Физиологический анализ действия яда саламандры на систему крови крыс в норме и при экспериментальном лучевом поражении

Овощникова, Лада Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Физиологический анализ действия яда саламандры на систему крови крыс в норме и при экспериментальном лучевом поражении
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Физиологический анализ действия яда саламандры на систему крови крыс в норме и при экспериментальном лучевом поражении"

На правах рукописи

ОВОЩНИКОВА Лада Владимировна

ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ДЕЙСТВИЯ ЯДА САЛАМАНДРЫ НА СИСТЕМУ КРОВИ КРЫС В НОРМЕ И ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ЛУЧЕВОМ ПОРАЖЕНИИ

03.00.13. - физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Нижний Новгород 2004

Работа выполнена на кафедре физиологии и биохимии человека и животных Нижегородского государственного университета им. Н. И. Лобачевского

Научный руководитель:

Кандидат биологических наук, доцент А.С. Корягин Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, профессор Д.Б. Гелашвили Доктор медицинских наук Ю.В. Зимин

Ведущая организация:

Нижегородская государственная медицинская академия

Защита состоится

¿¿¿С

2004 г. в

часов на

заседании диссертационного совета К 212.166.02 Нижегородского государственного университета им Н.И. Лобачевского (603950, Нижний Новгород, пр. Гагарина, 23)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ННГУ

Автореферат разослан

/О ^¿¿кЛл+М.—

2004 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета, к. б. н., доц.

И.Ф. Александрова

Общая характеристика работы •

Актуальность проблемы

Действие зоотоксинов, вырабатываемых ядовитыми животными, давно привлекает- внимание исследователей и врачей. Для большинства животных ядов характерна высокая биологическая активность и разностороннее действие на организм. Они обладают неспецифической активностью, поскольку являются многокомпонентными системами и одновременно воздействуют на многие регуляторные системы организма, что может быть использовано при лечении заболеваний разного - патогенеза, а также для целенаправленного повышения резистентности организма человека и животных к действию повреждающих факторов внешней среды. Большинство исследований посвящено изучению механизмов действия < ядов пчел, змей, жаб на функциональные системы организма (Артемов, 1969; Крылов,* 1990; Орлов, Вальцева, 1979). Систематических исследований по влиянию яда саламандры на организм животных и его интегративные системы не проводилось. В единичных работах показано центральное нейротропное действие этого яда (Крылов, Ошевенский, 1984; Гелашвили< и др., 1985). Не проводилось и прикладных исследований, в которых бы обосновывалась возможность применения зоотоксина как адаптогена, как стимулятора резистентности к действию экстремальных факторов среды, в том числе и ионизирующей радиации.

Повышение радиоустойчивости биологических объектов является одной из центральных проблем современной радиобиологии. Высокая биологическая активность ионизирующих излучений, потенциальная опасность ближайших и отдаленных неблагоприятных последствий его влияния на здоровье, как показала авария на ЧАЭС, определяют необходимость поиска эффективных средств защиты организма от повреждающего действия радиации, а также для терапии лучевой болезни. Действие ионизирующего излучения на человека и животных сопровождается развитием острой лучевой болезни, особенно изменяется картина системы крови, происходит поражение кроветворных ростков костного мозга (Балуда и др., 1986), возникает повреждение генетического аппарата клеток (Пяткин, Баранов, 1980). Взаимосвязь радиации и перекисного окисления липидов составляет сущность процесса лучевого поражения клетки организма, лежит в основе многих механизмов реакции живой системы на лучевое воздействие (Барабой, 1991).

К настоящему времени установлено радиозащитное действие многих химических соединений, большинство из которых, будучи введенными в организм перед облучением, увеличивают выживаемость животных и облегчают течение лучевой болезни (Романцев и др., 1980; Владимиров и др., 1989). Сравнительно недавно среди профилактических противолучевых средств была выделена группа стимуляторов радиорезистентности, куда относятся вещества, повышающие устойчивость организма к облучению в сублетальных дозах, вызывающих костномозговую форму лучевой болезни. Эти вещества

проявляют защитные свойства» как, в условиях

лечебного применения. Сюда относятся витамины, гормоны, продукты пчеловодства, некоторые зоотоксины (Легеза, Владимиров, 1998).

Изучено комплексное действие на организм пчелиного яда (Артемов, 1975; Корягин и др., 2000), жабьего яда (Орлов, Конькова, 1978) и ионизирующего излучения. Целенаправленного изучения противолучевых свойств яда саламандры не проводилось. Обычно зоотоксины вводятся в организм однократно в дозах, близких к летальным. Это приводит к возникновению- стресс-реакции и развитию фазы резистентности общего адаптационного синдрома, которая характеризуется повышенной устойчивостью организма к повреждающему действию радиации. Необходимо отметить, что при стрессе наряду с элементами защиты возникают элементы повреждения. В настоящее время в литературе имеются сведения о существовании других адаптационных реакций, которые развиваются в ответ на раздражители меньшей величины, чем стрессорные. Реакция на слабые воздействия - реакция тренировки, реакция на воздействие средней силы -реакция активации. При многократном действии такие раздражители способны вызывать физиологическим путем повышение неспецифической резистентности, то есть повышенную сопротивляемость организма к повреждающим факторам внешней и внутренней среды. Важно и то, что слабые раздражители могут вызывать благоприятные для организма реакции даже на фоне действия патогенных раздражителей, на фоне течения болезни (Гаркави, 1998). В настоящей работе исследовалось влияние малых доз яда саламандры пятнистой Salamandra Salamandra L. на систему крови и кроветворения крыс при его многократном введении, а также комплексное действие зоотоксина и у-излучения.

Цель и задачи исследований

Изучение радиозащитных и терапевтических свойств малых доз яда саламандры на модели костномозговой формы лучевой болезни и длительности состояния радиорезистентности, возникающего при действии зоотоксина на систему крови

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. исследовать действие малых доз яда саламандры при его курсовом введении на состояние периферической крови, костного мозга и перекисного окисления липидов интактных животных

2. выявить радиозащитные свойства яда саламандры на систему крови крыс, а также показатели перекисного окисления липидов при его многократном введении в различных дозах до -облучения

3. определить длительность состояния радиорезистентности, возникающего при хроническом введении в организм крыс яда саламандры в малых дозах, оценивая динамику изменения показателей белой крови, костного мозга, а так же выживаемость лабораторных животных

4. изучить терапевтические свойства яда саламандры на модели

• костномозговой формы лучевой болезни по показателям периферической

крови и костного мозга, а также активности свободнорадикальных процессов

Научная новизна

Получены новые данные, свидетельствующие о влиянии на организм животных хронического введения яда саламандры в малых дозах в норме и при экспериментальном лучевом поражении. Впервые установлено, что курсовое введение яда саламандры тормозит скорость пролиферации клеток костного мозга, что может быть одним из механизмов, приводящих к развитию радиорезистентности гемопоэтических клеток. Выявлены радиозащитные свойства яда саламандры, о чем свидетельствует достоверно более высокое содержание в крови облученных животных форменных элементов, нормализация процессов кроветворения, снижение активности свободнорадикальных процессов по сравнению с животными контрольных групп. Показано, что состояние радиорезистентности, которое возникает вследствие многократного введения яда в малых дозах, сохраняется в течение длительного времени (до 1 месяца). Проведенные исследования по изучению терапевтических свойств зоотоксина показали, что яд саламандры облегчает течение костномозговой формы лучевой болезни, стимулируя восстановительные процессы в системе крови и кроветворения.

Научно-практическая значимость

Выявленные радиозащитные свойства яда саламандры на систему крови и кроветворения предполагают возможность создания на его основе препаратов, повышающих радиорезистентность организма, с целью их применения в профилактике и терапии лучевых поражений. Проведенные исследования позволяют предполагать использование яда саламандры как адаптогена, стимулирующего резистентность и к другим экстремальным повреждающим факторам внешней среды.

Апробация работы

По теме диссертации опубликовано 7 работ. Основные положения, доложены на II международной конференции молодых студентов и ученых (Самара, 2001), на Пироговской студенческой научной конференции (Москва, 2002), на IX международной конференции студентов и аспирантов и молодых ученых "Ломоносов" (Москва, 2002), на VI Пущинской конференции молодых ученых "Биология-наука 21-го века" (Пущино, 2002), на международной научной конференции "Зоологические исследования регионов России и сопредельных территорий" (Нижний Новгород, 2002), на второй научной городской межвузовской конференции (Нижний Новгород, 2003), на заседании Нижегородского отделения Российского биохимического общества (2003), на

расширенном заседании кафедры физиологии и биохимии человека и животных ННГУ (2003).

Структура и объем диссертации

Материалы диссертации изложены m 4U? i н и ц а х машинописного текста, иллюстрированытаблицами и х>/&У н к а м и . Работа состоит из введения, обзора литературы, характеристики материалов и методов исследования, глав результатов исследования, обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, содержащего источника, из которых

ify на иностранных языках

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа была выполнена на 380 нелинейных белых крысах обоего пола массой 150-180 г. Были проведены 4 серии экспериментов в опытах in vivo. Общее распределение животных по сериям представлено в табл.1

Первая серия экспериментов была направлена на изучение действия яда саламандры на систему крови интактных животных. Яд саламандры растворяли в 12 % этаноле. Яд вводили внутрибрюшинно в дозах 0,25; 0,5 мг/кг в течение 7 дней с периодичностью 1 раз в сутки. Контрольным животным вводился эквивалентный объем растворителя в те же сроки. Кровь для анализа брали на 1, 8, 15 сутки после окончания инъекций из подъязычной вены. В крови определяли содержание эритроцитов, ретикулоцитов, гемоглобина, лейкоцитов, лейкоцитарную формулу, концентрацию продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ). Костный мозг для анализа количественного состава и митотического индекса кроветворных клеток забирали из бедренной кости на следующие сутки после курсового введения яда.

Во второй серии экспериментов исследовали радиопротекторные свойства яда саламандры. Яд саламандры вводили многократно (в течение 7 суток) перед облучением с периодичностью 1 раз в сутки, последнее введение -за 1 час до облучения. Введение осуществлялось внутрибрюшинно в дозах 0,25; 0,5 мг/кг для морфологического анализа крови; 0,5 мг/кг - для анализа ПОЛ. Контрольным животным вводился эквивалентный объем растворителя в те же сроки. Далее животных всех групп подвергали однократному тотальному у-облучению на терапевтической установке отделения лучевой

терапии городского онкологического центра в дозе 5 Гр (мощность облучения -1 Гр/мин). Облучение в дозе 5 Гр инициировало у экспериментальных животных развитие острой костномозговой формы лучевой болезни (Ярмоненко, 1984; Ботяков, 2001). Кровь для анализа брали на 1, 8, 15, 22 и 29 сутки после облучения. В периферической крови определяли содержание гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, молекулярных продуктов ПОЛ.

Таблица 1

Общее количество экспериментальных животных и их распределение по _сериям опытов._

Этапы исследований Исследуемые показатели Количество

животных

1. Изучение действия яда морфологический анализ крови; 40

саламандры на организм анализ продуктов ПОЛ; 40

интактных животных количественный состав и 30

митотический индекс клеток

костного мозга;

2. Изучение радиопротек- морфологический анализ крови; 40

торных свойств яда анализ подуктов ПОЛ; 40

саламандры (многократное количественный состав и 40

введение перед митотический индекс клеток

облучением) костного мозга;

3. Изучение морфологический анализ крови; 40

продолжительности выживаемость животных; 50

состояния количественный состав и 40

радиорезистентности митотический индекс клеток

костного мозга;

4. Изучение терапевтичес- морфологический анализ крови; 40

ких свойств яда анализ продуктов ПОЛ; 40

саламандры (многократное количественный состав и 80

введение после облучения) митотический индекс клеток

костного мозга;

В третьей серии экспериментов изучали продолжительность стадии радиорезистентности. Для этого яд вводился в дозе 0,5 мг/кг при условиях указанных выше. Животные были разделены на 4 группы: I группа облучалась через неделю после окончания инъекций; 2 группа - через 2 недели; 3 группа -через 3 недели; 4 группа - через 4 недели. Облучение проводили в дозе 3 Гр. Забор крови производили на 1-е сутки после облучения. В крови определяли общее количество лейкоцитов. Контрольной группой сравнения служили облученные животные, которым вводили растворитель, а также животные, которым предварительные инъекции не проводили. Кроме того, были проведены исследования по изучению состояния устойчивости животных к летальным дозам радиации в различные сроки при предварительном многократном введении яда саламандры. Для этого животных соответствующих опытных и контрольных групп облучали через 2 и 3 недели после окончания инъекций. В качестве дополнительного контроля служили животные, подвергшиеся только облучению. Животных однократно облучили в дозе 8 Гр, после этого в течение 30 суток наблюдали за их выживаемостью.

В четвертой серии изучались терапевтические свойства яда саламандры на модели острой лучевой болезни. Для этого животных предварительно

подвергали однократному действию у-излучения в дозе 5 Гр, инициируя развитие костномозговой формы лучевой болезни, а затем внутрибрюшинно вводили яд саламандры в дозах 0,25 мг/кг и 0,5 мг/кг. Контрольным животным вводили растворитель. Терапия проводилась в течение 7 суток, первая инъекция - через 1 час после облучения. Кровь для анализа брали на 8, 15, 22 и 29 сутки после окончания лечения, определяя те же гематологические показатели, что и в первой серии.

Для анализа костного мозга во всех сериях яд саламандры вводился в дозе 0,5 мг/кг. Животных облучали в дозе 3 Гр, так как облучение в дозе 5 Гр приводит к сильному разрушению клеток, что делает невозможным проведение анализа. Определялось общее количество клеток костного мозга и митотический индекс. Костный мозг забирали на 1-е сутки после облучения -во второй и третьей сериях, на 1-е и 29-е сутки после облучения - в четвертой серии.

В работе использовали общепринятые методы анализа: унифицированный колориметрический метод определения количества эритроцитов; унифицированный гемоглобинцианидный метод определения количества - гемоглобина; определение количества ретикулоцитов методом окрашенных мазков (Кост, 1975); определение количества лейкоцитов в камере Горяева; анализ процентного соотношения различных форм лейкоцитов (Меньшиков, 1987); спектрофотометрическое определение концентрации диеновых, триеновых конъюгатов и оснований Шиффа спектрофлюориметрическим методом (Fletcher, 1973). Костный мозг выделяли из бедренной кости крыс. В камере Горяева определяли общее количество клеток красного костного мозга одной бедренной кости (Горизонтов, 1984). При цитогенетическом исследовании на окрашенных препаратах костного мозга подсчитывали количество метафазных пластинок для определения митотического индекса (°/оо) (Методы ..., 1974).

Результаты исследований обрабатывали с использованием t-критерия Стьюдента. Обработка данных осуществлялась на персональном компьютере с помощью программы BIOSTAT. При расчете Т-критерия Стьюдента применяли поправку Бонферрони, позволяющую устранить ошибку первого рода, возникающую при сравнении более чем двух выборок данным методом (Гланц, 1998).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Изучение действия яда саламандры на организм интактных животных

Как показали наши исследования, при курсовом введении яда саламандры в дозе 0,5 мг/кг на первые сутки после окончания инъекций изменялась лейкоцитарная формула: увеличивался процент лимфоцитов до верхних границ нормы и снижалось относительное количество сегментоядерных нейтрофилов до нижних границ нормы (табл. 2). Это свидетельствует о том, что многократное действие яда в дозе 0,5 мг/кг приводит к формированию неспецифической реакции устойчивой активации,

при которой организм аналогично стадии резистентности стресса приобретает устойчивость к самым разнообразным неблагоприятным факторам, в том числе и радиации. Однако данная резистентность, в отличие от стресса, достигается не путем повреждения, а в результате гармоничного повышения активности всех защитных систем организма таких, как иммунной, гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой, антиоксидантной (Гаркави и др., 1995; Гаркави и др., 1998; Меерсон, 1993).

Изменения лейкоцитарной формулы при использовании дозы 0,25 мг/кг — увеличение числа нейтрофилов и снижение количества лимфоцитов -свидетельствуют о развитии у животных другой неспецифической реакции -тренировки, возникающей при действии слабых раздражителей, которая также приводит к появлению состояния устойчивости.

Таблица 2

Динамика изменения относительного количества лимфоцитов и нейтрофилов

(%) при введении яда саламандры

Показатель Интактные животные Группы Время после окончания введения яда (сут)

1 8 15

Лимфоциты, % 67,8310,45 Контроль 0,25мг/кг 0,5 мг/кг 65,50±1,40 62,ООН,03 # 75,5011,04#* 71,5011,88» 72,00Ю,58 # 75,75Н,49#* 76,00Ю,91 # 59.2011.86#* 65,0011,08*

Ссгменто-ядерные нейтрофилы, % 27,1710,79 Контроль 0,25мг/кг 0,5 мг/кг 31,67±1,03# 35,00±1,32 # 20,25±0,75#* 27,8311,08 24,5010,56 31.00+0,91« 21,5011.04 # 37,20+1,83# 32.25Ю.63*

Примечание: # -р<0,05 по сравнению с интактными животными

* - р<0,05 по сравнению с контролем.

Исследования свободнорадикальных процессов интактных животных показали, что введение яда в начальный момент времени приводит к активации перекисного окисления липидов. На первые сутки после окончания введения яда происходит достоверное увеличение в плазме крови животных опытных групп содержания диеновых конъюгатов, триеновых конъюгатов и оснований Шиффа. Повышение их концентрации связано с активацией системы цитохром Р450, направленной на обезвреживание ксенобиотиков, какими являются стероидные компоненты яда. По-видимому, это сопровождается индукцией ферментов эндогенной антиоксидантной защиты и увеличением мощности антиоксидантной системы, так как к концу эксперимента уровень продуктов пероксидации снижается и в опытной группе, с применением дозы 0,5 мг/кг, не отличается от значений интактных животных (рис. 1). Возможно, такая усиленная эндогенная антиоксидантная система будет активно ингибировать процессы ПОЛ при последующем действии ионизирующего излучения.

Результаты показали, что курсовое введение яда в дозе 0,5 мг/кг достоверно снижало митотический индекс (табл. 3). По-видимому, яд саламандры при многократном введении в малых дозах приводит к активации гипоталамо - гипофизарно - надпочечниковой системы и, как следствие, к увеличению концентрации глюкокортикоидов в крови (Гаркави и др., 1995), которые ингибируют процессы пролиферации (Горизонтов, 1974; Балаж, Блажек, 1982; Cohen, 1989; Kaspers et al., 1993). Можно полагать, что это также

приведет к повышению радиорезистентности, так как известно, что неделящиеся клетки наиболее устойчивы к действию радиации (Ярмоненко, 1989).

I 8 15

сутки после окон чан ия □ контроль В10,25 мг/кг Ш0,5 мг/кг введения яда

Рис. 1 Изменение содержания диеновых конъюгатов при введении яда саламандры интактным животным

Примечание: здесь и в остальных рисунках: # - р<0,05 по сравнению с интактными животными

по сравнению с контролем

Таблица 3

Влияние яда саламандры на количество клеток красного костного мозга _крыс и митотический индекс_

Условия проведения опыта Количество клеток костного мозга (х 10 6) Митотический индекс (%>)

Интактные животные л 14,28+0,24 23,30±5,00

Яд саламандры 12,43±0,93 5,50±1,90#

# - р<0,05 по сравнению с интактными животными

Исследование радиозащитных свойств яда саламандры

Выраженный радиозащитный эффект выявился при исследовании белой крови. В контрольной группе животных после облучения наблюдалась резкая лейкопения, достигнувшая своего максимума (43 % от исходного уровня) к концу второй недели после облучения. В дальнейшем восстановления-количества лейкоцитов до исходного уровня не произошло и к концу исследуемого периода составило лишь 55 % по отношению к норме (табл. 4).

У животных, которым вводили яд саламандры, изменения в количестве лейкоцитов были менее выражены. Во всех опытных группах наибольшее снижение числа лейкоцитов наблюдалось на 15-е сутки после'облучения. К концу эксперимента показатель вернулся к норме и не отличался от уровня интактных животных (р<0,05).

Как известно, костномозговая форма лучевой болезни сопровождается снижением количества форменных элементов крови (Лыков и др., 1998). Это снижение происходит не столько из-за непосредственной гибели клеток, циркулирующих в крови, так как зрелые форменные элементы крови относительно радиорезистентны, а за счет нарушения гемопоэза в кроветворных органах (Жербин, Чухловин, 1989). Проведенные исследования показали, что действие радиации в дозе 3 Гр приводит к поражению системы кроветворения красного костного мозга. Общее количество клеток костного мозга у контрольных животных снизилось на 36 % от исходного уровня. В опытных группах животных, которым предварительно вводили яд саламандры, гибель кроветворных клеток была достоверно ниже, чем в контроле (р < 0,05) (табл. 5).

Таблица 4

Изменение количества лейкоцитов (109 кл/л) в крови облученных животных при

предварительном введении яда саламандры

Группа Интактные животные Время после облучения (сут)

1 8 15 22 29

контроль 9,8510,38 8,70±0,28 5,34±0,60 # 4,25±0,19# 4,5210,20 # 5.43±0.37 и

Яд (0,25 мг/кг) 9,8510,38 10,3810,20 • 8,8810,34 * 7,9±0,27 Ч 8,9810,38 * 9,4310.53 »

Яд (0,5 мг/кг) 9,85±0,38 9,8410,19* 8,5 ±0,80 • 6,6±0,59 7,08±0,5 *# 8,7510.72 ♦

Примечание: # -р<0,05 по сравнению с интактными животными

»- р<0,05 по сравнению с контролем.

Действие ионизирующей радиации сопровождалось угнетением пролиферативной активности клеток костного мозга, о чем свидетельствовало снижение митотического индекса клеток в контроле в 2 раза по сравнению с интактными животными. У животных, которым вводили яд саламандры, угнетения пролиферации кроветворных клеток практически не наблюдалось.

Возможно, что повышение радиоустойчивости костного мозга обусловлено снижением митотической активности в кроветворной ткани при многократном введении яда саламандры (таб. 3) через механизмы реакции активации, вызывающей повышение уровня глюкокортикоидов в крови (Гаркави и др., 1995). Выжившие клетки затем увеличивают свою митотическую активность, что видно из полученных результатов (таб. 5).

Одним из главных повреждающих механизмов радиации, особенно в начальный период лучевого поражения, является интенсификация свободнорадикальных процессов, что приводит к повреждению

информационных макромолекул, накоплению токсичных продуктов и нарушению функций мембран (Kadiгi, WafT, 1990).

