Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Клинико-морфологическая характеристика облученных реплантатов кости при лечении остеосаркомы у собак

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Клинико-морфологическая характеристика облученных реплантатов кости при лечении остеосаркомы у собак"

На правах рукописи

МИТРОХИНА НАТАЛЬЯ ВИКТОРОВНА

КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОБЛУЧЕННЫХ РЕПЛАНТАТОВ КОСТИ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ОСТЕОСАРКОМЫ У СОБАК

Специальность 06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

5 ДЕК 2013

Москва 2013

005542463

Работа выполнена на кафедре клинической ветеринарии аграрного факультета ФГБОУ ВПО «Российский университет дружбы народов»

Научный руководитель

Научный консультант

Официальные оппоненты

Якунина Марина Николаевна, научный сотрудник лаборатории комбинированной терапии опухолей НИИ ЭД и ТО ГУ РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН, доктор ветеринарных наук Ватников Юрий Анатольевич, заведующий кафедрой клинической ветеринарии ФГБОУ ВПО «РУДН», доктор ветеринарных наук, профессор Борхунова Елена Николаевна, доктор ветеринарных наук, профессор, профессор кафедры анатомии и гистологии ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К. И. Скрябина», Кулешова Яна Александровна, кандидат ветеринарных наук, ветеринарный врач ветеринарной клиники «ВетПрофАльянс»

Ведущая организация

ФГБОУ ВПО «Ивановская государственная сельскохозяйственная академия им. академика Д. К. Беляева (ИГСХА).

Защита состоится 26 декабря 2013 г. в 1200 часов на заседании диссертационного совета Д 212.203.32 при Российском университете дружбы народов по адресу: 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8/2, зал №2.

С диссертацией можно ознакомиться в Учебно-научном информационно-библиографическом центре Российского университета дружбы народов по адресу: 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, 6.

Автореферат диссертации размещен на сайте РУДН - www.rudn.ru

Автореферат диссертации разослан 25 ноября 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

Куликов Е.В.

Общая характеристика работы

Актуальность темы. Опухоли опорно-двигатслыюго аппарата являются одной из актуальных проблем клинической онкологии. Частота возникновения остеосаркомы у собак составляет 80 - 90 % от всех опухолей костей. В последние годы разработаны эффективные схемы химиотерапии, что безусловно позволяет пролонгировать продолжительность жизни пациентов, однако основным способом воздействия на первичную опухоль является хирургическое лечение, целью которого является сохранение пораженной конечности (Трапезников H.H., 1986; Митин В.Н., 1998; Дурнов JI.A., 1998; Якунина М.Н., 2006; ЯгниковСЛ., 1998; Дюльгер П.Г., 2013). При этом вопрос хирургической коррекции, связанной с замещением дефектов костей в процессе проведения сохранных операций, до сих пор дискутируется (Митин В.Н., 1998; ЯгниковСЛ., 1998; Гаранин Д.В., 2007; Тепляков В.В., Карпенко В.Ю. с соавт., 2010; Дворниченко В.В., Кожевников А.Б. с соавт., 2012; Дюльгер П.Г., 2013).

В научной литературе имеются сведения о различных способах замещения дефектов костей: аутотрансплантация, аллотрансплантация, эндопротезирование (Митин В. Н., 1998; Алиев М. Д., 2011; Амирасланов А. Т. Амирасланов A.A. с соавт., 2009; Трапезников Н. Н., 1986; Базаров Н. И., Нарзулоев В.А. с соавт., 2011). Каждый из этих методов имеет свои достоинства и недостатки. Оптимальным вариантом реконструктивной операции при опухолях кости является замещение дефекта реплантатом, полученным непосредственно при операции из резецированной кости после предварительной обработки. Среди методов обработки рассмотрены вываривание, лиофилизация с/без облучения, экспозиция реплантата в противоопухолевых растворах. Однако, повреждения кости, полученные в процессе обработки, не позволяют ткани реплантата полноценно перестроиться (Саутин E.H., 1965,1981).

В 1981 году был предложен метод обработки реплантатов, заключавшийся в однократном экстракорпоральном облучении кости в дозе 200 Гр с предварительной ее заморозкой в парах жидкого азота, и реимплантацией (Митин В.Н., 1981). Несмотря на имеющиеся клинические данные эффективности замещения дефектов костей, до настоящего времени не были изучены и оценены морфологические характеристики облученных реплантатов кости на различных этапах инкорпорации. Не были определены сроки рецидивирования остеосаркомы в ткани реплантата, что и определило вектор настоящих исследований.

Цель исследования. Изучить процесс перестройки облученных реплантатов кости у собак со спонтанной остеосаркомой длинных трубчатых костей.

Задачи исследования:

1. В сравнительном аспекте изучить морфологические изменения охлажденного и облученного рсплантата кости на разных сроках его перестройки.

2. Определить основные этапы перестройки охлажденного и облученного реплантата кости и сроки завершения его инкорпорации.

3. Исследовать изменения гиалинового хряща, подвергшегося охлаждению с последующим облучением, на разных этапах перестройки реплантата кости.

4. Определить риск рецидивирования остеосаркомы в ткани охлажденного и облученного реплантата кости.

Научная новизна. Впервые изучению подвергается реплантат после однократного экстракорпорального облучения в дозе 200 Гр с предварительным замораживанием при -195°С. Впервые проведена детальная оценка структурных характеристик реплантата на различных сроках его инкорпорации. Впервые определены этапы перестройки охлажденных и облученных реплантатов кости. Изучена реакция гиалинового хряща после замораживания при температуре -195°С и облучения в дозе 200 Гр. Впервые определен риск рецидивирования и наиболее вероятные сроки рецидива остеосаркомы в ткани реплантата.

Теоретическая значимость. Детальное изучение морфологических изменений ткани замороженного и облученного реплантата кости позволяет определить этапность его перестройки. Способность реплантата подвергаться перестройке можно расценивать как признак сохранности его жизненных свойств. Лакунарная резорбция в ткани рсплантата свидетельствует о включении его в обменные процессы организма в целом. Выявление морфологических изменений ткани - реплантата на разных сроках перестройки позволяет прогнозировать дальнейшее течение онкологического процесса. Морфологически доказанное постоянство и устойчивость структуры гиалинового хряща под воздействием замораживания и облучения реплантатов важна для разработки методик их приготовления. Нами доказано, что участие в процессе новообразования костной ткани гиалиновый хрящ не принимает. Устойчивость хрящевой ткани в процессе противоопухолевой обработки замораживанием при -195°С и облучением в дозе 200 Гр подтверждает низкую эффективность консервативных противоопухолевых методов воздействия при лечении опухолей хондрогенной природы.

Практическая значимость. Доказана возможность использования экстракорпорально облученных реплантатов кости для замещения костных дефектов при лечении спонтанных онкологических патологий собак. Впервые определены сроки завершения перестройки реплантата после обработки замораживанием при температуре -195°С и облучением в дозе 200 Гр. Выявлены сроки развития осложнений в раннем и позднем периоде после реплантации. Определен риск рецидивирования и наиболее вероятные сроки развития рецидива остеосаркомы в перестроенной ткани реплантата.

Апробация полученных результатов. Материалы диссертации доложены и обсуждены в клинике экспериментальной терапии ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН (2007), на IX Всероссийской конференции по вопросам онкологии мелких домашних животных (2013), на кафедре клинической ветеринарии аграрного факультета РУДН (2013), в клинико-диагностической лаборатории «Неовет» (2013).

Внедрение результатов. В ФГБОУ ВПО «Московская Государственная Академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К. И. Скрябина». В ФГБОУ ВПО «Орловский государственный аграрный университет». В ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств». В ФГБОУ ВПО «Ивановская государственная сельскохозяйственная академия им. академика Д. К. Беляева (ИГСХА). В ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н. И. Вавилова». Методические рекомендации «Морфологический контроль этапов перестройки облученных реплантатов кости при лечении остеосаркомы у собак».

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, 4 из которых в журналах, рекомендованных ВАК.

Положения, выносимые на защиту.

1. Морфологические изменения и основные этапы перестройки охлажденного и облученного реплантата кости на разных сроках его инкорпорации.

2. Изменения гиалинового хряща, подвергшегося охлаждению с последующим облучением, на разных этапах перестройки реплантата кости.

3. Прогноз рецидивирования остеосаркомы в ткани охлажденного и облученного реплантата кости.

Структура диссертации. Диссертация изложена на 123 листах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов исследования, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложения. Диссертация иллюстрирована 10 таблицами, 108 рисунками, 8 диаграммами и 1 графиком. Список литературы включает 88 источников (61 отечественный и 27 зарубежных).

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы. Работа выполнена на кафедре клинической ветеринарии аграрного факультета ФГБОУ ВПО «Российский университет дружбы народов». Клиническая часть диссертации проведена в ветеринарной клинике «Биоконтроль», в ветеринарной клинико-диагностической лаборатории «Неовет». Исследовано 35 реплантатов костей собак (19 самцов и 16 самок), проходящих комплексное лечение по поводу остеосаркомы. Средний возраст животных составил 7 лет, из них 26% собак младше 5 лет, собак старше 5 лет -74%. Локализация первичной опухоли разнообразна и составляет: в лучевой кости - 65,71% (п=23), большеберцовой кости - 14,29% (п=5), плечевой кости -14,29% (п=5), бедренной кости - 5,71% (п=2), другие локализации не

встретились. Локализация опухоли на передней конечности встретилась в 80% случаев (п=28), на тазовой конечности в 20% случаев (п=7).

Метод обработки реплантата. Производили широкую сегментарную резекцию пораженной кости и ее скелетирование. Удаленный препарат помещали в восемь слоев стерильной алюминиевой фольги. Скелетированный реплантат замораживали в сосуде Дьюара в парах жидкого азота при температуре -195°С в течении 10 минут и облучали на аппарате «Агат - Р» вне организма в дозе 200 Гр. Экспозиция составляла 20 минут. После облучения реплантат возвращали в сосуд Дьюара и доставляли в операционную. Стерильно удаляли с реплантата фольгу, меняя набор инструментов после 4-х слоев. После этого удаляли с реплантата все мягкие ткани, оставляя только капсулу сустава. Затем кюретировали содержимое костномозгового канала. Маркировали удаляемые фрагменты, на заранее составленной скиаграмме пораженной кости, для дальнейшего гистологического изучения. Завершали обработку промыванием костномозговой полости и погружением реплантата в 1%-ный стерильный раствор хлоргексидина биглкжоната. Реплантат крепили пластинами или внешним фиксатором, например аппаратом Илизарова.

Методика получения гистологических срезов. Распил проводили по длиннику кости, получая из центра препарата пластину толщиной около 1,5 см. Вырезали участки кости и маркировали их. Препараты помещали в 10 %-ньш раствор формалина, фиксировали, декальцинировали, обрабатывали по традиционной методике, заливали в парафин, готовили срезы на микротоме, депарафинировали, окрашивали гематоксилином и эозином, и пикрофуксином (по Ван - Гизону). Окрашенные срезы заключали под покровное стекло при помощи канадского бальзама и подвергали микроскопии.

Распределение животных по группам. В зависимости от времени инкорпорации реплантата, с целью оценки динамики его морфологических изменений, срок наблюдения был условно разделен на этапы. 1 - ый этап исследования. Активация и резорбция - реплантат до 30 суток - 7 собак,

2-ой этап. Формирование - реплантат от 30 до 120 суток - 15собак,

3-ий этап. Окончание ремоделирования - реплантат от 120 до 240 суток - 8 собак,

4 - ый этап. Осложнения - реплантат более 240 суток - 5 собак.

Полученные данные были обработаны статистически с использованием программного обеспечения PC MS Excel 2007.

РЕЗУЛЬ ТА ТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Этапы инкорпорации рвплантатов.

Этап 1. Активация и резорбция. (Срок до 30 суток). В результате настоящего исследования были выявлены этапы перестройки облученных реплантатов кости, определены сроки каждого этапа до суток и оценены морфологические характеристики ткани реплантатов.

В первые 30 суток полость вокруг реплантата облитерировалась и начался процесс его перестройки. В «молодых» реплантатах отмечены следующие изменения: некробиоз предсуществующей кости и опухоли, лакунарная резорбция костных балок с разрастанием в межбалочных пространствах фиброзной ткани. В 28,6% (п=2 из 7) наблюдений развился реактивный остеогенез. В гиалиновом хряще изменения не обнаружены. Отмечены особенности морфологии остеокластов: клетки имеют размытые контуры цитоплазмы и расположены среди других клеточных и тканевых элементов. Отсутствие изоляции остеокласта говорит о фазе активной его жизнедеятельности. В некоторых случаях возможно обнаружить опухолевую ткань, так же находящуюся в состоянии некробиоза, но достаточно оформленную для морфологической верификации. Осложнения в виде остеокластического рассасывания не отмечены. Количественная характеристика морфологических изменений экстракорпорально облученных реплантатов кости представлена в табл. 1.

Таблица 1.

Микроскопические изменения в ткани реплантатов на сроке до 30 суток.

Состояние ткани Количество животных %

Некробиоз 4 57,1

Лакунарная резорбция 3 42,8

Фиброз 4 57,1

Реактивные изменения в кости 2 28,6

Как представлено в табл. 1, некробиоз играет существенную роль в процессе перестройки костной ткани. Известно, что заживление переломов не опухолевого характера начинается с пролиферации клеточных элементов под воздействием продуктов некроза и некробиоза поврежденных клеток (Денисов -Никольский Ю.И., Миронов С.П., 2005). Формирование резорбированных лакун, в процессе перестройки костной ткани, служит для концентрации ионов кальция и играет ведущую роль в процессе минерализации кости (Ъд\<5\ М.Ы, 1989).

По данным СЬетЬеге Т.1. (1989), по скорости формирования лакун оценивается активность резорбции, которая в норме составляет в среднем 1-2 х 104 мкм2 костной поверхности на одну клетку в сутки. Процесс же фиброза необходим для формирования субстрата для дальнейшего остеогенеза. Следовательно, наличие этих процессов в реплантатах кости свидетельствует о

процессах перестройки последних, которые определяют тенденцию к дальнейшему нормальному костеобразованию.

Процессы активации и резорбции в нормальной костной ткани происходят в губчатой кости на сроке до 42 дней, а в компактной - до 27 дней (Щепеткин И.А., 1994). Эти процессы в ткани реплантата мы выявили на сроке до 30 суток. На этом этапе перестройки развиваются реактивные процессы и воспалительная инфильтрация ткани реплантата, которые могут быть обусловлены иммунным ответом организма, что необходимо учитывать при проведении сохранных операций. Подобные явления можно купировать назначением в послеоперационном периоде противовоспалительных препаратов.

Таким образом, основные процессы, которые происходят в реплантатах на сроке до 30 суток это некробиоз - 57,1% (п=4 из 7), фиброз - 57,1% (п=4 из 7) и лакунарная резорбция - 42,8% (п=3 из 7).

Этап 2. Формирование. (Срок от 30 до 120 суток). Основной процесс, происходящий на данном этапе это формирование костной мозоли, выявляется в 60,0% случаев (п=9 из 15). Наличие такого яркого процесса свидетельствует о выраженной перестройке ткани реплантата. Лакунарная резорбция завершена, выявляется в 20% (п=3 из 15) случаев, лакуны заполнены фиброзной тканью. Единичные остеокласты расположены изолировано, контуры округлены, что свидетельствует о фазе затухания их жизнедеятельности и, как следствие, завершении процессов перестройки реплантатов кости (Денисов - Никольский Ю.И., 1996). Процессы фиброза продолжаются в 46,6% случаев (п=7 из 15), но протекают менее интенсивно, в основном фиброзная ткань сформирована. В 2-х случаях межбалочные пространства заполнены фиброретикулярной тканью. Процессы некробиоза практически завершены и отмечены в 33,3% случаев (п=5 из 15). Гиалиновый хрящ функционален, хрящевая ткань обычного строения, хондроциты юные, «сочные», расположены в лакунах. Костная ткань на этом этапе активно перестраивается и играет ведущую роль в формировании костной мозоли. После некробиотических изменений развивается массивный фиброз, на фоне которого происходит формирование новообразованной кости. В этот срок мы наблюдали такие осложнения как остеокластическое рассасывание и лейкоцитарную инфильтрацию ткани реплантата. Остеокластическое рассасывание развилось в 13,3% (п=2 из 15) случаев. В 13,3% (п=2 из 15) случаев мы обнаружили лейкоцитарную инфильтрацию ткани реплантата. Количественная характеристика морфологических изменений

экстракорпорально облученных реплантатов кости на этапе от 30 до 120 суток представлены в табл. 2.

Таблица 2.

Морфологические изменения в реплантатах на сроке перестройки от 30 до 120 суток.

Состояние ткани Количество животных %

Некробиоз 5 33,3

Лакунарная резорбция 3 20,0

Фиброз 7 46,6

Формирование костной мозоли 9 60,0

Остеокласгаческое рассасывание 2 13,3

Лейкоцитарная инфильтрация ткали реплантата 2 13,3

Как представлено в табл. 2, основной процесс, происходящий на данном этапе - формирование костной мозоли - выявляется в 60,0% случаев (п=9 из 15), что характеризует перестройку ткани реплантата. Кость, как сложная биологическая структура, возникает только на почве предшествующих образований. Ей необходима механически прочная основа для минерализации. В реплантатах такую основу новой костной субстанции дает новообразованный периостальный хрящ, возникающий на этом этапе. Дальнейшее развитие костной ткани на месте хрящевой мозоли свидетельствует о ее функциональной достаточности. По данным Frost Н.М. (1963) процесс ремоделирования костной ткани составляет 3 — 4 месяца, что соответствует и нашим данным. В условиях заживления переломов диафизов костей периостальные мозоли образуются за счет разрастаний хрящевой ткани, которая в дальнейшем замещается костной. Такая хрящевая ткань образуется всегда в области периоста и смещается в щель между костными отломками, а отсюда в костно-мозговые пространства. Такое смещение обусловлено тем, что животные, перенесшие сохранную операцию, на второй день пытаются пользоваться конечностью. Но пролиферация хрящевых масс в костно-мозговые пространства задерживает репаративные процессы, а не способствует им.

Отсутствие клеточных элементов в ткани реплантата свидетельствует о процессах нормальной перестройки костной ткани, так как разрушение костной ткани сопровождается гибелью включенных в нее клеток (Денисов — Никольский Ю.И., Миронов С.П. с соавт., 2005). При образовании лакун появляются аргирофильные волокна (фиброретикулярная ткань), прочно сцепляющиеся с волокнами костного вещества, обнаженными в процессе его рассасывания. При таком механизме рассасывания костной ткани образуется волокнистая основа, на которой впоследствии откладывается новая костная субстанция. Так, механизм лакунарного рассасывания обеспечивает прочность всей костной структуры. Несмотря на частичное исчезновение опорного вещества в некоторых его участках, оно способно замениться новыми порциями этой субстанции. Так реплантат подвергается рассасыванию и замещается новой костной тканью, что способствует восстановлению целостности поврежденной кости и образованию новой костной структуры. В литературе приводятся

сведения, что процесс замещения и минерализации резорбированного остеона занимает у человека, собаки и кошки от 4 до 10 недель (Roberts W.E., Могеу E.R.,1985, Baron R., 1989, Григорьев А.И. с соавт., 1994). По нашим данным аналогичные процессы, происходящие в ткани облученного и охлажденного реплантата, занимают от 30 до 120 суток, т.е. от 4 до 17 недель.

Нами установлено, что процессы, происходящие в реплантате, морфологически тождественны процессам, одновременно протекающим в воспринимающей кости. Следует отметить особенности морфологии остеокластов на разных этапах инкорпорации реплантатов кости. На этапе перестройки реплантата до 120 суток остеокласты имеют размытые границы цитоплазмы и расположены среди других тканевых и клеточных элементов. Полная изоляция остеокласта и округление его контуров, которая выявляется в реплантатах па этапе более 120 суток, свидетельствует о фазе затухания его жизнедеятельности, что объясняет завершение процессов лакунарной резорбции на указанном сроке. Следовательно, пик перестройки реплантатов приходится на срок от 30 до 120 суток. Отметим, что при неосложненном течении процессов заживления переломов, не связанных с опухолевым поражением, к концу третьего месяца от момента травмы завершается процесс формирования костной мозоли (Денисов - Никольский Ю. И., Миронов С.П. с соавт., 2005). В последующие 5-6 месяцев происходит структурная и количественная перестройка мозоли. Избыточное количество костной ткани рассасывается, формируются функциональные костные балки.

Пик перестройки реплантатов совпадает с пиком перестройки костной ткани при травме. На этом сроке граница реплантата и материнской кости различается с трудом. Они соединены балками зрелой костной мозоли. В области реплантации костная ткань имеет губчатый вид. Вновь образованная костная ткань в виде пластов располагается на стенках расширенных гаверсовых каналов реплантата и материнской кости. Реплантат, представляющий единую структуру с воспринимающим костным ложем, подвергается вместе с ним перестройке, которая заключается в постепенном рассасывании старой костной ткани и замещении ее новой.

Этап 3. Окончание ремоделирования. (Срок от 120 до 240 суток). На

этом этапе перестройки в основном отмечен фиброз ткани реплантата, фиброзируется так же периост. Гиалиновый хрящ сохранен и находится в функциональном состоянии. Среди новообразованных структур в 37,5% (п=3 из 8) выявляются афункциональные костные балки. Процесс формирования костной мозоли завершен. Отмечены осложнения в виде реактивных изменений в кости в 25% (п=2 из 8) случаев. Количественные изменения, обнаруженные в реплантатах на этом этапе инкорпорации, представлены в табл. 3.

Таблица 3.

Морфологические изменения в ренлантатах на стадии инкорпорации от 120 до 240 суток

Состояние ткани Количество животных %

Некробиоз 2 25,0

Формирование костной мозоли 1 12,5

Фиброз 3 37,5

Реактивные изменения кости 2 25,0

Наличие новообразованных клеточных и тканевых элементов 3 37,5

На этапе от 120 до 240 суток окружающие реплантат предсуществующие ткани находятся в состоянии фиброза — 37,5% случаев (п=3 из 8) и реактивных изменений - 25% случаев (п=2 из 8). Фиброзная ткань служит дополнительной опорой для ткани реплантата. В нормальной костной ткани на этом этапе происходит процесс окончания ремоделирования (Денисов - Никольский Ю.И., Миронов С.П. с соавт., 2005). Эта стадия вновь образованного костного вещества включает секрецию компонентов матрикса и процесс минерализации сформированной костной субстанции (Щепеткин И.А., 1994).

В ткани реплантатов мы наблюдаем формирование афункциональных костных балок и других клеточных и тканевых элементов. В исследованиях, выполненных в Рижской школе биомехаников (Кнетс И.В., 1980), приведены данные о том, что циклические нагружения кости способствуют внутрикостной циркуляции крови и тканевой жидкости, что и приводит к запуску процессов перестройки кости, включающих костеобразование и резорбцию. Мы наблюдали, что оперированные животные в раннем послеоперационном периоде начинают пользоваться пораженной конечностью, обеспечивая ее такой нагрузкой.

Этап 4. Осложнения. (Срок более 240 суток). Изменения, которые обнаружены в реплантате на этом этапе, сводятся к осложнениям. Среди осложнений выявлены лейкоцитарная инфильтрация ткани реплантата и реактивное костеобразование. При микроскопии ткани реплантатов мы не обнаружили трещины или микропереломы, которые могли бы свидетельствовать о неспособности реплантата переносить функциональные нагрузки. Следовательно, можно предположить, что функция новообразованной костной ткани, заключающаяся в обеспечении опороспособности конечности и способности переносить функциональные нагрузки, сохраняется, однако подтверждение этого должно быть основано на проведении дополнительных тестов на прочность реплантата.

Таким образом, процессы перестройки реплантата завершены. Развиваются вторичные реактивные изменения.

Сравнительная характеристика морфологических изменений реплантата на разных этапах перестройки

Некробиотические изменения в тканях реплантатов на первом этапе отмечены в 57,1% (п=4 из 7) случаев, на втором - 33,3% (п=5 из 15), на третьем - 25,0% (п=2 из 8), на четвертом — 0%. Таким образом, процесс некробиоза происходит на ранних этапах инкорпорации реплантатов и практически

завершается к 120 определяется (Рис. 1).

суткам, после 240 суток признаков некробиоза не

60,0% - 57,1%

40,0% 33,3%

20,0% 0,0% - 25,0% : Г Ї 0,0%

менее зо суток

от 30 до 120 суток

от 120 до 240 суток

более 240 суток

Рис. 1. Количество некробиогических изменений в тканях реплантатов на разных этапах перестройки.

Лакунарная резорбция в ткани реплантата на первом этапе отмечена в 42,8% случаев (п=3 из 7), на втором - 20% (п=3 из 15), на третьем - 0%, на четвертом - 0%. Следовательно, лакунарная резорбция протекает, в основном, в течении первых 30 суток после реплантации. После 30 суток этот процесс завершается, и лакуны начинают заполняться фиброзной тканью, полость вокруг реплантата на этих сроках облитерируется (Рис. 2).

менее 30 от 30 до от 120 до более 240 суток 120 суток 240 суток суток

Рис. 2. Наличие лакунарной резорбции в тканях реплантатов на разных этапах инкорпорации.

Фиброз в тканях реплантатов на первом этапе выявляется в 57,1% случаев (п=4 из 7), на втором - 46,6% (п=7 из 15), на третьем - 37,5% (п=3 из 8), на четвертом - 0%. Таким образом, процесс фиброза происходит длительно, до 240 суток. Образование фиброзной ткани обеспечивает на сроке до 120 суток облитерацию вокруг полости реплантата, а затем служит субстратом для формирования костной мозоли (Рис. 3).

менее 30 от 30 до от 120 до более 240 суток 120 суток 240 суток суток

Рис 3. Наличие фиброза в тканях реплантатов на разных этапах инкорпорации.

Формирование костной мозоли в тканях реплантатов на первом этапе не отмечено, на втором этапе выявляется в 60% (п=9 из 15) случаев, на третьем - в 12,5% (п=1 из 8) , на четвертом не выявляется. Таким образом, формирование костной мозоли происходит в период от 30 до 120 суток, что соответствует времени развития нормальной костной ткани. (Рис. 4).

80,0% 60,0% 40,0% -20,0% 0,0%

60,0%

12,5%

менее 30 от 30 до от 120 до более 240 суток 120 суток 240 суток суток

Рис. 4. Формирование костной мозоли в тканях реплантатов на разных этапах инкорпорации.

На фоне перестройки реплантата отмечены осложнения, представленные в табл.5.

Таблица 5.

Осложнения в ткани реплантатов на различных этапах инкорпорации

Осложнения %

До 1 месяца От 1 до 4 месяцев От 5 до 8 месяцев 9 месяцев и более

Реактивные изменения 28,6 13,3 25,0 60

Реактивное костеобразование 0 0 0 20

Остеокластическое рассасывание 0 13,3 0 20

Таким образом, реактивные изменения в ткани реплантата выявляются в 28,6% (п=2 из 7) случаев на первом этапе его перестройки, в 13,3% (п=2 из 15) случаев на втором этапе, в 25,0% (п=2 из 8) - на третьем, в 60% (п=3 из 5) - на четвертом. Осложнение в виде реактивного костеобразования выявляется только на четвертом этапе в 20% (п=1 из 5) случаев. Остеокластическое рассасывание ткани реплантата на первом этапе не выявляется, на втором этапе встречается в 13,3% (п=2 из 15) случаев, на третьем — не выявляется, на четвертом - в 20% (п=1 из 5) случаев.

Морфологические изменения гиалинового хряща

Изменения гиалинового хряща не выявлены ни на одном этапе перестройки реплантата. Это доказывает наличие в лакунах молодых «сочных» хондроцитов. Исходя из этого, можно полагать, что ткань гиалинового хряща не изменяется в зависимости от длительности перестройки реплантата, что свидетельствует о сохранении гиалиновым хрящом его нормальных морфологических и функциональных свойств на всех этапах инкорпорации.

Хрящевая ткань характеризуется постоянством и устойчивостью своей структуры. Известно, что хрящевая ткань резистентна к воздействию химиотерапевтических средств и радиотерапии (Алиев М.Д., 2006). Этим принципом руководствуются при назначении лечения пациентам с опухолями хондрогенной природы (хондромы, хондросаркомы и др.), единственным методом в лечении которых является оперативный. В процессе обработки реплантат был подвергнут охлаждению при температуре -195° С, воздействию гамма-лучей в дозе 200 Гр, но патологических изменений в ткани гиалинового хряща это не вызвало. Эти свойства делают хрящ особенно ценным для пластических операций, где нужен трансплантат, стойко сохраняющий свою форму и размеры.

Ядра хрящевых клеток хорошо окрашиваются даже на самых поздних этапах перестройки реплантатов. Регенерация его выражается лишь

ограниченной пролиферацией хрящевых клеток в отдельных участках. Таким образом, хрящ сохраняет свои тинкториальные свойства и жизнеспособность. Жизнеспособный хрящ может участвовать в процессе хондрального остеогенеза и так же быть субстратом для формирования костной ткани (Павлова В.Н., 1988), но по данным нашего исследования эту роль играет фиброзная ткань.

Определение риска рецидивирования опухоли в ткани реплантата.

Анализируя риск развития рецидива остеосаркомы на разных этапах перестройки реплантатов мы выявили, что рецидив развивается на сроке от 30 до 120 суток в 20% случаев (п=3 из 15), на сроке от 120 до 240 суток в 50% случаев (п=4 из 8), на сроке более 240 суток в 80% случаев (п=4 из 5) (Рис. 5).

90,0% 1 60,0% -30,0% 0,0%

менее 30 от 30 до от 120 до более 240 суток 120 суток 240 суток суток

Рис. 5. Наличие рецидива остеосаркомы на разных сроках перестройки реплантата кости.

Возникновение рецидива на поздних этапах инкорпорации реплантата напрямую зависит от эффективности проведения специфической противоопухолевой терапии, и может свидетельствовать о недостаточном ответе онкологического процесса на лечение. Возникновение рецидива опухоли в раннем периоде может быть обусловлено недостаточным проведением предоперационной терапии, либо нарушением противоопухолевой обработки реплантата.

* и= *

Таким образом, результаты настоящего исследования показали, что процессы перестройки реплантатов соответствуют процессам физиологической перестройки костной ткани. Инкорпорация реплантатов начинается с некробиоза и лакунарной резорбции. Под воздействием продуктов некробиоза поврежденных клеток происходит активация остеокластов, которые осуществляют лакунарную резорбцию костных балок. Затем в лакунах

80,0%

появляются фиброретикулярные волокна, которые сцепляясь с волокнами воспринимающей кости обеспечивают прочность всей костной структуры. Механически прочную основу для минерализации кости дает новообразованный периостальный хрящ (хрящевая мозоль), который формируется на фоне фиброза. В последующем происходит структурная и количественная перестройка хрящевой мозоли. Из осложнений на ранних этапах перестройки развиваются реактивные процессы и воспалительная инфильтрация ткани реплантата, на поздних сроках развивается рецидив остеосаркомы.

ВЫВОДЫ

1. Облученные реплантаты кости у собак со спонтанной остеосаркомой длинных трубчатых костей при охлаждении -195° С и облучении в дозе 200 Гр сохраняют способность к перестройке в соответствии с процессами перестройки нормальной костной ткани.

2. Процесс перестройки реплантата завершается к 120 суткам и характеризуется развитием лакунарной резорбции и фиброза - процессов, являющихся субстратом для формирования новообразованных костных структур, таких как афункциональные костные балки и костная мозоль.

3. Морфологические изменения охлажденного и облученного реплантата кости включают на первом этапе инкорпорации некробиоз (57,1% случаев) и лакунарную резорбцию (42,8% случаев), а на втором - фиброз (46,6%) и формирование костной мозоли (60,0% случаев).

4. Гиалиновый хрящ эпифиза реплантата при охлаждении -195°С и облучении в дозе 200 Гр не претерпевает структурных изменений и остается стабильным на всем протяжении перестройки реплантата.

5. Рецидив остеосаркомы на сроке перестройки реплантата более 240 суток составил 80%, на сроке перестройки 120-240 суток рецидив остеосаркомы составил 50%, а в реплантатах на сроке инкорпорации 30-120 суток - 20%.

6. На сроке инкорпорации реплантата более 240 суток в 20% случаев развиваются осложнения в виде реактивного остеогенеза, в 60% случаев развиваются осложнения в виде лейкоцитарной инфильтрации.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Рекомендовано использовать экстракорпорально облученные и

охлажденные реплантаты для замещения костных дефектов у собак со спонтанной остеосаркомой длинных трубчатых костей.

2. Наибольшей прогностической ценностью при определении риска

рецидивирования остеосаркомы у собак, перенесших сохранную операцию, является морфологическое исследование ткани реплантата.

3. Морфологический метод может использоваться для оценки

функциональности реплантата и его способности к перестройке.

4. Для профилактики развития осложнений на ранних этапах перестройки реплантата, в лечении целесообразно проведение длительных курсов противовоспалительной терапии.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Митрохина, Н.В. Случай тромбоцитопенической пурпуры у собаки/ В.Н. Митин, В.С. Швед, Н.В. Митрохина, МЛ. Лукоянова //Российский ветеринарный журнал, 2005, № 4. - С. 33.

2. Митрохина, Н.В. Опухоли спинного мозга и позвоночного столба у собак/ С.А. Ягников, МЛ. Лукоянова, И.Ф. Вилковыский, М.Н. Якунина, Е.А. Корнюшенков, Н.В. Митрохина //Российский ветеринарный журнал, 2005, №4. -С. 7.

3. Митрохина, Н.В. Морфологические изменения этапов инкорпорации экстракорпорально облученных реплантатов кости/ Н.В. Митрохина// Тезисы девятой всероссийской конференции по вопросам онкологии мелких домашних животных. — 2013. — С. 51.

4. Митрохина, Н.В. Клинико-морфологическая характеристика остеосаркомы/ Н.В. Митрохина//Ветеринарная клиника, 2013, №6.-С. 19.

5. Митрохина, Н.В. Определение срока рецидивирования остеосаркомы в реплантате при выполнении сохранной операции/ Н.В. Митрохина// Ветеринарная клиника, 2013, №9. - С. 12.

6. Митрохина, Н.В. Морфологическая характеристика этапов перестройки экстракорпорально облученных реплантатов кости/ Н.В. Митрохина// Российский ветеринарный журнал, 2013, №3.- С. 18.

7. Митрохина, Н.В. Сравнительная морфологическая характеристика первичных хчокачественных опухолей мезенхимальной природы у собак/ Н. В. Митрохина, Ю.А. Ватников// Российский ветеринарный журнал, 2013, №5. - С. 19.

8. Митрохина, Н.В. Методические рекомендации. «Морфологический контроль этапов перестройки облученных реплантатов кости при лечении остеосаркомы у собак». / Н. В. Митрохина, ІО.А. Ватников. - М., 2013. - 18 с.

Митрохина Наталья Викторовна (Россия)

Клинико-морфологическая характеристика облученных реплантатов кости при лечении остеосаркомы у собак

Изучены этапы перестройки и структурные изменения ткани реплантатов, у собак с остеосаркомой трубчатых костей, подвергнутых охлаждению при -195 С и облучению в дозе 200 Гр. Процессы перестройки реплантатов происходят, несмотря на облучение и охлаждение и тождественны этапам перестройки нормальной костной ткани. Риск рецидивирования остеосаркомы в ткани реплантата возрастает в зависимости от времени перестройки реплантата, что связано с биологическим поведением опухоли. Появление рецидива на ранних этапах перестройки может быть связано с нарушением методики обработки реплантата или недостаточным противоопухолевым ответом.

Mitrokhina Natalia V. (Russia) Clinical and morphological characteristics exposed replants bones in the treatment of dogs osteosarcoma

Studied the stages of adjustment and structural change in tissue replants in dogs with osteosarcoma of long bones subjected to cooling at -195C , and the dose of 200 Gr. Restructuring processes replants occur despite the irradiation and cooling stages are identical and the restructuring of normal bone tissue. The risk of recurrence in osteosarcoma tissue replants increases depending on the time of perestroika replants, which is associated with the biological behavior of the tumor. The emergence of relapse in the early stages of restructuring may be associated with impaired processing techniques replants or insufficient anticancer answer.

Подписано в печать:

18.11.2013

Заказ № 9153 Тираж - 100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 wvvw.autoreferat.ru

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Митрохина, Наталья Викторовна, Москва

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Российский университет дружбы народов

04201454368 На правах рукот^и

Q/сш

МИТРОХИНА НАТАЛЬЯ ВИКТОРОВНА

КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОБЛУЧЕННЫХ РЕПЛАНТАТОВ КОСТИ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ОСТЕОСАРКОМЫ У СОБАК

Специальность 06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных.

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель -

доктор ветеринарных наук Якунина Марина Николаевна, научный сотрудник лаборатории комбинированной терапии опухолей НИИ ЭД и ТО ГУ РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН Научный консультант -доктор ветеринарных наук, профессор Ватников Юрий Анатольевич, заведующий кафедрой клинической ветеринарии ФГБОУ ВПО «РУДН»

Москва - 2013

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ.............................................................................................................4

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ....................................................................................9

1.1. Остеосаркома: клиника, морфология, диагностика..................................9

1.2. Радикальные операции влечении остеосаркомы....................................19

1.3. Сохранные операции в лечении остеосаркомы.......................................22

1.4. Способы замещения дефектов костей при сохранных операциях........25

1.4.1. Эндопротезирование...........................................................................27

1.4.2. Аллотрансплантация...........................................................................31

1.4.3. Аутотрансплантация..........................................................................33

1.5. Способы обработки реплантатов..............................................................36

1.5.1. Вываривание.........................................................................................37

1.5.2. Лиофшизация.......................................................................................38

1.5.3. Облучение..............................................................................................39

1.5.4. Облучение замороженных реплантатов...........................................39

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.........................................................................42

2.1. Материалы исследования..........................................................................42

2.2. Методы исследования.........................................................................49

2.2.1. Предоперационная и послеоперационная химиотерапия.............49

2.2.2. Методика обработки реплантатов..................................................49

2.2.3. Получение гистологических срезов....................................................51

2.2.4. Стартификация по группам...............................................................54

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.............................................................56

3.1. Характеристика морфологических изменений экстракорпорально облученных реплантатов кости........................................................................56

3.1.1. Этап 1. Активагщя и резорбг(ия (срок до 30 суток)........................56

3.1.2. Этап 2. Формирование (срок от 30 до 120 суток)..........................60

3.1.3. Этап 3. Окончаниеремоделирования (срок от 120 до 240 суток) 67

3.1.4. Этап 4. Осложнения (срок более 240 суток)..................................71

3.1.5. Сравнительная характеристика морфологических изменений реплантатов на разных этапах инкорпорации..........................................74

3.2. Морфологические изменения гиалинового хряща..................................80

3.3. Определение риска рецидивирования и срока рецидива опухоли в ткани реплантата...............................................................................................81

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.........................................................83

5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ...........................................................................................89

6. ВЫВОДЫ.......................................................................................................90

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.................................................91

8.СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ..........................92

9. ПРИЛОЖЕНИЕ.........................................................................................101

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Опухоли опорно-двигательного аппарата являются одной из актуальных проблем клинической оикологии. Частота возникновения остеосаркомы у собак составляет 80 - 90 % от всех опухолей костей. В последние годы разработаны эффективные схемы химиотерапии, что безусловно позволяет пролонгировать продолжительность жизни пациентов, однако основным способом воздействия на первичную опухоль является хирургическое лечение, целью которого является сохранение пораженной конечности (Трапезников H.H., 1986; Berg J., 1995; Митин В.Н., 1998; Дурнов Л.А., 1998; Якунина М.Н., 2006; Ягников С.А., 1998; Дюльгер П.Г., 2013). При этом вопрос хирургической коррекции, связанной с замещением дефектов костей в процессе проведения сохранных операций, до сих пор дискутируется (Митин В.Н., 1998; Ягников С.А., 1998; Гаранин Д.В., 2007; Тепляков В.В., Карпенко В.Ю. с соавт., 2010; Дворниченко В.В., Кожевников А.Б., с соавт., 2012; Дюльгер П.Г., 2013).

В научной литературе имеются сведения о различных способах замещения дефектов костей: аутогрансплантация, аллотрансплантация, эндопротезирование (Митин В.Н., 1998; Алиев М.Д., 2011; Амирасланов А.Т., Амирасланов A.A. с соавт., 2009; Трапезников H.H., 1986; Базаров Н.И., Нарзулоев В.А. с соавт., 2011). Каждый из этих методов имеет свои достоинства и недостатки. Оптимальным вариантом реконструктивной операции при опухолях кости является замещение дефекта реплантатом, полученным непосредственно при операции из резецированной кости после предварительной обработки. Среди методов обработки рассмотрены вываривание, лиофилизация с/без облучения, экспозиция реплантата в противоопухолевых растворах. Однако, повреждения кости, полученные в

процессе обработки, не позволяют ткани реплантата полноценно перестроиться (Саутин E.H., 1965, 1981).

В 1981 году был предложен метод обработки реплантатов, заключавшийся в однократном экстракорпоральном облучении кости в дозе 200 Гр с предварительной ее заморозкой в парах жидкого азота, и реимплантацией (Митин В.Н., 1981). Несмотря на имеющиеся клинические данные эффективности замещения дефектов костей, до настоящего времени не были изучены и оценены морфологические характеристики облученных реплантатов кости на различных этапах инкорпорации. Не были определены сроки рецидивирования остеосаркомы в ткани реплантата, что и определило вектор настоящих исследований.

Цель исследования. Изучить процесс перестройки облученных реплантатов кости у собак со спонтанной остеосаркомой длинных трубчатых костей.

Задачи исследования:

1. В сравнительном аспекте изучить морфологические изменения охлажденного и облученного реплантата кости на разных сроках его перестройки.

2. Определить основные этапы перестройки охлажденного и облученного реплантата кости и сроки завершения его инкорпорации.

3. Исследовать изменения гиалинового хряща, подвергшегося охлаждению с последующим облучением, на разных этапах перестройки реплантата кости.

4. Определить риск рецидивирования остеосаркомы в ткани охлажденного и облученного реплантата кости.

Научная новизна. Впервые изучению подвергается реплантат после однократного экстракорпорального облучения в дозе 200 Гр с предварительным замораживанием. Впервые проведена детальная оценка структурных характеристик реплантата на различных сроках его инкорпорации. Впервые определены этапы перестройки охлажденных и облученных реплантатов кости. Изучена реакция гиалинового хряща после замораживания при температуре и облучения в дозе 200 Гр. Впервые

определен риск рецидивирования и наиболее вероятные сроки рецидива остеосаркомы в ткани реплантата.

Теоретическая значимость. Детальное изучение морфологических изменений ткани замороженного и облученного реплантата кости позволяет определить этапность его перестройки. Способность реплантата подвергаться перестройке можно расценивать как признак сохранности его жизненных свойств. Лакунарная резорбция в ткани реплантата свидетельствует о включении его в обменные процессы организма в целом. Выявление морфологических изменений ткани реплантата на разных сроках перестройки позволяет прогнозировать дальнейшее течение онкологического процесса. Морфологически доказанное постоянство и устойчивость структуры гиалинового хряща под воздействием замораживания и облучения реплантатов важна для разработки методик их приготовления. Нами доказано, что участие в процессе новообразования костной ткани гиалиновый хрящ не принимает. Устойчивость хрящевой ткани в процессе противоопухолевой обработки замораживанием и облучением в дозе 200 Гр подтверждает низкую эффективность консервативных противоопухолевых методов воздействия при лечении опухолей хондрогенной природы.

Практическая значимость. Доказана возможность использования экстракорпорально облученных реплантатов кости для замещения костных дефектов при лечении спонтанных онкологических патологий собак. Впервые определены сроки завершения перестройки реплантата после обработки замораживанием при температуре и облучением в дозе 200

Гр. Выявлены сроки развития осложнений в раннем и позднем периоде после реплантации. Определен риск рецидивирования и наиболее вероятные сроки развития рецидива остеосаркомы в перестроенной ткани реплантата.

Апробация полученных результатов. Материалы диссертации доложены и обсуждены в клинике экспериментальной терапии ГУ РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН (2007), на IX Всероссийской конференции по вопросам онкологии мелких домашних животных (2013), на кафедре клинической ветеринарии аграрного факультета РУДН (2013), в клинико-диагностической лаборатории «Неовет» (2013).

Внедрение результатов: в ФГБОУ ВПО «Московская Государственная Академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К. И. Скрябина», ФГБОУ ВПО «Орловский государственный аграрный университет», ФГБОУ ВПО «Московский Государственный университет пищевых производств», ФГБОУ ВПО «Ивановская государственная сельскохозяйственная академия им. академика Д. К. Беляева (ИГСХА), ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н. И. Вавилова». Опубликованы методические рекомендации «Морфологический контроль этапов перестройки облученных реплантатов кости при лечении остеосаркомы у собак».

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, 4 из которых в журналах, рекомендованных ВАК.

Положения, выносимые на защиту:

1. Морфологические изменения и основные этапы перестройки охлажденного и облученного реплантата кости на разных сроках его инкорпорации.

2. Изменения гиалинового хряща, подвергшегося охлаждению с последующим облучением, на разных этапах перестройки реплантата кости.

3. Прогноз рецидивирования остеосаркомы в ткани охлажденного и облученного реплантата кости.

Структура диссертации. Диссертация изложена на 123 листах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов исследования, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложения. Диссертация иллюстрирована 10 таблицами, 108 рисунками, 8 диаграммами и 1 графиком. Список литературы включает 88 источников (61 отечественный и 27 зарубежных).

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Остеосаркома: клиника, морфология, диагностика

Опухоли опорно-двигательного аппарата, в частности, опухоли костей занимают важное место в клинической онкологии (Митин В.Н., 1998). В структуре онкологических заболеваний опухоли костей у человека составляют 1 - 4%. Опухоли костей отличаются агрессивным течением, бурным развитием клинической картины болезни, ранним гематогенным метастазированием, что часто приводит к быстрому летальному исходу (Двойрин В.В., Аксель Е.М., Трапезников H.H., 1996, Дроздов В.М., 1982, Ишанходжаев У.У., 1993, Dahlin D.C., 1975). Причина возникновения первичных опухолей костей остается не выясненной. В настоящее время указывается роль травмы в этиологии их возникновения. Больше половины пациентов со злокачественными опухолями костей в анамнезе отмечают ушибы костей и мягких тканей. Описаны случаи возникновения остеосаркомы на месте импланта после лечения перелома, хронического остеомиелита, эндопротезировапия (Bennett D.A., Campbell J.R., Broun P.A., 1979, Митин B.H., 1998, Дюльгер П.Г., 2013). Не последняя роль в возникновении злокачественных новообразований костей отводится наследственным факторам (Ганцев Ш.Х., 2006).

Основной нозологической единицей среди всех опухолей костей является остеосаркома. Остеосаркома - одна из наиболее частых и чрезвычайно злокачественных опухолей костей (Алиев М.Д., 2010). Из всех опухолей костей остеосаркома развивается в 30 - 50% случаев у взрослых и в 60% случаев у детей (Dahlin D.C., 1967, Соловьев Ю.Н., 1997). У собак большинство первичных опухолей костей составляют злокачественные, из которых 85% приходится на остеосаркому (Митин В.Н., Швед B.C. с соавт., 2005). Общий показатель смертности от опухолей кости составляет 5,3 на

один миллион населения в год, причем в возрасте до 15 лет этот показатель равен 9,98, а для пациентов в возрасте от 15 до 19 лет - 7,8 (Ргашпеш Л.Р., 1975). Согласно данным ВОЗ (1976), ежегодно из 100 тыс. собак 8 заболевают остеосаркомой (Митин В. Н. и др., Хохлов В.Ф. с соавт., 2005).

Термин «остеогенная саркома» введен Юингом, который этим термином обозначил саркому, происходящую из костной ткани. В дальнейшем разные авторы стали применять термин «остеогенный» в различном значении: одни — как «происходящий из костной ткани», другие - как «образующий костную ткань». В отношении костных сарком оба эти значения сближаются. Целесообразнее пользоваться термином «остеогенный» в смысле «являющийся дериватом костной ткани и продуцирующий костную ткань» (Виноградова Т.П., 1962). Способность клеточных элементов остеосаркомы формировать опухолевую костную ткань является главным проявлением этого новообразования. В настоящее время под термином «остеосаркома» понимают костную саркому, возникающую из костной ткани и характеризующуюся непосредственным костеобразованием опухолевыми клетками.

Остеосаркома — злокачественная опухоль, которая гистогенетически связана с примитивной мезенхимой или камбиальным резервом, обладающим потенцией к костеобразованию. В ней происходит прямое превращение опухолевой соединительной ткани в кость и остеоид.

Остеосаркома является злокачественной трансформацией быстро пролиферирующих костноформирующих клеток, которая происходит вследствие случайного или индуцированного воздействия вирусных, химических или физических агентов. Наряду с опухолевым костеообразованием в остеосаркомах встречаются другие клеточные и тканевые компоненты мезенхимального происхождения - хрящевая и соединительная опухолевые ткани. Количественное соотношение между костной, хрящевой и соединительной опухолевыми тканями может варьировать в широких пределах. Лишь около 50% остеосарком

продуцируют преимущественно костную опухолевую ткань. В 25% случаев опухолевая масса остеосаркомы представлена в основном хрящевыми формациями и в 25% - преимущественная дифференцировка опухоли направлена в строну веретенообразных клеточных элементов типа фибробластов. Однако, необходимо подчеркнуть, что во всех без исключения остеосаркомах в большем или меньшем количестве имеет место опухолевое костеообразование (Нейштадт Э.Л., Маркочев А.Б., 2007).

Диагностика остеосаркомы

Клиническая картина

Наиболее частая локализация остеосарком - диафизы длинных трубчатых костей, что, по-видимому, находится в связи с наибольшей энергией и длительностью роста этих отделов. На первом месте по частоте поражения у людей стоит дистальный отдел бедра, затем проксимальный отдел большеберцовой и плечевой костей, малоберцовая кость, кости таза, лопатка, лучевая и челюстные кости (Виноградова Т.П., 1962).

Наиболее частым местом локализации опухолей костей у крупных собак являются: дистальный отдел лучевой кости до 60%, проксимальный отдел плечевой кости до 30%, дистальный отдел бедренной кости до 20%, дистальный отдел большеберцовой кости до 15% (Майоров А.И., Митин В.Н. с соавт., 2001). При этом передние конечности поражаются чаще, чем задние (Wolke R.E., Nielsen S.W., 1966). Примерно 70% первичных костных опухолей приходится на поражение длинных трубчатых костей, и 20% - на поражение плоских костей (Brodey R.S., 1985). Остеосаркома встречается у животных среднего и старшего возраста (Misdorp W.A., Hart А. А., 1988). Более предрасположены к остеосаркоме собаки крупных и гигантских пород (Brodey R.S., Riser R.M., 1969). Самцы болеют чаще, чем самки (Ru G., Terracini В.A., Glickman L.T., 1998). Клинические проявления заболевания имеют определенную стадийность, и в значительной степени зависят от локализации опухоли. Первым симптомом болезни обычно является боль

(Алиев М.Д., 2010, Крживицкий П.И., 2010). Так же может появиться хромота, локальная припухлость мягких тканей (Кочергина Н.В., Зимина О.Г., Молчанов Г.В., 2004). Применение обезболивающих средств и тепловых процедур обычно не приносит облегчения. Напротив, боль усиливается и становится постоянной. Через некоторое время при глубокой пальпации определяется локальная болезненность, которая свидетельствует о связи опухоли с надкостницей (Нейштадт Э.Л., Маркочев А.Б., 2007).

Температура кожи в области опухоли может быть повышена, кожные вены расширены вследствие у