Фармакотерапия трансмиссивной венерической саркомы у собак

Шелестова, Юлия Сергеевна

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Фармакотерапия трансмиссивной венерической саркомы у собак
ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Фармакотерапия трансмиссивной венерической саркомы у собак"

На правах рукописи

005062124

ШЕЛЕСТОВА Юлия Сергеевна

Фармакотерапия трансмиссивной венерической

саркомы у собак

06.02.03- ветеринарная фармакология с токсикологией 06.02.06-ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

? п

.¡¡з

Краснодар - 2013

005062124

Работа выполнена в лаборатории фармакологии ГНУ Краснодарского научно - исследовательского ветеринарного института Россельхозакадемии .

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор, член - корреспондент РАСХН Антипов Валерий Александрович

Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор Родин Игорь Алексеевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор,

профессор кафедры паразитологии, ВСЭ и зоогигиены ФГБОУ ВПО Кубанского ГАУ Гугушвили Нино Нодариевна

доктор ветеринарных наук, зав. кафедрой акушерства и хирургии ФГБОУ ВПО Донской ГАУ Войтенко Любовь Геннадьевна

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО Воронежский государственный аграрный университет им. Императора Петра I

Защита диссертации состоится «_05_»_июля_2013 г. в 1400 часов на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, г.Краснодар, ул. Калинина,13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» (350044, г.Краснодар, ул. Калинина,13).

Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО

«Кубанский ГАУ» - http://www.kubsau.ru « 03 » июня_2013 г. и

официальном сайте ВАК РФ - http://www.vak.ed.gov.ru.

Автореферат разослан «_04_»_июня_2013 г.

Учёный секретарь диссертационного совета

Родин И.А.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Разработка и совершенствование новых методов диагностики и лечения новообразований в области половых органов животных является одной из актуальных проблем ветеринарной медицины (В.А. Антипов, 2001). В связи с появлением большого количества домашних и бездомных мелких непродуктивных животных, различных пород собак, проблема онкологических заболеваний в области половых органов у них приобретает особую значимость из-за слабой изученности патогенеза и отсутствия критериев ранней диагностики (И.А. Родин, 2013). Наиболее распространенным в данной группе заболеваний является трансмиссивная венерическая саркома (М.В. Назаров, 2004).

В соответствии с данными П.Ф.Терехова, 1983; Г.Ниманда Ханса, Ф.Сутера Петера, 1998; Г.П. Дюльгера,2002; В.П. Гончарова, Д.А.Черепахина,2004 - трансмиссивная венерическая саркома новообразование, локализующееся на слизистой оболочке преддверия влагалища и полового члена, характеризующееся единичными или множественными разрастаниями мягкой консистенции, склонных к изъязвлению и метастазированию.

Малоизученными, несмотря на имеющиеся исследования в данном направлении, остаются этиологические факторы, способствующие развитию заболевания, в связи с чем затруднена ранняя диагностика, лечение и профилактика данного заболевания. Трансмиссивная венерическая саркома у собак обычно бывает чаще, чем диагностируется, так как объективные клинические симптомы (кровотечение, изъязвление, изменение анатомического строения половых органов) проявляются только в стадии, когда новообразование поражает основную часть половых органов.

Быстрое развития осложнений (некроз тканей), отсутствие признаков воспаления, иммунологический характер патогенеза при данном заболевании (D.Cohen., 1973; E.I.Amberand, R.A. Henderson, 1982; A.Mendez, 1996) и отсутствие четкого представления о взаимосвязи между клинической картиной трансмиссивной венерической саркомы, свидетельствуют о необходимости исследования картины заболевания в сочетании с клинико- гематологическими и морфологическими показателями больного животного.

В тоже время, несмотря на большую повторяемость данной патологии у собак, до сих пор не определены причины возникновения и развития трансмиссивной венерической саркомы, не изучены диагностические критерии и не разработаны эффективные методы лечения и профилактики. Лечение трансмиссивной венерической саркомы до настоящего времени не является комплексным, а лишь основано на отдельных приемах и методах: не определены схемы использования препаратов, дозы, длительность их применения, их эффективность. Это подтверждается в основном неудовлетворительными результатами лечения, приводящими зачастую к рецидивам в регионарных лимфатических узлах.

Исходя из вышеизложенного, возникает настоятельная необходимость в разработке эффективной системы научно-обоснованного подхода к вопросам диагностики, лечения и профилактики трансмиссивной венерической саркомы.

Цель н задачи исследования. Основная цель настоящей работы состоит в том, чтобы на основе различных сторон этиопатогенеза трансмиссивной венерической саркомы, усовершенствовать лечебно-профилактические

мероприятия при указанной патологии у собак, для чего изучить новое лекарственное средство наружного применения. Исходя из цели исследования, были поставлены следующие основные задачи:

- изучить новый, эффективный препарат для терапии трансмиссивной венерической саркомы у собак;

- изучить основные фармако-токсикологические характеристики препарата;

- определить лечебную эффективность препарата при трансмиссивной венерической саркоме у собак;

- изучить внедрение в практику ветеринарных клиник нового комплексного метода лечения собак с трансмиссивной венерической саркомой;

- определить отдельные аспекты этиологии и патогенеза трансмиссивной венерической саркомы у собак, а также направления профилактики и терапии указанной патологии.

Научная новизна. Апробирован новый препарат (Патент РФ № 2283123), изучены фармако-токсикологические свойства и определено лечебное действие экстракта цветов кампсиса (Campsis (Z) Seem) семейства бегониевых при трансмиссивной венерической саркоме у собак. Разработана схема комплексного лечения при трансмиссивной венерической саркоме у собак.

Теоретическая и практическая значимость. На основании проведённых исследований предложен новый эффективный препарат - экстракт цветов кампсиса для комплексного лечения трансмиссивной венерической саркомы у собак.

Основные положения, выносимые на защиту:

Комплексный метод лечения собак с трансмиссивной венерической саркомой;

- результаты клинических и гематологических исследований у собак с трансмиссивной венерической саркомой;

- фармако-токсикологическая оценка экстракта цветов кампсиса для лечения трансмиссивной венерической саркомы у собак.

Объект и предмет исследования. Объектом исследований являются собаки, предмет исследования эффективный препарат экстракт цветов кампсиса для лечения трансмиссивной венерической саркомы.

Апробация результатов исследований. Материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на ученых советах Краснодарского научно -исследовательского ветеринарного института в течение 2010 - 2012 гг., на международной научно - практической конференции «Актуальные проблемы современной ветеринарии», посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани (г. Краснодар - 2011г.), на международной научно - практической конференции «Опыт международного сотрудничества в области экологии, лесного хозяйства, ветеринарной медицины и охотоведения» посвященной 90 - летию со дня образования Кубанского государственного аграрного университета (г. Краснодар -2011), на международной научно-практической конференции, посвященной 35-летию факультета ветеринарной медицины Кубанского государственного аграрного университета (г. Краснодар - 2009г.).

Публикации. Основные материалы диссертации опубликованы в 4-х печатных работах, в том числе одна в рецензируемом издании, рекомендованном ВАК России - «Труды Кубанского государственного аграрного университета».

Структура и объём диссертационной работы. Диссертация изложена на 170 страницах машинописного текста в компьютерном варианте и состоит из

введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, выводов, практических предложений, библиографического списка и приложений. Список литературы включает 134 источник, в том числе 43 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 33 таблицами, 23 рисунками, 1 диаграммой.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнялась в лаборатории фармакологии Краснодарского научно -исследовательского ветеринарного иститута в 2008- 2011 гг. Фармако-токсикологические исследования проведены при техническом содействии кандидата ветеринарных наук С.Н. Поветкина. Клинико - морфологические исследования проводились на кафедре анатомии сельскохозяйственных животных Кубанского ГАУ при участии доцента, кандидата ветеринарных наук В.И. Кравченко.

Характеристика больных животных.

Первостепенной задачей этого раздела являлось изучение целого ряда признаков характеризующих больных собак с трансмиссивной венерической саркомой. Учитывая, что патология половых путей встречается преимущественно у взрослых животных, принадлежащих к обоим полам, породистых и непородистых, имеющих различный возраст и массу, для проведения исследования была отобрана группа животных в количестве 30 собак в возрасте от 2 до 15 лет, поступивших в клинику «Доверие» (филиал ЮМР) г. Краснодара с клиническими признаками трансмиссивной венерической саркомой различной степени тяжести, имеющих сходное кормление и содержание. Все животные принадлежали частным лицам, послеоперационный уход, кормление и содержание собак осуществляли владельцы под нашим контролем, согласно данным рекомендациям.

Характеристика исследований

Цель исследований - изучить клиническую картину, клинико-морфологические и биохимические показатели крови, гистологические показатели при трансмиссивной венерической саркоме.

В ходе нащей работы, применялись клинические и лабораторные методы диагностики (по С.Ф. Назимкиной, 2006):

> Сбор анамнеза;

> Клиническое исследование животного;

> Исследование зоны патологического процесса;

> Клинико-морфологическое исследование крови;

> Биохимическое исследование крови;

> Гистологическое исследование.

Сбор анамнеза собак больных трансмиссивной венерической саркомой.

При диагностике опухолей, как и других заболеваний, большое значение имеет анамнез. При выполнении работы тщательно собирались данные анамнеза, которые затем анализировались по следующим показателям:

> Возраст животного;

> Порода;

> Характер половых циклов (у сук);

> Возможный коитус;

> Наличие патологических выделений из влагалища (у сук) или препуциального мешка (у кобелей);

> Состояние животного на момент обращения в клинику;

> Особенности клинической картины заболевания.

Клиническое исследование животного

Клиническое исследование животного проводилось по следующим показателям:

> Измерение температуры тела;

> Пульса;

> Дыхания;

> Состояния лимфатических узлов;

> Упитанность животного;

> Наличие или отсутствие аппетита.

Исследование зоны патологического процесса

При обследовании наружных половых органов собак, опухоль обнаруживали довольно легко, вследствие анатомических особенностей расположения половых органов и специфических особенностей данной опухоли. Пальпацией определяли:

> Консистенцию опухоли;

> Характер поверхности опухоли;

> Границы опухоли и ее отношение к окружающим тканям;

> Наличие первичной множественности опухоли;

> Наличие метастазов.

Клинико-морфологическое исследование крови

Клинико-морфологический анализ служил для определения качественного и количественного состава крови, который проводили по общепринятым методикам до лечения, на 7-ой, 14-й и 28-й дни лечения.

Биохимическое исследование крови

Кровь для исследования получали натощак из поверхностной вены предплечья. Сыворотку отделяли после свертывания крови и центрифугировали в течение 15 минут при 2 тыс. оборотов в минуту.

При определении биохимических показателей использовали сыворотку без признаков гемолиза. Биохимическое исследование проводили при помощи автоматического биохимического анализатора марки Sinchron-4 Фирмы Bekman.

Полученные результаты обрабатывали методом вариационной статистики с использованием программы Statgraphics 5 Plus.

Гистологические исследования

Для гистологического исследования использовались срезы опухолей, взятые до и после лечения.

Образцы фиксировались в 10%-ном нейтральном формалине, затем промывали в проточной воде в течение суток, обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации (от 50 до 100 градусов) и заливали в парафин (Г.А.Меркулов, 1963; Р.Лилли, 1978; Х.Луппа, 1980; Л.В.Кактурина и др., 1997). Парафиновые срезы изготавливали на микротоме "Reichert"(ABCTpHa). Исследования в световом микроскопе (МБИ-15) проводили после окраски срезов гематоксилином и эозином.

Все новообразования были классифицированы согласно Международной классификации опухолей домашних животных (ВОЗ, 1975).

Методы лечения трансмиссивной венерической саркомы у собак.

В соответствии с разработанными схемами лечения опухолей трансмиссивной венерической саркомы, животные были разделены на три группы.

Для лечения собак первой группы применяли противоопухолевый препарат «Винкристин» (Onkovin) - алколоид, выделенный из растения Vincarocea, действие его, обусловлено способностью связываться с молекулами тубулина, тормозить образование митозного веретена и блокировать митоз.

По этой схеме пролечено 10 собак. Препарат вводили в дозе 0,03мг/кг, разведенного в 50 мл5% раствора глюкозы внутривенно один раз в неделю. Для достижения полной регрессии опухоли проводили 4-5 курсов лечения.

Во второй группе (10 собак) использовали лекарственный препарат, разработанный преподавателями кафедры ветеринарного акушерства и хирургии Кубанского ГАУ совместно с сотрудниками Краснодарского НИВИ (Патент РФ № 2283123) - экстракт цветов кампсиса во время операции, через 72 часа, на 7 и 14 день после операции.

Цветы кампсиса (Campsis (Z) Secm) семейства бегониевых предварительно измельчали, помещали в стеклянную ёмкость, заливали нашатырным спиртом в соотношении 2:1 и настаивали в течение 30 суток при постоянной температуре 16 -20°С. По истечении указанного срока жидкость из ёмкости сливали, процеживали и хранили в течение 1 года в тёмном месте при температуре не выше 25°С.

В полученном препарате смачивали стерильные марлевые салфетки.

Активно действующими веществами являются алкалоиды, эфирные масла, дубильные вещества, обеспечивающие в сочетании антимитозное действие на опухолевые клетки, сужение сосудов с нарушением трофики клеток и тканей в зоне поражения без вредного влияния на здоровые клетки.

Перед оперативным вмешательством животное выдерживали в течение 12 часов на голодной диете, готовили операционное поле по Филончикову- выбривали волосы, протирали кожу тампоном с йодированным спиртом и двукратно смазывали 5%-ным спиртовым (раствором йода. Фиксировали в спином или в боковом положении, покрывали стерильной простыней. Для обезболивания использовали препарат «Рометар» в дозе - 0,15 мл/кг. За 10 минут до введения наркоза делали премедикацию 0,5 %-ным раствором атропина сульфата. Проводили инфильтрационную анестезию по Вишневскому 0,5%-ным раствором новокаина по месту предстоящего разреза и у основания опухолевых узлов. В уретру вводили катетер. Хирургический доступ осуществляли по линии промежности у самок. Опухолевые узлы удаляли в пределах здоровых тканей. С целью предотвращения рецидивов, на прооперированный участок применяли тампоны, смоченные в экстракте цветов кампсиса, на края слизистой оболочки накладывали швы из кетгута. Через 72 часа после операции, на 7-ой, 14-й день для профилактики роста опухолевых клеток вводили дренаж, смоченный в экстракте цветов кампсиса на 3 - 5 минут во влагалище у самок и вокруг пениса у самцов.

В третьей (контрольной) группе пролечили 10 собак хирургическим способом по общепринятой методике. Кровотечение останавливали лигированием сосудов.

С целью профилактики развития раневой инфекции животным 2 и 3 группы вводили цефалоспориновый антибиотик «Цефазолин» (Cefazolin) по 0,25 г или 0,5 г внутримышечно 2 раза в сутки 5 дней в зависимости от массы.

Для нахождения параметров острой токсичности препарата использовали метод Deichmann & Le Blanc (1943), позволяющий использовать небольшое

количество животных.

Оценку токсичности экстракта цветов кампсиса проводили согласно «Методическим указаниям по токсикологической оценке новых препаратов для лечения и профилактики незаразных болезней животных», утверждённым директором ВНИИ незаразных болезней, профессором В.Т. Самохиным, 29 января 1987 г.

На первом этапе исследовали общее состояние животных и формировали их по принципу аналогов в специальные группы. За животными осуществляли клинические наблюдения. При этом особое внимание уделяли животным, у которых наблюдалась трансмиссивная венерическая саркома.

Хроническую токсичность определяли по методу Lim (1961). Изучение субхронической активности проводилось на 30 белых крысах подобранных по принципу пар-аналогов. Препарат применяли наружно ежедневно в течение 30 дней..

Влияние экстракта цветов кампсиса на интенсивность роста животных определяли по динамике живой массы мышей. Взвешивание проводили до опыта и далее каждые 10 дней.

Воздействие экстракта цветов кампсиса на печень, почки, некоторые иммунокомпетентные органы определяли путём патологоанатомического вскрытия трупов мышей, подвергнутых убою методом декапитации по завершении курса препарата.

Изучение влияния экстракта цветов кампсиса на некоторые показатели белкового, липидного и минерального обменов проводили в серии опытов на интактных кроликах и крысах по общепринятой методике. Сыворотку крови исследовали на содержание общего белка, белковых фракций, липопротеидов низкой плотности (ЛПНП), кальция и фосфора.

Оценку влияния экстракта цветов кампсиса на неспецифическую резистентность организма животных проводили на основании оценки динамики бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови, содержания белков у -глобулиновой фракции, сиаловых кислот в сыворотке крови, морфометрических показателей некоторых иммунокомпетентных органов, полученных в серии опытов на животных различных видов (кролики, крысы, мыши).

Изучение аллергизирующего действия экстракта цветов кампсиса проводили путём воспроизведения местных аллергических реакций, феномена Артюса-Сахарова, скарификационного теста, и анафилактического шока.

Влияние экстракта цветов кампсиса на течение регенеративных процессов при воспалении изучены на белых крысах. Всем животным под эфирным наркозом делали разрез кожи и в подкожную клетчатку вводили стерильные пластмассовые бусины. В течение 14 дней подряд, опытной группе животных с кормом задавали экстракт цветов кампсиса. Контрольной группе препарат не назначали. По массе образовавшейся ткани судили о влиянии препарата на пролиферацию.

Изучение влияния экстракта цветов кампсиса на эмбриональное развитие и генеративную функцию животных проводились на белых крысах. В опытной группе со дня подсадки к самкам самцов, ежедневно наружно наносили настой цветов кампсиса. В контрольной группе назначали только основной рацион. На 1720 день беременности половину беременных самок каждой группы убивали декапитацией. Яичники этих крыс осматривали на наличие патологий, взвешивали и подсчитывали число жёлтых тел в них. По полученным данным высчитывали

процент пред- и постимплантационной гибели эмбрионов. Для обнаружения внешних уродств плодов их осматривали с помощью лупы и микроскопов. После рождения крысят у оставшихся беременных крыс определяли количество плодов, из них число живых и мёртвых, наличие аномалий и уродств. После окончания лактации часть потомства убивали, подвергали внешнему обследованию, изучали состояние внутренних органов и скелета. Полученный цифровой материал подвергали статистической обработке.

Морфометрию гистологических структур проводили при помощи окуляр-микрометра. Расчёт осуществляли по формуле: ш = (а х с) : в, где а - число делений объект-микрометра, в - число делений окуляр-микрометра, с - величина одного деления объект-микрометра (в мкм или мм). Одно деление объект-микрометра для окуляра 7 и объектива 3,5 составляет 32 мкм, для окуляра 7 и объектива 8 составляет 14 мкм, для окуляра 7 и объектива 20 составляет 5,5 мкм, для окуляра 7 и объектива 40 составляет 2,9 мкм (1 мкм = 0,001 мм).

Экономическую эффективность лечебно-профилактических мероприятий рассчитывали по «Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» (1997) и согласно «Методическим рекомендациям по определению общего экономического эффекта от использования результатов научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ в Агропромышленном комплексе» (2007).

Полученные экспериментальные данные были подвергнуты статистическому анализу по методике Н.А. Плохинского (1978).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Факторы риска возникновения трансмиссивной венерической саркомы у собак

Трансмиссивная венерическая саркома регистрируется преимущественно у молодых половозрелых собак. Проведенные исследования позволили сделать предположение о наличии определенных групп риска в отношении трансмиссивной венерической саркомы в зависимости от возраста, веса, породных и половых особенностей собак.

Согласно полученным данным заболеванию трансмиссивной венерической саркомой подвержены собаки всех возрастов, однако, наибольший пик заболеваемости приходится на период наибольшей половой активности от 3 до 7 лет.

Чаще (53,3 %) подвержены заболеванию трансмиссивной венерической саркоме собаки со средней живой массой от 20 до 40 кг.

Результаты исследования показали, что чаще всего трансмиссивную венерическую саркому регистрирует у немецкой овчарки (10 %), восточно -европейской овчарки ( 10 %), менее распространено у бультерьеров ( 6,7 %), лайки (2 %), чау - чау (3,3 %), в то время как среди беспородных собак уровень заболеваемости регистрируется у 20 %.

Заражению трансмиссивной венерической саркоме подвержены все собаки вне зависимости от возраста и пола. Поэтому в ходе дальнейшего исследования данной патологии, мы сделали предположение о наличии определенных групп риска, в отношении полового признака.

Данные, представленные в таблице 1 указывают на то, что трансмиссивная венерическая саркома регистрируется чаще у сук.

Таблица 1 - Частота возникновения трансмиссивной венерической

саркомы в зависимости от пола животных

Полживотного Количество больных(в абсолютных величинах) Количество больных(в относительных величинах) %

кобели 9 30

суки 21 70

Всего 30 100%

Изучая интенсивность заболевания в зависимости от обращения в клинику установлено, что животные, которые обращались в клинику на ранних сроках проявления болезни, реагировали на лечение более эффективно. Данный факт можно объяснить тем, что ввиду небольших размеров новообразования, оно не оказывало достаточно сильного патологического воздействия на организм.

Животные с клиническими признаками: апатии, лихорадочного состояния, наличия кровянистых выделений с неприятным запахом, т.е. на более поздних сроках, для получения удовлетворительного результата требовали более длительного срока проведения лечебных мероприятий.

3.2. Особенности клинической картины у собак больных трансмиссивной венерической саркомой

При сборе анамнеза обращали основное внимание на характер половых циклов у сук, т.к. именно в период течки происходит половой контакт самки и самца, что может повлечь за собой заражение трансмиссивной венерической саркомой. Иногда от владельцев нелегко добиться ответов на вопрос о наличии последней течки или же о возможном коитусе, что связано с невнимательным отношением к животному. В этом случае надо иметь четкую схему проведения клинического акушерско-гинекологического исследования. В данной работе была разработана схема, которая может объяснить продолжительность течения данного заболевания, так как время при данной патологии играет большую роль.

Схема акушерско-гинекологического исследования

> Кличка животного, ФИО и адрес владельца;

> возраст, тип содержания, вакцинация;

> порода;

> сроки последней течки (у сук);

> продолжительность течки;

> характер выделений;

> при выявлении каких-либо изменений определить момент их возникновения и возможные причины;

> наличие возможного коитуса;

> наличие жалоб со стороны владельца (наличие выделений из влагалища у сук и из препуция у кобелей;

> момент начала заболевания;

> проведение дополнительных исследований.

Сбор анамнеза по данной схеме проводился в процессе обследования животных. Из схемы явствует, что при постановке диагноза основная роль отводилась именно полному сбору анамнеза, так как он являлся основой для постановки диагноза выбора метода лечения.

3.2.3.Клинические признаки трансмиссивной венерической саркомы у собак

Больные собаки имели температуру, находящуюся в пределах границ физиологической нормы. Выраженных изменений частоты пульса и количества дыхательных движений не отмечено.

При клиническом исследовании наружных половых органов, опухоли трансмиссивной венерической саркомы обнаруживали легко, вследствие анатомических особенностей расположения половых органов и специфических особенностей данной опухоли.

Симптомы заболевания заключались в следующем:

Опухоль трансмиссивной венерической саркомы локализовалась на слизистой оболочке преддверия влагалища у сук и на слизистой оболочке пениса и препуция у кобелей. Трансмиссивная венерическая саркома проявлялась в виде округлых рыхлых изъязвленных образований от серого до красновато-бурого цвета имеющих вид цветной капусты или малины, размером от нескольких миллиметров и доходящих до 12 сантиметров. Обнаружение новообразования всегда сопровождалось капельными, кровянистыми выделениями.

Анализируя данные клинической картины у больных животных, мы обнаружили: что у сук опухоли располагались в основном в мочеполовом преддверии у 100% больных животных. В некоторых случаях (28,6 %) опухоль располагалась только в области клитора. У 23,8 % больных животных опухоль располагалась только на нижней стенке преддверия влагалища, тогда как у 9,5 % сук опухоль располагалась в области наружного отверстия уретры и на нижней стенке преддверия влагалища. В этих случаях процесс мочеиспускания был затруднен из-за давления опухоли на уретру. У 4,8 % больных сук опухоль располагалась на верхней стенке преддверия, а у 9,5 % опухоль располагалась на верхней стенке преддверия и в области клитора. На боковых стенках и стенке уретры - опухоль обнаружили у 19,0 % больных, а у 4,8 % опухоль располагалась на нижней, верхней стенках преддверия и в области клитора. Клинически это выражалось выпячиванием и удлинением промежности, если имели место большие размеры опухоли. У животных наблюдались отек, болезненность, гиперемия наружных половых органов. Из половой щели выделялся экссудат коричнево-красного цвета с резким неприятным специфическим запахом. У 52,4 % сук опухоль была видна в просвете половой щели.

При пальпации, опухоли легко травмировались с отделением с поверхности кусочков опухолевой ткани.

Данные динамики клинических наблюдений у кобелей, показывают, что опухолевые разрастания находились у основания полового члена у 44,4 % собак, а у основания полового члена и стенке свода препуция у 33,3% животных.

Клинически это выражалось в виде утолщения в области препуция. Наблюдались отек, болезненность, гиперемия слизистой оболочки полового члена и препуция. У 33,3% собак диагностировали участки изъязвления кожи в месте соприкосновения с новообразованием. Окружающие ткани препуция болезненные,

покрасневшие, отечные из-за постоянных расчесов и разлизывания. Из препуция выделялся экссудат коричнево-красного цвета со специфическим, неприятным запахом.

Представляет определенный интерес клиническая картина трансмиссивной венерической саркомы у 22,3 % кобелей, у которых наблюдалось диффузное тотальное поражение слизистой оболочки полового члена и препуциального мешка и кожи препуция. Таким образом, клиническое проявление трансмиссивной венерической саркомы многообразно. Специфической особенностью являлось поражение у сук чаще всего преддверия влагалища с локализацией на уретре, клиторе, стенках преддверия. Клинически это выражалось выпячиванием и удлинением промежности с геморрагическими или гнойными выделениями из половой щели.

У кобелей опухолевые узлы находились в основном на слизистой оболочке основания полового члена и стенке препуция. Клинически это выражалось утолщением в области препуция с геморрагическими и гнойными выделениями из препуция.

3.3. Экспериментальные и клинические исследования по разработке,

применению и изучению свойств экстракта кампсиса (Campsis (Z) Seem) 3.3.1. Разработка и характеристика препарата

Экстракт цветов кампсиса - препарат светло - розового цвета с тонким, слегка улавливаемым специфическим запахом, срок хранения экстракта 1 год в тёмном прохладном месте ripnt= от+5 до+20°С; препарат не пожароопасен. Не обладает токсичным и раздражающим действием в рекомендуемых для применения концентрациях. Препарат хорошо сочетается с другими средствами и способами терапии. Препарат на слизистые оболочки и кожу действует смягчающе, рассасывающе, болеутоляюще, противовоспалительно, кератопластически, стимулирует регенеративные процессы, повышает локальную резистентность.

Экстракт цветов кампсиса безвреден и не вызывает раздражения при длительном применении.

Основными активно действующим компонентами экстракта цветов кампсиса являются: алкалоиды, эфирные масла, дубильные вещества, обеспечивающие в сочетании антимитозное действие на опухолевые клетки, сужение сосудов с нарушением трофики клеток и тканей в зоне поражения без вредного влияния на здоровые клетки.

Препарат получают следующим образом: цветы кампсиса (Campsis (Z) 8еет)семейства бегониевых предварительно измельчали, помещали в стеклянную ёмкость, заливали нашатырным спиртом в соотношении 2:1 и настаивали в течение 30 суток при постоянной температуре 16 - 20°С. По истечении указанного срока жидкость из ёмкости сливали, процеживали и хранили в течение 1 года в тёмном месте при температуре не выше 25°С.

3.3.2. Токсикологическая оценка экстракта цветов кампсиса 3.3.2.1 Изучение острой токсичности препарата

В опыт было взято 40 белых мышей живой массой 20-22 г. Сформировали 4 аналогичные группы. Мышам первой опытной группы однократно внутрь, посредством металлического зонда ввели 1 мл (максимально допустимый для

однократного перорального введения объём) исследуемого препарата, мышам второй группы однократно подкожно, в 5 разных точек ввели 1 мл препарата. Мышам двух контрольных групп по аналогичной схеме применяли 0,5%-ный раствор нашатырного спирта для исключения влияния его высоких доз на результаты эксперимента. Наблюдение за состоянием животных вели, обращая внимание на общее состояние, активность, аппетит, местную реакцию на месте введения препарата; на 2 сутки и на 5 сутки брали кровь для исследований, до введения препарата и по завершении срока наблюдения животных взвешивали. По завершении опыта все животные были убиты методом декапитации, было проведено патологоанатомическое вскрытие.

Полученные результаты свидетельствуют об отсутствии токсического действия экстракта цветов кампсиса на организм мышей при энтеральном и парентеральном его применении в максимально допустимых для однократного введения дозах. Кратковременное угнетение и понижение аппетита у животных опытных и контрольных групп при энтеральном применении экстракт цветов кампсиса объясняется единовременным введением больших объёмов питательных субстратов.

Анализ показателей крови животных показывает, что количество эритроцитов и гемоглобина на протяжении опыта оставалось на одном уровне, составляя 7,27±0,08 млн/мм3 и 196±0,4 г/л, соответственно. Количество лейкоцитов на вторые сутки после введения экстракта цветов кампсиса и 0,5%-ного раствора нашатырного спирта животным опытных и контрольных групп увеличилось. В первой опытной группе животных, на 200 тыс. на мм3 (2,4%), в первой контрольной на 400 тыс. на мм3 (4,6%), во второй опытной группе на 400 тыс. на мм3 (4,6%), во второй контрольной на 500 тыс. на мм3 (5,7%). На 10 сутки от начала опыта количество лейкоцитов понизилось до исходных данных. Количество эозинофилов и базофилов на вторые сутки после введения экстракта цветов кампсиса и 0,5%-ного раствора нашатырного спирта также увеличилось, достигнув в группах животных, которым вводили препараты парентерально, 4 и 5 % эозинофилов и 3 % базофилов соответственно, но оставаясь в пределах физиологических норм.

По завершении эксперимента, все мыши были убиты методом декапитации и проведено патологоанатомическое вскрытие всех животных опытных и контрольных групп. Макроморфологическая картина органов мышей опытной и контрольной групп была идентична и соответствовала здоровым животным.

Таким образом, разработанный препарат в максимально допустимых для однократного введения дозах не вызывает гибели мышей. Полулетальная доза (ЬО50) не была установлена, так как в максимально допустимых для однократного введения дозах отрицательной местной и общей реакции, случаев падежа животных опытных и контрольных групп отмечено за период наблюдения не было.

3.3.2.2. Изучение хронической токсичности

При анализе полученных результатов, мы установили, что масса мышей до опыта составляла в среднем 20,9±0,28 г. Спустя 10 дней данный показатель увеличился в опытной группе на 6,78 %, составив 22,53±0,35 г, в группе положительного контроля на 17,81 %, составив 24,74±0,34 г, а в группе отрицательного контроля на 9,63 %, составив 23±0,36 г соответственно. На 20 день

масса животных увеличилась на 19,4 %, 29,2% и 21 % соответственно по отношению к данным предыдущего взвешивания, составив 26,9±0,34 г, 31,9±0,38 г, 27,83±0,32 г.

