Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Лечение собак с опухолевой патологией дистального отдела конечностей

ВАК РФ 06.02.04, Частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства

Автореферат диссертации по теме "Лечение собак с опухолевой патологией дистального отдела конечностей"

4846230

На правах рукописи

ДАШАЕВ ИСА ВАХАЕВИЧ

ЛЕЧЕНИЕ СОБАК С ОПУХОЛЕВОЙ ПАТОЛОГИЕИ ДИСТАЛЬНОГО ОТДЕЛА КОНЕЧНОСТЕЙ

06.02.04. - ветеринарная хирургия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

2 МАЙ 2011

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ

2011

4846230

Работа выполнена на кафедре общей и частной хирургии им. К.И. Шакалова ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины».

Научный руководитель: Стекольников Анатолий Александрович, доктор

ветеринарных наук, профессор кафедры общей и частной хирургии им.

К.И. Шакалова ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная

академия ветеринарной медицины».

Официальные оппоненты:

Виденин Владимир Николаевич, доктор ветеринарных наук, профессор

кафедры оперативной хирургии ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская

государственная академия ветеринарной медицины»;

Чернигов Юрий Владимирович, доктор ветеринарных наук, доцент

ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет».

Ведущая организация - ФГОУ ВПО «Курская государственная

сельскохозяйственная академия».

Защита диссертации состоится «_ » с- -СсО-сС 2011г.

, 1

в "часов, на заседании диссертационного совета Д 220.059.01 при

ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» по адресу: 196084, г. Санкт-Петербург, ул. Черниговская, д. 5., у] тел./факс (812) 388-36-31.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины».

Автореферат разослан « ^г? » ¿л <• 1/1 сс!' 2011г. и размещен на сайте http://spbgavm.ru

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор ветеринарных наук , Крячко О.В.

¿ССОо

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Сегодня одним из актуальных вопросов ветеринарной ортопедии является - опухолевая патология дистальных отделов конечностей у собак, особенно у таких пород как ротвейлер, ризеншнауцер, черный терьер, Лабрадор.

Однако в настоящий момент в литературе имеются лишь отдельные не систематизированные исследования и клинические наблюдения по данной проблеме. Краткие ссылки на опухолевую патологию пальцев имеются в ряде исследований по органонеспецифическим опухолям кожи (Кудряшов A.A. и др., 1998; Фролов В.И., 1999; Стеколышков A.A.; Бокарев A.B. и др., 2005; Суховольский и др., 2010), в трудах (Пономарьков В.И., 1985; Терехов П.Ф., 1986, Пономарьков В.И., 1994) и в учебных пособиях по хирургии (Магда И.И. и др., 1979; Лукьяновский В.А. и др., 1984; Башкиров Б.А. и др., 1990). В зарубежной научной печати имеются отдельные публикаций по эпизоотологии (Marino DJ. et al., 1995), патологической анатомии (S-K Liu, Hohn R.B., 1968; Madewell B.R. et al., 1982) и химиотерапевтическому лечению (Howard D.M., 1961; O'Brien M.G. et al., 1992) опухолевой патологии пальцев у собак.

Лечение опухолевой патологии в области пясти (плюсны) имеет объективную трудность в связи с тем, что с одной стороны необходимо соблюдать принцип онкологического радикализма, а с другой, проводить максимально щадящее оперативное вмешательство для сохранения анатомо-функциональной специфики органа, чтобы сохранить опорную функцию конечности. Исходя из этого, считаем, что целесообразно сочетать хирургическую эксцизию опухоли с циторедуктивной химиотерапией: с неоадыовантной - для уменьшения опухолевой массы, и соответтвенно уменьшения последующей хирургической травматизации, и с адьювантной -для окончательного устранения оставшихся опухолевых клеток.

Однако аспекты комбинированного лечения (сочетание химиотерапии с оперативным удалением) опухолевой патологии дистальных отделов конечностей у собак до сих пор серьезно не исследованы. В то же время, учитывая что среди опухолей данной локализации от 76% до 77,8% составляют злокачественные новообразования (Marino D.J. et al., 1995; Бокарев A.B., 2003), а выживаемость свыше двух лет при хирургическом лечении не превышает 40% (при меланоме пальцев не более 13%), следует предположить, что именно комплексное лечение должно способствовать достижению максимальной эффективности.

Цель исследований. Цель наших исследований - разработать и дать оценку целесообразности комплексного лечения опухолевой патологии дистальных отделов конечностей у собак и обеспечения максимально длительного безрецидивного периода, сохраняя жизнь и рабочие качества у

служебных животных. Оптимизировать простые методы комплексного лечения опухолевой патологии дистальных отделов конечностей у собак.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

• изучить распространенность опухолевой патологии дистальных отделов конечностей среди домашних и служебных собак;

• определить макро- и микроморфологию опухолевой патологии дистальных отделов конечностей собак;

• исследовать метод визуальной (рентгеноконтрастной) диагностики позволяющий определять границы распространения патологического процесса;

• разработать методы эффективной местной химиотерапии опухолей пальцев и пясти (плюсны) у собак;

• изучить биохимические и иммунологические показатели крови у собак больных опухолями различного гистогенеза, и их изменения при местной химиотерапии;

• исследовать возможность индивидуального подбора цитотоксических препаратов на основании тестов in vitro;

• дать сравнительную оценку методам лечения онкопатологии данной локализации (химиотерапия, хирургическое лечение и комплексное лечение (сочетание химиотерапии и хирургического лечения)).

Научная и практическая новизна

В настоящей работе разработана схема и дана оценка целесообразности комбинированного лечения опухолевой патологии дистальных отделов конечностей у собак. Для визуальной оценки распространенности опухолевого процесса в области пальцев и пясти (плюсны) у собак при жизни применен метод внутривенной ретроградной рентгеноконтрастной флебографии.

Разработан и предложен метод внутривенной ретроградной местной химиотерапии опухолей дистальных отделов конечностей у собак.

Предложена и исследована возможность индивидуального подбора цитотоксических препаратов на основании тестов in vitro. Новизна результатов исследований подтверждена патентом РФ на изобретение: «Способ получения посттестового лейкоконцентрата периферической крови», № 2394584.

Практическая ценность и реализация результатов исследования

В результате проведенного исследования разработаны современные новые схемы лечения опухолевой патологии у собак, позволяющие не просто сохранить или продлить жизнь пациента, но и сохранить рабочие качества служебного животного.

Отработана техника выполнения прижизненной внутривенной ретроградной рентгеноконтрастной флебографии и внутривенной ретроградной химиотерапии собак при опухолевых патологиях в области дистального отдела конечностей.

Полученные данные позволяют практикующим ветеринарным врачам осуществлять дифференциальную диагностику воспалительных и опухолевых патологий пальцевой локализации, а также осуществлять максимально щадящие оперативные вмешательства, обеспечивающие с одной стороны полное удаление пораженных тканей, а с другой, максимальную сохранность локомоторных функций конечностей.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- макроморфологическая картина опухолевой патологии дистальных отделов конечностей у собак неспецифична, и характеризуется хроническими язвенно-некротическими процессами;

- внутривенная прижизненная ретроградная рентгеноконтрастная флебография визуализирует поражения пальцев и пясти (плюсны) воспалительной и опухолевой природы;

- меланома и плоскоклеточный рак неподкогтевой локализации наиболее часто дают местные и общие рецидивы после хирургического лечения;

- неоадыовантная химиотерапия, выполненная методом внутривенной ретроградной инфузии позволяет уменьшить объем опухолевой массы и паранеопластического воспаления или достичь полного излечения от некоторых опухолей пальцев и пясти (плюсны) не обладающих инвазивным ростом;

- комбинированное лечение опухолевой патологии пальцев и пясти (плюсны) у собак способствует быстрому восстановлению локомоторной функции конечности и позволяет значительно увеличить безрецидивный период при таких заболеваниях как меланома, плоскоклеточный рак подкогтевой и неподкогтевой локализации.

Внедрение:

Результаты проведенной научно-исследовательской работы используются на кафедрах общей и частной хирургии при чтении лекций, проведении лабораторных и практических занятий со студентами очного и заочного ветеринарных факультетов: Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины, Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии, Вологодской государственной молочнохозяйственной академии им. Н.В. Верещагина, Орловского государственного аграрного университета, Омского государственного аграрного университета и Карельского института переподготовки и повышения квалификации кадров агропромышленного комплекса.

Используются в практической работе ветеринарными специалистами лечебно-диагностического отдела Санкт-Петербургской городской станции по борьбе с болезнями животных и в клиниках по лечению мелких домашних животных.

Апробация результатов научных исследований

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на:

- Первом международном конгрессе ветеринарных фармакологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства» 21—22 мая, Санкт-Петербург, 2008; - Научной конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПБГАВМ, 2009; - Всероссийской научной конференции (семинар) по вопросам ветеринарной хирургии «Внедрение новых технологий в профилактику и лечение хирургической патологии у животных» 28-30 октября, Санкт-Петербург, 2009.

Публикация результатов исследования

Основное содержание диссертационной работы изложено и опубликовано в 5 печатных работах, две из которых в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки для публикации материалов докторских и кандидатских диссертаций и патент на изобретение «Способ получения посттестового лейкоконцентрата периферической крови» №2394584.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 154 страницах машинописного текста и состоит из следующих основных разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы и практические предложения, список литературы, включающего в себя 149 источников, из них 46 на иностранных языках. Диссертация иллюстрирована 28 таблицами и 22 рисунками.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнялась в период с 2008 по 2010 гг. в ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» на кафедре общей и частной хирургии.

Исследования по разработке схем и изучению эффективности комплексных методов лечения опухолевой патологии дистальных отделов конечностей у собак проводили на животных с клиническими признаками, характерными опухолевому поражению в области пальцев и пясти (плюсны), в возрасте от рождения до 13 лет и старше, различной породной принадлежности, предварительно исключая инфекционные и инвазионные заболевания.

В зависимости от способа лечения были сформированы 4 группы из 78 собак. При этом учитывали наличие поражений в области дистальных отделов конечностей, доброкачественность и злокачественность процесса.

Лечение злокачественных опухолей пальцев и пясти (плюсны) проводили по следующим схемам:

Опытная группа №1 - только неоадьювантная химиотерапия.

Опытная группа №2 - неоадьювантная химиотерапия с последующей операцией.

Опытная группа №3 - неоадьювантная химиотерапия с последующей операцией и дальнейшей адыовантной химиотерапией.

Опытная группа №4 - начальная операция и дальнейшая адыовантная химиотерапия.

Для лечения и профилактики рецидивов доброкачественных новообразований пальцев и пясти (плюсны) применяли только следующие схемы:

- неоадьювантная химиотерапия с последующей операцией;

- начальная операция и дальнейшая адьювантная химиотерапия.

В заключение каждого опыта формировали протокол в зависимости от избранного способа лечения.

Лекарственную терапию опухолей дистальных отделов конечностей проводили методом внутривенной ретроградной инфузии (A.B. Бокарев; М.А. Нарусбаева; A.A. Стекольников; О.Н. Суворов; М.В. Матвеева 2010).

Для неоадыовантной химиотерапии был использован препарат циклофосфамид (100 мг в объеме 10 мл, вводимый внутривенно ретроградно в поверхностную вену пораженной конечности 2 раза в неделю (6 инъекций на курс)). Для адыовантной химиотерапии использовали препарат блеомицин (2,5 мг в объеме 10 мл, вводимый внутривенно ретроградно в поверхностную вену пораженной конечности 2 раза в неделю (6 инъекций на курс)).

Оперативные манипуляции на пальцах проводили под ксилазин -золетиловым наркозом с предварительной (за 30 минут) премедикацией препаратом веттранквил, в соответствии с рекомендациями (A.A. Стеколышков, A.B. Бокарев, 2005).

У всех животных были изучены следующие показатели:

- гематологические (содержание эритроцитов, лейкоцитов, СОЭ, концентрация гемоглобина и лейкограмма);

- биохимические (биллирубин, креатинин, мочевина, сиаловые кислоты, глюкоза);

показатели активности фагоцитоза (фагоцитарная активность нейтрофилов, фагоцитарное число, фагоцитарный индекс);

- гуморальные показатели естественной резистентности и иммунной реактивности (количество общего белка и белковых фракций, лизоцимная

активность сыворотки крови, количество циркулирующих иммунных комплексов, НСТ - тест, Кон-А, IL-2);

исследование пролиферативной активности лимфоцитов периферической крови собак;

- чувствительность опухолевых клеток к цитостатикам in vitro.

Также у больных собак брали биопсийные пробы патологически измененной ткани, для цитологического и гистологического исследования.

Динамику изменения гематологических, биохимических и иммунологических показателей исследовали до лечения у всех опытных групп и у тех собак, которые последовательно прошли все стадии лечения от неадьювантной химиотерапии до оперативного удаления и адыовантной химотерапии.

Исследование морфологического состава периферической крови проводили в лаборатории кафедры общей и частной хирургии им. К.И. Шакалова СПбГАВМ и городской ветеринарной лаборатории.

Перед взятием крови проводили клинический осмотр животных и термометрию. Пробы крови для исследований брали утром из пястной вены в две пробирки, соблюдая правила асептики и антисептики. Часть крови использовали для получения сыворотки, путем центрифугирования 15 мин при 3000 об/мин. Другая часть сохранялась как цельная стабилизированная кровь. В качестве стабилизатора использовали 3-4 капли 10%-ного раствора трилона Б.

Количество эритроцитов, лейкоцитов определяли по общепринятым методикам путем подсчета клеток в камере Горяева; лейкограмму составляли при микроскопическом исследовании мазков крови окрашенных красителем «Диф-Квик»; гемоглобин определяли унифицированным гемиглобинцианидным методом; СОЭ по методу Панченкова.

Биохимические исследования проводили в соответствии с рекомендациями (Кондрахин И.П., 1985): концентрацию общего белка в сыворотке крови определяли биуретовым методом; количественное определение альбумина - по реакции с бромкрезоловым зеленым; креатинин - псевдокинетическим методом. Определение активности мочевины и сывороточных ферментов (АлАТ, АсАТ, ЩФ) проводили кинетическими методами.

Определение дифференциальной активности печеночного и костного изоферментов щелочной фосфатазы проводили методом термоинактивации.

Количественное определение ацетилнейраминовой (сиаловой) кислоты выполняли при помощи набора реагентов «Сиалотест 80».

Количество циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови определяли методом ПЭГ - теста (Гриневич Ю.А., 1988).