Таблица 5

Влияние профилактического введения яда саламандры на общее количество клеток костного мозга и митотический индекс на первые сутки после у-

облучения

Условия проведения опыта Количество клеток костного мозга (х 10 6) Митотический индекс <%»)

Интактные животные 14,28±0,24 23,0±1,0

Контроль (облучение) 9,13±0,15 # 12,0±1,0#

Яд саламандры 12,22+0,12 *# 21,0±2,0 *

Контроль (12 % этанол) 9,18±0,24 # 10,0±0,3#

Примечание: # -р<0,05 по сравнению с интактными животными

*-р<0,05 по сравнению с контролем.

При исследовании активности перекисного окисления липидов были получены следующие результаты. В первые сутки после облучения во всех группах было увеличено содержание диеновых конъюгатов, триеновых конъюгатов и оснований Шиффа. Эти данные свидетельствуют о повышенной активности процессов пероксидации при действии ионизирующего излучения. Максимум повышения концентрации диеновых конъюгатов в плазме крови контрольных животных пришелся на 15-е сутки после облучения и составил 132 % от исходного уровня (рис. 2). Многократное введение яда саламандры в дозе 0,5 мг/кг животным опытной группы достоверно снижало содержание диеновых конъюгатов по сравнению с контрольными животными. У животных, которым вводили спиртовой контроль, уровень содержания диеновых конъюгатов был высоким и не отличался от уровня животных, подвергшихся только действию радиации.

Концентрация триеновых конъюгатов в опытной группе не отличалась от таковой в группе интактных животных и достоверно отличалась от показателей контрольных животных в течение всего периода наблюдений.

При исследовании содержания конечных продуктов липопероксидации - оснований Шиффа - выявили достоверное увеличение их концентрации в группах контрольных животных по сравнению с интактными с максимумом на 15-е сутки эксперимента (р<0,05) (рис.3). Концентрация оснований Шиффа увеличилась до 210 %, и к концу эксперимента этот показатель у контрольных животных так и не вернулся к норме и достоверно отличался от исходного уровня. Увеличение содержания конечных продуктов свидетельствует о повышенной активности процессов пероксидации при действии ионизирующей радиации (Ноздрачев и др., 1997). Накопление оснований Шиффа у животных контрольной группы говорит о серьезном нарушении баланса между прооксидантной и антиоксидантной системами в пользу первой (Кеэп, 1980; Журавлев, 1982).

В опытной группе наблюдалось некоторое увеличение количества оснований Шиффа (до 122 % на 15-е сутки эксперимента), но в течение всего периода наблюдения концентрация этого продукта ПОЛ была достоверно ниже, чем в контроле и на 22-е сутки не отличалась от уровня интактных животных.

Рис. 2 Динамика изменения содержания диеновых конъюгатов в плазме крови облученных животных при предварительном введении яда саламандры

220 200 2 180

§ 160

* 140 I-

г? 120

• »

* * 4 #..... _____

X » *

по. » И , 1' • •

□ контроль

1 8 13 спирт Вопит

15 22

сутки после облучения

Рис. 3 Динамика изменения содержания оснований Шиффа в плазме крови облученных животных при предварительном введении яда саламандры

По-видимому, снижение активности свободно-радикальных процессов у облученных животных опытной группы происходит за счет предварительной индукции антиоксидантной системы многократным введением яда саламандры в малых дозах до облучения. Возможно, что яд с.шамандры сам обладает антиоксидантными свойствами. Эти свойства яда саламандры могут реализовываться за счет фенольной структуры алкалоидов яда. Доказано, что

удается ослабить лучевое поражение организма при введении фенольных АО (Вартанян, 1975; Барабой, 1992; Шанин и др., 2003).

Проведенные исследования выявили четкий радиозащитный эффект малых доз яда саламандры, что проявляется в постоянстве клеточного состава крови, содержания гемоглобина, сохранении пролиферативной активности клеток костного мозга и снижении интенсивности перекисного окисления липидов. Возможно, при многократном введении в организм животных яда саламандры в дозах в десятки раз ниже токсических происходит постепенное развитие реакции устойчивой активации и тренировки. На фоне этого повышается радиорезистентность биохимических и физиологических систем и интенсификация компенсаторных и восстановительных процессов. Наши исследования показывают, что* радиозащитный эффект яда саламандры при многократном ведении в дозах, ниже летальных в сотни раз, сходен с эффектами 8Ы- радиопротекторов (цистамин, цистафос), которые также ингибируют процессы пролиферации и активность ПОЛ. Однако, необходимо заметить, что данные радиопротекторы вводятся перед облучением в высоких дозах, близких к переносимым, при этом радиозащитный эффект непродолжительный (не более 2-х часов) (Легеза, Владимиров, 1998).

Исследование продолжительности стадии резистентиости

Задачей данного исследования служило выяснение продолжительности состояния радиорезистентности, возникающего при многократном введении яда саламандры. Из таблицы видно, что стадия резистентности сохраняется в течение 4 недель после окончания введения яда (табл. 6). Повышенная же устойчивость к повреждающему действию радиации наблюдается в течение 2 недель. Общее количество 1слеток костного мозга и митотический индекс опытной группы на 8-е и 15-е сутки после окончания инъекций достоверно отличается от контроля. Затем происходит ее постепенное снижение, хотя общее количество лейкоцитов периферической крови остается достоверно более высокимл чем в контроле, на протяжении всего эксперимента.

Для подтверждения пролонгированных радиозащитных свойств яда были проведены дополнительные исследования, направленные на изучение выживаемости животных при действии летальных доз радиации (8 Гр). В результате исследований было выяснено, что прешент выживших после облучения животных является наиболее высоким (84,6 % - облучение через 2 недели после окончания введения яда; 80 % - облучение через 3 недели после окончания введения яда) в группе, где вводился яд в дозе 0,5 мг/кг в то время, как в контроле при введении этанола этот показатель составил 50 %, а в кошрольной группе животных, подвергшихся только облучению - 30 %.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что повышенная активность защитных систем организма, индуцированная многократным введением малых доз яда саламандры, сохраняется в течение продолжи!ельного времени, в отличие от пассивной радиозащиты, вызываемой радиопротекторами химической природы, которая сохраняется в течение нескольких часов.

Таблица 6

Показатели системы крови крыс, облученных в разные сроки после курсового __введения яда саламандры_

Показатель Интактные животные Группы Время облучения (сут) после окончания введения яда

8 15 22 29

Общее количество клеток костного мозга (хЮ6) 8,91+0,49 Контроль спирт 0,5 мг/кг 6,49+0,27* 6,46+0,29* 9,47±0,21* 6,49+0,273 6,31+0,12» 8,95±0,47* 6,49+0,27* 6,93+0.17» 7.73+0,42»» 6.49+0.27* 4.13+0.38 6,82+0.35*

Митотаческин индекс °/оо 24,б±0,5 Контроль спирт 0,5 мг/кг 3,6+0,8* 3,8+0,4* 11,0±0,5** 3.6±0,8# 4,4+0,5« 10,4+1,4/»* 3,6+0,8* 4,0±0,7# 3,2±0,4* 3.6±0.8* 2.0±0.4# 36±08#

Общее количество лейкоцитов (х!0'), кл/л 18,16+0,50 Контроль спирт 0,5 мг/кг 3,04+0,07» 8,45±0,76#* 8,45+0,76** 3,04±0,07* 5,88+0,49*» 11,32±1,31*» 3,04+0.07* 4,60+0.11*» 6,45+0,16** 3.04+0,07? 4.35+0.15** 9.37+0.14=;*

Примечание: # -р<0,05 по сравнению с интактными животными

* - р<0,05 по сравнению с контролем.

Исследование терапевтических свойств яда саламандры

Выздоровление организма после лучевого поражения в наиболее общей форме сводится к процессу замены пораженных радиацией клеток здоровыми, поэтому лечебные мероприятия в основном направлены на ускорение и стимуляцию этого процесса (Барабой, 1988). У облученных животных контрольной и опытных групп в течение первой недели после окончания инъекций наблюдается эритропения по отношению к группе интактных животных (табл. 7). Это свидетельствует о том, что при воздействии на организм ионизирующего излучения кроветворная система претерпевает быстро наступающие изменения, и развивается типичный кроветворный синдром, характеризующийся уменьшением числа форменных элементов (Белов, Киршин, 1981).

У животных контрольной группы после наблюдательного периода эритропении происходит постепенное восстановление количества эритроцитов и к окончанию периода исследования почти достигает уровня интактных животных.

У животных, которым вводили яд саламандры, в первую неделю после окончания инъекций также наблюдалось снижение исследуемых показателей красной крови. Восстановительный период носил сходный характер с таковым у контрольных животных, но необходимо отметить, что содержание гемоглобина у животных опытных групп уже на первые сутки после окончания лечения было значительно выше, чем у группы кошрольных животных, что подтверждено статистическими различиями между контрольной и второй опытной группой, где яд саламандры вводился в дозе 0,5 мг/кг.

Костномозговая форма лучевой болезни сопровождалась лейкопенией (табл. 8). В контрольной группе на 15-е сутки произошел резкий спад количества лейкоцитов, примерно в 2,5 раза от исходного уровня. В дальнейшем их число увеличивалось, но так и не достигло уровня интактных животных.

В отличие от контрольных животных на 8-е сутки после лечения у опытных групп количество лейкоцитов значительно повысилось, как в отношении контроля, так и интактных животных. Однако, на 15-е сутки наблюдается резкий спад (стадия опустошения), но и в этом случае количество лейкоцитов выше, чем в контрольной группе.

В последующие дни наблюдается повышение общего числа лейкоцитов периферической крови, но уровня интактных животных этот показатель достигает только в группе, где терапию проводили ядом в дозе 0,5 мг/кг.

Таблица 7

Динамика изменения количества эритроцитов в периферической крови облученных животных при терапии ядом саламандры

Группа Иптактные животные Время после облучения (сут)

1 8 15 22 29

контроль 3,57±0,01 2,50К),02# 2,66+0,03» 2,71±0,05# 2,87±0,04й 3,48±0,02#

Ял (0.25 М|/КГ) 3,57±0,01 2,53+0,02« 2,71±0,05# 2,79±0,04# 2,89±0,03# 3,60±0,03*

Ял (0.5 М1/К1) 3,57±0,01 2,56±0,03# 2,77±0,05# 2,88±0,02#* 3,08±0,05#* 3,68±0,04»

Примечание: # -р<0,05 по сравнению с интактными животными

* - р<0,05 по сравнению с контролем.

При изучении терапевтического действия яда было показано, что у животных опытных групп, прошедших курс терапии, восстановительные процессы шли более интенсивно, и количество клеток костного мозга было достоверно выше, чем в контроле, хотя и не достигало уровня интактных животных. Митотическая активность кроветворных клеток у животных как контрольных, так и опытных групп значительно ниже исходного уровня. Достоверных различий между контролем и опытом не наблюдалось, однако, при более высоком содержании клеток самая низкая пролиферативная активность наблюдалась после введения яда. Это свидетельствует о том, что репарационные процессы еще не закончены, и скорость деления кроветворных клеток крайне низкая (табл. 9).

Возможно, торможение пролиферации при многократном введении яда увеличивает время на репарационные процессы в кроветворной ткани. В дальнейшем, прошедшие репарацию клетки активируют свою скорость

деления. Это приведет к нормализации кроветворения, что мы и наблюдаем на 28-е сутки после окончания терапии.

Таблица 8

Динамика изменения общего числа лейкоцитов (109 кл/л) периферической крови облученных животных при терапии ядом саламандры

Группа Интактные животные Время после облучения (сут)

1 8 15 22 29

контроль 7,10Ю,83 7,60Ю,94 6.96±0,78 2.69+0.29« 4,12±0.75# 4.24Ю.65

Яд (0,25 мг/кг) 7,10+0,83 7,00±0,65 8,10±0,37 4,85+0,77* 5,70+0.62 4.55Ю.46И

Яд (0,5 мг/кг) 7,10±0,83 6,26+0,48 10,!4±0.84#* 3,40+0.41 К 5.03±0.40 7.95+0.45*

Примечание: # -р<0,05 по сравнению с интактными животными * - р<0,05 по сравнению с контролем.

Таблица 9

Влияние терапевтического применения яда саламандры на общее количество и __митотический индекс клеток костного мозга _

Условия проведения опыта * . " Время 11Ьсле окончания лечения (сут)

1 28

Количество клеток костного мозга (хЮП Митотический индекс ( /со) Количество клеток костного мозга (х*10 ") Митотический индекс ( Дн|)

Интактные живвтные 14,2810.24 23.011,0 12.6411.32 24.0+5.0

Контроль(облучение) 9,29+0.05 # 3.4±0,6 # 9.11 ±0.5 6# 21.011.0

Яд саламандры 12.9510.11 *# 2.4+0.4 # 14.7511.56«* 20.011.0

Контроль (этанол) 10,0710.07 6.211.5 # 10.67±1.4 11.011.0

Примечание: # -р<0,05 по сравнению с интактными животными

* - р<0,05 по сравнению с контролем •

Для выявления способности кроветворной системы к пострадиационному восстановлению исследовались показатели кроветворения на 28-е сутки после окончания лечения (табл. 9). Общее количество клеток костного мозга животных, прошедших курс терапии, значительно превышает это количество у нелеченных животных. Пролиферативная активность клеток костного мозга не отличается от показателей интактных животных. Это свидетельствует о том, что восстановительные процессы уже завершились и клетки вернулись в состояние с нормальными темпами деления.

При исследовании ПОЛ у животных, прошедших терапию ядом саламандры в дозе 0,25 мг/ кг, наблюдали следующее. На 1-е сутки после окончания лечения содержание диеновых конъюгатов было увеличено по сравнению с интактными животными на 70 %. На 8-е и 15-е сутки их содержание было еще более высоким - на 116%. Затем началось снижение их концентрации, достигнув к концу эксперимента показателей первой недели. После окончания инъекций яда в дозе 0,5 мг/кг концентрация диеновых конъюгатов возрастает на 71 %, снижаясь до уровня интактных животных к 8-м суткам, повышаясь на 49 % на 15-е сутки, и к концу эксперимента опять возвращается к исходному уровню (рис 5).

Содержание триеновых конъюгатов в контрольной группе на 1-е сутки после лечения составило 112 % от исходного уровня, затем произошло резкое увеличение их концентрации до 256 % на 15-е сутки и к концу наблюдения снизилось лишь до 201 % от исходного уровня.

После окончания терапии дозой яда - 0,25 мг/кг в плазме опытных животных также произошло увеличение количества вторичных продуктов с максимумом на 15-е сутки (243 % от исходного уровня). В группе животных, подвергшихся терапии ядом в дозе 0,5 мг/кг на 1-е сутки произошел резкий скачок концентрации триеновых конъюгатов до 262 %, и к концу эксперимента их концентрация снизилась до уровня интактных животных.

1 8 15 22

сутки после окончания лечения □ контроль 00,25 мг/кг ■ 0,5 мг/кг

Рис. 5 Динамика изменения содержания диеновых конъюгатов в плазме крови облученных животных при терапии ядом саламандры

11овреждающее действие радиации сказалось и на клеточном уровне, что отразилось на динамике изменения конечных продуктов ПОЛ. В контрольной группе животных в течение всего периода исследования уровень содержания оснований Шиффа остается высоким с максимумом на 8-е сутки (202 % от исходного уровня) и достоверно отличается от уровня интактных животных. В

опытной группе с применением дозы 0,25 мг/кг динамика содержания оснований Шиффа напоминала таковую в контроле. Напротив, в опытной группе с применением дозы 0,5 мг/кг наблюдалось некоторое увеличение концентрации этого продукта в начале опыта, но к 22-м суткам эксперимента это значение достигло исходного уровня и достоверно отличается от контроля (рис. 6).

Рис. 6 Динамика изменения оснований Шиффа при терапии лучевой болезни

Можно полагать, что яд саламандры в дозе 0,5 мг/кг оказывает синхронизирующее действие на работу основных регуляторных систем организма (нервная, эндокринная), таким образом, нормализует протекание обменных процессов и снимает стресс-реакцию, вызванную действием радиации, переводя ее в другую более оптимальную неспецифическую реакцию активации (Гаркави и др., 1990; Гаркави и др., 1998).

На основании полученных результатов можно заключить, что многократно вводимый в организм яд саламандры является эффективным профилактическим, а также терапевтическим средством при действии у -излучения.

ВЫВОДЫ

1. Многократное введение яда саламандры интактным животным в дозах 0,25; 0,5 мг/кг практически не влияет на количество форменных элементов и гемоглобина периферической крови.

2. Хроническое введение яда в дозе 0,5 мг/кг вызывает изменение лейкоцитарной формулы: увеличение относительного содержания лимфоцитов до верхних границ нормы и уменьшение содержания нейтрофилов до нижних границ нормы, свидете»ьствующее о развитии неспецифической реакции активации.

3. Курсовое введение яда саламандры в дозе 0,5 мг/кг приводит к снижению митотического индекса и торможению пролиферативной активности клеток костного мозга.

4. Многократное введение яда саламандры в дозе 0,25 мг/кг сопровождается возникновением неспецифической реакции тренировки.

5. Введение яда саламандры в дозах 0,25; 0,5 мг/кг интактным животным сопровождается увеличением содержания первичных, вторичных и конечных продуктов липопероксидации в начальный период исследования с последующим постепенным снижением их количества.

6. Установлено, что предварительное многократное введение яда саламандры в дозах 0,25 и 0,5 мг/кг увеличивает радиорезистентность системы крови и кроветворения крыс при у-облучении в дозах 3 и 5 Гр .

6.1 Курсовое введение яда саламандры в дозах 0,25'и 0,5 мг/кг ослабляет повреждающее действие радиации, обеспечивая более высокое содержание форменных Элементов и- гемоглобина" в периферической крови опытных животных относительно контроля.

6.2 Ведение яда саламандры в дозе 0,5 мг/кг снижает у облученных животных интенсивность перекисного окисления липидов в плазме крови, сохраняет высокую пролиферативную активность и количество клеток красного костного мозга, близкое к норме.

6.3 Состояние радиорезистентности, которое развивается в результате многократною введения яда саламандры в дозе 0,5 мг/кг, сохраняется в течение нескольких недель.

7. Терапевтическое применение яда саламандры в дозе 0,5 мг/кг облегчает течение лучевой болезни, стимулируя восстановительные процессы в системе крови и кроветворения крыс, что приводит к повышению уровня форменных элементов и гемоглобина в циркуляторном русле, к снижению концентрации молекулярных продуктов ПОЛ в плазме крови, повышению общего количества мегамиелоцитов в костном мозге до уровня интактных животных. Применение яда саламандры в дозе 0,25 мг/кг оказалось менее эффективным.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Овощникова Л.В., Корягин А.С. Влияние предварительного введения яда саламандры на систему гемостаза при действии ионизирующей радиации // Тез. докл. 2-ой межд. конф. молод, студ. и учен., Самара, 2001. с. 106-107.

2. Овощникова Л.В. Влияние яда саламандры на перекисное окисление липидов при лучевом поражении // Тез. докл. Пироговской студ. научн. конф., 2002. С. 144,

3. Корягин А.С., Логинов В.В., Овощникова Л.В., Синельщиков А.Д. Исследование радиопротекторных свойств яда саламандры на модели костномозговой формы лучевой болезни // Вестник Нижегородского университета. Серия Биология. № 1 (3), 2002 С. 100-104.

4. Овощникова Л.В., Корягин А. С. Влияние яда саламандры на общее количество и содержание отдельных форм лейкоцитов периферической крови при костномозговой форме лучевой болезни// Материалы IX междунар. конф. студ., аспир. и молодых ученых "Ломоносов", Москва, 9-12 апреля 2002. С. 41-42.

5. Логинов В.В., Корягин А.С., Овощникова Л.В., Синелищиков А.Д. Оценка радиозащитных свойств яда пятнистой саламандры Salamandra salamandra на модели костномозговой формы лучевой болезни // 6-ая Путинская школа-конференция молодых ученых "Биология-наука 21-го века". Пущино, 2002. С. 103 - 104.

6. Овощникова Л. В. Ядовитые животные в профилактике лучевого поражения // Зоологические исследования регионов России и сопредельных территорий. Матер, межд. науч. конф.Н. Новгород, 2002. С. 144.

7. Корягин А. С, Логинов В. В., Овощникова Л. В., Ерофеева Е. А. Сравнительный анализ действия ядов саламандры, пчелы и жабы на систему кроветворения при экспериментальной форме лучевой болезни // Вестник Нижегородского университета. Серия Биология. № 1 (4), 2003 (в печати).

Подписано в печать 15.03 2004. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Печать офсетная. Усл. псч. л. I. Тир. 100 эю. Зак. 374.

Типография Нижегородского госуниверситета. Лицензия № 18-0099. 603000, И. Новгород, ул. Б. Покровская, 37.

»-5385

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Овощникова, Лада Владимировна

Введение.

1.Обзор литературы.

1.1. Саламандра пятнистая.

1.2. Действие ионизирующих излучений.

1.2.1. Перекисное окисление липидов как механизм усиления поражающего эффекта радиации.

1.2.2. Радиация и система крови.

1.3. Неспецифические реакции организма.

2. Материалы и методы исследования.

3. Результаты и их обсуждение.

3.1. Изучение действия яда саламандры на организм интактных животных.

3.2. Исследование радиозащитных свойств яда саламандры.

3.3. Изучение продолжительности состояния радиорезистентности.

3.4. Исследование терапевтических свойств яда саламандры на модели костномозговой лучевой болезни.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Физиологический анализ действия яда саламандры на систему крови крыс в норме и при экспериментальном лучевом поражении"

Действие зоотоксинов, вырабатываемых ядовитыми животными, давно привлекает внимание исследователей и врачей. Для большинства животных ядов характерна высокая биологическая активность и разностороннее действие на организм. Они обладают неспецифической активностью, поскольку являются многокомпонентными системами и одновременно воздействуют на многие регуляторные системы организма, что может быть использовано при лечении заболеваний разного патогенеза, а также для целенаправленного повышения резистентности организма человека и животных к действию повреждающих факторов внешней среды. Большинство исследований посвящено изучению механизмов действия ядов пчел, змей, жаб на функциональные системы организма (Артемов, 1969; Крылов, 1990; Орлов, Вальцева, 1979). Систематических исследований по влиянию яда саламандры на организм животных и его интегративные системы не проводилось. В единичных работах показано центральное нейротропное действие этого яда (Крылов, Ошевенский, 1984; Гелашвили и др., 1986). Не проводилось и прикладных исследований, в которых бы обосновывалась возможность применения зоотоксина как адаптогена, как стимулятора резистентности к действию экстремальных факторов среды, в том числе и ионизирующей радиации.

