Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Эколого-физиологическая характеристика адаптогенных свойств зоотоксинов при повреждающем действии гамма-облучения на организм экспериментальных животных

ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Эколого-физиологическая характеристика адаптогенных свойств зоотоксинов при повреждающем действии гамма-облучения на организм экспериментальных животных"

На правах рукописи

ЭКОЛОГО-ФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА АДАПТОГЕННЫХ СВОЙСТВ ЗООТОКСИНОВ ПРИ ПОВРЕЖДАЮЩЕМ ДЕЙСТВИИ ГАММА-ОБЛУЧЕНИЯ НА ОРГАНИЗМ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ

03.00.16 — экология 03.00.13 — физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

003066252

Нижний Новгород 2007

003066252

Работа выполнена на кафедре физиологии и биохимии человека и животных Нижегородского государственного университета им Н И Лобачевского

Научный консультант:

Официальные оппоненты

доктор биологических наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ Крылов Василий Николаевич

доктор медицинских наук, профессор Бояринов Геннадий Андреевич

доктор биологических наук, профессор Конторщикова Клавдия Николаевна

доктор биологических наук, профессор Моничев Александр Яковлевич

Ведущая организация:

Институт экологии Волжского бассейна РАН (г Тольятти)

Защита состоится «!?_»QfcMff&Pff 2007 г в ^ часов на заседании диссертационного совета Д 212166.12 при Нижегородском государственном университете им Н И Лобачевского (603950, г Нижний Новгород, пр Гагарина, 23, корп 1, биологический факультет)

e-mail ecology@bio unn ru факс (831)-465-85-92

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Нижегородского государственного университета им Н И Лобачевского

Автореферат разослан « jtf »сеншъря 2007 г

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 212 166 12 (^¿Я' /

кандидат биологических наук, доцент г А Кравченко

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы

Обострение радиоэкологической ситуации в стране, как результат техногенных аварий на ядерных объектах, испытаний оружия массового поражения, захоронения отходов с атомных электростанций ставит задачу поиска научно-обоснованных методов и средств, обеспечивающих адаптацию и повышение резистентности организма человека и животных к повреждающему действию радиации, особенно при многократном (фракционированном) и хроническом облучении (Кудряшов, Гончаренко, 1999, 2004) Классические радиопротекторы из-за своей высокой токсичности и кратковременности действия (1-2 часа) оказались непригодными в сложившихся условиях (Ярмоненко, Вайнсон, 2004) Стресс — наиболее известная неспецифическая адаптационная реакция, развивающаяся в ответ на действие сильных раздражителей, обычно неблагоприятных для организма Стадия резистентности стресс-реакции характеризуется повышенной устойчивостью не только к данному стрессору, но и к действию других факторов (Селье, 1972, 1977) Необходимо отметить, что при стрессе, наряду с элементами защиты, имеются элементы повреждения Стресс — это реакция, при которой сохранение жизни (защита) достигается ценой повреждения

В настоящее время известны еще две адаптационные реакции — реакция активации и реакция тренировки (Гаркави и др, 1998) Они развиваются в ответ на относительно слабые (реакция тренировки) или средние (реакция активации) воздействия В отличие от стресса изменения при этих реакциях по своему характеру близки к вариантам нормы При продолжительном действии раздражителя средней силы развивается вторая стадия активации — устойчивая (стойкая) активация На этой стадии происходит повышение активной резистентности, формирующейся не запредельным торможением в центральной нервной системе и снижением чувствительности, как при стрессе, а обусловленной истинным подъемом активности защитных и регуляторных систем организма (Гаркави и др, 1990)

Несомненный интерес в этом направлении исследований вызывают яды природного происхождения Отметим, что наибольшей физиологической активностью в этой группе биологически активных веществ обладают яды (зоотоксины) пчёл, змей, пауков, скорпионов и др В настоящее время зоотоксины успешно применяются в исследованиях для решения фундаментальных и прикладных задач биологии (Гелашвили, 2002, Meier, 1986), используются в медицине в качестве лекарственных средств (Орлов, Вальцева, 1977; Крылов, Млявый, 2002) Вводимые в малых дозах, они вызывают в организме комплекс приспособительных изменений как соматовегетативных функций, так и процессов метаболизма, направленных на сохранение гомеостаза Очевидно, что

такой комплекс реакций может стать фактором, запускающим или усиливающим в организме цепь взаимосвязанных процессов, повышающих его резистентность В то же время систематические исследования, посвященные изучению адаптогенных свойств зоотоксинов, до сих пор не проводились Имеются немногочисленные работы, в которых показаны противолучевые свойства пчелиного яда (Артемов, 1975), жабьего яда (Орлов, Конькова, 1978), ядов змей (Халиков и др , 1975, Бердыева, 1990) Обычно при исследованиях зоотоксины вводятся в организм однократно в дозах близких к летальным, что приводит к развитию стресс-реакции, стадия резистентности которой и характеризуется повышенной устойчивостью к повреждающему действию радиации Действие зоотоксинов на живые системы в малых дозах (в десятки раз ниже летальных), вызывающих адаптационные реакции активации и тренировки не исследовалось, хотя именно эти реакции создают повышенную устойчивость организма к самым различным неблагоприятным факторам, не сопровождающуюся, как при стрессе, структурными повреждениями и напряженностью адаптационных процессов (Гаркави др , 1998)

Экстренная противолучевая терапевтическая помощь — наименее освоенная область радиационной биологии и медицины (Кудряшов, Гончаренко, 1999) С учетом того, что слабые раздражители могут вызывать благоприятные для организма реакции на фоне действия патогенных раздражителей, на фоне течения болезни, переводя его из стрессового состояния в другую более оптимальную неспецифическую реакцию (тренировка, активация) (Гаркави и др, 1998), исследование адаптогенных свойств малых доз зоотоксинов на фоне предварительного облучения, на фоне лучевой болезни является весьма перспективным

Продукты пчеловодства — мед, прополис, маточное молочко — многокомпонентные смеси, обладающие широким спектром биологической активности Многочисленные исследования показали, что они обладают общим тонизирующим действием, стимулируют энергетические процессы в клетках, активируют процессы биосинтеза (Лудянский, 1994, ТасЬс е1 а!, 1995, Крылов и др, 1998) Лучевое поражение организма, напротив, сопровождается угнетением этих процессов, дестабилизацией мембран (Кудряшов, 1986, Рыскулова, 1986, Коломийцева, 1989), что указывает на возможность продуктов пчеловодства, в силу их биологической активности, снижать тяжесть поражения организма

В связи с изложенным в настоящей работе проведены исследования по обоснованию адаптогенных свойств малых доз зоотоксинов (меньших 0,02 ОЬ50) пчелы, саламандры и жабы, а также продуктов пчеловодства при повреждающем действии радиации Исследуемые зоотоксины имеют различную химическую природу (яд пчелы представлен компонентами белковой природы, яд саламандры — это стероидные алкалоиды, яд жабы

сформирован компонентами стероидной и индольной природы) и разную специфическую направленность (яд пчелы проявляет гематотропные свойства, яд саламандры обладает нейротропным действием, яд жабы — кардиотоник)

Цель и основные задачи исследования

Цель работы: обоснование адаптогенных свойств зоотоксинов (ядов) пчелы медоносной (Apis mellifera L, Insecta, Hymenoptera), саламандры пятнистой (Salamadra salamadra L, Amphibia, Caudata) и жабы зеленой (Bufo viridis L, Amphibia, Anura), оцениваемых по показателям системы крови, при повреждающем действии гамма-облучения на организм экспериментальных животных

Цель исследования определила следующие задачи

1 Установить тип адаптационной реакции экспериментальных животных при однократном и курсовом введении зоотоксинов по показателям белой крови и красного костного мозга

2 Диагностировать возникновение радиорезистентности по показателям белой крови и красного костного мозга у экспериментальных животных, находящихся в состоянии устойчивой активации, вызванной профилактическим курсовым введением зоотоксинов, при однократном гамма-облучении в дозе 3 Гр

3 Определить длительность состояния радиорезистентности экспериментальных животных, подвергнутых однократному гамма-облучению в дозе 3 Гр в разные сроки после профилактического курсового введения зоотоксинов, по показателям периферической крови, красного костного мозга и активности свободнорадикальных процессов

4 Изучить профилактическую радиопротекторную эффективность зоотоксинов при фракционированном гамма-облучении экспериментальных животных в дозах 1,5 и 3,0 Гр по показателям периферической крови, красного костного мозга

5 Изучить адаптогенную эффективность зоотоксинов по показателям периферической крови, красного костного мозга и активности свободнорадикальных процессов после однократного гамма-облучения экспериментальных животных в дозе 5 Гр

6 Провести сравнительный анализ адаптогенной эффективности продуктов пчеловодства (пчелиного яда, прополиса, мёда, маточного молочка) по показателям периферической крови и активности свободнорадикальных процессов после однократного гамма-облучения экспериментальных животных в дозе 3 Гр

Научная новизна

В работе впервые проведено исследование неспецифических реакций организма экспериментальных животных при однократном и курсовом введении зоотоксинов пчелы, саламандры и жабы в малых дозах Установлено, что курсовое введение зоотоксинов жабы, пчелы (0,1 мг/кг) и

саламандры (0,5мг/кг) приводит к развитию адаптационной реакции устойчивой активации Впервые показано, что реакция устойчивой активации характеризуется возникновением состояния

радиорезистентности организма, продолжительность которого составляет 3-4 недели в зависимости от природы яда Впервые установлено, что состояние продолжительной радиорезистентноти, вызванное курсовым введением зоотоксинов в малых дозах, способствует эффективной защите системы крови от фракционированного гамма-облучения в суммарной дозе 1,5 Гр и суммарной дозе 3 Гр Впервые показано, что зоотоксины пчелы, саламандры и жабы проявляют выраженное адаптогенное действие и на фоне предварительного повреждающего действия гамма-облучения, что, по всей видимости, связано с их способностью переводить организм из состояния стресса в состояние устойчивой активации Среди продуктов пчеловодства (зоотоксинов пчелы, прополиса, мёда и маточного молочка) адаптогенной эффективностью, при их применении после облучения, обладают только зоотоксины пчелы и прополис

Научно-практическое значение

Выявленные закономерности проявления неспецифических реакций могут лежать в основе многих известных в настоящее время адаптогенных эффектов зоотоксинов Полученные данные указывают, что при использовании зоотоксинов животных в качестве лекарственных средств в клинике и эксперименте необходимо учитывать возможное развитие системных неспецифических реакций Результаты исследования позволяют дифференцировать неспецифические эффекты зоотоксинов, в основе которых лежат системные адаптационные реакции от специфического действия, обусловленного особенностями химической природы животных ядов Использование методов многомерной статистики и функции желательности может быть рекомендовано для использования в радиобиологии при поиске противолучевых средств Полученные данные открывают перспективу использования зоотоксинов в качестве эффективных адаптогенов при фракционированном и, возможно, хроническом действии радиации

Основные положения, выносимые на защиту

1 Курсовое введение зоотоксинов пчелы медоносной (Apis mellifera L, Insecta, Hymenoptera), саламандры пятнистой (Salamadra salamadra L, Amphibia, Caudata) и жабы зеленой (Bufo viridis L, Amphibia, Anura) экспериментальным животным в дозах меньших 0,02 DL50 вызывает развитие адаптационной реакции типа устойчивой (стойкой) активации

2 Формирование адаптационной реакции устойчивой активации у лабораторных животных, вызванное профилактическим курсовым введением малых доз зоотоксинов, сопровождается возникновением состояния радиорезистентности

3 Состояние радиорезистентности к однократному гамма-облучению у экспериментальных животных, вызванное профилактическим курсовым введением малых доз зоотоксинов, сохраняется в течение трех-четырех недель (в зависимости от природы зоотоксинов)

4 При фракционированном гамма-облучении экспериментальных животных профилактическая радиопротекторная эффективность выражена сильнее у зоотоксинов пчелы и жабы, чем у зоотоксинов саламандры

5 Курсовое введение зоотоксинов пчелы, саламандры и жабы экспериментальным животным после однократного гамма-облучения в дозе 5 Гр оказывает положительный адаптогенный эффект, объясняемый развитием адаптационной реакции устойчивой активации

6 Среди продуктов пчеловодства (зоотоксинов пчелы, прополиса, мёда и маточного молочка), применяемых после однократного гамма-облучения в дозе 3 Гр, адаптогенные свойства проявляют только зоотоксины пчелы и прополис, как вещества понижающие активность свободнорадикальных процессов и нормализующих показатели белой крови поврежденного организма

Апробация работы

Материалы диссертации были доложены на III, VI VII, X, XII Международных научно-практических конференциях по апитерапии (г Рыбное Рязанской обл, 1994, 1997, 1999, 2002, 2006), на Российской научной конференции «Антиоксиданты и актопротекторы» (С -Петербург, 1994), на I конференции герпетологов Поволжья (Тольятти, 1995), XXXV Congress international d'apiculture (Anvers, Belgique, 1997), международной конференции «Пчеловодство — XXI век» (Москва, 2000),

II Международной конференции молодых ученых (Самара, 2001),

III Всероссийской конференции «Гипоксия механизмы, адаптация, коррекция» (Москва, 2002), I Международной конференции по пчеловодству и пчелотерапии «Белорусский мед» (Минск, 2002), IX Международной конференции аспирантов и молодых ученых «Ломоносов» (Москва, 2002), VI конференции молодых ученых «Биология — наука XXI века» (Пущино, 2002), XXXVIII Apimondia International Apicultunal Congress (Lublana, Slovenia, 2003), на III Международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования в системе образования» (Тамбов, 2005), на VIII Всероссийском популяционном семинаре «Популяции в пространстве и времени» (Нижний Новгород, 2005), на III Европейском конгрессе по социальным животным (С -Петербург, 2005), на VII Всемирном конгрессе «Международное сообщество для адаптивной медицины» (Москва, 2006)

Публикации

Всего по теме диссертации опубликованы 47 работ, из них 12 — в изданиях, рекомендованных ВАК, получено 3 авторских свидетельства на изобретения

Объём и структура работы

Материалы диссертации изложены на 257 страницах машинописного текста, иллюстрированы 51 таблицами и 20 рисунками Работа состоит из введения, обзора литературы, характеристики материалов и методов исследования, глав результатов исследования, обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, содержащего 305 источников, из которых 186 на русском языке и 119 на иностранных языках, приложения

Личный вклад соискателя

В исследованиях, которые положены в основу диссертационной работы, соискатель ставил проблему, подбирал методы исследования, планировал эксперимент, принимал личное участие в проведении экспериментальных исследований, обработке и оценке результатов и формулировке выводов

1. Обзор литературы

В обзоре представлены обобщенные литературные данные по биологическим эффектам зоотоксинов пчелы, саламандры и жабы, продуктов пчеловодства, убихинона на организм человека и животных, освещены типы адаптационный реакций, а также представлены некоторые аспекты повреждающего действия на живые системы ионизирующей радиации

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2. Материалы и методы

Исследования проводились на нелинейных белых крысах массой 180-250 г Всего было использовано 763 животных Животные разделялись на группы по 7 особей в каждой.

2.1. При изучении типа неспецифического адаптационного ответа использовали зоотоксины пчелы медоносной (Apis melífera L), саламандры пятнистой (Salamandra salamandra L) и жабы зеленой (Bufo viridis Laur) Исследуемые растворы ядов в объеме 0,2 мл вводили животным внутрибрюшинно в дозах 0,1 и 0,5 мг/кг однократно или курсом в течение 7 дней ежедневно Выбор доз был обусловлен данными литературы об их эффективности при терапии и профилактике модельных патологических процессов у животных (Артемов, 1969, Орлов и др , 1982, Крылов, 1995), а также их токсичностью (DL50 яда пчелы — 8-10 мг/кг, яда саламандры — 28-30 мг/кг, яда жабы — 60-65 мг/кг) Животным контрольных групп вводили соответствующий растворитель (для

пчелиного яда — физиологический раствор, для ядов саламандры и жабы — 12 % этанол на физиологическом растворе)

Костный мозг для анализа количественного состава кроветворных клеток забирали из бедренной кости на следующие сутки после окончания инъекций В камере Горяева определяли общее количество клеток красного костного мозга в одной бедренной кости (Горизонтов и др , 1983), митотический индекс, процентное содержание клеток с хромосомными аберрациями (Макгрегор, Варли, 1986, Методы , 1974) Интенсивность процессов свободнорадикального окисления (СРО) и активность антиоксидантных систем в сыворотке крови оценивали, используя метод индуцированной хемилюминесценции (БХЛ) (Кузьмина, 1983) Определение лейкоцитарной формулы проводили общепринятым методом с окраской мазков по Романовскому—Гимзе (Меньшиков и др , 1987), при этом были учтены рекомендации JI X Гаркави (1998) по подсчету лейкоцитарной формулы при использовании её в качестве сигнального показателя системных неспецифических реакций На основании лейкоцитарной формулы вычисляли лейкоцитарный коэффициент

2.2. При диагностике возникновения состояния радиорезистентности зоотоксины вводили предварительно перед облучением в течение 7 дней с периодичностью 1 раз в сутки Использовали те же дозы ядов, что и при курсовом введении зоотоксинов в условиях относительной нормы Через сутки после окончания инъекций животные подвергались однократному общему гамма-облучению (60Со) на терапевтической установке «АГАТ-С» в дозе 3 Гр (мощность дозы 1 Гр/мин) Животные группы «контроль на облучение» не подвергались никаким воздействиям, за исключением облучения

Через сутки после облучения определяли лейкоцитарную формулу, лейкоцитарный коэффициент, показатели состояния костного мозга и интенсивность перекисного окисления липидов в крови по содержанию малонового диальдегида (МДА) (Владимиров, Арчаков, 1972)

2.3. При изучении продолжительности состояния радиорезистентности, вызванного действием зоотоксинов, животных опытных групп подвергали общему гамма-облучению через разные сроки (7, 14, 21 и 28 суток) после окончания курса инъекций Костный мозг и кровь для анализа забирали через сутки после облучения В них определяли те же показатели, что и в предыдущих случаях Кроме того, в опытах оценивали интенсивность перекисного окисления липидов (ПОЛ) в плазме крови по содержанию его первичных и вторичных продуктов (диеновые и триеновые конъюгаты) (Fletcher et al., 1973) Содержание продуктов перекисного окисления выражали в единицах оптической плотности на мг общих липидов Общее содержание липидов в плазме определяли с помощью стандартных наборов реактивов

2.4. При исследовании адаптогенных свойств зоотоксинов к фракционированному гамма-облучению яды вводились животным предварительно в течение 7 дней в дозах 0,1 мг/кг и 0,5 мг/кг Животные подвергались облучению в течение 5 дней ежедневно в дозе 0,6 Гр и 0,3 Гр в день Общая доза составила соответственно 3 Гр и 1,5 Гр (мощность дозы 1 Гр/мин) Первому облучению животные подвергались через сутки после окончания инъекций На следующие сутки после последнего облучения определялось состояние системы крови костного мозга и периферической крови, для чего определяли концентрацию гемоглобина, количество эритроцитов, лейкоцитов, лейкоцитарную формулу, общее количество клеток костного мозга, митотический индекс, хромосомные аберрации, а также процентное соотношение клеток разных ростков кроветворения, концентрацию МДА

2.5. Для исследования адаптогенных свойств зоотоксинов на фоне повреждающего действия ионизирующей радиации животных облучали в дозе 5 Гр, вызывающей костномозговую форму лучевой болезни средней степени тяжести Введение ядов проводили через 2 часа после облучения и далее в течение 7 суток Через 1 и 28 суток после окончания инъекций исследовали состояние костного мозга и белой крови Условия введения зоотоксинов и анализа показателей были аналогичны предыдущим сериям экспериментов