Неспецифические показатели иммунитета (лизоцимная активность сыворотки крови и фагоцитарная активность нейтрофилов крови)

определяли специальными методами исследования: активность лизоцима (мурамидазы) определяли унифицированным турбидиметрическим методом (Каграманова К.А., Ермолаева З.В., 1966); фагоцитарную активность нейтрофилов - в реакции с цельной кровью, используя в качестве мишени клетки пекарских дрожжей (30 мин - 37°С, эффекторы/мишени =25/1). HCT тест с нейтрофилами периферической крови проводили экспресс методом (Стекольников A.A.; Бокарев A.B.; Токарев A.C. - Патент на изобретение № 2379685).

Исследование пролиферативной активности лимфоцитов периферической крови собак in vitro на митогенный лектин Кон-А и митогенный интерлейкин IL-2 проводили в культуре цельной крови (97), с подсчетом индекса активации по количеству лимфоцитов с активным ядрышком.

Чувствительность опухолевых клеток к цитостатикам in vitro определяли полуколичественно в первичной кратковременной (8 часов) культуре клеток биоптатов (Wilson А.Р., 1989). Использовали 10-кратные (от терапевтических) дозы цитостатиков, как рекомендовано в патенте «способ определения индивидуальной химиочувствительности опухоли у больных in vitro» № RU2094802.

Для изучения структуры опухолевой патологии использовали обзорную рентгенографию и ретроградную флебографию с контрастом, а также цитологический и гистологический анализы биопсийного материала.

Цитологические препараты фиксировали в метаноле, окрашивали для обзорной светооптической микроскопии красителем «Диф-Квик». Селективное окрашивание А^ОР проводили коллоидным раствором AgN03.

Для гистологического исследования биоптатов из патологического очага, ткань фиксировали в 10%-ом растворе формалина и окрашивали гематоксилином и эозином, и на волокна по Ван-Гизону.

Обзорное рентгенологическое исследование проводили путем обычной рентгенографии в дорсо-пальмарной проекции, а визуализацию венозного русла дистальных отделов конечностей проводили путем внутривенной рентгеноконтрастной ретроградной ангиографии (Стекольников A.A. и др., 2009).

Микрофотографирование цитологических препаратов проводили цифровой камерой «Micrometrics 500 CU». Документирование и обработку полученных изображений проводили на персональном компьютере при помощи программы «ScopePhoto 2.0.4».

Морфометрические исследования проводили при помощи программы «IMAGE TOOL» for windows version 2.

Полученные данные статистически обработаны при помощи программы «Hrimer Biostatistics» версия 4,03.». Построение графиков проводили с использованием программы «Microsoft Graph» (11.5510.5606).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Эпизоотология новообразований пальцев и пясти (плюсны) у собак За время работы над диссертацией было выявлено 85 собак с опухолевыми заболеваниями в области пальцев и пясти (плюсны), что составило 0,51% ко всему количеству исследованных животных; 4,15% к животным у которых выявлены опухолевые заболевания всех локализаций; 28,27% к животным у которых имели место новообразования конечностей. Из 85 (100%) собак с опухолями в области пальцев, у 7 собак (8,24%) выявлены злокачественные новообразования с признаками генерализации процесса (в дальнейшем исследовании не использованы), у 59 (69,41%) выявлены злокачественные новообразования без признаков генерализации процесса и у 19 животных (22,35%) выявлены доброкачественные новообразования.

Наибольшее количество злокачественных новообразований наблюдалось в возрастной группе 9-11 лет - 18 собак (23,08%). Наибольшее количество доброкачественных новообразований наблюдалось в возрастной группе от рождения до двух лет - 5 животных (6,4%). Добракачественные новообразования в области пальцев, чаще регистрировали у собак породы «пудель» -26,32%. Злокачественные - чаще регистрировали у собак породы «ризеншнауцер» и «черный терьер» -16,95% и 13,56% соответственно.

3.2. Диагностика опухолевых болезней пальцев и пясти (плюсны)

3.2.1. Макро- и микродиагностика

Исследования показали, что при наличии обширных поверхностных повреждений, невозможно провести макроморфологическую дифференциацию между хроническим язвенно-некротическим воспалением и опухолевой язвой.

В 12 случаях повреждения в области пальцев, вызвавшие онкологическую настороженность, были верифицированы как остеомиелит. И, наоборот, 2 случая визуально напоминавшие язвенный дерматит, гистологически были верифицированы как базалиома.

Цитологические исследования показали, что в большинстве случаев в зоне повреждения, содержатся атипичные клетки. Исключение составляет подкогтевой рак, при котором сильно выраженное поверхностное воспаление затрудняет получение объективного цитологического материала. Обзорная окраска цитологического материала (Романовского, Лейшмана, Диф-Квик) не позволяет верифицировать гистогенетическое происхождение опухолей. Однако исследование морфологии ядрышка опухолевых клеток окраской AgNOЗ показало, что опухолевые клетки различного гистогенетического происхождения имеют различную форму укладки аргентофильных гранул. Всего за время исследования было верифицировано 14 гистогенетических вариантов новообразований в области пальцев, из которых, 5 вариантов приходиться на доброкачественные опухоли и 9 - на злокачественные. Из

злокачественных новообразований наиболее часто встречается плоскоклеточная карцинома - 35 случаев, что составило 44,87% (примерно в равных долях неподкогтевого и подкогтевого происхождения 19(20,51%) и 16(24,36%) случаев, соответственно) и меланома - 9(11,54%) случаев.

3.2.2. Рентгенодиагностика Рентгенографическое исследование показало, что остеодеструкция фаланг пальцев имеет место: в 87,5% (14 случаев) подкогтевого рака, в 10,52% (2 случая) неподкогтевого рака, ив 11,1% (1 случай) меланомы.

Обычная обзорная рентгенография не позволяет проводить четкую дифференциацию между воспалительной и опухолевой патологией. Внутривенная прижизненная ретроградная рентгеноконтрастная флебография обеспечивает при воспалительной патологии визуализацию типичной, но дилятированной сосудистой сети. В случае опухолевой патологии рентгеноконтраетное вещество визуализирует атипичную (новообразованную) васкуляризацию зоны опухолевого роста.

3.3. Результаты исследования морфологических, биохимических и иммунологических показателей крови собак ДО НАЧАЛА ЛЕЧЕНИЯ Исследования крови, проведенные до начала лечения, не выявили серьезных гематологичеких изменений. Имеют место только достоверные отклонения от референтной величины в показателях СОЭ (норма = 2-9 мм/ч) у животных с неподкогтевым плоскоклеточным раком (10,74±1,99мм/ч) и у животных с меланомой пальца (9,67±3,24мм/ч). В тех же группах животных отмечается незначительный лейкоцитоз со сдвигом ядра в лево: 12,26±2,42 и 18,0±3,16 соответственно (р<0,05). В биохимических показателях крови выявили повышенную активность костного изофермента щелочной фосфатазы у животных с подкогтевым раком (р<0,05). Достоверное повышение содержания сиаловой (ацетилнейраминовой) кислоты выявлено у животных с меланомой пальцев. Исследование напряженности иммунитета методом реакции бласттрансформации лимфоцитов периферической крови с митогенными лектинами, не выявило никаких закономерностей и различий между группами животных. Однако, при инкубировании клеток крови с рекомбинантным IL-2, отмечено достоверное высокое количество активированных лимфоцитов на третьи сутки инкубирования в группе животных с меланомой пальцев.

3.4. Лечение опухолевых заболеваний пальцев и пясти (плюсны-) Неоадыовантная и адьювантная химиотерапии были проведены в виде монохимиотерапии препаратами, показавшими максимальную цитотоксичность в тесте in vitro. Хирургическое удаление опухоли проводили «радикальным» способом (Бокарев А.В, Стекольников A.A., 2003 г.).

Протоколы лечебных мероприятий формировали, как показано в таблице 1: Протоколы, использованные для лечения опухолевых заболеваний дистальных отделов конечностей у собак

Таблица 1.

Опытная группа 1 Опытная группа 2 Опытная группа 3 Опытная группа 4

Фиброма N=3 3

J ts папиллома N=7 1 3 3

и й> а н Эпидермальная киста N=3 1 2

(D ¡Г Я и Гистиоцитома (ювиниальная) N=5 3 1 1

о. ю о ч липома N=1 1

Плоскоклето чный рак Подкогтевой локализации N=16 7 6 3

(D Неподкогтевой локализации N=19 6 11 2

в S 0J m н базалиома N=3 1 1 1

меланома N=9 7 2

о 6Г сЗ и, Тучноклеточная опухоль N=3 1 1 1

о ч метатипичный рак N=2 1 1

хондросаркома N=1 1

фибросаркома N=3 2 1

хемодектома N=2 1 1

Трихоэпителтома кистозная N=1 1

о о N=78 5 26 30 17

Ш t-1 100% 6,41 33,33 38,46 21,80

3.4.1. Подбор средств химиотерапии in vitro

На чувствительность опухолевых клеток к цитостатикам in vitro исследовано 18 опухолей: подкогтевой рак показал наибольшую чувствительность к циклофосфану и блеомицину; неподкогтевой рак показал наибольшую чувствительность к циклофосфану и тиофосфамиду; меланома - к метотрексату, циклофосфамиду и блеомицину; мастоцитома - к циклофосфану и меттрексату, а фибросаркома показала наибольшую чувствительность к метотрексату и циспластине.

3.4.2. Неоадыовантная химиотерапия методом внутривенной ретроградной инфузии (опытная группа 1) Неоадыовантная химиотерапия методом внутривенной ретроградной инфузии была применена по отношению к 61 животному (78,2%). В 5 случаях (8,2%) это привело к полной редукции новообразования (папиллома - 1 случай, гистиоцитома - 3 случая, базалиома - 1 случай). В 10 случаях (16,4%) терапия вызвала частичную редукцию опухолей. Наибольший эффект был отмечен в отношении меланомы (частичная редукция в 4 случаях из 7), мастоцитомы (частичная редукция в 2 случаях из 2), и фибросаркомы (частичная редукция в

2 случаях из 3). В 37 случаях (60,66%), 25 из которых представлена плоскоклеточным раком, терапия привела к улучшению визуализации хирургических границ новообразований. В 9 случаях (14,75%) неоадыовантная химиотерапия не оказала видимого эффекта на течение опухолевого и паранеопластического процессов.

3.4.3. Комбинированное лечение

* Неоадыовантная терапия с последующей операцией (опытная группа 2)

Из 26 животных, которых лечили по этому протоколу у 16 собак (61,54%) отмечалось без рецидивное течение за весь период наблюдения. У 1 животного с подкогтевым раком имел место рецидив по типу первичной множественности. У 6 собак (23,1%) (у 4 из которых новообразования были злокачественными (у

3 собак из 4 - плоскоклеточный рак)), имел место рецидив по месту удаления. Отдаленные метастазы, развились у 3 животных с плоскоклеточным раком, что составило 11,54% от всей группы животных, леченых по данному протоколу, и 17,6% от группы животных только со злокачественными новообразованиями.

* Неоадыовантная химиотерапия с операцией и дальнейшей адыовантной терапией (опытная группа 3)

Данный протокол лечения был применен только к злокачественным заболеваниям. Из 30 животных, которых лечили по этому протоколу, у 22 собак (73,3%) не наблюдалось каких либо рецидивов за весь период последующего наблюдения. У 1 животного с подкогтевым раком имел место рецидив по типу первичной множественности. У 4 (20,0%) животных, (2 - неподкогтевой плоскоклеточный рак, 1 случай меланома и 1 случай метотипичный рак)), имел место рецидив по месту удаления. Отдаленные метастазы впоследствии были выявлены у 1 животного с плоскоклеточным раком и у 2 животных с меланомой, что в совокупности составило 10,0% от всей группы животных, леченых по данному протоколу.

*Операция с последующей адыовантной терапией (опытная группа 4)

Из 17 животных этой группы, без рецидивное течение в последующие 24 месяца отмечено у 8 животных. Таким образом, процент без рецидивных

случаев среди доброкачественных новообразований составил 66,7%, а среди злокачественных - 36,36%. Рецидив по типу первичной множественности имел место в одном случае подкогтевого плоскоклеточного рака. Рецидив по месту удаления наблюдали 7 раз (2 случая доброкачественной опухоли и 5 случаев злокачественной). В одном случае при меланоме пальца наблюдали поражение внутренних органов метастазами.

3.5. Изменение морфологических, биохимических и иммунологических показателей у собак В ПРОЦЕССЕ и ПОСЛЕ ЛЕЧЕНИЯ Морфологические, биохимические и иммунологические исследования, проведенные в процессе и после завершения лечения, не выявили серьезных отклонений от референтных величин. У 21% животных опытной группы 2 и у 30% животных опытной группы 3 имело место незначительное снижение гемоглобина. Сиаловые кислоты в сыворотке крови достоверно возросли по сравнению с периодом предшевствующим лечению у 15% животных второй группы (р<0,05), у 27% животных третьей группы, и только у 3% животных четвертой группы. В 10% случаев, после лечения по протоколу неоадьювантная химиотерапия с операцией и последующей адьювантной химиотерапией отмечено достоверное возрастание активности сывороточной щелочной фосфатазы (р<0,05). Причем данное повышение в 3% было обусловлено за счет костного изовермента и в 7% за счет печеночного изовермента. У 25% животных третьей опытной группы после лечения снизилось количество эритоцитов, у 12% животных этой группы уменьшилось количество лейкоцитов периферической крови. Иммунологические исследования выявили снижение активности лимфоцитов в ответ на стимуляцию митогенами во всех группах животных, но более значительное в третьей группе животных. Так же отмечено что в периферической крови собак больных меланомой, достоверно снижается количество лимфоцитов способных к активации рекомбинантным 1Ь-2 (р<0,05).

3.6. Ранние и отдаленные результаты лечения опухолей пальцев и пясти (плюсны) у собак Для оценки последствий лечения опухолей пальцев, пясти или плюсны у собак учитывали следующие параметры: продолжительность заживления хирургической раны и восстановление опорной функции конечности. Анализ этих параметров показал, что заживление раны и восстановление опоры, наиболее быстро (9,17 суток и 9,1 сутки соответственно) происходило у животных третьей опытной группы (таблица 2).

Эффективность лечения опухолей дистальных отделов конечностей у собак _Таблица 2.

вид новообразований Протокол лечения всего случаев полная ремиссия после первой операции,% Количество рецидивов эвтаназия, бесперспективность лечения, %

| по типу первичной множественности, % рецидив по месту удаления, % вторичные метастазы, %

доброкачественные Опытная группа 2, N=9 100% 77,8 22,2

Опытная группа 3, N=0

Опытная группа 4, N=6 100% 66,7 33,3

злокачественные Опытная группа 2, N=17 100% 52,9 5,9 23,5 17,6 11,8

Опытная группа 3, N=30 100% 73,3 3,3 13,3 10 10

Опытная группа 4, N=11 100% 36,36 9,1 45,45 9,1 9,1

все новообразования Опытная группа 2, N=26 100% 61,54 3,85 23,1 11,54 7,69

Опытная группа 3, N=31 100% 73,3 3,3 13,3 10 10

Опытная группа 4, N=17 100% 47,06 5,88 41,18 5,88 5,88

Наиболее длительное заживление хирургической раны (11,35 суток) имело место у собак четвертой опытной группы, объясняется это тем, что в отсутствии циторедуктивной неоадыовантной химиотерапии требуется хирургическое вмешательство в более широких анатомических границах, что приводит к образованию большой хирургической раны. Кроме этого цитостатики могут тормозить пролиферацию фибробластов раневого края. Наиболее длительное восстановление опорной функции конечности (10,96 суток) имело место во второй опытной группе животных. Сравнительный анализ применяемых протоколов лечения показал что, при злокачественных заболеваниях пальцев наибольшее количество без рецидивных случаев (73,3%) имело место после применения неоадыовантной химиотерапии с последующей операцией и дальнейшей адыовантной химиотерапией (опытная группа 3). Со ответственно, количество местных рецидивов при данном протоколе было наименьшее: 3,3% - по типу первичной множественности, 13,3% - по месту удаления, а продолжительность времени до наступления местных рецидивов было наибольшее - в среднем 332 суток. В то же время, при данном протоколе

лечения, количество случаев с рецидивами заболевания, вследствие поражения внутренних органов метастазами, было почти на 1% больше, чем при протоколе лечения опытная группа 4 (операция с дальнейшей адьювантной химиотерапией) и составил 10%. Период до наступления (диагностики) признаков метастатического процесса в третьей опытной группе оказался наименее продолжительный - 121 сутки. В сравнении с результатами во второй

- 204 суток, и четвертой группе опытных животных - 129 суток. Во второй опытной группе процент без рецидивных случаев составляет 52,9%. Это обусловлено способностью неоадьювантной химиотерапии улучшать визуализацию границ опухолевой массы и, соответственно, способствовать более полному удалению опухоли. Последний протокол лечения (опытная группа 4) показал наименьшую эффективность в отношении лечения и последующей профилактики местных рецидивов, которые возникали в 45,45% случаев (соответственно без рецидивных 36,36%). При доброкачественных опухолях пальцев, протокол лечения неоадьювантная химиотерапия и операция показал себя более эффективным (без рецидивные случаи 77,8%, рецидивы 22,2% при среднем сроке наступления 326 суток), чем протокол лечения операция и адыовантная химиотерапия, при котором количество безрецидивных случаев составляло - 66,7 %, а без рецидивный период составил всего, 70 суток.

В то же время в отношении рецидивов обусловленных появлением отдаленных метастазов, наблюдается обратная закономерность.

При протоколе неоадьювантная химиотерапия + операция количество таких рецидивов больше (17,6%) в сравнении с протоколом операция + адьювантная химиотерапия (9.1%). По данной проблеме можно высказать гипотезу, что адьювантная терапия профилактирует процесс метастазирования обусловленный попаданием опухолевых клеток в кровоток и лимфоток в процессе хирургической операции. А при протоколе лечения не включающем адьювантной химиотерапии такие клетки беспрепятственно образуют дочерние опухоли.

Оценивая скорость наступления рецидивов можно отметить, что во всех случаях рецидивы отмечались в промежутке до 1,5 лет. Максимальное количество (37,5%) случаев с безрецидивным периодом укладывающимся в предел от 1 до 1,5 года отмечено только при протоколе лечения неоадьювантная химиотерапия + операция + адьювантная химиотерапия. При протоколе лечения неоадьювантная химиотерапия + операция случаев с таким длительным безрецидивным периодом отмечено только (12,5%). При протоколе лечения операция + адыовантная химиотерапия все случаи рецидивов, были отмечены в период до 1 года после лечения. Причем большинство из них (57%)

- в период до 0,5 года.

ВЫВОДЫ

1. У собак в области дистальных отделов конечностей встречаются доброкачественные (22,35%), и злокачественные опухоли (77,65%) различного гистогенеза; чаще у собак породы ризеншнауцер (16,95%), черный терьер (13,56%), пудель (26,32%) и в возрасте 9-11 лет (23,08%).

2. Гистологическими исследованиями было установлено 14 гистогенетических вариантов новообразований в области пальцев, из которых, пять вариантов приходиться на доброкачественные опухоли и девять - на злокачественные. Из злокачественных новообразований наиболее часто встречается плоскоклеточная карцинома - 35 случаев, что составило 44,87% (примерно в равных долях неподкогтевого и подкогтевого происхождения 19(20,51%) и 16(24,36%) случаев, соответственно) и меланома - 9(11,54%) случаев.

3. У собак с опухолевой патологией дистальных отделов конечностей отмечается достоверное повышение СОЭ и лейкоцитоз со сдвигом ядра влево (р<0,05) а также достоверное повышение активности костного изофермента щелочной фосфатазы и концентрации сиаловой кислоты (р<0,05).

4. Метод внутривенной ретроградной рентгеноконтрастной флебографии позволяет визуально оценить распространенность опухолевой ткани в пределах дистальных отделов пораженной конечности. Проведение локальной химиотерапии методом внутривенной ретроградной инфузии создает высокую концентрацию цитостатиков непосредственно в патологическом очаге.

5. Метод визуальной оценки аргентофилыюй зоны ядрышка опухолевых клеток, осуществляемый после их кратковременной (8 часовой) инкубации in vitro с различными цитостатиками, позволяет подобрать химиотерапевтические средства, к которым максимально чувствительна конкретная опухоль конкретного пациента.

6. Неоадьювантная внутривенная ретроградная химиотерапия приводит к полной или частичной редукции поверхностно растущих новообразований дистальных отделов конечностей и улучшает хирургические границы; адьювантная внутривенная ретроградная химиотерапия уменьшает количество местных и общих рецидивов после хирургического удаления опухолей дистальных отделов конечЕюетей у собак.

7. После химиотерапии отмечено достоверное повышение показателей: СОЭ, концентрации сиаловых кислот, концентрации ЦИК в крови (р<0,05). Другие показатели метаболизма после химиотерапии варьировали в пределах референтных значений.

8. Комбинация неоадыовантной химиотерапии, операции и последующей адьювантной химиотерапии опухолевого процесса дисталыюго отдела конечностей у собак увеличивает выживаемость животных на 1,5 года, в сравнении с только хирургическим лечением.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. У собак в случаях язвенно-некротического поражения пальцев и пясти (плюсны), рекомендовано проводить внутривенную ретроградную рентгеноконтрастную флебографию с целью диагностики, дифференциальной диагностики и определения распространенности патологического процесса.

2. В случае обнаружения, язвенно-некротического поражения пальцев и пясти (плюсны) обусловленного злокачественным новообразованием рекомендован индивидуальный подбор цитотоксических препаратов на основании теста in vitro, с последующей неоадьювантной химиотерапией методом внутривенной ретроградной инфузии; а после хирургического удаления злокачественной опухоли - адьвантной химиотерапией, для профилактики местных рецидивов.

3. Из-за высокой вероятности попадания лекарства в параваскулярное пространство, для внутривенной ретроградной химиотерапии, не следует использовать препараты, рекомендованные исключительно для внутривенного введения.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Бокарев A.B., Лаковников Е.А., Дашаев И.В. Морфология ядрышка и ядрышковых организаторов в клетках саркомы Штиккера - интактных и при лечении противоопухолевым препаратом винкристин//Международный вестник ветеринарии.- 2009.- №1,- С. 59 -62.

2. Стекольников A.A., Бокарев A.B., Нарусбаева М.А., Дашаев И.В. Исследование возможности лечения опухолевой патологии дисталъных отделов конечностей у собак методом внутривенной ретроградной химиотерапии//Ветеринарная практика.- 2009.- №1(44).- С. 52 - 57.

3. Дашаев И.В. Использование внутривенного ретроградного введения цитостатиков при опухолевой патологии дистальных отделов конечностей у собак//Актуальные проблемы ветеринарной медицины:Сб.науч.тр. СПбГАВМ.- СПб., 2009,- №140.- С. 25-26.

4. Дашаев И.В. Сравнительная токсичность противоопухолевых препаратов на организм собак//Актуальные проблемы ветеринарной медицины//Сб.науч.тр. СПбГАВМ.- СПб., 2009,- №140,- С. 26 - 29.

5. Пат. 2009100516/15 Российской Федерации, МПК А61К 35/14 (2006.01), А61К 35/14. Способ получения посттестового лейкоконцентрата периферической крови/Стекольников A.A., Бокарев A.B., Дашаев И.В.; заявитель и патентообладатель ФГОУ ВПО СПбГАВМ.- № 2394584/10; заявл. 11.01.2009; опубл. 20.07.2010, Бюл. №20.- 2с.

Подписано в печать «11» апреля 2008 г. Формат 60x84/16 Бумага офсетная. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,25. Тираж 100 экз. Заказ № 555

Типография «Восстания -1» 191036, Санкт-Петербург, Восстания, 1.

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Дашаев, Иса Вахаевич

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 АНАТОМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДИСТАЛЬНОГО ОТДЕЛА'

КОНЕЧНОСТЕЙ У СОБАК

В рамках данной диссертации, как дистальные, рассматриваются те части конечностей собак, которые располагаются дистальнее запястного (на передней конечности) и заплюсневого (на задней конечности) суставов (рис.1.).

Скелет дистальных отделов конечностей собак представлен костями пясти (плюсны), фалангами пальцев и сесамовидными костями.

Кости и суставное соединение пальцев тазовой и грудной конечности устроены по одинаковому принципу. Незначительные отличия заключаются в том что: первая и вторая фаланга пальцев стопы несколько уже и тоньше чем на пальце грудной конечности, а третья фаланга длиннее, чем на грудной конечности. Дорсальные (одиночные) и плантарные (парные) сесамовидные кости суставов первых фаланг короче, но толще, чем на грудной конечности.

Мускулы, действующие на запястный сустав и на суставы пальцев располагаются в области предплечья. Длинные мышцы суставов пальцев начинаются от дистальной части плечевой кости, а оканчиваются на фалангах пальцев -— все они являются многосуставными и действуют на локтевой сустав и суставы пальцев: пястно-фаланговые, суставы вторых и третьих фаланг.

Поверхностный и глубокий сгибатели суставов пальца располагаются на каудомедиальной поверхности костей предплечья между сгибателями запястного сустава. К длинным разгибателям суставов пальца относятся: общий разгибатель, суставов пальца и боковой разгибатель суставов пальца. Брюшки этих мышц лежат на краниолатеральной' поверхности костей предплечья между разгибателями запястного сустава.

На задней конечности разгибатели проходят по краниальной поверхности большой берцовой кости и дорсальной поверхности костей стопы, а сгибателями - по каудальной поверхности большой берцовой кости и плантарной поверхности костей стопы.

Рис.1. Дистальный отдел конечности собаки (внешний вид): а - дорсальная сторона; б — латеральная сторона; в - задняя сторона (плантарная или волярная). 1- пальцы, 2- пясть (плюсна), 3- запястье (заплюсна), 4- коготь, 5- пальцевый мякиш, 6- пястный (плюсневый) мякиш, 7- запястный (заплюсневый) мякиш. г - продольный срез пальца: 1 - кость третьей фаланги; 2 - роговая стенка когтя; 3 - основа кожи когтя; З1- валик каймы когтя; 4 - роговой слой подошвы; 5 - дорсальная эластическая связка; 6 - кость средней фаланги; 7 -сухожилие глубокого сгибателя пальца; 8 - дистальная сесамовидная кость; 9 - пальцевый мякиш; 10 - железы; 11 - кость первой фаланги.

Крово- и лимфообращение пальца у собаки

Отток венозной крови от грудной конечности осуществляется по двум сосудистым магистралям: глубокая и поверхностная. Вены, формирующие первую из них, сопровождают одноименные артерии и получают аналогичные названия (рис.2, 3). При этом они, как правило, удвоены. Поверхностная венозная магистраль идет под кожей. Из поверхностных волярных вен пясти и пальцевых вен начинается подкожная вена предплечья (v. cephalica antebrachii), которая в области локтевого сустава отдает анастомогическую ветвь к плечевой вене (ramus anastomoticus cum v. Brachialis), а сама получает добавочную подкожную вену (v. cephalica accessoria). Последняя проходит по дорсальной поверхности предплечья и отводит кровь из дорсальных пястных и дорсальных пальцевых вен. На тазовой конечности, из плантарной венозной дуги и плантарных пальцевых вен, выходит медиальная вена сафена (v. saphena medialis), которая огибает медиодорсально плюсневые кости и переходит в медиальную дорсальную плюсневую вену. Последняя переходит на краниомедиальную поверхность голени, получает название медиальной вены сафена и впадает в бедренную вену. Из дорсальных и плантарных плюсневых вен начинается латеральная вена сафена (v. saphena lateralis). Она лежит на латеральной поверхности голени и впадает в каудальную вену бедра, к которой проходит по каудальной поверхности икроножной мышцы.

Отток лимфы от дистальных отделов грудной конечности осуществляется в подмышечный лимфатический узел (In. Axillaris), в добавочный подмышечный лимфатический узел (In. axillaris accessorius) и в поверхностный шейный лимфоузел (Inn. Cervi-cales superficiales). Отток лимфы из первого осуществляется в грудной проток, или в наружную яремную вену. Отток лимфы из второго осуществляется в подмышечный лимфатический узел. Отток лимфы из последнего, на левой стороне, осуществляется в задние шейные лимфатические узлы и (или) в ярёмную вену. А с правой стороны, в правый лимфатический ствол. Отток лимфы от дистальных отделов тазовой конечности происходит в подколенный лимфатический узел (In. Popliteus), и далее в медиальный подвздошный лимфоузел; а также частично в глубокий паховый лимфатический узел (In. inguinalis profundus). А оттуда в крестцовый и (или) медиальный подвздошный лимфатический узел.

Рис. 2. Артерии пальцев конечности

1 - плюсневая плантарная артерия;

2 - пальцевые артерии.

Рис. 3. Артерии пальцев конечности

1 - срединная артерия;

2- осевая пальцевая вторая артерия;

3- осевая пальцевая третья артерия;

4- осевая пальцевая четвертая артерия;

5- осевая пальцевая пятая артерия;

6- пальцевые артерии;

7- артерии мякиша

8- поверхностная пальмарная пястная артерия.

Иннервация в области пальца у собаки

Нервы дорсальной поверхности кисти - начинаются от дистальной фаланги пальцев как дорсальные пальцевые нервы (п. digitales dorsales lateralis et medialis I. и n.digitalis dorsalis. medialis II), проксимально переходят в дорсальные пястные нервы, а далее в лучевой нерв {ramus lateralis) и его латеральную ветвь {ramus lateralis) и в дорсальную ветвь локтевого нерва {ramus dorsalis). С волярной стороны пальцы инервируются волярными пальциевыми специальными нервами {п. digitalis volaris medialis et lateralis), которые проксимально переходят в поверхностные волярные пястные нервы {пп. metacarpeus volares superficiales), далее в волярную ветвь локтевого нерва {ramus volaris) и в серединный нерв {п. Medianus). На стопе дорсально пальцы инервируют специальные дорсальные пальцевые нервы {п. digitalis dorsal is II, п. digitalis dorsalis medialis III, n. digitalis dorsalis lateralis III, n. digitalis dorsalis medialis IV, n. digitalis dorsalis lateralis IV, n. digitalis dorsalis V); проксимально они переходят в дорсальные плюсневые нервы {пп. metatarseae dorsales), а далее в поверхностный малоберцовый {п. peroneus superficialis) и в глубокий малоберцовый нервы {п. peroneus profundus). На плантарной поверхности стопы имеются специальные плантарные пальцевые нервы {п. digitalis plantaris lateralis IV, п. digitalis plantans V, и т. д), которые проксимальнее переходят в плантарные плюсневые нервы {пп. metatarseae plantares) и далее в плантарные медиальный и латеральный нервы {пп. plantares lateralis et medialis). Они сливаясь, образуют болыпеберцовый нерв {п. Tibialis).

Дистальные отделы конечностей собаки покрыты кожей (integumentum commune (cutis)), которая состоит из эпидермиса, основы кожи и подкожного слоя (рис.4.). Эпидермис представлен многослойным ороговевающим эпителием.

Рис.4. Строение кожи.

1 - подкожный слой;

11 - сосочковый слой основы кожи;

2 - базальный (производящий) слой эпидермиса;

3 - шиповатый слой эпидермиса;

4 - гранулярный слой эпидермиса;

5 - ороговевающий слой эпидермиса.

В рамках рассматриваемой темы важно отметить, что анатомические элементы дистальных отделов конечностей собак сформированы, практически, из всех, известных на сегодняшний день, тканей: эпителиальной, соединительной, мышечной, нервной. А, так же, крови и лимфы и клеток иммунной системы. Клетки большинства из перечисленных тканей имеют высокий пролиферативный потенциал, а значит, при воздействии на них канцерогенных факторов могут служить источником опухолевого роста.

1.2. ОПУХОЛЕВЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ У СОБАК: эпизоотология, классификация, этиология, патогенез

Эпизоотология опухолей дистального отдела конечностей у собак

Современная домашняя собака, благодаря хорошему уходу, полноценному кормлению и своевременной ветеринарной помощи, доживает до того возраста, когда риск онкологических заболеваний многократно возрастает.

На сегодняшний день по статистике различных исследователей известно что, как правило онкологические заболевания у собак возникают во второй половине их жизни (в среднем 7-9 лет и старше). В возрасте 3-5 лет заболевания онкологической природы встречаются в единичных случаях, а в возрасте до 3 лет крайне редко (7, 12, 14, 32, 38, 48, 50).

Наиболее часто, специалистами ветеринарной медицины диагностируются опухоли молочных желёз у сук, разнообразные опухоли кожи, опухоли наружных половых органов, опухоли крови и лимфоузлов, опухоли костей, опухоли носовых пазух, опухоли семенников у кобелей и яичников у сук. В то же время, такие заболевания опухолевого генеза, как опухоли мозга, лёгких и желудка считаются редкими (49, 50, 55, 75, 80).

По разным источникам частота новообразований у собак к общему числу незаразных заболеваний варьирует: от 5% до 20% и даже до. 35%. Смертность собак от опухолевой патологии высока и может составлять до 29% от всех причин гибели (50).

Опухоли у собак бывают доброкачественными и злокачественными. Доброкачественные опухоли окружены капсулой, имеют вид плотного округлого узла и обычно растут медленно. Они обычно не метастазируют, но могут наносить ущерб здоровью и даже жизни пациента, если вызывают сдавливание жизненно важных органов, сосудов или нервов (88, 92, 112, 124, 125). Злокачественные опухоли редко имеют капсулу, быстро увеличиваются в размерах и обладают способностью прорастать в окружающие ткани, а так же распространяться по внутренним органам лимфогенным и гематогенным путём (метастазировать) образуя в них вторичные опухоли (2, 6, 30, 31, 58, 75, 76).

Кроме опухолей гистогенетически сходных с опухолями людей, у собак встречаются и эксклюзивные, не встречающиеся у других биологических видов, такие как трансмиссивная венерическая опухоль (106, 109) и кожная гистиоцитома щенков (126). Знание морфологии и биологии данных новообразований крайне важно для правильной диагностики и разработки стратегии лечения.

Данные по опухолевой патологии дистальных отделов конечностей собак малочисленны и противоречивы. Имеются данные, что из всех опухолей дистальных отделов конечностей на злокачественные приходится 75%, и 25% на доброкачественные. Среди злокачественных новообразований 24% приходиться на меланомы, 29% - на сквамозноклеточные карциномы и 47% на другие гистогенетические варианты новообразований. Из всех сквамозноклеточных карцином 65,6% имеет подкогтевое происхождение (112). В другом исследовании отмечена более частая встречаемость подкогтевого рака - 33,9% (130).

Согласно исследованиям отечественных авторов (14, 26), 22,2 % опухолей дистальных отделов конечностей собак представлены доброкачественными новообразованиями, которые верифицированы так: фибромы - 8,3%, папилломы - 8,3% и эпидермальные кисты - 5,6%. Из всех исследованных опухолей 77,8% оказались злокачественными. Большая часть злокачественных новообразований была представлена опухолями кожи (26 из 28). И только две опухоли имели неэпителиальное происхождение: одна опухоль была верифицирована как плазмоцитома, а другая как хемодектома (нехромофинная параганглиома). Первичные опухоли кожи были представлены меланомами - 11,1%, две из которых были беспигментными , метатипичным раком - 2,8% и плоскоклеточным раком - 55,6 %. Плоскоклеточный рак пальца составил 75% от всех злокачественных опухолей пальцевой локализации. 90,5 % опухолей дистальной фаланги верифицированы как подкогтевая сквамозноклеточная карцинома.

Клиническая и анатомическая классификации опухолей

На сегодняшний день параллельно существуют две классификации злокачественных новообразований, которые дополняют и усовершенствуют друг друга.

Первая классификация - деление злокачественных новообразований на 4 стадии (их обозначают римскими цифрами I, II, III, IV, отражающими как размеры опухоли, так и распространение опухоли в пределах органа или за его границами. Буквы русского алфавита указывают на отсутствие ("а")' или наличие ("б") регионарных и отдаленных метастазов.).

В основу классификации по стадиям положена степень распространенности новообразования к моменту установления диагноза. Учитывается: одна и та же локализация, однородность по клиническому течению болезни, прогнозу, подходу к лечебной тактике, а также размеры опухоли, характер вовлечения в процесс подлежащих тканей, переход на соседние анатомические отделы, наличие или отсутствие регионарных и отдаленных метастазов - одиночных, множественных, смещаемых, несмещаемых.

Вторая классификация - разработанная специальным комитетом Международного Противоракового Союза (МПРС) так называемая система TNM принятая для описания анатомического распространения поражения, основана на 3 компонентах.

Международная классификация степени распространения злокачественных опухолей у человека по системе TNM начала разрабатываться в 40 годах 20 века. В 2002 г. опубликовано 6-е издание TNM, одобренное и принятое Американским объединенным комитетом по онкологическим заболеваниям и Международным противораковым союзом, которое было рекомендовано к использованию с января 2003 г.

Аналргичная классификация для опухолей у домашних животных начала разрабатываться в 70-ых годах XX века и была издана на английском языке в 1980 году (115, 145). В 1997 году ФГОУ ВПО «Санк-петербургская государственная академия ветеринарной медицины» издала методические рекомендации «классификация опухолей домашних животных по системе TNM».

Абривиатура TNM состоит из заглавных букв слов-символов обеспечивающих описание клинической стадии, в которой находиться животное с неоплазмой на момент обследования: Т - tumors: описывает размер опухоли и её прорастание в окружающие ткани. Соответственно размеру и инфильтрации опухолью окружающих тканей существует градация- Ть Т2, Т3, Т4 (цифры указывают на распространенность злокачественного процесса); N - noduli: характеризует вовлечённость в опухолевый процесс регионарных лимфатических узлов. No - метастазы в лимфатических узлах отсутствуют. Nb N2, N3 - соответственно подозрение на метастазы, множественные подвижные метастазы, неподвижные метастазы. М - metastasis: описывает отсутствие - М0 или наличие - Mi гематогенных метастазов в органах и тканях отдалённых от места первичной локализации опухоли (88, 127). Как дополнительная информация, касающаяся степени дифференцировки опухоли первичной опухоли: GX -степень дифференцировки не может быть установлена, G 1 - высокая степень дифференцировки, G 2 - средняя степень дифференцировки, G 3 - низкая степень дифференцировки, G 4 - недифференцированные опухоли.

Множественные и диссеминированные опухоли имеют специфику в описании по классификации TNM.

В отношении опухолей дистальных отделов конечностей собак такая специфика не описана.

Патологическая классификация (постхирургическая, патогистологическая-классификация), обозначается pTNM, основывается- на данных, полученных до начала лечения1 и дополнительных сведений, при хирургическом вмешательстве или исследовании операционного материала. После определения Т, N ,М и/или рТ, pN и рМ категорий может быть выполнена группировка по стадиям.

Этиология и патогенез опухолевых заболеваний

Современные данные, полученные при изучении биологии клетки свидетельствуют о том, что для превращения нормальной клетки в опухолевую должны произойти серьезные нарушения в ее генетическом аппарате (7, 9, 31, 58, 62, 132). Факторы способные вызвать подобные нарушения принято называть факторами канцерогенеза (канцерогенные вирусы, ионизирующее излучение и химические вещества). Следует отметить, что некоторые, исходно не канцерогенные вещества, могут превращаться в канцерогены уже после попадания в организм. Так аминокислота тирозин может превращаться в канцерогенный метаболит в печени. Интересно, что в генетическом аппарате клеток могут присутствовать специфические гены (онкогены) которые могут активироваться факторами канцерогенеза и продукт которых может индуцировать ее опухолевую трансформацию. Современные методы генетического скрининга позволяют выявить наличие таких генов в геноме пациента и тем самым выявить склонность исследуемого индивида к той или иной опухолевой патологии. Собакам, как и человеку, наиболее часто приходиться контактировать именно с химическими канцерогенами. Обнаружено, что собаки, живущие в домах заядлых курильщиков и собаки, живущие вблизи цехов деревообработки чаще страдают от болезней онкологической природы (108).

Под воздействием канцерогенного фактора на генетический аппарат клетки, последняя либо погибает, либо приобретает способность к бесконтрольному размножению. Но процесс превращения нормальной клетки в раковую сложный и многоступенчатый.

Упрощенно схему опухолевого процесса можно представить так:

Клетка приобретает способность к постоянному делению и теряет способность к апоптозу и не подчиняется контактному торможению, вследствие чего возникает и увеличивается в размерах первичная опухоль. клетки опухоли теряют рецепторы адгезии, вследствие чего первичная опухоль перестает быть компактной ограниченной массой и инфильтрирует окружающую ткань, а отдельные опухолевые клетки кровотоком и (или) лимфотоком разносятся по всему организму.

Опухолевые клетки, попавшие в органы и ткани пролиферируют и дают вторичные опухоли (метастазы). Способность к метастазированию приобретается опухолевыми клетками не сразу (могут быть исключения).

Органы и ткани пораженные первичной и вторичными опухолями начинают функционировать некорректно или их функция полностью выпадает.

Надо отметить, что патологическое влияние опухолей на макроорганизм обусловлено не только механическим повреждением внутренних органов. Могут возникать серьезные нарушения метаболизма макроорганизма. Например, инсулинома (опухоль из в-клеток поджелудочной железы) приводит к развитию хронической гипогликемии. А аденома поджелудочной железы сформированная из а-клеток приводит к развитию у собак заболевания называемого «метаболический некроз кожи».

1.3 ДИАГНОСТИКА И ЛЕЧЕНИЕ ОПУХОЛЕВЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Диагностика опухолевых заболеваний

Диагностика заболеваний онкологической природы имеет свою специфику и свои сложности. Скрытое течение заболевания, малосимптомность, отсутствие, как правило, патогномоничных симптомов для рака любой локализации, схожесть клинических проявлений с другими неонкологическими заболеваниями затрудняет своевременную диагностику рака (2, 9, 80, 127). Поэтому, большое значение в своевременной диагностике рака имеет "онкологическая настороженность" врача, под которой следует подразумевать конкретные познания в области онкологии, и которая включает: 1) знание симптомов злокачественных опухолей в ранних стадиях; 2) знание предраковых заболеваний и их лечение; 3) тщательное обследование каждого больного, обратившегося к врачу с целью выявления возможного онкологического заболевания; 4) привычку в трудных случаях диагностики думать о возможности атипичного или осложненного течения злокачественной опухоли; 5) привычку помнить об опасности необоснованного оптимизма в отношении пациентов с малой симптоматикой заболевания.

Для злокачественных опухолей характерны достаточно быстрый рост, прорастание в окружающие ткани, распад, присоединение инфекции и параканкрозное воспаление, интоксикация и метастазирование (6, 14, 16, 32, 35, 38, 39, 48, 51, 53, 58, 62, 83, 90, 92, 115, 126,). Эти свойства по-разному проявляются в зависимости от локализации опухоли, клиникоанатомической формы, стадии и степени дифференцировки. При объективном обследовании больного с предраковыми заболеваниями и раком можно выделить некоторые синдромы с учетом их определенной условности (2, 9, 28, 38, 69, 76, 80).

Синдром "плюстканей", или опухолевидного образования. Это главный признак злокачественной опухоли, который определяется визуально, пальпаторно или методами специального исследования. При наружной локализации заболевания внимание врача акцентируется на увеличении размера образования или органа, изменение цвета, появление изъязвления, избыточный рост грануляций и т.д.

Синдром патологических выделений. Например, врач может отметить наличие крови в слюне, мокроте и испражнениях. Причем примесь крови может быть как при значительных по размеру, так и при небольших, но распадающихся опухолях. Классическим примером является кровянистые выделения из половых органов у сук при трансмессивной венерической опухоли. Постоянное раздражение опухолью слизистой желудка, кишечника, бронха может приводить к повышенному выделению слизи. Опухоль молочной железы может сопровождаться патологической лактацией. Присоединение инфекции изменяет характер выделений.

Синдром нарушения функции. Злокачественная опухоль может деформировать органы или ткани сдавливая их извне или изнутри. Тогда может развиваться различная симптоматика нарушения функций как то: кишечная непроходимость, одышка, механическая желтуха, задержка мочеиспускания, хромота и др. Диагностика и оценка данных симптомов, обычно, не требуют специальных методов исследования.

Более трудной представляется оценка нарушения секреторной и инкреторной функций органов. Опухоль, замещающая функционирующую ткань органа, может вызвать снижение секреторной деятельности ткани (5, 36, 44) или сохранить ее функциональную активность (1,31, 57).

Наряду с общеклиническими и лабораторными анализами при диагностике злокачественных опухолей широко используется рентгенодиагностика, УЗИ-диагностика, ЯМР-тамография (и другие виды тамографии), иммунодиагностика. Ветеринарная онкология отстает в диагностике от онкологии гуманной и широко использует только лабораторные методы исследования, рентгенодиагностику (в модификации и без), УЗИ-диагностику, а так же цитологическое и гистологическое исследование биопсийного материала.

В последние годы появились работы по ветеринарной тамографии (93).

Лучевая диагностика, в широком смысле этого термина, предусматривает использование рентгеновских лучей, радиомагнитного резонанса и ультразвукового сканирования. При рентгенологическом исследовании используются бесконтрастные и контрастные методы. Визуальная рентгенологическая картина рака зависит от многих факторов: от размера, формы, плотности и места роста опухоли. Обычно лучше выявляются плотные экзофитные опухоли, растущие в просвет полого органа, хуже эндофитные (инфильтративные). Рентгенологическая семиотика нередко основывается на анализе следующих синдромов: синдром уплотнения тканей, синдром деструкции тканей, синдром деформации трубчатых и полых органов, синдром нарушения функции органа (12, 14, 60,61,66, 67, 146).

Ученые ФГОУ ВПО «Санкт-петербургская государственная академия ветеринарной медицины» разработали метод внутривенной ретроградной ангиографии. Данный метод позволяет визуализировать микроциркуляторное русло патологического очага дистальных отделов конечностей у собак. На основании этих визуальных данных, в большинстве случаев, можно дифференцировать повреждения воспалительного и опухолевого генеза, а так же доброкачественный опухолевый процесс от злокачественного (27, 86).

Также информативно в диагностике злокачественных опухолей и ультразвуковое сканирование. Используя различные методики, можно точно дать такие характеристики опухоли как: локализация, размер, контуры, структура, наличие включений. При УЗИ возможно выполнение направленной пункционной биопсии. Можно получить информацию о метастазах и местных отсевах (10, 54).

Специфическое противоопухолевое лечение не может быть начато без морфологического подтверждения злокачественности новообразования. Поэтому биопсия с последующей гистологической или цитологической верификацией, является обязательной диагностической процедурой. В отношении дистальных отделов конечностей у собак это имеет, тем более, принципиальное значение так как многие хронические воспалительные процессы сопровождающиеся избыточной пролиферацией грануляционной ткани, визуально сходны с новообразованиями онкологической природы (26, 27, 112, 124, 130).

Термин "биопсия" (от греческого "биос" жизнь и "опсис" зрение) был предложен в 1879 г. французским дерматологом Эрнестом Анри Бенье для обозначения исследования кусочка ткани, удаленного прижизненно хирургическим путем с диагностической целью, которое предусматривает не только забор ткани, но ее микроскопическое исследование. Затем это понятие было расширено и исследованию стали подвергать не только ткань (гистология), но и клетки (цитология) (1, 2, 38, 48, 50, 55, 65, 79, 90, 128, 132, 144). Существует более 16 видов биопсий, включающих, например, такие как: трепанбиопсия, щипцовая биопсия, кюретаж, направленная катетеризационная биопсия, биопсия путем массажа и давления, аспирационная или засасывающая биопсия, биопсия путем использования губки или тампона, биопсия путем промывания полых органов, биопсия путем смыва операционных ран, неожиданная или случайная биопсия. Но в практике ветеринарной онкологии наиболее часто используются 4 вида биопсии. 1 - эксцизионная биопсия - хирургическое удаление всего патологического очага. 2 - инцизионная биопсия - взятие кусочка опухоли на границе с неизмененной тканью. 3 - пункционная биопсия тонкой иглой. 4 — мазки-отпечатки.

Цитологическая диагностика рака предполагает обнаружение в материале атипичных клеток. Однако для планирования лечения необходимы гистологические характеристики опухоли. При гистологической диагностике устанавливается точный гистогенетический тип новообразования и соотносительно этого назначается протокол лечения (1,6, 26, 43,49, 55,83).

Что касается лабораторной диагностики рака, то следует отметить, что пока нет универсальных реакций, которые позволили бы своевременно диагностировать рак. Известно, что изменения в составе крови анемия, лейкопения или лейкоцитоз, повышенная СОЭ не являются специфическими и могут иметь место при различных заболеваниях. Но отклонения этих показателей от рефферентных величин, выявленные при обследовании больного, обязывают врача выяснить причину их возникновения и исключить онкопатологию (44, 47, 51, 57, 110).

В^ настоящее время, в гуманной медицине, широко используются иммунодиагностика (определение опухолевых маркёров) и радиоизотопная диагностика (избирательное поглощение радиоактивного материала опухолевой тканью) злокачественных опухолей. Однако в ветеринарной медицине данные методы широкого распространения не имеют.

Сегодня в ветеринарной медицине начинает широко использоваться эндоскопическая диагностика. Данный вид диагностики позволяют осмотреть и получить необходимую информацию об исследуемом органе: сужение и деформация полого органа, состояние слизистой (отечность, гиперемия, кровоточивость), наличие инфильтрации. При обнаружении опухоли эндоскопическая визуализация позволяет дать ей характеристику: эндофитная или экзофитная, определить параметры, характеризующие степень местного распространения (размер, изъязвление, смещаемость). Современные эндоскопы позволяют, так же, взять материал для морфологического исследования. В специализированной научной печати по ветеринарной медицине уже представлены материалы по визуализации эндоскопическим методом опухолевой патологии носовых ходов у собак и кошек. В отношении опухолевой патологии дистальных отделов конечностей данный метод не актуален.

Лечение и прогноз опухолевых заболеваний

В соответствии с рекомендациями Европейской Ассоциации по онкологическому образованию при составлении плана лечения больного необходимо знать три главных фактора: фактор опухоли, фактор больного и фактор доктора. Фактор опухоли определяет совокупность таких данных как: гистогенез, дифференцировка и степень местного распространения опухоли, а так же наличие или отсутствие лимфогенных и гематогенных метастазов. Фактор больного определяется общим состоянием здоровья больного и наличием сопутствующей патологии. К фактору доктора относятся специфическая компетенция персонала лечебного учреждения, оборудование, медикаменты и средства обслуживания.

Современная клиническая онкология использует три основных вида лечения: оперативное, лучевое и лекарственное (11). Любой из этих видов может применяться как самостоятельно, так и в различных комбинациях. Операция и лучевая терапия являются местнорегионарными методами лечения. Лекарственное лечение относится к системному. Выбор метода лечения зависит от типа опухоли, ее биологических особенностей, локализации, распространенности процесса, возраста пациента и его общего состояния.

Различают комбинированный метод лечения при котором, кроме радикального хирургичого ользуют и другие виды воздевия на опухолевый проц в зоне мнорегионарного поражения. Сочетанный -предатривающий два или более однотипных воздевия (различные очники излучения при лучевой терапии) на опухоль и метазы. И комплеый - включающий два или нолько разнородных воздевия на опухолевый проц, но при этом обязательным являе хотя бы один метод, направленный на уничтожение циркулирующих или вших в тканях за пределами мнорегионарной зоны поражения опухолевых клеток. Имеет отметить, что в научной литературещвует некоторая путаница в понятиях комбинированный и комплеый методы лечения. И, как это ниранно, но Директор Европеой школы онкологии (РФ-СНГ);.н РОНЦ им. Блохина Субраманиан Ссундаран, читая лекцию «Принципы хирургичого лечения злокачвенных новообразований» на втором общеобразовательном ку онкологии дляудентов (07, 08), ваза в томе, чтом дох пор не понимает в чем разница между комплеым и комбинированным методами лечения.

В зависимости от поставленной цели, различают радикальное лечение направленное на полное уничтожение всех опухолевых клеток в организме, и нерадикальное - направленное на частичное уничтожение опухоли или паранеопластических синдромов. Нерадикальное лечение, обычно, назначается при выраженной распространенности ракового процесса, когда рассчитывать на радикализм не представляется возможным. В этом случае планируется паллиативное или симптоматическое лечение в задачи которых входит ограничение темпа или временная задержка прогрессирования процесса, улучшение качества жизни больного, предупреждение специфических симптомов, лечение осложнений.

Хирургическое лечение (12, 61, 69, 72, 80, 85, 97, 141, 149). В основе хирургического лечения злокачественных опухолей лежат два принципа абластика и антибластика. Под абластикой понимают такой способ оперирования, при котором удаляют все опухолевые элементы в пределах здоровой ткани. Абластичность хирургических операций возможна только при соблюдении таких методик оперирования как: зональность и футлярность. Понятие "зональность хирургического вмешательства" определяет методику оперирования, при которой учтены особенности местного распространения опухоли и предполагаемых или выявленных метастазов в регионарные лимфоузлы. Тогда объем оперативного вмешательства определяется стадией процесса и анатомической формой роста опухоли.

Понятие «футлярности» подразумевает выполнение операции в пределах анатомических фасциальножировых и серозножировых футляров естественным образом отграничивающих распространение опухоли. Под антибластикой подразумевается совокупность правил соблюдение которых профилактирует ятрогенный разнос опухолевых клеток из зоны первичной локализации. К этим правилам относятся следующие: 1 - орган или его часть, пораженные опухолью, и регионарные лимфатические узлы должны удаляться единым блоком в пределах анатомических футляров; 2 - раннее лигирование венозных сосудов, отводящих кровь от опухоли; 3 - перевязка трубчатых органов выше и ниже опухоли; 4 - обкладывание пораженного опухолью органа марлевыми салфетками; 5 - частая смена перчаток и инструментов; 6 - обработка операционного поля, после удаления опухоли, антибластическими веществами (спирт, химически чистый ацетон). Правда, следует отметить, что изучение вопроса химической антибластики показало ее низкую эффективность. Большое значение имеет предоперационное и послеоперационное лучевое воздействие, понижающее жизнеспособность опухолевых клеток.

Виды хирургических операций.

Резекция - удаление части органа с восстановлением или без восстановления его непрерывности.

Ампутация - усечение, удаление дистального отдела органа.

Экстирпация полное удаление органа, пораженного раком. Типы онкологических операций.

Радикальная операция предусматривают полное удаление первичной опухоли и полное удаление регионарных метастазов в пределах здоровых тканей. В тех же случаях, когда нет возможности радикального удаления опухоли с широким захватом окружающих тканей изза сложности синтопии или близости жизненных органов, решается вопрос о дополнительной лучевой терапии.

Паллиативная операция - неполное удаление опухолевой ткани. При таких операциях устраняется, например, непроходимость, кровотечение, уменьшается интоксикация и создаются условия для последующего лучевого или медикаментозного лечения.

Симптоматические операции - операции устраняющие ведущий патологический симптом больного: непроходимость желудочнокишечного тракта, непроходимость дыхательных путей, внутреннее кровотечение и т.д. Возможны и другие виды хирургического вмешательства, которые не носят, как правило, радикальный характер:

• энуклеация опухоли (по специальным показаниям), В онкологии операция энуклеация в принципе является ошибочной и может выполняться по особым показаниям в отдельных случаях. При энуклеации имеется высокий риск оставления части опухоли.

• деструкция опухоли методами электрокоагуляции, криодеструкции, лазерного излучения и локальной гипертермии. Рассчитывать на радикализм при данных методах трудно, а так же сложно убедиться, насколько полностью разрушена опухоль.

Рис.5. Техника удаления пальца радикальным (1) и щадящим (2) способами. А-спинковая, Б-подошвенная сторона кисти (стопы). 1,2,3-проекции первой, второй и третей фаланги пальцев соответственно. 4-проекция пястной (пльсневой) кости. 5-пястно-(плюсне) фаланговый сустав. 6-третий и четвёртый пальцы. 7-линии хирургических разрезов. 8-пястный (плюсневый) мякиш. 9-пальцевые мякиши. 10-линии ушивания кожных лоскутов после удаления пальца. 11-межпальцевые складки. 12-суставная часть пястной (плюсневой) кости. 13-кожные лоскуты после удаления пальца. 14-остаток пястной (плюсневой) кости после сегментарной резекцией её дистального отдела.

Для подтверждения радикальности удаления опухоли производится гистологическое исследование резекционного края.

Хирургический метод лечения опухолевой патологии собак является самым доступным и, поэтому, доминирующим. В пособиях по ветеринарной хирургии описано достаточно много технических приемов для удаления новообразований различных локализаций. Для хирургического лечения опухолевой патологии пальцев у собак применяются несколько типов операций: 1 - местная эксцизия, 2 - частичная ампутация пальца (простая и с сохранением кожи пальцевого мякиша), 3 - щадящий способ ампутации и 4 -радикальный способ ампутации (85). Первый и второй способ не рекомендованы для лечения злокачественных новообразований. А третий и четвертый способ хорошо себя зарекомендовали при лечении такого заболевания с низким метастатическим потенциалом, как подкогтевой рак (рис.5). Другие хирургические техники, рекомендованные при опухолевой патологии пальцев и пясти (плюсны) у собак, сводятся к частичной или полной ампутации конечности и не актуальны соотносительно данного исследования.

Актуален вопрос: нужно ли удалять регионарные лимфоузлы, (если метастазы в них не обнаружены) при лечении рака наружных или дистальных локализаций? Существуют разные мнения на этот счет. От утвердительного при наличии признаков выраженной злокачественности, до тактики "бдительного ожидания" (11).

Лучевая терапия (45, 66, 114, 129, 146). Лучевая терапия, как и хирургическое лечение, является методом местнорегионарного воздействия. С этой целью применяется рентгеновское или другие виды ионизирующего излучения.

Энергия ионизирующей радиации, переходя на биомолекулы клеток инактивирует или разрушает последние. Вследствие чего клетки погибают по механизму некроза или апоптоза. Ионизирующее излучение оказывает повреждающее действие, как на раковые, так и на здоровые клетки. Но клетки злокачественных опухолей, особенно недифференцированные, с большим числом митозов обладают наибольшей чувствительностью к лучевому воздействию по сравнению с нормальными тканями.

Кроме этого, после прекращения действия радиации восстановление нормальных клеток происходит быстрее, чем раковых. Имманентная чувствительность тканей к радиации зависит от степени их дифференцировки. А степень лечебного и (или) повреждающего воздействия ионизирующего излучения зависит от его дозы. Лучевую терапию применяют:

1. самостоятельно (с радикальной или нерадикальной целью). Имеются сообщения успешного применения самостоятельной лучевой терапии с радикальной целью при лечении этезионейроэпителиомы или трансмессивной венерической опухоли носовых ходов у собак. Самостоятельно с нерадикальной целью лучевую терапию применяют в гуманной медицине с полиативной симптоматической целью.

2. в комбинации с операцией (до операции или после операции) лучевая терапия применяется, в основном, для соблюдения принципа антибластики. А так же в тех случаях, когда нет возможности радикального удаления опухоли с широким захватом окружающих тканей из-за сложности синтопии или близости жизненных органов.

3. в комбинации с химиотерапией лучевая терапия применяется при невозможности проведения радикальной хирургической операции.

4. Комбинация лучевой терапии с операцией и химиотерапией является способом радикального противоопухолевого лечения.

Лучевая терапия опухолевых заболеваний применяется в виде: 1 - наружнего облучения, при котором для достижения максимального радиобиологического воздействия на опухоль, облучение как можно больше концентрируется в области мишени. А окружающие нормальные ткани экранируются при помощи различных технических приемов; 2 - внутреннего облучения, которое может быть внутритканевым (радиоактивные иглы или проволока вводятся в ткань) и внутриполостным (радиоактивный источник вводится в естественную полость); 3 - а так же в виде комбинации обоих методов.

Обычно, общая доза облучения делится на фракции, чем достигается постепенное разрушение опухоли и возможность восстановления нормальных тканей перед очередной фракцией.

Во время или после лечения могут наблюдаться ранние реакции со стороны кожи, слизистых, костного мозга. Поздние реакции в виде сосудистых повреждений и фиброза могут появиться через несколько месяцев, а иногда и через несколько лет после лучевой терапии.

В нашей стране в клинической онкологии мелких домашних животных лучевая терапия проводится крайне редко в связи с отсутствием специализированных радиологических отделений при ветеринарных клиниках и необходимость их полного обездвиживания при проведении процедуры. Но поскольку подобную процедуру необходимо проводить несколько раз в неделю на протяжении нескольких недель животное должно на протяжении длительного периода времени, почти ежедневно, вводиться в состояние наркоза. Естественно, что сами по себе такие частые наркозы не могут не сказаться негативно на состоянии пациента. Но кроме этого имеется опасность гибели животного во время проведения процедуры от остановки' сердечной деятельности или дыхания из-за: с одной стороны, объективного негативного влияния препаратов для общей анестезии на бульбарные центры головного мозга, и с другой, из-за невозможности прямого контроля врача за функциональным состоянием этих органов в момент нахождения пациента в камере облучения.

Таким образом на сегодняшний день, лучевая.терапия недоступна для большинства малобюджетных частных, ведомственных и государственных ветеринарных клиник.

Лекарственное лечение (11, 76, 82, 88, 102, 111, 120, 121, 142, 148).

Лекарственное лечение относится к системному, так как при большинстве способов введения препарат распространяется по всему организму и воздействует как на первичную опухоль так и на метастазы. Существует несколько направлений лекарственного лечения заболеваний онкологического генеза, которые могут применяться по отдельности или вместе.

Гормональная терапия рака. Рост, пролиферация и способность к метастазированию некоторых опухолевых клеток зависит от концентрации гормонов. Одни гормоны ускоряют эти процессы. Другие замедляют или полностью блокируют. В том случае, когда точно установлено, что естественный гормон организма способствует прогрессированию опухолевого процесса, больному назначают специфические лекарства: блокирующие влияние этого гормона на опухолевую клетку (тамоксифен блокирует положительное ростовое действие эстрогенов на клетки рака молочной железы), или ингибирующие синтез этого гормона тканями организма (аминоглютатемид ингибирует синтез эстрогенов). Тамоксифен и аминоглютатемид применяются при лечении опухолей молочной железы у сук. К антигормональному лечению так же, относится и хирургическое удаление гормонопродуцирующих органов. Как в гуманной так и в ветеринарной онкологии широко используется удаление семенников (как источника тестостерона) при раке простаты. Наоборот, некоторые гормоны подавляют рост и пролиферацию опухолевых клеток. Так, например, при опухолях простаты и при опухолях перианальных желез у кобелей, высоким терапевтическим эффектом обладает синестрол - синтетический аналог эстрогенов.

Лечение рака цитостатическими препаратамиявляется наиболее распространенным направлением лекарственной терапии злокачественных опухолей как в гуманной так и в ветеринарной медицине. К цитостатическим препаратам относятся вещества различного происхождения и химического строения, общим свойством которых является то, что они способны останавливать пролиферацию или вызывать гибель опухолевых клеток. Действие большинства цитостатических препаратов не ограничивается только опухолевыми клетками. К сожалению, они способны оказывать токсическое воздействие и на нормальные клетки организма следствием чего бывает интоксикация, и даже гибель пациента. Химиотерапия опухолей применяется в виде монохимиотерапии (одним препаратом) и в виде полихимиотерапии (несколькими препаратами по схеме). Препарат или препараты назначаются в соответствии с рекомендациями по лечению того или иного онкологического заболевания. В последние годы в гуманной онкологии разрабатываются и применяются методы индивидуального подбора цитотоксических препаратов на основании тестов выживаемости клеток опухоли пациента in vitro. Подобные работы начали проводится и в ветеринарной онкологии мелких домашних животных. Существуют объективные проблемы при проведении противоопухолевой терапии цитостатиками у собак. Одна из таких проблем - низкая (значительно более низкая чем у людей) толерантность нормальных тканей собак к токсическому действию цитостатиков (71, 74, 98, 101). Вследствие этого предельно переносимые дозы препаратов для нормальных тканей оказываются ниже токсической дозы для некоторых опухолей, и лечебный эффект не достигается. При лечении опухолевой патологии дистальных отделов конечностей у собак проблема общей токсичности цитостатиков усугубляется сложностью создания необходимой концентрации цитостатиков в зоне опухолевого поражения.

При стандартном внутримышечном или внутривенном способе введения, концентрация цитостатического средства в опухолевой паренхиме оказывается явно недостаточной для реализации радикального терапевтического эффекта. Это происходит потому что во-первых, объем микроциркуляторного русла дистальных отделов конечностей во много раз меньше объема микроциркуляции всего тела, поэтому происходит существенная потеря концентрации средств химиотерапии в системном кровотоке, во-вторых, низкое давление в сосудах дистальных отделов конечностей в силу удаленности последних от сердца затрудняет диффузию лекарственных препаратов из кровотока в ткань, в-третьих, современные средства противоопухолевой терапии не имеют облигатной тропности к патологически измененной ткани, а значит не способна там специфически акомулироваться.

Повышение концентрации цитостатического средства в опухолевой паренхиме путем общего повышения их концентрации в системном кровотоке, как уже сказано выше, лимитирована, высокой вероятностью развития побочных токсических реакций. В медицине с целью локального создания высокой концентрации цитостатика применяется метод изолированной регионарной перфузии. Метод изолированной регионарной перфузии основан на подведении к опухоли концентрированных растворов цитостатических препаратов. С этой целью катетеризируют сосуды в зоне расположения опухоли и с помощью аппаратов инфузомат или сердцелегкое в определенном режиме осуществляется введение химиопрепаратов. В ветеринарной медицине данный метод не применяется в связи с высокой стоимостью и отсутствием в клиниках специального оборудования. Однако, в последние годы, на кафедре общей и частной хирургии ФГОУ ВПО «Санкт-петербургская государственная академия ветеринарной медицины» разработан способ введения лекарств методом внутривенной ретроградной инфузии (27, 86). Данный способ лекарственной терапии разработан целенаправленно для лечения воспалительной патологии дистальных отделов конечностей у собак. Процедуру внутривенной ретроградной инфузии проводится следующим образом (рис.6).

Лечебный препарат вводится в поверхностные вены дистальных отделов предплечья (или голени) после наложения гемостатического жгута проксимальнее вкола иглы. Вследствие прекращения естественного венозного оттока, препарат распространяется по вене(ам) против тока крови (т.е. ретроградно). После окончания введения, накладывают второй гемостатический жгут, на 1 - 2 см. дистальнее места? вкола- иглы, и удерживается на; теле животного 10 - 20 минут для обеспечения максимальной диффузии препарата в ткань. Следует заметить, что поскольку после снятия жгутов венозный кровоток восстанавливается и оставшееся лекарство разносится по организму, данный способ лекарственного лечения сочетает в себе свойства местнорегионарного и системного. Существуют и другие - местные способы введения противоопухолевых препаратов. К таким способам относятся: интратуморальные - в, толщу опухолевой паренхимы, субтуморальные - под опухоль, внутриплевральное введение, внутрибрюшное введение, внутрипузырное введение, интратекальное введение. Все эти способы введения только условно называются, местными, так как препараты в той или иной мере все равно всасываются в общий кровоток и оказывают системное воздействие. рисунок взят из совместной статьи с соавторами Рис. 6. Методика проведения внутривенной ретроградной инфузии. А, Б, В — схематичное изображение последовательности манипуляций при ВРИ передней конечности. А-1, Б-1, В-1 — фотоотчет последовательности манипуляций при ВРИ задней конечности.

При сочетании лекарственной терапии с хирургическим лечением ее принято подразделять на адъювантную и неадъювантную. Неоадьювантная химиотерапия проводится до хирургического лечения. Химиотерапия, проводимая после хирургической операции называется адьювантная. Радикальная химиотерапия возможна в редких случаях. В медицинской онкологии такими случаями являются некоторые злокачественные гематологические заболевания, некоторые злокачественные опухоли у детей (например лимфома Беркита), и некоторые солидные опухоли людей пожилого возраста, особенно тестикулярный рак у мужчин и хориокарцинома у женщин. В ветеринарной онкологии собак химиотерапия как единственный радикальный способ лечения используется только при трансмессивной венерической опухоли и эстезионейроэпителиоме (75, 76, 82, 88, 106). Во всех остальных случаях химиотерапия используется как полиативный метод лечения или в сочетании с другими способами лечения.

Практически отсутствуют экспериментальные и клинические данные по химиотерапевтическому лечению опухолевой патологии собак локализованной в дистальных отделах конечностей. Имеется одно сообщение о безуспешной попытке лечения подкогтевой сквамозноклеточной карциномы комбинированием лучевой терапии с системной монохимиотерапией. Но тот же автор сообщает о двух случаях положительного лечении рецидивов по месту удаления после применения метотрексата (28).

Другие авторы сообщают о возможности и целесообразности применения системной химиотерапию по схемам РЕВ, СрВ, РАВР, включающей в себя препараты цисплатина, метотрексат, блеомицин, адриамицин, фарморубицин, после хирургического и лучевого лечение первичного очага, и хирургического удаления метастазов, при плоскоклеточном раке (в том числе и подкогтевой локализации) кожи (92). Однако в данном сообщении не акцентируется вклад химиотерапии в общую эффективность комплексного лечения.

В арсенале современной онкологии имеют место и другие способы противоопухолевой терапии, которые применяются крайне редко, или не применяются вообще в ветеринарной медицине.

Иммунотерапия рака. Иммунотерапия рака в современной отечественной ветеринарии имеет ограниченное применение. Классическое применение иммунотерапии для лечения онкологических заболеваний предполагает стимуляцию активности NK-клеток или продукцию LAK-клеток, которые способны распознавать, вступать в непосредственный контакт и уничтожать опухолевые клетки (29, 33, 34, 59, 118). Стимуляцию под действием интерферонов и интерлейкинов, последующее культивирование и накопление клеток с NK и LAK функцией, проводят в условиях in vitro из предварительно выделенных из крови пациента лимфоцитов. После активации и культивирования клетки возвращаются в организм пациента, где их противоопухолевая активность поддерживается постоянными инъекциями интерлейкинов (95, 104, 117, 122, 123). За последние годы в отечественной научной печати появилось только одно сообщение о клиническом эксперименте по лечению меланомы у лошади используя LAK-клетки стимулированные человеческим рекомбинантным IL-2 (19). Большинство других сообщений анонсированных как работы по иммунотерапии злокачественных новообразований у мелких домашних животных, в действительности таковыми не являются, так как указанные способы введения и дозы иммуностимулирующих препаратов не способны индуцировать реальный противоопухолевой иммунитет (37, 77, 94). В настоящий момент на рынке ветеринарной фармацевтической продукции появилось несколько препаратов рекомендованных для лечения опухолей у животных по средству активации противоопухолевого иммунитета. Однако объективной клинической информации об их противоопухолевом действии нет. Более того, на сегодняшний день нет ни одной рекомендации по использованию иммунотерапии рака животных как радикального метода лечения.

Фотодинамическая терапия. Фотодинамическая терапия злокачественных опухолей является методом лечения, основанным на способности фотосенсибилизаторов селективно накапливаться в ткани опухолей и при локальном воздействии лазерного облучения определенной длины волны генерировать синглетный кислород или кислородсодержащие свободные радикалы, которые вызывают гибель опухолевых клеток. Фотодинамическая терапия проводится с использованием фотосенсибилизатора фотогема — лиофилизированной натриевой соли PHD (зарубежные аналоги — фотофрин, Канада; фотосан, Германия; «HPD», Китай), и фотосенсибилизатора фотосенса, представляющего собой сульфированный фталоцианин алюминия, с пиком поглощения 620-630 нм и 630-670 нм соответственно (доза 2-3 мг/кг и 0,5-1,0 мг/кг . Источником света для фотодинамической терапии с фотогемом могут быть различные специализированные лазерные и не лазерные установки.

Фотодинамическая терапия применяется в некоторых ветеринарных клиниках для лечения поверхностных неинвазивных форм рака (53). Но большинству малобюджетных ветеринарных клиник недоступна.

Ингибирование неоангиогенеза (71, 111). Терапия рака основанная на ингибировании неоангиогенеза бурно развивающаяся клиническая дисциплина современной медицинской онкологии. В основе метода лежит тот факт, что злокачественые опухоли посредству синтеза факторов роста сосудов, продуцируют собственную сосудистую сеть, без которой опухолевая ткань не может прогрессировать. Фармакологическое подавление опухолевого ангиогенеза приводит к редуцированию опухолевой ткани. В отечественной ветеринарной онкологии, в настоящее время, данный вид терапии не используется.

1. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнялась в период с 2008 по 2010 гг. в ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» на кафедре общей и частной хирургии.

Исследования по изучению эффективности комплексного метода лечения опухолевой патологии дистальных отделов конечностей у собак проводили на животных с клиническими признаками характерными опухолевому поражению в области пальцев и пясти (плюсны), в возрасте от рождения до 13 лет и старше, различной породной принадлежности, предварительно исключая инфекционные и инвазионные заболевания.

В зависимости от способа лечения были сформированы 4 группы из 78 собак. При этом учитывали наличие поражений в области дистальных отделов конечностей, доброкачественность или злокачественность процесса.

Лечение злокачественных опухолей пальцев и пясти (плюсны) проводили по следующим схемам:

Опытная группа №1 - только неоадьювантная химиотерапия — полная редукция опухоли.

Опытная группа №2 — неоадьювантная химиотерапия с последующей операцией - частичная редукция опухоли и улучшение хирургических границ на неоадьювантную химиотерапию, плюс отсутствие опухолевых клеток в тканях резекционного края.

Опытная группа №3 - неоадьювантная химиотерапия с последующей операцией и дальнейшей адьювантной химиотерапией.

Опытная группа №4 — начальная операция и дальнейшая адьювантная химиотерапия.

Для лечения и профилактики рецидивов доброкачественных новообразований пальцев и пясти (плюсны) применяли только следующие схемы:

- неоадьювантная химиотерапия с последующей операцией;

- начальная операция и дальнейшая адьювантная химиотерапия.

Заключение Диссертация по теме "Частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства", Дашаев, Иса Вахаевич

ВЫВОДЫ

1. У собак в области дистальных отделов конечностей встречаются доброкачественные (22,35%), и злокачественные опухоли (77,65%) различного гистогенеза; чаще у собак породы ризеншнауцер (16,95%), черный терьер (13,56%), пудель (26,32%) и в возрасте 9-11 лет (23,08%).

2. Гистологическими исследованиями было установлено 14 гистогенетических вариантов новообразований в области пальцев, из которых, пять вариантов приходиться на доброкачественные опухоли и девять - на злокачественные. Из злокачественных новообразований наиболее часто встречается плоскоклеточная карцинома — 35 случаев, что составило 44,87% (примерно в равных долях неподкогтевого и подкогтевого происхождения 19(20,51%) и 16(24,36%) случаев, соответственно) и меланома - 9(11,54%) случаев.

3. У собак с опухолевой патологией дистальных отделов конечностей отмечается достоверное повышение СОЭ и лейкоцитоз со сдвигом ядра влево (р<0,05) а также достоверное повышение активности костного изофермента щелочной фосфатазы и концентрации сиаловой кислоты (р<0,05).

4. Метод внутривенной ретроградной рентгеноконтрастной флебографии позволяет визуально оценить распространенность опухолевой ткани в пределах дистальных отделов пораженной конечности. Проведение локальной химиотерапии методом внутривенной ретроградной инфузии создает высокую . концентрацию цитостатиков непосредственно в патологическом очаге. .

5. Метод визуальной оценки аргентофильной зоны ядрышка опухолевых клеток, осуществляемый после их кратковременной (8 часовой) инкубации in vitro с различными цитостатйками, позволяет подобрать химиотерапевтические средства, к которым максимально чувствительна конкретная опухоль конкретного пациента.

6. Неоадьювантная внутривенная ретроградная химиотерапия приводит к полной или частичной редукции поверхностно растущих новообразований дистальных отделов конечностей и улучшает хирургические границы; адьювантная внутривенная ретроградная химиотерапия уменьшает количество местных и общих рецидивов после хирургического удаления опухолей дистальных отделов конечностей у собак.

7. После химиотерапии отмечено достоверное повышение показателей: СОЭ, концентрации сиаловых кислот, концентрации ЦИК в крови (р<0,05). Другие показатели метаболизма после химиотерапии варьировали в пределах референтных значений.

8. Комбинация неоадьювантной химиотерапии, операции и последующей адьювантной химиотерапии опухолевого процесса дистального отдела конечностей у собак увеличивает выживаемость животных на 1,5 года, в сравнении с только хирургическим лечением.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. У собак в случаях язвенно-некротического поражения пальцев и пясти (плюсны), рекомендовано проводить внутривенную ретроградную рентгеноконтрастную флебографию с целью диагностики, дифференциальной диагностики и определения распространенности патологического процесса.

2. В случае обнаружения, язвенно-некротического поражения пальцев и пясти (плюсны) обусловленного злокачественным новообразованием рекомендован индивидуальный подбор цитотоксических препаратов на основании теста in vitro, с последующей неоадьювантной химиотерапией методом внутривенной ретроградной инфузии; а после хирургического удаления злокачественной опухоли - адьювантной химиотерапией, для профилактики местных рецидивов.

3. Из-за высокой вероятности попадания лекарства в параваскулярное пространство, для внутривенной ретроградной химиотерапии, не следует использовать препараты, рекомендованные исключительно для внутривенного введения.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Дашаев, Иса Вахаевич, Санкт-Петербург

1. Абрамов М.Г. Клиническая цитология/Абрамов М.Г. 2-е изд, перераб. и доп. - М.: Медицина, 1974.- 334 с.

2. Абрикосов А.И. Основы частной патологической анатомии /Абрикосов А.И. -М.: Медгиз, 1950. с. 356-363.

3. Акаевский А.И. Анатомия домашних животных / Акаевский А.И.- Изд. 4-е, испр. и доп. М.: «Колос», 1984. - 544 с.

4. Андреев К.А. Строение и васкуляризация органов грудной конечности нутрии на некоторых этапах постнатального онтогенеза: Автореф. дис.канд. вет. наук,- СПб, 2009.- 18с.

5. Антонова В.Я., Блинов П.Н. (под редакцией). Лабораторные исследования в ветеринарии. М.: Колос, 1974.- 89с.

6. Апатенко А.К. Опухоли кожи. Патолого-анатомическая диагностика опухолей человека под ред. Краевского H.A.- М.: «Медицина», 1982.- с. 417472.

7. Апатенко В.М. Морфо-экологические проблемы в животноводстве и ветеринарии/Апатенко В.М. Киев: Уражай, 1991. - с. 6 - 7.

8. Асатиани B.C. Ферментные методы анализа.- М.: Наука, 1969.- 105с.

9. Балаж А. Биология опухолей, сомнения и надежды.- М.: Мир, 1987.-214с.

10. Барр Ф. Ультразвуковая диагностика собак и кошек.-М.: «Аквариум», 2001.- 523с.

11. Бахлаев И.Е., Толпинский А.П. Введение в клиническую онкологию.-Петрозаводск: Издательство Петрозаводского университета, 2001.- 76 с.

12. Башкиров Б.А., Белов А.Д., Есютин A.B., Калашник И.А., Лукьяновский В.А., Плахотин М.В. Общая ветеринарная хирургия.- М.: ВО «Агропромиздат», 1990.- 196с.

13. Берестов В.А., Узенбаева Л.Б. Фагоцитарная реакция крови у песцов и норок.- Ленинград: «Наука», 1983.- 32с.

14. Бокарев А. В. Дифференциальная диагностика заболеваний пальцев у собак опухолевого генеза (этиология, патогенез, лечение): Автореф. дис.канд. вет. наук.- СПб, 2003- 23с.

15. Бокарев A.B., Стекольников А. А. Исследование ингибирования изоферментов щелочной фосфатазы сыворотки крови собак при разных режимах тепловой денатурации//Актуальные вопросы ветеринарной биологии.- 2010,- № 1 (5).- с. 8 18.

16. Бокарев A.B., Лаковников Е.А., Дашаев И.В. Морфология ядрышка и ядрышковых организаторов в клетках саркомы Штиккера интактных прилечении противоопухолевым препаратом Винкристин//Международный вестник ветеринарии.- 2009.- № 1.-е. 59 62.

17. Бокарев A.B., Переверзева A.B. Дифференцированный плоскоклеточный рак дистальной (третьей) фаланги пальцев у собак/ Ветеринарная практика.- 2001.- № 2 (13).- с. 7-11.

18. Бокарев A.B., Стекольников A.A. К методике определения активности щелочной фосфатазы сыворотки крови собак//Ветеринарная патология.-2007.- № 1 (20).- с. 65 74

19. Бокарев A.B., Стекольников A.A. Морфологическая верификация опухолей пальцев у собак/Ветеринария.- 2004.- №7.- с.54-55.

20. Бокарев A.B.; Нарусбаева М.А.; Стекольников A.A.; Суворов О.Н.; Матвеева М.В. Диагностика и лечение воспалений пальцев у собак/Ветеринария, 2010.- N 3. с. 59 - 62.

21. Бокарев A.B. Дифференциальная диагностика заболеваний пальцев опухолевого генеза у собак (этиология, патогенез, лечение)// Ветеринарный консультант.- 2005.- №1 (92).- с. 22-25.

22. Ветто P.M. Иммунный ответ у больных раком. Иммунологическая инженерия.- М.: «Медицина», 1982.- с. 166 — 212.

23. Воларчук М.И. Устойчивость организма к метастазированию. Вопросы иммуноонкологии. -М.: «Медицина», 1991.- с. 75-82.

24. Волегов А.И. Устойчивость организма к злокачественным опухолям.-Москва: «Медицина», 1987.- 375с.

25. Гаранин Д.В., Фролов В.И., Наш опыт лечения рака щитовидной железы у собак//Восьмой международный конгресс по проблемамветеринарной медицины мелких домашних животных/Материалы 6-8 апреля 2000'года.- Москва, 2000.- с. 145 146.

26. Герберт Дж.У. Ветеринарная иммунология: пер. с англ. / Герберт У. -М.: Колос, 1974. с.231 - 271.

27. Джирш Д.У., Фалк P.E. Иммунотерапия солидных опухолей. Иммунологическая инженерия.- Москва.: «Медицина», 1982.-е. 365 411.

28. Досон Р., Элиот Д., Элиот У., Джонс К. Справочник биохимика.-Москва: «Мир», 1991.- 357с.

29. Дядюша Г.Ф., Булкина Э.П., Система соединительной ткани и злокачественные опухоли.- Киев: «Наукова думка», 1978.- 120с.

30. Егорова В.Н., Сахарова Е.Д. Возможности использования медицинского препарата «ронлейкин» при иммунозаместительной терапии/ЛВетеринарная практика, 2000.- №1(8).- с. 19-22.

31. Жаков М.С. Вскрытие животных и патологоанатомические диагнозы» болезней / Жаков М.С. Минск: Урожай, 1992. - 100с.

32. Зеленевский Н.В., Соколов В.И., Чумаков* В.Ю., Малявский A.B., Васильев А.П., Логинова Л.К. Анатомия собаки.- Санкт-Петербург, 1997.-456с.

33. Ивантер Э.В. Основы практической биометрии.- Петрозаводск: «Карелия», 1979.- 112 с.

34. Ильинских H.H., Ильинских И.Н., Бочаров* Е.Ф. Цитогенетический гомеостаз и иммунитет//Сибирское отделение.- Новосибирск: «Наука», 1986.-236с.

35. Карпуть И.М. Гематологический атлас сельскохозяйственных животных.-Минск: «Ураджай», 1986.- 625с.

36. Кассирский И.А. Справочник по функциональной диагностике.-Москва: «Медицина», 1970.- 125с.

37. Козлов Ю.В. Лучевая терапия в лечении мелких домашних животных// Актуальные проблемы ветеринарной медицины мелких домашних животных/Конференция.- СПб, 19-20 июня 1997.- с. 22-23.

38. Коляков Я.Е. Ветеринарная иммунология.- Москва: Агропромиздат, 1986.- 563с.

39. Конопатов Ю.В., Рудаков В.В. Биохимические показатели кошек и собак в норме и при патологии//Методическое пособие СПбГАВМ. СПб, 1998.- 63 с.

40. Кочерга М.Н., Кухаренко Н.С. Анализ опухолей мелких домашних животных// Восьмой международный конгресс по проблемам ветеринарной медицины мелких домашних животных/Материалы 6-8 апреля 2000 года.-Москва, 2000.- с. 301 302.

41. Кудряшов A.A., Алексеева JI.P., Павлова A.B., Лаковников Е.А. Причина смерти собак старшего возраста в Ленинграде Санкт-Петербурге в 1974 - 2001 годах//Ветеринарная практика.-2001.- № 15.- с. 45 - 55.

42. Кудряшов A.A., Лаковников Е.А., Карпецкая Н.Л. Базально-клеточные опухоли кожи у кошек и собак// Ветеринарная практика.- 1998.- № 2(5). с.9-13.

43. Кузнецова А.Л.; Шимширт A.A.; Ягников С.А.; Козловская Н.Г.; Лисицкая К.В.; Соловьева О.В.; Арнопольская A.M.; Телицын В.В. Сравнительная характеристика методов лечения меланомы у собак//Мелкие домашние и дикие животные.- 2009.- N 4. с. 28-32.

44. Кулешова O.A.; Ягников С.А. Фотодинамическая терапия при спонтанных новообразованиях слизистой ротовой полости у кошек и собак//Мелкие домашние и дикие животные.- 2009.- N 4. с. 33-37.

45. Лагунова Н.М. Ультрозвуковая диагностика в ветеринарии//Ветеринарная практика.- 1998.- №2 (5).- с. 26-31.

46. Лаковников Е.А., Кудряшов А.А. Анализ исследований биоптатов от собак и кошек//Ветеринарная практика.- 1999.- № 1(7).- с. 16-18.

47. Лефковитц Методы исследования в иммунологии. Москва: «Мир», 1981.- с. 213-214.

48. Линёва А. (автор составитель) Физиологические показатели нормы животных.-М.: «Аквариум ЛТД», 2001.- 678 с.

49. Лобун Дж. Современная гематология и онкология.- Москва: «Медицина», 1983.- 537 с.

50. Ломакин М.С. Иммунобиологический надзор.- Москва: «Медицина», 1990.- 343 с.

51. Лукьяновский В.А., Белов А.Д., Беляков И.М. Болезни костной системы животных.- Москва: «Колос», 1984.- 565 с.

52. Магда И.И., Иткин Б.З., Воронин И.И. Оперативная хирургия с основами топографической анатомии домашних животных.- Москва: «Колос», 1979.- 487 с.

53. Матэ Ж. Досье рака.- М.: Мир, 1983.- 296 с.

54. Меньшиков И.В., Бедулаев Л.В. Основы иммунологии/Лабораторный практикум.- Ижевск: «Удмуртский университет», 2001. 158 с.

55. Меньшикова В.В. (под редакцией). Лабораторные методы исследования в клинике/Справочник.- Москва: «Медицина», 1987.- 368 с.

56. Меркулов Г. А. Курс патологогистологической техники.-Л.:«Медицина», 1969.- 347 с.

57. Митин В.Н., Саутин В.Н., Соловьев Ю.Н., Ягников С.А. Попытка сохранения конечности при лечении опухолей костей у собак с использованием облученных костных реплантантов//Ветеринарный журнал.-1995.-№2.- с. 3-7.

58. Найт С. Анализ пролиферации лимфоцитов. Лимфоциты. Методы, (под редакцией Дж. Клауса).- Москва: «Мир», 1990. -с. 286 310.

59. Напалков П.Н., Смирнов А.В., Шрайбер М.Г. Хирургические болезни.- Л.: Медгиз, 1961.- 437 с.

60. Олейник Е.К., Бокарев А.В. Микрометод определения фагоцитарной, активности нейтрофилов/ТВопросы иммунологии и гематологии/Межвузовский сб. науч. трудов.- Петрозаводск, 1990. — с. 59-61.

61. Олийниченко П.И., Булкина З.П., Синиборова Т.И. Справочник по полихимиотерапии опухолей.- Киев: «Здоровье», 2000,- 304 с.

62. Островерхое Г.Е., Лопухин Ю.М., Молодёнков М.Н. Техника хирургических операций// Издательское бюро треста Медучпособие.-Москва, 1963.- 156 с.

63. Поваженко И.Е., Борисевич В.Б. Болезни конечностей животных.-Киев: «Урожай», 1987.- 267 с.

64. Подольцева Э.И. Профилактика и лечение гематологических осложнений химиотерапии у онкологических больных//Практическая онкология.- 2000.- №2 (июнь).- с. 31-37.

65. Пономарьков В. И. Опухоли у собак// Охота и охотничье хозяйство.-1985.-№8.-с. 34-38.

66. Пономарьков В.И. Опухоли. Болезни собак.- Москва.: «Че-Ро», «TREADE PUBLISHERS», 1994.- с. 209-225.

67. Поспелов Е.В. Применение ронколейкина и реамберина в комплексной терапии диспепсии новорождённых телят//Материалы научной конференции проф.-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПБГАВМ.- Санкт-Питербург, 2002.- с. 72-74.

68. Прусаков А.В. Возрастная морфология сосудистого русла тазовой конечности и органов репродукции самца нутрии: Автореф. дис.канд. вет. наук.- СПб, 2008- 18с.

69. Ричард А.С. Уайт. Методы биопсии. Онкологические заболевания мелких домашних животных. Москва: «Аквариум», 2003.- с. 88-97.

70. Ричард А.С. Уайт. Онкологическая хирургия. Онкологические заболевания мелких домашних животных.- Москва: «Аквариум», 2003.- с. 113-124.

71. Ройт А. Основы иммунологии. — Москва: «Мир», 1991.- 243 с.

72. Рунова OB. Опыт практического использования препаратов винкристин и винбластин в ходе терапевтического лечения саркомы Штиккера у собак//Ветеринарная практика.-2001.- №1(12).- с. 44-46.

73. Салимое В.А.; Овчаренко Р.В.; Ходякова JI.B. Клинико-патоморфологическая характеристика круглоклеточной саркомы ' собаки; породы "Колли'У/Известия Самарской государственной сельскохозяйственной академии, 2008.- в.1. с. 141-143.

74. Смирнов A.M., Дугин Г.Л., Кондратьев B.C., Беляков И.М., Ленец И:А. Практикум по клинической диагностике внутренних незаразных болезней сельскохозяйственных животных.- Ленинград: «Колос», 1978. 187 с.

75. Стекольников А. А., Бокарев А В. Техника удаления пальцев у собак при опухолях//Ветеринария.-2005.- №5,-с. 54 -56.

76. Суховольский O.K. и др. Клиническая хирургия в ветеринарной медицине.- Минск, 2010.- 598с.

77. Терехов П.Ф. Злокачественные, новообразования у животных//Клуб служебного собаководства.-1986.- №3.- с. 34 36.

78. Томпсон. P.A. (под редакцией) Последние достижения в клинической иммунологии.-Москва: «Медицина», 1983.-388 с.

79. Трапезникова; H.H., Соловьёва Ю.Н., Хингарова Г.Х. Методологические вопросы изучения онкогенеза.- Москва: «Медицина», 1988.- 112 с.

80. Фёдоров Ю.Н., Верховский. O.A., Слугин И.В. Основы иммунологии и иммунопатологии собак.-Москва: «Арт 2», 2000.-243 с.

81. Фролов В.И. Диагностика и лечение рака кожи у собак//Седьмая Международная конференция по проблемам ветеринарной медицины мелких домашних животных/Тезисы 3-5 марта. — Москва, 1999.- с. 114-116.

82. Холин A.B., Чуваев И.В., Пиневский М.Е. Ядерно-магнитный резонанс в диагностике новообразований у мелких домашних животных/ЛЗетеринарная практика.- 1997.- №1.- с. 34-38.

83. Чуваев И.В., Сахарова Е.Д., Возможности использования препарата ронлейкин при лечении остеосаркомы у собак//Ветеринарная практика.-2000.-№2(9).- с. 41-43.

84. Чуркин С.И. Противоопухолевое действие IL-2 in vitro и in vivo. -Москва: «Медицина», 1992.- 158 с.

85. Шакалов К.И., Башкиров Б.А., Поваженко Е.И., Калашник И.А., Авроров В.Н., Островский Н.С., Семёнов Б.С., Лебедев A.B., Фёдоров А.И. Частная ветеринарная хирургия.- Ленинград: «Агропромиздат», 1986. — 328с.

86. Шебиц Хорст, Брасс Вильгельм. Оперативная хирургия собак и кошек.-Москва: «Аквариум», 2001. -478 с.

87. Шестернин Д.А. Побочное действие противобластомных препаратов «Новые фармакологические средства в ветеринарии»//Материалы 13 межвузовской научно-практической конференции.- Санкт-Питербург, 2001.-с. 117-118.

88. Штельцнер А. Фагоцитоз. Иммунологические методы. Фримель Г. (под редакцией).- Москва: «Медицина», 1987.- с.378 390.

89. Шютт. X. Реакция бласттрансформации лимфоцитов. Иммунологические методы. Фримель Г. (под редакцией).- Москва: «Медицина», 1987.- с. 294 303.

90. Якунина М.Н., Трещалина Е.М. Анализ эффективности адьювантной химиотерапии доксорубицином спонтанного рака молочной железы у собак и кошек//Российский ветеринарный журнал/Мелкие домашние и дикие животные.- 2009.- N 4. с. 23-27.

91. Ярыгин Н.Е., Серов В.В. Атлас патологической гистологии. -Москва: «Медицина», 1977. 378 с.

92. Ariel L. Rivas, Edward S. Kimball, Fred W. Quimby and Douglas Gebhard. Functional and phenotypic analysis of in vitro stimulated canine peripheral bloodmononuclear cells. Veterinary Immunology and Immunopathology.- Vol. 45 (12).- 1995. P. 55-71.

93. Arwedsson G: Arthrodesis in traumatic plantar subluxation of the metatarsal bones in the dog. J Am Vet Med Assoc. 124:21, 1954.

94. Babo, V. J., Ramadinha, R. H. R., Freire, R. B. The Canine Transmissible Venereal Tumour: a review. Rev. Univ. Rural, Ser. Cienc. Vida, 20 (1/2).- 1989.-P. 61-69.

95. Baron M, Valin I. Bases et techniques de l'oncochirurgie. Rec. Med. Vet,Special Cane. 1990; 11 (166): 999-1007.

96. Baskin, C.R., Couto, C.G. (2000) Wittum, T.E. Factors influencing first remission and survival in 145 dogs with lymphoma: a retrospective study. J. Am. Anim. Hosp. Assoc. 36, 404-409.

97. Batamuzi E.K., Kassuku A.A. and Agger J.F. Risk factors associated with canine transmissible venereal tumour in Tanzania. Preventive Veterinary Medicine.- Vol. 13 (1).- 1992.-P. 13-17.

98. Boyd J.W., The interpretation of serum biochemistry test results in domestic animals, in Veterinary Clinical Pathology, Veterinary Practice Publishing Co., Vol. XIII, # II, 1984.

99. Carter SK. Principles of Cancer Chemotherapy. In: Theilen, Madewell., editors. Veterinary Cancer Medicine. Lea & Febiger; Philadelphia: 1987.-P. 167— 182.

100. DJ Marino, DT Matthiesen, JD Stefanacci, and SD Moroff. Evaluation of dogs with digit masses: 117 cases (1981-1991).J Am Vet Med Assoc, September 15.- 1995.-207(6).- 726-8.

101. Enrique Rozengurt. Polypeptide and neuropeptide growth factors: signalling pathways and role in cancer. Oxford Textbook of Oncology.

102. Forrest L. J. Radiation Therapy. Clinical Neurology in Small Animals -Localization, Diagnosis and Treatment, K. G. Braund ( 15-Jul-2002 ).

103. Hayes AA. Immunothérapie et thérapeutique biologique des cancers. Ree. Méd. Vét., Special Cane. 1990; 11 (166): 1031-1042.

104. Howard DM: Artificial legs for a dog. J Am Vet Med Assoc 139:564, 1961.

105. J. Gordon Mcvie. Achievements of chemotherapy and obstacles to further progress. Oxford Textbook of Oncology. Oxford University Press. 1996.

106. Jun MH, Johnson RH. Effect of cyclophosphamide on tumor, growth and cell-mediated immunity in sheep with ovine squamous cell carcinoma. Res. Vet. Scie. 1979; 27: 155-160.

107. Kirkwood J.M., Ibraghim J.G., Sondak V.K. et al. High- and Low-Dose Interferon Alfa-2b in High-Risk Melanoma: First Analysis of Intergroup Trial-El 690/S9111/C9190 J. Clin. Oncol. 2000; 18: 2444-2258

108. Linda A. Everse.Monique R. Bernsen.Hub F.J. Dullens. Willem Den Otter. Priming of the antitumor response promotes efficacy of interleukin-2 therapy.Cancer Immunol Immunother (1997) 44: 221 229

109. Liu S-K, Hohn RB: Squamous cell carcinoma of the digit of the dog. J Am Vet Med Assoc 153:411, 1968.

110. Madewell BR, PoolRR, Thielen GH et al:. Multiple subungual squamous cellcarcinomas in five dogs. J Am Vet Med Assoc 180:731, 1982.

111. Madewell BR, Theilen GH. Tumors of the Skin and Subcutaneous Tissues. In: Theilen, Madewell., editors. Veterinary Cancer medicine. Lea & Febiger; Philadelphia: 1987. pp. 238-281.

112. Marco Greco. Achievements and obstacles to progress in cancer surgery. Oxford Textbook of Oncology. Oxford University Press. 1996.

113. Mary Bate. The dog sa an experimental animal. Anzccart.News. Vol 10. No 1 March. 1997.

114. Mc Knight JA, Mauldin GN, Mc Entee MC, Meleo KA, Patnaik AK. Radiation treatment for incompletely resected soft tissue sarcomas in dogs. J. Am. Vet. Med. Assoc. 2000; 217 (2): 205-210.

115. MG O'Brien, J Berg, and SJ Engler. Treatment by digital amputation of subungual squamous cell carcinoma in dogs: 21 cases (1987-1988) J Am Vet Med Assoc, September 1, 1992; 201(5): 759-61.

116. Michael J. Day. Clinical Immunology of the Dog and Cat. Veterinary Immunology and Immunopathology. 75 (2000) 163.

117. Michael R. Stratton And Barry Gusterson. New techniques in pathology and their application in diagnosis and studies of tumour biology. Oxford Textbook of Oncology. Oxford University Press. 1996.

118. Moore RW, Withrow SJ: Arthrodesis. The Compendium on Continuing Education for the Small Animal Practitioner. 3:319, 1981.

119. Mortimer P. W. and Margaret F. Spittle. Skin cancer other than melanoma. Oxford Textbook of Oncology. Oxford University Press. 1996.

120. Natale Cascinelli, Claudio Clemente, And Filiberto Belli. Cutaneous melanoma. Oxford Textbook of Oncology. Oxford University Press. 1996.

121. Newton C. D. Arthrodesis of the Stifle, Tarsus, and Interphalangeal Joints In: Textbook of Small Animal Orthopaedics, C. D. Newton and D. M. Nunamaker (Eds.) Ithaca, New York, USA. ( 1-Jan-1985 )

122. Newton C. D. Principles and Techniques of Osteotomy. In: Textbook of Small Animal Orthopaedics, C. D. Newton and D. M. Nunamaker (Eds.) Ithaca, New York, USA. ( 1-Jan-1985 )

123. Newton DC, Nunamaker DM: Osteotomy. In Manual of Internal Fixation for Small Animals, pp 255-264. New York, Springer-Verlag, 1984.

124. Newton CD, Nunamaker DM: Arthrodesis. In Small Animal Manual of Internal Fixation, pp 265-272. New York, Springer-Verlag, 1984.

125. Souhami R. And Cannon Stephen R. Osteosarcoma. Oxford Textbook of Oncology. Oxford University Press. 1996.

126. Stone E. A. Amputation. In: Textbook of Small Animal Orthopaedics, C. D. Newton and D. M. Nunamaker (Eds.) Ithaca, New York, USA.( 1-Jan-1985 ).

127. Theilen GH, Madewell BR, Carter SK. Chemotherapy. In: Theilen, Madewell., editors. Veterinary Cancer Medicine. Lea & Febiger; Philadelphia: 1987a. pp. 157-166.

128. Thierry Boon ., Jean-Charles Cerottini. The cell-mediated immune response to tumours. Oxford Textbook of Oncology. Oxford University Press. 1996.

129. Thrall D. E., and Goldschmidt M. H. Radiography and Biopsy of Bony Neoplasia. Textbook of Small Animal Orthopaedics, C. D. Newton and D. M. Nunamaker (Eds.) Ithaca, New York, USA. ( 1-Jan-1985 ).

130. TNM classification of tumors in domestic animals. WHO:Geneva, 1980.

131. Torsten G. Landberg. Radiotherapy. Oxford Textbook of Oncology. Oxford University Press. 1996.

132. Wangenstein OH, Wangenstein SD: The Rise of Surgery, p 305. Minneapolis, University of Minnesota Press, 1978.

133. Watson Adj, Peaston Ae, Malik R And Swinney Gr. Guidelines for handling antineoplastic and immunosuppressive drugs. Aust Vet .- Vol 75.-№12.- December.- 1997.

134. Withrow SJ, Hirsch VM: Owner response to amputation of a pet's leg. Vet Med Small Anim Clin., March 1979, pp 332.лч