Повышение радиоустойчивости биологических объектов, в том числе и человека, является одной из центральных проблем современной радиобиологии. Высокая биологическая активность ионизирующих излучений, потенциальная опасность ближайших и отдаленных неблагоприятных последствий его влияния на здоровье, как показала авария на ЧАЭС, определяют необходимость поиска эффективных средств защиты организма от повреждающего действия радиации, а также для терапии лучевой болезни. Действие ионизирующего излучения на человека и животных сопровождается развитием острой лучевой болезни, особенно изменяется картина системы крови, происходит поражение кроветворных ростков костного мозга (Балуда и др., 1986), возникает повреждение генетического аппарата клеток (Пяткин, Баранов, 1980). Взаимосвязь радиации и перекисного окисления липидов составляет сущность процесса лучевого поражения клетки организма, лежит в основе многих механизмов реакции живой системы на лучевое воздействие (Барабой и др., 1991).

К настоящему времени установлено радиозащитное действие многих химических соединений, большинство из которых, будучи введенными в организм перед облучением, увеличивают выживаемость животных и облегчают течение лучевой болезни (Гончаренко, Кудряшов, 1985). Сравнительно недавно среди профилактических противолучевых средств была выделена группа стимуляторов радиорезистентности, куда относятся вещества, повышающие устойчивость организма к облучению в сублетальных дозах, вызывающих костномозговую форму лучевой болезни. Эти вещества проявляют защитные свойства как в условиях профилактического, так и лечебного применения. Сюда относятся витамины, гормоны, продукты пчеловодства, некоторые зоотоксины (Легеза, Владимиров, 1998).

Изучено комплексное действие на организм пчелиного яда (Артемов, 1969; Корягин и др., 1995), жабьего яда (Орлов, Конькова, 1978) и ионизирующего излучения. Целенаправленного изучения противолучевых свойств яда саламандры не проводилось. Обычно зоотоксины вводятся в организм однократно в дозах, близких к летальным. Это приводит к возникновению стресс-реакции и развитию фазы резистентности общего адаптационного синдрома, которая характеризуется повышенной устойчивостью организма к повреждающему действию радиации. Необходимо отметить, что при стрессе наряду с элементами защиты имеются элементы повреждения. В настоящее время в литературе имеются сведения о существовании других адаптационных реакций, которые развиваются в ответ на раздражители -меньшей; величины, чем стрессорные. Реакция на слабые воздействия - реакция тренировки, реакция на воздействие средней силы -реакция активации. При многократном действии такие раздражители способны вызывать физиологическим путем повышение неспецифической резистентности, то есть повышенную сопротивляемость организма к повреждающим факторам внешней и внутренней среды. Важно и то, что слабые раздражители могут вызывать благоприятные для организма реакции даже на фоне действия патогенных раздражителей, на фоне течения болезни (Гаркави и др., 1998). В настоящей работе исследовалось действие малых доз яда саламандры пятнистой Salamandra Salamandra L. на систему крови и кроветворения крыс при его многократном введении, а также комплексное действие зоотоксина и у-излучения.

Цель работы. Изучение радиозащитных и терапевтических свойств малых доз яда саламандры на модели костномозговой формы лучевой болезни и длительности состояния радиорезистентности, возникающего при действии зоотоксина на систему крови

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать действие малых доз яда саламандры на состояние периферической крови, костного мозга и перекисного окисления липидов интактных животных при его курсовом введении.

2. Выявить радиозащитные свойства яда саламандры на систему крови крыс, а также показатели перекисного окисления липидов при его многократном введении в различных дозах до у-облучения

3 Определить длительность состояния радиорезистентности и механизмы ее возникновения при хроническом введении в организм крыс яда саламандры в малых дозах, оценивая динамику изменения показателей белой крови, костного мозга, а так же выживаемость лабораторных животных.

4. Изучить терапевтические свойства яда саламандры на модели костномозговой формы лучевой болезни по показателям периферической крови и костного мозга, а также активности свободнорадикальных процессов.

Научная новизна исследования. Получены новые данные, свидетельствующие о влиянии на организм животных хронического введения яда саламандры в малых дозах в норме и при экспериментальном лучевом поражении. Впервые установлено, что курсовое введение яда саламандры тормозит скорость пролиферации клеток костного мозга, увеличивая, таким образом, устойчивость гемопоэтических клеток к повреждающему действию радиации. Выявлены радиозащитные свойства яда саламандры, о чем свидетельствует достоверно более высокое содержание в крови облученных животных форменных элементов периферической крови, нормализация процессов кроветворения, снижение активности свободнорадикальных процессов по сравнению с животными контрольных групп. Показано, что состояние радиорезистентности, которое возникает вследствие многократного введения яда в малых дозах, сохраняется в течение длительного времени (до 1 месяца). Проведенные исследования по изучению терапевтических свойств зоотоксина показали, что яд саламандры облегчает течение костномозговой формы лучевой болезни, стимулируя восстановительные процессы в системе крови и кроветворения.

Научно-практическая значимость. Выявленные радиозащитные свойства яда саламандры на систему крови и кроветворения предполагают возможность создания на его основе препаратов, повышающих радиорезистентность организма, с целью их применением в профилактике и терапии лучевых поражений. Проведенные исследования позволяют предполагать использование яда саламандры как адаптогена, стимулирующего резистентность и к другим экстремальным повреждающим факторам внешней среды.

Апробация работы. По теме диссертации опубликовано 7 работ. Основные положения доложены на П международной конференции молодых студентов и ученых (Самара, 2001), на Пироговской студенческой научной конференции (Москва, 2002), на IX международной конференции студентов и аспирантов и молодых ученых "Ломоносов" (Москва, 2002), на VI Пущинской конференции молодых ученых "Биология-наука 21-го века" (Пущино, 2002), на международной научной конференции "Зоологические исследования регионов России и сопредельных территорий" (Нижний Новгород, 2002), на второй научной городской межвузовской конференции (Нижний Новгород, 2003), на заседании Нижегородского отделения Российского биохимического общества (2003), на расширенном заседании кафедры физиологии и биохимии человека и животных ННГУ (2003).

Структура и объем диссертации.

Материалы диссертации изложены настраницах машинописного текста, иллюстрированытаблицами и рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы, характеристики материалов и методов исследования, глав результатов исследования, обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, содержащего источника, из которыхна иностранных языках.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Овощникова, Лада Владимировна

ВЫВОДЫ

2. Хроническое введение яда в дозе 0,5 мг/кг вызывает изменение лейкоцитарной формулы: увеличение относительного содержания лимфоцитов до верхних границ нормы и уменьшение содержания нейтрофилов до нижних границ нормы, свидетельствующее о развитии неспецифической реакции активации.

3. Курсовое введение яда саламандры в дозе 0,5 мг/кг приводит к снижению митотического индекса и торможению пролиферативной активности клеток костного мозга;

4. Многократное введение яда саламандры в дозе 0,25 мг/кг сопровождается возникновением неспецифической реакции - тренировки.

6. Установлено, что предварительное многократное введение яда саламандры в дозах 0,25 и 0,5 мг/кг увеличивает радиорезистентность системы крови и кроветворения крыс.

6.1 Курсовое введение яда саламандры в дозах 0,25 и 0,5 мг/кг ослабляет повреждающее действие радиации, обеспечивая более высокое содержание форменных элементов и гемоглобина в периферической крови опытных животных относительно контроля.

6.3 Состояние радиорезистентности, которое развивается в результате многократного введения яда саламандры в дозе 0,5 мг/кг, сохраняется в течение нескольких недель.

Заключение

Таким образом, в результате исследований было установлено, что курсовое введение яда саламандры в дозе 0,5 мг/кг сопровождается развитием устойчивой активации, в дозе 0,25 мг/кг - стадии тренировки, которые характеризуются, согласно литературным данным, повышением активности основных защитных систем организма (Гаркави, Квакина, 1997; Гаркави и др., 1998). Наши исследования показали, что активация, вызванная ядом, способствует повышению резистентности к действию радиации, вызывающей костномозговую форму лучевой болезни, что выражается в более высоком содержании форменных элементов периферической крови, нормализации процессов кроветворения, снижении активности свободнорадикальных процессов. Данная резистентность сохраняется в течение длительного времени (4 недели) в отличие от химических радиопротекторов, которые вводятся перед облучением в высоких дозах, близких к переносимым, при этом радиозащитный эффект непродолжительный (не более 2-х часов) (Легеза, Владимиров, 1998). Установлено, что курсовое введение яда саламандры тормозит скорость пролиферации клеток костного мозга, увеличивая, таким образом, устойчивость гемопоэтических клеток к повреждающему действию радиации.

Выявлено, что при терапевтическом использовании яда саламандры данный зоотоксин облегчает течение лучевой болезни, ускоряет восстановительные процессы, что обусловлено переходом поврежденного организма из стресса в состояние устойчивой активации и в результате синхронизацией работы основных регуляторных систем организма.

Результаты исследований открывают перспективу использования малых доз яда саламандры с целью повышения резистентности организма к действию не только радиации, но и других неблагоприятных факторов внешней среды путем активации собственных защитных систем организма, что особенно важно в условиях ухудшения экологической ситуации.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Овощникова, Лада Владимировна, Нижний Новгород

1. Абрамова Ж. И., Оксегендлер Г. И. Человек и противоокислительные вещества. Л., 1985. 245 с.

2. Адрианов Н. В., Уваров В. Ю. Регуляция активности ферментных систем окисления чужеродных соединений // Вестн. АМН СССР. 1988. № 1. С. 24-33.

3. Акоев И. Г. Отдаленные последствия облучения в системе крови // Мед. радиобиол., 1976. Т. 13. № 1. С. 21-28.

4. Алерсова Э., Алерс И., Седлакова А., Прасличка М. Метаболические изменения липидов после длительного у-облучения крыс // Радиобиол., 1973. Т. 13. № 1.С. 116-118.

5. Алешин Б. В. Эндокринная система и гомеостаз // Гомеостаз. М., 1981. С. 77-113.

6. Андреев Б. В., Галустьян Г. Э., Игнатов Ю. Д., Никитина 3. С., Сытинский И. А. Влияние эмоционально болевого стресса на активность системы у-аминомасляной кислоты // Укр. биохим. журн., 1983. Т. 55. № 6. С. 652 -656.

7. Андреев С. Т., Хвостунов И. К., Спитковский Д. М., Талызина Т. А. Биофизическое моделирование радиационных повреждений ДНК и хроматина, индуцированных излучением разного качества // Рад. биол. Радиоэк., 1997. Т. 37. № 4. С 533 538.

8. Аристархова С. А., Архипова Г. В., Бурлакова Е. Б., Гвархия В. О., Глущенко Н. Н., Храпова Н. Г. ДАНСССР. 1976, 228. С. 215-218.

9. Артемов Н. М. Физиологические основы действия на организм пчелиного яда. Автореф. дисс. на соиск. уч. степени доктора биол. наук, Горький, 1969. 55 с.

10. Ю.Арутюнян А. В., Дубинина Е. Е., Зыбина Н. Н. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма. Метод, рек., 2000. 104 с.

11. П.Арчаков А. И., Карузина И. И. Цитохром Р-450 // Белки и пептиды. М., 1995. Т. 1.С. 95-101.

12. Афанасьев Б. В., Алмазов В. А. Родоначальные стволовые клетки человека. М., 1985. 168 с.

13. Бак 3., Александер П. Основы радиобиологии. М., 1963. 366 с.

14. И.Балаж А., Блажек И. Эндогенные ингибиторы клеточной пролиферации.1. М., 1982

15. Балуда В. П., Володин В. Н., Проспишил Я. и др. Радиация и гемостаз. М., 1986. 160 с.

16. Барабой В. А., Брехман И. И., Глотан В. Г., Кудряшов Б. Ю. Перекисное окисление и стресс. С.-П., 1992. 150 с.

17. Барабой В. А., Орел В. Э., Карнаух И. М. Перекисное окисление и радиация. Киев, 1991. 253 с.

18. Барабой В. А., Чеботарев Е. Е. Проблема перекисного окисления в радиобиологии // Радиобиол., 1986. Т. 26. №5. С. 591 595.

19. Барсукова JI. П., Котляревская Е. С., Марьяновская Г. Я. К вопросу об энергетическом гомеостазе организма при развитии различных адаптационных реакций // Гомеостатика живых и технических систем. Иркутск, 1987. С. 49 50.

20. Белов А. Д., Киршин В. А. Радиобиология. М., 1981. 225 с.

21. Белоусова О. И., Горизонтов П. Д., Федотова М. И. Радиация и система крови. М., 1979.126 с.

22. Биленко М. В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов. М., 1989. 368 с.

23. Бурлакова Е. Б. Роль липидов в процессе передачи информации в клетке // Биохимия липидов и их роль в обмене веществ. М., 1981. С. 23-33.

24. Бяков В. М., Степанов С. В. О механизме первичного радиобиологического действия // Рад. биол. Радиоэкол., 1997. Т. 37. № 4. С. 469-474.

25. Вартанян JI. С. Фенолы как источники радикалов в биохимических системах// Успехи химии, 1975. Т. 44. № 10. С. 1851 1870.

26. Виру А. А. Общий механизм адаптации // Стресс и адаптация. Кишинев, 1978. 16 с.

27. Владимиров Ю. А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестн. РАМН. 1998. № 7. С. 43-51.

28. Владимиров Ю. А., Арчаков Р. М. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М., 1972.252 с.

29. Владимирская Е. Б., Румянцев А. Г. Роль ростовых факторов в регуляции кроветворения // Гемат. и трансфуз., 2000. № 6. С. 4 8.

30. Воложин А. Н., Субботин Ю. К. Адаптация и компенсация -универсальный биологический механизм приспособления. М., 1987. 176 с.

31. Воробьев А. И. Острая лучевая болезнь // Тер. Архив, 1985. Т. 58. № 12. С. 3-8.

32. Воробьев А. И. Руководство по гематологии. М., 1985. 140 с.

33. Высоцкий В. И., Корнилова А. А., Самойленко И. И. Молекулярные механизмы саморепарации двойных разрывов ДНК // Рад. биол. Радиоэк., 1997. Т. 37. № 4. С. 494 507.

34. Гаврилов О. К., Козинец Г. И., Черняк Н. Б. Клетки костного мозга в периферической крови (структура, биохимия, функция). М., 1985. 286 с.

35. Гаркави Л. X. Адаптационная «реакция активации» и ее роль в механизме противоопухолевого влияния раздражителей гипоталамуса. Автореф. дисс. . док. мед. наук., 1969. 30 с.

36. Гаркави Л. X., Квакина Е. Б., Кузьменко Т. С. Антистрессорные реакции и активационная терапия. Реакция активации как путь к здоровью чсре?. процессы самоорганизации. М., 1998. 656 с.

37. Гаркави Л. X., Квакина Е. Б. О критериях оценки неспецифической резистентности организма при действии различных биологически активных факторов с позиции теории адаптационных реакций // Миллиметровые волны в биологии и медицине, 1995. № 6. С. 11 21.

38. Гаркави JI. X., Квакина Е. Б., Уколова М. А. Адаптационные реакции и резистентность организма. Ростов-на-Дону, 1990. 375 с.

39. Гаркави Л. X., Квакина Е. Б., Уколова М. А. Магнитные поля, адаптационные реакции и резистентность организма // Реакции биологических систем на магнитные поля. М., 1978. С. 131 148.

40. Гелашвили Д. Б., Силкин А. А., Сиднев Б. Н. К нейрофизиологической характеристике судорожного действия яда саламандры. Межвуз. сборник. Горький, 1986. С. 32-37.

41. Гелашвили Д. Б., Силкин А. А., Сиднев Б. Н. Нейрогуморальные механизмы судорожного действия яда саламандры на организм // Механизмы действия зоотоксинов. Межвуз. сб. Горький, 1987. С. 30-38.

42. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М., 1998. 452 с.

43. Гончаренко E.H., Кудряшов Ю.Б. Химическая защита от лучевого поражения. М., 1985.147 с.

44. Горизонтов П: Д. Общая характеристика и значение реакций стресса. Вестник АМН СССР, 1975. № 8. 81 с.

45. Горизонтов П. Д., Белоусова О. Н., Федотова М. И. Стресс и система крови. М., 1983.240 с.

46. Горизонтов П.Д. Роль симпатической нервной системы в ранних неспецифических реакциях кроветворных органов // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1975, №3, с. 34-38

47. Горизонтов П. Д. Стресс и реакция органов кроветворения // Патологическая физиология, 1974. № 2. С. 3-6.

48. Грицак А. И., Стародуб И. Ф., Рекун Г. М. Эритропоэтическая активность плазмы облученных животных // Радиобиол., 1976. № 5. С. 770 773.

49. Г.Груздев Г. П. Проблема поражения кроветворной ткани при острой лучевой патологии. М., 1968. 140 с.

50. Гусев В. А., Панченко Л. Ф. Современные концепции свободнорадикальной теории старения // Вопросы мед. химии; 1982. № 4. С. 8 24.

51. Дешевой Ю. Б., Мороз Б. Б. Влияние предварительного хронического у-облучения в малой дозе на состояние и компенсаторные возможности системы крови // Гематол. и трансфуз., 1995. № 5. С. 3 -6.

52. Дубинин Н. П. Молекулярная генетика и действие излучений на наследственность. М., 1963. 312 с.

53. Дубинина Е. Е. Характеристика внеклеточной супероксиддисмутазы // Вопр. мед. химии. 1995: Т. 41. вып. 6. С. 8 12.

54. Дубинина Е. Е., Шугалей Н. В. Окислительная модификация белков // Успехи соврем, биологии. 1993. Т. 113. вып. 1. С. 71 81.

55. Дъякова А. М., Ляско Л. И., Сушкевич Г. Н., Полуэктова М. В., Чиркова Т.

56. B. Состояние свободнорадикального окисления липидов у ликвидаторов аварии на Чернобыльской АЭС в зависимости от условий работы в зоне радиоактивного загрязнения // Гематол. и трансфуз., 1994: № 1. С. 22 24.

57. Дэвид Г. Натан, Колин А. Зифф Регуляция кроветворения // Гематол. и трансфуз., 1994. № 2. С. 3 10.

58. Жербин Е. А., Чухловин А. Б. Радиационная гематология. М., 1989. 219 с.

59. Жербин Е. А., Чухловин А. Б. Механизмы природной и модифицированной радиочувствительности. М., 1989. 139 с.

60. Журавлев А. И. Развитие идей Б. Н. Тарусова о роли цепных процессов в биологии // Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. М., 1982. С. 3 28.

61. Квакина Е. Б. Повышение неспецифической противоопухолевой резистентности с помощью бесконтактного раздражения гипоталамуса. Автореф. дис. док. биол. наук. 1972.41 с.

62. Коган А. X., Кудрин А. И., Николаев С. М. К вопросу о роли свободнорадикального окисления липидов в патогенезе адреналиновых кардионекрозов // Пат. физиол., 1979. № 1. С. 66 70.

63. Козинец Г. И., Макаров В. А. Исследование системы крови в клинической практике. М., 1998.480 с.

64. Козлов Ю. П. Свободные радикалы и их роль в нормальных и патологических процессах. Mi, 1973. 150 с.

65. Козлов Ю. П., Данилов В. С., Коган В. Е. Свободнорадикальное окисление липидов в биологических мембранах. М., 1972. 88 с.

66. Кокс Т. Стресс. М., 1981.216 с.

67. Колесова О. Е., Маркин А. А., Федорова Т. H. Перекисное окисление липидов и методы определения продуктов липопероксидации в биологических средах // Лабораторное дело. М., 1984. № 9. С. 36 38.

68. Коломийцева И. К., Васильев А. В. Радиационные нарушения метаболизма липидов мембранных образований клетки // В кн.: Радиационная биохимия. М., 1975, С. 149 — 164.

69. Корягин А. С., Синельщиков А. Д., Крылов В. Н. Профилактика радиационных поражений ядом саламандры // Первая конференция герпетологов Поволжья (тез. док.). Тольятти, 1995. С. 68.

70. Котеров А. Н., Гребенюк 3: А., Пушкарева Н. Б., Никольский А. В. Возможный механизм противолучевого эффекта металлотионеина; стимуляция репликативного синтеза ДНК и пролиферации клеток костного мазка // Радиац. биолог. Радиоэк., 1996. № 5. С. 432 438.

71. Котляревская Е. С. Исследование функционального состояния гипоталамической области головного мозга при противоопухолевом действии магнитных полей; Автореф. дис. канд. биол. наук, 1974.24 с.

72. Крылов В. Н. Механизмы изменения некоторых функций нормального и альтерированного сердца под влиянием зоотоксинов. Автореф. дис; . док. биол. наук, 1990. 309 с.

73. Крылов В: Н., Ошевенский JI. В. Использование яда саламандры в экспериментальной кардиологии // Вопросы герпетологии. Шестая всесоюз. герпетол. конф. Автореф. док. Ташкент. 18-20 сентября 1985 г.

74. Крылов В. Н;, Ошевенский Л. В. Сравнительный анализ кардиотропного действия некоторых зоотоксинов // Механизмы действия зоотоксинов. Межвуз. сб. Горький, 1984; С. 3-10.

75. Кудряшов Ю. Б. Лучевое поражение и его модификация. М., 1985; 153 с.

76. Кудряшов Ю.Б. Лучевое поражение критических систем // Лучевое поражение / Под ред. Ю.Б. Кудряшова. М:, 1987. С. 5-72.

77. Кудряшов Ю. Б., Беренфельд Б. С., Основы радиационной биофизики. М., 1982: 456 с.

78. Кузин А. М. Действие излучения на некоторые физико-химические свойства мембран ядер тимоцитов // Действие ионизирующего излучения на клеточные мембраны, М., 1973.111 с.81 .Кузин А. М. Структурно-метаболическая гипотеза в радиобиологии. М., 1970.222 с.

79. Кузин А. М., Каушанский Д. А. Прикладная радиобиология. Mi, 1981. 222 с.

80. Кузин А. М., Копылов В. А. Радиотоксины. М., 1983. 174 с.

81. Кулинский В; И., Колесниченко Л. С. Обмен глутатиона // Успехи биол. химии. 1990. Т. 31. С. 157 -179;

82. Левицкий А. П. Уровень свободных жирных кислот в сыворотке крови после рентгеновского облучения // Радиобиол., 1968. Т. 8. № 6. С. 923 -927.

83. Легеза В. И., Владимиров В. Г. Новая классификация профилактических противолучевых средств // Радиационная биология. Радиоэкология. 1998. Т. 38, вып. 3. С. 416-425.

84. Ломова М. А. Мобилизация жиров у животных при: воздействии ионизирующей радиации. Автореф. дис. кан. н. М., 1964.22 с:

85. Лыков А. П., Сахно Л. В., Михеенко Т. В., Козлов В; А. Гемопоэз у ликвидаторов аварии на Чернобыльской АЭС // Гемат. и трансф., 1998; № 2. С. 34 -36.

86. Ляхович В: В., Цырлов И. Б. Индукция ферментов метаболизма ксенобиотиков. Новосиб., 1981. 240 с.

87. Мазурик В. К., Михайлов В. Ф. Некоторые биохимические детерминанты и макромолекулы радиорезистентности организма млекопитающих // Радиобиол. Радиоэкол., 1997. Т. 37. №4. С. 512 -521.

88. Малышев В. В., Васильева Л. С., Кузьменко В. В. Взаимосвязь воспаления и стресса — общебиологическая закономерность, определяющая принцип оптимизации воспалительного процесса // Успехи совр. биол., 1997. Вып. 4. С. 405-407.

89. Меерсон Ф. 3. Адаптация, стресс и профилактика. М., 1981. 278 с.

90. Меерсон Ф. 3. Общий механизм адаптации и профилактики. М., 1973; 358 с.

91. Меерсон Ф. 3. Основные закономерности индивидуальной адаптации // Руков. по физиол. Физиол. адаптационных процессов, М., 1986. С. 10 76.

92. Меерсон Ф. 3. Пластическое обеспечение функций организма. М., 1967. 318 с.

93. Меерсон Ф. 3. Стресс-лимитирующие системы организма и их роль в предупреждении ишемических повреждений сердца // Бюлл. Всесоюз. кардиол. науч. центра AME GCCP., 1985. № 1. С. 34 -43.

94. Меерсон Ф. 3., Каткова Л. С. Влияние предварительной адаптации к коротким стрессорным воздействиям на резистентность спонтанносокращающегося миокарда к индуктору перекисного окисления липидов // Бюлл. эксп: биол., 1985. № 2. С. 659 661.

95. Меерсон Ф. 3., Пшенникова М. Г. Адаптационная защита организма: Основные механизмы и использование для профилактики и терапии // М., 1993. Т. 45.

96. Меерсон Ф. 3., Явич М. П. Роль цитоплазматических факторов в постстрессорных изменениях синтеза РНК в сердце и печени // Вопр. Мед. хим;, 1987. № 2. С. 90 96.

97. Меерсон Ф.З., Малышев И.Ю. Феномен адаптационной стабилизации структур и защита сердца.-М.: Наука, 1993.-159 с.

98. Меньшиков В. В., Делекторская Л. Н., Золотницкая Р. П: и др. Лабораторные методы исследования в клинике. М., 1987. 368 с.

99. Метгазетдинов Д. Е., Карузина И. И., Арчаков А. И. Инактивация цитохрома Р-450 перекисью водорода, образующейся в каталитическом цикле при распаде пероксикомплекса // Биохимия. 1989. Т. 54. вып: 7. С. 1102-1107.

100. Методы биологии развития. М., 1974.240 с.

101. Морщакова Е. Ф., Пансков Е. Н. Влияние ингибирования белкового синтеза на продукцию эритропоэтина в почках // В кн.: Повреждение и ре1уляторные процессы организмаю М., 1982. С. 185 186.

102. Мулатова А. К. Морфофункциональная характеристика лимфоидных органов крыс при адаптационных реакциях // Функциональная морфология лимфоузлов и других органов иммунной системы. М., 1983: С. 120.

103. Ноздрачев А. Д., Жекалов А. Н., Коваленко Р. И., Галанцев В; П., Молчанов А. А. И др. Динамика перекисного окисления липидов при адаптации человека к новым экологическим условиям // Бюл. Эксп. Биол. и мед., 1997. № и. С. 678 -682.

104. Окада Ш. Радиационная биохимия клетки. М., 1974. 245 с.

105. Орлов Б. Д., Гелашвили Д. Б., Ибрагимова А. К. Ядовитые животные и растения СССР. М., 1990. 272 с.

106. Орлов Б. Д., Гелашвили Д. Б., Ушаков В. А. Ядовитые позвоночные и их яды. Учебное пособие. Горький, 1982. 92 с.

107. Орлов Б. Д., Гелашвили Д. В. Зоотоксинология. Ядовитые животные и их яды. М., 1985.280 с.

108. Орлов Б. Н., Конькова Л. Г. Зоотоксины и радиация // Механизмы действия зоотоксинов. Горький, 1978. С. 52 69.

109. ИЗ. Осипов А. Н., Азизова О. А., Владимиров Ю. А. Активные формы кислорода и их роль в организме // Успехи биол. химии. 1990. Т. 31. С. 180 -208.

110. Павлов А. Д., Морщакова Е. Ф. Регуляция эритропоэза: физиологические и клинические аспекты. М., 1987. 272 с.

111. Павлов А. Д., Морщакова Е. Ф., Румянцев А. Г. Регуляция эритропоэза: онтогенетические аспекты // Гемат. и трансфуз., 1999. № 6. С. 62.

112. Парк Д. Биохимия чужеродных соединений. М., 1973. 387 с.

113. Переверзев А. Е. Кроветворные колониеобразующие клетки и физические стресс-факторы. JI., 1986. 172 с.

114. Пигулевский С. В. Ядовитые животные. Токсикология позвоночных. М., 1966: С. 74-76.

115. Попова М. Ф. Радиочувствительность и стимулирующие свойства регенерирующих тканей млекопитающих. М., 1984. 221 с.

116. Пшенникова М. Г. Роль опиоидных пептидов в реакции организма на стресс // Патол. физиол., 1987. № 3. С. 85 90.

117. Пяткин Е. К., Баранов А. Е. Биологическая индикация дозы с помощью анализа аберраций хромосом и количества клеток в периферической крови // Итоги науки и техники. Сер. Радиационная биология. М., 1980. С. 103 -179.

118. Рыскулова С. Т. Радиационная биология плазматических мембран. М., 1986. 127 с.

119. Сергеев П. В. Плазматическая мембрана клетки-мишени и стероидные гормоны // Бюл. эксп. биол. и мед., 1995; № 10. С. 342 348.

120. Сергеев П.В. Стероидные гормоны. М.: Наука, 1984.240 с.

121. Скулачев В. П. Эволюция, митохондрии и кислород // Соросовский образовательный журнал. 1999. № 9. С. 4 10.

122. Соколовский В. В. Антиоксиданты в профилактике и терапии заболеваний//Международные медицинские обзоры. 1993. № 1. С. 11 -14.

123. Соколовский В. В. Окислительно-восстановительные процессы в биохимическом механизме неспецифической реакции организма на действие экстремальных факторов // Антиоксиданты и адаптация. 1984. С. 5-19.

124. Сосновский И. П. Амфибии и рептилии леса. М., 1983.143 с.

125. Суворова А. А., Веселова Н. А., Барабанова А. Е. Пострадиационное восстановление костного мозга человека и; морфодинамика пула недифференцированных клеток//Матер, арх., 1981 вып. 9. С. 127-131.

126. Тарусов Б. Н. Первичные процессы лучевого поражения. М., 1962. 230 с.

127. Теппермен Дж., Теппермен X. Физиология обмена веществ и эндокринной системы.-М.: Мир, 1989; 651 с.

128. Теста Н. Регуляция клеточных линий в гемопоэзе // Гемат. и трансфуз., 1994. №6. С. 7-8.

129. Тигранян П. А. Стресс и его значение для организма. М., 1988.218 с.

130. Тигранян П. А., Вакулина О. П. Содержание опиоидных пептидов в тканях крыс при длительном ограничении двигательной активности // Косм, биол., 1984. Т. 18. № 6. С. 83 85.

131. Тинякова О. П., Парин С. Б., Крылов В- Н. Исследование антиноцептивного действия яда саламандры пятнистой Salamandra salamandra//Журн. эволюц. биохим. и физиол. 1999. № 2. С. 111-116.

132. Трахтенберг И. М., Сова Р. Е., Шафтела В. М., Онищенко Р. А. Норма, адаптация, предпатология химического генеза. Гематологические показатели // Проблема нормы в токсикологии. М., 1991. С. 20 35; 142 — 145;

133. Уколова М. А., Гаркави JI. X., Квакина Е. Б. Об изменении взаимоотношений свертывающей и противосвертывающей систем крови при общей неспецифической адаптационной реакции тренировки // Система свертывания крови и фибринолиз. Киев, 1969. С. 159 160.

134. Ульянова Л. П., Будагов Р. С. Влияние предварительного облучения мышей в малой дозе на реакцию крови и выживаемость при последующих лучевом и комбинированном радиационно-термическом поражениях // Рад. биол. Радиоэк., 1997. Т. 37. № 5. с. 735 739.

135. Физиология лейкоцитов человека // Под ред. Алмазова В. А., Ленинград, 1979.230 с.

136. Филаретов А.А., Т.Т. Подвигина, Л.П; Филаретова Адаптация как функция гипофизарно- адренокортикальной системы .-СПб. : Наука, 1994 -131с.

137. Френкель Л. А. Радиобиология костной ткани. М., 1986.130 с.

138. Хавинсон В. X., Баринов В. А., Арутюнян А. В., Малинин В. В. Свободнорадикальное окисление и старение, 20031 328 с.

139. Хайдарму С. X. Функциональная биохимия адаптации. Кишинев, 1984. 270 с.

140. Хансон К. П., Комар В; Е. Молекулярные механизмы радиационной гибели клеток. М., 1985.76 с.

141. Чертков И. А., Флиндпггейн А. Я. Клеточные основы кроветворения. М., 1976.274 с.

142. Шанин Ю. Н., Шанин В: Ю., Зиновьев Е. В. Антиоксидантная терапия в клинической практике. С-П., 2003. 128 с.

143. Шилова О. П., Парин С. Б. Некоторые механизмы болеутоляющего действия яда пятнистой саламандры // Первая конференция герпетологов Поволжья (тез. док.). Тольятти, 1995; 68 с.

144. Шихлярова А. И. Адаптационно-трофическое влияние малых доз адреналина. Автореф. дис. . канд. биол. наук,, 1985. 24 с.

145. Шмаров Д. А., Кижаев Е. В., Сергеев Г. А., Крехнов Б. В. Параметры митотического цикла клеток костного мозга после облучения // Гемат. и трансф., 1993. № 5. С. 21 24.

146. Шмаров Д. А., Козинец Г. И. Закономерности клеточного цикла гемопоэтических клеток при действии ионизирующей радиации // Гемат. и трансф., 1995. № 6., С. 25 29.

147. Щербак Н. Н., Щербань М. И. Земноводные и пресмыкающиеся Украинских Карпат. Киев, 1980. 264 с.1521 Эверли Дж., Розенфельд Р. Стресс: природа и лечение М., 1985. 224 с.

148. Эйдус Л. X. Физико-химические основы радиобиологических процессов и защиты от облучения. М., 1977.223 с.154; Ярилин А. А., Шарый Н. И. Иммунитет и радиация. М., 1991. С. 36 — 39

149. Ярмоненко С. П. Радиобиология человека и животных. М., 1984.424 с.

150. Amelizad Z., Narbonne J. F. Interaction of xenobiotics and nutritional factors with drug metabolizing enzime systems // In: Cytochrome P 450, Biochemistry, Biophysics and Environmental Implication. Amsterdam, 1982. P: 63-66.

151. Arcos J. S., Conney A. H., Buu Hoi N. P. Induction of microsomal enzyme synthesis by polycuclic aromatic hydrocarbons of different molecular size // J. Biol. Chem., 1961. V. 236. P. 1291 - 1296.

152. Ascensao J., Versellotti G. M., Jacob H. S., Zanjani E. D. Role of endotelial cells in human hematopoiesis: Modulation of mixed colony growth in vitro // Blood. 1984. V. 63. P. 553 558.

153. Bannister J., Bannister W. What is superoxide dismutase? // Biochem. Educ. 1981. Vol. 9. N. 2.P.42-45.

154. Baxter J. D., Forsham P. H. Tissue effects of glucocorticoids // Amer. J. Med., 1972. V. 53. P. 573.

155. Beane P., Dansette P., Flinois J. P. Partial purification of human liver cytochrome P 450 // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1979. V. 88. P. 826 -832.

156. Blackburn M. J., Patt H. M. Increased survival of hemopoietic pluripotent stem cells in vitro induced by a marrow fibroblast factor // Brit. J. Haematol. 1977. V. 37. P. 337-344.

157. Borsa J., Ewing D., Dugle D. L., Einspenner M. Radiobiology of a differentiating cell system in vitro // Int. J. Radiat. Biol., 1982. V. 41. P. 369 -388.

158. Bourgeous S. Gasson J. C. Genetic Bases of Glucocorticoids Resistance in Lymphoid Cell Lines. N. Y., 1985. P. 240.

159. Byron J. W. Effect of steroids on the cycling of haemopoietic stem cells // Nature, 1970. V. 228. P. 1204.

160. Cohen J. J. Lymphocyte death induced by glucocorticoids. San Diego, 1989. P. 300

161. Colen J.J., Duke R.C. Glucocorticoid activation of a calcium-dependent endonuclease in thymocyte nuclei leads to cell death. J. Immunnol. 132: 38-42. 1984. P. 1305 -1312.

162. Comai K., Gaylor J. L. Existence and separation of three forms of cytochrome P 450 from rat liver microsomes // J. Biol. Chem., 1973. V. 248. P. 4947 - 4955.

163. Das S. K., Stanley E. R., Guilbert L. J., Forman L. W. Human colony -stimulating factor (CSF-1) radioimmunoassay: Resolution of three subclasses of human colony-stimulatory factors // Blood, 1981. V. 58. P. 630 641.

164. Denecamp J., Rojas A. Cell kinetics and radiation pathology // Experimentia, 1989. V. 45. № 1. P. 33 -41.

165. Dewey W. C., Ling C. C., Meyn R. E. Radiation-induced apoptosis: relevance to radiotherapy // Int. J. Radiat. Biol. Phis., 1995. V. 33. P. 781 — 796.

166. Dick K. A., Platenburg M. G., van Bekkum D. W. Colony formation in agar: in vitro assay for haemopoietic stem cells // Cell, Tissue Kinet., 1971. V. 4. P. 463-477.

167. Eliason J. F., Vassali P. Bone marrow physiology and radiobiology // Blood cells, 1988. №14. P. 339-354;

168. Emillson A., Gudbjaraason S. Changes in fatty acyl chain composition of rat heart phospholipids induced by noradrenaline // Biochem. Biophys. Acta., 1984. V.664I P. 82-86.

169. Fisher J. W. Control of erythropoietin production. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1983. V. 173. P. 289 306.

170. Fletcher D. L., Dillard C. J;, Tappel A. L. Measurement of fluorescent lipid peroxidation products in biological systems and tissues // Analit. Biochem. 1973. V. 52. P. 1-9.

171. Folch J., Less M:, Stenley A. A simple method for isolation and purification of total lipids from animal tissues // Biol. Chem. 1957. V. 226, № 2. P. 497 -509.

172. Fraioli F., Moretti C., Paolucci D., Aliciccio E., Grescenzi F., Fortunio G. Physical exercise stimulates marked concomitant release of beta-endorphin and ACTH in peripheral blood in man // Experimentia, 1980. V. 36. P. 987 989.

173. Goodhead D. T. Radiation effects in living cells // Can. J. Phis. 1990. V. 68. P. 872 882.

174. Guengerich F. P., Dannan G. A., Wright S. T. Purification and characterization of microsomal cytochrome P 450 // Xenobiotica, 1982, V, 12. P. 701-716.

175. Guillemin R., Vargo Th., Rossier J., Minick S., Ling N., Rivier C., Vale W., Bloom F. E. p-Endorphine and adrenocorticotropin are secreted concomitantly by the pituitary gland // Science, 1977. V. 197. P. 1367 1369.

176. Habermehl G. Toxicology, Pharmacology, Chemistry and Biochemistry of Salamander Venom. In.: Venomous Animals and Their Venom. Academ. Press. London, 1971. P. 569-584.

177. Habermehl V., Vogel G. Samandarine, a minor alkaloid < from Salamander maculosa. Laur. Toxicon, 1969. V. 7,2. P. 163.

178. Haimovitz-Freadman A. Radiation-induced signal transduction and stress respones // Radiat. Res., 1998. V. 150. № 5. P.102 -108.

179. Henry J. P. Present concept of stress theory // Catecholamines and stress: recent advances. N. Y., 1980. P. 555 571.

180. Imail Y., Nakao. I. The radiosensevity of cell // Exp. Hematol., 1987. V. 15. № 7. P. 890 895.

181. Janowsky D. S., Risch S. C., Huly L. Y. Et al. Hypothalamic pituitary -adrenal regulation, neurotransmitters and affective disorders // Peptides, 1983. V. 4. P. 775-784:

182. Kadiri L. A., Waff D. E. Common mechanism in the induction of variol biological effects by ionising radiation // Int. J; Radiat. Biol. 1990. V. 57. P. 249 -262

183. Kaspers G. J. L. Drug Resistance in Newly Diagnosed Childhood Leukemia. Amsterdam, 1993. P. 140.

184. Kaspers G. J. L., pietrs R., Klumper E. Et al. Glucocorticoid Resistance in Childhood Leukemia. Amsterdam, 1993. P. 56.194; Krantz S. B., Jacobson L. O. Erythropoietin and the regulation of erythropoiesis. Chicago-LONDON. 1971. P. 330.

185. Lewis J. M., Tordoff M. G., Sherman J. E., Liebski J. C. Adrenal-medullary enkephaline-like peptides may mediate opioid stress analgesia // Science, 1982. V. 217. № 4550. P. 557 559.

186. Lindell M., Daniel A. The role of stress hormones in the catabolic metabolism of shock// Sure. Gynec. Obstet.-1979.-VoI. 149. P.822-831

187. Macario A. J. L., Dugan Ch., Perez-Lloret I. L., Le Macario E. C. Purification of erythroblastic nests // Blood, 1981. V. 1957. P. 922 927.

188. Matuszek A., Reszka K. J., Chignell C. F. Reaction of melatonin and related indols with hydroxyl radicals and spin trapping agents // Free Radical Biol; Med. 1997. Vol; 23. P; 367 372.

189. McCulloch E. A., Siminovitch L., Till J. E. The role of independent and dependent stem cells in the control of hemopoietic and immunological respones // In: Hematopoietic cell differentiation. N. Y., 1978. P. 317 333.

190. Meerson F. Z. Adaptation, stress and prophylaxis. Verlag., 1984. 329 P.

191. Meerson F. Z. Adaptive protection of the heart: protecting against stress and ishemic damag. Boca Ration. CRC Press., 1991.290 P.

192. Meister A., Anderson M. Glutathione // Ann. Rev. Biochem. 1983. Vol. 52. P. 711 -760.

193. Messner H. A., Fauser A. A., Brick R., Chang L., Lepine J. Assesment of human pluripotent hemopoietic progenitors and leukemic blasts-forming cells in culture // In: Modern trends in human leukemia IV. Berlin, 1981. P. 246 -250.

194. Metcalf D. Control of hemopoietic cell proliferation and differentiation // Contr. Cell. Div., 1981. Pt A. P. 473 486.

195. Metcalf D. Early events in the suppression of myeloid leukemic cells by biological regulators // In: modern trends in human keukemia, 1983. P. 320 -326.

196. Miller W.L., Tirrell J.B. The adrenal cortex // In: Endocrinology and Metabolism (Felig P., Baxter J., Frohman L., Eds.). McGraw-Hill Inc. NY. 1995.P.555-680

197. Nakahata T., Ogawa M. Identification in culture of a class of hemopoietic colony-forming units with extensive capability of self-renew and generate multipotential hemopoietic colonies. USA, 1982. V. 79. P. 3843 -3847.

198. Neuwirt J. Erythropoietic precursor cells in culture // Blut, 19811 V. 43. P. 65-69.

199. Palkovits M. Organization of the stress response at the cellular level // In: Progress in Brain Research (de Kloet E., Wiegant V., de Wied D., Eds.) Elsevier, Amsterdam. 1987. P. 137-174

200. Preusser H., Habermehl G., Sablafski M., Schonall-Haury D. Antimicrobial activity of alkaloids from amphibian venom and effects on the ultrastracture of yeast cells. Yn: Anim., Plant and Microbial Toxins, V. 1, N-y-London, 1976, P. 273-286.

201. Radford I. R. Evidens for a general relationship between the induced level of DNA double-strand brakage and cell killing after X-radiation of mammalian cells // Int. J; Radiat. Biol., 1986. V. 49. P. 611 620.

202. Renauld J. S., Houssiau F. Et al: Chemokine I 309 / TC A3 Protects Murine T-cells lymphomas against dexamethasone - induced' apoptosis. Leuven, 1992. P. 130.

203. Roodyn D. B., Freeman K. B., Tata J. R. The stimulation by treatment in vivo with tri-iodothyronine of amino acid incorporation into protein by isolated rat liver mitochondria // Biochem. J., 1965. V. 94. P. 628 641.

204. Sava L., Lombart Ch., Nunez E. Corticosterone binding globulin: an acute phase "negative" protein in the rat // FEBS Lett., 1980. V. 113. P. 102 106.

205. Selye H. The stress of life. NY-Toronto-London: McGrow-Hill Book Company, 1956. P. 325.

206. Smelik P. G. Factors determing the pattern of stress responeses // Sterss: the role of catecholamines and other neurotransmitters. N. Y., 1984. V. 1. P. 17 — 25.

207. Steinberg D. The control of lipid metabolism. Academic Press. L. N. Y., 1963. P. 111.

208. Taylor T., Dluhy R., Williams G. Beta-endorphin suppressed adrenocorticotropin and Cortisol levels in 9 normal humen subjects // J. Clin. Endocrinol. Metab., 1983: V. 57. P. 592 596.

209. Testa N. G. Erithroid progenitor cells: their relevence for the study of haematological disease. Clin. In Haematol. 1989. V. 8. P. 311 — 333.

210. The red blood cell. V. 1 // Ed. Surgenor D. M. N. Y.: Acad.Press. 1974. P. 11.

211. Van Zant G., Goldwasser E., Pech N. Competition between erythropoietin and colony stimulating factor for target cells in mouse marrow // Blood. 1979. V. 53. P. 946-965.

Информация о работе

Овощникова, Лада Владимировна
кандидата биологических наук
Нижний Новгород, 2004
ВАК 03.00.13

Диссертация

Физиологический анализ действия яда саламандры на систему крови крыс в норме и при экспериментальном лучевом поражении - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы