Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Функциональные особенности аппарата трансляции печени и миокарда при острой экспериментальной ишемии миокарда

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Функциональные особенности аппарата трансляции печени и миокарда при острой экспериментальной ишемии миокарда"

• С ,

ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ДРУЖБЫ НАРОДОВ АКАДЕМИЯ НАУК УКРАИНСКОЙ ССР ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ИНСТИТУТ БИОХИМИИ им. А. В. ПАЛЛАДИНА

На правах рукописи

ЛУКОШЯВИЧЮС ЛЯОНАРДАС ЮОЗОВИЧ

V УДК 612,015.33 + 616.127-005.4

ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ АППАРАТА ТРАНСЛЯЦИИ ПЕЧЕНИ И МИОКАРДА ПРИ ОСТРОЙ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ИШЕМИИ МИОКАРДА

03.00.04- Биохимия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

I

¿О .[ у КИЕВ-1988 ^Г) ЛрЗОО-

Работа выполнена . на ка«едре Биологической и Биоорганической хипии Каунасского педицинского института

Официальные оппоненты: академик АН УССР,

доктор Биологических назк. профессор МАНУКА Г. X.

доктор Биологических наук, стэрвий научный сотрудник. ФАВ0Р08А 0.0.

член-корреспондент АН ЛитССР, доктор химических назк, профессор ЮОДКА Б. А.

Ведущая организация - Киевский медицинский институт ип. акад. A.A. Богомольца

Защита состоится " "_ 178? г. в _часов на

заседании специализированного совета Д 016.07.01 при Институте биохимии имени A.B. Палладина АН УССР по адгессу:252030, Киев-30„, ал. Леонтовича, ?).

С диссертацией ложно ознакомиться в Библиотеке Института Автореферат разослан " " __ 19В*? г.

/ченый секретарь специализированного совета

кандидат Биологических назк Кирсенко О.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

-VI. 1 V "*t !

" акгаая1яосхь_пмбаемм _ Оаной из основных задач современной

биохмии и молекулярной биологии является выяснение тонких механизмов развития различных Физиологических и патологических процессов как на молекулярном и клеточном, так и на организменном ароонях. Особое зчачение приовретаит исследования, направленные на изучгнив патологических процессов, приводящих к нарушении жизненно важных функций в организме человека. Понимание молекулярных механизмов, лежащих в основе различных патологий, является обязательны!! условием создания назчно овоснованных систем их коррекции и профилактики на современном этапе развития медицины.

Наиболее тяжелые функциональные и структурные нарзаения, вплоть до гиаели клеток, во многих случаях связаны с ияемиой тканей. Не случайно ишепическая Болезнь сердца закипает осовое место среди заболевания сердечно-сосудистой системы и по прагу названа "величайшей эпидемией века". Актуальность и важность проблемы определяется все еоэрастакщея смертность« от этого заболевания, трудностями диагностики и лечения. Б"лее Torot в последний годы навлидается "омоложение" иаемической Болезни сердца, которая, наряда со"значительной смертность!«, вызывает временна» и стойкзн утрату трудоспособности лндей молодого и среднего возраста (Янзюкявичэс 3. И. и др., 1976: Чазов Е. И. , 1770,1VB3).

Снижрнио притока крови к сердечной иывце и, следовательно, снижение поступления кислорода и различных вепеств приводит к глубоким метаболическим, Функциональным и морфологическим нарушениям как а самом сердце, так и а других органах, а тон числе и в печени. Многие звенья клеточного метаболизма, особенно нарушение энергетического обмена, довольно детально изучены при ишемии миокарда (Псаякявичнс А.К. , 1471; Фетисова Т. В. , Фролькис Р. А, 19?г>: Смирнов В. Н. , 1ТГ?: Меерсон 0.3. , Толейкис

А. й. , 19В7: Reimer К. А. , Hennings R В. , f?Qi>>. Однако, хотя во многих работах обнаружено нару|еиие Биосинтеза белка как в ишемиэированном сердце, так и в других органах, имемвиеся данные носят отрывочный и часто противоречивый характер. На их основании невозможно дате схематично представить картину функ-

ционирования аппарата трансляции и развития тех нарушений в сас оте его отдельных к оппонентов и звеньев! которые приводят к реэкона изменении Биосинтеза белка и снижению содержания ииз-ненно необходимых Белков при ин»аркте миокарда. Понимание молекулярных механизмов нарушения Белкового Биосинтеза важно не только в прккладном плане, но ипеет и суцественное теоретическое значение, госкольку ивепия миокарда является естественной по-делью для условного изучения особенностей Биосинтеза Белка в животных организмах, его регуляции и понимания «акторов, приводя них к его нагэшенип в экстремальных ситуациях.

Шгдь_Ы_лддалн_Ийнявдавжшя^ Учитывая актуальность вышеизложенной пРОБлепы, целы» настояиеп работы явилось изучение, активности аппарата трансляции в целом и отдельных его компонентов для выяснения но лек алярных механизмов нарувения Биосинтеза ьелка в миокарде и печени при острой экспериментальной ишемии миокарда, В соответствии с цель» исследования были поставлены следу/щие задачи:

1. Изучить структурно-Функциональные осоьенности тРНК пио-карда и печени в различные сроки ОЗИМ.

2. Установить влияние ишемии миокарда на аиииоцил-тРНК-синтетаэные активности миокарда и печени и состав их высок оно лек у ля риых комплексов.

3. Получить вькокоочикеинме препараты лейцил-тРНК-синтетаэы из миокарда и печени в норме и при ивепии и изучить свойства •ерпеит» в свободном и агрегированном состоянии.

Сравнить содержание эндогенных анииеация-тРНК в"печени контрольных и экспериментальных живот них.

5. Изучить »«локсинтеэирукпу* активность ниокарда и печени при* ОЭИП и «акторы, опрвделйввие в« уровень.

¿>. Определит» влияние и»еиии миокарда на риьосопный пул в печени и миокарде контрольных и экспериментальных животных.

7. Проверить возможность коррекции изменений Биосинтеза »елка ниокарда и печени при ОЭИИ путей использования некоторых Биологически активных вечеств,

Наа_Ч11М_1ШАИЗН»»_ Выполнен»»* работа представляет соьоя первое детальное исследование «о выяснении молекулярных механизмов нарувения Биосинтеза .Белка в клетках миокарда и печени при ОЗИМ. Впервые изучена Биологическая активность и свойства основных компонентов аппарата трзнляции генетической ин«ор-

нации, опгеделячцих эффективность и скорость ьелкового биосинтеза» а также установлен ряд Факторов, выэывамних нарушение их Функционирования в условиях ишемии. Так» уже лги кратковременной ивеиии в миокарде и печени уменьшаете* биологическая активность суммарной тРНК за счет появления неактивны« конфосмеров и увеличиваете» активность ДРСаэ. Впервые показано> что при и«епии имеет место изменение активности ряда АРСаэ в составе высокомолекулярных комплексов, вызванное как наруиением структуры ассоциатов» так и регуляцией активности АРСаз с участие« неорганической пиро»ос»атаэы. Из миокарда и печени в норне и при иаеиии впервые выделены высокоочиценныа препараты леяиил-тРНК-синтетазы и проведено сравнительное изучение свойств Ферментов в свободно« и агрегировамнон состоянии.

Обнаружено изменение ряда параметров Биосинтеза ьелка в миокарде и печени кролика при изучаемой патологии. Влероые описано резкое увеличение времени синтеза "средней" полипептидной цепи, т.е. замедление процесса элонгации и/или тер-минации при ОЭИМ» Показано» что основной причиной развиван^ейся гипопротеинемии и гипоальвуминемии является нарувение велок-синтоэирумией функции гепатоцитов, которое определяется в основной недостатком энергетического обеспечения. Основная причина снижения -белоксинтеэирумиея способности миокарда связана с нарушением функциональной активности полириьосом.

Установлена принципиальная возможность направленной коррекции виосинтеэа белка в печени и миокарде при экспериментальной ивеиии миокарда. 0 профилактическом и лечебной отно-яениях перспективным является использование биомассы культивируемых клеток Растения Ро1уас1аз 1111с11о11а ВаНеу, препараты которого< обладая антистрессовыми и адалтогенными свойствами, оказывает нормализирующее воздействие на Биосинтез белка в тканях животного организма при данном экстремальном состоянии.

значение диссертации эаклнчается в выявлении ряда закономерностей Функционирования аппарата трансляции в стрессовой для животного организма ситуации и определении Факторов, участвущих в регуляции биосинтеза белка на трансляционном уровне. Появление в печени и миокарде при ОЗИМ неактивных в аминоацилировании кон-ФОРмегов тРНК, способных к полной ренатурщии при нормализации

ситуации в организме, повышение АРСазной активности тканей, иле-ня.ее, по всей вероятности, компенсаторный характер, ассоииация-диссоииаиия АРСаз, оьгатиные иэпенения риьосопмого пул! и его отдельных компонентов - все зти выявленные в работе «акты свидетельствует о "гибкости" и достаточной запасе прочности функционирования >укариотического аппарата трансляции.

Больной вклад внесен в понимание роли надмолекулярной организации йРСаэ в регуляции активности как самих «ерпентов, так и биосинтеза белка в целой. Важным в теоретической плане попентон является также установление конкретных механизмов нарушения биосинтеза (елка в разных тканях при одном и топ же патологической состоянии организма (недостаточное энергетическое обеспечение и изменение соотношения АБР/АТР и СОР/СТР,

перераспределение отдельных классов полириьосоп, снижение функциональной активности рибосомкой »раками и т.д.).

Выполненная гаьота является часты« заданий Всесоюзных научно-технических программ: 0.74.05 "Разработать новые направления исследований генетического аппарата, ьиополиперов и структур клетки, осуместолянких важнейшие проявления жизнедеятельности, и внедрить достижения молекулярной биологии и молекулярной генетики в народное хозяйство" по тепе О. 74. 05. 19Н5 "Изучить функциональные характеристики транспортных риьонук леиновых кислот и аминоацил-тРНК-синтетаз миокарда и печени при непродолжительной гипоксии сердца" (N0.гос. регистрации 61067760) и 0.69.01 "Разработать эффективные методы и средства про»илактики, диагностики и лечения основных заболеваний сераечно-сосчпистой систепы" по тепе 01. 01.07И "Изучить белок синтезирующие, энергетические и иммунохипические особенности клеток печени и миокарда при гипоксических состояниях органов" <n0. гос. регистрации 018500020320).

Полученные результаты расширяет представления о причинах и механиэпах, вызывании* нарушение ьиосинтеэа белка в органах при ОЭИП, что неоьходипо при создании Фундаментальной теоретической базы для целенаправленного поиска наиболее з»»ектионых путей нормализации Белкового Обмена при данной патологии. Результаты проведенных исследований указывает на перепектионость использования биопассы культивируемых клеток растения Ро1узс1аз £111с1(о11а Ва11еу в качествь антистрессового препарата, вли-лммего на процесс биосинтеза белка.

Теоретические выводы равоты о Функциональных свойствах тРНК, АРСаэ и их высокомолекулярных комплексов 8 миокарде и печени при икемии вклинены в курс лекций по биохимии для студентов Каунасского медицинского института и в учебник "Биохимия" (Правкявичнс fl. , Лукоияеичнс Л. .Глемиа Д. и др. . Вильмис: "Минтис", 1975, 510 е.. Государственная премия Литовской ССР, 197В). Результаты изучения механизмов нарушения Биосинтеза Белка при ииемии приведены в учебнике "Клиническая биохимия" (Лравкявичис Я. , Лукоияеичнс Л. , Йстраускас В. и др. , Вильмис! "Мокслас", 1767, 301 е.). Кроме того, некоторые положения диссертационной работы вкличены в учевные пособия: "Обмен Белков" (Прашкявичлс Д., Лукоиявичис Л., Каунас, 197*», 150 е.), "Биохимия тканей" |Г)равкявичис О. , бурнецкеме Ю. , Лукошявичис Л. и др. , Вильнис, 1977, 135 с.) и "Биохииия крови" (Лукошявичис Л. , Праткявичис ft. , Гриьаускас П. , Вияьнчс, 19В0, 96 с. >.

Данная работа является основной часты« цикла исследований "Закономерности биохимических и морфологических нарушений органов и особенности их развития при гипоксии (экспериментальный инФаркт миокарда) (1965-17851", удостоенного Государственной премии Литовской ССР за 19В7 год.

Апр_аешиЛ„ tSUOTVi. Основные положения диссертационной работы доложены на следанцих конгрессах,съездах и конференциях; 1) на IX международном конгрессе Обвества по изучении сердца (Ньи Дели,

1978)! 2) на XI международном Биохимическом конгресс» (Торонто,

1979): 3) на республиканских научных конференциях! Вильнис-1979, 1983, 19В7, Каунас- 19В2-19В7: <»> на Всесоиэнои симпозиуме "Реализация наследственной информации" (Паланга, 1980)-; 5) на IV Украинском Биохимическом сьеэде (Днепропетровск, 1702); Ь> на III Всесоиэнои съезде патофизиологов (Тбилиси, 1982); 7) на XV конференции Федерации Европейских биохимических обвеете (Брюссель, 1903)1 В) на Всесоизноя симпозиуме "Метаболизм, структура и функция сердечной клетки" (Ташкент, 19ВЗ): 9) на V Всесоизном Биохимическом сьеэде (Киев, 19В£>); 10) на XXIII сьеэде Польского биохимического общества (Бялысток, 19Э7); 11) на XIV международном биохимическом конгрессе (Прага, 178В)

Публикации, По материалам диссертации опубликовано S9 работ.

Структура__и_а&лен__дисеес,т»ииии_ Диссертация состоит из введения, обзора литературы, методической части, изложения реэуль-

татов и их обсуждения, эаклнчения. выводов и списка цитируемой литературы, еклмчанмго 197 отечественных и ^01 зарубежных источников. Диссертация изложена на 355 страницах машинописи, содержит таблиц и рисунков.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе использовались подели локальной острой ишемии миокарда кролика, тотальной ишении сердца кролика и свиньи« аноксии и реоксигенации сердца свиньи. Локальную ишении воспроизводили окклаэией передней нисходяаеи ветви коронарной артерии по нетоду Косицкого Г. И. (19^3) с модификацией Виткуса A.C. (19t8), за развитие« ииении следили электрокардиографически. Сердца свиней, полученные на мясокомбинате сразу после забоя животных, делили на три части: одна служила контролен <ее сразу замораживали при -70°С), другие две подвергали тотальной ииении путем ауто-лиза в течение 15 и 30 ним при 3?°С по методу Arnigsr L. С. et al. I197fc) и затем запорашивали. йиокси« миокарда свиньи воспроизводили пер»узи*й по модифицированной методике ПаигендорФа (Morgan Н. В. et al. , 19Ь1). Для создания аноксии миокарда сердце перфузировали в течение 20 мин бескислородным буфером Kpesca-Генселейта, мгсывенмын газовой смесьм 95Z N2 + 5У. СО^ , а ре-оксигенацин аноксического миокарда проводили е течение 20 лин тем те буфером, насывенмым смесь»» 75У. О2 + 5Х СО^.

Суммарные препараты тРНК из печени кроликов и миокарда свиней выделяли депротеинизацией гомогената ткани Фенолом с последунжей хроматографией РНК на ДЭАЭ-целлмлозе (Brungrabet Е. F. , 1962). Определение содержания в печени эндогенных анино-ацил-тРНК проводили по методу Allen R. В. et al. (19&9).

ЯкцептоРНУМ активность тРНК определяли по накс^пальнону уровни аниноацилирования при оптимальных условиях инкуьации в течение 2О мин при 37°С (Elalcaja А. V. , 1971), Реакции останавливали добавлением равного обьема lDX-ной ТХУ, осадки промывали на нитроцеллилоэных <ииллипорных1 Фильтрах и радиоактивность проб измеряли на сцинтилляционном счетчике "Delta-300" (Нидер ланды) (э»Фек тивность счета Ьй'/Л. Ренатураци* биологически неактивных форм тРНК проводили прогреванием тРН" при 60°С в течение 5 мин в присутствии Mgf+ по методике Llndahl Т. et al, (196£>). Кинетику ренатурации биологически неактивных тРНК

изучали при разных температурах (23, 30 и 37°С) по методике Jochida T., Sueofca N. (19Ь8).

Препараты суммарных аниноацил-тРНК-синтетаэ из печени и миокарда получили хроматографией на дэаэ-целлнлоэе постриво-сонной надосадочной мидкости по методу Keller В, В. , Zamecnik Р. С (1*756), а высокомолекулярные комплексы - по методу Deutscher ПР. (1774). Аниноацил-тРНК-синтетазну» активность определили в условиях соблюдения прямолинейной зависимости выхода продукта реакции аминоацилирования тРНК от количества белка и времени инкубации, при "насыцаихих" концентрациях субстратов (Blskaja А. V. , 1771). Содержание фосфолипидоо в комплексах АРСаэ изучали по методу Plske С. H. . Subbarow J. (1925). Активность неорганической пиро»ос»атазы определяли по приросту неорганического «ос«ата, который измеряли аьтеуказанным методом.

Активность лейцил-тРНК-синтетазы определяли по начальной скорости реакции аминоацилирования тРНК ( 1г,С]лейциноп (Гудзера О. И. и др., 1979). Аналитический тлектрофорез в полиакрилаиидном геле проводили по методу Ornstein К , Davis J. (lit,1*) , а такте по методу Weber К. , ОзЬогп M. (1ЧЬЧ). Полекулярнуп массу лейцил-тРНК-синтетазы определяли по петоду Hedrick J. r„ , Smith A. J. (196В).

Термоинактивация лейцил-тРНК-синтетазы изучали при 25, 30, 37 и *»2°С, константы термоинактивации (К^) определяли как описано Chuang H. J. , Bell.F. В. (1972). Седиментационный анализ лейцил-тРНК-синтетазы проводили в ультрацентрифуге "Sorvall OTD-75" (США) (ротор fiH 650) при Константы седиментации опре-

деляли по методике Martin R. G. , Ames В. H. (1961).

Концентрации белка определяли по метопа Lowry О. et al. (1951) или Warburg О., Christian W. (1941). Относительное содержание альбумина в сыворотке крови рассчитывали посла ее фракционирования методом диск-электрофореза в ПААГе (Ornatein M. , Davis J. , 1964), а полученные гели сканировали на лазерном денситометре "Ultrascan" (LKB, Швеция). Альбумин для иммунизации крыс выделяли из сыворотки крови кроликов препаративным электрофорезом в ПААГе по методике Ажицкого Г. Ю. и Багдасарьян С. Н. (1975). Иммунизации проводили по схеме Day al В. et al. (1982). Иммуноглобулины выделяли из сыворотки иммунизированных крыс по методу ЛеФковитса И. и Перииса Б. (1981). Этим we методом из сыворотки крови кроликов, иммунизированных иммуноглобулинами крыс.

получали вторые антитела. Титры антител в антисыворотках и препаратах иммуноглобулинов проверяли по реакции Ouchterlony R. (19651. Эквивалентна» точка преципитации определяли по метода Al-Sarr« J. К. et al. (1778).

Для изучения скорости и уровня биосинтеза тотального белка и альбумина в бесклеточных ьелоксинтеэирущих системах использовали очинённые и меочииенные S-ЗО Фракции из печени и миокарда в стандартной инкубационной смеси, а такте реконструированная систему иэ гибосои и цитозоля согласно Явич М. П. • Лермам п, И. (1976). Иммунопреципитации альбумина проводили по методу Hradec J, et al. (1983). Определение уровня вкличения радиоктивных аминокислот In vivo в ьеяки печени и в аль-ьмминову» фракци» проводили патеи введения животным внутри-брщиино смеси (l^C ¡аминокислот из расчета 59,2 МБк/кг. Время синтеза "средней" полипептидной цепи определяли по методу Лейтина В. Л. > Лернана П. И. (1777). Суммарные риьосомы выделяли по методике Wettstoln F.D. et al. (1963). Для разделения свободных и мембраносвяэанных рибосом использовали методику бермана ft. Е. (1977). Препараты рибосом центрифугировали в центрифуге "Sorvall OTD-75" (США) (ротор AH-6Z7) в линейном градиенте плотности сахарозы (10-40%) при 26000 оь./пин а течение 3 ч и рассчитывали относительное содержание полисонного материала. Содержание ДНК и РНК в гомогенате печени определяли методом Schmidt С., Thannhauacr G. (1945).

Достоверность результатов оценивали по методу Максимова В, Н. (1980) и по t-тесту Стьчлемта (Лаким Г. ф. , 1VBÜ). Статистически достоверными считались различия при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Ь_..стг»кт.арцо-Фънкаионяльные.свойства тРНК миокарда и печени лги острой экспериментальной ишемии миокарда

В первой серии экспериментов после установления оптимальных условий максимального апиноацилирования проведено сравнение акцепторной активности тРНК контрольных и экспериментальных животных по ряду аминокислот. Г1репставпемиые в табл. 1 результаты свидетельствует о топ, что во вгемя кратковременной тотальной ишемии миокарда (15 пин аутолиэа) акцепторная активность суп-парных тРНК миокарда по всем исследованным аминокислотам ( Ala,

Gly, Glu, Leu, Ser) снижается на 36-382 по сравнении с контролен, а в слзчае Более длительной ишемии (30 иин ауто-лиэа) это снижение еае более выражено и составляет 43-487. . 20-минутная аноксия ниокарда тоже сопровождается выраженный уменьшением акцепторной активности тРНК, специфичных к Ala, Glu, Leu и Ser на 20-4Т/. с тенденцией восстановления при последуиаей 20-минутной реоксигенацией сердечной мышцы.

Tas лица 1

Акцепторная активность тРНК ниокарда свиньи при тотальной ишемии (нноль аминокислоты на 1 мг тРНК! М+т: п=Ь-10; р<0,05)

11(,С Аминокислота Контроль

Алании Глицин

Глутамимовая кислота

Лейцин

Серин

2,7+0,2 4,3*0,3 4,3±0,2

А,5+0,1 3,8+0,1

__BfJMJL^ajfi(l»3aj_ñWÍ_

15 30

1,7+0,1 2,8*0,2 2,¿±0,2

2,8±0,1 2,6+0,1

1,5+0,1 2,310,2 2,410,1

2,4±0,l 2,6+0,1

Результаты изучения максимального уровня аминоацилирования тРНК, выделенных иэ печени кроликов, показали, что в ранние сроки ОКА (6-24 ч) акцептирование Cly, Glu, Phe и Ser ниже ' контрольного на 19-36/Î и восстанавливается до нормы через 72 ч. Акцепторная активность тРНКА1а в суммарном препарате в исследованные сроки оставалась Без изменений (табл. 2).

Изучение причин изменения биологической активности тРНК миокарда и печени показало, что акцепторная активность тРНК в норме и при ишемии в гетерологичной системе аминоацилирования не отличается от активности тРНК в гомологичной -системе при "насыианцих" концентрациях Фермента. Поэтому было сделано предположение, что In vitro снижение максимального уровня аминоацилирования тРНК при ишемии не связано с изменением каталитических свойств АРСаз, а, по-видимому, является следствием нарушений в самой молекуле тРНК.

Известно, что акцепторный конец тРНК чрезвычайно лабилен ,и при различных состояниях организма (Bester F. J. , Gever? W. , 1973) может отщепляться, а затем достраиваться in vitro в сис-

Таблица 2

Акцепторная активность тРНК печени кроликов ори локальной ишемии миокарда (нмоль аминокислоты на 1 мг тРНХ; М+т; п=9-11)

I1<С1амииокислота Контроль _Время после ОКА, ч

б 12 24 72

Алании 2,110,1 2,110,1* 2,010,1* 2.2+0,2* 2,0+0,2*

Глидии 2,8+0,1 2.210.2 2.110,2 1,810,2 2,510,2*

Глутаминовая кислота 2,910,2 2,110.2 2,1.10,2 2,0+0,2 3.1±Ок2*

Лейцин 3,4+0,1 2,3+0,2 2.5+0.2 2.5+0,2 3,2+0.2*

Серии 3,8+0,2 2.5+0,2 3,1+0.2 3,1+0,2 4.0+0,2*

*) Изменения статистически недостоверные (р<0,05>

теме, содержадей ATP (СТРКтРНК нук леотидилтранс»ер»эы, присутствующие, как правило! в препаратах суммарных АРСаэ (Choо А. Н. G. , Logan D.H. , 1977). Однако в навих зксперинентах добавление в инкубационную смесь наг*ду с ATP СТР но оказало влияния на акцепторную активность тРНК ниекарда и печени при ОКА. Это является косвенный доказ4тельством сохранности акцепторного тринуклеотида в молекулах тРНК.

Возможной причиной снижени* акцепторной активности тРНК ножет выть обратимое изменение пространственной структуры по-лекулы, приводящее к появление Функционально неактивных кон-»орнироа (Мацука Г, X. , 1973, Llnflbal Т. et al. , 1966). Кратковременное прогревание в присутствии Мд++ приводит к переходу неактивных конформоров в активные и восстановлении акцепторной способности тРНК (Bich Д., flaj Bhan3ary U. L. , 1976). Оказалось, что подобное прогревднив препаратов тРНК, полученных из миокарда при его аутолизе, а так«е выделенных из печени через 6, и 2>* ч после ОКО, приводит к достоверному восстановлении акцепторной активности тРНК. Эти Результаты даит основание предположить , что снижение акцепторной активности тРНК при ОКА связано именно с появлением биологически неактивных кон-«орнеров тРНК. Изучение термодинамических харак-. ■ теристик реакции рена-турации неактивных кон-•орнеров ТРНК Дает возможность судить as энергетической стабильности этих структур* На пример« TPHKLe>1, в состав« суммарных препаратов,

выделенных из печени кроликов через 12 ч

Рис. 1. Кинетика Рвнатурации неактивных «онФоряеров тРНкЬ*« » суммарных препаратах, выделенных из печени кролика через 1Z ч после ОКА, при различных температурах.

И

■ поел* ОКА, изучена кинетика генатугации биологически неактивных тРНК пги различных температурах (рис. 1). Определены следуквие значения активациоммых параметров кон»ормационных переходов: стандартная энтальпия реакции активации Hp = 113 - 12Ь кДт/моль, стандартная энтропия Sp = 146 - IBS Дж/ <моль>град). Следует отметить, что полученное значение Hp энергетически соответствует разрыва - обраэооани:« 5-6 водородных связей.

Изучение тернодинамических параметров реакции ренатурации неактивных форм тРНК показывает, что изменение кон*ормации таких молекул происходит, скорее всего, на уровне третичной структуры. Появление биологически неактивных к0Н*0РМеР0В описано при неко-тогых экстремальных состояниях организма, сопровождавшихся изменением биосинтеза белка (Мацука Г. X. и др. , 1973; Демидов C.B., Солдаткин А. Л. , 19В1). Исследования последних лет показали! что неактивные формы -РНК не являится инертными поле-калами, а могут участвовать в негативной регуляции биосинтеза белка (Негруцкий 6.С. и др., 1937, 198В), ингибиру» взаимодействие нативно» тРНК с АРСазой или рибосомами. 2._5анкш10ижлк«нв_ас0$ емности _ачина»иил-тРНК-синтетяз печени и яиокаедирн острой эксоягимента.'иной-ииемии чиакагда Интенсивность биосинтеза Белка во многом определяется функциональной активность» АРСаэ, к»тализиру«»их строго специфичное аминоацилирование тРНК. В связи с этим проведено изучение АРС-аэных активностей по тем же аминокислотам, для которых ранее была изучена акцепторная активность тРНК. В отличие от тРНК установлено значительное увеличение АРСазных активностей в печени при ОКА (таьл. 3). Исклнчение составляет лишь аланил-тРНК-синтетаза. Что касается ЙРСаэ миокарда свиньи, то аланил-, глицил-, глатания-, лейцил- и серил-тРНК-синтетазные активности о препаратах, выделилиух при 15-мин. тотальной ивемии увели-чивамтся иа 25-55Х, а при ЗО-иин. ишемическом повреждении происходит их уменьшение на 35%, за исключением аланил- и серил-тРНК-синтетаэных активностей, которые снижается до контрольного уровня. 20-минутная аноксия миокарда сопровождается увеличением аланил-, глутамил-, лейиил- и серил-тРНК-синтетазных активностей в миокарде свиньи на 40-64Х, с тенденцией нормализации при последуицей реоксигенации.

Обнаруженное Увеличение ряда АРСаэных активностей в печени кроликов при ОКА и в миокарде свиньи при 15-мин. тотальной июе-

Таблица 3

Аминоацил-тРНК-синтетазная активность препаратов суммарных АРСаз печени кроликов при локальной ишемии миокарда (пмоль аминоацил-тРНК на 100 мкг белка за 1 мин; М+га; п=9-13)

[**С1амино- Контроль Время после ОКА, ч

кислота 6 12 24 72

Алании 98,0+1,9 100,5+2,9 * 101.5+4.0* 97,5+2,3 100,2+2.4*

Глицин 43,2+2,7 28.3+2.2 32,4+2,6 32,5+2,1 36,8+3,5

Глутаминовая кислота 40,4+2,0 / 52.1+1,3 56.0+2,0 68,3+4.1 73.7+3.9

Ле&ции 21,3+1,2 28,3+2.2 32.4+2.6 32,5+2,1 36.8+3,5

Серия 78,8+3,0 84,1+2,6* 84,6+4.4* 96.4+2,7 92,6+3,3

*) Изменения, статистически недостоверные (р > 0,05)

и

пии и 20-мин. аноксии может быть связано либо со стимуляцией Биосинтеза и увеличением содержания »erментов, лиьо с повышением их каталитической активности. Есть данные, укаэываивие на возможность регуляции активности некоторых АРСаэ действием гяда ии-топлаэматических Фактчров (Hllderman R.H.,1977; Lapointe J. et al. I 1905) и путем модификации (Виноградова H. Е. , Качеген-

Gablus 11. -J. et al. , 19B3: Ger ken S. С. Ar fin S. V. , 1984; Pendergast A. M. . Traugh J. A. , 198S>. Уменьшение активности АРСаз в миокарда свиньи п."и тотальной ишемии может быть обусловлено снижением количества их активных форм эа счет частичного или полного протеолиэа в связи с выходом из лизосом протеолитических Ферментов (Wildenthal К. ,197В).

Поскольку АРСаэы в эукариотических клетках функционирует в основном в составе высокомолекулярных комплексов (Dang С. V. et al. , 19BZ: Deuts-

Рис. 2. Седиментограмм» комплексов АРСаз из печени кролика в норме (А) и через 12 ч после ОКА (Б).

cher M. г. ,¡934!, дальнейшие исследования были направлены на изучение надмолекулярной организации этих Ферментов при ОЭЮТ.

Седимеитациомный анализ показал, что размеры ЛРСазмык комплексов практически одинаковы в норме и при патологии как в случае печени (рис. 2), так и в случае миокарда . Результаты исследования высокомолекулярных комплексов (Kg = 2t-29 S) из миокарда показали, что содержание глицил-тРНК-синтетазной активности снижается как при 15-мин. . так и при ЗО-пим. тотальной ишемии сердечной мышцы. Доля глзтамил- и лейцил-трнк-симтетаэной

ко H.Е. 198λ; Daraull Z. et al., 19B2;

активности в вышеуказанной фракции комплексов остается без изменений. Доля аланил-тРНК-синтетазной активности незмачительно увеличивается при 15-нин. тотальной ишемии и эатен остается без изменений.

Динамика изменеьия изученных АРСаэных активностей в составе комплексов иэ печени при ОКА различна. Глутамил-, лейцил- и лизил-тРНК-синтетазные активности увеличивается, а глицил- и серил-тРНК-синтетаэные активности снишантся через 6-24ч после ОКА, по сравнение с контролем. Установлено, что глутамил-, лейцил- и лизил-тРНК-гинтетазы локализованы, преимуаественно, во фракции комплексов, глицил-тРНК-синтетаза содержится в равной степени как во Фракции комплексов, так и в солее ниэко-молекулярной Фракции, серил-тРНК-синтетаза содержится, преимэ-аественно, в низкомолекулярной фракции. Через 12 ч после ОКА глиция- и серил-тРНК-синтетазиые активности переходят иэ фракции комплексов в ниэкомолекулярнуи «ракции (рис.З). Таким образом,

1 2

1 2 1.Еи

I а

4. - контроль а - через -12 ч после ОКА

сз - франция комплексов ЕЗ - ни.комотшшр-ная 4>|>ш1«|я

\ г

1

1

4 Ъ Б«

Рис.3. Распределение АРСазных активностей по фракциям при хроматографии постриьосомного супернатанта гомогената печени кроликов на се«адексе СЗ-200.

глицил- и серил-тРНК-синтетаэы в меньшей степени, чем другие АРСазы, способны участвовать в образовании высокомолекулярных комплексов и могут легче выходить из их состава. Следует от-

метить, что наруаение структуры комплексов (уменьшение содержания фосфолипидов в их составе через 12 ч после ОКА) также пошет быть одной из причин изменения их АРСаэного состава.

Как отмечалось выше, на каталитическун способность АРСаз может оказывать влияние ряд цитоплазматических Факторов. К таковым относится, в частности, неорганическая пиро«ос«атаза, которая, расщепляя неорганический пиро»ос»ат, может сдвигать равновесие реакцчи в сторону образования аминоацил-тРНК. Поэтому было высказано предположение, что этот »ериент, присутствуя в составе высокомолекулярных комплексов, может быть причиной обнаруженного увеличения активности ряда АРСаз при ОЗИМ. Полученные данные действительно свидетельствует об увеличении активности пиро-«ос»атазы в препаратах сумпарных АРСаз (1,2 раза) и особенно в высокомолекулярных комплексах ( в 2,7 - 2,4 раза), выделенных из миокарда при 15- и ЗО-иин. тотальной ивепии. Следует подчеркнуть, что при 15-нин. иеепии миокарда наБлндается более значительное увеличение аланил-, лейцил- и сеРил-тРНК-синтетаэной активности в составе высокомолекулярных комплексов по сравнении с препаратами суммарных АРСаз, что может выть следствием Более высокой активности неорганической лиго*ос»атаэы в комплексах.

Однако при 30-мин. иеемическоп повреждении миокарда не на-ьлид&ется соответствия между изменением АРСазных активностей и активность)« неорганической пирооосФатаэы, что мошет быть обусловлено снижением количества активных форм АРСаз за счет их частичного или полного протеолиэа при Более длительной ишемии. Изучение комплексов АРСаз из печени кроликов через 12 ч после ОКА также обнаружило корреляции между их активность» и содержанием пироФбС»атазы. Полученные данные являмтся косвенным доказательством роли надмолекулярной организации Ферментов в регуляции активности их кйппоигагвг.

Для выяснения вопроса, изменимте* ли каталитические свойства непосредственно АРСаз при ОЗИМ, были получены высокоочищенные препараты индивидуальных лейцил-тРИК-синтетаз из печени и миокарда и изучены их Фиэико-хинические свойства и молекулярные активности.

Из миокарда свиньи в норме и при 15- и ЗО-иин. тотальной иаемии выделена и очинена лейРС в свободном состоянии и прочно ассоциированная в высокомолекулярный комплекс, а из печени кролика в норме и через 12 ч после ОКА получена свободная Форма

Фермента (рис.4). Высокоочиценный Фермент из миокарда состоит иэ одной полипептидной цепи с молекулярной' массой 130 кДа, что соответствует большинству изученных лейРС из высших эукарио-тических организмов, В составе высокомолекулярного комплекса« выделенного иэ миокарда! присутствует также АРСазы, специфичные к аргинину, аланину, глутаминовой кислоте, изолейцину и лизину. Выделенный комплекс характеризуется значением молекулярной массы 840 кДа. Размеры и состав очищенного комплекса ЙРСаз иэ миокарда свиньи указывант на его сходство с "кор"-комплексами, описанными другими авторами (Kellerman О. et al. , 1???).

Значение молекулярной массы и суььединичность строения Фермента иэ печени котрольных кроликов (185 кЛа, Об£) были идентичны таковым для Фермента, выделенного из печени через 12 ч после ОКД. Различия в молекулярных массах лейРС иэ печени кролика и иэ других оыектоо могут быть связаны с наличием в Ферменте иэ печени углеводного компонента (Dang С. V. et al. , 19В2). ^

"i ?

Рис.4. Хроматография частично очиненнол лейцил-тРНК-синтетазы печени кролика (й) и миокарда свиньи (В, на оксиапатите при рН 6,В: Е1 - своьодная Форма лейРС, - лв.|РС в составе комплекса иэ миокарда свиньи; электрофорез в лолиакриламидноп геле (7X): 1-лейРС иэ печени кролика, 2- »орна Е1 лейРС из миокарда свиньи.

Результаты кинетического изучения показали, что значения для свободной и ассоциированной в комплекс ииокардиаяьной лейРС-

близки, не обнаружено такие существенных различий Кц по АТР, лейцину и тРНК для указанных Ферментов как в контроле, так и при 15- и 30-иин. тотатльмой мнении миокарда. Сравнение каталитических свойств лейРС а свободном и агрегированном состоянии иэ печени в контроле и через 12 ч после ОКА показало, что К|>| по лейцину и тРНК для очищенных лейРС и в составе высокомолекулярных комплексов практически не отличамтся, а К^ по АТР для агрегированной формы Фермента характеризуется Более высоким значением <-абл. 4).

Таблица 4.

Каталитические свойства лейцил-тРНК-синтетаэы печени кроликов и миокарда свиньи <М+т; п=6)

Препарат Фермента

АТР «ю-1* Н) Лейцин (1СГ5 М) тРНК <10"Ь М) умах UO-Ьи/пин/иг)

Печень ?_

ЛейРС, контроль 1,610,3 1,Ч±0,2 0,610,2 16,013,1

ЛейРС, 12ч после ОКА 2,0+0,3 0,910,1 0,410,04 19,Т±2,9

Комплекс контроль АРСаэ, 2,3+0,6 1,6+0,4 0,010,1 9,3«

<оиллпкс АРСаэ, 12 ч после ОКА 8,0+0,7 1,6±0,2 0,8+0,1 В,5*

Пиякагдь

El контроль < 39,013,0 0,710,1 1.Н0.4 20,6±5,4

аутолиэ, 15 мин 69,017,0 1,710,3 0*410,1 19,213.1

аутояиэ. 30 мин 41,011,0 2,010,2 0,5+0,1 20,7+1,6

Е2 контроль 128,017,D 2,710,3 0,410,06 15,3*

аатониз, « е (W 30,0+5,0 2,910,3 0,610,1 •15,1"

аатолиэ, 30 мин 42,011,0 3,010,2 0.610,1 18,1"

Неочищенный леке АРСаэ контроль коип- _ 2,910,03 0,410,02 6,1»

аутолиэ, IS пии - 4,4+0,3 0,710,03 12,3"

аутолиз. 30 мин - ' 4,410,2 0,4>+0,1 -7,5"

vm»x ~ рассчитана на 1 яг »елка комплексов.

Что касается Vnax, то ее величины не отличались для реакций, катализируемых свободной лейРС, выделенной иэ миокарда в

норме и после 15- и ЗО-мии. тотатльной ишемии, а также лейРС, выделенной из печени контрольных и экспериментальных кроликов.

Изучение термоставильности лейРС в свободном и агрегированном состоянии в норне и при 15- и 30-мин. тотатльной ишемии миокарда показало, что изучаемый »ермент в составе высокомолекулярных комплексов солее устойчив к термоинактивации, чем в свободном состоянии. Показательно, что свободная формя лейРС, выделенная из ииемического миокарда, менее устойчива к температурным воздействиям, чем Фермент из нормального миокарда. В то же время препараты лейРС, выделенные из печени кроликов через 12 V после ОКА, отличаются больней тернолавильность», чем препараты, выделенные из печени контрольных животных, что особенно характерно для лейРС, ассоциированной о комплекс. ЛейРС, входящие в состав комплексов АРСаэ, характериэчится более высокими значениями Kj, no сравнении с высокоочиденными препаратами. Таким образом, нави результаты не полностью подтверждают предположение и стабилизирующей i оли ассоциации АРСаэ в комплексе (Dang C.V., 1*?В2). По-видииопу, это зависит от вида ткани и состава выделенных из нее комплексов Ферментов.

„Изучен уров«я_аниноаиияиРовзми»_тРНК_.В печени in vivo п си_ о с Tf о а. гке п ерипентад ц н сй_ич емин^оио кягла .

Раэнонаправленность обнаруженных in vitro изменений Функциональной активности тРНК и АРСаэ ставит вопрос о тон, как реализуется эти изменения в клетке, т.е. каков уровень образования аминоацил-тРНК In vivo. Результаты, приведенные в табл. 5, сии-детельствинт об уменьшении содержания эндогенных глицил-, глу-тамия-, лейцил-, серил- и Фвнилаланил-тРНК в печени кроликов через Ь-2<* ч после ОКА на 10-37% . Через 72 ч после ОКА содержание эндогенных аминоацил-тРНК возвращается к контрольному уговн*. Содержание аланил-тРНК в печени кроликов в указанные сроки послеоперационного периода не изменялось. Эти' результаты коррелирует с данными о снижении акцепторной активности тРНК in' vitro. Кроме того, сопоставление полеченных данных (таел. 1 и 5) выявляет следующую закономерность. Так, акцепторная активность по Gly,Glu и Leu препаратов тРНК, выделенный через ¿>-24 ч после ОКА, снижена In vitro в большей степени, чем содержание соответствующих аминоацил-тРНК in vivo в эти ж» сроки. В этом случае снижение акцепторной . способности тРНК сопровождается значительным повышением соответствующих АРСаэных активностей.

N

Таблица

Содержание эндогенных аминоацил-тРНК в печени кроликов при локальной ишемии миокарда (нмоль аминокислоты на 1 мг тРНК; Мил; п= 9-11)

1'•'с]аминокислота Контроль _Время после ОКА, ч

6 12 24 72

Алании 1 ,27^0, ,05 1 ,26+0, ,06* 1 .3110, 13* 1 ,31^0, 12* 1, ,29+0,

Глицин 1 .53*0, ,04 1 .27+0, ,06 1 ,25+0. 06 1 ,22+0, 07 1, ,59 + 0,,

Глутаминовая кислота 1 .71+0. ,06 1 ,32+0, ,08 1 ,42+0, 09 1 ,40+0, 08 1, .71+0,1

Лейцин 2 .02+0, ,07 1 ,60+0, .07 1 .75+0. 10 1 ,68+0, .06 2 ,00+0,'

Серии 1 ,60-0, .10 1 ,20+0, .12 1 .19+0, 12 1 ,22+0, 13 1, ,63+0,

*) Изменения статистически не достоверные (р > 0,05)

что, по-видимому, носит компенсаторный характер и направлено на урегулирование Белкового Биосинтеза уме на первой этапе. Э то же врепя содержание эндогенных сеРИл-тРНК через 6-12 ч после ОКА снижается в Большей степени, чем уменьшается акцепторная способность тРНК^вг . причен в этой случае серил-тРНК-синтетаэная активность остается Без изменений.

Можно предположить,что наличие Биологически неактивных форм тРНК частично компенсируется солее интенсивный использованиеп оставшихся активных тРНК, что и треьует повышения АРСазиой активности для быстрого ОБРаэования соответствующих аниноацил-тРНК. Однако увеличение АРСаэной активности в первые сутки после ОКА не способно поддержать образование аниноацил-тРНК на контрольной уровне. Полное восстановление содержания аниноацил-тРНК в печени через 72 ч после ОКА коррелирует с максимальным увеличение« активности АРСаз и восстановлением акцепторной способности соответствунаих тРНК. Эти результаты свидетельствуют о ведущей роли тРНК в нарушении начальных этапов Биосинтеза Белка в печени кроликов при ОЗИМ.

П 94 е н ИЛ Р С ТГ_0 ЧР-ИЛвНН АкИ РЙ_И*ея Ч

Приведенные выше результаты свидетельствунт об изменении й активности тРНК и АРСаз

<0

30

£ с

S а: х

L_

О. с

vT

<г íSLJ

d 5

/^^КОНТРОДЬ

__•

15-мии. ИШЕМИЯ

__а--а

30-МИН. ИШЕМИЯ

пиокарда при тотальной ишемии и аноксии, что но-жет сказаться на функционировании Белоксин-тезирункего аппарата кар-диопиоцитов в целой. Для изучения этого вопроса были использованы Бесклеточные ьелоксинтезирун-иие системы двух видов. Одна система включала неочищенную постнитохон-

0 ЛЧ 30 60 -120

■fc, МИН

Рис. 5. Зависимость включения t l^C 1»»гинина в ТХУ-неРастворимый продукт трансляции в весклеточной seлоксинтеэирунщеи системе с неочищенной 8-30 фракцией из пиокарда от времени инкУБации.

дриальнум фракцию S-30, а вторая (реконструированная)- цитозояь

и рибосонную Фракцию, выделенные отдельно из' миокарда. Как по-

к »за ли полученные данные <рис.5>, уме при кратковременной ишемии миокарда резко изменяется функциональная активность трансляционного аппарата кардиомиоцитов. Так, скорость и уровень включения I •''С ¡аргинина в продукт трансляции в S-3Q системе снижается на ЗВХ и 33''. соответственно. При увеличении продолжительности (ЗО-пин. ) тотальной ишемии это снижение усиливается. достигая ЬУ/. и ЬЬХ соответственно. Следует отметить, что обнаруженные изменения не обусловлены различием в содержании ATP. OTP, КР и K<SK, так как их концентрации ьыли предварительно изучены и приближены к оптимальным.

На основании полученных результатов пожно эакличить, что тотальная ивемия сердечной мыты сопровождается снижением ьиосинтеэа ьелка, которое связано не столько с нарушением энергетического Баланса, сколько со структурно-функциональными

изменениями самого трансляционного аппарата.

Для выяснения вопроса, какие те компоненты аппарата ьио-синтеза ьелка в миокарде наиболее ответственны за снижение его активности при ишемии, ьыли раэраьо-таны реконструированные ьесклеточные ьелоксин-тезируниие системы, в которых количество риьосом и цитозояя, выделенных

О

г

X

ч

ТУ

t, Нин

Рис. Зависимость уровня вклнчения | lifC (лейцина в ТХУ-нераство-римый продукт трансляции а реконструированной ьесклеточной ье-локсинтеэируишей системе миокарда кролика от времени инкубации: 1. рибосомы <Р) + цитоэоль (Ц) иэ нормального миокарда, 2. Р из нормального + II иэ иеемизированного миокарда, 3. Р из ивемизи-рованного ♦ И иэ нормального миокарда, ¡t. Р + Ц из ишемиэиро-ванного миокарда; 30-иин тотатльная ишемия миокарда.

иэ контрольных и иаемизированных (30-нин. аутолиз> сердец, было одинаково. Сравнительный анализ гомологичных и "перекрестных" систем показал, что интенсивность трансляции эндогенных мРНК миокарда гораздо выше при наличии в системе сибосомного материала из контрольной ткани (рис. Ь>. Цитозойь , как из нормаль-

ного сердца, так и после 30-мин. тотальной ишемии, оказывает одинаковое влияние на обший уровень Биосинтеза велка в реконструированных системах. Из этого следуеть, что основная причина снижения скорости и уровня Биосинтеза суммарных Белков миокарда при его ишемии связана с Функциональным состоянием рибосом. Это предположение полностью подтверждается кинетическим показателем трансляции - временем синтеза "средней" полипептидной цепи. Охаэалось, что величина этого параметра в нормальном миокарде составляет 1,6110,12 мин, а при 15- и 30-мин. тотальной ишемии значительно возрастает до ;,5Ю>5 мин и 4,110,6 мин соответственно.

Еае одним показателем, характеризующим интенсивность рэботы Белоксимтезирумщего аппарата клетки, является степень вовлечения рибосом в трансляции матриц, определяемая как доля полирибосон в овеем пуле рибосом. С другой стороны, обимй пул рибосом клеток состоит из пула мембРаносвязанных и пула свободных рибосом. Полученные нами данные показали, что оецее содержание рибосом в контрольном и ишемиэироаанном миокарде практически одинаково. Вместе с тем при тотальной ишемии происходит ярко выраженное перераспределение между свободными и мемБраносвязаннь.ми риБОСомами в оеысн пуле рибосом. Так, если в нормальном миокарде свободный рибосомы составляет 91,812,07., то после 30-мин. тотальной иземии их содержание снижается до 59,4±5,27., а то время как число мем-БРаносвязанных рибосом возрастает почти в 5 раз, т.е. с В,312,07. до 40,61.5,67. . Наряду с этим Фракционирование рибосомного материала в градиенте плотности сахарозы позволило обнаружить изменение профиля распределения суммарных, свободных и мемБра-носеязанных рибосом. Оказалось, что после 30-мин. тотальной ишемии доля полисомного материала в суммарном пуле и в классе свободных от мемьран рибосом снижается, в то время как состав мембРаносвязанных рибосом практически не изменяется. Эти данные являнтсл определенным доказательством того, что снижение ье-локсинтезируицей активности миокарда связано с перестройкой рибосомной Фракции аппарата трансляции, которая к тому же приводит, по-видимому, к изменении соотношения Белков, синтезируемых на свободных и мембРаносвязанных рибосомах.

При ишемических состояниях миокарда, в частности при инфаркте миокарда, наьлюдается диспротеикемич, пропвпямцаяся гипо-альбУминемией (Волынский Э. Г1. и др., 176В; Луковявичис Л. и др.,"

1968, 1971 í Фетисова Т. В. , Фролькис P.A.» 1976). Однако молекулярный механизм этого явления неизвестен. Наши последующие эксперименты были направлены на.выяснение этого вопроса. Согласно полаченныи данным в первые сатки после ОКА в сыворотке крови на-ьл«дается снижение содержания как обцего белка, так и альбумина. Чтобы выяснить, связана ли развивающаяся гипоальБупинения со снижением белоксинтезираищеи функции гепатоцитоо, был определен уровень Би.)синтеза суммарных белков и альбумина в печени In vivo. Оказалось • что уме в первые часы после ОКА включение радиоактивных аминокислот в ТХУ-нерастворинам Фракцию гомогената печени (общий белок) и во фракцию Белков, осаждаемых анти-альбаминовой сывороткой (альбамин), снижено (таьл. 6). Так, через 6 ч после ОКА инмунопреципитат содержал 47Х метки по

Таблица 6.

Уровень включения (''♦С ¡аминокислот в общий белок печени и апььамин лги локальной ивении миокарда (имп. /пин/10 мг белка:

Mi и; п=5)

Показатель Контроль ..... вр£дв-1тс.яе_-0Кйл_ч_

6 12 24

Общий белок 3023+299 1640+310 1007+310 2357+396"

АЛЬбЬПИН 904+29 425+35 335+34 soo±3B

") Изменения статистически недостоверные (р > 0,05)

сравнении с контролем, а к 12 ч опыта включение I'^С¡аминокислот в альбумин достигало только 37Х контрольного уровня. По истечении первых суток после ОКА уровень Биосинтеза альбумина возрастает, однако в отличие от уговня биосинтеза общего белка, остается существенно ИИ*« ¡соп-гзльягге. Изучение кинетики процесса трансляции показало, что время синтеза "средней" полипептидной цепи к 12ч после ОКА авеличивается почти в 2 раза. Увеличение ерепеии синтеза • "средней" полипептидной цепи свидетельствует о снижении скорости Белкового биосинтеза в печени на этапе элонгации и/или терминации.

Для выяснения молекулярных механизмов нарушения Биосинтеза Белка в печени изучалась эффективность трансляции эндогенных мРНК в Бесклеточных Белоксинтезигающих системах иэ печени с использованием S-30 Фракции. Определение уровня Биосинтеза белка в бесклеточной системе, содержащей неочищеннаю Фракцию S-30, ко-

тогая в вольней неге отражает ситуации in vivo , так как в ней используются собственные ресурсы для биосинтеза ьелка, показало, что вклинение метки в продукт трансляции ниже в присутствии •ракции S-30, полученной из печени кроликов через 6-12 ч после ОКА, по сравнении с контролен (тавл. 7). Известно, что в первые сутки ин»аркта миокарда нарушается энергетический обмен не только в сердечной мывце, но и в печени. Логично предположить, что энергетическое Обеспечение велоксинтезирунией системы из печени после ОКА недостаточно для оптимального Функционирования трансляционного аппарата. Для проверки этого предположения было изучено включение I l^C ]лейцина в тотальный продукт трансляции при внесении в систем» различных количеств ATP, GTP и KP. Оказалось, что увеличение концентрации АТР приводит к повышении биосинтеза белка, который, однако, не достигает контрольного уровня, GTP

Таблица 7.

Включение 11 **С) лейцина в ТХУ-нераствориныл продукт трансляции в бесклеточных велоксинтезирующих системах из печени кроликов в норне и при локальной ишемии миокарда (пноль/1 o.a. S-30: М+га:

п=14-1В)

Зид

системы

Время инкуэгции, мин

Контроль _Время после ОКА, ч

6 12 24

Неочищенная 30 фракция S-30

Неочищенная 30 фракция S-30 + 60 мМ KP

Очищенная Фракция S-3Q

30

2,2t0,3 1,5±Q,3* 1,3+0,2 1,?+0,3" 5,2+0,6 7,1±0,7 7,9±1,0 6,7±1,0"

?,6±0,5 11,5±1,О" 14,310,7 12,0¿1,О

") Изменения статистически недостоверные (р > 0,05)

практически не влияет на уровень включения радиоактивной аминокислоты в продукт трансляции. В то же время при увеличении в инкубационной снеси концентрации КР биосинтез белка в системе, полученной из печени кроликов в различные сроки ОКА. возрастает и даже превышает контроль (табл. 7). Известно, что добавление КР вклнчает креатин®оСФОкиназную систему, которая поддерживает соотношение АДР/АТР и СОР/СТР н оптимальном уровне.

Одновременно в бесклеточных системах изучался и уровень биосинтеза индивидуального ьелка - сывороточного альбумина. Полученные данные (таьл. 0) свидетельствуют о том, что в бескле--

точной ьелоксинтеэиручвей системе, содержащей как очищении», так и неочижвнну» 8-30 фр акции, снижается уровень Биосинтеза аль-ьумима на протяжении первых суток после ОКА. Проведенное сравнительное определение радиоактивности продуктов трансляции, осамдаеиых иммунопреципитацией и ТХУ, показало, что уже начиная .с ¿ч после ОКА, уровень ьиосинтеэа алььумина в Бесклеточных бе-яоксинтеэирундих системах по отноиенин к уровни биосинтеза оькего ьеяка снижен. Следовательно, снижение абсолютного ьиосинтеэа алььупина наиболее выражено через 12 ч после ОКА, а относительный виосинтез этого Бел*а снижен во все изученные сроки. Это помет свидетельствовать о топ, что при локальной ишемии миокарда в печени происходит перераспределение уровней Биосинтеза отдельных Белков. Следует подчеркнуть, что даже при оптилэльмих концентрациях «оппонентов энергетической снеси аьсолмтны» и относительный биосинтез альбумина снижен.

Таблица В.

Е»ялчвнив I "С )лвйцина в алььукии, синтезированный в БвСК латочиоя БОЯОКСИНТОЗК?Ы™5гй с «С ТВ и с из печени КРОЛИКОВ в морпг и при локальной мвемии ииакард» (пмоль/о.е. 8-30; И+т;

п=0-1О>

Вид систем» Контроль Вт«*» после ОКй, ч

Ь 12 2<*

О^и^аииа» фр акция 3,2+0,2 5,0+0,2" 2,Ь+0,г 2,9+0,3"

Ивочтениа» «ракци» 2,^+0,2 2,1+0,2* 1,6+0,2 2,0+0,3"

&-30+4,0 им КР

"> Изменения статисяшк*« »»бос.тоойтие (р > о,05»

Таким Образота, сгтижем'гт овцеги згиопя ьиОСИптеза Бейка б гепатоцитах при шда кожи1» оыяснить недостатком энергетических ресурсов и, по всей вероятности, нап>»ениен оптимального соотношении ,АЛР/АТР и ББР/СТР. Однако снижение уровня биосинтеза сывороточного альбумина нельзя* обьяснить только этим фяктороЯ, Так как биосинтез данного белка происходит на меиьраносвяэанных рибосомах гепатоцитов, то изучался состав рибосоИнои фракции печени после ОКА. Результаты показали, что доля полисом в суммарном препарате рибосом несколько возрастала, в препарате свободных рибосом изменений практически не было, доля же полисом в препаратах мембраносвяэанных рибосом уменьшалась. Однако наи-

больший интерес представляет обнаруженное нами существенное изменение доли мемБрамосвязанных рибосом в облом пуле рибосом клеток печени. Оказалось« что если доля мемБраносвязанных рибосом в норме составляет 0,7±D,2, то через 6,12 и 24 ч после ОКА она снижается до Q,3l06t, 0,2ip,Z и 0,4¿.0,2 соответственно.

Таким оБразоМ) в печени при ОЗИМ имеит место перераспределение рибосомного материала между классами свободных и мемБраносвязанных рибосом и в пределах каждого из этих классов определенные изменения доли рибосом, непосредственно занятых в трансляции мРНК. Особто внимания заслуживает изменения, каса-ишиеся класса мембраносвязанных рибосом. Так как на этих рибосомах, в основном, синтезируется секретируеные Белки, а сывороточный альБУмин и является таковым, возникновение гипоаль-буминемии при локальной ишемии пиокагаа, по-видимому, в значительной мере связано с изменениями в классе мемБраносвязанных рибосом. Связывание рибосом с эндоплаэпатическим ретикулом может быть, в свои очередь, обусловлено целым рядом причин: изменением рибосомосвязываицеи способности самих мембран, наличием в цитоплазме де»»ектиемых молекул мРНК для секреторных белков и т. д. Эти вопросы тревумг дальнейшего эксперимента 1ьного исследования.

5. Изучение принципиальных возномностей коррекции нар у пения Биосинтеза б ел каьр ечени_11_мяокзрАе кРРликчп^леи орт?оа

экспериментально йиирм ии л.ио мс да» Один из подходов к нормализации метаболических нарушений о органах вследствие ишемии миокарда связан с усилением естественных адаптационных механизмов, на чем основано применение раз-яичных биологически активных векеств. К таким веществам относится, в частности, женьвень (Panax ginseng), который оказывает стимзлируивее влияние на Биосинтез белков и рибонуклеиновых кислот, обмен углеводов (Kimura И et al., 1981S Lu Z. -Q. t Dice J. p. , 1785). В связи с этим Была предпринята попытка нормализовать нарушения биосинтеза Белка в печени при локальной ишемии и аноксии миокарда с помощью Биомассы культивируемых клеток растения Polyaclas filicifolla Bailey, который произрастает в тропиках и используется как заменитель женьшеня. Биомасса культивируемых клеток растения Polysciaa íillcifolla Bailey была ли-Безио предоставлена зав. лаь. генетики клеточных популяций ИМБиГ АН УССР В. А. Кунахом.

Изучение профилактического и лечебного воздействий Биомассы проводили в двух вариантах экспериментов - пероральное введение (в течение 2 дней три раза в день по 13 мг биомассы и перед операцией - 26 мг) препарата кроликам перед ОКА и введение препарата в БЬФвр апя пегФУэии сердца свиньи при воспроизведении анок-сии. В первом варианте было изучено влияние введения препарата перед ОКА на следующие показатели: содержание нуклеиновых кислот и общего белка в постмитохондриальном и пострибосомном суперна-танте гомогената печени, уровень включения меченых предшественников в цитоллазиатические белки печени, биологическая активность тРНК1-®" и лейцил-тРНК-синтетазы. было обнаружено стабилизирующее действие предварительного введения биомассы Ро1узс1аз

Таблица 9

Влияние биомассы культивируемых клеток растения Polysclas flllcilolla Bailey на некоторые характеристики Белоксинте-зируючего аппарата печени при при локальной ишемии миокарда (И±ш: п= 5-12)

Показатель

Контроль

12 ч

после ОКА

12 ч

после ОКА +лолисциас

Акцепторная активность 3,3+0,2 суммарного препарата тРЖ (ниоль I 1'»С1леи-цина на 1 иг тРНК)

Лейцил-тРНК-синтетаэная 22,6+1,2 активность

(пмоль/I '^СЬеицина за 1 мин на 100 мкг белка)

Паст р иг ох о н аг_иа л к»..и ш. csastHiianxL

Уровень включения 315+16

1'''С¡аминокислот в ьелки .1имп. в пин на 1 кг Белка)

Ь . ПхГЧ, т

О,15+0,01

u и utt г панйе

«мг/иг ДНК)

отношение РНК/ДНК

Пветгир.осомныя. салаг MT»HT.L

Уровень включения 1269+24

( 14С)аминокислот в Белки 1инл. в мин на 1 мг Белка)

содержание Белка (мг/мг ДНК)

отношение РНК/ДНК

3,010,3 0,65+0,01

2,5+0,1

29,В±2,2

434+21

3,4+0.2 0,20+0,02

747+54

2,6+0,3* 0,59+0,0

4,9+0,2

3B,3±2,7

906+34

3,9+0,3* 0,12+0,01*

1206+37"

2,Bt0,2" 0,73+0,02

*) Изменения статистически недостоверные <р > 0,05)

2В

fillclfolJa Bailey на все перечисленные показатели эффективности

функционирования ьелоксинтеэирзпцего аппарата печени (табл.?).

/

Во втором варианте экспериментов было обнаружено протекторное действие испытуемого препарата на биологическую активность тРНК и АРСаэ (Ala, Glu, Leu, Ser) миокарда непосредственно при аноксии (рис.7). Следовательно, испытуеный препарат оказывает стабилиэирумнее действие на функциональна* активность компонентов велоксинтеэируилего аппарата гепатоцитов и кардиониоцитов при ОЗИМ. Эти результаты позволяют считать перспективными дальнейшие исследования с целы» использования биомассы Ро1узс1аз fillcifolia Bailey для нормализации белкового обмена в различных органах при ишемии миокарда. Кроме того, такие исследования должны быть направлены на изучение конкретных механизмов возействия препарата биомассы Polyaciaa fillcifolia

/о + 80 +60 +W +20 100 -20 -40 -60 -80

--тРНК-

Au Gio Itu Se»

1

"I в ш

Ala Glu Leu 5er 4-ДРСАЗЫ-'

ESI - КОНТРОЛЬ + ПРЕПАРАТ

сз - аноксия

ШШ - АКСКШЯ +ПРЕПАРАТ

Рис. 7. Влияние препарата б. эмассы Ро1увс1ав 1111с1(о11а Ва11ау на акцепторную активность тРНК и АРСазную активность миокарда, свиньи; за 100% принята активность тРНК и АРСаэ из нормального миокар да.

Bailay на Биосинтез Белка, выделение его наиболее активных компонентов и внедрение Результатов в клиническуи практику.

ВЫВОДЫ

I. Обнаружено изменение Функциональной активности компонентов > участвующих во внериьосомном этапе биосинтеза белка в миокарде при острой экспериментальной ишемии миокарда.

1. При 15- и 30-минутном аутолиэе сердца свиньи обнаружено снижение акцепторной активности тРНК миокарда по всем изученным аминокислотам (Ala ■ Gly, Glu, Leu, Ger) на 25—48/« связанное с появлением неактивных в аминоацилировании конформеров тРНК, ре-натурация которых возможна при прогревании в присутствии ионов магния.

2. АРСазная активность суммарных препаратов no Ala, Gly, Glu, Leu и Ser возрастает на 25-55% через 15 мин аутолиза и затем в Большинстве случаев резко снижается через 30 мин, максимально на 352 . В составе "больших" высокомолекулярных комплексов (Kg= 26-29S) через 15 пин обнаружен подъем активности ала-, глу-, лей- и серРС на 25-98/Í и снижение глиРС на 44Z, через 30 мин — аланил- и глицил-тРНК-синтетазные активности существенно снижены, а остальные находятся на уровне контроля. ГлиРС в процессе аутолиза сердца перераспределяется в низкомолекулярнум фракции.

3. Показано, что одной из причин увеличения АРСазноя активности высокомолекулярных комплексов при 15-минутном аутолиэе может быть одновременное увеличение активности пироФосФатазы, расвепляицей пиРОФОСФат - ионный ингибитор реакции аминоацилиро-

. вания.

ii. Установлено, что биологическая а«тиопост» tf¡¡¡< и АРСаз печени кроликов существенно изменяется при локальной ишемии миокарда - окклпзии коронарной артерии .

1. В первые сутки после ОКА (6,12, и 24 ч) навлидается снижение акцепторной активности тРНК по всем исследованным аминокислотам '(Gly, Glu, Leu, Ser, Phe), кроме аланина, на 1936% и восстановление до контрольного уровня на 3-й сутки.

2. Снижение акцепторной активности тРНК при ОКА не связано с активность» соответствушших АРСаз или меньшей сохранность* акцепторного кониа, а определяется появлением конформеров тРНК, неактивных а реакции аминоацилирования. Определены активационные

параметры их ренатурации in vitro, значение стандартной эпталь-пии активацими (12í> кДж/иоль) энергетически соответствует разрыву - образовании 5-6 водородных связей, что свидетельствует об умеренных изменениях пространственной организации неактивных •ори тРНК.

3. Суммарная АРСазная активность печени по всем изученным . аминокислотам, кроме аланина, увеличивается при ОКА на 20-00%: в основном, максимальное увеличение наелндается на 3-й сутки. 3 высокомолекулярных комплексах навлмдается повышение глчтамил-, лейцил- и лиэил-тРНК-синтетазных активностей ("короаыв" вермен-ты> и уменьшение глицил-, сеРил-тРНК-синтетаэных активностей ("периферические" Ферменты) за счет их выхода в растворимун фр акции.

4. Содержание эндогенных аминоацил-тРНК в печени in vivo при ОКА снижено е первые сутки, причем уровень снииения каюдого вида определяется, в основном, уменьшением акцепторной активности соответствуяцей тРНК и в ряде случаев выходом определенных АРСаз из высокомолекулярных комплексов.

III. Выделены в высокоочищенном состоянии препараты лейцил-тРНК-синтетаз из печени кролика и миокарда свиньи о норме и при острой экспериментальной ишемии миокарда, изучены их физихо-хипические, каталитические свойства и молекулярная активность, которые не отличантся о норме и патологии. В отяичиа от печени (105 кДа) очинённый миокардиальный Фермент характеризуется наличием двух форм - свободной (130 кДа) и прочно ассоциированной с другими Белками (840 кДа).

IV. Изучена велоксинтезирунщая способность миокарда кроликов при 15- и 30-минутном аутолизе. Обнаружено снижение скорости и уровня включения меченых предшественников в обдий Белок на 35X и 65Х соответственно и увеличение времени синтеза "средней" полипептидной цепи, причем эти изменения не связаны с энергетическим овеспечениеп и определянтся в основном нарушением функционального состояния рибосомной Фракции.

V. Обнаружено изменение ряда параметров биосинтеза Белка в печени кроликов при острой экспериментальной иаении миокарда.

1. Изучение овдего белка и альбумина в сыворотке крови по-* каэало, что их содержание ame через 12 4i после ОКА сникаете я на 202 и ЬОУ. соответственно, достигая минимума на 2-е сутки, и лишь к концу 3-х суток наьлндается тенденция к аосстгновлени».

2. Обнаружено, что одной из основных причин гипопротеинении и гипоальбуминении является нарушение белоксинтеэирующей функции гепатоцитов. Наряду со снижением включения in vivo печеных апи-нокислот в ьелки, в топ числе в сывороточный альбумин, установлено резкое удлинение (в 2 раза) времени синтеза "средней" полипептидной цепи,т. е. замедление процесса элонгации и/или терминации.

3. Использование различных видов бесклеточных белок-синтезирукдих систем из печени позволило установить, что уровень сунпарного биосинтеза белка при ОКА снижен в основном за счет недостатка энергетического обеспечения, в то время как падение биосинтеза альбумина только частично определяется этим »актором.

Обнаружены качественные изменения в рибосонном пуле гепатоцитов, причем снижение доли иембРаносвяэанных полисом через ¿-12 ч после ОКА помет быть основной причиной уменьвения биосинтеза альбумина, синтезируемого на этом классе полисом.

VI. Показана принципиальная возможность лекарственной направленной коррекции биосинтеза белка в миокарде и печени при острой экспериментальной иееиии миокарда. В профилактическом и лечебном отновении перспективным является использование биомассы, культивируемых клеток растения Polyaclaa tllicltolla Bailey.

Основные положения диссертации опубликованы в следующих работах:

1. Pri»3hkevlc?iiU3 ft, , LuKoahevlchius L. , Elaka A. Local myocardial ischemia and liver tRNA's acceptor activity //J. Hoi. Cell. Cardiol.-1778- Vol.10 <BJ , n. I. - P. 82

2. Лукоаявичис Л. Ю. . Цравкявичис А. К. , Пивормнайте И. И. , Ельская А, t». изучение nursui и зтапа ьвлксгсго Еигсимтсзг -печени при гипоксических состояниях, вызванных развитием экспериментального инфаркта миокарда// Вопросы биохимии патологических процессов (Эксперим. иедицина}5>. - Рига, 1777,- С, ЗЗ-ЗВ.

3. Луконявичюс Л. Ю. , Прашкявичюс А. К. , Пивормнайте И. W. , Данилявичюс И. С. Нуклеиновые кислоты, нуклеазы и аниноацил-тРНК-синтетазы печени кроликов в динамике развития экспериментального инфаркта миокарда //«единица,- Вильнюс, 1V77. - Т. 17. - С. 53-63.-(Науч. тр. вузов ЛитССР). - На лит. яз.

PraSkevi£lus A. , Burneckiene J. . LukoSeviCiua L. , 5lu3iene M. Restoration of biochemical processes In the myocardium and liver during acute period of experimental myocardial Infarction /J Abstract Xlth International Congress of Biochemistry.- Toronto, 1977.- P. 658.

5. Родовичис Г. A. , Мацкявичнс П. К. , Лукоеявичис П. №. , Пиворннайте И. Ю. , Прашкнвичнс А. К. Аминоацилирование тРНК печени кроликов в первые сутки эскпериментального инфаркта пиокарда // Реализация наследственной информации: Тез. к всесопэ. сиппоэ. -Паланга, 1780.- С. 83.

6. Коваленко П. й. . Луковявичвс Л. Ю. , Ельская А. В. &1олог1чна активн1сть тРНК 1 АРСаэ при патолог1чних станах // Тез. IV Укр. б ioх 1ft. эЧэйч. - Ки1в, 1702.- Т. I.- С. 5В.

7. Лукошявичюс Л. Ю. , Коваленко И. И. , Иванов П. Л. , Праикявичис А. К. , Родовичис Г. А. ■ Ельская А. В. Экспериментальная ишемия пиокарда: изменение активности компонентов аппарата трансляции // Повреждение и регуляторные процессы организма: Тез. докл. III Всесонз. сьезда пато»иэиологое. - П., 1782.- С. 13В-137.

0. Прашкявичис А. К. , Лукоиявичис Л. Ю. , Коваленко Г1. И. , Ельская А. В. Влияние Развития экспериментального инфаркта миокарда на акцепторную активность тРНК печени кроликов и Кардиология,- 17(32. - Т. 22, No. 12. - С. 105.

7. Родовичюс Г. А. , Коваленко (1. И. , Иванов Л. Л. , Луковявичис Л. 10. , Ельская А. В. Апиноацип-тРНК-синтетаэы печени кроликов при экспериментальном иноаркте миокарда // Докл. АН УССР. Сер. Б. -1782, No. 4,- С. ¿3-65.

10. Иванов Л. Л. , Лукошявичюс Л. И). , Коваленко М. И. , Ьагдонайте 0. Л. , Лекис А. В. , Праакявичюс А. К. , Ельская А. В. Изучение комплексов аминоацил-тРНК-синтетаэ печени кролика при экспериментальном ин®аркте пиокарда // Укр. ьиохим.журн. - 1783. - Т. 55. No. 3. - С. 360-371.

11. Лукошявичюс Л. И. , Родовичнс Г. А.. , Коваленко М. И. , Пиворннайте И. №. , Праикявичис А. К. , Ельская А. В. тРНК и аминоацил-тРНК-синтетазы печени кроликов при экспериментальном ин»аркте миокарда // Вопр. мед. химии. - 1783. - No. - С. 6569.

12. Тамчлявичис А.-А.й. , Прашкяеичис А. К. , Луковявичис Л. К). , Иванов Л. Л. Аниноацил-тРНК-синтетазные активности экс-

трактов миокарда. в состав« комплексов при автолизе сердца свиньи // Метаболизм, структура и функция сердечной клетки: Тез. II всесонз. симлоз. - Ташкент, 1983. - С. 3?.

13. Praäfcevlöius А. К. , LukoäevlClua U J. , Ivanov L. L. , Biskaja A. V. High molecular weight aminoacyl-tRNA synthetases complexes during experimental Ischemia of the myocardium // Abstracts cf Communication of the XV FEBS Meeting. - Brüssel, 19B3. - P. 17?.

14. Иванов Л. Л. , Тапулявичнс fi.-А. , Лукошявичис Л. И. , Коваленко П. И. , Родовичис Г. А. , Праикявичис А. К. Аминоацил-тРИК-синтетаэы и их высокомолекулярные комплексы ' при экспериментальной ишемии миокарда // Молекулярная биология. - 19В<». -

т. ib, no. s. - с. izzb-izzi.

15. Коваленко П. И. , Родовичнс Г. А. , Таиуляеичмс А. -А. й. , Пивормнайте И. Ю. , Лукошявичис Л. Ю. , Лрашкявичмс А. К. Изучение молекулярных основ нарушения биосинтеза белка при экспериментальном инфаркте миокарда и аутолизе миокарда// Молекулярная биология: Респ. пежведомств. сб. науч. тр. - Киев, 1904. - Вып. 37. - С. 18-21.

16. Лекис R. В. , Потапов А.П.*, Лукошявичис Л. Ю. Изменения в пуле рибосом печени кроликов в ранние сроки экспериментального инФагкта миокарда // Там же.' - С. 22-25.

17. Иванов /i. П. , Сталуленис P.P., Лукошявичис Л. ю. Выделение и характеристика лейцил-тРНК-синтетаэы из тканей плекопитаииих // Биополимеры и клетка. - 1*?В5. - Т. 1, No. 3. -С. 15i»-15b.

16. Лекис А. В. , Булдакова О. В. , Коваленко М. И. , Лукошявичис . Л. №. , Прашкявичпс А. К. , Ельская A.B. Белоксинтеэируидая функция ПкЧбпИ Хголигсг пги экспггипгктгяьно« ин»ар*т» миокарда // Бил. эксперим. биологии и медицины. - 1V85. - T. U9, Но. 1. - С. 5760.

19. Лекис A.B., Коваленко И. И. , Лукошяеичмс Л. Ю. , Прашклвичмс А. К. , Ельская A.B. Биосинтез белка в печени кроликов при экспериментальном инфаркте миокарда // ,Докя. АН УССР. Свр. Б. - 1V05. - No. 6. - С. 60-6"?.

20. Лекис A.B., Лукошявичис Л. W. • Коваленко П. И. , Булдакова C.B. Изучение молекулярных механизмов гипоальбуиинемии на модели экспериментального инФаркта миокарда // Биополимеры и клетка. -176S. - Т. 1, No. 6. -"С. 322-327.

3ù

21. Праакявичис А. < Сталиор аятите Е. « Виткус А. , Чапонис И. < Стропус Р. . Лукошявичис Л. , Толейкис А. , Луьите И. Теоретические, экспериментальные (Биохимические и морфологические) и патолого-анатомические исследования иаепической болезни сердца в Каунасском медицинском институте // Медицина. - Вильнмс. 1785. -Т. 24. - С. 128-146. - (Науч. тр. вузов ЛитССР). - На лит. яз.

22. Тамулявичис А. -А. й. . Иванов Л. Л. , Лукоаявичнс Л. Ю. , Праакявичис А. К. Аминоацил-тРНК-синтетаэы и их высокомолекулярные комплексы при аутолизе сердца свиньи // Вопр. мед. химии. - 1985. - Т. 35. - No. 5. - С. 104-107.

23. Лукоаявичнс Л. Исследование Биологической активности тРНК печени у кроликов при острой недостаточности на модели ишемии миокарда ft Медицина. - Вильнмс. 19В6. - Т. 25. - С. 313. - (Науч. тр. вузов ЛитССР).

24. Лукоаявичнс Л. > Родоеичис Г. ■ Праакявичис А. . Иванов Л. Влияние острой коронарной недостаточности на содержание эндогенных аминоацил-тРНК в печени кролика на модели ишемии миокарда // Медицина. - Вильмис, 1986. - Т. 25. - С. 14-22. -(Науч. тр. вузов ЛитССР).

25. Славинскене Р. К). , Лукоаявичнс Л.№. , Кунах В. А. . Слепян Л. И. , Коваленко М. И. , Иванов Л. Л. Влияние Биомассы культивируемых клеток Polysclaa flllcifolla Bailey на активность тРНК и аминоацил-тРНК-синтетаэ печени кроликов при экспериментальном ин»аркте миокарда // Биополимеры и клетка. 1986. - Т. 2, No. 3. - С. 152-153.

26. Стапуленис P.P.. Иванов Л. Л. . Лукошявичшс Л. И. . Ярмоленко В. В. . Правкявичис А. К. Очистка и свойства двух форм лейцил-тРНК-синтетаэы иэ миокарда свиньи // Биополимеры и клетка. - 19В6. - Т. 2, No. 6. - С. 302-307.

27. Тамулявичмс А.-А.й. . Каяаускас А.П. , Лукоаявичнс Л. Ю. , Пяашкявичис А.К. Молекулярные основы нарушения Биосинтеза Белка е поврежденной сердечной иыаце // Тез. стендовых coos». V Всёсоиз. биохим. сьеэда. - М. , 1986. - Т. 2. - С. 310.

2В. Лукоиявичис Л. Биохипия ишемического повреждения миокарда ft Клиническая »иохимия: Учевник для мед. вузов /Праакявичис А., Лукоаявичнс Л.) Астравскас В. и др.: Под ред. А. Праакявичис». - Вильнис, 19В7. - С. 168-184. - На лит. яз.

29. Tamulavieiua А. -A. J. , Stapullonia R. R. , LukoSeviSi'ua L. J. , KaSauskas A. P. Biological activity of tranafar RMAa ana

»

aminoacyl-tRNA aynthetaaes In iechemlc and anoxic pig myocardium // XXXII zjazd Polsklego towarzystwa biochemlcznego. Blalystok, 1787. - P. 157-157.

30. Каваускас Д. П. , Тамулявичис А.-А. й. , Луковявичис Л. И. , Иванов Л. И. , Лравкявиччс А. К. Биологическая активность тРНК и аминоацил-тРНК-синтетаз миокарда свиньи при аноксии и по-следучаей реоксигенации // Вопр. мед. химии. - 17ВВ. - Т. 34, No. 2. - С. 84-86.

31. Лекис A.B., Маванаускас Т.К., Иванов Л. Л. , Кунах В. А. , Коваленко М. й. , Лукояявичис Л. И. , Правкявичнс А. К. , Ельская A.B. Влияние культивируемых клеток полисциаса на Биосинтез Белка в печени кроликов // Хим. -»армац. юзрн. - 17ВВ. - Т. 22, No. 8. -С. 770-773.

32. Лукоаявичис Л. , Иванов Л.а.Родовичмс Г. , Стапуленис Р. Экспериментальная ишемия миокарда: Функциональные особенности аминоацил-тРНК-синтетаз печени кроликов// Биохимия и морфология тканей сердца и других органов в условиях гипоксии : Сб. науч. тр./ Под ред. А. Прашк явичмса. - Вильнмс, 19В8. - С. 77-107.

33. Луковявичнс Л. , Родовичпс Г. , Негруцкий Б. :. Термодинамические характеристики конформационных переходов тРНК печени кроликов при экспериментальном ин*аркте миокарда // Там же. - С. 122-131.

34. Касколпнас Р. , Луковявичнс Л. , Лекис А. , Иаванаускас Т., Позурэйтис Р. Изучение синтеза Белка в Бесклеточных ьелоксинтезирунщих системах из миокарда и печени при ивемии миокарда // Таи те. - С. 10Q-114.

35. Оавкявичис А. ■ Тамзлявичпс А.-А. , Луковявичмс Л.

Тв ^4СЛЛЛТ|К'П лщ.. .. -nilW ----------

• • .o.x.f > <■■". I . >0 w f I ..п Il«.lll.u«<e ft Plw #> V t В* П В|1.1ПивЦГ1Л ~ I Г I lr\~l. ПП 1С IttJM

при аутолизе сердца свиньи // Таи же. - С. 115-121.

36. Llekls А. , Ivanov u L. , Martinkus Z. , LukoSeviClua L. , Praäkevitflus A. The liver translation machinery state during myocardial Ischemia // Abstracts 14th International Congress of Biochemistry. - Praque, 17B8. - Fr. 533.

(^XxJUfuA-x—^

э

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ АРСаза - аминоацил-тРНК-синтетаза КР - кгеатин*ос*ат КФК - креатин»ос«окиназа ЛеяРС - яейцил-тРНК-еинтетаза ОКА - окклюзия коронарной артерии ОЗИМ - острая экспериментальная ивепия миокарда ПААГ - полиакрилапидный гель яРНК - матричная рибонуклеиновая кислота тРНК - транспогтная рибонуклеиновая кислота TPHKLeu- тРНК, специ»ична» к лейцину ТХУ - трихяоруксусная кислота ADP - аденозин-5'-ди»ос»ат АТР - аденозин-5'-триФОС»ат СТР - цитозиН-5'-три*ос»ат GDP - гуаноэин-5'-дифосфэт GTP - гэанозин-5'-три»ос»ат

Институт биохимии им. А. В. Палладии»

АН УССР, Лукоеявичюс Ляонардас Юоэович Функциональные особенности аппарата трансляции печени и миокарда пги острой экспериментальной ишемии миокарда Подписано к печати 15 декабря 1?ВВг. ЛВ 00327. Бумага типографическая 60 х 84 1/16. тираж 100 экэ. Заказ 2036, зся. печ. 1,9 Бесплатно.

Отпечатано ротапринтов ь центре назчно-технической информации и патентных услуг. 232000, Вильнюс, Тотори 27.