2.6. При сравнительном изучении адаптогенной эффективности продуктов пчеловодства и тест-вещества антиоксиданта убихинона-10 на фоне предварительного однократного гамма-облучения экспериментальных животных в дозе 3 Гр применение исследуемых веществ проводили в течение 10 суток, начиная через 2 часа после облучения Мёд и смесь маточного молочка с медом животные получали перорально Для введения прополиса (препарат «Апигалин») крысы подвергались ингаляции препаратом в течение 10 минут ежедневно в проточной камере с помощью ультразвукового ингалятора ИУП-01М Яд пчелы вводили внутрибрюшинно в дозе 0,1 мг/кг В опытах использовали масляный препарат убихинона-10 из расчёта 2 мг/кг Контролем служило растительное масло Убихинон и растительное масло вводили животным внутрижелудочно при помощи зонда в объеме 0,2 мл Сравнительную эффективность адаптогенных свойств исследуемых веществ оценивали, определяя в крови концентрацию МДА (одного из вторичных продуктов липопероксидации), а также количество лейкоцитов, эритроцитов, гемоглобина Кровь для анализа забирали из подъязычной вены на 1, 8, 15 сутки после окончания введения продуктов пчеловодства и убихинона

2.7 При проведении исследований по определению типа неспецифических адаптационных реакций экспериментальных животных при курсовом пероральном введении наночастиц золота, содержащих зоотоксин пчелы, нанокомпозиты вводили внутрижелудочно с помощью

зонда общим объемом 1 мл на животное, что соответствовало дозе зоотоксинов 0,5 мг/кг Композиты вводили ежедневно в течение 7 суток Кровь для анализа забирали на следующие сутки после окончания курса введения

Результаты исследований обрабатывали статистически с помощью программы Primer of Biostatistics Version 4 03 (Гланц, 1999) и STADIA Нормальность распределения данных проверяли с использованием критерия Шапиро-Уилка Выборки сравнивали с помощью однофакторного дисперсионного анализа, i-критерия Стьюдента с учётом поправки Бонферрони (Гланц, 1999)

Данные, полученные при фракционированном гамма-облучении, дополнительно подвергались статистической обработке с помощью кластерного анализа (метод Уорда) и методов многомерной статистики и обобщенной функции желательности (Воробейчик и др , 1994, Булгаков и др , 2003, Гелашвили и др , 2004)

3. Результаты и их обсуждение

3.1. Исследование неспецифических реакций при курсовом внутрибрюшинном введении зоотоксинов

Для многократного введения были выбраны дозы зоотоксинов, не вызывавшие в системе крови при однократной инъекции признаков напряженных адаптационных реакций, т е стресс-реакции и активации с признаками напряженности адаптации Яд жабы и пчелы вводили в дозе 0,1 мг/кг, яд саламандры — в дозе 0,5 мг/кг в течение 7 дней Состояние белой крови после окончания хронического введения всех ядов соответствовало реакции активации без признаков напряженности адаптационных процессов, о чем свидетельствовало увеличение процентного содержания лимфоцитов до верхних границ нормы и статистически значимое снижение относительного количества сегментоядерных нейтрофилов (табл 1) Надо полагать, что многократное действие ядов приводило к формированию второй стадии реакции активации — устойчивой активации, при которой организм аналогично стадии резистентности стресса приобретает устойчивость к самым разнообразным неблагоприятным воздействиям Однако резистентность, в отличие от стресса, достигается не путем жертвы и повреждения, усиления процессов распада, а более физиологическими механизмами, те в результате гармоничного повышения активности всех защитных систем организма, активации, как катаболических процессов, так и анаболизма (Гаркави и др, 1990, 1998) Устойчивая активация характеризуется стойкостью и продолжительностью и не приводит к наступлению фазы истощения, как продолжительный стресс

Таблица 1

Влияние курсового введения зоотоксинов пчелы, жабы (0,1 мг/кг х 7 дней) и саламандры (0,5 мг/кг х 7 дней) на соотношение лейкоцитов (%) в крови

Группы животных Нейтрофилы (всего) Сегментоядерные нейтрофилы Лимфоциты

интактные 28,3 ± 1,6 26,4 ±1,9 64,4 ± 1,7

контроль для зоотоксинов пчелы (физ р-р) 26,9 ± 1,4 17,6 ± 0,8* 66,0 ±1,4

зоотоксины пчелы 14,7 ±2,3*+ 8,7 ± 1,5*+ 79,6 ± 2,8*+

контроль для зоотоксинов саламандры и жабы (12 % этанол) 27,5 ± 2,3 18,7 ± 1,9 64,2 ± 2,8

зоотоксины саламандры 16,1 ± 1,3*+ 10,2 ± 0,8*+ 79,1 ± 1,9*+

зоотоксины жабы 13,9 ±4,3*+ 7,4 ± 0,7*+ 79,9 ± 4,0*+

Примечание * — статистически значимо отличается от интактных (р < 0,05), + — статистически значимо отличается от контроля (р < 0,05)

Таблица 2

Влияние курсового введения зоотоксинов пчелы, саламандры и жабы на количество клеток красного костного мозга в бедренной кости крыс и митотический индекс

Группы животных Количество клеток костного мозга, 106 Митотический индекс (%о)

интактные животные 11,8 ±0,2 23,0 ±1,0

контроль для зоотоксинов пчелы 11,8 ±1,8 19,0 ±1,0

зоотоксины пчелы 11,9 ±1,9 5,5 ± 0,9*+

контроль для зоотоксинов саламандры и жабы 11,8 ±0,1 24,0 ± 2,0

зоотоксины саламандры 12,4 ± 0,2 14,0 + 1,5*+

зоотоксины жабы 11,7 ±0,1 27,0 ± 2,0*+

* — статистически значимо отличается от интактных (р < 0,05), + — статистически значимо отличается от контроля (р < 0,05)

Дополнительно было проведено исследование влияния многократного введения ядов на кроветворную ткань костного мозга в условиях относительной нормы

Общее содержание клеток костного мозга соответствовало норме, при этом наблюдалось снижение пролиферативной активности, о чем свидетельствовало уменьшение митотического индекса (табл 2) Вероятно, компоненты зоотоксинов оказывают активирующее действие на гипоталамо-гипофизарную систему, в результате чего увеличивается секреция АКТГ, что приводит к повышению уровня глюкокортикоидов, которые снижают митотическую активность кроветворных клеток костного мозга Количество относительно зрелых, неделящихся клеток в кроветворной ткани значительно превышает количество пролиферирующих клеток-предшественников, поэтому кратковременное снижение скорости деления не приводило к уменьшению общего количества клеток костного мозга

Одной из задач применения адаптогенов и других биологически активных веществ является необходимость противодействия возрастанию активности свободнорадикальных процессов (Борткевич, 1996)

При исследовании влияния малых доз зоотоксинов на активность свободнорадикальных процессов в сыворотке крови методом БХЛ показано, что курсовое введение ядов жабы и саламандры снижало активность СРО, о чем свидетельствовало уменьшение параметра светосуммы (5) по сравнению с интактными животными (р < 0,05) (табл 3)

Таблица 3

Параметры хемилюминесценции сыворотки крови крыс после курсового введения зоотоксинов

Группы животных 5, отн ед /тах, отн ед 182

интактные 92,4 ± 5,2 26,6 ± 3,3 14,3 ± 1,9

контроль для зоотоксинов пчелы 92,3 ± 1,6 27,7 ± 1,6 15,9 ± 1,5

зоотоксины пчелы, 0,1 мг/кг 79,1 ± 2,7 27,4 ± 1,9 14,8 ± 2,3

контроль для зоотоксинов жабы и саламандры 90,8 ± 2,4 25,9 ± 1,5 14,8 ± 1,1

зоотоксины жабы, 0,1 мг/кг 75,1 ± 2,4*+ 24,2 ± 2,2 12,9 ± 1,4

зоотоксины саламандры, 0,5 мг/кг 76,8 ± 6,7* 20,5 ± 1,8 10,7 ± 1,4

Статистически значимые отличия * — р < 0,05 по отношению к интактным животным, +—р< 0,05 по отношению к контролю

При введении пчелиного яда наблюдалась тенденция к снижению данного показателя (0,05 <р < 0,1) Исследуемые зоотоксины не оказывали влияния на значение максимальной интенсивности сигнала (/шах) и антиоксидантный потенциал сыворотки крови ^2) (р > 0,05) (табл 3)

Малые дозы исследуемых зоотоксинов при многократном введении не обладали мутагенным действием, не увеличивали уровень хромосомных аберраций в клетках костного мозга крыс (р > 0,05)

Таким образом, проведённые исследования показали, что курсовое внутрибрюшинное введение экспериментальным животным малых доз зоотоксинов пчелы, саламандры и жабы вызывает развитие адаптационной реакции устойчивой (стойкой) активации, сопровождающейся снижением количества нейтрофилов, увеличением количества лимфоцитов, а также уменьшением активности свободнорадикальных процессов и ингибированием (за исключением яда жабы) пролиферативной активности кроветворных клеток Зоотоксины не оказывали мутагенного действия на клетки кроветворной ткани красного костного мозга и не влияли на их количество

3.2. Диагностика возникновения состояния радиорезистентности

При диагностике возникновения радиорезистентности у экспериментальных животных, находящихся в состоянии устойчивой активации, вызванной профилактическим введением зоотоксинов, их подвергали однократному гамма-облучению в дозе 3 Гр У животных контрольных групп на следующие сутки после облучения наблюдалось статистически значимое снижение общего количества клеток костного мозга по сравнению с интактными животными У животных, находящихся в состоянии активации, количество выживших клеток было выше в среднем на 20-30 % по сравнению с контролем (рис 1)

Было установлено, что все исследуемые зоотоксины оказывали защитное действие на систему периферической белой крови Яды пчелы, жабы и саламандры статистически значимо увеличивали, по сравнению с показателями контрольных групп, количество выживших лейкоцитов в среднем на 40-50 % (рис 2)

Действие гамма-облучения сопровождалось угнетением пролиферативной активности клеток костного мозга, о чём свидетельствовало снижение митотического индекса клеток в контрольных группах в 2 раза по сравнению с интактными животными У животных, которым вводили зоотоксины (за исключением яда жабы), пролиферативная активность кроветворных клеток была статистически значимо выше, чем в контроле (табл 4) Торможение процессов пролиферации одна из главных причин клеточного опустошения

кроветворных органов при повреждающем действии ионизирующей радиации (ЕСудряшов, Беренфельд, [982; Владимиров, Джаракьян, 1982).

*®ба саламандра

группы

□ интактные ■ контроль на облучение 6Э контроль □ опыт

Рис.I. Влияние предварительного многократного введения зоотоксинов пчелы, жабы, саламандры на общее количество клеток костного мозга в бедренной кости крыс при однократном облучений в дозе 3 Гр. * — статистически значимо отличается от интактных (р < 0,05), + — статистически значимо отличается от контроля (/; < 0,05), # — статистически значимо отличается от контроля на облучение (р < 0,05).

Повышение радиорезистентности костного мозга животных, находящихся в состоянии устойчивой активации, с большой дозой вероятности связано со снижением митотической активности кроветворных клеток при многократном введении зоотоксинов (табл. 2). Неделящиеся клетки более устойчивы к повреждающему действию гамма-облучения. Выжившие клетки затем увеличивают свою пролифератнвную активность и быстро, в течение нескольких суток, восстанавливают пул кроветворных клеток и клеток периферической крови (Вернигорова, Лебедев, 1986; Кузник, 2004).

Одним из главных повреждающих механизмов радиации, особенно в Начальный период лучевого поражения, является интенсификация свободнорадикальных процессов, что приводит к повреждению информационных макромолекул, накоплению токсичных продуктов и нарушению функций мембран (Барабой, 1990).

При исследовании активности пере к иен о го окисления липидов были получены следующие результаты. В первые сутки после облучения у животных контрольных групп содержание МДА было статистически

значимо выше, чем у интахтных животных (табл. 4). Эти данные свидетельствуют о повышенной активности процессов пероксидации при действии ионизирующего излучения. В контрольной группе для зоотоксинов саламандры и жабы, которым вводили растворитель -— 12 % этанол, содержание М ДА практически не отличалось от его количества у шггактных животных. Это указывает на амтиоксидантные свойства этанола. В опытных группах активность процессов лшюпероксядации была ниже, чем в контроле.

саламандра

□ интактные «контроль на обпучегале О контроль □ опыт |

Рис. 2. Влияние предварительного курсового введения зоотоксинов пчелы, жабы, саламандры на количество лейкоцитов периферической крови при однократном облучении и дозе 3 Гр. * — статистически значимо отличается от интактных (/; < 0,05), + — статистически значимо отличается от контроля (р<0,05), # — статистически значимо отличается от контроля на облучение (р < 0,05).

По видимол1у, снижение активности свои од н ор ад икальны& процессов у облучённых животных, находящихся в состоянии устойчивой активации, происходит за счёт предварительной индукции антиоксидантной системы многократным введением зоотоксинов в малых дозах перед облучением. Возможно, яды сами обладают антноксидантными свойствами. Эти свойства зоотоксинов саламандры и жабы могут ре ал изо вы ват ься за счёт фенольной и индольной структуры компонентов ядов. Показано, что удаётся ослабить лучевое поражение

организма при введении фенольных и индольных антиоксидантов (Вартанян, 1975, Барабой, 1992, Шанин и др, 2003) Антиоксидантные свойства зоотоксинов пчелы могут быть связаны с сульфгидрильными группами полипептидов яда

Результаты исследования свидетельствуют, что курсовое введение малых доз зоотоксинов приводит к возникновению состояния радиорезистентности, по всей видимости, связанной с формированием реакции устойчивой активации

Таблица 4

Влияние курсового профилактического введения зоотоксинов пчелы, саламандры и жабы на содержание малонового диальдегида (МДА) в крови и митотический индекс клеток костного мозга через сутки после однократного гамма-облучения в дозе 3 Гр

Группы животных МДА (нмоль/мл) Митотический индекс (%с)

интактные животные 4,10 ±0,18 23,7 ± 1,9

контроль на облучение 5,76 ± 0,17+ 11,8 ± 1,5+

контроль для зоотоксинов пчелы (физ р-р) 5,02 ± 0,21*+ 3,5 ± 0,2+

зоотоксины пчелы 4,17 ± 0,16*+ 8,2 ± 1,1**

контроль для зоотоксинов саламандры и жабы (12 % этанол) 4,23 ± 0,31* 10,3±0,3+

зоотоксины саламандры 3,53 ± 0,17*+ 21,3 ±2,4*+

зоотоксины жабы 3,79 ± 0,19* 7,8 ± 1,4*+

Статистически значимые отличия * — р< 0,05 по отношению к интактным животным, + — р< 0,05 по отношению к контролю

3.3. Длительность состояния радиорезистентности

экспериментальных животных

При исследовании продолжительности радиорезистентности, вызываемой зоотоксинами, было установлено, что это состояние сохранялось в течение всех 4-х недель наблюдения у животных опытных групп При облучении крыс через 14, 21 и 28 суток после курсового введения зоотоксинов общее количество клеток костного мозга в этих группах было достоверно выше, чем в контроле (табл 5) В этих опытах было выявлено определенное отличие в динамике развития радиорезистентности между ядами Так, если для зоотоксинов саламандры

радиорезистентность, выявленная сразу после окончания курса введения, сохранялась весь период наблюдения, имея максимум через 7 и 14 суток после окончания курса введения, то для яда жабы эффект, наблюдаемый сразу после окончания курса, исчезал через 7 суток, но вновь появлялся на 14-28 сутки, имея максимум на 21 сутки (табл 5) Для зоотоксинов пчелы радиозащитный эффект на 7 сутки после инъекций проявлялся в виде тенденции по отношению к контролю Позднее, на 14, 21, 28 сутки, наблюдалось четкое радиозащитное действие яда

Таблица 5

Общее количество клеток костного мозга (10б кл) в бедренной кости крыс, облученных в разные сроки после курсового введения зоотоксинов

Группы животных Срок после введения зоотоксинов

7 суток 14 суток 21 суток 28 суток

контроль для зоотоксинов пчелы (физ р-р) 8,3 ± 0,2# 7,6 ± 0,5*# 6,6 ± 0,5* 5,7 ± 0,4*

зоотоксины пчелы, 0,1 мг/кг 9,0 ± 0,3# 10,2 ± 0,8#+ 8,8 ± 0,4#+ 7,8 ± 0,2#+

контроль для зоотоксинов жабы и саламандры (12 % этанол) 6,5 ± 0,3* 6,3 ±0,Г 6,9 ± 0,2* 4,1 ± 0,4*

зоотоксины жабы, 0,1 мг/кг 6,0 ± 0,3* 7,8 ± 0,5#+ 8,3 ± 0,3#+ 6,9 ± 0,4*+

зоотоксины саламандры, 0,5 мг/кг 9,5 ± 0,2#+ 9,0 ± 0,5#+ 7,7 ± 0,4*#+ 6,8 ± 0,4*+

Данный показатель у интактных животных равен (8,9 ± 0,5) х 106 кл, у животных группы «контроль на облучение» равен (6,5 ± 0,3) х 10б кл * — р< 0,05 по отношению к интактным, # — р < 0,05 по отношению к контролю на облучение, + — р < 0,05 по отношению к контролю

Можно полагать, что курсовое введение малых доз зоотоксинов пчелы и саламандры, точкой приложения которых служат интегративные системы организма — центральная нервная система и система крови, переводит организм в состояние неспецифического адаптивного ответа — устойчивой активации сразу после начала воздействия зоотоксинов Быстрая активация симпатоадреналовой и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы ведёт, в конечном итоге, к быстрому и длительному повышению устойчивости организма к действию

экстремального фактора среды — высоких доз радиации В отличие от этого, выраженные противолучевые эффекты зоотоксинов жабы, наблюдавшиеся в первые дни после его введения, по всей видимости, обусловлены свойствами стероидных и индольных компонентов яда Известно, что производные фенантрена и индола, являются хорошими радиопротекторами (Кудряшов, Гончаренко, 1991)

Из полученных результатов можно заключить, что в основе противолучевого эффекта всех исследованных зоотоксинов лежат неспецифические механизмы реакции активации, о чём свидетельствует однотипность изменений в состоянии костного мозга и крови при действии различных по химической природе ядов Полагают, что устойчивая активация подобно длительному стрессу может вызывать синтез белков теплового шока, увеличивать мощность стресс-лимитирующих систем (Гаркави и др , 1998), в том числе и антиоксидантных, на что указывают данные, полученные для более слабых, чем стрессорные, физиотерапевтических воздействий (Меерсон, 1993) По-видимому, эти эффекты лежат в основе повышения ядами радиорезистентности кроветворной ткани костного мозга и крови В пользу данного утверждения свидетельствуют полученные в нашей лаборатории данные о повышении устойчивости к летальному перегреву мышей, кроликов и крыс при предварительном введении им названных зоотоксинов (Хомутов и др , 2005) Известно, что белки теплового шока осуществляют неспецифическую защиту белков клетки от денатурационных изменений, в том числе это может касаться и ферментов системы репарации ДНК, имеющих ключевое значение в защите клетки от радиационного поражения (Алейникова и др , 2003; Мушкамбаров, Кузнецов, 2003)

Повышение активности антиоксидантных систем клетки также может защищать белки, участвующие в процессах репарации, от конформационных сдвигов Показано, что свободные радикалы, образование которых особенно сильно активируется при лучевом поражении, мо1ут вызывать образование «сшивок» в белковых молекулах и таким образом нарушать их структуру (Хавинсон и др, 2003) Как следует из табл 6, в наших опытах было показано существенное торможение животными ядами повышенного облучением уровня ПОЛ плазмы крови — как диеновых (табл 6), так и триеновых (р < 0,05) коньюгатов Вместе с тем следует отметить, что пчелиный яд оказывал непродолжительное антиоксидантное действие — в течение 1 недели после окончания введения зоотоксинов Более продолжительным антиоксидантным эффектом обладали яды саламандры и жабы Снижение интенсивности ПОЛ наблюдалось в течение 3-х недель (табл 6), что, по-видимому, обусловлено достаточно высоким содержанием в их составе веществ стероидной природы, известных своим антиоксидантным действием стероидных алкалоидов (яд саламандры) и буфотенинов (яд жабы)

Таблица 6

Содержание диеновых конъюгатов (единицы оптической плотности/мг общих липидов) в плазме крови крыс, подвергнутых однократному гамма-облучению в разные сроки после курсового введения зоотоксинов

Группы животных Время между окончанием введения зоотоксинов и облучением

7 суток 14 суток 21 сутки

контроль для зоотоксинов пчелы (физ р-р) 3,38 + 0,09 3,43 ±0,19 3,49 ±0,10

зоотоксины пчелы 3,12 ± 0,05+ 3,25 + 0,09 3,41 + 0,14

контроль для зоотоксинов саламандры и жабы (12 % этанол) 3,24 + 0,09 3,51 ±0,08 3,52 ± 0,06

зоотоксины саламандры 2,86 ± 0,11+ 2,99 ± 0,10+ 3,06 ± 0,08+

зоотоксины жабы 2,92 ± 0,12+ 3,04 ± 0,07+ ЗД0±0,10+

н--р< 0,05 по сравнению с контролем

Таким образом, антиоксидантная активность пчелиного яда не играет столь существенной роли в его противолучевом эффекте, как в случае токсинов жабы и саламандры С другой стороны, этой активностью можно объяснить факт отсроченного радиопротекторного эффекта у яда жабы утилизация стероидных ксенобиотиков системой цитохрома Р450 сопровождается образованием свободных радикалов (Арчаков, Карузина, 1995), что может привести к увеличению мощности антиоксидантной системы и, следовательно, к повышению так называемого эндогенного фона радиорезистентности (Гончаренко, Кудряшов, 1980)

Зоотоксины пчелы, воздействующие на многие регуляторные и интегрирующие системы организма, вероятно, способны вызвать быстрое развитие устойчивой активации Кроме того, пчелиный яд проявляет специфическую активность в отношении системы крови, характеризуясь высоким содержанием гемолитических веществ (мелиттин, фосфолипаза А2) (Крылов, 1995), что может вызывать стойкие адаптивные изменения в костном мозге при многократном введении зоотоксина Известно, что гемолиз эритроцитов приводит к высвобождению из них эритропоэтических факторов, непосредственно влияющих на эритропоэз (Кузник, 2004) Не исключено также высвобождение цитокинов, регулирующих гемопоэз, из эндотелия и лейкоцитов крови под действием гемололитических компонентов пчелиного яда — мелиттина и фосфолипазы А2 в микроциркуляторном русле костного мозга

Вышеизложенные результаты экспериментов позволяют заключить, что курсовое введение крысам зоотоксинов пчелы, жабы и саламандры в малых дозах приводит к развитию реакции активации, которая играет ведущую роль в возникновении продолжительного состояния повышенной устойчивости к действию ионизирующего облучения, что позволяет отнести зоотоксины к природным радиопротекторам длительного действия В то же время радиорезистентность, возникающая при введении зоотоксинов, может различаться по механизмам ее реализации и связана с составом яда и его физиологической активностью

3.4. Радиопротекторная эффективность зоотоксинов при фракционированном гамма-облучении экспериментальных животных

Определение длительности состояния радиорезистентности, вызванной курсовым введением ядов пчелы, саламандры и жабы, а также то, что классические радиопротекторы оказались неэффективны в условиях пролонгированного действия радиации, послужили основой для исследования адаптогенных свойств зоотоксинов при фракционированном гамма-облучении

Основные показатели периферической крови и красного костного мозга экспериментальных животных на следующие сутки после фракционированного гамма-облучения в дозе 3 Гр (0,6 Гр х 5) при предварительном курсовом введения зоотоксинов представлены в таблицах 7 и 8

Применение методов одномерной статистики (однофакторный дисперсионный анализ, ¿-критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони) выявило наличие противолучевого эффекта при фракционированном гамма-облучении у исследованных зоотоксинов по ряду изученных показателей Так, введение перед фракционированным облучением пчелиного яда увеличивало как общее количество выживших мегамиелокариоцитов костного мозга, так и количество клеток основных ростков кроветворения (лимфоидного, миелоидного, эритроидного), в том числе и пролиферирующих, о чем свидетельствовало более высокое, по сравнению с контролем, значение митотического индекса (табл 8) Кроме того, в периферической крови общее количество лейкоцитов и процент лимфоцитов в лейкоцитарной формуле были статистически значимо выше, чем у животных контрольной группы Однако отмечалась лишь тенденция к снижению процента хромосомных аберраций (табл 7, 8) Содержание гемоглобина и количество эритроцитов не изменялось при действии фракционированного облучения (табл 8), что обусловлено более высокой устойчивостью безъядерных эритроцитов млекопитающих к лучевому

Таблица 7

Показатели красного костного мозга у крыс при фракционированном гамма-облучении (0,6 Гр х 5 дней) после профилактического введения

зоотоксинов

Группы Кол-во Кол-во Кол-во Кол-во Про- Митоти-

клеток клеток клеток клеток цент ческий

кост- миело- лимфо- эритро- хромо- индекс,

ного идного идного идного сомных %с

мозга в 1 бед- ряда в 1 бед- ряда в 1 бед- ряда в 1 бед- аберраций в

ренной ренной ренной ренной кост-

кости (Х106) кости (хЮ6) кости (хЮ6) кости (хЮ6) ном мозге

интакт-ные 9,7±0,4 6,3+0,2 3,0±0,2 0,36±0,03 1,4±0,7 30,0±0,7

контроль на облуч 4,4±0,5 * 3,2±0Д * 1,2±0Д 0Д2±0,02 * 7,1±1,4 * 21,3±0,8

контроль

для

зооток- 4,8±0,2* 3,2±0,1* 1,5±0Д* 0,13±0,03 3,3+1,9 13,4±1Д*

синов

пчелы

зооток-

сины пчелы, 7,4±0,4 »#+ 4,4±0,1 2,5±0,2 0,43±0,04 #+ 2,1 ±0,5 # 29,3+0,6

ОД мг/кг

контроль

для

зооток-

синов 5,1 ±0,2* 3,4±0Д 1,4±0,1* 0,11±0,01 4,7±1,5 15,0±1,3*

жабы и

саламан-

дры

зооток-

сины жабы, 7,7±0,6 »(й- 4,8+ОД * 2,5±0,2 0,30+0,02 1,9±0,5 30,7±0,8 #+

0,1 мг/кг

зооток-

сины саламан- 5,2±0,7 * 3,4±0Д 1,7±0,1 * 0Д1±0,03 1,4±0,5 »#+ 30,1+0,6 #+

дры, 0,5 мг/кг

* — р < 0,05 по сравнению с интактными, # — р < 0,05 по сравнению с

контролем на облучение, + — р < 0,05 по сравнению с контролем

Таблица 8

Показатели периферической крови у крыс при фракционированном гамма-облучении (0,6 Гр х 5 дней) после профилактического введения зоотоксинов

Группы Содержание гемоглобина, г/л Кол-во эритроцитов, (х1012 кл/л) Кол-во лейкоцитов, (хЮ9 кл/л) Процент лимфоцитов Процент нейтро-филов

интактные 143,9±7,9 4,2±0,2 13,9±0,6 82,7±1,3 15,1±1,2

контроль на облучение 158,2±3,8 4,2±0,1 6,9±0,7* 57,0±2,3* 41,4±2,3*

контроль для зоотоксинов 170,4±9,7 4,4±0,1 7,9±0,5* 59,2±5,7* 38,0±5,2*

пчелы

зоотокси-ны пчелы, 0,1 мг/кг 165,3±3,3 * 3,8±0,2 #+ 12,8±0,4 #+ 77,2±2,0 #+ 21,4±2,0 *#+

контроль для зоо-

токсинов жабы и саламандры (12 % этанол) 187,0+4,1 *# 4,7±0,1 # 7,1±0,4 * 65,5±3,0 * 30,3±2,8 *

зоотокси-ны жабы, 0,1 мг/кг 160,6±6,0 + 4,4±0,1 + 10,8±1,0 *#+ 75,1+3,0 *#+ 27,3±8,4 *#

зоотокси-ны саламандры, 0,5 мг/кг 165,9±10,9 4,2±0,1 12,5±0,9 #+ 79,7±2,1 #+ 16,9±2,1 *#+

Условные обозначения см к табл 7

поражению, по сравнению с ядросодержащими клетками, и их высокой продолжительностью жизни (Ярмоненко, Вайнсон, 2004) Сходная картина состояния системы крови отмечалась и при введении зоотоксинов жабы и саламандры Однако по ряду показателей эти токсины не проявляли радиозащитного действия Жабий яд не приводил к статистически

21

значимому снижению процента хромосомных аберраций в костном мозге (табл 8) Яд саламандры не защищал от гибели клетки костного мозга, но в то же время значительно уменьшал количество хромосомных аберраций (р < 0,05) (табл 7) К сожалению, одномерные методы статистики не позволяют получить интегральную картину радиозащитного действия зоотоксинов, основанную на всех исследованных параметрах, что затрудняет проведение сравнительного анализа радиозащитного действия ядов В связи с этим данные были проанализированы также с помощью методов многомерной статистики и функции желательности

В ходе эксперимента контролировались 11 параметров системы крови Эти параметры имеют различные размерности, поэтому для упрощения дальнейшего многомерного анализа и выравнивания вклада различных параметров были рассчитаны нормированные значения параметров. В дальнейшем анализе везде использованы полученные таким образом нормированные значения

На первом этапе обработки отбирались показатели состояния системы крови, которые статистически значимо подвержены влиянию фракционного гамма-облучения С этой целью был проведён стандартный ¿-тест Стьюдента на различия между крайними выборками, то есть интактными животными и животными, подвергнутыми облучению без предварительного введения ядов или растворителя (контроль на облучение)

Результаты анализа свидетельствуют, что содержание гемоглобина и количество эритроцитов не подвержены влиянию гамма-облучения (р < 0,55 и р < 0,99), поэтому в дальнейшем анализе эти переменные принимать участие не будут

Для получения качественной характеристики радиопротекторных свойств зоотоксинов был проведен кластерный анализ участвовавших в эксперименте групп При этом каждая группа характеризовалась средними значениями по 9 отобранным переменным. Дендрограмма представлена на рис 3 Четко видно разделение двух кластеров в первый кластер объединены контрольные группы и контроль на облучение, во второй — интактные животные и опытные группы животных, которым вводили яды перед облучением Второй кластер подразделяется на два подкластера Хорошо прослеживается, что группа животных, подвергнутых профилактике ядом саламандры, не входит в подкластер, который образуют группы «интактные», «пчела» и «жаба»

Это можно интерпретировать следующим образом исследуемые зоотоксины обладают радиопротекторными свойствами, поскольку опытные группы по отобранным чувствительным к облучению параметрам ближе к интактным животным, чем к контролю, некоторое обособление животных, подвергнутых профилактике ядом саламандры, свидетельствует о несколько более слабых радиопротекторных свойствах этого яда по сравнению с ядами жабы и пчелы

10

2

спирт

контроль на облуч физ р-р салам

жаба

Рис. 3. Дендрограмма экспериментальных групп крыс, подвергнутых многократному гамма-облучению после предварительного введения зоотоксинов пчелы, саламандры и жабы

Результаты кластеризации были подвергнуты проверке многомерным дисперсионным анализом (MANOVA) Выделенные группы статистически значимо отличаются (Wilks' X = 0,057, F = 64,4, р < 0,001) Для подтверждения радиопротекторных свойств ядов были проведены попарные сравнения (также посредством многомерного дисперсионного анализа) групп животных, подвергнутых профилактике ядами, с соответствующими контрольными группами (зоотоксины пчелы — физ раствор, зоотоксины жабы и саламандры — спиртовой раствор)

Все исследуемые зоотоксины обладают модулирующим действием по отношению к облучению (зоотоксины саламандры р < 0,027, зоотоксины жабы р < 0,0014, зоотоксины пчелы р < 0,00026) Причем, исходя из результатов кластеризации, можно говорить о радиопротекторных свойствах этих ядов

Далее был проведён сравнительный анализ в различиях между радиопротекторными свойствами зоотоксинов Это проще всего осуществить путем сравнения трех групп животных, подвергнутых профилактике зоотоксинами Результаты многомерного дисперсионного анализа свидетельствуют о достоверности различий (Wilks' 1 = 0,0117, F- 8,24, р < 0,001)

Обобщённые функции желательности экспериментальных групп животных приведены на рис 4

интакткые пчела жаба саламандра фиа. р-р спирт контроль на облуч

Рис. 4. Обобщённая функция желательности (О) для экспериментальных групп крыс, подвергнутых многократному шмма-облучению после предварительного введения зоотоксииов пчелы, саламандры и жабы.

Отчётливо видно, что профилактика зоотоксинами пчелы и жабы сильно нивелирует действие облучения, профилактика ядом саламандры также имеет радиопротекторное действие, ко гораздо менее выраженное.

Таким образом, все три изученных яда достоверно обладают радиопротекторными свойствами. При этом зоотоксины пчелы и жабы компенсируют около 70% действия облучения (об этом свидетельствуют значения обобщённой функции желательности Дни» = 0,72 и £>ЖЯц;1 = 0,74), тогда как яд саламандры компенсирует лишь около 30 % = 0,28).

Соответственно можно говорить о сильном радио протекторном действии зоотоксинов пчелы и жабы и слабом — яда саламандры.

Все исследованные зоотоксины обладают свойствами радиопротекторов длительного действия. Состояние радиорезистентности связано с индукцией зоотоксинами защитных регуляториых систем организма (нервной, иммунной, антиоксидантной и др.). Однако мощность защитных систем, индуцированная зоотоксинами, различна. Наименьшей индуцирующей способностью обладает яд саламандры. По-видимому, именно с этим связана меньшая противолучевая эффективность токсинов саламандры при фракционированном гамма-облучении по сравнению с зоотоксинами пчелы и жабы, что свидетельствует о различии механизмов противолучевого эффекта у данного зоотоксина по сравнению с пчелиным и жабьим ядами. Такая специфика вполне может иметь место несмотря на то, что все исследованные яды в использованных дозах вызывают один и тот же неспецифический ответ организма — формирование

неспецифической реакции активации Согласно современной концепции фенотипической адаптации, она осуществляется как минимум при участии двух типов функциональных систем организма специфических — обеспечивают адаптацию к данному конкретному фактору, зависят от его специфики, неспецифических — осуществляют мобилизацию и перераспределение ресурсов организма в направлении специфических функциональных систем, степень их активации зависит от силы, но не качества фактора (Меерсон, 1993)

Таким образом, использование методов многомерной статистики и функции желательности позволяет получить интегральную оценку противолучевого эффекта радиопротекторов, что особенно полезно при проведении сравнительного анализа радиозащитных свойств и может быть рекомендовано для использования в радиобиологии при поиске противолучевых средств

Представленные результаты, подвергнутые математической обработке с использованием методов многомерного статистического анализа и функции желательности, позволяют отнести зоотоксины пчелы, саламандры и жабы к адаптогенам естественного происхождения, повышающим устойчивость организма к фракционированному, а возможно, и хроническому действию ионизирующей радиации

Адаптогенные эффекты зоотоксинов при фракционированном гамма-облучении в дозе 1,5 Гр (0,3 Гр х 5). Было установлено, что под действием фракционированного гамма-облучения в дозе 1,5 Гр происходило снижение общего количества клеток красного костного мозга у животных контрольных групп в среднем на 35-40 % по сравнению с интактными животными Снижение общего количества лейкоцитов периферической крови достигало 50 % по сравнению с интактными животными Было показано, что зоотоксины пчелы и жабы, вводимые многократно перед облучением, оказывали адаптогенное действие на систему красного костного мозга, статистически значимо, по сравнению с контролем, увеличивая количество кроветворных клеток Зоотоксины саламандры не проявляли радиозащитных свойств в отношении системы кроветворения, не увеличивая количество выживших клеток костного мозга

Все исследуемые зоотоксины оказывают защитное действие на систему белой крови, увеличивая число выживших лейкоцитов в периферической крови в среднем на 35 % по сравнению с контролем

Фракционированное гамма-облучение в дозе 1,5 Гр не изменяло процентное соотношение различных групп лейкоцитов, не ингибировало пролиферативную активность кроветворных клеток Лейкоцитарная формула и величина митотического индекса были практически одинаковыми у интактных, контрольных и опытных животных (р > 0,05)

Действие на организм гамма-облучения в этой дозе оказывает меньший повреждающий эффект, по сравнению с дозой 3 Гр, но и в этих условиях зоотоксины увеличивают радиорезистентность экспериментальных животных

Таким образом, можно заключить, что профилактическое применение зоотоксинов перед фракционированным гамма-облучением оказывает адаптогенное действие при облучении как в дозе 3, так и 1,5 Гр При этом радиопротекторная эффективность выражена сильнее у зоотоксинов пчелы и жабы, чем у зоотоксинов саламандры

3.5. Адаптогенная эффективность зоотоксинов при применении после однократного гамма-облучения в дозе 5 Гр

Применение зоотоксинов после гамма-облучения стимулировало восстановительные процессы в системе крови у поражённых животных Через сутки после окончания инъекций зоотоксинов количество клеток в красном костном мозге у животных опытных групп было статистически значимо выше, чем у контрольных животных Пролиферативная активность кроветворных клеток была низкой как в контрольных, так и опытных группах У животных, прошедших курс инъекций зоотоксинов, наблюдалась даже тенденция к уменьшению скорости деления клеток по отношению к контролю (табл 9) Предположительно активация зоотоксинами гипофизарно-надпочечниковой системы приводит к повышенной секреции глюкокортикоидов, одним из свойств которых является способность ингибировать процессы деления клеток Это приводит к увеличению времени репарации генетического материала Выжившие клетки увеличивают затем скорость гемопоэза и восстанавливают нормальную популяцию клеток крови (Вернигорова, Лебедева, 1986) Нормальные показатели системы крови наблюдались только к 28 суткам после окончания введения зоотоксинов

У контрольных животных к 28 суткам наблюдений общее количество клеток в костном мозге не достигало уровня нормы (табл 9) Состояние белой крови соответствовало стресс-реакции (лейкоцитарный коэффициент был меньше на 50 % по сравнению с интактными животными) (рис 5)

У животных, прошедших курс адаптации зоотоксинами, происходило восстановление общего количества клеток костного мозга (зоотоксины жабы и саламандры) и даже превышение уровня интактных животных (зоотоксины пчелы) В белой крови наблюдались сдвиги, соответствующие реакции активации (лейкоцитарный коэффициент увеличивался в 2-3 раза по сравнению с интактными животными)

В целом можно полагать, что адаптогенный эффект зоотоксинов, на фоне предварительного действия гамма-облучения, был обусловлен их

способностью переводить животных из состояния стресса в состояние устойчивой активации и синхронизации функционирования систем пораженного организма

Таблица 9

Влияние курсового введения зоотоксинов после однократного гамма-облучения в дозе 5 Гр на митотический индекс и общее количество клеток костного мозга в бедренной кости крыс

Группа животных 1 сутки после инъекций 28 сутки после инъекций

Количество клеток (106) Митотический индекс (%о) Количество клеток СЮ6) Митотический индекс (%о)

интактные 14,28±0,24 23,0±1,0 12,6±1,3 24,0±5,0

контроль на облучение 9,29±0,05# 3,4±0,6# 9,1±0,6 21,0±1,0

контроль для зоотоксинов пчелы (физ р-р) 9,49±0,14# 1,6±0,4# 16,5±2,3 21,0±1,0

зоотоксины пчелы 12,49±0,48#+ 2,0±0,4# 19,9+2,1*# 21,0+6,0

контроль для зоотоксинов саламандры и жабы (12% этанол) 10,07±0,07# 6,2±1,5# 10,7±1,5 11,0±1,Г#

зоотоксины саламандры 12,95±0,11#+ 2,4±0,4# 14,8+1,6 20,0±1,0+

зоотоксины жабы 12,64±0,14#+ 6,0±1,1# 16,2±2,3# 10,0±0,2*#

* — р < 0,05 по сравнению с контролем на облучение, + — р < 0,05 по сравнению с контролем, # — р < 0,05 по сравнению с интактными животными

интактные

контроль (опыт 1)

контроль (опыты 2, 3)

опыт 3 (жаба)

группы

Рис. 5. Влияние курсового введения зоотоксинов после однократного гамма-облучения в дозе 5 Гр на лейкоцитарный коэффициент. * —- р < 0,05 по отношению к интактным, #—р< 0,05

по отношению к контролю, н--р <0,05 по отношению к контролю

на облучение.

3,6, Адаптогснная эффективность продуктов пчеловодства (прополиса, мёда, маточного молочка) и убихпнона-10 при однократном гамма-облучении экспериментальных животных в дозе 3 Гр

Активация процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) — обязательное звено в механизме действия радиации и многих других экстремальных агентов, поэтому использование препаратов, способных противостоять активации ПОЛ, является необходимым условием профилактики и терапии стрессорных поражений (Барабой и др., 3991; Барабой, 2006). Несомненный интерес в этом направлении исследований представляет убихинон. Это вещество является истинным антиоксидантом (Биленко, 1989; Brude et al., 1997), оказывает карди отрои но е действие (Crestanello et al., 1996), улучшает энергетический обмен в условиях гипоксии (Nayier, 1980), оказывает противолучевое действие (Коломнйцева, 1989). Это послужило основой выбора убихинона-Ю в качестве тест-веществ а при изучении адаптогенных свойств продуктов пчеловодства на фоне предварительного повреждающего действия радиооблучения.

Обсуждая эффективность адаптогенного действия продуктов пчеловодства и убихинона-10 как представителя антиоксидантов, следует отмстить, что наиболее вероятным представляется реализация защитного эффекта путём снижения интенсивности свободнорадикальных процессов — одного из основных факторов повреждающего действия радиации. Так,

у контрольных животных концентрация МДА была статистически значимо больше, чем у интактных животных в течение всего периода исследований (табл 10) У животных, прошедших курс адаптации зоотоксином пчелы, интенсивность перекисного окисления была ниже, чем в контроле (р < 0,05) и несущественно отличалась от значений у интактных животных

Таблица 10

Содержание МДА (нмоль/мл) в крови животных, подвергнутых однократному гамма-облучению в дозе 3 Гр, при последующем применении продуктов пчеловодства и убихинона-10

Группы Время после окончания терапии

животных 1 сутки 7 суток 14 суток

контроль для зоотоксинов 4,96 ± 0,44 8,06 ± 0,72* 3,80 ±0,37

пчелы

зоотоксины пчелы 3,26 ± 0,29# 3,42 ± 0,40* 3,18 ±0,32

контроль для

прополиса, меда и маточного 5,91 ± 0,38* 9,23 ± 0,94* 8,32 ± 0,89*

молочка

прополис 9,32 ± 0,54** 5,41 ± 0,32* 4,41 ± 0,38*

маточное молочко + мед 8,52 ± 0,68*# 6,40 ± 0,44 6,10 ±0,55

мед 8,11 ±0,65 8,70 ± 0,72 8,12 ±0,68

контроль для убихинона-10 6,24 ± 0,45* 6,78 ± 0,56* 4,06 ± 0,23

убихинон-10 7,76 ± 0,54* 3,10 ±0,32" 2,56 ± 0,22*

Содержание МДА в крови интактных животных 3,49 ± 0,72 (зоотоксин пчелы), 4,01 ± 0,20 (прополис, маточное молочко и мед), 3,60 ± 0,20 (убихинон-10) * — р < 0,05 по отношению к интактным, # — р < 0,05 по отношению к контролю

При использовании прополиса, маточного молочка и мёда содержание МДА в крови в первые сутки после окончания их применения у животных опытных групп было повышенным по сравнению с контролем (табл 10) В последующем в этих группах происходило уменьшение интенсивности свободнорадикальных процессов Особенно явно это было выражено в группе животных, прошедших курс адаптации прополисом У животных, подвергнутых воздействию прополиса, динамика изменения

содержания МДА в крови была похожей на таковую у животных, получавших убихинон-10

Проведение дисперсионного анализа и попарных сравнений значений в опытных группах позволило выделить зоотоксин пчелы и прополис как наиболее эффективно влияющие, по сравнению с другими продуктами пчеловодства (р < 0,05), на свободнорадикальные процессы в крови облученных животных При этом антиоксидантная эффективность прополиса была практически одинаковой с эффективностью убихинона-10, а для яда пчелы даже превосходила ее.

Увеличение содержания МДА в начальный период после окончания терапии прополисом и убихиноном-10 свидетельствует об усилении активности свободнорадикальных процессов Оно, по всей видимости, связано с увеличением скорости окислительного фосфорилирования, вызываемого биофлавоноидами прополиса и убихиноном, которые, как известно, стимулируют дыхание и фосфорилирование (Лукьянова, 2000, Крылов, 2002) Надо полагать, что последующее снижение активности ПОЛ обусловлено антиоксидантными свойствами биофлавоноидов прополиса, которые широко известны (Ratty, Dus, 1988, Тюкавкина и др , 1996) и убихинона (Бурлакова, Храпова, 1985, Tertov et al, 1998)

Ингибирование реакций ПОЛ зоотоксином пчелы может быть опосредовано фосфолипазой А2, играющей важную роль в ингибировании процессов липопероксидации (Мейерсон, 1986, 1990) По всей видимости, антиоксидантное действие зоотоксина пчелы реализуется апамином и другими белками яда, содержащими большое количество сульфгидрильных группировок, которые обладают восстановительными свойствами (Крылов, 1995)

Продукты пчеловодства практически не влияли на показатели красной крови пораженных животных Количество эритроцитов и содержание гемоглобина было одинаковым у всех групп животных Различия в показателях между опытными и контрольными группами оказались статистически несущественными (табл 11) Это можно объяснить устойчивостью красной крови к действию данной дозы радиации, а также высокой продолжительностью жизни эритроцитов Применение убихинона-10, в отличие от продуктов пчеловодства, оказало существенное влияние на систему красной крови облученных животных Содержание гемоглобина, эритроцитов на 7 и 14 сутки после окончания «терапии» в крови этой группы было статистически значимо выше, чем у животных других групп Особенно ярко это видно на содержании гемоглобина (табл 11).

Это, видимо, связано с противоанемической способностью убихинона, как это показано и для других физиологических состояний организма (Ludwig et al, 1967, Maijaj, Folkers, 1968) Можно полагать, что убихинон-10 как компонент дыхательной цепи митохондрий увеличивает

интенсивность энергетического обмена, который нарушается при действии радиации (Савич, 1981) Интенсификация окислительного фосфорилирования, как следствие, сопровождается увеличением скорости потребления кислорода, что приводит к относительной гипоксии тканей, и это, в свою очередь, приводит к стимуляции эритропоэза

Таблица 11

Содержание гемоглобина (г/л) в крови животных, подвергнутых однократному гамма-облучению в дозе 3 Гр, при последующем применении продуктов пчеловодства и убихинона-10

Группа животных Время после окончания терапии

1 сутки 7 суток 14 суток

контроль для зоотоксинов пчелы 116,0 + 4,0 107,0 ±4,7* 115,0 ±4,2

зоотоксины пчелы 117,0 ±4,0 116,0 ±4,7 126,0 ± 6,3

контроль для прополиса, меда и маточного молочка 113,0+1,9 101,7 ± 3,6* 109,4 ± 3,0*

прополис 125,7 ± 3,3 116,4 ±3,1 121,6 ±4,5

маточное молочко + мед 122,7 ± 2,3 108,7 ±2,8* 116,4 ±3,8

мед 124,7 ± 2,0 111,6 + 3,1 122,0 ±4,4

контроль для убихинона-10 114,4 ±2,6 103,4 ± 2,3* 110,0 ±3,2

убихинон-10 126,4+6,2 152,8 + 7,2* 153,6 ± 10,9*

Содержание гемоглобина крови интактных животных 128,0 ± 2,3 г/л (зоотоксины пчелы), 129,3 ± 4,7 г/л (прополис, маточное молочко и мёд), 130,6 ± 8,9 г/л (убихинон-10) * — р < 0,05 по отношению к интактным, # —р< 0,05 по отношению к контролю

Необходимо отметить, что зоотоксины пчелы и прополис оказали положительный эффект на восстановительные процессы в системе белой крови пораженных животных Содержание лейкоцитов в этих группах на 1 и 7 сутки после терапии было статистически значимо выше, чем у животных, получавших маточное молочко и мед (табл 12) Можно полагать, что это связано с иммунотропными свойствами пчелиного яда и прополиса (Манакова и др , 1988, Крылов, 1995, Gonzales, Dias, 1995)

Таблица 12

Содержание лейкоцитов (109 кл/л) в крови животных, подвергнутых однократному гамма-облучению в дозе 3 Гр, при последующем применении продуктов пчеловодства и убихинона-10

Группа Время после окончания применения продуктов

животных 1 сутки 7 суток 14 суток

контроль для зоотоксинов 5,10 ± 0,15* 4,90 ± 0,55* 8,10 ±0,60*

пчелы

зоотоксины пчелы 7,40 ± 0,37#* 6,60 ± 0,44#* 9,40 + 0,71

контроль для

прополиса, мёда и маточного 4,14 ±0,15* 6,13 ± 0,22* 7,44 ± 0,23

молочка

прополис 6,51 ± 0,14** 7,30 ±0,14** 7,75 ± 0,19

маточное молочко + мед 5,54 ±0,19* 6,54 ±0,18* 7,60 ±0,13

мёд 4,94 ± 0,14 5,79 ±0,10 7,00 + 0,10*

контроль для убихинона-10 9,92 ± 1,00 13,50 ± 1,22* 10,04 + 0,94

убихинон-10 8,32 ± 0,40 13,44 ± 1,84* 9,16 ±0,10

Содержание лейкоцитов в крови интактных животных 11,73 ± 0,47 (зоотоксин пчелы), 8,90 ± 0,20 (прополис, маточное молочко и мед), 8,16 + 0,08 (убихинон-10) * — р < 0,05 по отношению к интактным, # — р < 0,05 по отношению к контролю

Убихинон-10 не оказал существенного влияния на восстановительные процессы в системе белой крови Количество лейкоцитов в крови животных опытной группы существенно не отличалось от показателей контрольной группы Однако при этом нужно отметить положительный стимулирующий эффект растительного масла, который получала контрольная группа, т к оно служило растворителем для убихинона Хотя количество этих клеток крови у животных контрольной группы не отличалось от показателей группы животных, получавших убихинон, однако было статистически значимо выше, чем у животных, получавших мёд и маточное молочко, и не отличалось от животных, прошедших терапию зоотоксином пчелы и прополисом (табл 12)

Положительные эффекты применения масел при радиооблучении животных были показаны и в других работах (Коломийцева и др, 1985) Можно полагать, что содержащиеся в растительных маслах

полиненасыщенные жирные кислоты используются в организме на синтез простагландинов, лейкотриенов и других регуляторов метаболизма и гемопоэза

Сравнительное исследование адаптогенной эффективности продуктов пчеловодства, применяемых после однократного гамма-облучения экспериментальных животных в дозе 3 Гр, показало, что только зоотоксин пчелы и прополис, также как и убихинон-10, проявляют адаптогенное действие, уменьшая интенсивность свободнорадикальных процессов и дополнительно нормализуя показатели белой крови у предварительно облученных животных Другие продукты пчеловодства — мед и маточное молочко, практически не проявили выраженного адаптогенного эффекта на фоне предварительного облучения организма

3.7. Исследование неспецифических реакций при курсовом пероральном введении зоотоксина пчелы

Белковая природа зоотоксинов пчелы делает невозможным их пероральное применение, так как они подвергаются протеолитическому действию пищеварительных ферментов желудка и тонкого кишечника, распадаясь в конечном итоге до свободных аминокислот

Успехи нанотехнологии позволяют создавать наночастицы, способные при пероральном введении в организм преодолевать эпителиальный барьер кишечника и попадать в кровь Эффективным стабилизатором наночастиц служит хитозан — модифицированный природный полимер хитина В настоящее время создаются нанокомпозиты — многокомпонентные системы, которые кроме ядра и стабилизатора содержат в своем составе и другие, в том числе биологически активные вещества На кафедре химии высокомолекулярных соединений химического факультета Нижегородского государственного университета им Н И Лобачевского были созданы наночастицы (нанокомпозиты) золота (ядро), стабилизированные хитозаном и содержащие зоотоксины пчелы Нами были проведены исследования по определению типа неспецифических адаптационных реакций экспериментальных животных при курсовом пероральном введении наночастиц золота, содержащих зоотоксин пчелы Результаты исследований представлены в табл 13

Курсовое пероральное введение наночастиц, содержащих зоотоксины пчелы, сопровождалось статистически значимым увеличением количества лимфоцитов и снижением числа сегментоядерных нейтрофилов, а также и общего числа нейтрофилов, до нижних границ нормы Это свидетельствует в пользу того, что состояние организма после применения нанокомпозита соответствует реакции активации (Шихлярова и др , 2002) Результаты исследований указывают на возможность создания препаратов, содержащих зоотоксины пчелы, с целью их применения в

качестве адаптогенов при пероральном введении в организм человека и животных

Таблица 13

Влияние курсового перорального введения зоотоксинов пчелы (0,5 мг/кг х 7 дней) в составе наночастиц золота на соотношение лейкоцитов (%) в крови экспериментальных животных

Группа животных Лимфоциты Нейтрофилы (всего) Сегментоядерные нейтрофилы

интактные 59,0 ±2,1 24,6 ± 2,8 19,0 ± 2,2

наночастицы золото, хитозан (контроль) 59,2 ±3,9 25,8 ± 3,4 20,7 ± 2,9

наночастицы золото, хитозан, зоотоксины пчелы (0,5 мг/кг) 71,0 ± 2,5*# 15,5 ± 2,2*# 10,0 ± 1,4*#

*—р < 0,05 по отношению к интактным, #—р < 0,05 по отношению к контролю

ВЫВОДЫ

1 Курсовое внутрибрюшинное введение крысам (в течение 7 суток) зоотоксинов пчелы (0,1 мг/кг), саламандры (0,5 мг/кг) и жабы (0,1 мг/кг) приводит к развитию адаптационной реакции устойчивой активации, характеризующейся увеличением лейкоцитарного коэффициента, снижением содержания сегментоядерных нейтрофилов до нижней границы нормы и увеличением содержания лимфоцитов до верхней границы нормы

2 Состояние адаптационной реакции устойчивой активации у крыс, вызванное профилактическим курсовым введением малых доз зоотоксинов пчелы, саламандры и жабы, сопровождается развитием радиорезистентности, которая характеризуется статистически значимыми (р < 0,05) увеличением числа лейкоцитов периферической крови, клеток красного костного мозга, снижением концентрации малонового диальдегида у животных экспериментальных групп по сравнению с животными контрольной группы (однократное гамма-облучение в дозе ЗГр)

3 Профилактическое курсовое введение зоотоксинов пчелы и жабы обеспечивает радиорезистентность крыс к однократному гамма-облучению в дозе 3 Гр в течение 3 недель, в случае зоотоксина саламандры эффект наблюдается в течение 4 недель

4 Профилактическое курсовое введение зоотоксинов пчелы и жабы обеспечивает более высокий, по сравнению с зоотоксином саламандры,

уровень радиорезистентности крыс к фракционированному гамма-облучению в дозах 1,5 и 3 Гр, выражающийся в статистически значимом (р < 0,05) повышенном содержании клеток красного костного мозга

5 Курсовое введение крысам зоотоксинов пчелы, саламандры и жабы после однократного гамма-облучения в дозе 5 Гр приводит к статистически значимой (р < 0,05) нормализации показателей периферической крови (содержание лейкоцитов, малонового диальдегида) и красного костного мозга (общее количество клеток, митотический индекс)

6 Курсовое применение продуктов пчеловодства (зоотоксина пчелы, прополиса, меда, маточного молочка) после однократного гамма-облучения экспериментальных животных в дозе 3 Гр выявило адаптогенную эффективность только зоотоксинов пчелы и прополиса как веществ, нормализующих активность свободнорадикальных процессов и показатели белой крови

Список основных публикаций по теме диссертации

* — статьи, опубликованные в журналах, рекомендованных ВАК

1*. Крылов В Н Пчелиный яд и лучевая болезнь / Крылов В Н, Корягин А. С., Ястребова ЕВ// Пчеловодство 1994 № 6 С 7-8

2 Крылов В Н Зоотоксины в патофизиологии и медицине / Крылов В Н, Парин С Б , Корягин А. С., Ошевенский Л В // Биология, экология, биотехнология и почвоведение. М.. Изд-во Московского ун-та, 1994 С 5964

3 Корягин А С Влияние убихинона-10 на энергетический обмен и ПОЛ в миокарде при ишемии / Корягин А. С., Троицкая В Т, Самарцев В Н, Крылов В Н // Антиоксиданты и актопротекторы Тез докл С -П, 1994 С. 47

4 Корягин А С Профилактика радиационных поражений и терапия лучевой болезни пчелиным ядом в эксперименте / Корягин А. С., Крылов В Н // III Научно-практическая конференция «Апитерапия сегодня» Тез докл Рыбное, 1994 С 62-63

5 Тиняков Р П Влияние убихинона-10 на содержание АТФ и перекисное окисление липидов в миокарде при ишемии / Тиняков Р П, Ястребова Е В , Корягин А. С. // Сборник «Вестник Нижегородского государственного университета» Изд-во Нижегородского ун-та, 1995 С 17-18

6 Корягин А. С Профилактика радиационных поражений ядом саламандры / Корягин А. С., Синелыциков А Д, Крылов В Н // I конференция герпетологов Поволжья Тез докл Тольятти, 1995 С 28-29

7 Крылов В H Защитное действие убихинонов при адреналиновом миокардите крыс / Крылов В H, Корягин А. С., Ястребова ЕВ// X Всероссийский пленум анестезиологов и реаниматологов «Анестезия и интенсивная терапия при травме Гипоксия, эндотоксемия и методы их коррекции» Тез докл Нижний Новгород, 1995. С 95

8 Krylov V Expérimental apitherapy of the radiation disease / Krylov V, Koryagin A., Sinelchicov A // XXXV Congress international d'apiculture Anvers, Belgique, 1997 Résumés des raports Edition Apimondia Bucharest — Roumanie P 390

9 Крылов В H Ингаляция продуктов пчеловодства в экспериментальной терапии лучевой болезни / Крылов В H, Корягин А. С., Улитин И Б , Сандова О M , Новиков В В. // Апитерапия сегодня Вып 6 Материалы VI Международной научно-практической конференции по апитерапии, г. Рыбное Рязанской обл, 14-17 октября 1997 г Рязань,

1998 С 82-83

10. Пономаренко А. А Влияние продуктов пчеловодства на систему крови при экспериментальной лучевой болезни / Пономаренко А А, Корягин А. С. // Апитерапия сегодня Вып 7 Материалы VII Международной научно-практической конференции по апитерапии, г Рыбное Рязанской обл, 10-13 октября 1999 г Рязань, 1999 С 150-153

11*. Корягин А С Сравнительный анализ радиозащитных свойств некоторых биологически активных веществ / Корягин А. С. // Вестник Нижегородского университета им H И Лобачевского Серия биология

1999 Вып 1 С 72-77

12 Крылов В H Исследование механизмов адаптогенного действия зоотоксинов на организм человека и животных / Крылов В H, Хомутов А Е, Корягин А. С., Ошевенский Л В. // Важнейшие научные результаты Сборник кратких описаний Нижний Новгород Изд-во Нижегородского ун-та, 1999 С 175-176

13*. Крылов В H Влияние убихинона-10 на энергетический обмен и ПОЛ в миокарде крыс при ишемии / Крылов В H, Лукьянова Л Д, Корягин А. С., Ястребова ЕВ.// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2000. Т 130, № 7 С 35-38

14 Корягин А. С К проблеме использования продуктов пчеловодства в радиобиологии / Корягин А. С., Пономаренко А А, Ошевенский Л В , Новиков В В , Крылов В H // Вестник Нижегородского отделения Российской академии естественных наук / Под ред Ю А Марченкова, В В Шкарина Нижний Новгород Изд-во НГМА,

2000 Вып 3 С 105-111

15 Крылов В H «Апингалин» при экспериментальном лучевом поражении крыс / Крылов В H, Сокольский С. С, Корягин А. С. // «Пчеловодство — XXI век», Москва, 2000 Рыбное Изд-во НИИ пчеловодства, 2000 С 78-80.

16 Крылов В Н Терапевтическое действие продуктов пчеловодства на систему крови крыс при экспериментальном лучевом поражении / Крылов В Н, Корягин А. С., Николаева А А, Овощникова Л В // «Пчеловодство — XXI век», Москва, 2000 Рыбное Изд-во НИИ пчеловодства, 2000 С 81-83

17*. Корягин АС К проблеме использования продуктов пчеловодства в терапии острого лучевого поражения / Корягин А. С., Николаева А А // Вестник Нижегородского университета им Н И Лобачевского Серия биология 2001 Вып 1 (2) С 140-143

18 Овощникова Л В Влияние предварительного введения яда саламандры на систему гемостаза при действии ионизирующей радиации / Овощникова Л В, Корягин А. С. // Тез. докл 2 Международной конференции молодых ученых Самара, 2001 С 106-107

19 Krylov V N Experimente of therapeutic effects of preparation of beekeeping producís on radiation íllnesses / Krylov V N , Koryagin A. S., Nicolaeva A A, Smelschicov A D , Ovoschnicova L V // Melliefera 2002 V 2, No 4 P 58-61

20*. Корягин А С Влияние убихинона-10 на систему крови при радиационном облучении крыс / Корягин А. С., Крылова Е В , Лукьянова Л Д // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2002 Т 133, №6 С 650-652

21 Крылов В Н Апитерапия экспериментального лучевого поражения крыс / Крылов В Н, Корягин А. С., Николаева А А, Синелыциков АД// Апитерапия сегодня Материалы международной конференции Рязань, 2002 С 41-44

22 Крылов В Н Сравнительный анализ радиопротекторного действия продуктов пчеловодства при экспериментальном лучевом поражении крыс / Крылов В Н., Корягин А. С. // Белорусский мед-2002 От медоцелительства до научной пчелотерапии III тысячелетия Материалы I Международной научно-практической конференции по пчеловодству и пчелотерапии Минск, 2002 С 59-60

23 Крылов В Н Антигипоксическое действие экзогенного убихинона-10 на моделях альтерации функции организма / Крылов В Н , Корягин А. С., Лукьянова Л Д // Гипоксия- механизмы адаптации, коррекция Тез докл III Всероссийской конференции Москва, 2002 С 68-69

24. Овощникова Л В. Влияние яда саламандры на общее количество и содержание отдельных форм лейкоцитов периферической крови при костномозговой форме лучевой болезни / Овощникова Л В, Корягин А. С. // Материалы IX Международной конференции молодых ученых «Ломоносов», Москва, 9-12 апреля 2002 С 41-42

25 Логинов В В Оценка радиозащитных свойств яда пятнистой саламандры Salamandra Salamandra на модели костномозговой формы

лучевой болезни / Логинов В В , Корягин А. С., Овощникова Л В // VI Пущинская школа-конференция молодых ученых «Биология — наука XXI века» Пущино, 2002 С 103-104

26 Krylov V The investigation of antiradiatmg activity of bee venom on hemopoesis / Krylov V, Koryagin A., Ovoschnicova L V , Loginov V V // XXXVIII Apimondia International Apicultural Congress, Lublana, Slovenia, August 24-29, 2003 Final Programme and Book of Abstracts No 197 P 462463

27*. Корягин А С Исследование радиопротекторных свойств яда саламандры на модели костномозговой формы лучевой болезни / Корягин А. С., Логинов В В, Овощникова Л В , Синелыциков АД// Вестник Нижегородского университета им Н И Лобачевского Серия биология 2004 Вып 3(5) С 114-118

28*. Копылова С В Исследование антигипоксических свойств убихинона-10 на модели гипобарической гипоксии крыс / Копылова С В , Крылова Е В , Корягин А. С. // Вестник Нижегородского университета им Н И Лобачевского Серия биология 2004 Вып 3(5) С 129-132

29 Корягин А С Исследование адаптогенных свойств животных ядов к действию повреждающих факторов (на примере ионизирующей радиации) / Корягин А. С., Ерофеева Е А // Поволжский экологический журнал 2004 Вып 2 С 173-182

30*. Крылов В Н Защитные свойства пчелиного яда / Крылов В Н, Корягин А. С., Ерофеева Е А / Пчеловодство 2004 Вып 6 С 52-53

31 Gamova О N The use of nontoxic doses of bee venom for protection from fractional gamma-radiation /ON Gamova, A. S. Korjagin, E A Yerofeeva, О U Vaneeva // Proceedings of 3rd European Congress on Social Insects, St Petersburg, Russia, 2005 P 140

32*. Корягин А С Исследование продолжительности состояния радиорезистентности кроветворной ткани костного мозга крыс, вызываемого действием зоотоксинов / А. С. Корягин, Е А Ерофеева, О Н Гамова, О Ю Ванеева // Вестник Нижегородского университета им Н И. Лобачевского Серия биология. 2005. Вып 2 (10) С. 145-152.

33 Корягин А С Продолжительность радиорезистентности системы крови крыс, возникающей при многократном введении малых доз некоторых зоотоксинов / Корягин А. С., Ерофеева Е А, Гамова О Н, Ванеева О Ю // Фундаментальные и прикладные исследования в системе образования Материалы III Международной научно-практической конференции Часть 1 Тамбов Першина, 2005 С 93-96

34 Корягин А С Использование нетоксичных доз ядов саламандры и жабы для защиты от фракционного гамма-излучения / Корягин А. С., Ерофеева Е А, Гамова О Н., Логинов В В, Ванеева О Ю // Естествознание и гуманизм Сборник научных работ Томск Изд-во Сибирского государственного медицинского ун-та, 2005 Т 2, № 2 С 8-9

35 Корягин А С Повышение устойчивости популяции лабораторных крыс к повреждающему действию фракционного гамма-облучения с помощью многократного введения животных ядов в нетоксичных дозах / Корягин А. С., Ерофеева Е А, Гамова ОН// Популяции в пространстве и времени Сборник материалов докладов VIII Всероссийского популяционного семинара Нижний Новгород Изд-во Нижегородского ун-та, 2005 С 167-169

36 Корягин А С Сравнительная оценка противолучевых свойств животных ядов по состоянию системы крови в условиях многократного гамма-облучения / Корягин А. С., Ерофеева Е А, Логинов В В , Гамова О Н , Якунин В Н , Ванеева О Ю // Поволжский экологический журнал 2005 Вып 2 С 137-146

37 Корягин А С Яды жабы зелёной (Bufo viridis) и саламандры пятнистой (Salamandra salamandra) как радиопротекторы длительного действия / А. С. Корягин, Е А Ерофеева, О Н Гамова, А Д Синелыциков, О Ю Ванеева // Актуальные проблемы герпетологии и токсинологии Сборник научных трудов Вып 8 Тольятти, 2005 С 67-74

38 Korjagin A S Venoms of the bee, salamander and toad as adaptogens of long action to extreme factors (on the example of ionizing radiation) / A. S. Korjagin, E A Yerofeeva, О N Gamova, E V Kuznetsov, V S Suhov // Proceedings of the VIII World Congress ^International society for adaptive medicine (ISAM)", Moscow, Russia, 2006 P 191.

39 Корягин А С Сравнительный анализ противолучевых свойств ядов пчелы, саламандры и жабы в условиях однократного гамма-облучения / А. С. Корягин, Е А Ерофеева, О Н Гамова, Е В Кузнецов // Естествознание и гуманизм Сборник научных работ Томск, 2006 Т 3, № 1 С 60-61

40*. Корягин А С Экспериментальный и теоретический анализ адаптогенного действия ядов пчелы, саламандры и жабы в условиях фракционированного гамма-облучения / А. С. Корягин, Е А Ерофеева, О Н Гамова, В С Сухов // Вестник Нижегородского университета им Н И Лобачевского Серия биология 2006 Вып 1 (11) С 166-169

41 Корягин А С Радиозащитные свойства пчелиного яда при многократном действии гамма-излучения в низких дозах / А. С. Корягин, Е А Ерофеева, О Н Гамова, Е В Кузнецов // Материалы XII Всероссийской научно-практической конференции «Апитерапия сегодня» Рыбное Изд-во НИИ пчеловодства, 2006 Сб 12 С 75-79

42*. Корягин А С Анализ антиоксидантных свойств хитозана и его олигомеров / А. С. Корягин, Е А Ерофеева, Н О Якимович, Е. А Александрова, Л А Смирнова, А В Мальков // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2006 Т 142, № 10 С 444-446

43*. Якимович Н О Антиоксидантные свойства наночастиц золота в условиях нормы и действия ионизирующей радиации /НО Якимович,

Е А Ерофеева, Е. А Александрова, Е. А Корягина, А. В Мальков, А. С. Корягин, Л А Смирнова // Вестник Нижегородского университета им Н И Лобачевского Серия химия 2006 Вып 1 (5) С 60-68

44 Кузнецов Е В Исследование радиопротекторного действия пчелиного яда при многократном гамма-облучении в «костномозговом» диапазоне доз /ЕВ Кузнецов, Е А Корягина, А. С. Корягин, Е А Ерофеева // Естествознание и гуманизм Сборник научных работ Томск, 2007 Т 4, № 1 С 58

Изобретения

45 Орлов Б Н, Гелашвили Д Б, Егоров В В , Корягин А. С., Балакина И Н Контейнер для транспортировки беспозвоночных животных Авт св. на изобр № 677994 Опубл 1979 Бюлл № 29

46 Орлов Б Н, Гелашвили Д Б, Егоров В В , Корягин А. С., Балакина И Н Устройство для содержания беспозвоночных ядовитых животных Авт св на изобр №728795 Опубл 1980 Бюлл №5

47 Орлов Б Н, Гелашвили Д. Б, Егоров В В , Корягин А. С., Корнева Н В , Конькова Л Г. Устройство для отбора яда у жалоносных животных Авт св на изобр. № 886905 Опубл 1981 Бюлл №45

Подписано в печать 05 09 2007 Формат 60x84 1/16 Бумага офсетная Печать офсетная Уел печ л 2 Тир 100 Зак 961

Типография Нижегородского госуниверситета Лицензия № 18-0099 603000, Н Новгород, ул Б Покровская, 37

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Корягин, Александр Сергеевич

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Общие адаптационные реакции организма.

1.2. Химический состав и физиологические основы действия зоотоксинов на организм.

1.3. Действие ионизирующей радиации на организм.

1.4. Адаптогены — противолучевые средства природного происхождения.

1.5. Характеристика физико-химических и биологических свойств продуктов пчеловодства.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Адаптационные реакции при однократном и курсовом введении зоотоксинов пчелы, саламандры и жабы.

3.2. Диагностика возникновения состояния радиорезистентности, развивающегося в результате многократного введения зоотоксинов.

3.3. Определение длительности состояния радиорезистентности экспериментальных животных, вызванного курсовым введением зоотоксинов.

3.4. Изучение профилактической радиопротекторной эффективности зоотоксинов при фракционированном гамма-облучения в дозах 3 и 1,5 Гр.

3.5. Адаптогенная эффективность зоотоксинов при применении после однократного гамма-облучении в дозе 5 Гр.

3.6. Адаптогенная эффективность продуктов пчеловодства (зоотоксинов пчелы, прополиса, мёда, маточного молочка) и убихинона-10 при однократном гамма-облучении экспериментальных животных в дозе 3 Гр.

3.7. Исследование неспецифических реакций при курсовом пероральном введении зоотоксина пчелы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Эколого-физиологическая характеристика адаптогенных свойств зоотоксинов при повреждающем действии гамма-облучения на организм экспериментальных животных"

Актуальность проблемы

Обострение радиоэкологической ситуации в стране как результат техногенных аварий на ядерных объектах, испытаний оружия массового поражения, захоронения отходов с атомных электростанций ставит задачу поиска научно обоснованных методов и средств, обеспечивающих адаптацию и повышение резистентности организма человека и животных к повреждающему действию радиации, особенно при многократном (фракционированном) и хроническом облучении (Кудряшов, Гончаренко, 1999; Кудряшов, 2004). Классические радиопротекторы из-за своей высокой токсичности и кратковременности действия (1-2 часа) оказались непригодными в сложившихся условиях (Ярмоненко, Вайнсон, 2004). Стресс — наиболее известная неспецифическая адаптационная реакция, развивающаяся в ответ на действие сильных раздражителей, обычно неблагоприятных для организма. Стадия резистентности стресс-реакции характеризуется повышенной устойчивостью не только к данному стрессору, но и к действию других факторов (Селье, 1972, 1977). Необходимо отметить, что при стрессе, наряду с элементами защиты, имеются элементы повреждения. Стресс — это реакция, при которой сохранение жизни (защита) достигается ценой повреждения.

В настоящее время известны ещё две адаптационные реакции — реакция активации и реакция тренировки (Гаркави и др., 1998). Они развиваются в ответ на относительные слабые (реакция тренировки) или средние (реакция активации) воздействия. В отличие от стресса, изменения при этих реакциях по своему характеру близки к вариантам нормы. При продолжительном действии раздражителя средней силы развивается вторая стадия активации — устойчивая (стойкая) активация. На этой стадии происходит повышение активной резистентности, формирующейся не запредельным торможением в центральной нервной системе и снижением чувствительности, как при стрессе, а обусловленной истинным подъёмом активности защитных и регуляторных систем организма (Гаркави и др., 1990).

Несомненный интерес в этом направлении исследований вызывают яды природного происхождения. Отметим, что наибольшей физиологической активностью в этой группе биологически активных веществ обладают яды (зоотоксины) пчёл, змей, пауков, скорпионов и др. В настоящее время зоотоксины успешно применяются в исследованиях для решения фундаментальных и прикладных задач биологии (Гелашвили, 2002; Вга§апса, 1971), используются в медицине в качестве лекарственных средств (Орлов, Вальцева, 1977; Крылов, Млявый, 2002). Вводимые в малых дозах, они вызывают в организме комплекс приспособительных изменений как соматовегетативных функций, так и процессов метаболизма, направленных на сохранение гомеостаза. Очевидно, что такой комплекс реакций может стать фактором, запускающим или усиливающим в организме цепь взаимосвязанных процессов, повышающих его резистентность. В то же время систематических исследований, посвященных изучению адаптогенных свойств зоотоксинов, до сих пор не проводилось. Имеются немногочисленные работы, в которых показаны противолучевые свойства пчелиного яда (Артёмов и др., 1973), жабьего яда (Орлов, Конькова, 1978), ядов змей (Бердыева, 1990; Халиков и др., 1975). Обычно при исследованиях зоотоксины вводятся в организм однократно в дозах близких к летальным, что приводит к развитию стресс-реакции, стадия резистентности которой характеризуется повышенной устойчивостью к повреждающему действию радиации. Действие зоотоксинов на живые системы в малых дозах (в десятки раз ниже летальных), вызывающих адаптационные реакции активации и тренировки, не исследовалось, хотя именно эти реакции создают повышенную устойчивость организма к самым различным неблагоприятным факторам, не сопровождающуюся, как при стрессе, структурными повреждениями и напряжённостью адаптационных процессов (Гаркавидр., 1998).

Экстренная противолучевая терапевтическая помощь — наименее освоенная область радиационной биологии и медицины (Кудряшов, Гончаренко, 1999). С учётом того, что слабые раздражители могут вызывать благоприятные для организма реакции на фоне действия патогенных раздражителей, на фоне течения болезни, переводя его из стрессового состояния в другую, более оптимальную неспецифическую реакцию: тренировка, активация (Гаркави и др., 1998), исследование адаптогенных свойств малых доз зоотоксинов на фоне предварительного облучения, на фоне лучевой болезни является весьма перспективным.

Продукты пчеловодства — мёд, прополис, маточное молочко — многокомпонентные смеси, обладающие широким спектром биологической активности. Многочисленными исследованиями показано, что они обладают общетонизирующим действием, стимулируют энергетические процессы в клетках, активируют процессы биосинтеза (Лудянский, 1994; Крылов, Сокольский, 2000; ТасНс е1 а1., 1995). Лучевое поражение организма, напротив, сопровождается угнетением этих процессов, дестабилизацией мембран (Кудряшов, 1986; Рыскулова, 1986; Коломийцева, 1989), что указывает на возможность продуктов пчеловодства, в силу их биологической активности, снижать тяжесть поражения организма.

В связи с изложенным в настоящей работе были проведены исследования по обоснованию адаптогенных свойств малых доз зоотоксинов (меньших 0,02 DL50) пчелы, саламандры и жабы, а также продуктов пчеловодства при повреждающем действии радиации. Исследуемые зоотоксины имеют различную химическую природу (яд пчелы представлен компонентами белковой природы, яд саламандры — это стероидные алкалоиды, яд жабы сформирован компонентами стероидной и индольной природы) и разную специфическую направленность (яд пчелы проявляет гематотропные свойства, яд саламандры обладает нейротропным действием, яд жабы — кардиотоник).

Цель и основные задачи исследования

Цель работы: обоснование адаптогенных свойств зоотоксинов (ядов) пчелы медоносной (Apis mellifera L., Insecta, Hymenoptera), саламандры пятнистой (Salamadra salamadra L., Amphibia, Caudata) и жабы зелёной (Bufo viridis L., Amphibia, Anura), оцениваемых по показателям системы крови, при повреждающем действии гамма-облучения на организм экспериментальных животных.

Цель исследования определила следующие задачи:

1. Установить тип адаптационной реакции экспериментальных животных при однократном и курсовом введении зоотоксинов по показателям белой крови и красного костного мозга.

2. Диагностировать возникновение радиорезистентности по показателям белой крови и красного костного мозга у экспериментальных животных, находящихся в состоянии устойчивой активации, вызванной профилактическим курсовым введением зоотоксинов, при однократном гамма-облучении в дозе 3 Гр.

3. Определить длительность состояния радиорезистентности экспериментальных животных, подвергнутых однократному гамма-облучению в дозе 3 Гр, в разные сроки после профилактического курсового введения зоотоксинов, по показателям периферической крови, красного костного мозга и активности свободнорадикальных процессов.

4. Изучить профилактическую радиопротекторную эффективность зоотоксинов при фракционированном гамма-облучении экспериментальных животных в дозах 1,5 и 3,0 Гр по показателям периферической крови, красного костного мозга.

5. Изучить адаптогенную эффективность зоотоксинов по показателям периферической крови, красного костного мозга и активности свободнорадикальных процессов после однократного гамма-облучении экспериментальных животных в дозе 5 Гр.

6. Провести сравнительный анализ адаптогенной эффективности продуктов пчеловодства (пчелиного яда, прополиса, мёда, маточного молочка) по показателям периферической крови и активности свободнорадикальных процессов после однократного гамма-облучения экспериментальных животных в дозе 3 Гр.

Научная новизна

В работе впервые проведено исследование неспецифических реакций организма экспериментальных животных при однократном и курсовом введении зоотоксинов пчелы, саламандры и жабы в малых дозах.

Установлено, что курсовое введение зоотоксинов жабы, пчелы (0,1 мг/кг) и саламандры (0,5 мг/кг) приводит к развитию адаптационной реакции устойчивой активации. Впервые показано, что реакция устойчивой активации характеризуется возникновением состояния радиорезистентности организма, продолжительность которого составляет 3-4 недели в зависимости от природы яда. Впервые установлено, что состояние продолжительной радиорезистентности, вызванное курсовым введением зоотоксинов в малых дозах, способствует эффективной защите системы крови от фракционированного гамма-облучения в суммарной дозе 1,5 Гр и суммарной дозе 3 Гр. Впервые показано, что зоотоксины пчелы, саламандры и жабы проявляют выраженное адаптогенное действие и на фоне предварительного повреждающего действия гамма-облучения, что, по всей видимости, связано с их способностью переводить организм из состояния стресса в состояние устойчивой активации. Среди продуктов пчеловодства (зоотоксинов пчелы, прополиса, мёда и маточного молочка) адаптогенной эффективностью при их применении после облучения обладают только зоотоксины пчелы и прополис.

Научно-практическое значение

Выявленные закономерности проявления неспецифических реакций могут лежать в основе многих известных в настоящее время адаптогенных эффектов зоотоксинов. Полученные данные указывают, что при использовании зоотоксинов животных в качестве лекарственных средств в клинике и эксперименте необходимо учитывать возможное развитие системных неспецифических реакций. Результаты исследования позволяют дифференцировать неспецифические эффекты зоотоксинов, в основе которых лежат системные адаптационные реакции от специфического действия, обусловленного особенностями химизма животных ядов. Использование методов многомерной статистики и функции желательности может быть рекомендовано для использования в радиобиологии при поиске противолучевых средств. Полученные данные открывают перспективу использования зоотоксинов в качестве эффективных адаптогенов при фракционированном и, возможно, хроническом действии радиации.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Курсовое введение зоотоксинов пчелы медоносной (Apis mellifera L., Insecta, Hymenoptera), саламандры пятнистой (Salamadra salamadra L., Amphibia, Caudata) и жабы зелёной (Bufo viridis L., Amphibia, Anura) экспериментальным животным в дозах меньших 0,02 DL50 вызывает развитие адаптационной реакции типа устойчивой (стойкой) активации.

2. Формирование адаптационной реакции устойчивой активации у лабораторных животных, вызванное профилактическим курсовым введением малых доз зоотоксинов, сопровождается возникновением состояния радиорезистентности.

3. Состояние радиорезистентности к однократному гамма-облучению у экспериментальных животных, вызванное профилактическим курсовым введением малых доз зоотоксинов, сохраняется в течение трёх-четырёх недель (в зависимости от природы зоотоксинов).

4. При фракционированном гамма-облучении экспериментальных животных профилактическая радиопрожекторная эффективность выражена сильнее у зоотоксинов пчелы и жабы, чем у зоотоксинов саламандры. и

5. Курсовое введение зоотоксинов пчелы, саламандры и жабы экспериментальным животным после однократного гамма-облучения в дозе 5 Гр оказывает положительный адаптогенной эффект, объясняемый развитием адаптационной реакции устойчивой активации.

6. Среди продуктов пчеловодства (зоотоксинов пчелы, прополиса, мёда и маточного молочка), применяемых после однократного гамма-облучения в дозе 3 Гр, адаптогенное свойства проявляют только зоотоксины пчелы и прополис как вещества, понижающие активность свободнорадикальных процессов и нормализующих показатели белой крови поврежденного организма.

Апробация работы

Материалы диссертации были доложены на III, VI VII, X, XII международных научно-практических конференциях по апитерапии (г. Рыбное Рязанской обл., 1994, 1997, 1999, 2002, 2006), на Российской научной конференции «Антиоксиданты и актопротекторы» (С.-Петербург, 1994), на I конференции герпетологов Поволжья (Тольятти, 1995), XXXV Congress international d'apiculture (Anvers, Belgique, 1997), международной конференции «Пчеловодство — XXI век» (Москва, 2000), II международной конференции молодых учёных (Самара, 2001), III Всероссийской конференции «Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция» (Москва, 2002). I международной конференции по пчеловодству и пчелотерапии «Белорусский мёд» (Минск, 2002), IX международной конференции аспирантов и молодых учёных «Ломоносов» (Москва, 2002), VI конференции молодых учёных «Биология — наука XXI века» (Пущино, 2002), XXXVIII International Congress of Apiculture — Apimondia (Lublana, Slovenia, 2003), на

III международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования в системе образования» (Тамбов, 2005), на VIII Всероссийском популяционном семинаре «Популяции в пространстве и времени» (Н. Новгород, 2005). На III Европейском конгрессе по социальным животным (С.-Петербург, 2005), на VII Всемирном конгрессе «Международное сообщество для адаптивной медицины» (Москва, 2006).

Публикации

Всего по теме диссертации опубликованы 47 работ, из них 12 — в изданиях, рекомендованных ВАК, получено 3 авторских свидетельства на изобретения.

Объём и структура работы

Материалы диссертации изложены на 257 страницах машинописного текста, иллюстрированы 51 таблицами и 20 рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы, характеристики материалов и методов исследования, глав результатов исследования, обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, содержащего 305 источников, из которых 186 на русском языке и 119 на иностранных языках, приложения.

Заключение Диссертация по теме "Экология", Корягин, Александр Сергеевич

ВЫВОДЫ

1. Курсовое внутрибрюшинное введение крысам (в течение 7 суток) зоотоксинов пчелы (ОД мг/кг), саламандры (0,5 мг/кг) и жабы (0,1 мг/кг) приводит к развитию адаптационной реакции устойчивой активации, характеризующейся увеличением лейкоцитарного коэффициента, снижением содержания сегментоядерных нейтрофилов до нижней границы нормы и увеличением содержания лимфоцитов до верхней границы нормы.

2. Состояние адаптационной реакции устойчивой активации у крыс, вызванное профилактическим курсовым введением малых доз зоотоксинов пчелы, саламандры и жабы, сопровождается развитием радиорезистентности, которая характеризуется статистически значимыми (р < 0,05) увеличением числа лейкоцитов периферической крови, клеток красного костного мозга, снижением концентрации малонового диальдегида у животных экспериментальных групп по сравнению с животными контрольной группы (однократное гамма-облучение в дозе 3 Гр).

3. Профилактическое курсовое введение зоотоксинов пчелы и жабы обеспечивает радиорезистентность крыс к однократному гамма-облучению в дозе 3 Гр в течение 3 недель, в случае зоотоксина саламандры эффект наблюдается в течение 4 недель.

4. Профилактическое курсовое введение зоотоксинов пчелы и жабы обеспечивает более высокий, по сравнению с зоотоксином саламандры, уровень радиорезистентности крыс к фракционированному гамма-облучению в дозах 1,5 и 3 Гр.

221

5. Курсовое введение крысам зоотоксинов пчелы, саламандры и жабы после однократного гамма-облучения в дозе 5 Гр приводит к статистически значимой (р < 0,05) нормализации показателей периферической крови (содержание лейкоцитов, малонового диальдегида) и красного костного мозга (общее количество клеток, митотический индекс).

6. Курсовое применение продуктов пчеловодства (зоотоксина пчелы, прополиса, мёда, маточного молочка) после однократного гамма-облучения экспериментальных животных в дозе 3 Гр выявило адаптогенную эффективность только зоотоксинов пчелы и прополиса как веществ, нормализующих активность свободнорадикальных процессов и показатели белой крови, выражающуюся в статистически значимом (р < 0,05) повышенном содержании клеток красного костного мозга.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате проведённых исследований можно заключить, что курсовое введение зоотоксинов пчелы, саламандры и жабы в малых дозах, сопровождается развитием у экспериментальных животных адаптационной реакции устойчивой активации. Состояние устойчивой активации сопровождается снижением активности свободнорадикальных процессов и ингибированием (за исключением зоотоксинов жабы) пролиферативной активности кроветворных клеток. Установлено, что исследуемые зоотоксины не влияют на общее количество кроветворных клеток костного мозга и уровень хромосомных аберраций в них.

Наши исследования показали, что реакция устойчивой активации, вызываемая курсовым введением животным малых доз зоотоксинов пчелы, жабы и саламандры, сопровождается повышением резистентности системы крови к действию ионизирующей радиации в дозе 3,0 Гр. К наиболее значимым среди выявленных механизмов адаптогенного действия исследуемых зоотоксинов можно отнести увеличение устойчивости кроветворных клеток и лейкоцитов циркулирующей крови, снижение активности процессов перекисного окисления липидов у облучённых животных. Кроме того, яды пчелы и саламандры повышают уровень пролиферативной активности клеток красного костного мозга облученного организма. Наши исследования показали, что состояние радиорезистентности, вызванное зоотоксинами пчелы, жабы и саламандры сохраняется в течение длительного времени, трех-четырех недель, в зависимости от природы яда.

Было показано, что состояние продолжительной радиорезистентности, развивающегося в ответ на многократное введение лабораторным животным зоотоксинов пчелы, жабы и саламандры, позволяет успешно защищать систему крови в условиях общего фракционированного гамма-облучения в суммарных дозах 1,5 и 3,0 Гр. Зоотоксины пчелы и жабы повышают количество выживших лейкоцитов, кроветворных клеток и уровень их пролиферативной активности. Яд саламандры снижает степень ингибирования пролиферативной активности клеток красного костного мозга, но не влияет на их устойчивость к воздействию фракционированного облучения. Все исследуемые зоотоксины оказывают защитное действие на генетический материал кроветворных клеток, снижая в них уровень хромосомных аберраций по отношению к группе контроль (облучение). Можно полагать, что индукция мощности защитных систем организма, под влиянием зоотоксинов пчелы и жабы является достаточной для защиты системы крови и кроветворения от многократного (фракционного) действия ионизирующей радиации, а стимуляция защитных систем зоотоксинами саламандры недостаточна для обеспечения радиорезистентности при длительном действии ионизирующей радиации.

Выявлено, что применение зоотоксинов после однократного гамма-облучения в дозе 5 Гр, ускоряет восстановительные процессы в системе крови, что, по всей видимости, обусловлено переходом поврежденного организма из состояния стресса в состояние устойчивой активации.

Результаты проведённых исследований служат обоснованием адаптогенных свойств малых доз зоотоксинов пчелы, жабы и саламандры, и предполагают возможность создания на основе этих биологически активных веществ препаратов, способных повышать радиорезистентность организма в

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Корягин, Александр Сергеевич, Нижний Новгород

1. Аганин Л. В. Мёд и его исследование. Саратов: Изд-во Саратовского ун-та, 1985. 98 с.

2. Альферович А. А., Готлиб В. Я., Пелевина И. И. Изменение пролиферативной активности клеток после воздействия облучения в малых дозах//Известия АН. Сер. биологическая. 1995. № 1. С. 15-18.

3. Андреев А. А., Эйдельман Ю. А., Хвастунов И. К. Биофизическое моделирование радиационных повреждений генетических структур клетки // Радиационная биология. Радиоэкология. 2005. Т. 45, № 4. С. 549-560.

4. Ажуцкий Д. Г., Ажуцкий Г. Ю., Борисенко С. Н. Взаимодействие мелиттина пчелиного яда с альбумином крови человека // Украинский биохимический журнал. 1995. Т. 67, № 4. С. 54-62.

5. Андреев С. В. Моделирование сердечно-сосудистых заболеваний // Моделирование заболеваний / Под ред. С. В. Андреева. М., 1973. С. 198-223.

6. Афанасьев Ю. И., Баланчук В. К., Ванников Л. Л., Донских Н. В. Основы гистологии и гистологической техники. М., 1967.

7. Артёмов Н. М., Калинина Т. Е., Михайлова Я. В. Влияние пчелиного яда на морфологический состав крови млекопитающих // Учёные записки Горьковского ун-та. 1951. Вып. 19. С. 53-87.

8. Артёмов Н. М., Конькова JI. Г., Сергеева Л. И. Радиозащитный эффект пчелиного яда // Механизмы действия биологически активных веществ: Межвуз. сб. Горький, 1973. С. 28-34.

9. Ю.Артёмов Н. М. Физиологические основы действия на организм пчелиного яда: Автореф. дис. . докт. биол. наук. Горький, 1969. 55 с.

10. Арчаков А. И., Карузина И. И. Цитохром Р-450 // Белки и пептиды. М.: Наука, 1995. Т. 1. С. 95-101.

11. Атясов Н. И., Гусева М. П. Куприянов В. А. Десятилетний опыт применения прополиса при лечении гранулирующих ран в горьковском ВОЦ // Международный конгресс по пчеловодству (Апимондия). 1972. С. 46-48.

12. Байдан A.B., Жолос A.B. Апамин — высокоспецифичный и эффективный блокатор некоторых кальций-зависимых и калиевых проводимостей//Нейрофизиология. 1988. Т. 20, № 6. С. 843-846.

13. Балуда В. П., Володин В. М., Поспишил Я. Радиация и гемостаз. М.: Энергоатомиздат, 1986. 160 с.

14. Барабой В. А. Стресс: природа, биологическая роль, механизмы, исходы. Киев: Фитосоциоцентр, 2006. 424 с.

15. Барабой В. А. Хемилюминесценция крови в экспериментальной онкологии // Хемилюминесценция крови в экспериментальной и клинической онкологии / Ред. В. А. Барабой, Е. Е. Чеботарев. Киев: Наукова думка, 1984, С. 111-116.

16. Барсукова Л. П., Котляревская Е. С., Марьяновская Г. Я. К вопросу об энергетическом гомеостазе организма при развитии различных адаптационных реакций // Гомеостатика живых и технических систем. Иркутск, 1987. С. 49-50.

17. Белоусова О. И., Горизонтов П. Д., Федотова Н. И. Радиация и система крови (к проблеме радиочувствительности в условиях внешнего облучения). М.: Атомиздат, 1979. 128 с.

18. Бердыева А. Т. Патофизиологические аспекты токсического действия змеиных ядов. Алма-Ата: Ылым, 1990. 164 с.

19. Бесядовский Р. А., Иванов К. В., Козюра А. К. Справочное руководство для радиобиологов. М.: Атомиздат, 1978. 128 с.

20. Биленко М. В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов. М.: Медицина, 1989. 370 с.

21. Богач И. М, Каримова 3. Л. Применение прополиса при различных заболеваниях дыхательной системы // Международный симпозиум по применению продуктов пчеловодства в медицине и ветеринарии: Сб. научн. тр. 1972. С. 47.

22. Бонд В., Флиднер Т., Аршамбо Д. Радиационная гибель млекопитающих. Нарушение кинетики клеточных популяций. М.: Атомиздат, 1971. 320 с.

23. Борткевич Л. Г. Общедоступные методы защиты населения, проживающего на заражённых радионуклидами территориях // Ядерная энциклопедия. М.: Благотворит фонд Ярошинской. 1996. С. 327-330.

24. Васин М. В. Классификация средств профилактики лучевых поражений как формирование концептуального базиса современной радиационной фармакологии // Радиационная биология. Радиоэкология. 1999. Т. 39, № 2-3. С. 212-222.

25. Вахонина Т. В. Пчелиная аптека. Л., 1992. 190 с.

26. Вернигорова Л. А., Лебедев В. Г. Радиозащитная эффективность некоторых зоотоксинов // Радиобиология. 1986. Т. 26, № 4. С. 532-535.

27. Владимиров В. Г., Джаракьян Т. К. Радиозащитные эффекты у животных и человека. М.: Энергоиздат, 1982. 88 с.

28. Владимиров Ю. А. Свободные радикалы в биологических системах // Соросовский образовательный журн. 2000. Т. 6, № 12. С. 13-19.

29. Владимиров Ю. А., Арчаков А. И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Наука, 1972. 252 с.

30. Вовк С. В. Влияние иммобилизации на морфофункциональные свойства лизосомального аппарата нейтрофильных лейкоцитов в условиях блокады Р-адренорецепторов // Физиологический журнал им. М. И. Сеченова. 1993. Т. 79, № 9. С. 42^7.

31. Гаврилов О. К., Козинец Г. И., Черняк Н. Б. Клетки костного мозга и периферической крови. М.: Медицина, 1985. 288 с.

32. Галанкин В. Н., Токмаков А. М., Боуманов К. В. О структурных основах снижения неспецифической антимикробной резистентности, связанной с функционированием системы нейтрофильных лейкоцитов // Архив патологии. 1989. Т. 89, № 1. С. 168-171.

33. Гаркави JI. X., Квакина Е. Б., Уколова М. А. Адаптационные реакции и резистентность организма. Ростов-на-Дону: Изд-во Ростовского ун-та, 1990. 375 с.

34. Гаркави Л. X., Квакина Е. Б. О критериях оценки неспецифической резистентности организма при действии различных биологически активных факторов с позиции теории адаптационных реакций // Миллиметровые волны в биологии и медицине. 1995. № 6. С. 11-21.

35. Гаркави Л. X., Квакина Е. Б., Кузьменко Т. С. Антистрессорные реакции и активационная терапия. Реакция активации как путь к здоровью через процессы самоорганизации. М.: ИМЕДИС, 1998. 656 с.

36. Гелашвили Д. Б., Силкин А. А., Сиднев Б. Н. К нейрофизиологической характеристике судорожного действия яда саламандры//Межвуз. сборник. Горький, 1986. С. 32-37.

37. Гераськин С. А., Севанькаев А. В. Цитогенетические эффекты малых доз: результаты Н. В. Лучника и современное состояние вопроса // Радиационная биология. Радиоэкология. 1996. Т. 36, № 6. С. 860-863.

38. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: Практика, 1998.459 с.

39. Голиков П. П. Рецепторные механизмы глюкокортикоидного эффекта. М.: Медицина, 1989. 288 с.

40. Гончаренко E.H., Кудряшов Ю. Б. Гипотеза эндогенного фона радиорезистентности. М.: Изд-во Московского ун-та, 1980. 176 с.

41. Гончаренко Е. Н., Кудряшов Ю. Б. Противолучевые средства природного происхождения // Успехи современной биологии. 1991. Т. 111, №2. 302-316.

42. Гончаренко Е. Н., Кудряшов Ю. Б. Химическая защита от лучевого поражения. М.: Изд-во Московского ун-та, 1985. 248 с.

43. Горизонтов П. Д. Роль симпатической нервной системы в ранних неспецифических реакциях кроветворных органов // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1975. № 3. С. 34-38.

44. Горизонтов П. Д., Белоусова О. И., Федотова М. И. Стресс и система крови. М.: Медицина, 1983. 823 с.

45. Груздев Г. П. Проблема поражения кроветворной ткани при острой лучевой патологии. М.: Медицина, 1968. 140 с.

46. Деревич А., Попеску А. Л., Попеску И. Новый вклад в исследование биологических свойств прополиса // Международный конгресс по пчеловодству (Апимондия). 1965. С. 76-77.

47. Джаракьян Т. К. Геморрагический синдром острой лучевой болезни. Л.: Медицина, 1976. 156 с.

48. Донченко Г. В. Биохимия убихинона (Q). Киев, 1988. 240 с.

49. Евстигнеева 3. Г., Соловьева Н. А., Сидельникова Л. И. Структура и функции шаперонов и шаперонинов // Прикладная биохимия и микробиология. 2001. Т. 37, № 1. С. 5-18.

50. Жербин Е. А., Чухловин А. Б. Радиационная гематология. М., 1989.219 с.

51. Заславский Ю. С., Шишкина Л. Н., Кожакару А. Ф. и др. Модификация радиационного поражения коэнзимом (¿9 // Радиобиология. 1981. Т. 21, вып. 4. С. 609-611.

52. Коган А. X., Сыркин А. Л., Дриницина С. В., Коканова И. В. Антиоксидантная защита сердца коэнзимом С)10 при стабильной стенокардии напряжения // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1999. №4. С. 16-19.

53. Засухина Г. Д. Нерешённые вопросы систем защиты клеток человека от радиации // Радиационная биология. Радиоэкология. 2006. Т. 46, № 4. С. 389-392.

54. Захаров В. И. Жабий яд. Кишинёв: Карта молдовеняска, 1960.104 с.враги. Активные формы кислорода и азота // Биохимия. 2005. Т. 70, № 2. С. 265-272.

55. Зубарева О. Е., Клименко В. М. Конфликт мотиваций и реакция нейтрофильных гранулоцитов у крыс // Физиологический журнал им. И. М. Сеченова. 1996. Т. 82, № 12. С. 87-92.

56. Ильюхин А. В., Шашков В. С., Бурковская Г. Е., Зубенкова Э. С. Цитокинетика и морфология кроветворения при хроническом облучении. М.: Энергоиздат, 1982. 136 с.

57. Казначеев В. П. Современные аспекты адаптации. Новосибирск: Наука, 1980. 191 с.

58. Калинина Т. Е. О действии ядов пчёл и других перепончатокрылых на морфологический состав крови // Учёные записки Горьковского ун-та. 1962. Вып. 55. С. 245-257.

59. Квачева Ю. Е., Власов П. А. Патоморфологическая характеристика раннего некробиоза миелокариоцитов при остром лучевом поражении // Радиационная биология. Радиоэкология. 1997. Т. 37, № 1. С. 76-81.

60. Козинец Г. И. Общие вопросы кроветворения // Исследование системы крови в клинической практике / Ред. Г. И. Козинец, В. А. Макаров. М.: Триада-Х, 1998. 480 с.

61. Колесникова Н. В., Нестерова И. В., Чудилова Г. А. Функционирование системы нейтрофильных гранулоцитов в динамике после экспериментальной кровопотери // Гематология и трансфузиология. 1999. № 2. С. 20-23.

62. Коломийцева И. К. Радиационная биохимия мембранных липидов. М.: Наука, 1989. 335 с.

63. Коломийцева И. К., Новосёлова Е. Г., Потехина Н. М. Убихинон-9. Влияние на липидный обмен и радиационную гибель. Пущино, 1984. 29 с.

64. Коломийцева И. К., Новосёлова Е. Г., Потехина Н. М. Терапевтическое действие масел и убихинона-9 при лучевом поражении // Радиобиология. 1983. Т. 25, вып. 1. С. 53-57.

65. Корнева Е. А., Шхинек Э. К. Гормоны и иммунная система. Л.: Наука, 1988. 251 с.

66. Корнева Н. В. Физиологический анализ рефлекторного действия некоторых животных ядов: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Горький, 1970. 24 с.

67. Котляревская Е. С. Исследование функционального состояния гипоталамической области головного мозга при противоопухолевом действии магнитных полей: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Ростов-на-Дону, 1974. 24 с.

68. Крылов В. Н. Механизмы изменения некоторых функций нормального и альтерированного сердца под влиянием зоотоксинов. Автореф. дис. . докт. биол. наук. Горький, 1990. 39 с.

69. Крылов В. Н. Пчелиный яд. Свойства, получение, применение: Научно-справочное издание. Нижний Новгород: Изд-во Нижегородского унта, 1995. 224 с.

70. Крылов В. Н., Ошевенский Л. В. Сравнительный анализ кардиотропного действия некоторых зоотоксинов // Механизмы действия зоотоксинов: Межвуз. сб. Горький, 1984. С. 3-10.

71. Крылов В. Н., Сокольский С. С. Маточное молочко пчёл. Свойства, получение, применение. Краснодар: Агропромполиграфист, 2000. 216 с.

72. Кудряшов Ю. Б. Основные принципы в радиобиологии // Радиационная биология. Радиоэкология. 2001. Т. 41, № 5. С. 531-547.

73. Кудряшов Ю. Б. Радиационная биофизика (ионизирующие излучения). М.: Физматлит, 2004. 448 с.

74. Кудряшов Ю. Б. Химическая защита от лучевого поражения // Соросовский образовательный журнал. 2000. Т. 6, № 6. С. 21-26.

75. Кудряшов Ю. Б., Гончаренко Е. Н. Современные проблемы противолучевой химической защиты организмов // Радиационная биология. Радиоэкология. 1999. Т. 39, № 2-3. С. 197-211.

76. Кузник Б. И., Цыбиков Н. Н. Гемостаз и иммунные реакции // Актуальные проблемы гемостазиологии. Молекулярно-биологические и физиологические аспекты. М.: Наука, 1981. 504 с.

77. Кузьмина Е. И. Перекисное окисление липидов в комплексной оценке гиперлипопротеидемий: Автореф. дис. . канд. биол. наук. М., 1985. 19 с.

78. Легеза В. И., Владимиров В. Г. Новая классификация профилактических противолучевых средств // Радиационная биология. Радиоэкология. 1998. Т. 38, № 3. С. 416-425.

79. Лесничук С. А., Катунов В. Ю., Породенко Н. В., Северин Е. С. Характеристика бензодиазепиновых рецепторов лимфоцитов человека // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1998. Т. 126, № 10. С. 1241-1243.

80. Ли Д. Е. Действие радиации на живые клетки. М.: Атомиздат, 1963.287 с.

81. Лобачевский П. Н., Фоминых Е. В. Учёт радиационно-индуцированной задержки деления клеток при исследовании индукции хромосомных аберраций//Радиобиология. 1991. Т. 31, № 1. С. 59-64.

82. Лукьянова Л. Д. Биоэнергетическая гипоксия: понятие, механизмы и способы коррекции // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1997. Т. 124, № 9. С. 244-254.

83. Мазурик В. К., Михайлов В. Ф. О некоторых молекулярных механизмах основных радиобиологических последствий действия ионизирующих излучений на организм млекопитающих // Радиационная биология. Радиоэкология. 1999. Т. 39, № 1. С. 89-96.

84. Мазурик В. К., Михайлов В. Ф. Радиационно-индуцированная нестабильность генома: феномен, молекулярные механизмы, патогенетическое значение // Радиационная биология. Радиоэкология. 2001. Т. 41, № 3. С. 272-289.

85. Мазурик В. К., Мороз Б. Б. Проблемы радиобиологии и белок р53 // Радиационная биология. Радиоэкология. 2001. Т. 41, № 5. С. 548-572.

86. Макгрегор Г., Варли Дж. Методы работы с хромосомами животных. М.: Мир, 1986. 268 с.

87. Материй Л. Д., Ермакова О. В., Таскаев А. И. Морфофункциональная оценка состояния организма мелких млекопитающих в радиоэкологических исследованиях (на примере полёвки-экономки). Сыктывкар, 2003. 164 с.

88. Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека: В 2-х т. Т. 2 . М.: Мир, 1993. С. 210.

89. Маянский А. Н., Маянский Д. Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. Новосибирск: Наука, 1989. 321 с.

90. Меерсон Ф. 3. Адаптационная медицина: механизмы и защитные эффекты адаптации. М.: Hypoxia Medical LTD, 1992. 331 с.

91. Меньшиков В. В., Делекторская Л. Н., Золотницкая Р. П. и др. Лабораторные методы исследования в клинике. М.: Медицина, 1987. 368 с.

92. Меньшикова Е. Б., Зенков Н. К., Реутов В. П. Оксид азота и N0-синтазы в организме млекопитающих при различных функциональных состояниях // Биохимия. 2000. Т. 65, вып. 4. С. 485-503.

93. Методы биологии развития / Детлаф Т. А., Бродский В. Я., Гаузе Г. Г. М.: Наука, 1974. 134 с.

94. Микоша А. С. Роль периферических бензодиазепиновых рецепторов в транспорте холестерина и синтезе стероидов // Успехи современной биологии. 2001. Т. 121, № 3. С. 287-295.

95. Микоян В. Д., Воеводская Н. В., Кубрина Л. Н., Маленкова И. В., Ванин А. Ф. Экзогенное железо и у-облучение индуцируют синтез NO-синтетазы в печени мышей // Биохимия. 1994. Т. 59, № 5. С. 732-738.

96. Митрофанов Ю. А., Лесникова Л. Н., Восканян А. 3., Отраднова

97. B. В. Альтернативные и неальтернативные процессы возникновения аберраций хромосом // Радиобиология. 1991. Т. 31, № 4. С. 585-592.

98. Мороз Б. Б., Омельчук H.H. Нарушение связывания кортикостероидов с белками плазмы при острой лучевой болезни у различных видов экспериментальных животных // Радиобиология. 1979. Т. 19, №4. С. 512-515.

99. Назаренко С. А., Тимошевский В. А. Сравнительный анализ частоты анеуплоидии в покоящихся и делящихся клетках человека при воздействии вредных внешнесредовых факторов // Генетика. 2005. Т. 41, № 3.1. C. 391-395.

100. Нефедов И. Ю., Нефедова И. Ю., Палыга Г. Ф. Актуальные аспекты проблемы генетических последствий облучения млекопитающих // Радиационная биология. Радиоэкология. 2000. Т. 40, № 4. С. 358-372.

101. Новиков B.C., Горанчук В. В., Шустов Е. Б. Физиология экстремальных состояний. СПб.: Наука, 1998. 247 с.

102. Нугис В. Ю., Дудочкина Н. Е. Закономерности элиминации аберраций хромосом у людей после острого облучения по данным культивирования лимфоцитов периферической крови в отдалённые сроки // Радиационная биология. Радиоэкология. 2006. Т. 46, № 1. С. 5-15.

103. Обатуров Г. М. Биофизические модели формирования радиационно-индуцированных хромосомных аберраций // Радиационная биология. Радиоэкология. 1996. Т. 36, № 6. С. 834-839.

104. Обатуров Г. М., Потетня В. И. Хромосомные аберрации и репродуктивная гибель клеток млекопитающих. Количественные соотношения между этими эффектами // Радиобиология. 1986. Т. 26, №4. С. 465-472

105. Оганесян Н. М., Петросян Ш. М., Мириджанян М. И. Анализ показателей здоровья и структуры заболеваемости жителей Армении, принимавших участие в ликвидации последствий аварии на ЧАЭС // Радиационная биология. Радиоэкология. 2006. Т. 46, № 3. С. 341-347.

106. Окада Ш. Радиационная биохимия клетки. М.: Мир, 1974. 408 с.

107. Омаров Ш. М. Физиологический анализ антикоагулянтного действия зоотоксинов // Механизмы действия зоотоксинов: Межвуз. сб. Горький, 1982. С. 31-37.

108. Омельчук Н. Н. К механизму снижения связывающей способности кортикостероидсвязывающего глобулина плазмы крови при острой лучевой болезни // Радиобиология. 1987. Т. 27, № 4. С. 544-546.

109. Опи Л. X. Физиология и патофизиология сердца. Т. 2. М., 1990.624 с.

110. Опритов В. А., Калинин В. А., Ретивин В. Г. Теоретические основы и методы изучения биофизических процессов у растений. Горький, 1979. 84 с.

111. Орлов Б. Н. Физиологический анализ нейротропных свойств животных ядов: Автореф. дис. докт. биол. наук. Саратов, 1972. 25 с.

112. Орлов Б. Н., Вальцева И. А. Яды змей (токсикологические, биохимические и патофизиологические аспекты). М.: Медицина, 1977. 252 с.

113. Орлов Б. Д., Гелашвили Д. Б., Ибрагимова А. К. Ядовитые животные и растения СССР. М.: Высшая школа, 1990. 272 с.

114. Орлов Б. Д., Гелашвили Д. Б. Зоотоксинология. Ядовитые животные и их яды. М.: Высшая школа, 1985. 280 с.

115. Орлов Б. Н., Конькова Л. Г. Зоотоксины и радиация // Механизмы действия зоотоксинов: Межвуз. сб. Горький, 1978. С. 52-69.

116. Орлов Б. Н., Крылов В. Н. Жабий яд. Химический состав, физико-химические свойства // Механизмы действия зоотоксинов: Межвуз. сб. Горький, 1978. С. 3-8.

117. Охотский Б. А. Продукты пчеловодства в профилактике болезней и лечебном питании. // Биология и технология продуктов пчеловодства: Мат. конф. по апитерапии. Днепропетровск, 1990. Ч. 1. С. 64-65.

118. Пигаревский В. Е. Новое в клинико-морфологической оценке функционального состояния нейтрофильных гранулоцитов // Клиническая морфология нейтрофильных гранулоцитов. Л., 1988. С. 3-11.

119. Поливода Б. И., Конев В. В., Попов Г. А. Биофизические аспекты радиационного поражения биомембран. М.: Энергоатомиздат, 1990. 154 с.

120. Поправко А. С. Методы химического изучения прополиса // Пчеловодство. 1976. № 6. С. 34-36.

121. Пшенникова М. Г. Защитная роль простагландинов при повреждающих воздействиях // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1991. № 6. С. 54-58.

122. Реброва О. Ю. Статистический анализ медицинских данных. М.: Медиа сфера, 2003. 218 с.лимфоцитах крови человека in vitro после у-облучения // Радиационная биология. Радиоэкология. 1996. Т. 36, № 6. С. 848-851.

123. Ройт А., Бротстофф Дж., Мейл Д. Иммунология. М.: Мир, 2000.592 с.

124. Романцев Е. Ф., Блохина В. Д., Жуланова 3. И., Кащенко Н. Н., Филиппович И. В. Биохимические основы действия радиопротекторов. М.: Атомиздат, 1980. 168 с.

125. Рудаков В. Е., Ишмухаметова JI. Н. Исследование нарушений мегакариоцитопоэза при острой лучевой болезни // Радиобиология. 1970. Т. 10, №4. С. 66-74.

126. Рыскулова С. Т. Радиационная биология плазматических мембран. М.: Энергоатомиздат, 1986. 127 с.

127. Рябченко Н. И. Радиация и ДНК. М.: Атомиздат, 1979. 192 с.

128. Савич А. В. Действие ионизирующей радиации на внутриклеточные мембраны и тканевое дыхание // Тканевая гипоксия и её коррекция. Новосибирск: Наука. 1981. С. 63-70.

129. Сапронов Н. С. Фармакология гипофизарно-надпочечниковой системы. СПб.: Специальная литература, 1998. 336 с.

130. Селье Г. Концепция стресса как мы её представляем в 1976 году // Новое о гормонах и механизме их действия. Киев: Наукова Думка, 1977. С. 27-51.

131. Селье Г. На уровне целого организма. М.: Наука, 1972. 121 с.

132. Скулачев В. П. Эволюция, митохондрии и кислород // Соросовский образовательный журнал. 1999. Т. 5, № 9. С. 4-10.

133. Смирнов В. П., Монахов А. В. Руководство к описанию гистологических препаратов общего и частного курса патологической анатомии. Нижний Новгород, 1998.

134. Смирнов В. С., Фрейдлин И. С. Иммунодефицитные состояния. СПб., 2000. С. 50-53.

135. Соколовский В. В. Окислительно-восстановительные процессы в биохимическом механизме неспецифических реакций организма на действие экстремальных факторов // Антиоксиданты и адаптация. 1984. С. 5-19.

136. Сусков И. И., Кузьмина Н. С. Проблема индуцированной геномной нестабильности в детском организме в условиях длительного действия малых доз радиации // Радиационная биология. Радиоэкология. 2001. Т. 41, №5. С. 606-614.

137. Теппермен Дж., Теппермен X. Физиология обмена веществ и эндокринной системы. М.: Мир, 1989. 651 с.

138. Тимофеев-Ресовский Н. В., Иванов В. И., Корогодин В. И. Применение принципа попадания в радиобиологии. М.: Атомиздат, 1968. 228 с.

139. Тимошин С. С. Биологическая роль реактивного торможения митозов при стрессе // Арх. патологии. 1983. Т. 45, № 4. С. 83-87.

140. Тинякова О. П., Парин С. Б., Крылов В. Н. Исследование антиноцептивного действия яда саламандры пятнистой Salamandra salamandra // Журнал эволюционной биохимии и физиологии. 1999. №2. С.111-116.

141. Тиунов JI. А., Жербин Е. А., Жердин Б. А. Радиация и яды. М.: Атомиздат, 1977. 144 с.

142. Тюкавкина H.A., Руленко И. А., Колесник Ю. А. Природные биофлавоноиды как пищевые антиоксиданты и биологически активные добавки // Вопросы питания. 1996. № 2. С. 33-36.

143. Улитин И. Б. Эффект действия малых доз пчелиного яда // Вестник ННГУ им. Н. И. Лобачевского: Сб. научн. тр. аспирантов. Нижний Новгород, 1995. С. 22-24.

144. Филаретов А. А., Подвигина Т. Т., Филаретова Л. П. Адаптация как функция гипофизарно-адренокортикальной системы. СПб.: Наука, 1994. 131 с.

145. Филиппович И. В., Романцев Е. Ф. Влияние ионизирующей радиации, сульфгидрильных соединений и гипоксии на фосфорилирование тимидина в зобной железе и селезёнке крыс // Радиобиология. 1968. Т. 8, № 6. С. 800-805.

146. Хавинсон В. X., Баринов В. А., Арутюнян A.B., Малинин В. В. Свободнорадикальное окисление и старение. СПб.: Наука, 2003. 327 с.

147. Хаитов P.M., Лесков В. П. Иммунитет и стресс // Российский физиологический журнал им. И. М. Сеченова. 2001. Т. 87, № 8. С. 1060-1072.

148. Халиков С. К., Туракулов Я. X., Рахимов M. М. О радиозащитных свойствах ядов змей средней Азии // Радиобиология. 1975. Т. 15, вып. 6. С. 910-913.

149. Харин Г. М., Сабитова A.M. Взаимосвязь изменений факторов неспецифической резистентности при травматологическом и ожоговом шоке // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1997. № 5. С. 541— 544.

150. Холл Э. Дж. Радиация и жизнь. М.: Медицина, 1989. 256 с.

151. Хомутов А. Е. Гепарин и зоотоксины // Механизмы действия зоотоксинов: Межвуз. сб. Горький, 1987. С. 13-30.

152. Хомутов А. Е., Орлов Б. Н. Физиологическая роль гепарина. Горький: Изд-во Горьковского ун-та, 1987. 77 с.

153. Шарова Н. П. Как клетка восстанавливает повреждённую ДНК? // Биохимия. 2005. Т. 70, № 3. С. 341-359.

154. Шарпатый В. А. Радиационная модификация сахарного фрагмента в ДНК: образование разрывов, изменение конформаций полимера, передача повреждений на основание // Радиобиология. 1992. Т. 32, № 2. С. 180-193.

155. Шапиро А. М., Вальцева И. А., Бажутина Г. А. Действие пчелиного яда на некоторые показатели крови // Механизмы действия зоотоксинов: Межвуз. сб. Горький, 1976. С. 80-84.

156. Шилов Ю. И., Орлова Е. Г. Адренергические механизмы регуляции фагоцитарной активности нейтрофилов, моноцитов и эозинофилов периферической крови крыс при остром стрессе // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2000. Т. 129, № 5. С. 563-565.

157. Шихлярова А. И., Гаркави JI. X., Квакина Е. Б., Кузьменко Т. С. Антистрессорные реакции и активационная терапия. Екатеринбург: Филантроп, 2002. 196 с.

158. Шкендеров С., Иванов Ц. Пчелиные продукты. София: Земиздат, 1985.456 с.

159. Шмаров Д. А., Кижаев Е. В., Сергеев Г. А., Крехнов Б. В. Параметры митотического цикла клеток костного мозга после облучения // Гематология и трансфузиология. 1993. № 5. С. 21-24.

160. Шмаров Д. А., Козинец Г. И. Закономерности клеточного цикла гемопоэтических клеток при действии ионизирующей радиации // Гематология и трансфузиология. 1995. № 6. С. 25-29.

161. Шурлыгина A.B., Обут Т. А., Шварц Я. III., Труфакин В. А. Влияние гидрокортизона и их совместного применения на показатели фагоцитарной активности нейтрофилов крови крыс // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1995. № 2. С. 179-180.

162. Шхинек Э. К. Влияние общего рентгеновского облучения на содержание 17-оксикортикостероидов в периферической крови собак // Радиобиология. 1966. Т. 6, № 1. С. 46^9.

163. Ярмоненко С. П. Противолучевая защита организма. М.: Атомиздат, 1969. 264 с.

164. Ярмоненко С. П., Вайнсон А. А. Радиобиология человека и животных. М.: Высшая школа, 2004. 549 с.

165. Achong М., Macola S., Giral Т. The antimycotic effect of the gastric acid secretion // XXXIII International Congress of Apiculture — Apimondia, Beijing, 1993. P. 501-502.

166. Aghajanian G. K., Wang Y. Y. Common a2 and opiate affecter mechanisms in the locus ceruleans: intracellular studies in brain slices // Neuropharmacology. 1987. V. 26. P. 793-799.

167. Ardry M. R. Contribution a letude de la gellee royale // Ann. Pharmacol. 1956. V. 5. P. 97-100.

168. Bancs В. E. C., Shipolini A. R. Chemistry and pharmacology of honeybee venom // Venom of Hymenoptera / Ed. T. Pick. London: Academy Press, 1986. P.329-416.

169. Baker K. J., East J. M., Lee A. G. Mechanism of inhibition of the Ca2+-ATPase by melittin // Biochemistry. 1995. V. 34, No. 11. P. 3596-3604.

170. Blum M.S., Novak A. F., Taber S. 10-hydroxi-d-2-decenoic acid, an antibiotic found in royal jelly// Science. 1959. V. 130. P. 452^153.

171. Braunwald E., Ross J., Sonnenblick E. Mechanisms of contraction of normal and failing heart. Boston, 1976. 485 p.

172. Brude I. R., Drevon C. A., Hjermann I., et al. Peroxidation of LDL from combined-hyperlipidemic male smokers supplied with omega-3 fatty acids and antioxidants // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 1997. V. 17, No. 11. P.2576-2588.

173. Burton G. W., Joice A., Ingold K. U. Is vitamin E the only lipid-soluble, chain-breaking antioxidant in human blood plasma and erythrocyte membranes? // Arch. Biochem. and Biophys. 1983. V. 221, No. 1. P. 281-290.

174. Colen J. J., Duke R. C. Glucocorticoid activation of a calcium-dependent endonuclease in thymocyte nuclei leads to cell death // J. Immunol.1984. V. 132. P. 38-42.

175. Costeff H., Apter N., Elpeleg O. N., et al. Ineffectiveness of oral coenzyme Q10 supplementation in 3-methylglutaconic aciduria, type 3 // Brain Dev. 1998. V. 20, No. l.P. 33-35.

176. Crestanello J. A., Kamelgard J., Lingle D. M., et al. Elucidation of a tripartite mechanism underlying the improvement in cardiac tolerance to ischemia by coenzyme Q10 pretreatment // J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 1996. V. Ill,No. 2. P. 443-450.

177. Chen C. C., Lin-Shiau S. Y. Mode of inhibitory action of melittin on Na+-K+-ATPase activity of the rat synaptic membrane // Biochem. Pharmacol.1985. V. 34, No. 13. P. 2335-2341.

178. Cuppoletti J., Blumenthal K. M., Malinovska D. H. Melittin inhibition of the gastric H+-K+-ATPase and photoaffmity labeling with azidosalicylyl melittin // Arch. Biochem. Biophys. 1989. V. 275, No. 1. P. 263-270.

179. De Bony I., Dufoureg I., Clin B. Lipid-protein interactions: NMR-study of melittin and its binding to lysophosphatidylcholine // Biochim. Biophys Acta.1979. V. 552, No. 3. P. 531-534.

180. Degli E. M., Bertoli E., Parenti-Castelli G., et al. Incorporation of ubiquinone homologs into lipid vesicles and mitochondrial membranes // Arch. Biochem. Biophys. 1981. V. 210, No. 1. P. 21-32.

181. Diaz-Achirica P., Pristo S., Ubach J., et al. Permeabilization of mitochondrial inner membrane by short cecropin-A-melittin hybrid peptides // Eur. J. Biochem. 1994. V. 224, No. 1. P. 257-263.

182. Diplock A. N. The role of antioxidant in clinical practice // Br. J. Clin. Pract. 1990. V. 44. P. 257-258.

183. Finkelstein Y., Koffler B., Rabey J.M., Gilad G. M. Dynamics of cholinergic synaptic mechanisms in rat hippocampus after stress // Brain Research. 1985. V. 343. P. 314-319.

184. Fletcher D. L., Dillared C. J., Tappel A. Y. Measurement of fluorescent lipid peroxidation products in biological system and tissues // Analyt. Biochem. 1973. V. 52. P. 497-499.

185. Frias T. I., Torre A. N, Espinar M. N. Sugars and crystallization of the honeys // XXXIII International Congress of Apiculture — Apimondia, Beijing, 1993. P. 427-428.

186. Folkers K. Basis chemical research on coenzyme Q10 and integrated chemical research on therapy of diseases // Biomed. Clin. Aspects Coenzyme Q. 1985. V. 5. P. 457^178.

187. Folkers K., Kaji M., Baker L., et al. Cardiac outputs of control individuals and cancer patients and evidence of deficiencies of coenzyme Q10 and vitamin B6 // Res. Commun. Chem. Pathol, and Pharmacol. 1980. V. 28, No. 1. P. 145-152.

188. Folkers K., Moesgaard S., Morita M. A one year bioavailability study of coenzyme Q10 with 3 months withdrawal period // Mol. Aspects. Med. 1994. V. 15. P. 281-285.

189. Folkers K., Watanabe T., Kaji M. Critique of coenzyme Q in biochemical and biomedical research and in ten years of clinical research on cardiovascular disease // J. Mol. Med. 1977. V. 2, No. 2. P. 431-460.

190. Fuder H. Selected aspects of presynaptic modulation of noradrenalin release from heart // J. Cardiovascular Pharmacology. 1985. V. 7, Suppl. 5. P. S2-S7.

191. Goodhead Dudly T. Radiation effects in living cells // Can. J. Phys. 1990. V. 68, No. 9. P. 872-882.

192. Guillemin R., Vargo Th., Rossier J., Minick S., Ling N., Rivier C., Vale W., Bloom F. E. (^-Endorphin and adrenocorticotropin are secreted concomitantly by the pituitary gland// Science. 1977. V. 197. P. 1367-1369.

193. Gevod V. S., Birdi K. S. Melittin and the 8-26 fragment. Differences in ionophoric properties as measured by monolayer method // Biophys. J. 1984. V. 4, No. 6. P. 1079-1083.

194. Gong B., Chen Q., Almasan A. Ionizing radiation stimulates mitochondrial gene expression and activity // Radiat. Res. 1998. V. 150, No. 5. P. 505-512.

195. Gonzales G. A. P., Dias B. M. A preliminary study of the action of propolis on the immunological system in mice // XXXIV International Congress of Apiculture — Apimondia, Lausanne, 1995. P. 380-381.

196. Habermann E. Apamin // Pharmacol, and Fher. 1984. Bd. 25, No. 2. P. 255-270.

197. Habermann E. Bee and wasp venoms // Science. 1972. V. 177, No. 4046. P. 314-322.

198. Habermann E., Hardt K. A sensitive and specific plate fest for the guantitation of phospolipases // Anat. Biochem. 1972. V. 50. P. 163-173.

199. Habermehl G. Salamandanine, a minor alkaloid from Salamandra maculoza Laur. // Toxicon. 1969. V. 7. P. 163-170.

200. Habermehl G. Toxicology, pharmacology, chemistry and biochemistry of salamander venom // Venomous Animals and Their Venoms / Eds. W. Buchert, E. Buckley. New York, London: Academ Press, 1971. P. 569-584.

201. Hresser H.-Y., Habermehl G., Sablofski M., Sehmall-Haug P. Antimicrobial activity of alkaloids from amphibian venom and effects on the ultrastructure of yeast cells // Animal., Plant, and Microbiol. Toxins. New York, London, 1976. P. 273-286.

202. Ioshi S. D., Korgaonkar K. S. Effect of groundnut oil on radiation injury in mice // Int. J. Exp. Biol. 1976. V. 14, No. 3. P. 263-267.

203. Isler O., Ruegg R., Chopard-dit-Jean L. H., et al. Syntese und isoliering von vitamin K2 und isoprenologen Verbindungen // Helv. Chim. Acta. 1958. V. 41, No. 3.P. 786-807.

204. Ixart G. A., Cryssogelou H., Szafarczyk A. Acute and delayed effects of Picrotoxin on the adrenocorticotropic system of rats // Neurosci. Letters. 1983. V. 43. P. 235-240.

205. Jackisch R., Fehr R., Hertting G. Adenosine: an endogenous modulator of hippocampal noradrenaline // Neuropharmacology. 1985. V. 24. P. 499-507.

206. Iwadate M., Asakura T., Williamson M. P. The structure of the melittin tetramer at different temperatures on NOE-based calculation with chemical shift refinement // Eur. J. Biochem. 1998. V. 257, No. 2. P. 479-^87.

207. Je J., Park P., Kim S. Free radical scavenging properties of hetero-chitooligosaccharides using an ESR spectroscopy // Food and Chemical Toxicology. 2004. V. 42. P. 381-387.

208. Kaijita S., Iizuka H. Melittin-induced alteration of epidermal adenilate cyclase responses // Acta. Derm. Venereol. 1987. V. 67, No. 4. P. 295-300.

209. Kind L. S., Allaway E. Enhanced IgE and IgG anti-melittin antibody formation induced by heparin-melittin complexes in mice // Allergy. 1982. V. 37, No. 4. P. 225-229.

210. Koppenol W. H., Moreno J. J., Pryor W. A. Peroxynitrite: a cloaked oxidant from superoxide and nitric oxide // Chem. Res. Toxicol. 1992. V. 5. P. 834-842.

211. Lausada L., Anselmo R., Lescano L. Effects of different storage conditions on the preservation of bees honey quality // XXXIV International Congress of Apiculture — Apimondia, Lausanne, 1995. P. 310-314.

212. Leach J. K., Van Tuyle G., Lin P.-S. Ionizing radiation-induced, mitochondria-dependent generation of reactive oxygen/nitrogen // Cancer Res. 2001. V. 61, No. 10. P. 3894-3901.

213. Lewis J. M., Tordoff., Gherman J. E., Liebski J. C. Adrenal-medullary enkephalin-like peptides may mediate opioid stress analgesia // Science. 1982. V. 217, No. 4550. P. 557-559.

214. Lubawy W. С., Dallam R. A., Hurley L. H. Protection against anthramycin-induced toxity in mice by coenzyme Q10 // J. Nat. Cancer Inst. 1980. V. 65, No. l.P. 105-109.

215. Ludwig F. C., Elashoff R. M., Smith I. L., et al. Response of the bone marrow of the vitamin E-deficient rabbit to coenzyme Q and vitamin E // Scand. J. Haematol. 1967. V. 4, No. 4. P. 293-300.

216. Ma A., Zhang W., Liu Z. Effect of protection and repair of injury of mitochondrial membrane-phospholipid on prognosis in patients with dilated cardiomyopathy//Blood. Press. Suppl. 1996. V. 3. P. 53-55.

217. Maijaj A. S., Folkers K. Hematological activity of coenzyme Q in an anemia of human malnutrition // Int. Z. Vitaminforsch. 1968. V. 38, No. 2. P. 182195.

218. Marangos P. J. Biochemical and pharmacologic properties of brain adenosine receptors and uptake sites // Pflug. Arch. 1986. V. 407, Suppl. 1. P. S5-S7.

219. Marnett L. J. Lipid peroxidation — DNA damage by malondialdehyde // Mutat. Res. 1999. V. 424. P. 83-95.

220. Marnett L.J. Oxyradicals and DNA damage // Carcinogenesis. 2000. V. 21, No. 3. P. 361-370.

221. Milos M., Scaer J. J., Comte M., Cox J. A. Microcalorimetric investigation of the interactions in the ternary complex calmodulin-calcium-melittin // J. Biol. Chem. 1987. V. 262, No. 6. P. 2746-2749.

222. Munro T. R. The Relative Radiosensitivity of the nucleus and cytoplasm of Chinese hamster fibroblasts // Radiat. Res. 1970. V. 42, No. 3. P. 451-470.

223. Navaratnam N., Virk S. S., Ward S., Kuhn N. J. Cationic activation of galactosyltranaferase from rat mammary Golgi membranes by polyamines and by basic peptides and proteins // Biochem. J. 1986. V. 239, No. 2. P. 423^433.

224. Nishija T. Mechanistic study on membrane basis by bee venom // Phosph., Sulfur, Silicon and Relat. Elem. 1993. V. 77, No. 14. 12th Int. Conf. Phosp. Chem., Toulouse, 6-10 July 1992. P. 117-120.

225. O'Brian C. A., Ward N. E. ATP-sensitive binding of melittin to the catalitic domain of protein kinase C // Mol. Pharmacol. 1989. V. 36, No. 3. P. 355359.

226. Mortensen S. A. Coenzyme Q10 treatment may be protective during coronary artery bypass operations (letter) // Ann. Thorac. Surg. 1996. P. 12431244.

227. Morton R. A. Ubiquinones, plastoquinones and vitamin K // Biol. Rev. Cambridge Phil. Soc. 1971. V. 46, No. 1. P. 47-96.

228. Nakamura Y., Takahashi M., Hayashi J., et al. Protection of ischemic myocardium with coenzyme Q10 // Cardiov. Res. 1982. V. 16, No. 3. P. 132-137.

229. Nayler W. G. The use of coenzyme Q10 to protect ischemic heart muscle // Biomedical and Clinical Aspects of Coenzyme Q / Eds. Y. Yamamura, K. Folkers, Y. Ito. Amsterdam: Elsevier/North-Holland Biomedical Press, 1980. V. 2. P. 409-^25.

230. Nuquist S. E., Barr R., Morre D. J. Ubiquinone from rat liver Golgi apparatus fractions // Biochem. Biophys. Acta. 1970. V. 208, No. 3. P. 532-534.

231. Oda T. Recovery of the systolic time intervals by coenzyme Q10 in patients with a load-induced cardiac dysfunction // Mol. Aspects Med. 1997. V. 18. P. 153-158.

232. Ohara H., Kanaide H., Nakamura M. A. Protective effect of coenzyme Q-10 on the adriamycin-induced cardiotoxicity in the isolated perfused rat heart // J. Mol. Cell. Cardiol. 1981. V. 13, No. 8. P. 741-753.

233. Okada K., Yamada Sh., Kawashima Y., et al. Cell injury by antineoplastic agents and influence of coenzyme Q10 on cellular potassium activity and potential difference across the membrane in rat liver cells // Cancer Res. 1980. V. 40. P. 1663-1667.

234. Onouchi Z., Singh R. B., Niaz M. A., Thakur A. S., Shinde S. N., Chopra R. K. Effect of coenzyme Q10 on experimental atherosclerosis and chemical composition and quality of atheroma in rabbits // Atherosclerosis. 1999. V. 148. P. 275-282.

235. Ohki S., Marcus E., Sukumaran D. K., Arnold K. Interaction of melittin with lipid membranes // Biochim. Biophys. Acta. 1994. V. 1194. P. 223-232.

236. Park P., Je J., Kim S. Free radical scavenging activities of differently deacetylated chitosans using an ESR spectrometer // Carbohydrate Polymers. 2004. V. 55. P. 17-22.

237. Pelham H. R. B. Speculation on the function of the major heat shock and glucose-regulated proteins // Cell. 1986. V. 46. P. 959-961.

238. Radford I. R. Evidence for a general relationship between the induced level of DNA double — strand breakage and cell killing after x-irradiation of mammalian cells // Int. J. Radiat. Biol. 1986. V. 49, No. 5. P. 611-620.

239. Rastogi S. S., Singh R. B., Shukla P. K. Randomized, double-blind trial of coenzyme Q10 in hypertensives with oxidative stress and coronary artery disease // American Journal of Hypertension. 1998. V. 11-12, No. 4. P. 210.

240. Rao N. M. Differential susceptibility of phosphotidylcholine small unilamellar vesicles to phospholipases A2, C and D in the presence of membrane active peptides // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1992. V. 182, No. 2. P. 682688.

241. Ratty J., Dass R. Effects of flavonoides on nonenzimatic lipid peroxidation: structure-activity relationship // Biochem. Med. Metab. Biol. 1988. V. 39,No. l.P. 69-79.

242. Rozegurt E., Gelehrter T. D., Legg A., Pettican P. Melittin stimulates Na entery, Na-K pump activity and DNA synthesis in quiescent cultures of mouse cells // Cell. 1981. V. 23, No. 3. P. 781-788.

243. Sheil C. A., Hass M. A., Massaro D. In vitro heat shock increases the synthesis of Cn-Zn superoxide dismutase by normal mammalian tissues (Abstract) // Proc. Fed. Amer. Soc. Exp. Biol. 1986. V. 45. P. 317.

244. Spignoli G., Pepen G. Oxiracetam prevents electroshock-induced decrease in brain acetylcholine and amnesia // Eur. J. Pharmacology. 1986. V. 126. P. 253-257.

245. Sinatra S. T., DeMarco J. Free radicals, oxidative stress, oxidized low density lipoprotein (LDL), and the heart: antioxidants and other strategies to limit cardiovascular damage // Conn. Med. 1995. V. 59, No. 10. P. 579-588.

246. Singh R. B., Niaz M. A. Serum concentration of lipoprotein(a) decreases on treatment with hydrosoluble coenzyme Q10 in patients with coronary artery disease: discovery of a new role // Int. J. Cardiol. 1999. V. 68, No. 1. P. 2329.

247. Soja A. M., Mortensen S. A. Treatment of congestive heart failure with coenzyme Q10 illuminated by meta-analyses of clinical trials // Mol. Aspects Med. 1997. V. 159, No. 49. P. 159-168.

248. Spignoli G., Pepen G. Oxiracetam prevents electroshock-induced decrease in brain acetylcholine and amnesia // Eur. J. Pharmacology. 1986. V. 126. P. 253-257.

249. Spisni A., Masotti L., Lenaz G., et al. Interactions between ubiquinones and phospholipid bilayers: a spin-label study // Arch. Biochem. Biophys. 1978. V. 663, No. 3. P. 613-620.

250. Strijks E., Kremer H. P., Horstink M. W. Q10 therapy in patients with idiopathic Parkinson's disease // Mol. Aspects Med. 1997. V. 18. P. 237-240.

251. Sugavara H., Yamamoto T., et al. // J. Biochem. 1990. V. 22. P. 477480. Stark J. A. Trials to standardize the antibacterial activity of propolis // XXXIII International Congress of Apiculture — Apimondia, Beijing, 1993. P. 480-484.

252. Steiner R. F., Norris L. The interacting of melittin with troponin C // Arch. Biochem. Biophys. 1987. V. 254, No. 1. P. 342-352.

253. Taggart D. P., Jenkins M., Hooper J., et al. Effects of short-term supplementation with coenzyme Q10 on myocardial protection during cardiac operations //Ann. Thorac. Surg. 1996. V. 61, No. 3. P. 829-833.

254. Talbot J. C., Lalanne J., Faucon J. F., Dufourcq J. Effect of the state of association of melittin and phospholipids on their reciprocal binding. // Biochim. Biophys. Acta. 1982. V. 689, No. 1. P. 106-112.

255. Taylor T., Dluhy R., Williams G. Beta-endorphin suppressed adrenocorticotropin and Cortisol levels in 9 normal human subjects // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1983. V. 57. P. 592-596.

256. Tertov V. V., Sobenin I. A., Kaplun V. V., Orekhov A. N. Antioxidant content in low density lipoprotein and lipoprotein oxidation in vivo and in vitro // Free Radic. Res. 1998. V. 29, No. 2. P. 165-173.

257. Tomasovic S. P. Functional aspects of the mammalian heat-stress protein response // Life Chemistry Reports. 1989. V. 1. P. 33-63.

258. Tosteson M. T., Holmes S. J., Razin M., Tosteson D. C. Melittin lysis of red cells // J. Membs. Biol. 1985. V. 87, No. 1. P. 35-44.

259. Voss J., Birmachu W., Hussey D. M., Thomas D. D. Effects of melittin on molecular dynamics and Ca-ATPase activity in sarcoplasmic reticulum membranes: time-resolved optical anisotropy // Biochemistry. 1991. V. 30, No. 30. P. 7498-7506.

260. Weidmann H., Moller E., Die Wirkung von bienengift auf den hypophysen nebennieren system der ratte // Arch. Exp. Pathol, und Pharm. 1953. V. 220, No. 6. P. 448-465.

261. Welch W. J., Suhan J. P. Cellular and biochemical events in mammalian cells during and after recovery from physiological stress // T. Cell. Biol. 1986. V. 103. P. 2035-2052.

262. Werking L. L., Brown S. R., Cox B. M. Opioid receptor regulation of the release of norepinephrine in brain // Neuropharmacology. 1987. V. 26. P. 987996.

263. Westermarck T., Aberg L., Santavuori P., et al. Evaluation of the possible role of coenzyme Q10 and vitamin E in juvenile neuronal ceroid-lipofuscinosis (JNCL) // Mol. Aspects Med. 1997. V. 18. P. 259-262.

264. Xing R., Liu S., Guo Z. Relevance of molecular weight of chitosan and its derivatis and their antioxidant activities in vitro // Bioorganic Medicinal Chemistry // 2005. V 13. P. 1573-1577.

265. Yu C. A., Yu L. Ubiquinone-binding proteins // Biochim. Biophys. Acta. 1981. V. 639, No. l.P. 99-128.

266. Zhang C. J., Dong W. C., Zeng J. Y. The detection of high fructose content syrups in honey by means of the high pressure liquid chromatography // XXXIII International Congress of Apiculture — Apimondia, Beijing, 1993. P. 414^-20.257

267. Zhang X., Yu A., Wang S. The analysis of the nutritive content and the clinical investigation of honey for babies // XXXIII International Congress of Apiculture — Apimondia, Beijing, 1993. P. 515-516.