По завершении курса применения препарата все мыши были подвергнуты убою путём декапитации, было проведено патологоанатомическое вскрытие трупов и измерение массы и линейных размеров некоторых паренхиматозных органов (печень, селезёнка).

Таблица 2. Динамика живой массы мышей на фоне применения

экстракта цветов кампсиса (М±т)

Группы животных Средняя масса мышей, г

До опыта 10 дней 20 дней

Опытная группа (п=10) 21,1 ±0,24 22,53±0,35* 26,9±0,34*

Группа положительного контроля(п=10) 20,77±0,24 24,74±0,34 31,9±0,38"

Группа отрицательного контроля(п=10) 20,85±,027 23±0,36 27,83±0,32

Примечание:

• * - степень достоверности Р < 0,05 по отношению к данным положительного контроля

• * - степень достоверности Р < 0,05 по отношению к данным отрицательного контроля

При патологоанатомическом вскрытии трупов мышей патологических изменений внутренних органов выявлено не было. Линейные размеры и масса некоторых паренхиматозных органов (селезёнка, печень) мышей опытной группы были меньше, чем в контрольных группах.

Наименьшие относительные массы селезёнки и печени были у животных опытной группы и составляли 0,37 % и 3,9 % соответственно, против 0,56 и 4,41 % в группе положительного контроля и 0,43 и 4,04 % в группе отрицательного контроля. Линейные размеры данных органов соответствуют их массам и минимальны в опытной группе.

Полученные результаты позволяют сделать вывод об отсутствии патологоанатомических изменении на фоне длительного применения экстракта цветов кампсиса в дозах, превышающих терапевтическую, но при этом понижаются привесы, снижается физическая выносливость и уменьшаются масса и линейные размеры селезёнки и печени.

3.3.3. Фармакологические свойства экстракта цветов кампсиса 3.3.3.1. Изучение воздействия препарата на белковый, жировой и минеральный обмены веществ

Изучение влияния экстракта цветов кампсиса на некоторые показатели белкового, липидного и минерального обменов проводили в серии опытов на интактных кроликах и крысах.

Содержание и соотношение кальция и фосфора в сыворотке крови животных, получавших экстракт цветов кампсиса, на протяжении опыта оставалось в пределах физиологической нормы. Содержание кальция увеличилось с 15,25±0,22 до 17,75±0,55 мг/мл. Содержание фосфора соответственно увеличилось с 9,5±0,4 до 12,5±0,4 мг/мл, соотношение кальция и фосфора до опыта составляло 1,6:1, на четырнадцатые сутки эксперимента 1,45:1. Полученные данные свидетельствуют

об оптимальном протекании минерального обмена у животных опытной группы.

Содержание общего белка в сыворотке крови кроликов опытных и контрольных групп на протяжении эксперимента оставалось в пределах физиологической нормы, разница в его содержании была недостоверна.

В опытной группе содержание альбуминов в сыворотке крови оставалось на одном уровне, колебания значений не превышали 0,25 %. Содержание у -глобулинов в сыворотке крови кроликов группы отрицательного контроля на протяжении опыта понизилось с 21,2 % до 17,6 %, в группе положительного контроля осталось на прежнем уровне, в опытной группе повысилось с 20,8 % до 21,4 %. Полученные данные свидетельствуют об оптимальном протекании белкового обмена животных опытной группы.

Результаты, полученные в данной серии опытов, показывают, что благодаря оптимальному составу экстракта цветов кампсиса интенсификация роста животных не сопровождается нарушениями белкового, минерального и липидного обменов.

Содержание гемоглобина в крови крыс различных групп достоверно не отличалось.

На основании вышеописанных данных можно предварительно сделать вывод, что применение экстракта цветов кампсиса лабораторным животным способствует оптимизации некоторых показателей белкового и липидного обменов.

3.3.3.2. Изучение влияния экстракта цветов кампсиса на показатели неспецифической резистентности

Содержание общего белка в сыворотке крови кроликов опытной и контрольных групп на протяжении опыта достоверно не отличалось. Доля белков ^-глобулиновой фракции в сыворотке крови кроликов группы отрицательного контроля понизилась с 21,2±0,6 % до 17,6±0,5 %, в сыворотке крови животных группы положительного контроля и опытной группы достоверно не изменилась.

Бактерицидная активность сыворотки крови кроликов опытной группы увеличилась с 16,3±0,74 до 21,4±0,75 %. Лизоцимная активность сыворотки крови кроликов группы отрицательного контроля на протяжении опыта достоверно не отличалась, кроликов группы положительного контроля увеличилась с 5,7±0,31 до 6,9±0,26 %, кроликов опытной группы увеличилась с 5,8±0,34 до 7,3±0,3 %.

Содержание сиаловых кислот в сыворотке крови кроликов опытной группы достоверно понизилось за 14 дней опыта с 2,010,2 до 1,6±0,31 моль/л. Лизоцимная активность сыворотки крови крыс на момент завершения опыта в группе отрицательного контроля увеличилась с 19,5±0,36 до 21±0,46%, в группе положительного контроля с 20,0±0,48 до 24,45±0,24%, в группе крыс, получавших настой цветов кампсиса, с 20,1±0,32 до 26,04±0,29%. Уровень бактерицидной активности сыворотки крови животных группы отрицательного контроля на протяжении опыта достоверно не отличался,у животных группы положительного

контроля увеличился с 21,2±0,34 до 26,31 ±0,21%, в группе животных, получавших экстракт цветов кампсиса, с 21,15±0,27 до 28,3±0,22%.

Анализ результатов исследования сыворотки крови крыс показал увеличение содержания сиаловых кислот на 10 % в группе отрицательного контроля, в группе положительного контроля и опытной группе содержание сиаловых кислот понизилось. В группе положительного контроля на 13 %, понизившись с 1,7±0,1 до 1,5±0,16 моль/л, в группе животных, получавших экстракт цветов кампсиса на 26 %, понизившись до 1,5±0,14 моль/л, против 1,9±0,14 моль/л до начала опыта.

Таким образом, на фоне применения экстракта цветов кампсиса молодняку и взрослым животным в пределах норм увеличивается бактерицидная и лизоцимная активность сыворотки крови, содержание белков /-глобулиновой фракции, что свидетельствует о повышении неспецифической резистентности на фоне применения экстракта цветов кампсиса.

Понижение концентрации сиаловых кислот, являющихся строительными материалов белков, структурных полисахаридов, косвенно свидетельствует о резистентности биологических мембран, уравновешивании процессов деполимеризации и синтеза основного вещества соединительной ткани, что препятствует их повреждению при воздействии агрессивных факторов внешней среды и косвенно свидетельствует о повышении адаптационных возможностей организма.

Исследованиями также установлено, что применение экстракта цветов кампсиса мышам вызывает физиологическую гиперплазию печени и селезёнки, что косвенно свидетельствуют о более высоких уровнях кроветворения и иммунной защиты.

3.3.3.3. Влияние препарата на гематологические показатели

В результате проведенных исследований установлено, что в опытной группе количество эритроцитов составило 7,61 * 10|2/л, в группе положительного контроля количество эритроцитов составило 7,5*1012/л, что меньше отрицательного контроля соответственно на 1,05 и 2,49%. При этом содержание гемоглобина меньше контроля в опытной группе на 3,63%, в группе положительного контроля -на 2,52%. СОЭ в при этом в опытной группе составляет 3,3±0,25 мм/ч, в группе положительного контроля - 2,9+1,23 мм/ч, что превышает показатели группы отрицательного контроля на 18,1 и 12,12 %.

Также, из опыта явствует, что показатели крови в опытной группе и группе положительного контроля - уровень лейкоцитов, палочкоядерных нейтрофилов и лимфоцитов - немного ниже показателей в группе отрицательного контроля. Количество лейкоцитов в опытной группе составляет 9,77+1,4 млн/мкл, в группе положительного контроля - 9,89+0,7 млн/мкл, что на 7,48 и 6,34 % меньше по сравнению с группой отрицательного контроля. Уровень палочкоядерных нейтрофилов при этом меньше по сравнению с группой отрицательного контроля в опытной группе на 26,66%; в группе положительного контроля - на 16,66%. Уровень лимфоцитов также немного меньше по сравнению с группой отрицательного контроля в опытной группе - на 14,15 %, в группе положительного контроля - на 4,72 %. Параллельно с этим отмечены более высокие показатели сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов по сравнению с группой отрицательного контроля. В опытной группе сегментоядерные нейтрофилы выше на 35,76%, в группе положительного контроля - на 15,77%; при этом моноциты в

опытной группе составляют 0,1±0,01 %, в группе положительного контроля -0,2±0,01 %, что соответствует по показателям в группе отрицательного контроля.

3.3.3.4. Изучение аллергизирующего действия экстракта цветов кампсиса

Изучение аллергизирующего действия экстракт цветов кампсиса проводили путём воспроизведения местных аллергических реакций (феномена Артюса-Сахарова, скарификационного теста) и анафилаксического шока.

Опытами первой серии установлено, что исследуемый препарат не вызывает феномена Артюса-Сахарова.

При этом у всех опытных животных после шестикратного введения раствора экстракта цветов кампсиса, характерных для геморрагического воспаления признаков отёков и уплотнений на месте инъекций не отмечалось. Лишь сразу после инъекций в этих местах образовывались небольшие инфильтраты, размером с маленькую горошину и отёк, вызванный травматическим повреждением иглой, который рассасывался в течение 3-24 часов.

При клинических наблюдениях во второй серии опытов в течение 3 суток у опытных животных в местах скарификации не выявлено признаков характерных для аллергического воспаления.

Во всех случаях отмечали лишь кратковременную гиперемию в течение 3-4 часов. В контрольной группе животных воспалительных явлений не выявлено.

Таким образом, проведенные аллергизирующие тесты показали, что препарат экстракт цветов кампсиса не обладает аллергизирующими свойствами.

3.3.3.5. Влияние экстракта цветов кампсиса на регенеративные

процессы и заживление ран

Установлено, что масса грануляционной ткани в группе животных, получавших экстракт цветов кампсиса, составила 7,8 ± 0,8 мг, тогда как в контроле он равнялся 6,3±0,4 мг, то есть в опытной группе на 1,5мг больше, чем в контрольной.

Назначение экстракта цветов кампсиса опытным крысам положительно влияло на ход заживления ран. Полное заживление раны происходило на 8-9 день эксперимента, тогда как в контроле на 13 -15 день.

Значительно быстрее эпителизация раневой поверхности и рост грануляций протекали в опыте, чем в контроле. Общее состояние и поведение опытных и контрольных крыс также не отличались между собой.

Таким образом, экстракт цветов кампсиса положительно влиял на заживление ран у белых крыс.

3.3.3.6. Эмбриотоксические и тератогенные свойства препарата

В результате исследований установлено, что назначение экстракта цветов кампсиса, в дозе, в 3 раза превышающей терапевтическую, беременным белым крысам не оказывало токсического действия на течение беременности. Препарат не нарушал процесс оплодотворения. Число жёлтых тел в яичниках опытных крыс при назначении экстракта цветов кампсиса в среднем на 1 самку составило 13,7 ± 0,2, а у контрольных животных 12,9 ± 0,6.

Число резорбированных эмбрионов в среднем на одну самку в группах было равным и в среднем составило 0,5. Постимплантационная гибель плодов у животных первой группы равнялась 3,8 %, тогда как во второй 4,4%. Аномалий в развитии плодов у опытных и контрольных животных не выявили.

Регистрировали лишь незначительное отставание в приросте живой массы плодов контрольных крыс в сравнении с подопытными. Средняя масса одного эмбриона у крыс получивших препарат составила 6,17г, а у контрольных - 6,0 г. Аномалий внутренних органов у эмбрионов обоих групп не регистрировали. За всё время выращивания крыс в группе, получавших экстракт цветов кампсиса на конец опыта их масса тела была несколько выше.

Уродств и аномалий развития у крысят не отмечено. Патологические изменения во внутренних органах и скелете также отсутствовали.

Таким образом, назначение экстракт цветов кампсиса беременным животным, не влияет отрицательно на эмбриональное развитие и в постнатальный период жизни плодов.

3.3.3.7. Патоморфология органов при применении экстракта цветов кампсиса

В печени животных, получавших препарат, имели место слабая инъецированность капиллярной сети в отдельных участках и очаговая просветленность цитоплазмы гепатоцитов. Такие же изменения имели место и в печени у животных контрольной группы. У некоторых животных первой группы регистрировали слабое очаговое инъецирование капилляров и незначительное скопление в отдельных участках мозгового слоя почек клеток лимфоидного типа. Слизистая оболочка желудка и кишечника серо-розового цвета, без изъязвлений и кровоизлияний, хорошо развита. Изменения в миокарде, селезёнке, лёгких отсутствовали. Дистрофических и воспалительных явлений не регистрировали.

Приведённые данные указывают, что экстракт цветов кампсиса, при длительном назначении, не оказывает токсического действия на органы и ткани животных, что свидетельствует о её слабой токсичности.

3.4. Результаты лечения собак больных трансмиссивной венерической саркомой

На основе ретроспективного анализа результатов лечения 30 больных животных нами сравнивались системы комплексного лечения включающего: консервативный (химиотерапевтический) метод лечения, хирургический с применением препарата экстракт цветов кампсиса и контролем служили животные, которым проводилось оперативное лечение опухоли по общепринятой методике (табл.3).

Система лечения, предложенная нами, учитывала схемы, сроки и оценку их эффективности с учетом не только клинических особенностей животных, но и их биохимические и морфологические показатели крови.

Были определены клинико-морфологические и клинико- биохимические показания к назначению схем лечения при трансмиссивной венерической саркоме животных.

Нами была установлена необходимость длительного послеоперационного лечения, ведущая к восстановлению биохимических и морфологических

показателей крови в течение 2-6 месяцев. По нашему мнению, кратковременность и бессистемность лечения была основной причиной возникновения рецидивов новообразований.

Таблица 3. Методы лечения собак больных трансмиссивной _венерической саркомой_

Метод лечения Количество животных

№1 консервативный (с применении ем «Винкристина») 10

№2 оперативный (с применением экстракта цветов кампсиса) 10

№3 оперативный (контроль) 10

К факторам способствующим возникновению рецидивов, были отнесены: плохое кормление и содержание животных.

На основе обобщения результатов исследования нами была разработана комплексная система лечения, включающая:

1 .Консервативный метод с применением препарата «Винкристин».

2.Оперативный метод с применением экстракта цветов кампсиса.

Длительность лечения по схеме 1 составляла не менее 7 дней, при этом препарат «Винкристин» в дозе 0,03 мг/кг разводили в 50 мл 5% раствора глюкозы и вводили внутривенно один раз в неделю.

По второй схеме был выбран оперативный метод с применением экстракта кампсиса, который применяли для удаления оставшихся опухолевых клеток (тампоны, смоченные в 3-4 мл препарата, наносили на операционную рану).

Анализ ближайших и отдаленных результатов доказал, что применение способа лечения по схеме 1 было обосновано в тех случаях, когда у животного при клиническом осмотре обнаруживалось увеличение паховых лимфоузлов, свидетельствующих о возможном метастазировании опухоли в другие органы и ткани.

Во всех других случаях заболевания животных трансмиссивной венерической саркомой, когда не наблюдалось увеличения регионарных лимфоузлов, применяли лечение по схеме 2 и 3.

Применение экстракта кампсиса было обосновано наличием множественных мелких опухолевидных разрастаний.

3.5. Морфологические исследования крови собак с трансмиссивной венерической

саркомой

С целью подтверждения диагноза и выяснения тяжести патологического процесса, а также в ходе выздоровления на 7-ой, 14-й и 28-ой дни лечения у всех животных проводился морфологический анализ крови.

Уровень гемоглобина в крови собак изменялся в зависимости от времени начала лечения. Так у собак 1 группы НЬ до лечения, на 7 день, на 14 и 28 дни после применения препарата «Винкристин» составлял: 12,87± 1,1; 11,70+1,2; 12,34+0,9; 12,4+0,9, соответственно ( при р<0,05).

У животных 2 группы НЬ до лечения, на 7, 14 и 28 дни составлял:12,73+1,2; 12,8+0,7; 12,7±1,6; 12,6±1,6 (р< 0,05).

У животных 3 группы НЬ до лечения, на 7, 14, 28 дни составлял: 12,84+1,6; 12,45+1,1; 12,95±0,8; 13,73+1,4 (р<0,05).

Количество эритроцитов также напрямую зависело от времени лечения, находясь на нижних границах до лечения и увеличиваясь в процессе выздоровления.

У собак 1 группы количество эритроцитов составляло: до лечения 6,65+0,7; на 7 день 6,78+0,6; на 14 день 6,23±0,5; на 28 день 6,93±0,5 (р< 0,05).

У собак 2 группы данный показатель составлял соответственно: до лечения 6,1+0,6; на 7 день 6,4+0,5; на 14 день 6,8+0,7; на 28 день 7,12+0,6 (р< 0,05).

У собак 3 группы: до лечения 6,78+0,6; на 7 день 6,54+0,5; на 14 день 6,12+0,4; на 28 день 6,98+0,5 (р< 0,05).

Также отмечалось незначительное увеличение числа лейкоцитов, которое восстанавливалось до пределов нормы в процессе лечения.

У собак 1 группы: до лечения 11,94+1,1; на 7 день 11,56+1,2; на 14 день 11,55±0,9; на 28 день 10,96±0,5 (р< 0,05).

У собак 2 группы до лечения 12,2+1,4; на 7 день 11,0+0,8; на 14 день 10,9+0,7; на 28 день 10,1+1,3 (р<0,05).

У собак 3 группы: до лечения 14,14+1,4; на 7 день 12,8+1,0; на 14 день 11,0+0,7; на 28 день 10,66±0,5 (р< 0,05).

У собак 1 группы количество моноцитов до лечения составляло 7,12+1,2; на 7 день 7,8±1,1; на 14 день 6,24+1,2; на 28 день 6,97+1,1 (р<0,05).

У собак 2 группы - до лечения 8,4+1,2; на 7 день 6,98+1,5; на 14 день 5,1+1,3; на 28 день 4,9+1,2 (р<0,05).

У собак 3 группы - до лечения 4,95+1,2; на 7 день 5,45+1,2; на 14 день 4,9+1,3; на 28 день 5,15+1,4 (р<0,05).

У собак 1 группы количество тромбоцитов составляло до лечения-478,45+34,8; на 7 день 465,78±39,9; на 14 день 453,54+32,8; на 28 день 434,47+32,1.

У собак 2 группы соответственно - до лечения 589,87+33,5; на 7 день 435,78+32,6; на 14 день 397,54+31,7; на 28 день 371,59+24,8.

У собак 3 группы - до лечения 487,45+39,6; на 7 день 432,74+32,1;на 14 день 384,78+32,6; на 28 день 396,54+29,9.

Остальные морфологические единицы крови, изученные нами (базофилы, эозинофилы, лимфоциты) находились в границах физиологической нормы и не представляли диагностического интереса.

Таким образом, исследования клинико-морфологического состава крови собак с диагнозом трансмиссивная венерическая саркома, позволяет оценить тяжесть патологического процесса в каждом отдельном случае до и после лечения и позволяет наблюдать динамику морфологических и гематологических показателей крови на 7, 14 и 28 дни после начала лечения животных.

З.б.Биохимические показатели сыворотки крови собак с трансмиссивной венерической саркомой

В процессе экспериментальных исследований нами было установлено, что изучение биохимических показателей сыворотки крови у собак с диагнозом трансмиссивной венерической саркомы показало, что различные методы лечения по- разному отражаются на гомеостазе животных.

При оценке состояния общего билирубина, позволяющего оценить способность печени улавливать непрямой билирубин из крови и связывать его с глюкуроновой кислотой и экскретировать с желчью, у собак при лечении по первой схеме на 7, 4,28 дни отмечалось повышение ( 4,57±1,4 мкмоль/л, Р< 0,05), (5,12 ± 1,3 мкмоль/л, Р < 0,05), (6,32 ± 1,9 мкмоль/л, Р < 0,05), по сравнению с животными, которым оказывалась лечение по 2 и 3 схемам. Так, у собак по 2 схеме лечения количество общего билирубина на 7, 14, 28 день составляло: ( 3,12 ± 0,9 мкмоль/л, Р<0,05), (3,43 ±1,2 мкмоль/л, Р<0,05), (3,64 ± 1,0 мкмоль/л, Р<0,05). У собак с лечением по 3 схеме количество общего билирубина на 7, 14,28 день составляли (3,64 ± 1,2мкмоль/л, Р< 0,05), (3,35±1,3 мкмоль/л, Р < 0,05), (3,67 ±1,3 мкмоль/л, Р < 0,05) соответственно. У всех собак до лечения количество общего билирубина, находилось в пределах физиологического уровня.

У собак при лечении по первой схеме на 7, 14,28 дни отмечалось повышение АЛТ(68,9 ± 4,9 МЕ/л, Р< 0,05), (72,3 ± 3,7 МЕ/л, Р < 0,05), (72,6 ± 4,8 МЕ/л, Р < 0,05), по сравнению с животными, которым оказывалась лечение по 2 и 3 схемам. Так, у собак с 2 схемой лечения количество АЛТ на 7, 14,28 день составляли: (41,5 ± 4,8 МЕ/л, Р< 0,05), (42,3 ± 4,1 МЕ/л, Р < 0,05), (41,6 ±4,1 МЕ/л, Р < 0,05). У собак с лечением по схеме 3 количество АЛТ на 7, 14, 28 день составляли (42,9 ± 3,9 МЕ/л, Р< 0,05), (48,4 ±4,9 МЕ/л, Р< 0,05), (42,3 ± 4,2 МЕ/л, Р< 0,05) соответственно.

При оценке состояния аспартат-амино-трансферазы (АСТ) фермента, участвующего в обмене аминокислот было установлено повышение показателя. У собак при лечении по первой схеме на 7, 14, 28 дни отмечалось повышение (62,1 ± 4,3 МЕ/л, Р< 0,05), (68,4± 3,9 МЕ/л, Р < 0,05), (69,9 ± 4,2 МЕ/л, Р < 0,05, по сравнению с животными, которым оказывалась лечение по 2 и 3 схемам. Так, у собак по 2 схеме лечения количество АСТ на 7, 14, 28 день составляло: (43,8 ± 4,1 МЕ/л, Р< 0,05), (45,9 ± 3,9 МЕ/л, Р< 0,05), (46,4 ± 4,2 МЕ/л, Р < 0,05) соответственно. У собак, которых лечили по схеме 3 количество АСТ на 7, 14, 28 день составляли (47,7 ± 3,8 МЕ/л, Р< 0,05), (46,7 ±4,2 МЕ/л, Р<0,05), ( 47,1 ± 4,0 МЕ/л, Р< 0,05).

Как явствует из полученных данных, у всех собак до лечения, количество АСТ и АЛТ, находилось в пределах физиологического уровня.

Изучая состояние экскреторных ферментов, нами было установлено увеличение содержания щелочной фосфатазы, фермента, участвующего в реакциях обмена ионов фосфорной кислоты. У собак при лечении по первой схеме на 7, 14,28 дни отмечалось повышение щелочной фосфатазы (181 ± 17,8 мг/л, Р< 0,05), (189 ± 19,6 мг/л, Р< 0,05), (215 ± 18,8 мг/л, Р < 0,05), по сравнению с животными, которым оказывалась лечение по 2 и 3 схемам. Так, у собак с 2 схемой лечения количество щелочной фосфатазы на 7, 14,28 день составляли: (89 ± 6,5 мг/л, Р< 0,05), (111 ± 5,4 мг/л, Р <0,05), (103,4 ± 9,6 мг/л, Р < 0,05). У собак с лечением по схеме 3 количество щелочной фосфатазы на 7, 14,28 день составляли (112,4 ±10,3 мг/л, Р< 0,05), (106,5 ±9,7 мг/л, Р< 0,05), ( 111,2 ±7,8 мг/л, Р < 0,05) соответственно.

Нами было установлено, что у всех собак количество щелочной фосфатазы до лечения находилось в пределах нормы.

Не было установлено изменений в содержании общего белка в зависимости от применения различных схем лечения. Так, содержание общего белка в сыворотке крови у собак при лечении по первой схеме до лечения, на 7, 14,28 составило - (46,5 ± 1,4 г/л, Р< 0,05), (48,3 ± 1,6 г/л, Р < 0,05), (51,2 ± 1,3 г/л, Р <

0,05), (56,7 ± 1,8 г/л, Р < 0,05) по сравнению с животными, которым оказывалась лечение по 2 и 3 схемам. Так, у собак по 2 схеме лечения содержание общего белка до лечения, на 7, 14,28 день составляло: (48,4 ± 2,1 г/л, Р< 0,05), (53,1 ± 2,2 г/л, Р<0,05), (56,9 ± 3,1 г/л, Р < 0,05), (64,7 ± 4,3 г/л, Р < 0,05). У собак, которых лечили по схеме 3 содержание общего белка до лечения, на 7, 14, 28 день составляло: (40,9 ±1,17г/л, Р< 0,05), (42,6 ± 1,46 г/л, Р < 0,05), (51,2 ± 2,78 г/л, Р< 0,05), (52,3+3,17 г/л, Р < 0,05) соответственно.

Результаты наших исследований показывают, что содержание альбуминов также не существенно отличалось по группам животных в зависимости от схем лечения. Так, содержание альбуминов в сыворотке крови у собак при лечении по первой схеме до лечения, на 7, 14,28 составило (23,5 ± 1,9 г/л, Р< 0,05), ( 23,6 ± 1,8 г/л, Р < 0,05), (23,9± 1,8 г/л, Р<0,05), (26,5 ±2,16 г/л, Р < 0,05) по сравнению с животными, которым оказывалось лечение по 2 и 3 схемам. Так, у собак, которых лечили по 2 схеме, содержание альбуминов до лечения, на 7, 14, 28 день составляло: (25,3± 1,9 г/л, Р< 0,05), (26,6 ± 2,2 г /л, Р < 0,05), ( 25,4 ±2,7 г/л, Р < 0,05), (26,3 ±3,1 г/л, Р < 0,05). У собак по 3 схеме лечения, содержание альбуминов до лечения, на 7, 14, 28 день составляло (23,9 ± 1,9г/л, Р< 0,05), (25,6 ±1,8 г/л, Р< 0,05), (23,6 ± 1,8 г/л, Р< 0,05), (26,7 ±2,3 г/л, Р< 0,05)- соответственно.

Нами было установлено, что концентрация мочевины в сыворотке крови у собак при лечении по первой схеме на 7, 14,28 составила (8,9 + 0,7 ммоль/л, Р< 0,05), (8,8 +1,1 ммоль/л, Р <0,05), (9,2 +1,5 ммоль/л, Р <0,05), по сравнению с животными, которым оказывалась лечение по 2 и 3 схемам. Так, у собак с лечением по 2 схеме лечения концентрация мочевины на 7, 14, 28 день составляла: (6,2+ 0,24 ммоль/л, Р< 0,05), (6,1 + 0,67 ммоль/л, Р < 0,05), (4,9 + 0,59 ммоль/л, Р < 0,05)- соответственно. У собак с лечением по схеме 3 концентрация мочевины на 7, 14, 28 день составляла (5,9 + 0,78 ммоль/л, Р< 0,05), (5,6± 0,63 ммоль/л, Р < 0,05), (6,1 ± 0,47 ммоль/л, Р < 0,05) соответственно.

Исследованиями установлено повышенное содержание креатинина в сыворотке крови у собак при лечении по первой схеме на 7, 14,28 соответственно -: (117,5 + 11,8 ммоль/л, Р< 0,05), (123,4 ± 12,9 ммоль/л, Р < 0,05), (125,1 + 13,3 ммоль/л, Р < 0,05, по сравнению с животными, которым оказывалась лечение по 2 и 3 схемам. Так, у собак по 2 схеме лечения содержание креатинина на 7, 14, 28 день составляло: (74,3 + 5,Зммоль/л, Р< 0,05), (72,8+ 4,8 ммоль/л, Р < 0,05), (76,9± 5,24ммоль/л, Р < 0,05). У собак с лечением по схеме 3 содержания креатинина на 7, 14, 28 день составляло: (73,8 + 6,9 ммоль/л, Р< 0,05), (73,7 + 5,7 ммоль/л, Р < 0,05), (76,3+ 5,4 ммоль/л, Р < 0,05) - соответственно.

В наших экспериментах было установлено снижение глюкозы в сыворотке крови у собак при лечении по первой схеме на 7, 14,28 составило (4,1 + 0,42 ммоль/л, Р< 0,05), (3,8 ± 0,67 ммоль/л, Р < 0,05), (3,1 + 0,54 ммоль/л, Р < 0,05), по сравнению с животными, которым оказывалась лечение по 2 и 3 схемам -соответственно. Так, у собак по 2 схеме лечения содержание глюкозы на 7, 14,28 день составляло: (4,1 + 0,34 ммоль/л, Р< 0,05), (4,3 + 0,65 ммоль/л, Р < 0,05), (4,2 + 0,46 ммоль/л, Р < 0,05). У собак с лечением по схеме 3, содержание глюкозы на 7, 14, 28 день составляло (4,2 + 0,89 ммоль/л, Р< 0,05), (4,1 + 0,69 ммоль/л, Р < 0,05), (4,3 ± 0,77 ммоль/л, Р < 0,05) - соответственно.

Исследованиями установлено, что под влиянием Винкристина (схема 1) происходит увеличение содержания АЛТ (77,9+6,4 МЕ/л, Р< 0,05), и АСТ (68,8+4,7 МЕ/л, Р <0,05), активности щелочной фосфатазы (218+19,8 мг/л, Р <0,05), общего

билирубина (6,34+1,9 мкмоль/л, Р <0,05), мочевины (10,1+1,5 ммоль/л, Р <0,05) и креатинина (125±17,3 ммоль/л, Р <0,05), что позволяет судить о влиянии экстракта кампсиса на функциональную активность отдельных органов и систем у животных.

3.7. Результаты гистологических исследований

Для подтверждения диагноза на трансмиссивную венерическую саркому использовали наиболее точный метод диагностики новообразований за счет определения природы опухоли - гистологическими исследованиями. Гистоморфологические исследования помогают нам на заключительном этапе диагностики опухолевой болезни и дают возможность окончательно решить вопросы прогноза и выбора лечебных средств, при терапии этого заболевания.

Окончательный диагноз - трансмиссивная венерическая саркома был подтвержден у 100% исследованных собак. Нами было установлено, что трансмиссивная венерическая саркома - это круглоклеточная саркома альвеолярного типа построена из мелких или крупных клеток с богатыми хроматином ядрами и узким ободком цитоплазмы. В клетках мелкокруглоклеточной саркомы цитоплазмы так мало, что ядра их кажутся «голыми». Межклеточное вещество неоформленное, выступает мало.

Выявляется более густая сеть артериальных сосудов, чем в аналогичных местах здорового органа, причем калибр этих сосудов намного крупнее обычного.

Опухоль трансмиссивной венерической саркомы инфильтрирует и разрушает окружающие ткани

Проведенные гистологические исследования позволили на заключительном этапе диагностического процесса решить вопросы прогноза, выбора средств и способов лечения.

3.8. Ближайшие и отдаленные результаты лечения трансмиссивной венерической

саркомы собак

Оценку результатов лечения больных ТВС проводили в ближайшем периоде, через 2 и 6 месяцев после лечения.

При сравнительной оценке результатов лечения отмечали, что отсутствие рецидива достигалось чаще всего после лечения по схеме 2, чем после лечения по схемам 1 и 3 (табл. 4).

Таблица 4. Результаты лечения трансмиссивной венерической саркомы в ближайшем и отдаленном периоде

Схема Количество Здоровы Несостоя- Рецидив Рецидив

лечения больных тельность через 1-2 через 6

лечения месяца месяцев

№1 10 6 2 1 1

. №2 10 9 - 1 -

№3 10 7 1 2 -

При оценке результатов лечения в отдаленные сроки учитывалось клиническое течение заболевания. Благоприятное, характеризующееся не рецидивирующим течением, (при отсутствии рецидивов в сроки наблюдения не менее 2 месяцев после окончания лечения) и неблагоприятное при рецидивирующем течении процесса.

Благоприятное течение трансмиссивной венерической саркомы отмечалось у 6 (60%) животных 1 группы, у 9 (90%) животных 2 группы и у 7 (70%) животных 3 группы.

Таким образом, анализ ближайших и отдаленных результатов лечения показал, что наилучшие результаты получены при лечении больных собак по схеме №2.

3.9. Профилактика трансмиссивной венерической саркомы у собак

В качестве профилактических мер нами предлагались следующие мероприятия:

> наблюдать за половыми циклами сук на протяжении жизни;

> считаем целесообразным, перед вязкой и через месяц после нее проводить клинический осмотр половых органов животных;

> после вязки обрабатывать половые органы животных дезинфицирующими средствами;

> не допускать к вязке собак заболевших трансмиссивной венерической саркомой;

> использовать рациональный тип кормления в зависимости от породы, возраста и энергетических затрат;

> обеспечивать животным полноценный ежедневный моцион и хорошее содержание.

ВЫВОДЫ

1. Исследованиями установлено, что трансмиссивной венерической саркомой чаще болеют беспородные собаки 20%, немецкие и восточно -европейские овчарки 10%, несколько реже - малые пудели, бультерьеры и другие. Выявлена корреляция между возрастными параметрами животного и количеством заболевших собак. Чаще болеют молодые животные в возрасте от 3 до 5 лет 43,3% (13 случаев), в возрасте от 5 до 7 лет- 30% (9 случаев) и в возрасте от 1 до 3 лет-10% (3 случая).

2. Установлено, что основными этиологическими факторами возникновения и развития трансмиссивной венерической саркомы у собак являются: бесконтрольные вязки, отсутствие плановых мер профилактики, снижение резистентности, поздняя диагностика заболевания, недостаточно квалифицированная и несвоевременная лечебная помощь, проводимая чаще всего без учета клинических признаков и общего состояния животного.

3. Клинические исследования показали, что трансмиссивная венерическая саркома локализуется в местах повреждения слизистой оболочки преддверия влагалища, полового члена и препуция и проявляется чаще всего во

время коитуса. Опухоли имеют вид округлых, рыхлых, изъязвленных образований от серого до красно-бурого цвета, размером от нескольких миллиметров до 12 сантиметров, сопровождающиеся капельным кровотечением. При гистологическом исследовании выявлена трансмиссивная венерическая саркома альвеолярного типа, построенная из клеток с богатыми хроматином ядрами и узким ободком цитоплазмы. Отмечено значительное усиление васкуляризации пограничной с опухолью здоровой ткани.

4. По данным клинического анализа крови у больных животных установлено:

A) снижение гемоглобина у 75% собак до лечения и у 33% собак после лечения по схеме 1;

Б) снижение количества эритроцитов наблюдалась у 68% собак до лечения.

B) увеличение количества лейкоцитов наблюдалось у 38% собак до лечения;

Г) увеличение количества тромбоцитов у 64% собак до лечения. По данным биохимического исследования крови, существенные изменения у больных животных наблюдались по следующим показателям:

A) повышение щелочной фосфатазы в 89% собак.

Б) повышение AJIT у 27% собак до лечения, у 21% собаки после лечения по схеме 1.

B) повышение ACT у 61% собаки до лечения, у 32% собак после лечения по схеме 1.

Г) повышение общего билирубина у 28% собак до лечения, у 29% собак после лечения по схеме 1.

Д) повышение мочевины у 88% собак до лечения, у 27% собак после лечения по схеме 1.

Е) повышение креатинина у 27% собак после лечения по схеме.

5. Апробирован экстракт цветов кампсиса на основе растения семейства бегониевых для лечения трансмиссивной венерической саркомы у собак. При определении токсичности препарата установлено, что экстракт цветов кампсиса не оказывает на организм лабораторных животных местного раздражающего и токсического действия при энтеральном и парентеральном её применении в максимально допустимых для однократного введения дозах.

6. Применение экстракта цветов кампсиса взрослым интактным крысам способствует оптимизации показателей белкового (альбумины, у -глобулины) и липидного обменов (липопротеиды низкой плотности (ЛПНП)), а на фоне применения экстракта кампсиса молодняку и взрослым животным в пределах физиологических норм увеличивается бактерицидная и лизоцимная активность сыворотки крови (содержание сиаловых кислот понизилось на 23%), содержание белков у -глобулиновой фракции (с 19,6% до 18,3%).

7. Разработана научно-обоснованная система лечения трансмиссивной венерической саркомы у собак, которая включает применение местной и общей противовоспалительной и патогенетической терапии, способствующей благоприятному течению заболевания и позволяющая избежать возникновения рецидивов заболевания. Наиболее оптимальным вариантом лечения этого заболевания считаем комплексный метод.

8. В качестве профилактических мер предлагается: контролировать течение половых циклов у сук, проводить клинический и акушерско-

гинекологический осмотр перед вязкой, проводить обработку дезинфицирующими средствами наружные половые органы после вязки. Не допускать к вязке собак заболевших трансмиссивной венерической саркомой. Обеспечивать сбалансированное кормление и полноценное содержание животных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ РЕЗУЛЬТАТОВ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

1 .Разработанные в результате научных исследований схемы ранней диагностики, лечения и профилактики внедрены в ветеринарную практику.

2.Результаты исследований используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедре ветеринарного акушерства и хирургии Кубанского государственного аграрного университета.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Манака, Ю.С. Распространение и клиническое проявление трансмиссивной венерической опухоли у собак / И.А. Родин // Материалы 2-й Международной научно - практической конференции, посвященной 90 -летию со дня образования Кубанского ГАУ. - Краснодар, 2011 г. - С. 182 -184.

2. Манака, Ю.С. Стимуляция регенерации у собак / И.А. Родин, М.Б. Славецкая // Труды 17-го Московского международного ветеринарного конгресса. Москва, 2009, С.103 - 105.

3. Шелестова Ю.С. К вопросу о динамике обмена веществ при использовании средств неспецифической терапии / И.А. Родин, Л.В. Литвиненко // Сборник материалов научно - практической конференции. -Краснодар, 2013 г. - С. 115 - 122.

4. Шелестова Ю.С. К вопросу о локализации воспаления молочной железы и трансмиссивной венерической опухоли у собак / А.Ю. Шантыз, И.А. Родин, Л.В. Литвиненко // Труды Кубанского государственного аграрного университета: серия - ветеринарные науки - Краснодар, 2012. - № 3 (36). - С. 222-224.

Бумага офсетная Печать цифровая тираж 100 экз.

Типография «Световод» 350004, г. Краснодар ул. Калинина 134/2

Подписано в печать 03.06.2013 Формат А5 60x84 1/16 Усл. печ. л. 1,0 Заказ № 1693

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Шелестова, Юлия Сергеевна, Краснодар

ГНУ КРАСНОДАРСКИЙ НАУЧНО - ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ РОССЕЛЬХОЗАКАДЕМИИ

ШЕЛЕСТОВА Юлия Сергеевна

ФАРМАКОТЕРАПИЯ ТРАНСМИССИВНОЙ ВЕНЕРИЧЕСКОЙ

САРКОМЫ У СОБАК

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией 06.02.06 - ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных

04201360764

На правах рукописи

Диссертация на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор В.А. Антипов

Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор И.А. Родин

Краснодар - 2013

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ...................................................................................4

1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ..................................................................8

1.1. Особенности строения полового аппарата собак.............................8

1.1.1 .Некоторые особенности анатомии половых органов кобелей............8

1.1.2. Особенности анатомии половых органов самок собак (сук)............10

1.2. Классификация и морфология опухолей животных..........................13

1.3. Этиология и патогенез опухолей................................................17

1.4. Особенности диагностики опухолей............................................24

1.5. Основные принципы лечения опухолей животных...........................28

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.................................35

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ..........................48

3.1. Факторы риска возникновения трансмиссивной венерической саркомы

у собак.......................................................................................48

3.2. Особенности клинической картины у собак больных трансмиссивной венерической саркомой..................................................................53

3.2.1. Сбор анамнеза.......................................................................53

3.2.2. Схема акушерско - гинекологического исследования.....................53

3.2.3. Клинические признаки трансмиссивной венерической саркомы у собак..........................................................................................54

3.3. Экспериментальные и клинические исследования по разработке, применению и изучению свойств экстракта кампсиса (Campsis (Z) Seem).. .64

3.3.1. Разработка и характеристика препарата........................................64

3.3.2. Токсикологическая оценка экстракта цветов кампсиса...................65

3.3.2.1. Изучение острой токсичности препарата..................................65

3.3.2.2. Изучение хронической токсичности....................................................71

3.3.3. Фармакологические свойства экстракта цветов кампсиса...................75

3.3.3.1. Изучение воздействия препарата на белковый, жировой и минеральный обмены веществ .........................................................................75

3.3.3.2. Изучение влияния экстракта цветов кампсиса на показатели

неспецифической резистентности......................................................................80

3.3.3.3. Влияние препарата на гематологические показатели .......................85

3.3.3.4. Изучение аллергизирующего действия экстракта кампсиса............87

3.3.3.5. Влияние экстракта цветов кампсиса на регенеративные процессы

и заживление ран.................................................................................................90

3.3.3.6. Эмбриотоксические и тератогенные свойства препарата ................92

3.3.3.7. Патоморфология органов при применении экстракта цветов кампсиса......................................................................................93

3.4. Результаты лечения собак больных трансмиссивной венерической саркомой......................................................................................94

3.5. Морфологические исследования крови собак с трансмиссивной венерической саркомой..................................................................129

3.6. Биохимические показатели сыворотки крови собак с трансмиссивной венерической саркомой..................................................................133

3.7. Результаты гистологического исследования..................................140

3.8. Ближайшие и отдалённые результаты лечения трансмиссивной венерической саркомы у собак.........................................................142

3.9. Профилактика трансмиссивной венерической саркомы у собак.........143

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ. 145

5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ........................................................................152

6. ВЫВОДЫ...............................................................................153

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.............................................156

8. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ..............................157

ПРИЛОЖЕНИЯ...........................................................................170

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Разработка и совершенствование новых методов диагностики и лечения новообразований в области половых органов животных является одной из актуальных проблем ветеринарной медицины. (В.А. Антипов, 2001). В связи с появлением большого количества домашних и бездомных мелких непродуктивных животных, различных пород собак, проблема онкологических заболеваний в области половых органов у них приобретает особую значимость из-за слабой изученности патогенеза и отсутствия критериев ранней диагностики (И.А. Родин, 2013). Наиболее распространенным в данной группе заболеваний является трансмиссивная венерическая саркома (М.В. Назаров, 2004).

В соответствии с данными П.Ф.Терехова, 1983; Г.Ниманда Ханса, Ф.Сутера Петера, 1998; Г.П. Дюльгера,2002; В.П. Гончарова, Д.А.Черепахина,2004; - трансмиссивная венерическая саркома новообразование, локализующееся на слизистой оболочке преддверия влагалища и полового члена, характеризующееся единичными или множественными разрастаниями мягкой консистенции, склонных к изъязвлению и метастазированию.

Малоизученными, несмотря на имеющиеся исследования в данном направлении, остаются этиологические факторы, способствующие развитию заболевания, в связи, с чем затруднена ранняя диагностика, лечение и профилактика данного заболевания. Трансмиссивная венерическая саркома у собак обычно бывает чаще, чем диагностируется, так как объективные клинические симптомы (кровотечение, изъязвление, изменение анатомического строения половых органов) проявляются только в стадии, когда новообразование поражает основную часть половых органов.

Быстрое развитие осложнений (некроз тканей), отсутствие признаков воспаления, иммунологический характер патогенеза при данном заболевании (D.Cohen., 1973; E.I.AmberandR.A. Henderson, 1982, A.Mendez, 1996) и

отсутствие четкого представления о взаимосвязи между клинической картиной трансмиссивной венерической саркомы, свидетельствуют о необходимости исследования картины заболевания в сочетании с клинико-гематологическими и морфологическими показателями больного животного.

Цель и задачи исследования. Основная цель настоящей работы состоит в том, чтобы на основе различных сторон этиопатогенеза трансмиссивной венерической саркомы, усовершенствовать лечебно-профилактические мероприятия при указанной патологии у собак, для чего изучить новое лекарственное средство наружного применения. Исходя из цели исследования, были поставлены следующие основные задачи:

- изучить новый, эффективный препарат для терапии трансмиссивной венерической саркомы у собак;

- изучить основные фармако-токсикологические характеристики препарата;

- определить лечебную эффективность препарата при трансмиссивной венерической саркоме у собак;

определить отдельные аспекты этиологии и патогенеза трансмиссивной венерической саркомы у собак, а также направления профилактики и терапии указанной патологии.

Теоретическая и практическая значимость. На основании проведённых исследований предложен новый эффективный препарат -экстракт цветов кампсиса для комплексного лечения трансмиссивной венерической саркомы у собак.

Основные положения, выносимые на защиту:

Комплексный метод лечения собак с трансмиссивной венерической саркомой;

- результаты клинических и гематологических исследований у собак с трансмиссивной венерической саркомой;

Объект и предмет исследования. Объектом исследований являются собаки, предмет исследования эффективный препарат экстракт цветов кампсиса для лечениятрансмиссивной венерической саркомы.

Апробация результатов исследований. Материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на учёных советах Краснодарского научно - исследовательского ветеринарного института в течение 2010-2012 гг., на международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы

современной ветеринарии», посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани (г.Краснодар - 2011г.), на международной научно-практической конференции «Опыт международного сотрудничества в области экологии, лесного хозяйства, ветеринарной медицины и охотоведения» посвящённой 90 - летию со дня образования Кубанского государственного аграрного университета (г. Краснодар - 2011г.), на международной научно-практической конференции, посвящённой 35-летию факультета ветеринарной медицины Кубанского государственного аграрного университета (г. Краснодар - 2009г.).

Структура и объём диссертационной работы. Диссертация изложена на 170 страницах машинописного текста в компьютерном варианте и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, выводов, практических предложений, библиографического списка и приложений. Список литературы включает 134 источник, в том числе 43 за рубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 33 таблицами, 23 рисунками, 1 диаграммой.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Особенности строения полового аппарата собак 1.1.1. Некоторые особенности анатомии половых органов кобелей

Как известно, половая система млекопитающих, в том числе и собак выполняет наряду с репродуктивной функцией (внутреннее оплодотворение, рождение жизнеспособного плода) и сложную эндокринную функцию.

Сущность полового размножения у высших млекопитающих, заключается в развитии в половых железах половых клеток-гамет, слияния половых клеток самца и самки в яйцеводе половой системы самки - оплодотворении, с последующим образованием зиготы, дающей начало развитию нового организма (I.I.Christiansen, 1984; А.Ромер, Т.Парсонс, 1992; В.П. Гончаров, В.А. Карпов, 1994; И.В.Хрусталева, Н.В. Михайлов, Я.И. Шнейберг, и др. 1994; Н.В.Зеленевский,1997; Г.П. Дюльгер, 2002; А.Ф.Климов, А.И.Акаевский, 2003; H.A. Слесаренко, И.В. Хрусталева,2003).

Половые железы у самцов собак, семенники (testis) имеют некоторую особенность, они расположены недалеко от анального отверстия. На дорсальной стороне к семеннику прилежит сильно выраженный у собак придаток семенника - epididymis. В нем проходит очень извитой проток придатка, достигающий длины 5-8 м, в головчатую часть которого, расположенную на семеннике краниовентрально, впадает 7-20 выносящих канальца - ductus efferentes testis. Железы протока придатка выделяют секрет, способствующий питанию и обездвиживанию спермиев. Из хвоста придатка, расположенного каудодорсально выходит семяпровод (семявыносящий проток) — ductus deferens, который входит в состав семенного канатика и идет с ним через паховый канал до выхода через брюшное кольцо. Далее семяпровод направляется каудодорсально, идет в складке брюшины в мочеполовую складку, расположенную над мочевым пузырем. Правый и левый семяпроводы над шейкой мочевого пузыря сближаются и впадают

впереди ее в начальную часть мужской уретры, далее мужскую уретру называют уже мочеполовым каналом - canalis urogenitalis.

Топографически, мочеполовой канал разделяется на две части: тазовую, идущую по тазовому шву дна таза и половочленную, которая за пределами седалищной дуги таза ложится на вентральную сторону полового члена и заканчивается на его головке (И.И.Магда,1970; Л.Д.Бойнд,1998).

Тазовая часть мочеполового канала (мужская уретра) у собак имеет незначительный кавернозный слой, слабо утолщается в месте перехода в половочленную часть, образуя луковицу мочеполового канала. В мышечном слое поперечно исчерченные волокна формируют пучки, которые расположены поперек хода канала. Слизистая оболочка выстлана переходным эпителием.

В тазовую часть мочеполового канала открывается единственная у собак крупная застенная предстательная железа - prostata. Эта железа сложная, альвеолярно трубчатого типа, плотной консистенции, желтоватого цвета. Двумя крупными долями она расположена по бокам от шейки мочевого пузыря. Секрет этой железы активизирует подвижность спермиев.

Наружные половые органы у собак (кобелей) имеют весьма характерные особенности. Ножки, корень и тело полового члена их построены кавернозными телами, расположенными между довольно плотными трабекулами белочной оболочки пениса содержащие эластические и гладкомышечные волокна.

Головка полового члена у кобелей длинная, в основе ее лежит кость — os penis, у крупных животных достигающая длины 8-10 см. Впереди кость суживается и дополняется хрящевой или фиброзной тканью. К вентральной поверхности кости пениса прирастает мочеполовой канал и вся кость покрыта кавернозным телом головки полового члена, увеличивающимся в каудальном ее участке, образующим луковицу полового члена - bulbus penis. Вены, отводящие кровь от луковицы головки сдавливаются специальной парной мышцей - сжимателем вен — m. ishio cavernosus, покрывающей

ножки пениса от седалищных бугров и достигающим головки пениса и луковицы. Это затрудняет выведение пениса из половых органов самки после совокупления из-за задержки оттока крови от луковицы полового члена, вены которой оказываются еще сдавленными сжимателем вен.

Препуций - preputium у собак имеет париетальный листок, выстилающий изнутри стенки препуция и висцеральный листок, покрывающий головку пениса. В участке, окружающем основание головки, в париетальном и висцеральном листках препуция, концентрируются железы - gl. preputiales.

1.1.2. Особенности анатомии половых органов самок собак (сук)

Половые железы - яичники (парные) - ovarium у собак небольшие, овальной формы, окружены яичниковой бурсой, расположены в поясничной области брюшной полости, на уровне 3-4 поясничного позвонка.

Подходящие к яичнику яйцепроводы, как и яичники расположены в брыжейках образованных серозной оболочкой широкой маточной связки. Между этими брыжейками образуется яичниковая бурса, вход в которую у собак узкий. В раннем эмбриогенезе, как известно, яйцепровод (маточная труба - tuba uterina), матка и влагалище развиваются на основе мюллерова канала (отводящего канала самок в области пронефроса), который дифференцирует на три отдела участок, где проходит оплодотворение (яйцепровод), матку, где развивается плод и третий участок - родовой путь (влагалище), он же орган совокупления. Воронка маточной трубы довольно широкая, длина ее 4-10 см, она сильно извита и расширена в начале. Слизистая оболочка чрезвычайно складчата, складки самой разнообразной высоты образуют «дебри» в просвете яйцепровода, через которые «пробираются» спермии. Перистальтику стенки осуществляют продольные и кольцевые, гладкие мышечные волокна. Маточное отверстие яйцепровода открывается в верхушку рога матки. У собак матка двурогая. Рога длинные, прямые, тело матки в 5-6 раз короче рогов. В шейке матки сильно развит циркулярный слой гладких мышц (С.М.Лубнина,1972). Слизистая шейки

очень складчатая, (складки продольные и поперечные). В сторону влагалища шейка выступает в просвете (особенно ее вентральная часть).

Как у всех плацентарных млекопитающих, у сук органы совокупления представлены двумя отделами - преддверием влагалища, и влагалищем. Эти два отдела имеют не только различное строение, но и различное происхождение.

Влагалище - vagina вдвое длиннее преддверия. Оно расположено от шейки матки до отверстия мочеисп�

Информация о работе

Шелестова, Юлия Сергеевна
кандидата ветеринарных наук
Краснодар, 2013
ВАК 06.02.03

Диссертация

Фармакотерапия трансмиссивной венерической саркомы у собак - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы