содержащих антиген по результатам прямого ИФА. Таких антигенположительных проб было исследовано более 1000 от 16 видов мелких млекопитающих и 13 видов птиц.
В результате было выделено и идентифицировано 76 хантавирусных штаммов, включая 64 штамма из материалов, собранных на территории России
(26 - в Европейской части и 39 - на Дальнем Востоке), 3 штамма - на территории Грузии и 8 штаммов - на территории Украины (Таблица 1).
Из 76 хантивирусных штаммов, выделенных из материалов, собранных в разных географических регионах, 53 штамма были изолированы от 8 видов мелких млекопитающих (рыжая, красно-серая, обыкновенная, большая полёвки, полевая, восточно-азиатская, кавказская лесная мыши, серая крыса), 1 штамм от желтогорлой овсянки, 10 штаммов - из крови больных ГЛПС и 12 штаммов - из секционных материалов от погибших больных ГЛПС. До наших исследований не было сообщений других авторов о выделении хантивирусов в клетках УЕЯО-Еб из крови больных ГЛПС, а также из ткани органов при легальных исходах.
Таблица 1 Хантавирусные штаммы, изолированные в культуре VERO-E6
Выделено штаммов хантавирусов
Годы выделения Регионы Грызуны Больные ГЛПС Всего
1983,1985, 1986, Башкирия 4 4 8
1987 Саратовская область 3 1 4
1985, 1986, 1989, Приморский край 7 8 15
1988-1994, 1997 Хабаровский край 18 5 23
1992 Амурская область - 1 1
1988 Грузия 3 - 3
1992,1994 Крым 8 - 8
2001,2009,2011 Краснодарский край 5 1 6
2002,2007 Липецкая область 2 1 3
2002 Тульская область 1 - 1
2003 Воронежская область 2 - 2
2012 Тамбовская область 2 - 2
Всего: 55 21 76
Следует отметить низкую эффективность выделения хантавирусов. При этом, в процессе выделения хантивирусных штаммов в клетках VERO-E6 было показано, что штаммы хантавирусов Puumala, Tula, Khabarovsk, резервуарные хозяева которых (рыжая, обыкновенная и большая полёвки) относятся к подсемейству мелких млекопитающих "Хомяковые", обладают более низкой
адаптационной способностью к размножению в клетках VERO-E6 по сравнению со штаммами хантавирусов Hantaan, Seoul и Dobrava, ассоциированных с грызунами подсемейства "Мышиные" (полевая мышь, серая крыса, восточно-азиатская мышь).
Помимо хантавирусных штаммов выделено и генетически идентифицировано более 70 хантавирусных РНК-изолятов из органов мышевидных грызунов и крови больных ГЛПС людей.
2.2 Идентификация хантавирусов и их таксономическая классификация
В результате наших ранних исследований сывороток крови больных ГЛПС из Приморского края и Башкирии непрямым МФА с использованием препаратов криостатных срезов лёгкого полевой мыши, полученных из Южной Кореи, и приготовленных нами препаратов криостатных срезов лёгкого рыжих полёвок, отловленных в Башкирии, был установлен односторонний перекрест, то есть титры сывороток крови больных ГЛПС из Приморского края были значительно выше (в 8-128 раз) с гомологичными (от полевая мышь), чем с гетерологичными (от рыжей полёвки) антигенами. Эти данные подтвердили ¡»нее высказанное предположение (Chumakov et al., 1980) об антигенной неоднородности хантавируса и существовании двух антигенных вариантов этого вируса: "Восточный" - на Дальнем Востоке и "Западный", районами распространения которого считали Европейскую часть СССР, а также территории Швеции и Финляндии.
Более выраженные антигенные различия между штаммами, по сравнению с применением поликлональных сывороток крови реконвалесцентов ГЛПС, нам удалось установить при использовании в непрямом МФА моноклональных антител. По способности моноклонов специфически реагировать с антигенами оказалось возможным дифференцировать четыре отдельные антигенные группы хантавирусов, названные по номерам групп (1-й, 2-й, 3-й и 4-й серотипы).
Применение метода бляшкообразования и реакции нейтрализации вирусов по подавлению числа бляшек (Lee P.W.et al., 1985) позволило авторам дифференцировать пять антигенных вариантов хантавирусов, названных "Apodemus", "Rattus", "Puumala", "Microtus" и пятый (остался безымянным).
С начала 90-х годов по настоящее время серотипирование хантавирусов осуществляется нами с помощью непрямого МФА с моновалекгными культральными антигенами хантавирусов и в реакции нейтрализации по подавлению числа фокусобразующих единиц (ФОБ) (бляшки, выявляемые методом твердофазного иммуноферментного метода) в клетках VERO-E6.
В результате применения ПЦР с обратной транскрипцией и последующего сиквенирования нами было генетически идентифицировано 34 хантавирусных штамма, выделенных за период с 1983 по 1996 гг. в различных географических регионах России и республик бывшего СССР. Выявлены вирусы, относящиеся к двум новым, ранее не известным хантавирусным видам: вирус Khabarovsk, штаммы которого были выделены от большой полёвки (Microtus fortis) в Хабаровском крае и вирус Taimyr, РНК-изоляты которого были получены из образцов лёгочной ткани сибирских леммингов (Lemus sibiricus), отловленных на полуострове Таймыр.
В результате расшифровки зимних вспышек ГЛПС (2001-02 гг. и 2006-07 гг.) в Центральных областях России, а также тяжелых случаев заболевания ГЛПС в субтропической зоне Краснодарского края нами была впервые установлена циркуляция в России еще одного патогенного для человека хантавируса Dobrava/Belgrade. В очагах Центрального Черноземья были изолированы 7 штаммов от полевых мышей (A.agrarius) и один штамм от больного ГЛПС. На юге Краснодарского края были изолированы 5 штаммов от кавказских лесных мышей (A.ponticus), а также штамм от больной, погибшей от ГЛПС.
В результате анализа данных полного сиквенирования S, М и L сегментов штаммов Ар1584/Сочи-01, Аа1854/Липецк-02, выделенных от мышей, а также S и М сегментов штамма Орлова/Сочи-09, выделенного от больной, погибшей от ГЛПС из Сочи, и штамма ЕАТ/Липецк-06 от больного из Липецка были установлены значительные различия между сочинскими и липецкими штаммами. При этом более тесные филогенетические взаимоотношения сочинских штаммов отмечены со штаммами АР/АП9 и Slo/Af хантавируса Dobrava/Beigrade, выделенными от желтогорлой мыши (AJlavicolis) в Греции и Словении. В тоже время липецкие штаммы оказались филогенетически сходными с РНК-изолятами
вК/Аа и Куркино/53Аа/98, выделенными от полевых мышей (А.а^апш) в Словакии и России.
Филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей в сегмента показал, что штаммы Ар1584/Сочи-01, С)рлова/Сочи-09 а также РНК-изоляты Р-в1223/Краснодар-2000 (АГ442623) и Ар-1/Горячий Ключ-2000 (Аа442622) представляют отдельный кластер, который обозначен, как геновариант или подтип БОВ-Ар хантавируса БоЬгал>а/Ве&си1е (Рисунок 1).
Примечательно, что в то время как геноварианты БОВ-Ар и БОВ-А/ имеют общего предка на филогенетическом древе 8 сегмента, по анализу М и Ь сегментов штамм Ар1584/Сочи-01 выделяется из общего кластера хантавируса БоЬгт>а/Ве1£гшк. Штамм Аа1854/Липецк-02 по сиквенсам всех 3-х сегментов определенно занимает место в клейде БОВ-Аа, образуя отдельную ветвь с РНК-изолятами от палевой мыши, отловленной в районе Куркино Тульской области.
Выявленные отличия штаммов хантавируса БоЬг(п>а/Ве1^<и1е (генетические, антигенные, вирулентные, а также по резервуарному хозяину) вызвали потребность упорядочения их внутривидовой классификации. В 2012 г. группой хантавирусологов, включая автора настоящей диссертационной работы, было предложено взять за основу внутривидовой классификации штаммов хантавируса БоЬг(п>а/Ве1&ас1е филогенетический анализ сиквенсов 8 сегмента, а названия генотипов привести в соответствие с географическим названием местности, где впервые был выявлен (сиквенирован) генотип (согласно принятой в хантавирусологии терминологии). В соответствии с этой концепцией прототипные штаммы ЕЮВ-М хантавируса БоЬгта/Ве1&ас1е (Алтас-гирапс Й а1., 1992) обозначили как генотип "БоЬгапю ", штаммы хантавируса Баагета (Р1у1ш1ш е1 а!., 2003), выделенные от полевой мыши на эстонском острове Саарема - как генотип "Баагета", штаммы, выделенные от полевых мышей в Центральном Черноземье России и Словакии и ранее отнесенные к кластеру БОВ-Аа - как генотип "КигШо" по месту выявления первого геноизолята (Р1уияип й а1., 1999), штаммы, выделенные в Сочи (Ткаченко и др., 2005) и ранее отнесенные к кластеру БОВ-Ар -как генотип "5осйг"(Рисунок 2).
DOBV „г-ЧиММа да
6бП-SK/Aa
. I-Sa
Сокращения: HTNV - Hantaan, SEOV - Seoul, PHV - Prospect Hill, TULV - Tula; PUUV - Puumala; Saa - Saarema; ANDV -Andes; SNV - Sin Nombre; SANGV - Sangassou. Геноварианты вируса DOBV, ассоциированные с грызунами рода Apodemus: Ар -A.ponticus, каказская лесная мышь; Af- A.flavicollis, желтогорлая мышь; АА - A.agrarius, полевая мышь.
Рисунок 1 - Филогенетические взаимоотношения между штаммами хантивируса Dobrava/Belgrade и другими хантавирусами
на основании сиквенса S (А), М (Б) и L (В) сегментов.
Рисунок 2 - Генотипы вируса ОоЬгта/Ве^гас1е и их резервуарные хозяева.
По всей вероятности генетические отличия между генотипами хантавируса ОоЬга\а/Ве1^айе обусловливают и различную степень их вирулентности.
3 СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА И РЕЗУЛЬТАТЫ ЕЁ ПРИМЕНЕНИЯ В ИЗУЧЕНИИ ЗАКОНОМЕРНОСТЕЙ ГЛПС 3.1 Специфическая диагностика ГЛПС у больных людей
Для выяснения вопросов, связанных со специфической лабораторной диагностикой ГЛПС из 27 административных регионов Российской Федерации были собраны и исследованы сыворотки крови более 6 тысяч больных и реконвалесцентов с клиническим диагнозом ГЛПС, а также более 2 тысяч больных с другими диагнозами.
С целью отработки оптимальной схемы серологического обследования больных были изучены особенности антителообразования при ГЛПС в Европейской части и на Дальнем Востоке России. Обследование реконвалесцентов с давностью заболевания ГЛПС от 5 до 25 лет позволило
установить наличие антител к хантавирусу у 98% и 95% обследованных лиц из европейских и дальневосточных регионов, соответственно, что указывает на длительный, вероятно, пожизненный иммунитет к этой инфекции.
Результаты исследований непрямым методом ИФА динамики образования IgM и IgG антител к хантавирусам Puumala и Hantaan у больных ГЛГТС из европейских и дальневосточных регионов показали, что антитела класса IgM и IgG выявлялись с первых дней болезни, причем в ранние сроки титры IgM антител значительно превышали титры IgG антител. У большей части больных в парных сыворотках IgM антитела не определялись уже к 45 дню от начала заболевания, но, нередко, выявляли больных, у которых антитела класса IgM длительно персистировали, а в некоторых случаях определялись спустя год и более после заболевания и, иногда, с довольно высокими титрами. Таким образом, о диагностическом значении выявления IgM антител можно говорить только на основании динамики серококверсии при исследовании парных сывороток крови, а в спорных случаях при одновременном исследовании сероконверсии антител класса IgM и IgG.
В то же время выявляемые непрямым МФА («Диагностикум ГЛПС культуральный, поливалентный для непрямого метода иммунофлюоресценции») антитела представляют собой суммарно иммуноглобулины классов IgM и IgG. Чувствительность непрямого ИФА в формате использования рекомбинантного нуклеокапсидного белка, сорбированного непосредственно на иммунопанель, оказалась несколько ниже на ранних сроках болезни, о чём свидетельствуют более высокие титры флюоресцирующих антител, а также отдельные отрицательные результаты выявления IgM и IgG антител методом ИФА при положительных результатах их выявления непрямым МФА в этих же образцах.
Анализ результатов клинико-серологических исследований включал данные, полученные при обследовании двух групп больных: 1-я группа пациенты с типичной симптоматикой ГЛПС (первичный клинический диагноз -ГЛПС), а также больные с предварительным клиническим диагнозом «ГЛПС?». Вторая труппа - больные с различными диагнозами заболеваний, имеющих
сходные с ГЛПС симптомы (Рисунок 3). Несовпадения серологического и первичного клинического диагнозов были связаны с погрешностями клинической диагностики за исключением случаев типичного клинического течения ГЛПС на фоне отсутствия специфических антител. Эти случаи за весь период исследований были единичными и вероятно связаны с нарушением гуморального звена иммунитета у данных пациентов.
Применение специфической лабораторной диагностики ГЛПС позволило подтвердить предположение клиницистов о возможном существовании лёгких и стёртых форм течения инфекции. Диагностика таких форм может осуществляться только с учётом эпидемиологических и лабораторных серологических данных. Во время эпидемического подъёма стёртые формы выявляли в 10% случаев среди лиц, наблюдавшихся в амбулаторных условиях с различными диагнозами.
Обозначения: РФ - Российская Федерация, ЦФО - Центральный ФО, ЮФО -Южный ФО, ПФО - Приволжский ФО, УФО - Уральский ФО, ДВО -Дальневосточный ФО
Рисунок 3 - Серологическое подтверждение клинического диагноза ГЛПС (в %).
В результате исследования прямым методом ИФА около 800 сывороток крови, взятых в различные сроки от начала заболевания у больных с клиническим и серологически подтверждённым диагнозом ГЛПС, специфический антиген был обнаружен в менее чем 8% исследованных сывороток. При этом выявить какой-либо закономерности в динамике циркуляции антигена в крови больных и реконвалесцентов не удалось. В результате обследования секционных материалов от 13 погибших больных антиген хантавируса был обнаружен в органах 7 из 8 больных с клиническим диагнозом ГЛПС и одного из пяти с подозрением на это заболевание. За исключением бронхов, которые были обследованы только в одном случае, антиген был обнаружен во всех исследованных органах (лёгкое, печень, селезёнка, почка, сердце, головной мозг, лимфоузлы, надпочечник), что указывает на широкую диссеминацию хантавируса в органах больных людей. Результаты применения прямого ИФА в наших исследованиях для обнаружения специфического антигена в органах погибших людей указывает на эффективность использования этого метода для ретроспективной диагностики ГЛПС.
Молекулярная диагностика больных была предпринята нами при расшифровке зимней вспышки ГЛПС в 2006-07 гг. Методом ПЦР были обследованы пробы крови от 10 серологически подтвержденных больных ГЛПС из Липецкой и Воронежской областей, взятые на 1- 9 день появления симптомов ГЛПС. Филогенетический анализ по 8 сегменту геноизолятов от больных показал, что они отдельным кластером входят в состав ветви ДОБ-Аа, объединяющей штаммы и РНК-изоляты генотипа "КигШо" хантавируса ОоЬгача/Ве1&ас1е, резервуарным хозяином которого является полевая мышь.
Из-за отсутствия коммерческих тест-систем говорить в настоящее время об эффективности применения в широкой практике методов генетического анализа (ПЦР, сиквенирование, ПЦР в реальном времени) для специфической диагностики ГЛПС считаем преждевременным.
3.2 Распространение, этиология и клиннко-эпндемнологнческие особенности ГЛПС
Согласно одному из основных положений концепции функционирования природных очагов хангавирусной инфекции нозоареал ГЛПС ограничен ареалом носителей патогенных для человека хантавирусов.
Выявление хантавирусного антигена у диких грызунов является прямым доказательством циркуляции возбудителя ГЛПС в обследуемом районе. Однако, возможность обнаружения специфического антигена не является постоянной и частота выявления положительных на присутствие хантавирусного антигена животных может значительно меняться в различные временные промежутки в пределах даже ограниченной территории одного и того же района Это связано с особенностями эпизоотического процесса у животных, который периодически может активизироваться или затухать.
Благодаря длительному, вероятно, пожизненному сохранению антител после переболевания ГЛПС, определение естественного иммунитета (иммунной прослойки) у населения к хантавирусам может дать объективную информацию как о нозоареале ГЛПС, так и ареале возбудителей этой инфекции.
Хантавирусные антитела были выявлены у жителей административных территорий, где ранее случаи ГЛПС не регистрировались. Обнаружение на большинстве из этих территорий диких грызунов с хантавирусным антигеном позволяло предполагать возможность инфицирования людей хантавирусом, а также могло указывать на недостаточную компетентность медицинских работников в вопросах клинической диагностики ГЛПС. Что, в конечном итоге, в дальнейшем подтверждалось по мере внедрения в широкую практику специфической лабораторной диагностики, способствующей значительному повышению эффективности выявления больных ГЛПС.
За последние 14 лет, начиная с 2000 года, было зарегистрировано 96 840 случаев ГЛПС в 58 из 83 субъектов РФ, относящихся к 7 из 8 Федеральным округам.
95 323 случая заражения ГЛПС (98,4%) зарегистрировано в 46 из 58 субъектах РФ в Европейской части России, главным образом, в очагах, приуроченных к лесным
ландшафтам. Наиболее активная очаговая территория расположена в оптимуме ареала рыжей полевки - в широколиственных и хвойно-широколиственных лесах Приуралья и Среднего Поволжья (Бернштейн, 2004; Бернштейн, 2010), относящихся к Приволжскому федеральному округу.
3.2.1 ГЛПС в Центральном Черноземье
В этиологической структуре ГЛПС на большинстве административных территорий Европейской части России преобладает вирус Риита1а. Однако в последние десятилетия на территории лесостепной зоны Тульской, Рязанской областей и областей Центрального Черноземья была установлена циркуляция ранее не известного в России вируса ОоЬгауа/Ве!^ае1е. Существование таких природных очагов впервые было установлено в антропогенном ландшафте лесостепи Тульской и Рязанской областей при ретроспективном анализе зимней вспышки (130 случаев) в 1991-1992 гг. (ЬипсИа^ е1 а1.,1997). Спустя 10 лет с момента выявления первых в России случаев ГЛПС, вызванных вирусом ОоЬгауа/Ве1&ас1е, на территории Центрального ФО с интервалом в 4 года были зарегистрированы две крупные вспышки сходного заболевания, в расшифровке этиологии которых и выяснении клинико-эпидемиологических особенностей мы принимали непосредственное участие. Эти вспышки, по сравнению со вспышкой ГЛПС 1991-1992 гг. в Тульской и Рязанской областях, охватили более широкую территорию, включая 5 областей Центрального Черноземья. (Таблица 8). Так, в результате зимней 2001-2002 гг. вспышки было выявлено 211 случаев заболевания ГЛПС среди жителей Воронежской (97 больных), Липецкой (94 больных), Орловской (15 больных) областей, а в зимний период 2006-2007 гг. -609 случаев, включая Воронежскую (223 больных), Липецкую (257 больных), Тамбовскую (91 больной) и Курскую (22 больных) области. Кроме пяти областей Центрального Черноземья 71 больной ГЛПС был зарегистрирован в двух центральных областях России: 61 больной - в Тульской области зимой 2001-2002 гг. и 10 больных ГЛПС - в Рязанской области зимой 2006-2007 гг.
В результате клинико-эпидемиологических, зоологических,
эпизоотологических, вирусологических, иммунологических и молекулярно-генетических исследований были изучены структурные характеристики вновь выявленных очагов инфекции. К отличительным особенностям этих очагов можно отнести циркуляцию вируса, относящегося к генотипу "КигИпо" хантавируса ОоЬга\>а/Ве1£?ас1е и ведущую роль западного подтипа полевой мыши (Арсх^етия а^апиз а&апиз), как резервуарного хозяина этого вируса. Доказана этиологическая роль нового вируса в структуре заболеваемости ГЛПС, что указывает на эпидемиологическую значимость как вновь выделенного хантавируса, так и его основного хозяина - полевой мыши.
Вспышка ГЛПС 2006-2007 гг., по сравнению с таковой зимой 2001-2002 гг. в том же регионе, отличалась тем, что помимо более широкого распространения инфекции, была отмечена одновременная активизация как лесных, так и луго-полевых природных очагов ГЛПС. То есть, впервые был установлен факт одновременного (в один и тот же сезон года) заражения людей хантавирусами ОоЬгача/Ве^гаёе фОВ/КигШпо) и Риита1а, основными резервуарными хозяевами которых и источниками заражения людей являются полевая мышь (луго-полевые очаги) и рыжая полёвка (лесные очаги), соответственно. В результате исследования сывороток крови от 693 больных было установлено, что 87,8 % от общего количества зарегистрированных больных ГЛПС были инфицированы вирусом йОВ/Кигклпо и 12,2% - вирусом Риита1а.
Следует отметить, что за все предыдущие годы до этих вспышек, то есть с момента начала официальной регистрации Минздравом СССР заболеваемости ГЛПС в стране (1978 г.), в Воронежской, Курской, Тамбовской и Орловской областях заболеваемость носила спорадический характер в отдельные годы, а в Липецкой области случаев ГЛПС вовсе не было зарегистрировано.
В результате наших исследований по уточнению нозоареала ГЛПС территории Липецкой, Воронежской и Тамбовской областей впервые вошли в группу субъектов РФ с показателями заболеваемости ГЛПС высокой интенсивности эпидемического процесса (от 5,2 до 10 на 100 тыс. населения). Так, начиная с 2001 по 2007 гг., в Липецкой области было зарегистрировано 371
случаев заболевания ГЛПС в 14 из 18 административных районах и 2 городах областного подчинения, в Тамбовской области - 134 случая заболевания ГЛПС в 17 из 23 административных районов и 5 городах областного подчинения, в Воронежской области - 402 случая в 19 из 32 районов и г. Воронеже.
Многообразие клинических проявлений и отсутствие должного опыта у клиницистов в отношении ранее редко встречавшейся инфекции вызывали значительные трудности в дифференциальной диагностике ГЛПС. Окончательный клинический диагноз ГЛПС у подавляющего числа больных выставлялся лишь после серологической диагностики. Первичный диагноз ГЛПС в период вспышки 2006-07 гг. был поставлен в Воронежской области у 56,3%, в Липецкой области - у 77,1%, в Тамбовской области лишь у 21 % больных.
Сравнительный анализ клинического течения ГЛПС, этиологически обусловленной вирусом БОВ/КигИпо (205 больных ГЛПС-ДОБ/К из Липецкой области) и вирусом Риита1а (924 больных ГЛПС-ПУУ из Самарской области) показал преобладанием среднетяжелых форм при ГЛПС-ПУУ и относительно равномерное распределение пациентов по всем трем степеням тяжести в группе больных ГЛПС-ДОБ/К. Особенностями клинического течения ГЛПС-ДОБ/К по сравнению с ГЛПС-ПУУ являются редкое появление таких патогномоничных симптомов как жажда, нарушение зрения, субсклеральные гематомы, гиперемия лица и ротоглотки, а также полиурия. Сравнительный анализ лабораторных показателей выявил чаще встречающиеся лимфопению и сдвиг лейкоцитарной формулы влево с редким обнаружением плазматических клеток, более значительное увеличение СОЭ и менее выраженное снижение относительной плотности мочи у больных ГЛПС-ДОБ/К.
Сравнительный эпидемиологический анализ заболеваемости ГЛПС-ДОБ/К в областях Центрального Черноземья России во время вспышек в 20012002 и 2006-2007 годах и ГЛПС-ПУУ в Республике Башкортостан в 1997 г. выявил ряд различий принципиального характера. Так, 93,4% от общего числа больных ГЛПС-ДОБ/К составляли сельские жители, в то время как среди больных ГЛПС-ПУУ в Башкортостане - 31%. Заболеваемость ГЛПС-ПУУ
характеризовало постепенное нарастание с апреля по октябрь, затем снижение до конца ноября. Напротив, все больные ГЛПС-ДОБ/К регистрировались в промежутке между ноябрём и мартом с наивысшим подъемом заболеваемости в декабре (47,6%) и январе (44,9%). В очагах обоего типа чаще заболевали мужчины (70-80%), при этом преобладали лица наиболее трудоспособного возраста (от 20 до 50 лет).
Заражение больных ГЛПС-ПУУ происходило в различных условиях, однако наиболее многочисленными были заражения во время кратковременных посещений леса, чаше всего во время прогулок (22,9%), при выездах на рыбную ловлю (4,3%), охоту (3,0%). При работе в садах и на огородах, проживании на дачах заразились около трети всех заболевших. В тоже время заражения больных ГЛПС-ДОБ/К происходили, главным образом, при уходе за домашними животными (крупный рогатый скот, лошади, овцы, козы, свиньи и пр.) по месту жительства или работы, чаше всего при разборке стогов, перевозке сена, соломы и фуража, приготовлении и раздаче кормов, использовании соломы для подстилки в стойле (сушка и размельчение сена, соломы).
Анализ результатов зоологических и эпизоотологических исследований, полученных в очагах ГЛПС-ПУУ и ГЛПС-ДОБ/К в периоды эпидемических вспышек, показал, что в обоих типах очагов эпидемическому неблагополучию предшествовало увеличение численности и инфицированности хантавирусом основных хозяев - рыжей полёвки и полевой мыши, соответственно.
Не вызывает сомнения, что принципиальные различия в проявлении очагов ГЛПС-ПУУ и ГЛПС-ДОБ/К обусловлены особенностями биологии и динамики популяций резервуарных хозяев - рыжей полевки и полевой мыши. Связь эпизоотического и эпидемического процессов с видовыми и популяционными характеристиками теплокровных хозяев при отсутствии промежуточного звена (членистоногих переносчиков) благодаря респираторному пути передачи хантавирусной инфекции, а также видоспецифичности возбудителей оказывается особенно тесной. Биология грызунов-носителей определяет, в частности, характер контактов с ними населения на очаговой территории.
3.2.2 ГЛПС в субтропической зоне Краснодарского края
В результате обследования 577 зверьков 8 видов, отловленных за период работ (2000-2002 гг.) в районе Большого Сочи, было показано, что в циркуляции хантавирусов принимают участие, по крайней мере, 4 вида грызунов, а частота инфицирования грызунов хантавирусами составляла: среди кустарниковых полёвок - 18,7%, кавказских лесных мышей - 12,5%, полевых мышей - 4,6% и малых кавказских лесная мышей - 3,7%.
В результате многократного пассирования на клетках VERO-E6 образцов лёгочной ткани от 12 кавказских лесных мышей A. ponticus и от 2 кустарниковых полёвок Т. majori удалось выделить 4 хантавирусных штамма. При идентификации в перекрёстных опытах в МФА с использованием культуральных антигенов хантавирусов Puumala, Hantaan, Seoul, Dobrava/Belgrade и иммунных сывороток с антителами к этим вирусам была установлена принадлежность вновь выделенных штаммов к хантавирусу Dobrava/Belgrade.
Кроме того, РНК-изоляты были выделены из образцов лёгочной ткани от 13 из 17 исследованных особей кавказской лесной мыши, от 1 особи кустарниковой полевки, а также из лизата клеток VERO-E6, инфицированных штаммом АР-1579/Сочи-2001. Таким образом, полученные нами данные позволяют говорить об открытии уникального природного очага хантавирусной инфекции на территории Большого Сочи. К отличительным особенностям этого очага можно отнести установленный нами факт циркуляции ранее нигде не описанного генотипа «Sochi» хантавируса Dobrava/Belgrade (DOB/Sochi) и определение роли кавказской лесной мыши A. ponticus, как резервуарного хозяина этого вируса.
Предположение о возможной этиологической и эпидемиологической значимости вируса DOB/Sochi в структуре заболеваемости ГЛПС нам удалось подтвердить в результате комплексных клинико-эпидемиологических, иммунологических и вирусологических исследований материалов от больных людей.
За период с 2000 по 2013 гг. были собраны и исследованы на присутствие специфических антител к хантавирусам сыворотки крови от более 600
лихорадящих больных. В результате первичного скрининга сывороток крови непрямым МФА было выявлено 64 больных ГЛПС, этиологически обусловленной вирусом йОВ/БосЫ (ГЛПС-ДОБ/С), проживающих в 36 населённых пунктах 10 административных районов Краснодарского края, в том числе 38 больных - из 4-х районов Большого Сочи.
Не удалось установить какой-либо связи заболеваемости ГЛПС-ДОБ/С с профессиональной деятельностью больных. В районах Большого Сочи, как и в целом по Краснодарскому краю, наибольшее количество случаев ГЛПС было выявлено в октябре-ноябре. Остальные случаи, практически, равномерно, распределялись по другим месяцам. Возрастной состав больных варьировал от 7 до 60 лет. Наиболее подверженными риску заражения оказались лица возрастных групп от 18 до 29 (29,1%) и от 30 до 39 (29%). Довольно высокий процент среди заболевших ГЛПС составляли дети в возрасте до 17 лет (12,7%), включая 2-х больных в возрасте 7 лет и по 1 больному в возрасте 10, 13, 15, 16 и 17 лет. Мужчины болели в 3 раза чаще, чем женщины (76% и 24%, соответственно).
В большинстве случаев больные поступали в стационары в тяжелом состоянии. Первичный диагноз ГЛПС был поставлен лишь 6% выявленных больных, госпитализированных, нередко, не в специализированные инфекционные больницы. Больных после госпитализации вели с диагнозами различных заболеваний, включая нефрологические (острый нефрит, острый гломерулонфрит, мочекаменная болезнь, острая почечная недостаточность), респираторные (ОРВИ, ангина, бронхит, пневмония), заболевания брюшной полости (острая кишечная инфекция, гастроэнтерит, язвенная болезнь желудка, панкреатит, аппендицит), а также аднексит, лептоспироз, ККГЛ, отравление грибами, солями тяжелых металлов и лихорадка неясной этиологии. Окончательное установление клинического диагноза ГЛПС оказывалось возможным лишь после специфической диагностики, иногда посмертно.
Сравнительный анализ клинико-лабораторных данных больных ГЛПС, этиологически обусловленной возбудителями двух генотипов хантавируса ВоЬгта/Ве^гас1е фОВ/КигШо и БОВ/БоМ) из двух географически различных
регионов (Центральное Черноземье и субтропическая зона Краснодарского края) показал, что при ГЛПС-ДОБ/С реже регистрируются такие патогномоничные для ГЛПС жалобы, как нарушение зрения и жажда. У большинства больных из Сочи отмечали признаки поражения желудочно-кишечного тракта в виде болей в животе, тошноты и рвоты, сопровождавшихся нередко диареей. В 4 раза чаще, чем у больных из Липецкой области наблюдали увеличение печени, у 2-х пациентов развилась желтуха. В то же время, у этих больных значительно чаще имели место геморрагические проявления. Так, помимо субсклеральных гематом, наблюдавшихся у половины больных ГЛПС-ДОБ/С, у двух пациентов развилось желудочно-кишечное кровотечение. Возможно, эта особенность является характерной для клиники ГЛПС-ДОБ/С, если исключить возможность пропуска отдельных проявлений геморрагического синдрома местными врачами. Важной отличительной особенностью выявленных случаев ГЛПС на территории Краснодарского края была тяжесть клинического течения и высокая летальность (Рисунок 4).
Больные умирали на фоне полиорганной недостаточности (почечная, кардиоваскулярная, дыхательная недостаточность, ДВС-синдром, отек легких, отек мозга). Возможно, отсутствие должного опыта у клиницистов из Причерноморского региона в отношении редко встречавшейся прежде болезни вызывало значительные трудности в дифференциальной диагностике ГЛПС, что могло послужить основанием для допущения ошибок в лечении больных. Вместе с тем такие тяжелые, несовместимые с жизнью осложнения ГЛПС, вероятно, являются особенностью клинического течения заболевания, вызванного вирусом ИОВ/БосЫ. Следует признать, что клинические проявления ГЛПС имеют столь широкий диапазон, что в ряде случаев, при отсутствии специфической диагностики, даже для опытного врача клинический диагноз ГЛПС будет оставаться сомнительным.
Тяжесть клинического течения
1 О/
Г1УУ ДОБ-A« ДОБ-Ар
Лёгкая ■ Средне-тяжелая ■ Тяжёлая
Летальность
0,6% 0,3%
ПУУ ДОБ-Аа ДОБ/Ар
Возрастной состав больных
20%
12% 1 10% ^
Я-
Í7
0-17 18-2« 30-М 40 - 49
Рисунок 4 - Сравнительная тяжесть клинического течения и летальность при хантавирусной инфекции, вызванной хантавирусами Puumala (ПУУ), Dobrava/Kurkino (ДОБ/Аа), Dobrava/Sochi (ДОБ/Ар).
Результаты анализа структуры заболеваемости ГЛПС в России свидетельствуют об этиологической роли 5 хантавирусов. 97,7% всех случаев ГЛПС в России этиологически обусловлены вирусом Puumala и, только 2,3% - другими вирусами: Hantaan, Amur и Seoul (все вместе -1,5%) и двумя генотипами ("Kurkino" и "Sochi"') хантавируса Dobrava/Belgrade (0,8%), что указывает на ведущую этиологическую роль хантавируса Puumala в структуре заболеваемости ГЛПС в России.
4 РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ИЗГОТОВЛЕНИЯ И МЕТОДОВ КОНТРОЛЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ГЛПС
При изготовлении вакцины ГЛПС в качестве субстрата для размножения штаммов хантавирусов Dobrava/Belgrade (генотип Kurkino) и Puumala использовали линию перевиваемых клеток почек зеленой мартышки VERO,
Первичный диагноз
ГЛПС 6%
Другие 18%
полученную из ВОЗ (WHO Vero cell bank from ECACC, Accession number 991042). Использование этой линии клеток для производства инактивированной вакцины ГЛПС стало возможным в результате успешной адаптации штаммов ТКД/Уфа-97 и ТЕА/Липецк-06, выделенных из крови больных ГЛПС, к размножению в этой культуре. Посевные штаммы были охарактеризованы по всем требованиям, предъявляемым к аналогичным препаратам, включая тесты на специфическую идентичность, стерильность, отсутствие микоплазм, клеточной ДНК и т.д.
В результате изучения кинетики инактивации было показано, во-первых, отсутствие существенной разницы значений временных параметров инактивации для хантавирусных штаммов при обработке одними и теми же концентрациями формалина. Как и в случае с выбором температурного режима, руководствуясь желанием избежать повреждений структуры белков и сохранения максимальной антигенной активности инактивированного продукта, было принято решение об использовании в дальнейшем 0,025 % раствора формалина. С учетом запаса надежности, предложенная схема инактивирования инфекционной активности хантавирусов включает экспозицию вируссодержащего субстрата при температуре 6±2 °С в присутствии 0,025 % раствора формалина в течении 30 суток.
Концентрирование вирусов проводили методом ультрафильтрации в тангенциальном потоке. На первом этапе очистки балластные компоненты удаляли с помощью осветляющей фильтрации, используя фильтр Poly Pro XL (CUNO) с размерами пор и площади поверхности 0.6 мкм и 0,14 м2, соответственно. Второй этап -гель-фильтрация с использованием Sepharose 6 FF и хроматографа АКТА purifier (GE Healthcare). Для оптимизации процессов, осуществляемых на каждом из этих этапов, были изучены и определены параметры взаимодействия вируса с разными пористыми сорбентами. В результате проведенных исследований отобрана гельфильтрационная схема очистки вируса, приводящая к получению высокоактивных препаратов, удовлетворяющих требованиям к чистоте конечного продукта.
Из инактивированной формалином, сконцентрированной и очищенной антигенсодержащей культуральной жидкости после стерилизующей фильтрации через фильтр Миллипор (0,22 мкм) получали моновалентные вакцинные препараты,
представляющие собой инактивированные хантавирусы DOB/Kurkino и Puumala. (Таблица 2).
Таблица 2 Характеристика вакцинного препарата на технологических этапах
Стадии очистки Объем (л) Титр вируса lg ФОЕ/мл ИФА (N белок) 1о&/ 0.05 мл ИФА (Gn/Gc белок) \o%J 0.05 мл
Сбор КЖ 25 5,8 1024 512
Фильтрация 25 5,6 512 256
Концентрирование 0,35 7,3 8192 2048
Гельфильтрация 0,7 6,9 4096 1024
Инактивирование 0,7 0 4096 1024
Дня приготовления комбинированной вакцины ГЛПС определяли антигенную активность и рассчитывали рабочую дозу (РД) полуфабрикатов моновалентных вакцин. В соответствии с предварительно установленным соотношением зависимости между количеством содержащегося в вакцине специфического антигена и её иммуногенной активностью минимальная иммунизирующая доза (МИД), то есть максимальное разведение исходного препарата, обеспечивающее продукцию вируснейтрализующих антител у 50% животных, соответствовала 8 антигенным единицам (АЕ). Разведение исходного препарата, содержащего 4 МИД или 32 АЕ, принимали за 1 РД моновалентной вакцины.
После сведения равных объёмов моновалентных препаратов в разведениях, содержащих по 1 РД для каждой из моновакцин, и добавления адсорбента-гидроокиси алюминия (конечная концентрация 1,5±0,5 мг/мл) получали готовую комбинированную бивалентную вакцину против ГЛПС.
Специфическая активность инакгиврованной комбинированной вакцины против ГЛПС характеризуется по иммуногенности на мышах Balb/c, то есть, по способности препарата индуцировать у животных продукцию специфических вируснейтрализующих антител к штаммам хантавирусов DOB/Kurkino и Puumala, используя метод ФОЕ (Таблица 3).
Вакцинные препараты у 100 процентов животных индуцировали анти-вирусные антитела в довольно высоких титрах. Средний арифметический титр вируснейтрализующих шт-Риита1а и шт-ООВ/КиШпа антител после иммунизации мышей Ва1Ь/с адсорбированной вакцины по результатам испытания 3-х серий вакцины составил 1:90 и 1:70, соответственно.
Таблица 3 Контроль иммуногенности вакцинного препарата
Разведение вакцины Титр антител к вирусам
PUUMALA DQB/Kurkino
ИФА РН/ФОЕ ИФА РН/ФОЕ
+/п Средний титр +/п Средний титр +/п Средний титр +/п Средний титр
н/р 8/8 2389 8/8 136 8/8 1792 8/8 120
1/2 7/7 1152 7/7 54.8 7/7 1060 7/7 73.1
1/4 8/8 896 8/8 26.3 8/8 416 8/8 36
1/8 8/8 352 7/8 18.75 8/8 192 7/8 50.3
1/16 6/8 170 4/8 10 5/8 90 4/8 40
1/32 4/8 96 2/8 8 4/8 36 2/8 16
1/64 1/8 64 1/8 8 1/8 16 1/8 16
1/128 1/8 16 0/8 <8 0/8 <16 0/8 <16
1/256 0/8 <16 0/8 <8 0/8 <16 0/8 <16
Таким образом, из приведенных выше данных следует, что разработанные препараты комбинированной бивалентной вакцины ГЛПС обладают высокой иммуногенной активностью. Остаётся невыясненным, какова же реальная доза вакцины, способная защитить человека от инфекции. По литературным данным, производимая в Китае вакцина против хантавируса Hantaan, вызывающая при иммунизации кроликов продукцию специфических вируснейтрализующих антител с титрами 1:10, способна оказать 100% протективный эффект при 3-х кратной вакцинации людей.
Лабораторные серии вакцины «Комби-ГЛПС-Вак» успешно прошли тестирование в ГИСК им. Л.А.Тарасевича с использованием регламентированных методов контроля медицинских иммунологических препаратов, вводимых людям.
ВЫВОДЫ
1. Разработан комплекс методов, наиболее эффективных и значимых дня диагностики, изучения этиологии и эпидемиологических закономерностей в разных частях ареала ГЛПС, а также мониторинга хангавирусных инфекций в природе. Этот комплекс включает 1) вирусологические методы; 2) непрямой МФА на основе культуралыюго антигена - для выявления хангавирусных антител у людей и у животных; 3) прямой метод ИФА - для выявления хантавирусного антигена в органах мелких млекопитающих и секционных материалах людей; 4) непрямой метод ИФА с использованием рекомбинантных антигенов хантавирусов (выявление IgM и IgG антител к хантавирусам) - для серодиагностики ГЛПС. Помимо этого, две ИФА тест-системы, сконструированные на основе моноклональных антител, используются для определения нуклеокапсидного и поверхностного белков хантавирусов в инактивированных вакцинных препаратах против ГЛПС.
2. Выделены и идентифицированы 76 штаммов и более 70 хантавирусов по результатам выявления специфической РНК от 9 видов грызунов и одного вида птиц, а также из крови больных и секционных материалов от людей; определено их таксономическое положение в составе рода Hantavirus. Изолированные штаммы вирусов послужили основой дня изучения хангавирусологами в нашей стране и за рубежом филогении хантавирусов, а также их коэволюции с резервуарным хозяином.
3. Выявлены новые виды хантавирусов -"Khabarovsk' (изолирован от дальневосточной полёвки, Microtus fortis),' 'Taimyr- Topogrqfo\?' (от сибирского лемминга, Lemmas sibiricus), новый вирус "Adler" (от кустарниковой полёвки, Microtus majori), классифицированный как геноварианг вируса Тула, а также два новых генотипа хангавируса Dobrava - "DOB-Sochf' (штаммы изолированы от кавказской лесной мыши, Apodemus ponticus и из крови больной ГЛПС) и "DOB-Kurkino" (штаммы изолированы от западного подвида полевой мыши, Apodemus agrarius agrarius и из крови больного ГЛПС); экспериментально обосновано и опубликовано [Arch. Virol., 2013] предложение в Международный комитет таксономии вирусов (ICTV) о выделении 4-х самостоятельных генотипов хангавируса Dobrava/Belgrade. DOB/Dobrava, DOB/Kurttino, DOB/Sochi, DOB/Saarema (ранее DOB/Af, DOB/Aa, DOB/Ap, Saarema).
4. Выявлены и изучены ранее неизвестные природные очага ГЛПС в лесостепной зоне Центрально-Черноземных областей России и в субтропической зоне Краснодарского края, где циркулируют разные генотипы вируса Dobraval'Belgrade: DOB/ Kurkino и DOB/Sochi, основные хозяева которых попевая и кавказская лесная мыши, соответственно.
5. Установлена высокая вирулентность генотипа DOB/Sochi, в отличие от генотипа DOB/KuHdno и вируса Puumala, а также выявлены клинико-эпидемиологические особенности ГЛПС, этиологически обусловленной этими возбудителями. Доказано существование стертых и атипичных форм клинического течения ГЛПС по результатам серологического обследования остро лихорадящих больных.
6. Уточнен нозоареал ГЛПС по результатам серо-эпидемиологических исследований населения, проживающего в различных регионах России. Анализ иммунной структуры населения по отношению к хангавирусам позволяет выделить группы повышенного риска заболевания ГЛПС, что может служить основой формирования контингентов лиц, подлежащих профилактической иммунизации и определит рациональный порядок ее проведения.
7. Разработаны научные основы технологии изготовления и контроля двух диагностических препаратов: «Диагносгикум геморрагической лихорадки с почечным синдромом культуральный, поливалентный для непрямого метода иммунофлюоресценции» и «Иммуноферментная тест-система «Хантагносг» для определения антигенов хантавирусов»; налажен их серийный промышленный выпуск на базе ФГУП «ПИПВЭ им .М.П.Чумакова». Оба препарата внедрены в практику здравоохранения, что позволило существенно повысить эффективность диагностики ГЛПС, а также своевременно прогнозировать эпизоотическую и эпидемическую ситуацию в очагах инфекции с цепью проведения направленных профилактических мероприятий.
8. Разработаны основные биотехнологические параметры конструирования вакцины против ГЛПС. Разработаны методы кошроля безопасности, специфической антигенной и иммуногенной активности вакцины. Изготовлены лабораторные серии вакцины на основе вирусов Пуумала и Добрава, которые успешно прошли регламентированные доклинические испытания на соответствие требованиям, предъявляемым к медицинским иммунобиологическим препаратам, вводимым людям.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАНЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Ткаченко Е.А. Усовершенствование лабораторной диагностики геморрагической лихорадки с почечным синдромом / Е.А. Ткаченко, М.А. Донец, Т.К. Дзагурова, А.П. Иванов, Г.В. Резапкин, Е.В. Лещинская, A.A. Иванова, О.В. Стадухин, Н.М. Мустафин, А.Г. Степаненко, Т.И. Савинова // Вопросы вирусологии. -1981. - №5. - С. 618-621.
2. Дэагурова Т.К. Серологическое обследование бальных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом в Европейской части СССР / Т.К. Дзагурова, Е.В. Лещинская, ЕА. Ткаченко, ЮЛ. Мясников, И.М. Загидуллин, Т.А Гасанова, Г.М. Устюгова, Г.В. Резапкин, А.Г. Степаненко, АЛ. Иванова // Вопросы вирусологии. - 1983- № 6. - С. 676-680.
3. Мясников ЮЛ. Естественная иммунная прослойка населения Башкирской АССР к геморрагической лихорадкой с почечным синдромом / ЮЛ. Мясников, ЕЛ. Ткаченко, Г.В. Резапкин, Т.К. Дзагурова, A.A. Уразбаева, Р.Г. Нургалиева, А.Г. Степаненко // Вопросы вирусологии. - 1983. - № 5. - С. 573-577.
4. Рыльцева Е.В. Некоторые характеристики эпизоотического процесса у мелких млекопитающих в природных очагах ГЛПС, отловленных в окрестностях Уфы / ЕВ. Рыльцева, Е.А.Ткаченко, Донец М.А., Иванов А.П., Т.К. Дзагурова, Н.М. Мустафин, А.Г. Степаненко // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 1983. - № 3. - С. 15-18.
5. Башкирцев В.Н. Выделение штаммов вируса геморрагической лихорадки с почечным синдромом в культуре клеток / В.Н. Башкирцев, Е.А. Ткаченко, Т.К. Дзагурова, Е.В. Рыльцева // Вопросы вирусологии. - 1984. - № 4. - С. 497-502.
6. Гайдамович С.Я. Реакция непрямой гемагглютинации для индикации вируса ГЛПС и лабораторной диагностики заболевания / СЛ. Гайдамович, ГЛ. Клисенко, Е.А Ткаченко., Т.К. Дзагурова, Г.В. Резапкин / Вопросы вирусологии. - 1984. - №1. - С. 8285.
7. Дэагурова Т.К. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом в Пензенской области / Т.К. Дмгурова, К.И. Потрашкова, Е.А. Ткаченко, Щ.Ф. Брызгачева, Г.В. Резапкин, А.П. Иванов, В.Т. Клечина, A.B. Агафонов, Т.И. Климова, В.Д. Кандыбин, М.Г. Фролова // Вопросы вирусологии. - 1985.-№2.-С. 192-196.
8. Мясников Ю.А. Обнаружение природных очагов геморрагической лихорадки с почечным синдромом на территории Коми АССР / Ю.А. Мясников, Е.В. Рыльцева, Е.А. Ткаченко, А.П. Иванов, Т.К. Дэагурова, Г.В. Резапкин, ЕЕ. Фадеев, А.Г. Фаршатов, Н.М. Сафонова. // Вопросы вирусологии. - 1985. - № 3. - С. 354-357.
9. Мясников Ю.А. О сроках сохранения антител у реконвалесцентов ГЛПС в европейских очагах инфекции / Ю.А. Мясников, Т.К. Дэагурова, Е.А. Ткаченко, Г.В. Резапкин, P.A. Савельева, А.Г. Степаненко, Р. Г. Нургалеева, ВЛ. Игнатов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1986. - № 6. - С. 78-80.
10. Слонова P.A. Выделение штаммов вируса ГЛПС на культуре клеток от бальных людей и грызунов / P.A. Слонова, Т.И. Астахова, Е.А. Ткаченко, Т.К. Дзагурова, О.В. Павленко,
A.Н. Бондаренко, М.Е. Косой, Е.Л. Кушнарев // Вопросы вирусологии. - 1986. - №2. - С. 180-183.
11. Астахова Т.И. Результаты изучения гуморального иммунитета при геморрагической лихорадке с почечным синдромом в Приморском крае / Т.И. Астахова, P.A. Слонова, Е.А. Ткаченко, Г.В. Резапкин, Т.К. Дэагурова, И .С. Кислицына, В.М. Шакин, A.B. Ткачев // Вопросы вирусологии. - 1986. - №2. - С. 183-186.
12. Иванидэе Э.А. Обнаружение природных очагов геморрагической лихорадки с почечным синдромом в Грузинской ССР / Э.А Иванидзе, Л.А. Сакварелццэе, Е.А. Ткаченко, Г.В. Резапкин, Т.К. Дэагурова, Е.В. Рыльцева, И.О. Барнабишвили, Ш.А. Цанава, П.О. Гамцемлидзе, С.Ш. Каджая // Вопросы вирусологии. - 1987. - № 5. - С. 607-610.
13. Дзагурова Т.К. Эффективность применения культуральных антигенов для серодиагностики ГЛПС с помощью метода иммунофлюоресценции / Дэагурова Т.К., Е.А. Ткаченко, ВА. Петров//Вопросы вирусологии.-1988.-№1.-С. 71-75.
14. Слонова РА. Сероткпы Хантавируса, циркулирующие в очагах дальневосточного региона / P.A. Слонова, Е.А. Ткаченко, Т.И. Астахова, Т.К. Дэагурова // Вопросы вирусологии. - 1990.-№ 5. - С. 391-393.
15. Иванов Л.И. Клинико-иммунологическая характеристика заболеваемости ГЛПС в Хабаровском крае / Л.И. Иванов, Е.А. Ткаченко, Н.И. Здановская, Т.К. Дэагурова, А.Г. Ковальский, В.И. Резник // Вопросы вирусологии. - 1990. - № 1. - С. 74-76.
16. Лукашевич И.С. Вирусспецифические белки и РНК вируса ГЛПС / И.С. Лукашевич, Е.А. Ткаченко, H.H. Лемешко, Г.В. Резапкин, Т.А. Стельмах, АЛ. Пашков, A.C. Владыхо, Т.К. Дзагурова, Т.В. Школина, Е. П. Счесленок // Вопросы вирусологии. - 1990. - №1. -С. 38-42.
17. Деконенко А.Е. Генетическая дифференциация хантавирусов с помощью полимеразной цепной реакции и секвенирования / А.Е. Деконенко, Е.А Ткаченко, Г.Ю. Липская, Т.К. Дэагурова, Л.И. Иванов, P.A. Слонова, СЛ. Маркешин, Э.А. Иванидзе, Т.И. Шуткова,
B.В. Якименко, В. Чижиков // Вопросы вирусологии. - 1996. - № 1. - С. 24-27.
18. Иванов А.П. Дот-блот анализ в лабораторной диагностике ГЛПС / А.П. Иванов, Т.К. Дзагурова, Е.А. Ткаченко // Вопросы вирусологии. - 1996. - № 1. - С. 6-8.
19. Иванов А.П. Поликлональная иммуноферментная система для определения антигенов хантавирусов: оценка специфичности с помощью моноклональных антител и полимеразной цепной реакции / А.П. Иванов, А.Е. Деконенко, Т.М. Шуткова, Т.К. Дзагурова, Е.А. Ткаченко // Вопросы вирусологии. -1996. - № 3. - С. 110-112.
20. Дэагурова Т.К. Антигенная дифференциация хантавирусов с помощью моноклональных антител / Т.К. Дэагурова, Е.А. Ткаченко, P.A. Слонова, Л.И. Иванов, Э.А. Иванидзе,
C.Я. Маркешин, А.Е. Деконенко, Б. Никлассон, А. Лундквист // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 1996. - №3. - С. 47-52.
21. Шервали В.И. Выявление природного очага геморрагической лихорадки с почечным синдромом в Егорьевском районе Московской области / В.И. Шервали, П.М. Барановский, Н.В. Варданян, Е.И. Николаева, Т.К. Дзагурова, А.П. Иванов, А.Е.
Малкин, Е.А. Ткаченко // Военно-медицинский журнал. - 1996. - №3. - С. 55.
22. Иванов А.П. Система иммуноферментного анализа с использованием биотинилированньк монокпо-нальных антител для тонирования антигенов хантавирусов / А.П. Иванов, Т.К. Дшгурова, А.Е. Деконенко, П.М. Барановский, В.И. Шервали, Е.А. Ткаченко // Вопросы вирусологии. - 1996. - № 6. - С. 263-265.
23. Нургалеева Р.Г. Эпидемиологический анализ заболеваемости ГЛПС в Республике Башкортостан в 1997 году / Р.Г. Нургалеева, Е.А. Ткаченко, А.Г. Степаненко, Н.М. Мустафин, С.Г. Киреев, Т.К. Дзагурова, А.Е. Деконенко, JI.A. Кпимчук, Г.Д. Минин // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1999. - № 6. - С. 45-49.
24. Иванов А.П. Анализ вспышки ГЛПС в Егорьевском районе Московской области / А.П. Иванов, А.Е. Деконенко, Т.К. Дзагурова, А.Е. Малкин, В.И. Шерварли, П. М. Барановский, Н.В. Варданян, В.Е. Буланов, Е. И. Николаева, Е. А. Ткаченко // Вопросы вирусологии. - 2000. - № 4. - С. 33-36.
25. Якименко В.В. О распространении хантавирусов в Западной Сибири / В.В. Якименко, А.Е. Деконенко, Якименко В. В., А.Е. Деконенко, М.Г. Малькова, И.В. Кузьмин, А.К. Танцев, Т.К. Дзшурова, Е.А. Ткаченко II Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2000. - № 3. - С. 21-28.
26. Иванов Л.И. Адаптационная способность хантавирусов при изоляции на культуре клеток VERO-E6 в зависимости от вида экологического хозяина / Л.И. Иванов, Н.И. Здановская, Т.К. Дзагурова, Е.А. Ткаченко // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. -2000,-№4.-С. 22-25.
27. Морозов В.Г. Эпидемиологические и мслекулярно-генетические характеристики ГЛПС в Самарской области / В.Г. Морозов, Г.Д. Коробов, Е.А. Ткаченко, А.П. Иванов, Т.К. Дзагурова, А.Е. Деконенко, В.И. Рощупкин, В.Н. Верховцев, A.M. Спиридонов, A.A. Суэдальцев, М.Д. Цайг, С.Н. Белов, П.Е. Голов // Казанский Медицинский Журнал. -
2002,- T.LXXXm.-№2.-C. 151-155.
28. Ткаченко Е.А Хантавирусы / Е.А. Ткаченко, А.Е. Деконенко, Ф.П. Филатов, Т.К. Дзагурова, С.Г. Дроздов // Дальневосточный медицинский журнал. - 2003. - №3. - С. 50-54.
29. Морозов В.Г. Дифференциальная диагностика ГЛПС на основе иммуноферментного анализа с использованием рекомбинантных антигенов и непрямого метода флюоресцирующих антител / В.Г. Морозов, А.Е. Деконенко, А.П. Иванов, Т.К. Дзагурова, В.И. Рощупкин, Е.А. Ткаченко // Дальневосточный медицинский журнал. -
2003.-№3,-С. 105-106.
30. Морозов В.Г. Концентрация специфических иммуноглобулинов класса М в сыворотке крови больных ГЛПС в зависимости от сроков и характера течения болезни / В.Г. Морозов, А.П. Иванов, А.Е. Деконенко, Т.К. Дзагурова, В.И. Рощупкин, Е.А. Ткаченко // Дальневосточный медицинский журнал. - 2003. - №3. - С. 107.
31. Морозов В.Г. Генетическая идентификация хантавирусов в крови больных ГЛПС / В.Г. Морозов, С.П. Морзунов, С.Ф. Хайбулина, В.И. Рощупкин, Т.К. Дзагурова, А.П.
Иванов, Б.А. Ткаченко // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2004. - № 2. - С. 43-47.
32. Ткаченко Е.А. Эпизоотологические и вирусологические особенности природного очага хантавирусной инфекции в субтропической зоне Краснодарского края / Е.А. Ткаченко, Н.М. Окулова, Ю.В. Юничева, С.П. Морзунов, С.Ф. Хайбулина, Т.Е. Рябова, JI.E. Василенко, В.Н. Башкирцев, Т.К. Дзагурова, Е.А. Горбачкова, Н.С. Седова, А.Е. Балакирев, А.Е. Деконенко, С.Г. Дроздов // Вопросы вирусологии. - 2005. - №3. - С. 14-19.
33. Ющук Н.Д. Поражение нервной системы при геморрагической лихорадке с почечным синдромом / НД. Ющук, Е.П. Деконенко, Г.Н. Кареткина, М.Г. Кулагина, С.А. Макарова, Ф.В. Румо, З.Е. Бакулина, Т.К. Дзагурова, А.И. Берко, C.B. Шагильдян, Е.А.Ткаченко. // Клиническая медицина - 2005. - №12. - С. 65-68.
34. Ткаченко Е.А. Сравнительный анализ эпидемических вспышек геморрагической лихорадки с почечным синдромом, вызванных вирусами Пуумала и Добрава/Белград / Е.А. Ткаченко, АД. Бернпггейн, Т.К. Дзагурова, В.Н. Башкирцев, Н.С. Седова, А.Е. Малкин, Е.А. Горбачкова, А.Е. Балакирев, С.Г. Дроздов, И.В. Сикора, И.А. Щукина, С.И. Савельев, И.С. Богатова, Д.В. Транквилевский, М.И. Чубирко, Е.С. Торубарова, Р.Г. Нургалеева, Г.Д. Минин, И.М. Загидуллин, A.A. Иванова, В.И. Жуков, С.Г. Морозов, С.Ф. Хайбулина, С.П. Морзунов // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. - 2005. -№4. - С. 28-34.
35. Деконенко Е.П. Синдром Гийена-Барре при геморрагической лихорадке с почечным синдромом / Е.П. Деконенко, Г.И. Кареткина, М.Г. Кулагина, З.Е. Бакулина, Т.К. Дзагурова, А.И. Берко, C.B. Шагильдян, Н.Д. Ющук, Е.А. Ткаченко // Неврологический журнал. - 2006. - №1. - С. 9-12.
36. Ткаченко Е.А. Актуальные проблемы современного этапа изучения ГЛПС в России / Е.А. Ткаченко, АД. Бернпггейн, Т.К. Дзагурова, H.A. Коротана // Дезинфекционное дело. - 2007. - №4. - С. 26-33.
37. Окулова Н.М. Горные и степные очаги хантавирусов в Краснодарском крае и республике Адыгея / Н.М. Окулова, Ю.В. Юничева, Т.К. Дзагурова, H.A. Коротина, Т.Е. Рябова, Н.С. Седова, J1.E. Василенко, A.A. Смирнов, М.И. Баскевич, А.Х. Агиров, Е.А. Ткаченко //Дальневосточный журнал инфекционной патологии. - 2008. - №13. - С. 179180.
38. Ткаченко Е.А. Особенности геморрагической лихорадки с почечным синдромом, вызываемой генетическими подтипами вируса Добрава/Белград в России / Е.А. Ткаченко, Т.К. Дзагурова, Ю.В. Юничева, В.Г. Морозов, Г.П. Слюсарева, Н.С. Седова, A.A. Смирнов, H.A. Коротина, Б. Клемпа, Д. Крюгер // Тихоокеанский Медицинский Журнал. -2008. - №2. - С. 10-14.
39. Дзагурова Т.К. Обнаружение и клинико-этиологическая характеристика ГЛПС в субтропической зоне Краснодарского края / TJC. Дзагурова, Е.А. Ткаченко, Ю.В. Юничева, В.Г. Морозов, А.Ф. Брюханов, В.Н. Башкирцев, Н.С. Седова, Б. Клемпа, Д.
Крюгер // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2008. - №1. -С. 12-16.
40. Ткаченко Е.А. Хантавирусы: экология, молекулярная биология, морфология, патогенез и диагностика хантавирусных инфекций / Е.А. Ткаченко, Т.К. Дэагурова, П.Е. Ткаченко И Молекулярная медицина. - 2009. - №5. - С. 36-41.
41. Морозов В.Г. Обнаружение антител к хантавирусу у представителя отряда рукокрылых нетопыря средиземноморского (Pipistrellus kuhlii) на территории природного очага геморрагической лихорадки с почечным синдромом / В.Г. Морозов, С.И. Коломинов, В.П. Вехник, Т.К. Дэагурова, Ю.П. Краснобаев. И Дезинфекционное дело. - 2009. - №4. -С. 89-93.
42. Бернштейн А.Д. Особенности природной очаговости хантавирусных зоонозов / А.Д. Бернштейн, И.Н. Гавриловская, Н.С. Алехина, Т.К. Дэагурова, Е.А. Ткаченко // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. - 2010. - №2. - С. 5-13.
43. Транквилевский Д. В. Многолетняя динамика численности и видовой состав мелких млекопитающих в открытых лугополевых стациях Воронежской области и изменение эпизоотологической и эпидемиологической ситуации в очагах зоонозов / Д. В. Транквилевский, С.О. Стрыгина, A.B. Кутузов, Ю.О. Бахметьева, О.В. Трегубов, И.В. Родина, А. Д. Бернштейн, H.A. Коротина, Т.К. Дэагурова, Ю.И. Стёпкин, М.И. Чубирко, Е.А. Ткаченко. // Дезинфекционное дело. - 2011. - № 1. - С. 48-57.
44. Мухаметдинова Г.А. Клинико-эпидемиалогическая характеристика геморрагической лихорадки с почечным синдромом в эндемичном регионе / Г.А. Мухаметдинова, P.M. Фазлыева, В.Х. Мустафина, Т.К. Дэагурова // Эпидемиология и инфекционные болезни. -2011.-№1.-С. 41-44.
45. Мутных Е.С. Эпидемические, эпизоотологические и этиологические особенности вспышки геморрагической лихорадки с почечным синдромом в Тамбовской области в 2006-2007 гг. / ЕС. Мутных, Т.К. Дэагурова, А.Д. Бернштейн, ЕВ. Калинкина, H.A. Коротина, Н.С. Апекина, С.Е. Соцкова, Г.А. Толстова, А.П. Суворин, Е.А.Ткаченко. // Вопросы вирусологии. - 2011. - №6. - С. 41 -47.
46. Ткаченко Е.А. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом в России - проблема XXI века / Е.А. Ткаченко, Т.К. Дэагурова, А.Д. Бернштейн, Н.М. Окулова, H.A. Коротина, Д.В. Транквилевский, В.Г. Морозов, Ю.В. Юничева, Д.Л. Завора, М.В. Баловнева, С.Е. Соцкова, Е.С. Мутных, М.С. Смирнова, O.A. Леонович, А.Б. Шевелёв, Г.А. Малкин // Вестник Российской академии естественных наук. - 2012. - №1. - С. 4854.
47. Транквилевский Д.В. Об активности очагов геморрагической лихорадки с почечным синдромом в Воронежской области и прогнозировании заболеваемости этой инфекцией перед последней вспышкой 2006 года / Д.В. Транквилевский, Ю.О. Бахметьева, Т.К. Дэагурова, М.И. Чубирко, Е.А. Ткаченко // Здоровье населения и среда обитания. -2012.-№5.-С. 35-38.
48. Ткаченко Е.А. Актуальные проблемы современного этапа изучения геморрагической
лихорадки с почечным синдромом в России / Е.А. Ткаченко, А.Д. Бернштейн, Т.К. Дшгурова, В.Г. Морозов, P.A. Слонова, Л.И. Иванов, Д.В. Транквилевский, Д. Крюгер // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2013. - №1. - С. 51-58.
49. ДзагуроваТ.К. Разработка иммуноферментной тест-системы на основе моноклональных антител для определения специфической активности вакцины против геморрагической лихорадки с почечным синдромом / Т.К. Дзагурова, О.Н. Солопова, П.Г. Свешников,
H.A. Корогина, М.В. Баловнева, O.A. Леонович, Н.Е. Варламов, Г.А. Мапкин,С.Е. Соцкова, Е.А. Ткаченко // Вопросы вирусологии. - 2013. - №1. - С. 40-44.
50. Tkachenko Е.А. Immunosorbent assay for diagnosis of HFRS / E.A. Tkachenko, A.P. Ivanov, Т.К. Dzagurova, M.A. Donets, G.V. Rezapkin, E.V. Leshchinskaya, I.M. Zagidullin, A.A. Ivanova, N.M. Mustafin, T.I. Savinova // The Lancet. - 1981. - Vol. 2 (8240). - P. 257-258.
51. Tkachenko E.A. Serotypes of HFRS virus in East European and Far Eastern USSR / E.A. Tkachenko, M.A. Donets, G.V. Rezapkin, TJC Dzagurova, A. P. Ivanov, E.V. Leshchinskaya,
I. Reshetnikov, S.G. Drozdov, R.A. Slcmova, G.P. Somov // The Lancet - 1982. - Vol. 10. - P. 863.
52. Tkachenko E.A. Serological diagnosis of HFRS in European region of USSR / E.A. Tkachenko, Т.К. Dzagurova, E.V. Leshchinskaya. I.M. Zagidullin, I.M. Ustjugova, T.A. Gasanova, G.V. Rezapkin, J.A. Miasnikov//The Lancet - 1982. - Vol.18. - P. 1407.
53. Tkachenko E.A. Isolation in VERO-E6 cells of Hantavirus from Cl.glareolus captured in the Bashkiria area of the USSR / E.A. Tkachenko, V.N. Bashkiitsev, G. Van der Green, Т.К. Dzagurova, A.P. Ivanov, E.V. Ryltseva // Annales de la Société belge de médecine tropicale. -1984. - Vol. 64. - P. 425-426.
54. Danes L. Detection of HFRS causative agent in small mammals and antibodies in human in Czechoslovakia / L. Danes, E.A. Tkachenko, A.P. Ivanov, Lim D., G.B. Rezapkin, Т.К. Dzagurova // Journal of hygiene, epidemiology, microbiology, and immunology. - 1986. Vol. 30. No. l.-P. 79-85.
55. Ivanov A.P. Enzyme immuno assay for the detection of virus specific Ig G and Ig M antibody in patients with hemorrhagic fever with renal syndrome / A.P. Ivanov, E.A. Tkachenko, V.A. Petrov, A.J. Pashkov, Т.К. Dzagurova, T.P. Vladimirova, G.M. Voronkova, G. Van der Groen // Archives of virology. - 1988. - Vol. 100 - P. 1 -7.
56. Leschinskaya E.V. Acute hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) in Austria / E.V. Leschinskaya, E.A. Tkachenko, Т.К. Dzagurova, S.G. Drozdov// Acta virologica. - 1991. -Vol. 35. - P. 303.
57. Pejcoch M. Hantaviruses in small wild living mammals in Czechoslovakia. Results of a 19831989 study / M. Pejcoch, Z. Hubalek, E.A. Tkachenko, Т.К. Dzagurova, A.P. Ivanov, E. Svandova // Journal of hygiene, epidemiology, microbiology, and immunology. - 1991. - Vol. 35(3).-P. 281-288.
58. Danes L. Anti-hantavirus antibodies in human sera in Czechoslovakia / L. Danes, E. Pavlickova, J. Kobzik, Т.К. Dzagurova, A. Dankova, M. Cech, E.A. Tkachenko, Z. Sebek, J. Svejda // Journal of hygiene, epidemiology, microbiology, and immunology. - 1992. - Vol. 36 (1). - p.
55-61 .IF-)
59. Slonova R.A. Hantavirus isolation from birds / R.A. Slonova, E.A. Tkachenko, E.L. Kushnarev, T.K. Dzagurova, T.I. Astakova // Acta virologica- 1992. - Vol. 36. - P. 493.
60. Niklasson B. An epidemiological study of hemorrhagic fever with renal syndrome in Bashkortostan (Russia) and Sweden / B. Niklasson, B. Homfeldt, M. Mullaart, B. Settergren, E. Tkachenko, Yu. Myasnikov, E. Ryltceva, E. Leschinskaya, A. Malkin, T. Dzagurova // The American journal of tropical medicine and hygiene. - 1993. - Vol. 48(5). - P.670-675.
61. Chu Y.K. Study on Ecology and Etiologic Agents of Hemorrhagic fever with Renal Syndrome II. Comparison of Hantavirus isolates from world-wide geographical distribution by reverse transcriptase-polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism / Y.K. Chu, LJ. Baek, C.Y. Kang, E.A. Tkachenko, T.K. Dzagurova, S.G. Drozdov, Y.J. Lee, H.W. Lee // The Journal of Korean Society for Microbiology. - 1994. - Vol.29. -No.l.-P. 97-108.
62. Horling J. Detection and subsequent sequencing of Puumala virus from human specimens by PCR / J. Horling, A. Lundkvist, K. Pereson, M. Mullart, T. Dzagurova, A. Dekonenko, E. Tkachenko, B. Niklasson // Journal of clinical microbiology. - 1995. - Vol. 33. - No.2. - P. 277-282.
63. Dzagurova T. Antigenic relationships of hantavirus strains analysed by monoclonal antibodies / T. Dzagurova, E. Tkachenko, R. Slonova, L. Ivanov, E. Ivanidze, S. Markeshin, A. Dekonenko, B. Niklasson, A. Lundkvist // Archive Virology. - 1995. - Vol.140. - P. 17631773.
64. Horling J. Khabarovsk virus: a phylogenetically and serologically distinct Hantavirus isolated from Microtus fortis trapped in far-east Russia / J. Horling, V. Chizhikov, A. Lundkvist, Jonsson M., L. Ivanov, A. Dekonenko, B. Niklasson, T. Dzagurova, C. Peters, E. Tkachenko, S. Nichol // Journal of General Virology. - 1996. - Vol.77. - P. 687-694.
65. Dekonenko A. Genetic similarity of Puumala viruses found in Finland and western Siberia and of the mitochondrial DNA of their rodent hosts suggests a common evolutionary origin. Infection / A. Dekonenko, V. Yakimenko, A. Ivanov, V. Morozov, P. Nikitin, S. Khasanova, T. Dzagurova, E. Tkachenko, C. Schmaljohn // Genetics and Evolution. - 2003. - Vol. 3. - P. 245-257.
66. Klempa B. Hemorrhagic fever with renal syndrome caused by two distinct lineages of Dobrava hantavirus emerging in Russia / B. Klempa, E. Tkachenko, T. Dzagurova, Yu. Yunicheva, V. Morozov, N. Okulova, Slyusareva G., A. Smimov, D. Kruger // Emerging Infectious Diseases Journal. - 2008. - Vol. 14. - No.4. - P. 617-625.
67. Abu Daud N. H. Genetic and antigenic analyses of a Puumala virus isolate as a potential vaccine strain / N. H. Abu Daud, H. Kariwa, E.Tkachenko, T. Dzagurova, O. Medvedkina, I. Mariko, T. Seto, D. Miyashita, T. Sanada, M. Nakauchi, K. Yoshii, A. Maeda, K. Yoshimatsu, J. Arikawa, I. Takashima // Japanese Journal of Veterinary Research. - 2008. - Vol. 56 (3). - P. 151-165.
68. Dzagurova T.K. Molecular diagnostics of hemorrhagic fever with renal syndrome during a Dobrava virus outbreak in the European part of Russia / T.K. Dzagurova, B. Klempa, E.A,
Tkachenko, G.P. Slusareva, V.G. Morozov, B. Auste, D.H. Kiuger H Journal of clinical microbiology. - 2009. - Vol.47. - No. 12. - P. 4029-4036.
69. Kariwa H. Epidemiological Study of Hantavirus Infection in the Samara Region of European Russia / H. Kariwa, E.A. Tkachenko , V.G. Morozov, T. Seto, Y.Tanikawa, S.I. Kolominov, S.N. Belov, I.Nakamura, N. Hashimoto, A.E. Balakirev, Т.К. Dzagurnova, N.H. Abu Daud, D. Miyashita, O.A. Medvedkina, M. Nakauchi, M. Ishizuka, K. Yoshii, K. Yoshimatsu, J. Arikawa, I. Takashima // The Journal of veterinary medical science. - 2009. - Vol. 71 (12). - P. 1569-1578.
70. Seto T. An efficient in vivo method for the isolation of Puumala virus in Syrian hamsters and the characterization of the isolates from Russia / T. Seto, E. A. Tkachenko, V.G. Morozov, Т.К. Dzagurnova, O. A. Medvedkina, M. Nakauchi, M. Ishizuka, K. Yoshii, K. Yoshimatsu, L.V. Ivanov, J. Arikawa, I. Takashima, H. Kariwa // Journal of Virological Methods. - 2011. - Vol. 173.-P. 17-23.
71. Dzagurova Т.К. Isolation of Sochi virus from a fatal case of hantavirus disease with fulminant clinical course / Т.К. Dzagurova, P.T. Wilkowski, E.A. Tkachenko, B. Klempa, V.G. Morozov, B. Auste, D.L. Zavora, Y.V. Yunicheva, E.S. Mutaih, D.H. Kruger // Clinical Infectious Diseases.-2012,-Vol.54 (1).-P. 1-4.
72. Klempa B. Complex evolution and epidemiology of Dobrava-Belgrade hantavirus: definition of genotypes and their characteristics / B. Klempa, T. Avsic-Zupanc, J. Clement, Т.К. Dzagurova, H. Henttonen, F. Jakab, D.H. Kruger, P. Maes, A. Papa, E.A. Tkachenko, R.G. Ulrich, O. Vapalahti, A. Vaheri // Archive Virology. - 2013. - Vol. 158(3). - P. 521-529.
Патенты
1. Пат. 97729 Российская Федерация, МПК C12N. Устройство для получения вирионов хантавирусов из вируссодержащей суспензии / Набатников П. А., Дэагурова Т. К., Ткаченко Е. А., Мапкин А. Е., Киктенко А. В., Михайлов М. И.; заявитель и патентообладатель Набатников П. A. (RU), Дмгурова Т. К. (RU), Ткаченко Е. A. (RU), Малкин А. Е. (RU), Киктенко А. В. (RU), Михайлов М. И. (RU). -№ 2009141498 ; заявл. 11.11.2009; опубл. 20.09.2010. Бюл№ 26.
2. Пат. 2431148 Российская Федерация, МПК G01N. Способ получения "Диагностикума геморрагической лихорадки с почечным синдромом культурального, поливалентного для непрямого метода иммунофлюоресценции" / Ткаченко Е. А., Дэагурова Т. К., Михайлов М. И.; заявитель и патентообладатель Ткаченко Е. A. (RU), Дэагурова Т. К. (RU). - № 2010117619; заявл. 05.05.2010; опубл. 10.10.2011, Бюл. №28. - 8 с.
3. Пат. 2423520 Российская Федерация, МПК C12N А61К.Штамм вируса-возбудителя геморрагической лихорадки с почечным синдромом для изготовления вакцинных препаратов (варианты) / Ткаченко Е. А., Дзагурова Т. К., Михайлов М. И.; заявитель и патентообладатель Ткаченко Е. A. (RU), Дмгурова Т. К (RU). - №2009149041; заям. 30.12.2009; опубл. 10.07.2011, Бюл. № 19. -14 с.
4. Пат. 2445117 Российская Федерация, МПК А61К А61Р.Способ получения комбинированной бивалентной, культуральной, инактивированной, концентрированной,
очищенной вакцины для профилактики гемморагической лихорадки с почечным синдромом / Ткаченко Е. А., Дзагурова Т. К., Набатников П. А., Мапкин А. Е., Шевелёв
A. Б., Воробьёва М. С., Белова Г. А., Киктенко А. В., Михайлов М. И., Коротана Н. А., Хапчаев Ю. X.; заявитель и патентообладатель Ткаченко Е. A. (RU), Дзагурова Т. К. (RU), Набатников П. A. (RU), Михайлов М. И. (RU). - № 2009149040; заявл. 30.12.2009; опубл. 20.03.2012, Бюл. №8. - 9 с.
Авторские свидельства
1. Авторское свидетельство № 1319554. Штамм «Уфа CG-1820» 2-го серотипа вируса геморрагической лихорадки с почечным синдромом, используемый для специфической лабораторной диагностики / В.Н. Башкирцев, Е.А. Ткаченко, Т.К. Дзагурова, Е.В. Рыльцева, С.Г. Дроздов, АГ. Сгепаненко. - 1985.
2. Авторское свидетельство № 1319555. Штамм «Уссури-4590» 1-го серотипа вируса геморрагической лихорадки с почечным синдромом, используемый для специфической лабораторной диагностики / P.A. Слонова, Т.И. Астахова, М.Е. Косой, Е.А Ткаченко, Т.К. Дзагурова. - 1985.
3. Авторское свидетельство № 1365918. Способ получения диагностикума геморрагической лихорадки с почечным синдромом / Е.А. Ткаченко, Т.К. Дзагурова,
B.Н. Башкирцев, С.Г. Дроздов. - 1985.
4. Авторское свидетельство № 1639245. Диагностикум геморрагической лихорадки с почечным синдромом для детекции антигенов всех известных серотипов этого вируса прямым иммуноферментным методом / А.П. Иванов, ЕА. Ткаченко, Г.В. Резапкин, Т. А. Гасанова, В.Н. Башкирцев, Т.К. Дзагурова, С.Г. Дроздов. - 1990.
Монографии
1. Tkachenko Е. Hemorrhagic fever with renal syndrome and hantaviruses in Russia / E. Tkachenko, A. Dekonenko, A. Ivanov, T. Dzagurova, L. Ivanov, R. Slonova, R. Nurgaleeva, A. Stepanenko, E. Ivanidze, I. Zagidullin // In book: Emergence and Control of Rodent-borne Viral Diseases. - 1999. - France. - Elsevier. - P.63-72.
2. Слонова P.A. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом: монография / P.A. Слонова, ЕА.Ткаченко, В.А. Иванис, Г.Г. Комланец, Т.К. Дмгурова. - Владивосток: ОАО «Примполиграфкомбинат», 2006. - 246 с.
3. Транквилевский Д.В. Медико-экологический атлас Воронежской области (монография) / Д.В. Транквилевский, Т.К. Дзагурова, ЕА.Ткаченко. Болезни с природной очаговостью (Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом).- Воронеж: Изд-во «Истоки».-2010,- 167с,-Глава 28,- С.141-147
4. Мухаметдинова Г.А. Поражение лёгких при геморрагической лихорадке с почечным синдромом: монография / Г.А. Мухаметдинова, Р.М.Фазлыева, Д.Х.Хунафина, В.Х. Мустафина,Т.К. Дзагурова. Уфа.-«Гилем».-2013.- 131 с.
5. Дзагурова Т.К. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом / Т.К. Дзагурова, Г.А.Малкин / Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней: Практическое руководство / Москва: «Шико»,-2013. -С.377-393.
Благодарности
Свою диссертационную работу я посвящаю моему учителю, академику Михаилу Петровичу Чумакову, положившему начало моей научной карьеры и активно участвовавшему в становлении моих профессиональных возможностей в медицинской вирусологии.
Благодарю академика РАН С.Г.Дроздова, руководившего ИПВЭ им.М.П.Чумакова на протяжении подавляющего периода моей исследовательской работы, а также член-корреспондента РАН, профессора М.И.Михайлова, являющегося директором Института в настоящее время, за предоставленную возможность выполнить диссертационную работу.
Благодарю профессора Е.А.Ткаченко - научного консультанта моей диссертационной работы за помощь и внимание, оказанные мне в процессе проведения научных исследований и анализа полученных данных.
Я выражаю глубокую благодарность за тесное научное сотрудничество и техническую помощь при выполнении исследований в рамках моей диссертационной работы бывшим и настоящим сотрудникам лаборатории геморрагических лихорадок и других лабораторий ИПВЭ им.М.П.Чумакова и подразделений ФГУП «ПИПВЭ им.М.П.Чумакова»: В.Н. Башкирцеву, Г.В. Резапкину, А.П.Иванову, А.Е.Деконенко, М.А.Донцу, А.Д.Бернштейн, Н.С.Апекиной, Н.М.Окуловой, Н.А.Коротиной, Н.С.Седовой, М.В.Баловневой, О.А.Леонович, Е.С.Мутных, А.Б.Шевелёву, С.Е.Соцковой, А.П.Гмылю, М.Б.Королёву, В.М.Соколовой, З.В.Шуйковой, Р.Н.Водян, Л.А.Татьянченко, Л.Н.Конниковой, Г.А.Лыткиной, П.А.Набатникову, А.Е.Малкину, Ю.Х.Хапчаеву, А.А.Синюгиной, А.В.Киктенко и др., а также сотрудникам других НИИ и учреждений практического здравоохранения России: В.Г.Мороэову, В.А.Петрову, И.М.Загидуллину, Т.А. Гасановой, Э.А.Иванидзе, С.Я.Маркешину, М.С.Воробьёвой, О.А.Бархалёвой, Г.А.Мухаметдиновой, П.Г.Свешникову, Л.И.Иванову, Н.И.Здановской, Т.И.Астаховой, Ю.В.Юничевой, О.М.Пиликовой, И.А.Ходяковой, Д.В.Транквилевскому, Г.П.Слюсарёвой, Д.Л.Заворе, Г.А.Толстовой и многим другим.
Особая благодарность тем, кого уже с нами нет: выдающимся учёным, профессорам Е.В.Лещинской, Ю.А.Мясникову и Р.А.Слоновой за совместные исследования по выяснению этиологических и клинико-эпидемиологических
закономерностей ГЛПС в европейских и дальневосточных регионах нашей страны.
Благодарю зарубежных коллег - профессора Д.Крюгера (Институт вирусологии, Берлин, Германия) и Б.Клемпу (Институт вирусологии, Братислава, Словакия), принимавших активное участие в наших совместных исследованиях по изучению молекулярно-генетических характеристик хантавирусов.
Я благодарна моим рецензентам: академику РАН, профессору В.А. Лашкевичу, профессору Г.Г. Каргановой и доктору мед. наук А.Н. Лукашеву за тщательный анализ моей диссертационной работы и рекомендации по её оформлению.
Отпечатано в ЗАО «Издательство ИКАР». Москва, ул. Академика Волгина, д. 6 Тел.: 936-83-28. Тел./факс: 330-89-77 www.ikar-publi8her.ru
Формат 60x84/16. Гарнитура «ТСтев» Бумага офсетная. Заказ № 94. Объем - 2 псч. л. Тираж 100 экз.
-1070g
2014159671
-
Дзагурова, Тамара Казбековна
-
доктора медицинских наук
-
Москва, 2014
-
ВАК 03.02.02
- Патогенетическое значение оксида азота при геморрагической лихорадке с почечным синдромом
- Состояние процессов пероксидации у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом на фоне терапии с применением йодантипирина
- Иммунобиологическая характеристика живого и инактивированного вируса Марбург
- Экологические, эпизоотические и эпидемиологические аспекты хантавирусной инфекции в Удмуртии
- Роль грызунов в циркуляции хантавирусов в лесных экосистемах Южного Приморья
