Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Ферментативно-токсические свойства шигелл Флекснера 2А

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Бабаджанова, Бернара Наджимовна

ВВИЖНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА I. ФАКТОР ДАТОГЕННОСТИ ШИГЕЛЛ

1.1. Адгезия.

1.2. Липололисахариды шигелл.

1.3. Энтеротоксины.

1.4. Ферменты патогенности шигелл Флекснера.

ГЛАВА 2. ЕАКТЕРИАЛШЫЕ ЭНГЕРОТОКСИВЫ

2.1. Характеристика холерного энтеротоксина

2.2. Характеристика термолабильного токсина J:colA.

2.3. Характеристика стафилококковых энтеротоксинов.

ГЛАВА 3. МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ПОРАЖАЩЕГО ДЕЙСТВИЯ

ЭНТЕРОТОКСИНОВ

3.1. Рецепция^.

3.2. Интернализация.

3.3. Воздействие на внутриклеточную мишень

ГЛАВА 4. МЕТОДЫ И МАТЕРИАЛЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

4.1. Общая характеристика изучаемых штаммов дизентерийных культур.

4.2. Изучение биологической активности растворимых токсических веществ шигелл.

4.3. Действие культурального фильтрата шигелл Флекснера 2а и его фракций на дыхательную функцию и окислительное фосфорилирование митохондрий печени крыс.

4.4. Определение активности энтеральных карбогидраз под действием культурального фильтрата шигелл.

4.5. Мембранная активность бесклеточного фильтрата шигелл Флекснера 2а

ШВА 5. ХАРАКТЕРИСТИКА ЕИОЛОГШЕСКИХ СВОЙСТВ ДИЗЕНТЕРИЙНЫХ КУЛЬТУР

5.1. Ферментативно-токсические и вирулентные свойства дизентерийных культур шигелл Флекснера 2а.

5.2. Летальная активность культурального фильтрата шигелл Флекснера 2а

5.3. Фракционирование культуральных фильтратов шигелл Флекснера 2а.

ШАБА 6. ДЕЙСТВИЕ КУЛЬТУРАЛЬНЫХ ФИЛЬТРАТОВ ШИГЕЛЛ ФЛЕКСНЕРА 2а НА НЕКОТОРЫЕ ФУНКЦИИ ЭУКАРИОТИЧЕСКИХ КЛЕТОК

6.1. Влияние культурального фильтрата шигелл Флекснера на активность энтеральных карбогидраз.

6.2. Пространственное распределение ферментативных активностей слизистой оболочки тонкой кишки

6.3. Эффект культуральных фильтратов шигелл Флекснера 2а на дыхательную функцию и окислительное фосфорилирование митохондрий печени крыс

6.4. Мембранная активность культуральных фильтратов шигелл Флекснера 2а.

ЗАКЛШЕНИЕ. вывода

УКАЗАТЕЛЬ ЛИТЕРАТУРЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Ферментативно-токсические свойства шигелл Флекснера 2А"

Проблема патогенности микроорганизмов представляет собой интересный, но мало изученный раздел современной биологии. Изучение биологии возбудителя длительное время носило прикладной характер и проходило по пути решения задач, вытекающих непосредственно из необходимости борьбы с инфекционными заболеваниями. Общебиологические аспекты патогенности микробов оставались вне поля зрения исследователей. В последние годы благодаря успехам биохимии, биоорганической химии, биофизики, гистологии и молекулярной биологии интенсивно развиваются и достигнута определенные успехи в изучении структуры и функций биологически активных веществ, продуцируемых бактериями, а также в направлении системного подхода к исследованию природы и характера взаимодействия возбудителя и микроорганизма (Езепчук Ю.В., 1977). .

Изучение особенностей биологии патогенных бактерии установило, что. способность вызывать инфекционные заболевания формировались у них в направлении приобретения функций, позволяющих проникать в организм хозяина, противостоять его защитным силам, а также вызывать нарушения деятельности физиологически важных систем. Совокупность всех трех функций делает микроб патогенным (Smith f 1968) и в этом смысле патогенность является полиде-терминантным или полуфункционвльным свойством (В.Д.Тимаков и др., 1968).

Как известно, патогенность бактерий определяется тремя группами факторов. Первую группу составляют факторы, имеющие ферментативную природу; их характеризует общее свойство - деполиме-ризовать субстанцию, препятствующую проникновению и распространению возбудителя. Вторая группа факторов направлена на защиту микробов от фагоцитоза и третья группа, куда входят факторы па-тоге нности с токсической функцией (Езепчук Ю.В., 1973).

Бактерии, обладающие всеми тремя категориями факторов па-тоге нности, имеют реальную возможность вызвать развитие инфекционного процесса. Бактерии, способные только к инвазии и обладающие антифагоцитарными свойствами, могут представлять опасность для формирования носительства. Штаммы бактерий, лишенные факторов патогенности с инвазивной, антифагоцитарной и токсической функцией не могут быть возбудителями инфекционных заболеваний. Помимо этого имеется штаммовое многообразие форм патогенного вида бактерий, свидетельствующее о возможных вариантах контроля со стороны генетического аппарата за биосинтезом тех или иных биологически: активных макромолекул.

Изучению химического состава патогенных бактерий уделяется все большее внимание. Эти исследования показали, что как среди продуктов, так и самих патогенных бактерий не имеется каких-либо уникальных соединений, с которыми можно было бы связать патогенное действие возбудителя инфекционных заболеваний. Различные факторы вирулентности, антигены и токсины белковой и по-лисахаридной природа, как правило, содержат известные аминокислоты и сахара. Однако можно надеяться, что достижение современной иммунохимии в определении связи строения и функции макромо-лекулярных соединений помогут раскрыть в дальнейшем причины специфической активности поверхностных клеточных компонентов, токсинов и определить патогенные свойства бактерий.

В настоящее время накоплена значительная информация о свойствах, строении и механизме действия ряда бактериальных токсинов, в частности, энтеротоксинов. Однако, энтеротоксические свойства дизентерийных бактерий различных видов, молекулярная структура токсических начал, их антигенные свойства, механизм биологического действия шло изучены и нуждаются в тщательных исследованиях.

Б связи с этим, мы поставили перед собой задачу определить ферментативно-токсические и вирулентные свойства щигелл Флексне-ра 2а различных штаммов, выделить их водорастворимые токсические компоненты, изучить их биологическую активность и действие на некоторые функции эукариотической клетки.

- 7

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Бабаджанова, Бернара Наджимовна

ВЫВОДЫ:

1. Установлено наличие корреляции между вирулентностью шигелл Флекснера 2а и комплексом цродуцируемых ими ферментативно-токсических компонентов.

2. Путем гель-фильтрации культурального фильтрата шигелл Флекснера 2а на Г- 100 получены две фракции C-I и С-2. C-I по своей удельной активности превышает в 3 - 10 раз активность исходного бесклеточного фильтрата.

3. По данным электрофореза фракция C-I состоит из трех компонентов и обладает летальной активностью.

4. Под воздействием бесклеточного фильтрата шигелл Флекснера

2а в различных отделах тонкой кишки подавляются амилолитичес-кая, инвертазная и мальтазная активности. Ингибирование протекает во времени и характеризуется различной величиной сдвигов.

5. Фракции C-I и С-2, выделенные из бесклеточного фильтрата шигелл Флекснера 2а приводят к нарушению скорости окисления субстратов в митохондриях, находящихся в различных метаболических состояниях, подавляют эффективность окислительного фосфорилирования митохондрий и ингибируют систему переноса электронов дыхательной цепи.

6. Установлено, что культуры шигелл Флекснера 2а продуцируют фактор, который увеличивает проводимость бислойных фосфоли-пидных мембран, формируя в них ионные каналы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Как мы рассмотрели в обзоре литературы, патогенность бактерии является полидетерминантным их свойством и оцреде-ляется их способностью проникать в организм хозяина, противостоять его защитным силам и вызывать нарушения в функционировании физиологически важных систем макроорганизма. В этой интеграции, как видно, токсические начала микроорганизмов занимают основную и завершающую позицию.

В связи с этим, не требует доказательства важность изучения структуры этих бактериальных токсических начал и оно приобретает особую актуальность при рассмотрении во взаимосвязи с другими изучаемыми вопросами биологии микроорганизмов.

Вопрос изучения структуры и функции токсинов вообще имеет большую актуальность еще и потому, что токсины являются важным инструментом в исследованиях общих закономерностей функционирования и регуляции деятельности биологических структур и систем.

Результаты выполненных наш исследований свидетельствуют в пользу сложившихся концепций о том, что патогенность микроорганизмов связана со специфическими субстациями, синтезируемыми ими. В то же время токсичность бактерий сама по себе является полифункциональным свойством.

Нами были изучены биологические свойства дизентерийных культур. Шигеллы обладали комплексом ферментативно-то-ксических свойств и продуцировали такие субстанции, как гемолизин, цитотоксин, лецитиназу.

- 90

Вирулентные свойства шигелл Флекснера колебались в широких пределах от 44 млн. до 895 млн. и более микробных тел и находились в прямой коррелятивной связи от наличия фермента-тивно-токсических активностей. Высоковирулентные штаммы шигелл вырабатывали все 3 вида активности - гемолизин, лецитиназу, цитотоксин.

В дальнейшем нам удалось показать, что яультуральные фильтраты культур шигелл Флекснера обладают летальной активностью. Наибольшая летальная активность отмечается в третьей группе штаммов шигелл, ЛЛ^ которых колебалась от 0,61 - 0,99 мг сухого вещества.

Фракционирование культуральных фильтратов шигелл на сефадексе Г-100 позволило получить две фракции белков - C-I и С-2. Первая фракция по своей удельной активности превышалаа активность исходного культурального фильтрата в 3-10 раз. Электрофорез первой фракции в полиакриламидном геле показал наличие у нее трех компонентов.

Изучение ферментативно-токсических свойств первых фракций культуральных фильтратов шигелл Флекснера 2а показало,что ее биологическая активность чаще всего связана с цитотоксичес-ким компонентом, и небольшой процент отводится лецитиназе.

Токсины дизентерийных микробов существенно нарушают не только ферментовыводительную функцию слизистой кишечника, где разыгрываются основные патологические процессы цри бактериальной дизентерии, но эти токсины оказывают также значительное влияние на ряд других важных функций клетки и на функцию таких субклеточных частиц, как плазматическая мембрана и митохондрии.

Результаты выполненных исследований показывают: воздействие бесклеточного фильтрата шигелл Флекснера 2а на актив

- 91 ность кишечных карбогидраз показало, что в различных отделах тонкой кишки происходит подавление амилолитической,инвертазной и мальтазной активности. Ингибирование протекает во времени и характеризуется различной величиной сдвигов.

Для выяснения механизма действия бактериальных агентов на некоторые внутриклеточные процессы при дизентерийной инфекции, мы изучали влияние культуральных фильтратов Флекснера 2а и их фракций на окислительное фосфорилирование митохондрий печени крыс.

Полученные результаты показали, что бесклеточные фильтраты шигелл Флекснера 2а неодинаково действовали на параметры сопряжения митохондрий, нарушали скорость окисления субстратов в различных метаболических состояниях и подавляли эффективность окислительного, фосфорилирования митохондрий. Культуральные фильтраты и их фракции не только подавляли АТ£-синтетазную функцию, но и действовали на систему переноса электронов дыхательной цепи митохондрий, то есть нарушалась проницаемость их мембран.

Для изучения возможных механизмов физиологической активности культурального фильтрата мы изучили его влияние на свойства искусственных фосфолипидных мембран и обнаружили, что он увеличивает проводимость мембран, формируя ионные каналы. По-видимому, такая его способность лежит в основе его действия на различные биологические системы.

Токсин-каналоформер, внедряясь в фосфолипидный бислой разнообразных мембран, будет уменьшать их трансмембранный потенциал и таким образом оказывать на них цитотоксическое действие. Его внедрение в эритроцитарную мембрану может приводить к наблюдаемому гемолизу. А воздействие на мембрану митохондрий должно приводить к разобщению окислительного фосфорилирования.

Таким образом каналогеиной активностью фильтрата могут быть объяснены почти все отмеченные его биологические эффекты.

Дальнейшие исследования содержащегося в бесклеточном фильтрате очищенного до индивидуального состояния каналоформера позволят выяснить, способен ли он изменить активность мембранно-связанных ферментов кишечника, либо это связано с функционированием какого-либо другого агента.

В последнее десятилетие интенсивно изучаются токсины животного и бактериального происхождения. Они привлекают внимание исследователей тем, что являются физиологически весьма активными соединениями, оказывают сильное действие на нервно-мышечную проводимость (КрасильниковО.В.,Терновский В.И.,1981; Сорокин В.М.,1982), на различные стороны метаболизма клетки (Юкельсон Л.Я. и др.,1974), взаимодействуя с плазматическими мембранами, изменяют ионную проницаемость,а в некоторых случаях являются каналоформерами (Donovan et al ., 1981; Красильников О.В. и др., 1982).

Благодаря успехам биохимии, биофизики и молекулярной биологии ряд токсинов выделен в индивидуальном состоянии, расшифрована их первичная структура (Сорокин В.М. ,1973; Raziddin , 1979; oisnes , 1979; Туракулов Я.Х. и др. ,1974), а в некоторых случаях представлена их пространственная структура.

Некоторые токсины членистоногих (Гришин Е.В. и др.,1980) в связи с их необратимым прочным взаимодействием с биологическими мембранами,используются в качестве инструментов при изучении строения этих образований.

Ряд бактериальных токсинов изучены хорошо. К настоящему времени изучена структура токсинов: дифтерийного, стафилококкового и холерного, дана их физико-химическая характеристика (Да— линМ.В., Фиш Н.Г., 1980).

Однако не так хорошо освещены вопросы, касающиеся токсинов-возбудителей такого широко распространенного заболевания, как дизентерия.

Если принять во внимание, что токсины обладают свойством повышать неспецифическую резистентность организма (Шпилюк Г.Ф. и др., 1978) и даже высказывается идея о возможности использования в качестве специфических цитотоксических веществ, действующих на мембраны раковых клеток, бактериальных или иных токсинов ( Garswell et al. , 1976; Nowotny , 1980), TO Любая HO-вая информация о бактериальных токсинах, как нагл представляется, является полезной.

Обзор литературы и полученные экспериментальные данные еще раз свидетельствуют о многообразии эффектов таких физиологически активных биополимеров, как токсин. В то же время проблема изучения строения и молекулярных механизмов действия бактериальных токсинов остается весьма актуальной и требует к себе пристального внимания исследователей.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Бабаджанова, Бернара Наджимовна, Ташкент

1. Ашмарин И. А. Вычисление при малом числе подопытныхживотных. Сообщение 2. Ж. микробиол. эпидемиол. и иммуно-биол. 1959, 2, 102.

2. Бахадырова У.А. Биологические свойства и некоторые химические показатели возбудителей дизентерии в сопоставлении с клиникой заболевания. В кн.: Эпид., микроб, и клинико-диагностические проблемы инфек. патологии Узбекистана.Т., 1973 г., I09-II0. . .

3. Бобкова Е.Д. Активность некоторых тонкокишечных ферментовпри дизентерии. Мат. 4 Всес. конф. по клинич. биох. и клинич. биол.Рига, 1973, 21-22.

4. Веденская В.А. Имцунохишческая характеристика растворимыхантигенов. Автореф. канд. дисс. Ташкент, 1969.

5. Вертиев Ю.В. Выделение нейроминидазы у Corynebacteriumdiphtheriae и изучение некоторых ее свойств. Канд.дисс. 1972 г.

6. Вертиев Ю.В., Езепчук Ю.В. Выделение нейроминидазы НАГ-вибриона аффинной хроматографией. Биохимия, 1977, 9, 621625.

7. Выгодчиков Г. В. В кн.: Микробиология и иммунология стафилококковых заболеваний. М., Медицина, 1963, 166.

8. Гавршшк Б. К. Методика использования культуры ткани для выявления отличий энтеропатогенных палочек от банальных. Тр. Влад. НИИЭгЛГ, 1962 г., 2, 27-30.

9. Галаев Ю.В. В кн.: Патогенные ферменты бактерий. М., Медицина, 1968, II4-II8.-9610. Гришин Е.В., Солдатов Н.М., Овчинников 10.А. Природа мембранных рецепторов нейротокоинов из яда скорпиона. Биоор-ганич. химия, 1980, 6, 914-922.

10. Далин М.В., Фиш Н.Г. В кн.: Белковые токсины микробов. М., "Медицина", 1980, 105.

11. Демидова A.M. Дилептидазная активность слизистой оболочкитонкой кишки цри многократном воздействии высокой температуры и некоторых других стрессфакторов. И конф. физиол. Узбекистана. Ташкент, 1973, 97-98.

12. Дэвени Т., Гергей Я. В кн.: Аминокислоты, пептиды и белки.1. М., 1976 г., 28-31.

13. Езепчук 10.В. Факторы патогенности бактерий и проблема протективных антигенов. Вестник АМН СССР, 1973, II, 58-64.

14. Езепчук Ю.В. В кн.: Биомолекулярные основы патогенностибактерии. М., Наука, 1977, 108.

15. Ельчинова Е.А. Культивирование микробов Флекснера в куриных эмбрионах. Ж. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол., 1961, 3, 119.

16. Жалко-Титаренко В.П. и др. Механизм прикрепления шигеллк слизистой оболочке кишечника. ЖМЭИ., 1981, 8, 73-78.

17. Каверина К.Г., Шуваева Л.П. Изучение панкреализатов Sh.flexneri 2а И Sh. Sonnei, фракционированных фИЛЬТрацией через сефадекс Г- 200 и ультрацентрифугированием. S. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол., 1976, 7, 51.

18. Ойвин И.А. Статистическая обработка результатов экспериментальных исследований. Патол., физиол. и эксперим. терапия, I960, 1У, 76-85.

19. Остер Н.Р., Худяк Э.И. Токсинообразование у бактерий кишечной группы. В сб.: Актуальные вопросы кишечных и зоонозных инфекций. Ташкент, 1979, 38-39.

20. Павельева Н.И., Желтухин П.А. Морфология слизистой оболочкии мембранное пищеварение в тонкой кишке при острой дизентерии Зонне. Матер. 4 Всес. конф. по клинич. биохимии и клинич. биологии. Рига, 1973,; 58-59.

21. Петровская В.Г. Современные направления в изучении факторов,определяющих патогенные свойства бактерий. Вест. АМН СССР, 1976, I, 1-8.

22. Рахимов К.Р., Демидова А.И. Ферментативная активность слизистой тонкой кишки крыс в условиях повторных воздействий окружающей температуры. Физиол. журн. СССРД975, 5, 778784.

23. Рогинская И.З. Механизм действия агара при тифо-паратифозных инфекциях в-опыте на мышах. ШДЭИ, 1942, 9, 46.

24. Савицкая Л.А. Экстрацеллкшярный токсин Е. coii возбудителей острых кишечных заболеваний детей и взрослых. Автореф. канд. диес. Ташкент, 1974.

25. Сорокин В.М., Гришин Е.В., Сухих А.П. и др. Первичнаяструктура токсина П из яда среднеазиатской кобры. В кн.: Тезисы докл. Ш Советско-Индийского симп. по химии природн. соедин., Ташкент, 1973, 14-15.

26. Сорокин В.М. О механизме действия токсинов яда среднеазиатской кобры. Узб. биол. журнал, 1982, 5, 68-69.

27. Камзолкина Н.Б., Караева Л. Т., Джапаридзе М.Н. Испытаниетоксинов Зонне и холерного вибриона в изолированной петле тонкого кишечника мышей. МЭИ, 1977, 6, с.84.

28. Климачева Л.В. Выделение и изучение иммунохомических свойствгиалуронидазы Glostridium perfringens . Автореф. КЭНД. ДИСС., М., 1971.

29. Ковальчук В.К. Морфологическое проявление адсорбции шигелл

30. Зонне на эпителии кишечника. Арх.пат., 1977, I, 68-71.

31. Красильников О.В., Терновский В.И., Ташмухамедов Б.А. Свойства каналов проводимости индуцируемых в бислойных фосфоли-иидных мембранах -стафилотоксином. Биофизика, 1981, 26, 271-275.

32. Красильников О.В.-, Терновский В.И., Ташмухамедов Б.А. Исследование каналообразующих свойств яда каракурта. Биофизика, 1982, I, 72-75.

33. Макухина Г.В. Влияние иммобилизационного стресса на некоторые ферментативные и транспортные характеристики тонкой кишки. Автореф. докт. дисс., Л., 1978.

34. Мельников Н.И., Мельников В.Н., Гимранов М.Г. В кн.: Ферменты патогенности и токсины бактерий. М., Медицина,1969.

35. Мингулина Л.П. Состояние ферментовыделительной функции тонкой кишки у больных пищевыми токсико-инфекциями. Тр.Сарат. мед. ин-та, 1973, 85, 67-75.

36. Миролюбова Л.В., Петровская В.Г., Дгойсалиева Р.Г. Сравнительная характеристика бесклеточных фильтратов шигелл Флекснера разной вирулентности. Ж. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол., 1977, 5, 29-33.

37. Сысуева Е.Г. Исследование НАД-гликогидролазной активностистафилококковых энтеротоксинов. Биохим., 1983, т.48, 3, 503-507.

38. Тимаков В.Д., Кудлай Д.П. Внехромосомные факторы наследственности бактерий и их значение в инфекционной патологии. Ж. микробиол,эпидемиол. и иммунобиол.,1968,12,3.

39. Тимаков В. Д., Петровская В. Г. В кн.: Биология и генетика шигелл Флекснера. М., Медицина, 1972, 205.

40. Тимаков В. Д., Петровская В. Г., Бондаренко В.М. Биологические игенетические характеристики бактерий рода Shigella . М., "Медицина", 1980, 215.

41. Туракулов Я.Х. ,Нишанходжаева С.А.,Сорокин В.М. ,Юкельсон Л.Я.

42. Аминокислотный состав и концевые аминокислоты токсинов яда среднеазиатской кобры. Химия прир.соедин.,1974,1,62-64.

43. Уголев A.M. Мембранное пищеварение. Полусубстратные процессыорганизма и регуляция. Л.,Наука, 1972, 356.

44. Чистович Г.Н.В кн.: Патогенез стафилококковой инфекции. Л.,1. Медгиз, 1961, 52-60.

45. Ккельсон Л.Я.,Сахибов Д.Н. ,Садыков Э.С. .Сорокин В.М. Цитотоксин из яда ереднеазиатской кобры.В кн.: Ш Всес.биохим.съезд Рефераты научных сообщений.Рига,1974,т. 1,111.

46. Янишевская М.Н. К биологической характеристике шигелл Зоннеразных ферментативных типов. Ж. микробиол.,эпидемиол., и иммунобиол. 1965, II, 49-52.

47. Alpers D.H., Solin H. Intestinal amylase. Gastroenterology, 1970, 58, 833.

48. Alving G.R., Iglews B.M., Urban K.A. Binding of diphteria toxin to phospholipids in liposomes. P.N.A.S., USA, 1980, 77, 4, 1986-1990.

49. Auricchio S., Rubino A., Intestinal macosa. Chemical biochemistry principles and methods. Berlin, New-York, 1974, 2, 1260-1276.

50. Bergdoll M.S., Borja C.R., Robinson R.H., Weiss K.P. Identification of enterotoxin E. coli. Infect. Immun., 1971, 4, 593595.

51. Bergdoll M.S., Robinson R.2T. Characterisation of types of staphylococcal enterotoxins. J. Milk. Food. Thechnol., 1973, 36, 61 0-612.

52. Bergdoll M.S., Huahg I.J., Shantz E.J. Chemistry of staphylococcal enterotoxins. I. agric Pood. Chem. 1974, 22, 9-13.

53. Berry Z.I., Smythe D.S. Effect of bacterial endotoxins on metabolism. III. Nitrogen excretion alter ACTH as an assay for endotoxin. J. Exp. Med., 1961 , 113, 1-6, 83.

54. Bonventre P.P., Saelinger G.B., Ivins В., Woscinski C., Amo-rini M. Interaction of cultured mammalian cells with 125-diphteria toxin. Infect. Immun., 1975, 11, 675-684.

55. O.Brown I.E., Rohtman S.W., Doctor B.P. Inhibition of protein synthesis in Intact Hela cells by Shigella disenterlae I Toxin.1.fect, and Immun., 1980, 29, 1, 98-107.

56. Cassel D., Pfeuffer T. Mechanism of cholera toxin action: covalent modification of gumel nucleotidebinding protein of adenylate cyclase system. Proc. Hat. Acad. Sci. USA, 1.978, 75, 2669-2673.

57. Chance В., Williams G.R. Respiratory enzymes in oxidative phosphorylation. J. Biol. Chem., 1955, 217, 409-418.

58. Clements I.D., Finkelstein R. Isolation and characterisation of homogeneous heat-labile enterotoxin, with high specific activity from E.coli culture. Immunity, 1979, 24, 76O-769.

59. Clements I.D., Finkelstein R.A. Properties of homogeneous heat-labile enterotoxin from E.coli. Infect. Immun. 1980, 29, 91-97.

60. Collier R.I. Diphteria toxin: mode of action and structure. Вас. Rev., 1975, 39, 54-85.

61. Creaves M., Janossy G., Doenhoff LI. Selective triggering of human 'laud В lymphocites in vitro by polyelonal mitogens. J. Exp. Lied., 1974, 140, 1-8.

62. Cuatrecasas P. Affinity chromatography and structural analysis of Vibrio cholerae enterotoxin-ganglioside agarose and the biological effects of ganglioside containing soluble polymers, Biochemistry, 1973, 12, 4253-4254.

63. Dahlqvist A. Assay of intestinal disaccharidasis. Analitical. Biochem., 1968, 22, 99-107.

64. Donov/an J., J., Simon II.I., Draper R.IC. Diphteriae toxin forms transmembrane Channels in planar lipid bilaiers. Proc. Nat. Acad. Sci., USA, 1981, 78, 1, 172-176.

65. Donowitz M., Keusch G., Binder H. Effect of Shigella on electrolyte transport in rabbit ileum. Gastroenterology,1975, 69, 1230-1237.

66. Duffy L.K., Peterson J.Y/., Kurosky A., Covalent structure of genuma chain of the A subunit of cholerae toxin. J. Biol. Chem., 1981, 256(23), 12252-12256.

67. Esepchuk Yu.V., Ver-tiev Yu.V. Isolation and study of certain-neuraminidase properties. Behring Inst, Mitt., 1974, 55, 60-66.

68. Esepchuk Yu.V., Sysueva E.G., Noskov A.N. NaD-glycohydrolase activity of staphylococcal enterotoxin A. (SEA), Int. J. Biochem., 1981, 13, 1269-1279.

69. Esepchuk Yu.V., Noskova V.P., Noskov A.N. Properties of staphylococcal enterotoxin A an der limited proteolis. Int. J. Biochem., 1982, 14, 505-510.

70. Finkelstein R.A. Cholera. CRC Critic. Rev. Microbiol, 1973, 2, 553-623.

71. Finkelstein R.A. Immunology of cholera. Curr. Top. Microbiol. Immunol. 1975, 69, 137-196.

72. Finkelstein R.A. Cholera enterotoxin. Koch R. Revisted. Lbl. Bakt. Hyg., 1976, 235, 13-19.

73. Pinkelstein R.A. Cholera the relevance of the irrelevant. Lbl. Bact. Hyg., 1977, 239, 283-293.

74. Pinkelstein R.A. Laboratory production and isolation of ente-rotoxins and isolation of a candidade live vaccine for diarrheas. p. 64-79 in: Cholera and related diarrheas. Eds.: O.Aechterlony, S. Holmgren, S. Karger, Rasel, 1980.

75. Garswell E. et al. Partial Purification of a serum factor that causes necrosis of tumora. Proc. Nat Acad. Sci. USA, 1976,73, 2, 381-390.

76. Gill D.M., Hope J.A. Protein toxins that activithin cells. Bull. Inst. Pasteur, 1969, 74, 65-85.

77. Gill D.M. The arrangement of suhunits in cholera toxin. Biochemistry, 1976, 15, 1242-1248.

78. Gill D.M. Mechanism of action of cholera toxin, p.85-118 in: P. Creengard, G.A. Robinson (eds.) Advands in cyclic nucleotide research, 1977, 18, Raven Press., blew-York.

79. Gill D.M., Hope J.A., Meren R., Jacobs D.S. Cholera toxin interaction with cell membranes, in: Receptor-mediated binding and internalization of toxins and hormones. Acad. Press. ITew-Xork, 1981, 113-121.

80. Granum P.E. Tripsin activation of enterotoxin from Clostridium pertringens type A. Biochim. Biophys. Acta, 1981, 668, 325-332.

81. Hartee E.F. Biochemical properties of E.coli low molecular-weigt, heat-stable enterotoxin. Anal. Biochem. 1972, 48, 422.

82. Hafman I., Diabac v« Роль лидида А в фагоцитозе грамотрицатель-ных бактерий и их липополисахаридов.S.гиг.,эпидемиол.,микробиол. и иммунол.(Прага),1974,18,447—454.- 104

83. Holmgren I., Lonnroth I., Svennerholm L. Tussue receptor for cholera exotoxin: postulated structure from studies with Gm-j ganglioside and related glycolipids. Infect. Immun., 1973,8, 208-214.

84. Honda fD. Saga S., Takeda J., Miwatani T. Immunological noniden-tify of heat labile enterotoxin from human and porcine enterotoxigenic E.coli. Infect. Immun. 1981, 34, 337-340.

85. Ivins В., Sallinger C.B., Bonventre P.P., Woseinski C. Chemical modulation of diphteria toxin action of cultured mamalian cells. Infect. Immun., 1975, 11, 665-674.

86. Joseph K.C., Steiber A., Gonatas K. Endocytosis of cholera toxin in GERL-like structures of murine neuroblastoma cells pretrilated with G.M. ganglioside. J. Cells. Biol., 1979, 81, 543-554.

87. Kandel J., Collier R.J., Chung D.Y7. Interaction of fragment A from dephteria toxin with incotinamide adenine dinucleotide.

88. Biol. Chem., 1974, 249, 2088-2097.

89. Kauffman F. Семейство кишечных бактерий (Enterobacteria-ceae) пер. с англ. М., Медгиз, 1959.

90. Ketyi I., Adele V., Malovics Н., Unique Features of Heat-Stable Enterotoxin of Sh. flexneri. Acta microbiol Acad. Sci. hung; 1978, 25, 219-227.

91. Keusch G.T., Grady G.F. The pathogenesis of Shigella diarrhea. I. Enterotoxin production by Shigella dysenteriae 1. The J. of Clin. Infest., 1972, 51, 5, 1212-1218.

92. Keusch C-.T., Jacewitex M. The Pathogenesis of Shigella diarrhea. VI. Toxin and Antitoxin in Sh. flexneri and Sh. sonnei. Infections in Humans. The J. of Inf. Diseases, 1977, 135, 4, 552-559.

93. Keusch G.T. Receptor-mediated endocytosis of Shigella cyto-toxin in: Receptor-mediated binding and internalization of toxins and hormones. 1981, 95-112. Acad. Press. N.-Y.,London.

94. King C.A., van Heyningen W.E. Evidence for a complex nature of ganglioside receptor for cholera toxin. I. Infect. Dis., 1975, 131, 643-649.

95. Klipstein P.A., Engert R.P. Immunological interrelations-chips between cholera toxin and the heat-labile and heat-stabile enterotoxins of coliform bacteria. Infect. Immun., 1977, 18, 110-116.

96. Kunkel S.L., Richardson S. Purification and chemical characterization of the heat-labile enterotoxin produced by enterotoxinogenic E. coli. Infect. Immun., 1979, 25, 586-596.

97. Kurowski W.A., Markel D.E., Touchstone В., Peterson J.W. Chemical characterization of the structure of cholera toxin and its natural toxoid. J. Infect. Dis., 1976, 133, 14-22.

98. Lai C.G., Cancedda P., Chang D. Primary structure of cholera toxin subunit A; isolation partial sequences and alignment of Br ОТ fragments PEBS. Lett., 1979, 100, 85-89.

99. Ledley P.D., Uullin B.R., Lee G. et al. Sequence simularity between cholera toxin and glycoprotein hormones: implications for structure activity. Biochem. Biophys. Res. Comm., 1976, 69, 852-860.

100. Lehrer S., Nowotnu A. Isolation and purification of endotoxin by hydrolytic luzynus. Infect. Immun., 1973, 6, 928933.

101. Leppla S.H., Dorland 1С. S. Uptake mechanisms for ADP-ribosy-lating toxins. Receptor-mediated binding and internalization of toxins and hormones. (Eds., J.L. Middlebrook, L.D. Kohn). 1981, 65-80.

102. Lory S., Collier R.J. Ligand interaction of diphteria toxin II. Relationships between the NAD-site and the R-site. J. Biol. Chem. 1980, 255, 12016-12019.

103. Lowry O.H., Rosebrough M.G. Protein measurements with the Polin phenol reagent. J. Biol. Chem., 1951, 193, 1, 265-274.

104. Luderitz 0., Galanos S.C., Lehmann V. et al. НОВЬЮ Данные ПОхимической структуре и биологической активности бактериальныхлипополисахаридов, Ж., гиг.,эпидемиол.,микробиол.(Прага),1974, 18, 381—390.

105. Мс Iver J., Grady G., ICeusch G. Production and characterization of exotoxin (s) of Shigella dysenteriae type 1.

106. J. Infect. Dis., 1975, 131, 559-562.

107. Makalanos J.J., Collier R.J., Romig W.R. Ensymic activity of cholera toxin. II Relationships to proteolytic processing disulfide bond reduction and subunit composition. J. Biol. Chem., 1979, 254, 5855-5861.

108. Middlebrook I.L., Dorland R.B. Response of cultured mamalian cells to the exotoxins of Pseudomonas deruginosa and Coryne-bacterium diphtheriae: different cytotoxicity. Can. J. Microbiol., 1977, 23, 183-197.

109. Moss I., Eishman P.H., Manganiello V.C. Functional incorporation of ganglioside intact cell: induction of choleragen responsiveness. Proc. Hat. Acad. Sci. USA, 1976, 78, 1034-1037.- 107

110. Moss I., Vaughan M. Mechanism of action of choleragen. Evidence for ADP-ribosylation activity with arginine as on acceptor. J. Biol. Chem., 1977, 252, 2455-2459.

111. Moss I. ITAD-dependent ADP-ribosylation of arginine and proteins by E.coli heat-labile-enterotoxin. J. Biol. Chem., 1979, 254, 6270-6272.

112. Moss I. Mechanism of activation of adenylate cyclase by Choleragen and E.coli heat-labile enterotoxin. In: Secretory diarrhea (Eds. M., Field., T.S., Eordstrau. Chemical physiology series). 1980, 1 07-126.

113. Niskanen A. Desereption and properties of enterotoxins. In: staphilococcen enterotoxins and food poisomning. Prod. prop, detet. Espoo: Valtion Teknillinen Tutkimuskeskus, 1977, 23-31.

114. O'Brien A.D., Thompson H., Gemski P. et al. Biological properties of Shigella PI 2a Toxin and Serological Relationship to Sh. dys. 1. Toxin. Infect. Immun., 1977, 15, 3, 796-799.

115. Olsnes S., Eiklid K. Isolation and properties of Shigella Shigae cytotoxin. Toxicon, 1979, 17, 1, 135-142.

116. Panek S., Cardawene A., Gotterer G., Hendrix T. Secretory and cyclic AMP (c AMP) responses to Shigella enterotoxin (ST) and Cholera enterotoxin (CT). Gastroenterology, 1977, 72, 2, 141.

117. Pappenheimer A.M. Diphtheria: molecular biology of an enfec-tious process. Trends in Biol. Sci., 1978, 1, 220-223.

118. Pappenheimer A.M. Diphtheria toxin. Ann. Rev. Biochem., 1979, 46, 69-95.

119. Paradisi P., Trapani A., Grazino Z. The effect of diphteria toxin on primary cells cultures of the adult humon liver. Experimentia, 1974, 30, 940-941.

120. Peavy D.L., Adler W.H., Smith R.T. The mitogenic effects of endotoxin and staphylococcal enterotoxin on mouse spleen cells and human peripheral lymposytes. J. Immunol., 1970, 105, 14531458.

121. Pierce P. Diffirential inhibitory effects of cholera toxoids and ganglioside on the enterotoxins of V. cholerae and E.coli. J. Exptl. Med. 1973, 187, 1 009-1027.

122. Razinddin S. Structure and toxicity of lipid A from Vibrio cholerae. Toxicon, 1979, 17, 1, 148-160.

123. Ribi E. et al. Relationship of Chemical Composition to Biological Activity. Bacteriol. Rev., 1961, 25, 4, 427.

124. Richards K.L., Douglas S.D. Pathophysiological effects of Vibrio cholerae and enterotoxigenic Escherichia coli and their exotoxins on encaryotic cells. Microbiol. Rev., 1978, 42, 592-613.

125. Ruttloff H., Noack R., Priese R., Schenk G. Uber polysac-charidspaltende Ensyme im Burstensaum der Rattenmucosa under besonderer Berucksichtigung der Amylase. Acta Biol. Med, German., 1969, 19, 6, 831.

126. Saelinger C.B., Bonventre P.E., Ivans B. Uptake of diphteria toxin and its fragment moiety by mamalian cells in culture. Infect. Immun., 1976, 14, 742-751.- 109

127. Sattler H., Wiegandt H., Stoerk D. et al. Studies of the ligand binding to cholera toxin. II. The hydrophylic moeity of sialoglycolipids. L. Phys. Chem., 1877, 358, 159-163.

128. Schneider W.C., Hogeboom G.H. Cytochemical Studies of Mammalian Tissues. The isolation of Cell Components by- Differential Centrifugation: Л Rewien Concer Research., 1951 , 11 , 1, 1-22.

129. Schwarzman et al. Comparison of the interaction of mono and oligovalent ligande with cholera toxin. Demonstration of aggregates formation at a low ligand concentrations. L. Phys. Chem., 1978, 359, 1277-1286.

130. Seitmann G. 0-антиген шигелл Флекснера. S. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол., 1977, 4, 24-29.

131. Silverman S.J., Espeseth D.A., Schant E.J. Effect of fol-maldchyde on the immunochemical and biological activity of staphylococcal enterotoxin Б. J. Bacterid., 1969, 98, 437442.

132. Smith N.W. Biochemical challende of microbial pathogenicity. Bacter. Rev., 1968, 32, 3, 164.

133. Spero L., Warren J.R., Metzger J.P. Effect of single peptide bound scission by trypsin on structure and activity of staphylococcal enterotoxin B.J. Biol. Chem., 1973, 1248, 7289-7294.

134. Spero L., Griffin B.J., Middlebrook J.L. et al. Effect of a single and double bound scission by trypsin on the structure and activity of Staphylococcal enterotoxin С. I. Biol. Chem., 1976, 251, 5580-5589.

135. Spero L., Morlock В.Л. Gross reactions between tryptic polypeptides of staphylococcal enterotoxins В and C. J. Immunol, 1979, 122, 1285-1289.

136. Strewler Ст.I., Orloff I. Role of cyclic nucleotides in the fransport of water and electrolytes. In: Advanced in Cyclic nucleotide Researches. Raven Press., Hew-York, 1977, 311-361.

137. Takeuchi A. Penetration of the intestinal epithelium by various microorganism. Curr. Top. Pathol., 1971, 54, 1-6.

138. Tompson M.R., Formal S.B., Gemski P. Toxins of Sh. dysenteri-ae 1 and Sh. flexneri 2a. Federat. Proc., 1976, 35, 7, 1394.

139. Van Heyningen Y/.E. The fixation of tetanus toxin by ganglio-sides. J. Clin. Microbiol., 1961, 24, 107-119.

140. Van Heyningen V/.E. The exotoxin of Shigella dysenteriae. in: Microbial Toxins. Academic Press., blew-York, 1970, 1, 1 .

141. Van Heyningen Г/.Е. Die activation of cholera toxin by gang-liosides. J. Infect. Dis., 1971, 124, 415-418.

142. Van Heyningen W.E. Cangliosides as membrane receptors for tetanus toxin, cholera toxin and serotoxin. Nature, 1974, 249, 415-417.

143. Vasill M., Kabat D., Iglewski B. Structure-activity relationships of an exotoxin of Pseudomonas aeruginosa. Infect. Immunity., 1977, 1 6, 353-361.

144. Warren J.R., Spero L., Meteger J.F. The ph dependence of enterotoxin polymerisation by formaldehyde. Biochim, Biophys.1. Acta, 1974, 365, 434-438.

145. Wiegandt H., Ziegler W., Staerk J. Studies of the ligand binding to cholera toxin. I The bipolytic moiety of sialogly-colipids. L. Phys. Chem. 1976, 357, 1637-1647.

146. Yamakawa Y., Takahashi Т., Sugahara T. et al. Purification and characterisation of L-Toxin (phospholipase C.) of Clostridium perfringens. In: Animal. Plant, and Microbial Toxins. Piemen Press., New-York-London, 1976, 409-427.

147. Yoshida M., Hirota Ы., Satodate R. et al. Immunological andcytochemical studies on in vivo cytotoxic influence on granulocytes and lymphocytes caused by endotoxin. Jap. I. Med. Sci. Biol., 1974, 27, 114-120.