Филогенетический анализ двух форм серебряного карася Carassius auratus gibelio Bloch на основе изменчивости митохондриальной ДНК

Апаликова, Ольга Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Филогенетический анализ двух форм серебряного карася Carassius auratus gibelio Bloch на основе изменчивости митохондриальной ДНК
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Филогенетический анализ двух форм серебряного карася Carassius auratus gibelio Bloch на основе изменчивости митохондриальной ДНК"

Апаликова Ольга Владимировна

На правах рукописи

Филогенетический анализ двух форм серебряного карася Carassius auratus gibelio Bloch на основе изменчивости митохондриальной ДНК

03.00.15 - генетика

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

3 о 0U

— ^г ИТ t\

Владивосток - 2008

003451365

Работа выполнена в Институте биологии моря

им. А.В. Жирмунского Дальневосточного отделения Российской Академии наук

Научный руководитель доктор биологических паук,

старший научный сотрудник Брыков Владимир Алексеевич

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник Фролов Сергей Владимирович

доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник Челомина Галина Николаевна

Ведущая организация Институт проблем экологии и эволюции

имени А.Н. Северцова

Защита состоится 14 ноября 2008 г. в 10 часов на заседании диссертациоиного совета Д.005.008.01 при Институте биологии моря им. A.B. Жирмунского ДВО РАН по адресу: 690041, г. Владивосток, ул. Пальчевского, 17. Телефон: (4232) 310-905, факс: (4232) 310900, e-mail: inmarbio@mail.primorve.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института биологии моря им. A.B. Жирмунского ДВО РАН (690041, г. Владивосток, ул. Пальчевского, 17). Отзывы просим присылать на e-mail: mvaschenko@mail.ru

Автореферат разослан 10 октября 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук О ВащенкоМ.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Одним нз модельных видов для изучения процессов видообразования путем полиплопдизации является серебряный карась Carassius auratus gibelio (Bloch, 1782). В восточных популяциях Евразии (Японские острова, Северный Китай, Дальний Восток России) обнаруживаются бисексуальная диплоидная и гиногеиетическая полиплоидная формы серебряного карася в разных соотношениях. В Сибири, на Урале, в Средней Азии и в европейской части ареала вида встречается главным образом триллоидная форма, которая размножается с участием самцов других карповых рыб (Головинская и др.,1965; Никольский, 1974; Кирпичников, 1987). Это дает основание полагать, что регион Дальнего Востока является местом их происхождения. До сих пор остаются неясными филогенетические отношения форм серебряного карася с различающимися типами репродукции. Их морфологическое сходство (Васильева, Васильев, 2000) свидетельствует либо о недавней дивергенции, либо о постоянно идущем процессе генетического обмена.

Перечисленные проблемы определили необходимость данного исследования, а также его цели и задачи.

Цель н задачи исследования. Целью настоящей работы было сопоставление плоидносги особей в выборках серебряного карася из водоемов Дальнего Востока, Средней Азии и европейской части России с данными по фитогеографии серебряного карася для выяснения механизмов возможного генетического обмена между гиногенетической полиплоидной и бисексуальной диплоидной формами, а также уточнения места их дивергенции.

В работе поставлены следующие задачи:

1. Определить плоидность особей из выборок серебряного карася Carassius auratus gibelio, полученных из водоемов Дальнего Востока, Средней Азии и европейской части России.

2. Определить уровень внутривидовой изменчивости у серебряного карася Carassius auratus gibelio на основании данных полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ) участков мптохондриальной ДНК, кодирующих 3-ю и 4-ю субъединицы надоксидцегидрогеназы и две субъединицы (12S/16S) рибосомальной РНК, амплифицированных в полимеразной цепной реакции (ПЦР).

3. Сопоставить данные по пловдности с данными по внутривидовой изменчивости мтДНК Carassius auratus gibelio.

4. Изучить распределение бисексуальной диплоидной и гиногенетической полиплоидной форм серебряного карася на значительной части его ареала.

Научная новизна работы. Результаты проведенного исследования расширяют представления о механизмах, обеспечивающих морфологическое и генетическое единство клональных и бисексуальных форм в диплоидно-полиплоидных комплексах рыб. Впервые выполнен анализ изменчивости мнтохондриалыюй ДНК двух форм серебряного карася Carassius auratus gibelio из популяций Дальнего Востока, европейской части России и Средней Азии, а также установлена связь между способом репродукции серебряного карася и генетической изменчивостью на основе результатов ПЦР-ПДРФ мтДНК. Впервые приведены молекулярно-генетические доказательства существования генетического обмена между двумя формами серебряного карася и предложена гипотеза о механизме трансформации триплоидной гиногепетпческой формы в диплоидную бисексуальную форму. Доказано, что Дальний Восток является местом дивергенции бисексуальной и гиногенетической форм.

Практическая значимость работы

Результаты работы могут быть использованы при разведении серебряного карася в аквакультуре, для выведения его новых форм. Представленный материал может быть

использован в курсе лекций по теории эволюции для студентов биологических специальностей ВУЗов.

Лпробацпя работы. Основные результаты данной работы представлены на конференции «Современные проблемы биологической эволюции» к 100-леппо Государственного Дарвиновского музея (Москва, 2007), на конференции «Чтения памяти профессора Владимира Яковлевича Леванидова» (Владивосток, 2008), на Международной научно-практической конференции "Генетика, селекция, гибридизация, племенное дело и воспроизводство рыб" (Санкт - Петербург, сентябрь 2008), на ежегодных научных конференциях ИБМ (2005,2008), лабораторных семинарах.

Публикации.

По материалам диссертации опубликованы 5 научных работ, в том числе, 2 статьи - в рецензируемых журналах из списка ВАК.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит го введения, 3 глав, выводов, списка литературы и приложения. Работа изложена на 123 страницах, иллюстрирована 23 рисунками и содержит 24 таблицы, 13 из которых представлены в приложении. Список литературы содержит 159 источников, из них 52 на русском языке. Благодарности. Автор считает своим приятным долгом выразить глубокую признательность своему руководителю Владимиру Алексеевичу Брыкову за внимательное и конструктивное руководство. Автор выражает благодарность группе ученых за помощь в сборе материала для настоящей работы: Вл.А. Брыкову, С.М. Долганову, М.Ю. Ковалеву, Н.Е. Поляковой, C.B. Фролову, Н.Е. Ламаш. За неоценимую помощь в работе и при обсуждении диссертации автор благодарит к.б.н. М.Г. Елпсейкину и д.б.н. C.B. Фролова, а также весь коллектив лаборатории генетики ИБМ ДВО РАН за всемерную помощь и моральную поддержку.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА

Объекты исследования. Carassius auratus gibelio (380 экз.), Carassius carassius (2 экз.) и Cyprinus carpió (3 экз.).

Выделение и амплификация ДНК. Тотальную ДНК выделяли по стандартной методике (Sambrook et al., 1989) из фиксированной этанолом сердечной мышцы. ПЦР-ПДРФ - анализ. Амплифицировали 2 участка мтДНК: ND3/ND4L/ND4, кодирующий 3-ю и 4-ю субьединицы надоксиддегидрогеназы, и 12S/16S рРНК, кодирующий субъединицы рибосомальной РНК. ПЦР-фрагменты обрабатывали рестрикциоными эндонуклеазами Aval, BsuRl, Cfr\31, Bsh\ïiè\, Яш61, HinjI, Msp\, Mval, Rsal («Fermentas», Lithuania и «Сибэнзим», Новосибирск). Продукты рестрикции подвергали электрофорезу в 1.8% агарозном геле в 50мМ трпс-боратном буфере (Sambrook et al., 1989). Фрагменты ДНК в геле окрашивали этидиумбромидом и фотографировали в проходящем ультрафиолетовом свете.

Статистический анализ. Комбинированные гаплотипы каждой особи по исследованным участкам кодировались буквами. Данные по рестрикционным фрагментам преобразовывали в бинарные матрицы. Гаплогипическое (h) и нуклеотидное разнообразие (я), степень дивергенции между гаплотипами (р) определялись с помощью уравнений Ней (Nei, 1987) с использованием пакета программ REAP (McElroy et al., 1992). Полученная в REAP матрица количественных значений дивергенции между гаплотипами использовалась для кластеризации и построения фенограммы с использованием программы UPGMA [пакет программ NTSYS (Rohlf, 1990)]. Гетерогенность между выборками оценивали с помощью псевдовероятностпого теста (Zaykin, Pudovkin,1993). Устойчивость полученных филогенетических деревьев оценивали методом бутстрепа (Felsenstein, 1985), используя 1000 бутстреп-реплик. Реконструкцию сетей гаплотипов (древ минимальной протяженности) проводили по принципу минимального числа пуклеотидных замен между гаплотипами (Prim, 1957; Rohlf, 1973). Величину различий и

вероятные альтернативные связи между ними рассчитывали в пакете программ Arlequin 2.000.

Анализ уровня плоидиостн проводили на основе данных количества ДНК в ядрах эритроцитов (по Фельгену), соотношения площадей ядер эритроцитов у особей с различным уровнем плоидности (Toth et al., 2005) и на основе подсчета максимального количества ядрышек в ядрах эритроцитов на препаратах крови, окрашенных 50% AgNCb (Howell, Black, 1980).

Определение плоидиостн методом сравнения количества ДНК в ядрах эритроцитов.

Цитологические препараты из ткани печени и селезенки получали после щелочной дезагрегации, окрашивали по Фельгену (Пирс, 1962) и фотографировала в одинаковых условиях. Морфометрический анализ ядер эр1Гтроцнтов на препаратах проводили в программе Photoshop. У каждой особи определяли параметры для 40-100 эритроцитов. Расчет плоидности проводился сопоставлением средних значений, полученных по формуле Q = (В-А) / S, где В - интенсивность свечения фона, А - интенсивность свечения; ядра, S - площадь ядра. Для каждой особи строилась гистограмма значений Q в программе Exel. У триплоидных и тетраплоидных особей значения Q были увеличены относительно значений, полученных для диплоидных особей.

Определение площади ядер эритроцитов. Измерения площади ядер проводили на препаратах кровн из хвостовой артерии рыб, фиксированных. 96% этанолом и окрашенных, азокармином G (ООО «Биовитрум», Санкт-Петербург). Препараты анализировали на микроскопе Leica DM2500 при увеличешш хЮО. Морфометрический анализ эритроцитов на снимках препаратов проводили в программе Photoshop. Для определения плоидности каждой особи строился график распределения частот площадей ядер эритроцитов, выраженных в условных единицах (пикселах). Все полученные гистограммы распределяли на три группы по средним значениям площадей. За 1 было принято среднее значение площади ядра эритроцита в группе с наименьшими значениями площади. Подсчет максимального количества ядрышек в ядрах эритроцитов Предварительно фиксированные 96% этанолом препараты крови выдерживали в 2N растворе муравьиной кислоты в течение 1 часа (и более), отмывали их дистиллированной водой и высушивали. Затем на препарат наносили смесь 50% AgNÛ3 и 2% раствора желатина в соотношении 1:2. Инкубацию проводили при 55°С под покровным стеклом в течение 10 мин до появления золотистого цвета в зоне окрашивания препарата. Максимальное количество ядрышек в клеточных ядрах, указывающее на уровень плоидности (Черфас, Ильясова, 1980; Takai, Ojima, 1982, Phillips et al.,1986), анализировалось статистически.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Выясиеипе возможной связи меаду уровнем плоидности и генетической изменчивостью серебряного карася. К началу исследований было известно, что в восточных популяциях Евразии (Японские острова, Северный Китай, Дальний Восток России) обнаруживаются бисексуальная (диплоидная) и гиногенетическая (триплоидная) формы серебряного карася в разных соотношениях. Первый этап данного исследования был посвящен анализу плоидности особей в популяции серебряного карася одной реки ц выяснению возможной связи между изменчивостью мтДНК и плоидностью у особей (фактически - типом размножения) у этого вида. В качестве модельной популяции была использована выборка (33 экз.) серебряного карася Carassitts aurattis gibelio из реки Раздольная. В выборке было обнаружено 14 диплоидных особей (бисексуальная форма), из них 5 самцов и 9 самок. Остальные 19 особей были триплоидными или тетраплоидными. Полученные результаты подтвердили представление о том, что в водоемах Дальнего Востока и в популяции р. Раздольной, в частности, выявляются диплоидная, по-видимому, бисексуальная форма, и триплоидная гиногенетическая форма.

С целью выяснения возможной связи между уровнем плоидности и генетической изменчивостью серебряного карася был проведен ПЦР-ПДРФ анализ мтДНК. В двух амплифицированных фрагментах мтДНК - Ж3/КЕ)4Ь/К04 и 128/168 рРНК- было выявлено 62 сайта рестрикции, из них 9 - полиморфные, на основе которых были составлены 5 комбинированных гаплотипов: А, В, В1, С, Б. Гаплотипическая сеть серебряного карася выявила наличие двух групп гаплотипов (филогрупп), разделенных дистанцией в 12 нуклеотидных замен, в одну из которых входят гаплотипы А, С и О, а во вторую В и В1 (рис.1а). На иРОМА-девдрограмме все выявленные в популяции серебряного карася р. Суйфун гаплотипы также разделяются на две филогенетические группы, обозначенные нами как 1-я и И-я (рис. 16), уровень дивергенции между которыми составляет 2.5% нуклеотидных замен. К 1-ой филогенетической группе относятся особи

А С Э В В1

А .

С 0.0022 -

Ц 0.0132 0.0154 -

В 0.0254 0.0276 0.0156 -

В1 0.0228 0.0249 0.0133 0.0022 -

а)

б)

' ' ' { ......1>

доля нуклеотидных замен (%)

Рис. 1. а) Гаплотипическая сеть минимальной протяженности, демонстрирующая материнские генеалогии мтДНК серебряного карася из популяции р. Раздольной, б) иРОМА-фенограмма, построенная на основании матрицы расстояний между гаплотштами (с). По оси - величина дивергенции нуклеотидных последовательностей между гаплотипами особей. I, II - филогруппы. На фенограмме каждый гаплотип представлен особями, входящими в выборку.

с гаплотипами А, С и Б, к другой (11-й) - особи с гаплотипами В и В1. У особей бисексуальной формы выявляются гаплотипы, относящиеся как к филогруппе I, так и филогруппе II: 3 самца из 5 характеризуются гаплотипами Н-й филогруппы, и 2 -гаплотипом 1-й. Из девяти диплоидных самок для трех характерен гаплотип П-й филогруппы, и для 6 - гаплотип 1-й филогруппы. Тест на гетерогенность по частотам гаплотипов выявил высоко значимые различия при сравнении выборок диплоидных особей и особей с плоидностью Зп-4п (сН^З; х2=12.5; р<0.001).

Наличие у серебряного карася двух филогенетических линий мтДПК предполагает для этого вида этап дивергентной эволюции в прошлом. Исходя из примерной скорости нуклеотидных замен в 2% за 1 млн. лет, можно предположить, что это событие произошло около 1 мли. лет назад в регионе Дальнего Востока. Для пойкилотермиых животных часто предполагается меньшая скорость дивергенции, около 1% (Avise, 2000). В этом случае время дивергенции форм отодвигается, составляя около 2.5 млн. лет назад.

Исходя из уникальных биологических особенностей этого вида, можно было предположить, что обнаруженные в результате ПДРФ - анализа две филогрупиы мтДНК принадлежат двум генетически отличающимся формам - гиногенетической и бисексуальной. Сопоставление данных цитологического анализа по определению плоидпости и данных ПДРФ показало, что, действительно, все триплоидные и тетраплоидные особи (пшогенетические) без исключения характеризуются гаплотипами, относящимися к I -й филогруппе. Этот факт в определенной степени согласуется с предположением о том, что дивергенция филогрупп мтДНК связана с формированием гиногенетической формы из бисексуальной 1,25 - 2,5 млн лет назад. Изменения окружающей среды, и, в частности - температуры, по-видимому, были одним из наиболее вероятных факторов в процессе образования гиногенетической формы. На изменение температуры как на фактор, влияющий на образование полиплоидов, указывают некоторые исследователи (Ruiguang et al., 1986; Rishi et al., 1998; Leggatt, Iwama, 2003). Очевидно, что дальнейшая эволюция гиногенетической и диплоидной форм проходила независимо на протяжении длительного времени, что позволило в результате накопления нуклеотидиых различий сформироваться двум филогенетическим линиям мтДНК.

В то же время у особей диплоидной формы выявляются гаплотипы мтДНК, относящиеся к обеим филогруппам. И, таким образом, наличие между гипогенетическими и бисексуальными особями идентичных и близких гаплотипов мтДНК дает основание предполагать, что между отличающимися формами карася должен происходить генетический обмен. Такой обмен может быть обусловлен различными причинами. Наиболее вероятным представляется механизм трансформации одной формы в другую. На основании наших данных о том, что все без исключения пшогенетические особи несут гаплотипы одной филогруппы, а среди диплоидных особей, как самцов, так и самок, выявляются обе филогруппы мтДНК, можно утверждать, что существует ассиметричныи (однонаправленный) генетический обмен. Поскольку мтДНК передается только по материнской линии, можно предположить возможность трансформации гиногенетических особей в диплоидную бисексуальную форму. Вероятность обратной трансформации (из диплоидной в гиногенетическую форму) маловероятна или полностью исключена, поскольку среди гиногенетических особей мы не обнаруживаем особей со 11-й филогруппой мтДНК. Механизмы трансформации одной формы в другую предложены на рис. 2.

1. Яйцеклетка гиногенетической триплоидной формы может быть оплодотворена сперматозоидом, принадлежащим особям диплоидной формы (рис.2а). С этом случае могут возникать тетраплоиды, если после оплодотворения происходит обычное миготическое деление дробления. Схема приведена на рисунке 2а. Действительно, Такай и Оджима описывали появление тетрадлоидных особей в потомстве триплоидных серебряных карасей Carassiiis auratus langsdorfii (Takai, Ojima, 1983). Наши данные по анализу плоидности, при котором в популяции р. Раздольной (и других водоемов, см. ниже) обнаруживаются особи с плоидностъю большей, чем Зп, подтверждают возможность существования такого мехаиизма. В том случае, если после оплодотворения проходит редукционное деление, и образуются диплоидные зиготы, такие особи могут оказаться фертильными.

2. Редукция числа хромосом может произойти еще на стадии формирования гамет у триплоидных гиногенетических особей. Такое явление описано для гибридов ÇCarassius auratus x¿¡Cyprinus carpió (Liu et al., 2006). Отмечено образование яйцеклеток с уровнем

плоидности 1п, 2п, Зп, которые после оплодотворения могут формировать зиготы с плоидностыо 2п, Зп, и 4п (1ли еI я/., 2006) (рис. 26).

3 родительские гаметы S

Зп 1п

I-оплодотворение-Î

._Л_,

редукционное деление

обычное митошческое деление дробления

б)

Ç родительские гаметы S Зп 2п In In

-о'плодотаореште

4п Зп 2п ПОТОМСТВО

2п

потомство

4п

Рис. 2. Вероятный механизм трансформации триилоидной формы серебряного карася в диплоидную форму, а) Схема экспериментального получения диплоидного и тетраплоидного потомства при скрещивании триплоидной самки серебряного карася с диплоидным самцом, б) Варианты потомства с различной плоидностыо, полученные при скрещивании гибридной самки с диплоидным серебряным карасем (по: Liu et al., 2006).

В любом из представленных вариантов происходит частичное или полное объединение ядерных геномов. Вклад ядерного материала в случае появления таких особей может быть равным, или с преобладанием гиногенетического генома. Наличие такого механизма, даже если это явление происходит в популяциях с невысокой частотой, должно обеспечивать единство геномов и морфологическое сходство гиногепетической и гонохоричесхой форм, что и наблюдается в природных популяциях (Васильева, Васильев, 2000). Кроме того, при любом варианте, вследствие материнского наследования, у образующихся диплоидных особей мтДНК будет только 1-ого, «гиногенетического» типа. Таким образом, наличие у диплоидных особей обеих филогрупп мтДНК может объясняться существованием постулированного механизма в тех популяциях, где присутствуют обе формы.

На существование такого механизма указывают сообщения о периодическом, хотя и редком, появлении диплоидных самцов в гиногенетических популяциях серебряного карася (Головинская и др., 1965; Кирпичников, 1987). Имеются данные, согласно которым в неблагоприятных условиях, когда возрастает диапазон изменчивости, в гиногепетической популяции серебряного карася возникают быстро растущие и тугорослые формы, и среди тугорослых особей появляются самцы (Никольский, 1974). Кроме того, показана принципиальная возможность получения потомства при скрещивании гиногенетических самок с диплоидными самцами (Головинская и др., 1965; Кирпичников, 1987), что теоретически может приводить к образованию диплоидной формы. Экспериментально получено жизнеспособное тетраплоидное потомство при оплодотворении яйцеклеток триплоидной формы (С. auratus langsdorfii) спермой диплоидной формы (С. auratus cuvieri), и приведены доказательства формирования гибридного генома у особей в популяциях Японских островов (Takai, Ojima, 1983). Показана принципиальная возможность получения потомства при скрещивании гиногенетических самок с диплоидными самцами также в европейской популяции серебряного карася (Toth et al., 2005), что может приводить к образованию диплоидной формы. Более того, появились данные, свидетельствующие о возможности проявления в гиногенетических популяциях серебряного карася элементов гонохории при размножении, когда при активации яйцеклеток гомологичной спермой происходит лишь частичная передача отцовских хромосом (или их фрагментов) потомкам (Zhou et al., 2000).

Полученные нами результаты о существовании двух глубоко дивергировавших филогрупп мтДНК свидетельствуют о том, что, во-первых, появление двух форм было однократным актом. Во-вторых, генетический обмен между диплоидной и триплоидной формой существует, но при этом он ассиметричен, причем вклад генома гиногенетических особей в гибридный геном оказывается большим. Генетическим обменом может объясняться высокое морфологическое (и, вероятно, генетическое) сходство двух форм карася с разными типами репродукции. В то же время две образовавшиеся после дивергенции форм филогруппы мтДНК эволюционируют у этого вида независимо, как результат материнского наследования и отсутствия рекомбинации. Как следствие, мы не обнаруживаем Н-й филогруппы мтДНК у особей с гиногенетическим типом размножения. Наши результаты дают основание предполагать, что в континентальных популяциях карася процесс трансформации гиногенетической формы в бисексуальную форму происходит часто, в то время как обратный переход очень редок или не случается вовсе.

Цитометрический анализ и цитоморфологические особенности диплоидных и полиплоидных особей Carassiits auratus gibelio. Результаты кариологических исследований указывают на сложную генетическую природу серебряных карасей. Так, для триплоидной формы серебряного карася отмечены вариации числа хромосом в различных клонах: по литературным данным, число хромосом гриплоидного Carassius auratus gibelio варьирует от 140 до 160 (Васильев, 1985; Fister, Soldatovic, 1989; Fan, Shen, 1990; Boron, 1994).

Цитометрический анализ эритроцитов серебряных карасей с различной плоидностью показал, что соотношение средних значений площади диплоидных, триплоидных и тетраплоидных особей составляет 1 : 1.35 : 1.8, соответственно. В то же время у особей, относящихся ко второй филогруппе, средние значения площади ядра эритроцита несколько меньше, чем у особей, относящихся к первой («гиногенетической») филогруппе. Эти значения, полученные для диплоидных особей, относящихся ко второй филогруппе, диплоидов, относящихся к первой филогруппе, триплоидных и тетраплоидных особей можно представить как соотношение 1 : 1,09 : 1,46 : 1,97, соответственно. Эти результаты не являются статистически значимыми вследствие небольшого числа проанализированных особей, и пока не ясно, какое значение они могут иметь.

Окрашивание препаратов крови азотнокислым серебром выявляет ядерные структуры с высоким содержанием РНК: ядрышковые организаторы, ядрышки (Howell, Black, 1980). На рисунке 3 приведем картины окрашивания азотнокислым серебром клеток карася. Как видно, у диплоидных (рис. За) и триплоидных особей (рис. 36)

flip ' яр; * ;......» шяяияяш

Ш0 * ч ' * * "•*% '

t -*# \

г» вида,ш*

I ф .

, ^¡Mfi Лш :i вШЁШШШШЁвШтая

а) б)

Рис.3. Препарат окрашенных AgNÛ3 эритроцитов диплоидной особи (а) и триплоидной особи (б) серебряного карася. Интенсивно окрашенные области в ядре эритроцита - ядрышки. Стрелками различной формы показаны ядра с одним ( ) ядрышком, двумя ( ), гремя (■■•*■) ядрышками.

имеются значительные отличия. Так, в ядрах эритроцитов диплоидных особей количество ядрышек варьирует от 0 до 2. Соотношение количества ядер, в которых ядрышко не визуализируется, ядер с одним ядрышком и ядер с двумя ядрышками составляет около 10% : 60% : 30%, соответственно.

У некоторых диплоидных особей, относящихся как к первой, так и ко второй филогруппе мтДНК, наблюдается некоторое количество эритроцитов (до 5%), в ядрах которых визуализируются три ядрышка. Иное соотношение количества эритроцитов с различным содержанием ядрышек в ядрах наблюдается у трншоидных и тетраплоидных особей. .У триплодов соотношение клеток с одним, двумя и тремя ядрышками составило приблизительно 30% : 40% : 40%, соответственно, а у тетраплоидных особей это соотношение было смещено в сторону клеток с 3 и более ядрышками и составило около 10% : 30% : 40% : 20%, соответственно Сравнение цитоморфологических особенностей показало, что для диплоидных особей, относящихся ко второй филогруппе, за очень небольшим исключением характерно отсутствие аномалий ядер эритроцитов (сегментированные ядра) при окрашивании азокармином G.

Иная картина наблюдается среди диплоидов и полиплоидов, относящихся к первой филогруппе мтДНК. При окрашивании серебром, у нескольких особей, относящихся к первой филогруппе, отмечалось 3-5% ядер эритроцитов с 3 ядрышками при размерах ядра, соответствующих диплоидам. На препаратах крови этих особей, окрашенных азокармином G, были выявлены аномалии ядер эритроцитов (сегментированные ядра). Чаще всего эритроциты с необычными ядрами и картина «деления» эритроцитов наблюдаются у триплоидных и тетраплоидных особей Carassiits auratus gibelio в исследованных популяциях (pire. 4).

Различные авторы дают свою интерпретацию этих явлений. Так, Бенфи наблюдал аналогичную картину в эритроцитах автотриплоидных лососей, полученных в аквакультуре. Бенфи рассматривает эти отклонения от нормы, как свидетельство полиплоидии (автополиплоидии) (Benfey, 1999).

а) б)

Рис.4. Эритроциты триплоидной особи серебряного карася. (Стрелкой отмечены клетки с сегментированными ядрами)

В работе китайских исследователей, проводивших генетический и цитологический анализ полученных ими в искусственных условиях гибридов серебряного карася (представителя подсемейства Cyprininae) и леща (представителя подсемейства Cultrinae), отмечена прямая зависимость между частотой аномальных эритроцитов и уровнем плоидности гибридов. Авторы рассматривают необычные эритроциты как маркерный признак гибридов (или аллополиплоидов) (Liu et al„ 2007).

По нашим данным, необычные эритроциты с сегментированными ядрами и количеством ядрышек более двух встречаются у серебряного карася не только у полиплоидных особей. Такие особенности встречаются также у диплоидных (по площади ядра) особей, имеющих мтДНК первой филогруппы, в отличие от обитающих вместе с ними (в тех же условиях) диплоидов со второй филогруппой мтДНК.

Эти наблюдения дают основание предположить, что особи серебряного карася, относящиеся к двум разным филогруппам мтДНК, участвуют в процессах гибридизации в разной степени. Необычная картина сегментированных ядер эритроцитов у гиногенетической полиплоидной формы серебряного карася может свидетельствовать также о гибридной природе последней в подтверждение выдвинутой ранее гипотезы о гибридизации, как начальном этапе образования полиплоидного вида (Ruiguang et al., 1986; Dawly, 1989; Schultz, 1989; Vrijenhoek, 1994).

Распространение диплоидной и триплоидной формы и филогеография мтДНК серебряного карася в Евразии. Целью следующего этапа исследования было определение плоидности особей в выборках серебряного карася из водоемов Дальнего Востока, Средней Азии и европейской части России и сопоставление с данными по фитогеографии этого вида на основе анализа мтДНК. Для идентификации филогрупп гаплотипов мтДНК, каждый из амплифицированных участков анализировался ограниченным набором рестрикционных ферментов. Для рестрикции участка ND3/ND4L/ND4 были использованы Mspl, Mval, BsuRl и ßj/DEI, для 12S/16S рРНК -Mspl, Rsa\. Результаты анализа двух фрагментов мтДНК каждой особи по всем сайтам и всем рестрикционным ферментам объединяли, получая, таким образом, комбинированные гаплотипы, каждый из которых обозначался одной буквой от А до I.

В таблице 1 приведены данные анализа уровней плоидности, соотношения полов и вариантов гаплотипов 380 исследованных особей в десяти выборках серебряного карася. В большинстве приморских популяций, в популяции о. Сахалин, р. Волга (Рыбинское водохранилище) и р. Сырдарья соотношение полов смещено в сторону преобладания самок, от более 75% в р. Сырдарья до 90% в оз. Ханка и Рыбинском водохранилище. Доля самцов в выборках из крупных речных систем юга Приморья - выборки р. Раздольная, р. Карасик и р. Лебединка - не превышает 31%. В двух выборках, оз. о-ва Большой Пеляс и р. Камчатка, соотношение полов близко к 1:1 (табл. 1). В выборке р. Амур доля самцов составляет 17%, а в выборке оз. Ханка 10%. В выборках оз. Безымянное, о-ва Сахалин и бассейна р. Сырдарья самцы составляют 26% и 25%, соответственно. Наименьшая доля самцов выявлена в выборке Рыбинского водохранилища (9%).

В соотношении диплоидных и триплоидных особей в исследованных выборках Carassius auratus gibelio отмечаются существенные различия (табл. 1). В выборках из р. Раздольной, бассейна Амура (выборки оз. Ханка и р. Амур) и выборке р. Сырдарья преобладает триплоидная форма, где ее доля составляет 62%, 81% и 75%, соответственно. На Сахалине п на Камчатке серебряный карась представлен исключительно диплоидной формой. В выборке из бассейна р. Волга можно было ожидать преимущественно гиногенетическую (триплоидную) форму карася. Это следовало из полового состава выборки Рыбинского водохранилища с преобладанием самок. Тем не менее, цитофотометрический анализ показал, что количество диплоидных особей в исследованной популяции значительно и составляет около половины всех особей (табл. 1).

Филогеография мтДНК серебряного карася. ПЦР-ПДРФ анализ мтДНК десяти выборок серебряного карася подтвердил наличие двух ранее выявленных филогрупп, 1-й и П-й. Различия между филогрулпами при расчетах в данной работе оказались несколько больше, чем было обнаружено ранее в выборке р. Раздольной, - около 6% нуклеотидных замен (табл. 2, рис. 56). Это обусловлено тем, что в данной работе мы использовали только информативные рестриктазы, которые дифференцируют гаплотипы. Сеть гаплотипов серебряного карася Carassius auratus gibelio также формирует две группы

Соотношение полов, распределение фшгогрупп мтДНК и пловдности в различных популяциях серебряного карася

Выборка число особей соотношение полов(2: в) соотношение филогрупп гаплотипов (1:11) соотношение филогрупп гаплотипов у самок (1:11) соотношение филогрупп гаплотипов у самцов (1:11) соотношение дипловдов и триплоидов соотношение филогрупп гаплотипов у дипловдов соотношение филогрупп гаплотипов у триплоидов

1. р. Раздольная 52 2,3 : 1 3: 1 5: 1 1,3 : 1 0,6: 1 1 :2,4 все I

2. р. Карасик 64 2,2 : 1 2,6: 1 4: 1 0,18: 1 4: 1 все II все I

3. р. Лебединка 29 3,9: 1 0,53 : 1 0,64: 1 1 :5 - -

4. о. Б. Пелис 26 1:1 все II все II все II - - -

5. р. Амур 29 4,8 : 1 все I все I все I 0,23 : 1 все I все I

6. оз. Ханка .20 9:1 все1 все I все I 1 : 3 все I все I

7.оз. Безымянное 50 3:1 0,1 :1 0,1 : 1 все II все 2п 1 :30*

8. р. Камчатка 57 1,3 : 1 все II все II все 11 - все II -

9. р. Сырдарья 20 3:1 все I все I все I 0,25 : 1 все I все I

10. Рыбинское водохранилище 33 10:1 все I все I все I 1,2 : 1 все I все I

Примечание: В р. Карасих соотношение полов оценивалось в неселекгивпой выборке. В о. Большой Пелис и р. Лебединка плоидность не определялась. * Плоидность определена для 31 особи.

гаплотипов, разделенных дистанцией в 10 нуклеотидных замен (рис. 5а). В одну группу входят гаплотипы А, С, О, Е, Р, О, Н, I, а во вторую - гаплотип В. Максимальное расстояние, которое соответствует 10 нуклеотидным заменам, выявлено между гаплотипами В иб (рис. 5а). Гаплотипы, относящиеся к 1-й филогруппе, характеризуются большим разнообразием (табл. 3, рис. 5а, б) по сравнению со Н-й. Гаплотипическая изменчивость в первой филогруппе составила 0.2951±0.0312, нуклеотидная - 0.00231, по сравнению с нулевой изменчивостью во Н-й филогруппе. Не исключено, что эти различия обусловлены разным давлением естественного отбора на варианты мтДНК гиногенетической и бисексуальной форм серебряного карася вследствие различий в типах размножения. Результаты географического распределения групп гаплотипов приведены на рисунках 6 и 7. Доли гаплотипов, относящихся к 1-й и Н-й филогруппам мтДНК,

Таблица 2

Матрица расстояний между гаплотипами А, В, С, Б, Е, И, О, Н, I

А В С Т> Е Р О Н I

0.0582 _

0.0034 0.0615 -

0.0140 0.0500 0.0174 ■

0.0353 0.0603 0.0385 0.0428 -

0.0416 0.0584 0.0447 0.0491 0.0076 -

0.0345 0.0409 0.0378 0.0421 0.0265 0.0257 -

0.0076 0.0697 0.0108 0.0216 0.0178 0.0246 0.0460 -

0.0035 0.0649 0.0068 0.0173 0.0430 0.0489 0.0416 0.0117 -

Рис. 5. а) Гаплотипическая сеть минимальной протяженности, показывающая материнские генеалогии мтДНК серебряного карася Сига«;г« аигаШз ¿¡ЬеИо б) иРОМА-дендрограмма гаплотипов мтДНК серебряного карася. А, С-1 - гаплотипы I филогруппы, В - гаплотип II филогруппы.

Встречаемость гаплотипов мтДНК серебряного карася в исследованных популяциях

г-типы\№ выб. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

А 34(65.3) 28 (43.7) 3 (10.4) 0 29 (100) 18(90) 3 (6.0) 0 16 (80.0) 31(93.9)

В 13(25.0) 25 (39.1) 19 (65.5) 26 (100) 0 0 47 (94.0) 57 (100) 0 0

С 4(7.7) 0 0 0 0 0 0 0 0 0

О 1(2) 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Е 0 11 (17.2) 7(24.1) 0 0 1(5) 0 0 1 (5.0) 0

Б 0 0 0 0 0 0 0 0 2 (10.0) 0

в 0 0 0 0 0 0 0 0 1 (5.0) 0

Н 0 0 0 0 0 1(5) 0 0 0 0

I 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2(6.1)

Кол-во особей 52 64 29 26 29 20 50 57 20 33

В скобках приведены частоты. 1-10 - обозначения номеров выборок, как в таблице 1.

Рис.6. Географическое распределение и частоты филогрупп мтДНК в популяциях Сйгагада аигаШь $1Ье1ю. Белым обозначена первая фияогруппа (I), черным цветом -вторая филогруппа (II). 1-10- обозначения номеров выборок, как в таблице 1.

значительно различаются в исследованных выборках. В выборках из бассейнов рек Раздольной и Тумангана (р. Карасик, р. Лебединка) присутствуют гашготипы, относящиеся к обеим филогруппам, но в разных соотношениях (табл. 1, 3, рис. 6, 7). Так. в выборках из р. Раздольной и р. Карасик преобладают гаплотипы:, относящиеся к филогруппе I, в то же время в выборке из р. Лебединка (приток Тумангана) - гаплотип фгогогруппы II. В выборках из бассейнов Амура, С'ырдарьи и Волги все гаплотипы мтДНК принадлежат к филогруппе I, тогда как в выборках из озера о. Б. Пелис, и р. Камчатка все особи представлены гаплотипом филогруотгы II. В выборке оз. Безымянное (Сахалин) подавляющее большинство особей (47 из 50) характеризуется гаплотипом, относящимся к филогруппе II (табл. 1, 3, рис. 6, 7).

Распределение филогрупп гаплотипов среди самцов и среди самок в выборках также варьирует (табл.1). В р. Амур, оз. Ханка, р. Сырдарья и р. Волга все гаплотипы у обоих полов относятся к филогруппе I. В озере о. Большой Пелис и в р. Камчатка для всех особей характерен гаплотип филогруппы II. В выборке из оз. Безымянное на Сахалине лишь у 3-х самок из 35 обнаружены гаплотипы филогруппы I, остальные имеют гаплотип филогруппы II. Все самцы в этой выборке без исключения характеризуются гаплотипом из филогруппы II (табл. 1). В р. Раздольная доля гаплотипов из филогруппы I увеличена среди самцов и среди самок (табл. 1). В бассейне реки Туманган в одной из выборок (р. Карасик) у самок доминирует один из гаплотипов 1-й филогруппы, в р. Лебединка обратное соотношение гаплотипов 1-й и П-й филогрупп, но в обеих выборках значительно увеличена доля П-й филогруппы гаплотипов среди самцов (табл. 1).

123456789 10

Рис. 7. Распределение филогрупп мтДНК в популяциях серебряного карася. 1-10 -обозначения номеров выборок, как в таблице 1.

Распределение филогрупп гаплотипов среди самцов и среди самок в выборках также варьирует (табл.1). В р. Амур, оз. Ханка, р. Сырдарья и р. Волга все гаплотипы у обоих полов относятся к филогруппе I. В озере о. Большой Пелис и в р. Камчатка для всех особей характерен гаплотип филогруппы II. В выборке из оз. Безымянное на Сахалине лишь у 3-х самок из 35 обнаружены гаплотипы филогруппы I, остальные имеют гаплотип фплогруппы II. Все самцы в этой выборке без исключения характеризуются гаплотипом из филогруппы II (табл.1). В р. Суйфун доля гаплотипов из филогруппы I увеличена среди самцов и среди самок (табл.1). В бассейне реки Туманган в одной из выборок (р. Карасик) у самок доминирует один из гаплотипов 1-й филогруппы, в р. Лебединка обратное соотношение гаплотипов 1-й и Н-й филогрупп, но в обеих выборках значительно увеличена доля П-й филогруппы гаплотипов среди самцов (табл. 1).

Соотношение гаплотипов среди диплоидных особей также различается в разных выборках (табл. 1). В большинстве выборок наблюдается полное преобладание одного из гаплотипов (табл. 1,2). Так, гаплотип только 1-й филогруппы характерен для диплоидных особей в оз. Ханка, реках Амур, Сырдарья и Волга; только П-я филогруппа характерна для диплоидных особей в р. Карасик (бассейн реки Туманган) и серебряных карасей популяции реки Камчатка.

В выборке оз. Безымянного о. Сахалин лишь одна диплоидная особь имеет гаплотип из филогруппы I, остальные относятся ко П-й филогруппе (табл. 1, 3). У двух других особей с таким гаплотипом плоидность не была определена, но, очевидно, они также диплоидные. Все триплоидные особи из всех выборок без исключения характеризовались гаплотипами мтДНК, относящимися к 1-й филогруппе (табл. 1).

Тест на гетерогенность по частотам гаплотипов выявил высоко значимые различия при сравнении всех выборок (&Г.=48; х2=340; р< 0.001). Естественно, что отсутствуют различия между популяциями, где обнаруживается только один вариант гаплотипа, либо присутствует небольшое количество уникальных гаплотипов. Отсутствуют различия между выборками Амур - Ханка - Сырдарья - Рыбинское водохранилище; а также выборками с Камчатки и о. Большой Пелис. Высоко значимые различия обнаруживаются по частотам гаплотипов при сравнении объединенных в группы диплоидных и трнплоидных (полиплоидных) особей (с!.1>6; ^=138; р< 0.001).

Таким образом, в результате исследования плоидности установлено, что не только в большинстве материковых популяций Дальнего Востока, но и в популяциях р.Сырдарья и Рыбинского водохранилища присутствуют две формы серебряного карася, диплоидная

гопохорическая и триплоидная гиногенетнческая (табл. 1). Полученные данные находятся в противоречии с устоявшимися представлениями о том, что в европейской части преимущественно распространена гшюгенетическая форма этого вида (Васильев, 1985; Головинская и др.,1965; Кирпичников, 1987). При этом показано, что доля самцов в популяции не прямо связана с долей диплоидных особей. Так, в Рыбинском водохранилище доля самцов в популяции мала (9%), в то время как доля дцплоидов составляет около половины от всех исследованных особей (табл.1). Полученные результаты указывают на то, что доля диплоидной формы в европейской части России увеличилась. По-видимому, это общее явление, поскольку на увеличение доли бисексуальной фюрмы указывают также и другие исследователи. За последние 20 лет в популяциях европейской части СНГ стало отмечаться устойчивое увеличение доли самцов серебряного карася. При определении плоидности особей из разных частей нижней части р. Дон доля диплоидной формы в 1989-1993 гг. был оценена в 89.7% от общей численности (Лбраменко и др., 1997). Аналогичные изменения полового состава серебряного карася выявлены в низовьях Днепра и Дуная, отмечено появление самцов карася в водоемах бывшей Югославии, хотя ранее считалось, что здесь обитают лишь гиногенетические популяции (Абраменко и др., 1997). Предполагается, и имеются наблюдения, что при резких изменениях окружающей среды при клональном размножении однополые формы из-за отсутствия генетической рекомбинации утрачивают свои преимущества при размножении, и их численность резко падает, при этом увеличивается доля гонохорической формы (Абраменко и др., 1997).

Неясным остается то, каким образом сосуществуют две формы карася, значительно различающихся по способу размножения. Часто предполагается, что они всегда присутствуют в популяциях, и при изменении экологической обстановки происходит смена доминирования форм. Тем не менее, симпатрпческое сосуществование обеих форм и значительное морфологическое сходство (Васильева, Васильев, 2000) указывают на тесную генетическую связь между ними. Полученные данные по сравнению уровней плоидности и распределения филогрупп мтДНК в одной из дальневосточных популяции (р. Раздольной) позволили высказать предположения о механизме появления пшогенетической формы и о возможности генетического обмена между обеими формами.

Здесь необходимо отметить два аспекта. Первый связан с неясностью происхождения пшогенетической формы у этого вида (Murakami, Fujitani, 1997; Murakami et al., 2001; Васильева, Васильев, 2000). Второй определяется неизвестностью механизма поддержшшя высокого морфологического и, по-видимому, генетического сходства между формами. В известных случаях появления триплоидных гнногенетических форм чаще всего обнаруживается аллотетраплоидизация (Darnell, Abramoff, 1968; Guo et al., 2006; Liu et al., 2006; Rasch, Balsano, 1973a, 1973b; Schultz, 1980). В случае с серебряным карасем Васильева и Васильев рассматривают несколько возможных предковых форм при формировании пшогенетической формы, полагая маловероятным участие в этом процессе карпа Cyprinus carpió (Васильева, Васильев, 2000). Тем не менее, такая возможность подтверждается данными китайской группы исследователей (Liu et al., 2006; Guo et al., 2006). Они проводили гибридизацию обычного карася (Carassius auratus red var., 2n=100) с карпом (Cyprinus carpió, 2n=100) и поддерживали фертильных гибридных тетраплоидов (4п=200) на протяжении более чем 14 поколений. При этом скрещивание самцов такой тетраплоидной формы с диплоидной формой карася из Японии (Carassius auratus cuvieri) приводит к появлению жизнеспособной, но стерильной триплоидной формы (Guo et al, 2006). Сходный механизм, возможно, лежал в основе появления триплоидной формы серебряного карася, получившей способность к гиногенетическому размножению. Однако прямых доказательств этому в настоящее время нет. В нашем исследовашш анализ мтДНК всего лишь показал, что дивергенция форм карася произошла 1,25 - 2,5 млн. лет назад.

Анализ плоидности у карася на большой части ареала показал, что обе формы встречаются во всех исследованных материковых популяциях, в том числе в бассейнах р. Сырдарья и Волга. При сопоставлении плоидности у серебряного карася и присутствия той или иной филогруппы мтДНК на большом ареале (водоемы Дальнего Востока, Средней Азии и европейской части России) были выявлены некоторые закономерности. Показано, что в трех крупных речных системах Дальнего Востока (Раздольная, Туманган и Амур) обнаруживаются как диплоидная, так и триплоидная (гиногенетическая) формы карася. Также обе формы выявлены в бассейне р. Сырдарья и Волги. При этом в двух речных системах Приморья, Раздольной и Тумангана, обнаруживаются две филогруппы мтДНК (табл. 1, 3; рис. 6, 7), а в популяциях Амура, Сырдарьи и Рыбинского водохранилища - только одна филогруппа, характерная для патогенетической формы. Отсутствие второй филогруппы мтДНК в западных популяциях, начиная с бассейна Амура (табл. 1, 3, рис. 6, 7) позволяет предположить историю возникновения и распространения форм серебряного карася. На основании присутствия обеих форм, бисексуальной и гшюгенетической, а также наличия двух филогрупп мтДНК, следует предположить, что гиногенетическая форма возникла в дальневосточном регионе, и длительное время существовала в рефупш, в результате чего в мигохондриальной ДНК накопились отличия от мтДНК бисексуальной формы. Таким образом, сформировались линии мтДНК, существенно отличающиеся друг от друга. Впоследствии, относительно недавно, в материковых популяциях произошел вторичный контакт между гшюгенетической и диплоидной формами. Предположительно, местом такой рефугии могли быть Японские острова. Васильевы рассматривают японские подвиды серебряного карася как возможных предков гшюгенетической формы (Васильева, Васильев, 2000). Причины, по которым в европейской и среднеазиатской популяциях серебряного карася вторая филогруппа мтДНК отсутствует, пока остаются не выясненными. При распространении карася на запад эта филогруппа могла исчезнуть в результате случайных причин или под влиянием отбора. Более вероятным нам представляется предположение, что в западном направлении распространялась только гиногенетическая форма, для которой характерна исключительно первая филогруппа мтДНК. Известно, что гиногенетическая форма при экспансии имеет преимущество из-за способа размножения (Абраменко и др., 1997; Васильева, Васильев, 2000; Гребельный, 2005). Тогда возникает закономерный вопрос, каким образом в популяциях гиногенетической формы появляются диплоидные особи? На рисунке 2 приводятся вероятные механизмы образования диплоидной формы из триплоидной. Если такой механизм возможен, то очевидно, что диплоидная форма в этих популяциях появляется в результате трансформации in гиногенетической, триплоидной. Соответственно, в этих популяциях отсутствует вторая филогруппа мтДНК. В пользу возможности такого механизма свидетельствуют некоторые экспериментальные данные (Liu et ai, 2006, Toth et al., 2005), а также данные о появлении гонохорической формы серебряного карася даже в тех популяциях, где ранее фиксировалась исключительно гиногенетическая форма. Полученные нами данные также подтверждают существование такого процесса. Один из механизмов предполагает формирование диплоидной формы из триплоидной через тетраплоидную форму (рис. 2). В этом случае можно было ожидать выявления в популяциях, где встречаются обе формы, также и тетраплоидных особей. Действительно, в них обнаружено относительно большое количество особей, у которых плоидность определяется как 4п (5 из 20 в р. Сырдарья, 4 из 20 в оз. Ханка). Таким образом, этот факт подтверждает сделанное ранее предположение о существовании механизма перехода в природных популяциях триплоидной формы в диплоидную через тетраплоидную (рис. 2).

При сравнении плоидности и мтДНК в северо-восточных популяциях серебряного карася обнаруживаются другая закономерность. В сахалинской и камчатской выборках выявляется только диплоидная форма (табл. 1). При этом в сахалинской выборке для очень немногих особей характерно наличие гаплотипа филогруппы I, а в камчатской все

особи имеют гаплотипы филогруппы II (рис. 6, 7). В популяции о. Большой Пелис не удалось определить плоидность. Тем ле менее, наличие только одной П-ой филогруппы мтДНК и равное соотношение полов с очевидностью указывает, что в этой популящш все особи диплоидные (бисексуальные). Следует отметить, что сахалинская популяция и популяция озера на острове Большой Пелис имеют естественное происхождение. Камчатская же популяция сформировалась в результате искусственной интродукции серебряного карася в различные участки р. Камчатка в 30-е годы прошлого века, н в настоящее время этот вид естественным образом распространяется на север (Бугаев и др., 2007).

Почему и какие факторы определяют то, что при распространении карася в западном направлен™ преобладающая форма была представлена гиногепетическими особями, а в северо-восточном — бисексуальными, определить сложно. Для интродуцированной популяции карася можно предположить, что это определялось полным отсутствием до недавнего времени в камчатских водоемах других пресноводных видов карповых рыб, сперма которых необходима для активации развития яйцеклеток гиногенетическои формы карася. Но в водоемах Сахалина совместно с карасем обитают другие виды карповых. Представляется вероятным, что по каким-то причинам при распространешш на северо-восток более адаптивной оказалась бисексуальная форма серебряного карася.

Сравнительный анализ mi ДНК серебряного карася Carassiiis auratus gibelio, золотого карася Carassiiis carassius и карпа Cyprinus carpió. Установлению бесполого способа размножения часто предшествует процесс гибридизации между видами (Ruiguang et al, 1986; Dawly, 1989; Schultz, 1989; Vrijenhoek, 1994; Гребельный, 2005). Существует предположение, что роды Carassiiis и Cyprinus произошли от единого тетрапловдного предка, и со временем у большинства видов геномы стабилизировались в диплоидном состоянии (Schultz, 1980). Прн этом вопрос о лредковых формах серебряного карася пока остается открытым (Murakami, Fujitani, 1997; Murakami et al., 2001, Васильева, Васильев, 2000). Также остается неизвестным, один вид или два вида участвовали в формировании полиплоидной гшюгенетической формы серебряного карася (Черфас, 1987; Fan, Shen, 1990; Fan, Liu, 1990).

С целью прояснения филогенетических взаимоотношений был проведен сравнительный анализ изменчивости мтДНК обеих форм серебряного карася Carassius auratus gibelio, мтДНК золотого карася Carassius carassius и мтДНК карпа Cyprinus carpió. Анализ мтДНК позволяет совершенно определенно идентифицировать по крайней мере один из видов, участвовавших в гибридизации. Для этого были проанализированы мтДНК трех особей сазана Cyprinus carpió, (р. Амур), двух самок золотого карася Carassius carassius (р. Волга), а также мтДНК особей серебряного карася, представляющих каждый из обнаруженных ранее гаплотипов (А, В, С, Е, F, G, Н, I).

Для более точного определения филогенетических отношений исследуемых рыб методом ПЦР-ПДРФ было увеличено количество использованных рестршшионных эндонуклеаз. Как видно из данных, представленных в таблице 4 и на рисунке 8, варианты мтДНК обеих филогрупп серебряного карася формируют отдельный кластер. МтДНК золотого карася отличается от них примерно 6% нуклеотидных замен (от 5.4% между гаплотипами J и Н, до 6.7% между гаплотипами J и G). Основные гаплотппы (А и В), составляющие две филогруппы мтДНК серебряного карася, равноудалены от мтДНК золотого карася (6% нуклеотидных замен). Расстояние между гаплотипом J мтДНК золотого карася и гаплотипами К, L, М мтДНК карпа варьирует от 6.7% до 6.9% нуклеотидных замен (около 7% нуклеотидных замен). Вторая филогруппа мтДНК, представляющая только бисексуальную форму серебряного карася Carassius auratus gibelio равноудалена от мтДНК золотого карася и карпа - расстояние между ними составляет около 6% нуклеотидных замен (табл. 4).

Матрица расстояний между гашготипами А, В, С, Е, Б, в, Н, I, Д, К, Ь, М

А В С е Р в Н I ; к ь м

0.0284 -

0.0015 0.0299 -

0.0206 0.0293 0.0220 -

0.0198 0.0287 0.0212 0.0032 -

0.0125 0.0313 0.0140 0.0168 0.0161 -

0.0048 0.0350 0.0063 0.0149 0.0181 0.0174 -

0.0030 0.0316 0.0045 0.0206 0.0197 0.0122 0.0080 -

0.0599 0.0596 0.0613 0.0540 0.0569 0.0674 0.0538 0.0632 -

0.0757 0.0586 0.0771 0.0684 0.0716 0.0743 0.0739 0.0740 0.0675 -

0.0773 0.0601 0.0787 0.0699 0.0731 0.0758 0.0755 0.0756 0.0689 0.0015

0.0771 0.0602 0.0786 0.0700 0.0731 0.0757 0.0754 0.0754 0.0691 0.0015

Примечание. Гаплотипы Сагач5ш.ч аигшш #¡ЬеИо: I филогруииа - А, С, Е, Р, О, Н, I; II филогруппа - В; Сагаязпв сага.иш5;.); Сургтия сагрю: К, Ь, М.

Примечательно, что основные гаплотипы (А и В) двух филогрупп мтДНК серебряного карася имеют различия в расстоянии с гаплотипами мтДНК карпа. Так, между гаплотипом А и гаплотипами карпа расстояние варьирует в пределах 7.6-7.7% нуклеотидных замен (около 8%), а расстояние между гаплотипом В и гаплотипами К, Ь, М мтДНК карпа сопоставимо с расстоянием между В и гаплотипом мтДНК золотого карася и составляет 5.9-6% нуклеотидных замен. Из данных, представленных в таблице 4, видно, что вторая филогруппа мтДНК, представляющая только бисексуальную форму серебряного карася Сагаши.ч аигМш &ЬеНо равноудалена от мтДНК золотого карася и карпа. При этом основной гаплотип «гиногенетической» филогрупы мтДНК серебряного карася отстоит от мтДНК карпа значительно (почти на 2%) дальше, чем гаплотип В (табл. 4). Таким образом, этот факт подтверждает, что гаплотип, представляющий вторую фидогруппу мтДНК и распространенный только на Дальнем Востоке, появился раньше, чем гаплотип А, характерный для гиногенетической формы. Из данных также видно, что между золотым и серебряным карасями обнаруживается большее генетическое родство по мтДНК, и они представляют собой по отношению к карпу монофилетическую группу.

J¡2

_2£

100

4ST

JJ22

~i г

i—i—i—i—|—i—i—i—i—r

4 5

дол» нуклеотидных замен (%)

Ч-1—Г

А С I

Рис. 8. UPGMA-дендрограмма гаплотипов мтДНК серебряного карася, золотого карася и карпа.

A, C-I - гаплотипы I филогруппы, В - гаплотип II филогруппы Carassius auratus gibelio, J - гаплотип золотого карася Carassius carassius:. К, L, М - гаплотппы карпа Cyprimis carpió.

Митохондриальные линии обоих видов карасей примерно равноудалены от мтДНК карпа: 6-8% нуклеотидных замен составляет расстояние между гаплотипамп мтДНК серебряного карася и карпа, 7% нуклеотидных замен между мтДНК золотого карася и карпа (табл. 3). Поэтому можно предполагать, что предковая форма золотого и серебряного карасей дивергировала на два вида после отделения от общего предка с карпом. Очевидно также большее генетическое сходство между двумя формами серебряного карася по отношению к золотому и карпу. В то же время полученные данные не дают однозначного ответа на вопрос: могли ли другие виды, золотой карась или карп, участвовать в образовании полиплоидной формы гипогенетической формы серебряного карася. Причина этого лежит в особенности наследования мтДНК только по материнской линии. Остается правомочность допущения, что при гибридизации и образовании гиногепетической формы со стороны серебряного карася в этом процессе могли участвовать только самки. Процесс гибридизации с односторонним переносом мтДНК только от одного вида к гибридной форме известен среди рыб (Hubbs, Hubbs, 1946а). Поэтому для решения этого вопроса необходимо сравнительное исследование ядерных генов, которые приходят к гибридной форме от обоих родителей.

ВЫВОДЫ

1. В популяциях серебряного карася Сагашш аигайя ёЛеНо, представленного симпатрически обитающими формами, различающимися уровнем плоидности и способом размножения (гонохорические диплоидные и гиногенетические триплоидные), выявлены две филогруппы мтДНК, отличающиеся 2,5% нуклеотидной дивергешщи.

2. У триплоидных гиногенетических особей серебряного карася встречается только одна из филогрупп мтДНК (I), в то время как у диплоидных особей встречаются обе филогруппы (I и И). Вторая филогруппа мтДНК (II), отсутствующая у гиногенетических особей, обнаружена только на территории Дальнего Востока. Это свидетельствует о том, что данный регион является местом дивергенции бисексуальной и гиногенетической форм.

3. Симпатрическое существование и морфологическое сходство двух форм серебряного карася предполагает, что между бисексуальной и гиногенетической формой может происходить генетический обмен. Особенности встречаемости филогрупп мтДНК дают основания полагать, что этот процесс является однонаправленным и обусловлен существованием механизма трансформации триплоидной гиногенетической формы в диплоидную бисексуальную форму.

4. Существование в европейской и среднеазиатской популяциях серебряного карася диплоидных и триплоидных особей, но наличие только одной филогруппы мтДНК (I), подтверждает возможность однонаправленной трансформации гиногенетической формы в бисексуальную.

5. В северо-восточных популяциях Дальнего Востока выявляется только диплоидная форма и преимущественно вторая филогруппа мтДНК (II), характерная только для бисексуальной формы. Это также свидетельствует об однонаправленности процесса трансформации гиногенетической формы серебряного карася в бисексуальную.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Брыков Вл.А., Апаликова О.В., Елисейкина М.Г., Ковалев М.Ю. Изменчивость митохондриальной ДНК у диплоидной и трнплоидной форм серебряного карася Carassius auratiis gibelio //Генетика. 2005. T. 41, № 6. С. 811-816.

1. Апаликова O.B. Филогенетический анализ двух форм серебряного карася Carassius auratus gibelio Bloch в дальневосточных водоемах // Материалы конференции «Современные проблемы биологической эволюцию) к 100-летию Государственного Дарвиновского музея. 17-20 сентября 2007, Москва. М.: Изд-во ГДМ, 2007. С. 96-97.

2. Апаликова О.В., Елисейкина М.Г., Ковалев М.Ю., Брыков Вл.А. Сопоставление уровнен плоидносги и филогенетических линий митохондриальной ДНК у серебряного карася из популяций Дальнего Востока и Средней Азии // Генетика. 2008. Т. 44, № 7. С. 1000-1008.

3. Апаликова О.В. Фплогеографня плоидносги и митохондриальной ДНК у серебряного карася Carassius auratus gibelio в популяциях Евразии. Чтения памяти Владимира Яковлевича Леванидова. Вып.4. Владивосток: Дальнаука, 2008. - С. 398-397.

5. Апамкова О.В., Елнсейкина М.Г., Брыков Вл.А. Цитомегрический анализ и цитоморфологцческие особенности диплоидных и полиплоидных особей в смешанных природных популяциях серебряного карася Carassius auratus gibelio Bloch// Материалы международной конференции «Генетика, селекция, гибридизация, племенное дело и воспроизводство рыб». 10-12 сентября 2008, Санкт-Петербург: Изд-во ГосНИОРХ, 2008. С. 30-31.

Ольга Владимировна Апаликова

03.00.15 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Подписано в печать 07.10.2008 г. Формат 60x90/16. 1 уч.-изд. л. Тираж 100 экз. Заказ № 103. Отпечатано в типографии издательского центра ФГУП «ТИНРО-Центр» г. Владивосток, ул. Западная, 10

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Апаликова, Ольга Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Сведения о систематике серебряного карася Carassius auratus gibelio.

1.2. Биология и ареал распространения серебряного карася.

1.3. Проблема таксономического статуса серебряного карася.

1.4. Полиплоидия как фактор видообразования.

1.4.1. Общие сведения о полиплоидии.

1.4.2. Полиплоидия у рыб.

1.4.3. Образование полиплоидного вида у рыб.

1.4.4. Проблема определения полиплоидного статуса вида рыб.

1.5. Проблема происхождения триплоидной формы серебряного карася.

1.6. Кариологические исследования серебряного карася.

1.7. Цитологические особенности гиногенеза у серебряного карася.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Сбор материала.

2.2. Выделение ДНК.

2.3. Амплификация ДНК.

2.4. Электрофоретический анализ фрагментов рестрикции амплифицированных участков мтДНК.

2.5. Анализ полиморфизма длины фрагментов рестрикции.

2.6. Анализ уровня плоидности особей серебряного карася.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Выяснение возможной связи между уровнем плоидности и генетической изменчивостью серебряного карася.

3.1.1. Определение плоидности особей серебряного карася Carassius auratus gibelio в приморской популяции.

3.1.2. Анализ митохондриальной ДНК серебряного карася Carassius auratus gibelio в приморской популяции.

3.2. Цитометрический анализ и цитоморфологические особенности диплоидных и полиплоидных особей Carassius auratus gibelio.

3.3. Распространение диплоидной и триплоидной формы и филогеография мтДНК серебряного карася в Евразии.

3.3.1. Половой состав популяций серебряного карася.

3.3.2. Состав популяций серебряного карася по уровню плоидности.

3.3.3. Филогеография мтДНК серебряного карася.

3.4. Сравнительный анализ мтДНК серебряного карася Carassius auratus gibelio, золотого карася Carassius carassius и карпа Cyprinus carpio.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Филогенетический анализ двух форм серебряного карася Carassius auratus gibelio Bloch на основе изменчивости митохондриальной ДНК"

После создания синтетической теории эволюции (СТЭ) в биологии сформировалась общепринятая точка зрения, что наиболее вероятным механизмом видообразования является аллопатрический, при котором появление географических барьеров для потока генов между эволюционно значимыми единицами - популяциями - приводит к накоплению генетических различий между ними, и, в конечном итоге, к формированию новых видов (Майр, 1968). Однако в последние годы накапливается все больше теоретических и экспериментальных данных, свидетельствующих о возможном существовании других «механизмов образования новых видов, включая симпатрическое, видообразование путем гибридизации (Dawley,1989), аллополиплоидии или автотетраплоидизации (Оно, 1973).

Одним из первых, кто обратил внимание на значимость полиплоидизации для эволюции видов, был С. Оно (Оно, 1973). Он полагал, что одних только изменений частот аллельных вариантов генов недостаточно для эволюции, и тем более - для появления новых признаков и функций у организма. Для появления новых функций и признаков необходимо появление новых генов, однако новые гены могут возникнуть только на основе уже существующих. Эта дилемма может быть преодолена в том случае, если происходят дупликации генов. При этом один из генов может сохранять свою функцию, в то время как дуплицированная копия гена, выйдя из-под действия естественного отбора, может в результате накопления мутаций приобрести новую функцию (Оно, 1973). Дупликации (амплификации) могут происходить на ограниченном участке генома, в пределах одной хромосомы как следствие неравного кроссинговера, но возможен путь полной дупликации генома - аллополиплоидизации, при котором происходит кратное увеличение всего генома (Оно, 1973). В последние десятилетия обнаружено, что действительно, как частичная дупликация генома, так и полиплоидизация, часто сопровождают эволюцию групп видов (Гребельный, 2005).

Процесс полиплоидизации в большинстве случаев сопровождается формированием этапа бесполого размножения. При переходе к бесполому размножению утрачивается способность к рекомбинации, что позволяет удерживать и сохранять в поколениях сложившиеся удачные сочетания признаков и, таким образом, успешно конкурировать с диплоидными бисексуальными особями благодаря своему консерватизму, малой подвижности генотипического состава популяций.

Актуальность проблемы. Одним из модельных видов для изучения процессов видообразования путем полиплоидизации является серебряный карась Carassius auratus gibelio (Bloch, 1782). В восточных популяциях Евразии (Японские острова, Северный Китай, Дальний Восток России) обнаруживаются бисексуальная диплоидная и гиногенетическая полиплоидная формы серебряного карася в разных соотношениях. В Сибири, на Урале, в Средней Азии и в европейской части ареала вида встречается главным образом триплоидная форма, которая размножается с участием самцов сазана, плотвы, золотого карася и других карповых рыб (Головинская и др., 1965; Никольский, 1974; Кирпичников, 1987). Это дает основание предположить, что регион Дальнего Востока является местом их происхождения. До сих пор остаются неясными филогенетические отношения форм серебряного карася с различающимися типами репродукции. Их морфологическое сходство (Васильева, Васильев, 2000) свидетельствует либо о недавней дивергенции, либо о постоянно идущем процессе генетического обмена.

Перечисленные проблемы определили необходимость данного исследования, а также его цели и задачи.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы было сопоставление плоидности особей в выборках серебряного карася из водоемов Дальнего Востока, Средней Азии и европейской части России с данными по филогеографии серебряного карася для выяснения механизмов возможного генетического обмена между гиногенетической полиплоидной и бисексуальной диплоидной формами, а также уточнения места их дивергенции.

В работе поставлены следующие задачи:

2. Определить уровень внутривидовой изменчивости у серебряного карася Carassius auratus gibelio на основании данных полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ГТДРФ) участков митохондриальной Д1Ж, кодирующих 3-ю и 4-ю субъединицы надоксиддегидрогеназы и две субъединицы (12S/16S) рибосомальной РНК, амплифицированных в полимеразной цепной реакции (ПЦР).

3. Сопоставить данные по плоидности с данными по внутривидовой изменчивости мтДНК Carassius auratus gibelio.

Научная новизна работы. Результаты проведенного исследования расширяют представления о механизмах, обеспечивающих морфологическое и генетическое единство клональных и бисексуальных форм в диплоидно-полиплоидных комплексах рыб. Впервые выполнен анализ изменчивости митохондриальной ДНК двух форм серебряного карася Carassius auratus gibelio из популяций Дальнего Востока, европейской части России и Средней Азии, а также установлена связь между способом репродукции серебряного карася и генетической изменчивостью на основе данных анализа полиморфизма длины рестрикционных фрагментов амплифицированных участков митохондриального генома. Впервые приведены молекулярно-генетические доказательства существования генетического обмена между двумя формами серебряного карася и предложена гипотеза о механизме трансформации триплоидной гиногенетической формы в диплоидную бисексуальную форму. Доказано, что Дальний Восток является местом дивергенции бисексуальной и гиногенетической форм.

Практическая значимость работы

Результаты работы могут быть использованы при разведении серебряного карася в аквакультуре, для выведения его новых клональных форм. Представленный материал может быть использован в курсе лекций по теории эволюции для студентов биологических специальностей ВУЗов.

Апробация работы. Основные результаты данной работы представлены на конференции «Современные проблемы биологической эволюции» к 100-летию Государственного Дарвиновского музея (Москва, 2007), конференции «Чтения памяти профессора Владимира Яковлевича Леванидова» (Владивосток, 2008), международной конференции "Генетика, селекция, гибридизация, племенное дело и воспроизводство рыб" (Санкт-Петербург, сентябрь 2008), на ежегодных научных конференциях ИБМ (2005, 2008), лабораторных семинарах. Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ, в том числе, 2 статьи - в рецензируемых журналах из списка ВАК.

1. Брыков Вл.А., Апаликова О.В., Елисейкина М.Г., Ковалев М.Ю. Изменчивость митохондриальной ДНК у диплоидной и триплоидной форм серебряного карася Carassius auratus gibelio // Генетика. 2005. Т.41, №6. С. 811-816.

2. Апаликова О.В. Филогенетический анализ двух форм серебряного карася Carassius auratus gibelio В loch в дальневосточных водоемах // Материалы конференции «Современные проблемы биологической эволюции» к 100-летию Государственного Дарвиновского музея. 17-20 сентября 2007, Москва. М.: Изд-во ГДМ, 2007. - С. 96-97.

3. Апаликова О.В., Елисейкина М.Г., Ковалев М.Ю., Брыков Вл.А. Сопоставление уровней плоидности и филогенетических линий митохондриальной ДНК у серебряного карася из популяций Дальнего Востока и Средней Азии // Генетика. 2008. Т.44, №7. - С. 1000-1008.

4. Апаликова О.В. Филогеография плоидности и митохондриальной ДНК у серебряного карася Carassius auratus gibelio в популяциях Евразии. Чтения памяти Владимира Яковлевича Леванидова. Вып.4. Владивосток: Дальнаука, 2008. - С. 398-397.

5. Апаликова О.В., Елисейкина М.Г., Брыков Вл.А. Цитометрический анализ и цитоморфологические особенности диплоидных и полиплоидных особей в смешанных природных популяциях серебряного карася Carassius auratus gibelio Bloch // Международная конференция "Генетика, селекция, гибридизация, племенное дело и воспроизводство рыб", посвященная 100-летию со дня рождения выдающегося генетика и селекционера Валентина Сергеевича Кирпичникова. Тезисы докладов. 10-12 сентября 2008. Санкт-Петербург, 2008. - С. 30-31.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, 3 глав, выводов, списка литературы и приложения. Работа изложена на 123 страницах, иллюстрирована 23 рисунками и содержит 24 таблицы, 13 из которых

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Апаликова, Ольга Владимировна

ВЫВОДЫ

1. В популяциях серебряного карася Carassius auratus gibelio, представленного симпатрически обитающими формами, различающимися уровнем плоидности и способом размножения (гонохорические диплоидные и гиногенетические триплоидные), выявлены две филогруппы мтДНК, отличающиеся 2,5% нуклеотидной дивергенции.

2. У триплоидных гиногенетических особей серебряного карася встречается только одна из филогрупп мтДНК (I), в то время как у диплоидных особей - обе филогруппы (I и II). Вторая филогруппа мтДНК (II), отсутствующая у гиногенетических особей, обнаружена только на территории Дальнего Востока. Это свидетельствует о том, что данный регион является местом дивергенции бисексуальной и гиногенетической форм.

5. В северо-восточных популяциях Дальнего Востока выявляется только диплоидная форма и преимущественно вторая филогруппа мтДНК (II), характерная только для гонохорической формы. Этот факт также свидетельствует об однонаправленности трансформации гиногенетической формы серебряного карася в бисексуальную.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Апаликова, Ольга Владимировна, Владивосток

1. Атлас пресноводных рыб России / под ред. Ю.С. Решетникова. М.: Наука, 2002. Т 2.-378 с.

2. Абраменко М.И., Кравченко О.В., Великоиваненко А.Е. Генетическая структура популяций в диплоидно-триплоидном комплексе серебряного карася Carassius auratus gibelio в бассейне нижнего Дона // Вопр. ихтиологии. 1997 . Т. 37. № 1.-С. 62-71.

3. Берг Л.С. Рыбы пресных вод Российской империи. М.: Изд-во департамента земледелия, 1916.-563 с.

4. Берг Л.С. Об однополом размножении у карасей / Л.С. Берг Вестник ЛГУ, 1947, вып. 7. - С. 55-59.

5. Берг Л.С. Рыбы пресноводных вод СССР и сопредельных стран / Л.С. Берг. -М., Л.: Изд-во АН СССР, 1949. Т. 3.- С. 930-1381.

6. Боруцкий. Материалы о питании карася (Carassius auratus gibelio Bloch) в бассейне Амура // Труды Амурской ихтиологической экспедиции 1945-1949 гг., 1950. Т. I.-C. 331-344.

7. Бугаев В.Ф., Вронский Б.Б., Заварина Л.О., Зорбиди Ж.Х., Остроумов А.Г., Тиллер И.В. Рыбы реки Камчатка. Под редакцией д.б.н. В.Ф. Бугаева. Петропавловск-Камчатский: Издательство КамчатНИРО, 2007. 459с.

8. Васильев В.П., Васильева Е.Д. 1982. Новый диплоидно-полиплоидный комплекс у рыб // Докл. АН СССР. 1982. Т. 266, № 1. - С. 250-252.

9. Васильев В.П. Эволюционная кариология рыб. М.: Наука, 1985. 300 с.

10. Васильева Е.Д., Васильев В.П. Виды-двойники в роде Cobitis (Cobitidae). I.Южнорусская щиповка Cobitis rossomeridionalis sp. nova II Вопр. ихтиологии. -1998. Т. 38,№5.-С. 604-614.

11. Васильева Е.Д., Васильев В.П. К проблеме происхождения и таксономического статуса триплоидной формы серебряного карася Carassius auratus (Cyprinidae) // Вопр. ихтиол. 2000. Т. 40. - С. 581-592.

12. Головинская К.А., Ромашов Д.Д., Черфас Н.Б. Однополые и двуполые формы серебряного карася (Carassius auratus gibelio Bl.) II Вопр. ихтиол. — 1965. Т. 5, №4.-С. 614-629.

13. Головинская К.А., Ромашов Д.М. (при участии В.А. Мусселиус). 1947. Исследование по гиногенезу у серебряного карася // Тр. Всес. НИИ пруд. рыб. хоз-ва. 1947. Т. 4.-С. 73-113.

14. Дыбовский Б. Рыбы системы вод Амура // Изв. Сиб. отд. Рус. геогр. об-ва. -1877. Т. 8,№ 1-2.-С. 1-29.

15. Емельянова О.В., Черфас Н.Б. Результаты цитологического анализа неоплод отворенной икры самок карасекарпов, полученных при скрещивании серебряный карась* карп. В кн. Генетика и селекция рыб. М., 1980. - С.106-116.

16. Жолудев Л.И. Годовой отчет о работе Усть-Камчатского контрольно-наблюдательного пункта по воспроизводству лососевых рыб. Усть-Камчатск. Петропавловск-Камчатский: Камчатрыбвод. - 1994. - 60с.

17. Жолудев Л.И. Годовой отчет о работе Усть-Камчатского контрольно-наблюдательного пункта по воспроизводству лососевых рыб. Усть-Камчатск. Петропавловск-Камчатский: Камчатрыбвод. - 1998. -77с.

18. Жолудев Л.И. Отчет по сырьевой базе водоемов, подконтрольных Усть-Камчатской КНС, за 2000г. Усть-Камчатск. Петропавловск-Камчатский: Камчатрыбвод. - 2001. - 65с.

19. Жолудев Л.И. Отчет по сырьевой базе водоемов, подконтрольных Усть-Камчатской КНС, за 2001г. Усть-Камчатск. Петропавловск-Камчатский: Севвострыбвод. - 2002. - 90с.

20. Кирпичников B.C. Генетика и селекция рыб. Л.: Наука. - 1987 - 520 с.

21. Козлов В.И. Влияние изъятия воды на орошение и акклиматизационные мероприятия на ихтиофауну устьевых районов рек // Экологическое прогнозирование. М.: Наука. 1979. - С. 94-112.

22. Кесслер К.Ф. Об ихтиологической фауне р. Волги / К.Ф. Кесслер // Тр. СПб об-ва естествоиспытателей. СПб. - 1870. - Т. 1, Вып. 1-2. - С. 236-310.

23. Кесслер К.Ф. Труды Арало Каспийской экспедиции - С-Пб. - 1877. Вып.4. -С. 153-154.

24. Куренков И.И. Результаты акклиматизации карася в водоемах Камчатки // Тр. совещ. по проблеме акклиматизации рыб и водных беспозвоночных. Л.:АН СССР. 1954.-С.130-134.

25. Куренков И.И., Моисеев П.А. Опыт акклиматизации карповых рыб в лососевых водоемах (Камчатка) // Симпозиум по реакции водных экосистем на вселение новых видов (Таллин, 24-28 октября 1977 г.). М.: ВНИРО. 1977. С.66-67.

26. Куренков И.И. Рыбохозяйственная бонитировка озер нижнего течения р. Камчатки. Часть 2. Петропавловск-Камчатский. Архив КамчатНИРО. -1978а. 78с.

27. Моисеев П.А., Азизова Н.А., Куранова И.И. Ихтиология. М.: Пищевая пром-сть.- 1981.-384с.

28. Майр Э. Зоологический вид и эволюция. М.: Мир. 1968.

29. Никольский Г.В. Рыбы Аральского моря. Гибрид между сазаном и серебряным карасем // Материалы к познанию фауны и флоры СССР, издаваемые Моск. о-вом испыт. природы. Новая серия. Зоол. 1940. Вып. I (XIV). - С. 154.

30. Никольский Г.В. Рыбы бассейна Амура. М.: Изд-во АН СССР. 1956. - 551с. Никольский Г.В. Теория динамики стада рыб. М.: «Пищевая промышленность». - 1974. - 447 с.

31. Оно С. Генетические механизмы прогрессивной эволюции. М.: «Мир». -1973.-227с.

32. Пирс. Э. Гистохимия. М.: Издательство иностранной литературы. 1962.962 с.

33. Плетнев С.П., Суханов В.В. Динамика сообщества планктонных фораминифер в Японском море за последние два миллиона лет // Океанология. -2006. Т. 46, № 5. С. 695-702.

34. Решетников Ю.С. Список рыбообразных и рыб пресных вод России / Ю.С. Решетников, Н.Г. Богуцкая, Е.Д. Васильева и др. // Вопр. ихтиологии, 1997. Т. 37. -N6.-С. 727-771.

35. Сабанеев Л.П. Рыбы России. Жизнь и ловля, уженье наших пресноводных рыб / Л.П. Сабанеев Изд. 2-е, перераб. М. - 1892. - Т. 2. - 575 с.

36. Суворов Е.К. Основы ихтиологии. Л.: Сов.наука. 1948. - 580 с.

37. Суховерхов Ф.М. Биологические особенности размножения и развития серебряного карася // Агробиология. 1950. № 4. - С. 87-93.

38. Усынин В.Ф. Плодовитость и особенности размножения рыб бассейна р. Чулым // Исследования планктона, бентоса и рыб Сибири. Томск: Изд. Томск, унта.-1981.-С. 109-119.

39. Харитонова Н.Н. О формах серебряного карася // Вопр. ихтиологии. 1963. Т. 3., Вып. 2.-С. 401-405.

40. Черфас Н.Б. Гиногенез у рыб. Гл. 7 // В кн.: B.C. Кирпичников. Генетика и селекция рыб. Л.: Наука. 1987. - С. 309-335.

41. Черфас Н.Б., Гомельский Б.И., Емельянова О.В., Рекурбатский А.В. Триплоидия у возвратных гибридов серебряного карася с карпом // Генетика. -1981. Т.17, №6. - С. 1136-1139.

42. Черфас Н.Б., Ильясова В.А. Индуцированный гиногенез у гибридов серебряного карася и карпа // Генетика. 1980. - Т.16, №7. - С. 1260-1269.

43. Чуриков Д.Ю. Генеалогия гаплотипов митохондриальной ДНК у нескольких видов тихоокеанских лососей. Автореф. дис. . канд. биол. наук. Санкт-Петербург, 2001.- 17с.

44. Щетинина J1.A. О размножении серебряного карася в Веселовском водохранилище // Зоол. Ж. 1956. Т. 35. Вып. 10. - С. 1517-1521.

45. Юракова Т.В. Половые циклы и нерест золотого (Carassius carassius (L.)) и серебряного (Carassius auratus gibelio Bloch) карасей в водоемах Томского Приобья // Исследования планктона, бентоса и рыб Сибири. Томск: Изд. Томск, ун-та. -1981.-С. 106-108.

46. Abramoff P., Darnell R.M., Balsano J.S. Electrophoretic demonstration of the hybrid of the gyno genetic teleost Poecilia formosa II Amer. Natur. 1968. - Vol. 12. - P. 555-558.

47. Adams K.L., Wendel J.F. Polyploidy and genome evolution in plants // Curr. Opin. Plant Biol. 2005.-Vol. 8.-P. 135-141.

48. Allendorf F.W., Thorgaard G.H. Tetraploidy and the evolution of salmonid fishes. In: Turner, B.J. (ed.). Evolutionary Genetics of Fishes. Plenum Press, New York. 1984. -P. 1-53.

49. Attardi G. Animal Mitochondrial DNA: an Extreme Example of Genetic Economy // Int. Rev. Cytol. 1985. - Vol. 93. - P. 93-145.

50. Avise, J.C. Phylogeography. The history and formation of species. Harvard Univ. Press, Cambridge, MA, London, England. 2000. - 447p.

51. Balsano J.S. Systematic relations of fishes of the genus Poecilia in eastern Mexico based upon plasma protein electrophoresis // Ph. D. Marq. Univ. Diss. Abst. -1969. -Vol. 29.-P. 3533-B.

52. Balsano J.S., Darnell R.M., Abramoff P. Electrophoretic evidence of triploidy associated with with populations of the gynogenetic teleost Poecilia formosa. И Copeia. -1972.-P. 292-297.

53. Benfey T.J. A bibliography of triploid fish, 1943 to 1988 // Can. Tech. Rep. Fish. Aquat. Sci. 1989. №. 1682. - 33 pp.

54. Benfey T.J. The physiology and behavior of triploid fishes // Rev. Fish. Sci. -1999.-Vol. 7.-P. 36-67.

55. Berrebi P. Speciation of the genus Barbus in the North Mediterranean basin: Recent advances from biochemical genetics // Biol.Conserv. -1995. Vol. 72. - P. 237249.

56. Birky C.W. The Inheritance of Genes in Mitochondria and Chloroplasts: Laws, Mechanisms, and Models //Annu. Rev. Genet. -2001. Vol. 35. - P. 125-148.

57. Birstein V.J., DeSalle R. Molecular phylogeny of Acipenserinae // Mol. Phylogenet. Evol. 1998. - Vol. 9. - P. 141-155.

58. Birstein V.J., Hanner R., DeSalle R. Phylogeny of the Acipenseriformes: Cytogenetic and molecular approaches // Environ. Biol. Fishes. 1997. - Vol. 48. - P. 127-155.

59. Boron A. Karyotypes of diploid and triploid silver crucian carp Carassius auratus gibelio (Bloch) // Cytobios. 1994. - Vol. 80. - P. 117-124.

60. Brown W.M., George M. Jr., Wilson A.C. Rapid Evolution of Animal Mitochondrial DNA // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America.-1979.- Vol. 76.-P. 1967-1971.

61. Bulger A.J., Schultz R.J. Heterosis and interclonal variation in the thermal tolerance in unisexual fishes // Evolution. 1979. - V. 33. - P. 848-859.

62. Chiarelli В., Ferrantelli O., and Cucchi C. The karyotype of some teleostean fish obtained by tissue culture "in vitro" // Experientia. 1969. - Vol. 25. - P. 426—427.

63. Comai L. The advantages and disadvantages of being polyploid // Nature Reviews. Genetics. 2005. - Vol. 6. - P. 836-846.

64. Comai L. Phenotypic instability and rapid gene silencing in newly formed Arabidopsis allotetraploids // Plant Cell. 2000. - Vol. 12. - P. 1551-1568.

65. Cuellar O. Animal parthenogenesis // Science. 1977. - V. 197. - P. 837-843.

66. Darnell R.M., Abramoff P. Distribution of the gynogenetic fish Poecilia formosa, with remarks on the evolution of the species // Copeia. 1968. - P. 354-361.

67. Darnell R.M., Lamb E., Abramoff P. Matroclinous inheritance and clonal structure of a Mexican population of gynogenetic fish Poecilia formosa II Evolution. 1967. -Vol. 21.-P. 168-173.

68. Dawly R.M. An introduction to unisexual vertebrates. In: R.M. Dawly and J.P. Bogart. Evolution and ecology of unisexual vertebrates // Bulletin, New York State Museum, Albany, New York. 1989. - № 466. - P. 1-18.

69. Ding J, Jiang YG Comparative cytological studies on the oocyte maturation in gynogenetic crucian carp and amphimictic red carp //Acta Hydrobiol Sinica. 1991. -Vol.15.-P. 97-102

70. Donaldson E.M., Devlin R.H. Uses of biotechnology to enhance production. In: Pennell, W. and Barton, B.A. Principles of Salmonid Culture // Dev. Aquae. Fish. Sci. -1996. -№. 29. P. 969-1020.

71. Fan Z., Liu G. The ploidy and reproductive mechanism of crucian carp, Carassius auratus gibelio II J. Fish. Biol. 1990. -V. 36. - P. 415-419.

72. Fan Z., Shen J. Studies on the evolution of bisexual reproduction in crucian carp (iCarassius auratus gibelio Bloch) // Aquaculture. 1990. - V. 84. - P. 235-244.

73. Felsenstein J. Confidence Limits on Phylogenies: an Approach Using the Bootstrap //Evolution. 1985. - Vol. 39. - P. 783-791.

74. Ferris S.D. Whitt G.S. Evolution of the differential regulation of duplicate genes after polyploidization // J. Mol. Evol. 1979. - Vol. 12. - P. 267-317.

75. Fister S., Karyotype analysis of a Carassius auratus gibelio Bloch (Pisces, Cyprinidae) male caught in Tamis River // Acta vet. 1989. - V. 39. - P.99-108.

76. Fister S., Soldatovic B. Karyotype analysis of a gynogenetic population of Carassius auratus gibelio Bloch (Cyprinidae) from Pancevacki Rit // Acta vet. 1989. -V. 39, №5-6.-P. 259-268.

77. Gharrett A.J., Gray A.K., Brykov V.A. Mitochondrial DNA Variation in Alaskan Coho Salmon, Oncorhynchus kisutch // Fish. Bull. 2001. - V. 99. - P. 528-544.

78. Golubtsov A.S., Krysanov E.Y. Karyological study of some cyprinid species from Ethiopia. The ploidy differences between large and small Barbus of Africa // J. Fish Biol. 1993.-Vol.42.-P.445-455.

79. Gui JF, Liang SC, Zhu LF, Jiang YG. Discovery of multiple tetraploids in artificially propagated populations of allogynogenetic silver crucian carp and their breeding potentialities // Chin Sci Bull. 1993 a. - Vol. 38(1). - P.327-331.

80. Gui JF, Liang SC, Zhu LF, Jiang YG. Discovery of two different reproductive development modes of the eggs of artificial multiple tetraploid allogynogenetic silver crucian carp // Chin Sci Bull. 1993 b. - Vol. 38. - P.332-337.

81. Guo X., Liu S., Liu Y. Evidence for recombination of mitochondrial DNA in triploid crucian carp // Genetics. 2006. - Vol.172 (3). - P.1745-1749.

82. Haskins C.P., Haskins E.F., Hewitt R.R. Pseudogamy as an evolutionary factor in the poeciliid fish Mollienesia formosa II Evolution. 1960. - Vol. 14. - P. 473-483.

83. Holcik J. Carassius auratus (Pisces) in the Danube river // Acta Sci Natur. 1980. -V. 14.-P. 1-43.

84. Howell W.M., Black D.A. Controlled silver-staining of nucleolus organizer regions with a protective colloidal developer: a 1-step method. // Experientia. 1980. -Vol.36.-P. 1014-1015.

85. Hubbs C. L., Drenry G.E., Warburton B. Occurrence and morphology of a phenotypic male of a gynogenetic fish // Science. 1959. - Vol.129. - P. 1227-1229.

86. Hubbs C. L., Hubbs L.C. Apparent parthenogenesis in nature in a form of fish of hybrid origin // Science. 1932. - Vol.76. - P. 628-630.

87. Hubbs C. L., Hubbs L.C. Breeding experiments with the invariably female strictly matroclinous fish Mollienesia formosa II Genetics (USA). 1946 a. - Vol. 31. - P. 218.

88. Hubbs C. L., Hubbs L.C. Experimental breeding of the Amazone molly // Aquarium J. 1946 b. - Vol. 17. - P. 4-6.

89. Kallman K.D. Population genetics of the gynogenetic teleost, Mollinesia formosa II Evolution. 1962 b. - Vol. 16. - P. 497-504.

90. Kallman K.D. Gynogenesis in the teleost, Mollinesia formosa (Girard) with a discussion of the detection of parthenogenesis in vertebrates by tissue transplantation // J. Genet. 1962 a. - Vol.58. - P. 7-21.

91. Kawanabe H., Mizuno N. Freshwater fishes of Japan. Tokyo: YAMA-KEI Publ., 1989.-720 p.

92. Kobayasi H. A cytological study on gynogenesis of triploid ginbuna Carassius auratus langsdorfi II Zool. Mag. 1971. - Vol. 80.-P. 316-322.

93. Kobayasi H., Kawashima Y., Takeuchi N. Comparative chromosome studies in the genus Carassius, especially with a finding of polyploidy in the ginbuna // Jap. J. Ichthyol.- 1970.-Vol. 17.-P. 153-160.

94. Kobayasi H., Ochi H., Takeuchi N. Chromosome studies of the silver crucian carps (Carassius auratus gibelio), from the valley of the Amur river and their progenies. // Jpn. Women's Univ J. (Home economies). 1973. - Vol. 20. - P. 83-88.

95. Mayer V. W., Aguilera A. High levels of chromosome instability in polyploids of Saccharomyces cerevisiae 11 Mutat. Res. 1990. - Vol.231. - P. 177-186.

96. Menzel B.W., Darnell R.M. Morphology of naturally occurring triploid fish related to Poecilia formosa II Copeia. 1973. - P. 350-352.

97. Monaco P.J., Rasch E.M., Balsano J.S., Turner B.J. Muscle protein phenotypes and the probable evolutionary origin of an unisexual fish Poecilia formosa, and its triploid derivates // J. Exp. Zool. 1982. - Vol. 221. - P. 265-274.

98. Monaco P.J., Rasch E.M., Balsano J.S. Apomictic reproduction in the Amason molly, Poecilia formosa, and its triploid hybrids // In Evolutionary genetics of fishes. New York; London. 1984. - P.311-328.

99. Moritz С., Dowling Т.Е., Brown W.M. Evolution of Animal Mitochondrial DNA: Relevance for Population Biology and Systematics // Annual Review of Ecology and Systematics. 1987. - Vol. 18. - P. 269-292.

100. Murakami M., Fujitani H. Polyploid-specific repetitive DNA sequences from triploid ginbuna (Japanese silver crucian carp, Carassius auratus langsdorfi) II Genes Genet. Syst. 1997. - Vol. 72, 107-113.

101. McElroy D., Moran P., Bermingham E., Kornfield I. REAP: an integrated environment for the manipulation and phylogenetic analysis of restriction data // J. Heredity.-1992.-V. 83.-P. 153-158.

102. Muramoto J. A note on triploidy in the funa (Cyprinidae, Pisces) // Proc. Japan. Acad. 1975. - Vol.51. -P.101-103.

103. Nagasawa K., Torisawa M. Fishes and marine invertebrates of Hokkaido: biology and fisheries. Sapporo: Kita-nihon Kaiyo Center, 1991. 377 p.

104. Nakamura M. Cyprinid fishes of Japan. Studies on the life history of Cyprinid fishes of Japan. Tokyo: Res. Inst. Nat. Resourc. Contrib., 1969 № 1198,455 p.,

105. Nei M. Molecular evolutionary genetics. New York: Columbia University Press, 1987.-512 p.

106. Ohno S., Atkin N. B. 1966. Comparative DNA values and chromosome complements of eight species of fishes // Chromosome. 1966. - Vol.l 8. - P.455—466.

107. Ohno S., Muramoto J., Christian L. Diploid-tetraploid relationship among Old-World members of the fish family Cyprinidae // Chromosoma. 1967. - Vol.23. - P.l-9.

108. Ojima Y., Hitotsumachi, S. Cytogenetic studies in lower vertebrates. A note on the chromosomes of the carp in comparison with those of the funa and goldfish // Jap. J. Genet. 1967.-Vol.42.-P. 163-167.

109. Otto S.P., Whitton J. Polyploid incidence and evolution // Annu. Rev. Genet. -2000. Vol. 34. - P. 401-437.

110. Pelz G.R. Der Giebel: Carassius auratus gibelio order Carassius auratus auratusl //Natur.undMus.-1987.-Vol. 117.-P. 118-129.

111. Phillips R.B., Zajicek K.d.,Ihssen P.E., Johnson O. Application of silver staining to the identification of triploid fish cells.// Aquaculture. 1986. Vol.54. - P. 313-319.

112. Post A. Verleicheude Untersuchungen der Chromosomenzahlen bei Susswasser-Zeleosteen // Z. fur Zool. Syst. und Evol.Forsch. 1965. - Vol. 3. - P. 47-93.

113. Prehn L.M., Rasch E.M. Cytogenetic studies of Poecilia (Pisces) 1.Chromosome numbers of naturally occurring poeciliid fishes and their hybrids from eastern Mexico // Can.J. Genet. Cytol. 1969. - Vol. 11. - P. 880-895.

114. Prim R.C. Shortest Connection Networks and Some Generalizations // Bell. Syst. Tech. J. 1957.-Vol. 36.-P. 1389-1401.

115. Raicu P., Taisescu E., Banarescu, P. Carassius carassius and C. auratus, a pair of diploid and.tetraploid representative species (Pisces, Cyprinidae) // Cytologia. 1981. -Vol. 46.-P. 233-240.

116. Ramsey J., Schemske D. W. Neopolyploidy in flowering plants // Annu. Rev. Ecol. Syst. -2002.-Vol. 33. P. 589-639.

117. Rasch E.M., Balsano J.S. Cytogenetic studies of Poecilia (Pisces). 3. Persistence of triploid genomes in the unisexual progeny of triploid female associated with Poecilia formosa//Copeia.- 1973b.-P. 810-813.

118. Rasch E.M., Prehn L.M., Rasch R.W. Cytogenetic studies of Poecilia (Pisces). 2. Triploidy and DNA levels in naturally occurring populations associated with the gynogenetic teleost, Poecilia formosa (Girard) // Chromosoma. 1970. - Vol. 31. - P. 18-40.

119. Rishi, K.K., Shashikala and Rishi, S. (1998) Karyotype study on six Indian hill-stream fishes // Chromosome Sci. 1998. - Vol. 2. - P.9-13.

120. Rohlf F J. Algorithm 76. Hierarchical Clustering Using the Minimal Spanning Tree // The Computer Journal. 1973. - Vol. 16. - P. 93-95.

121. Rohlf F.J. NTSYS-pc: Numerical taxonomy and multivariate analysis system. Version 1.60. N.Y.: Exter publ. Ltd., 1990

122. Ruiguang, Z. Studies of sex chromosomes and C-banding karyotypes of two formes of Carassius auratus in Kunming Lake.// Acta Genetica Sinica.1982. Vol. 9. -P. 32-39.

123. Singh, R. J. Plant Cytogenetics. Boca Raton: CRC Press, 2003.

124. Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. Molecular cloning: a laboratory manual. N.Y.: Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989. 1626 p.

125. Schultz R.J. Role of polyploidy in the evolution of fishes. In: Lewis, W.H. (ed.), Polyloidy: Biological Relevance. Plenum Press, New York, 1980. P.313-340.

126. Schultz R.J. Origins and relationships of unisexual Poeciliids. In: Meffe, G.K. and Snelson, F.F., Jr. (eds.), Ecology and Evolution of Livebearing Fishes (Poeciliidae). Prentice Hall, Englewood Cliffs , NJ, 1989. P. 69-87.

127. Scheerer, P.D. and Thorgaard, G.H. Increased survival in salmonid hybrids by induced triploidy // Can. J. Fish. Aquat. Sci. 1983. - Vol. 40. - P. 2040-2044.

128. Shimizu Y., Oshiro Т., Sakaizumi M. Electrophoretic studies of diploid, triploid, and tetraploid forms of the Japanese silver Crucian carp, Carassius auratus langsdorfii 11 Jap. J. Ichthyol. 1993. - V. 40. - P. 65-75.

129. Sofradzija A., Berberovic Lj. Hadziselimovic R. 1978. Hromozomske garniture karasa (Carassius carassius) i babuske (Carassius auratus gibelio) II Ichthyologia. -1978.-Vol. 10.-P. 135—143.

130. Stingo V., Rocco L. Chondrichthyan cytogenetics: A comparison with teleosteans // J. Mol. Evol. 1991. - Vol. 33. - P.76-82.

131. Takai A., Ojima Y. The assignment on the nucleolus organizer regions in the chromosomes of the carp, the fima and their hybrids (Cyprinidae, Pisces) // Proc. Japan Acad. 1982.-P. 303-306.

132. Takai A., Ojima Y. Tetraploidy appeared in the offspring of triploid Ginbuna, Carassius auratus langsdorfi (Cyprinidae, Pisces) // Proc. Japan Acad. -1983.-P. 347-350.

133. Taylor J. S., Raes J. in: The Evolution of the Genome (ed. Gregory, T. R.). San Diego: Elsevier, 2005. P. 289-327.

134. Toth В., Varkonyi A., Hidas A., Edvine Meleg E., Varadi L. Genetic analysis of offspring from intra- and interspecies crosses of Carassius auratus gibelio by chromosome and RAPD analysis // J. Fish Biol. 2005. - V. 66. - P. 784-797.

135. Ueda Т., Ojima Y. 1978. Differential chromosomal characteristics in the fiina subspecies (Carassius) // Proc. Jap. Acad. 1978. - V. 54. - P. 283-288.

136. Vrijenhoek R.C. Unisexual fish: Model system for study ecology and evolution // AnnuRev Ecol Syst. 1994. - Vol. 25. - P. 71-96.

137. Vujosevic M., Zivkovic S., Rimsa D., Jurisic S. and Cakic P. The chromosomes of 9 fish species from Dunav basin in Yugoslavia // Acta Biol.Yug., Ichthyologia. 1983. -V. 15.-P. 29-40.

138. Wittbrodt J., Meyer A., Schartl M. More genes in fish? // BioEssays. 1998. -Vol. 20.-P. 511-515.

139. Yang Z.A, Li Q.H., Wang Y.F., Gui J.F. Comparative investigation on spindle behavior and MPF activity changes during oocyte maturation between gynogenetic and amphimictic crucian carp // Cell Res. -1999. Vol. 9. - P. 145-154.

140. Yu H.X. The gynogenesis and androgenesis. In: Lou, Y.D. (Ed.), Fish Breeding. China Agriculture Press, Beijing, 1998. P. 175- 184.

141. Zaykin D.V., Pudovkin A.I. Two programms to estimate significance of Chi-square values using pseudo-probability test // J. Heredity. 1993. - Vol. 84. - P. 152.

142. Zhang Q., Arai K. Distribution and reproductive capacity of natural triploid individuals and occurrence of unreduced eggs as a cause of polyploidization in the loach, Misgurnus anguillicaudatus II Ichthyological Res. 1999. - Vol. 46. - P. 153-161.

143. Zhou R., Cheng IT., Tiersch T.R. Differential genome duplication and fish diversity // Rev. Fish Biol. Fish. 2002. - Vol. П. - P.331-337.

144. Zhou L., Wang Y., Gui J.F. Genetic Evidence for Gonochoristic Reproduction in Gynogenetic Silver Crucian Carp (Carassius auratus gibelio Bloch) as Revealed by RAPD Assays // J Mol Evol. 2000. - Vol. 51. - P. 498-506.

Информация о работе

Апаликова, Ольга Владимировна
кандидата биологических наук
Владивосток, 2008
ВАК 03.00.15

Диссертация

Филогенетический анализ двух форм серебряного карася Carassius auratus gibelio Bloch на основе изменчивости митохондриальной ДНК - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Филогенетический анализ двух форм серебряного карася Carassius auratus gibelio Bloch на основе изменчивости митохондриальной ДНК - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы