Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Фармакотерапия и профилактика коньюнктиво-кератита крупного рогатого скота

ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Фармакотерапия и профилактика коньюнктиво-кератита крупного рогатого скота"

На правах рукописи

ДРОЖЖИНА Анастасия Сергеевна

Фармакотерапия и профилактика коньюнктиво -кератита крупного рогатого скота

06.02.03- ветеринарная фармакология с токсикологией

06.02.04- ветеринарная хирургия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

1" т 2013

Краснодар-2013 005Ь—

005535305

Работа выполнена в лаборатории паразитологии и ветеринарно - санитарной экспертизы ГНУ Краснодарского научно - исследовательского ветеринарного института Россельхозакадемии.

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор,

член - корреспондент РАСХН Антипов Валерий Александрович

Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор

Родин Игорь Алексеевич

Официальные оппоненты, доктор ветеринарных наук, ведущий научный

сотрудник лаборатории фармакологии ГНУ Краснодарского научно - исследовательского ветеринарного института Россельхозакадемии Кузьминова Елена Васильевна

кандидат ветеринарных наук, главный ветеринарный врач ЗАО «Воронцовское», Ейского района, Краснодарского края Лубко Дмитрий Евгеньевич

Ведущая организаг(ия: ФГБОУ ВПО Донской государственный

аграрный университет

Защита диссертации состоится «_24_»_октября_2013 г. в 1400 часов на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, г.Краснодар, ул. Калинина,13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» (350044, г.Краснодар, ул. Калинина,13).

Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ» - http://www.kubsau.ru « 23 » сентября_2013 г. и официальном сайте ВАК РФ - http://www.vak.ed.gov.ru.

Автореферат разослан «_23_»_сентября_2013г.

Учёный секретарь диссертационного совета --Родин И.А.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Наиболее часто,среди болезней, поражающих глаза животных, регистрируется инфекционный конъюнктиво - кератит крупного рогатого скота, возбудителем которого является Rickettsia conjunctive bovis, относящаяся к семейству Rickettsiae. В последние годы данная офтальмопатия во многих хозяйствах Российской Федерации имеет довольно широкое распространение (В.А. Антипов, 1992; В.А. Черванев, 1993, 1994; Б.Н. Алтухов, 1997; Р.И. Ситдиков, 2000; И.А. Золочевский, 2002; М.Ю. Лебедев, 2002; Y. Rehasek, V. Lisak, 1989; J.А. Smith, L.W. George, 1995 и др.), поэтому она наносит значительный экономический ущерб, как в нашей стране, так и за рубежом (В.Н. Авроров, 1973; А.Ф. Русинов, 1986; М.В. Назаров, 1986; Е.П. Копенкин, 2000; Е.П. Щербакова, 2013; Y.R. Saunders, 1975; A.N. Rilliger, 1978 и др.). Около 30% переболевших животных остаются слепыми, столько же теряют зрение на 50 % и более (А.А. Габбасов, 2000; С.М. Воробьев, 2001; Н.Н. Даричева, 2002; И.З. Зарипов, 2002; И.А. Родин, 2013).

В тоже время необходимо отметить недостаточную разработку лечебно-профилактических мероприятий при данной патологии. Вследствие этого разработка и внедрение новых препаратов и методов терапии больных коньюнктиво -кератитом животных является актуальной.

Настоящая работа посвящена проведению исследований по разработке оптимальной лекарственной формы и определению режимов применения нового лечебного средства наружного применения при риккетсиозном коньюнктивио - кератите у крупного рогатого скота.

Исходя из вышеизложенного, возникает настоятельная необходимость в разработке эффективной системы научно-обоснованного подхода к вопросам диагностики, лечения и профилактики инфекционного коньюнктиво - кератита у крупного рогатого скота.

Цель и задачи исследования. Основная цель настоящей работы состоит в том, чтобы на основе различных сторон этиопатогенеза, усовершенствовать лечебно - профилактические мероприятия при риккетсиозном коньюнктиво - кератите у крупного рогатого скота, путём разработки нового лекарственного средства наружного применения. Исходя из цели исследования, были поставлены следующие основные задачи:

• уточнить некоторые аспекты этиологии, патогенеза и клинического проявления коньюнктиво - кератита у коров в Краснодарском крае;

• изучить распространение риккетсиозного конъюнктиво-кератита у крупного рогатого скота в возрастном аспекте в некоторых хозяйствах края;

• разработать новый, эффективный, экологически безвредный препарат для терапии риккетсиозного конъюнктиво-кератита у крупного рогатого скота и провести фармако-токсикологическую оценку данного препарата;

• определить эффективность предложенных методов лечения инфекционной патологии глаз у телят в зависимости от стадий проявления;

• разработать и внедрить в практику животноводческих хозяйств новый комплексный метод лечения телят больных риккетсиозным конъюнктиво-кератитом.

Научная новизна. Впервые в условиях юга России проведена разработка и дана фармако-токсикологическая оценка и научное обоснование применения жидкой мази - линимента Сальвадоры персидской при риккетсиозном конъюнктиво-

кератите у крупного рогатого скота в сравнительном аспекте с другими препаратами, применяемыми при вышеуказанной офтальмопатии.

Теоретическая и практическая значимость. Разработана схема комплексного лечения при риккетсиозном конъюнктиво-кератите у телят. На основании проведенных исследований предложен новый эффективный препарат - линимент Сальвадоры персидской для лечения риккетсиозного конъюнктиво-кератита у крупного рогатого скота.

Основные положения, выносимые на защиту:

Распространение и этиопатогенез риккетсиозного конъюнктиво-кератита в некоторых хозяйствах края. Комплексный метод лечения коров больных вышеуказанной офтальмопатией. Диагностика и клинические исследования у коров при конъюнктиво-кератите. Фармако-токсикологическая оценка нового эффективного препарата для лечения телят больных риккетсиозным конъюнктиво-кератитом.

Объект и предмет исследования. Объектом исследований является крупный рогатый скот, предметом исследования линимент Сальвадоры персидской, предназначенный для лечения и профилактики риккетсиозного коньюнктиво - кератита у крупного рогатого скота.

Апробация результатов исследований. Материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на ученых советах Краснодарского научно - исследовательского ветеринарного института в течение 2010 - 2012 гг., на международной научно - практической конференции «Актуальные проблемы современной ветеринарии», посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани (г. Краснодар - 2011г.), на международной научно - практической конференции «Опыт международного сотрудничества в области экологии, лесного хозяйства, ветеринарной медицины и охотоведения» посвященной 90 - летию со дня образования Кубанского государственного аграрного университета (г. Краснодар -2011), на международной научно-практической конференции, посвященной 35-летию факультета ветеринарной медицины Кубанского государственного аграрного университета (г. Краснодар — 2009г.).

Публикации. Основные материалы диссертации опубликованы в 4-х печатных работах, в том числе одна в рецензируемом издании, рекомендованном ВАК России - «Ветеринария Кубани».

Структура и объём диссертационной работы. Диссертация изложена на 136 страницах машинописного текста в компьютерном варианте и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, выводов, практических предложений, библиографического списка и приложений. Список литературы включает 257 источников, в том числе 102 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 11 таблицами, 6 рисунками, 7 графиками.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнялась в лаборатории паразитологии и ветеринарно - санитарной экспертизы ГНУ Краснодарского научно - исследовательского ветеринарного иститута в 2009- 2012 гг. В ходе наших исследований применялись лабораторно -клинические и лечебно - профилактические методики при офтальмопатиях у животных по П.И. Липовцеву (2006). Фармако-токсикологические исследования проведены при техническом содействии кандидата ветеринарных наук Мергани Хаса-на М.О. Биохимические и бактериологические исследования проводились при

техническом содействии кандидата ветеринарных наук С.Н. Поветкина, Клиническую часть проводили на крупном рогатом скоте, принадлежащем учебно - опытному хозяйству «Краснодарское» и ОАО Агрокомплекс «Гиагинский им. Ю.Х. Тхайцухова».

Объектом наших исследований служил крупный рогатый скот голштино-фризской породы, а также помесный скот обоих полов и разного возраста.

Постановку диагноза на риккетсиозный конъюнктиво-кератит осуществляли с учётом клинического проявления болезни, эпизоотической ситуации и на основании лабораторных исследований.

Биохимические, морфологические и иммунологические исследования крови, гистологические и гистохимические исследования тканей глаза у телят в возрасте до одного года, проводили в научно - производственном центре «Биопоиск» ФГОУ ВПО «Кубанский государственный университет».

По методу В.Н. Авророва (1973) делали мазки-отпечатки с конъюнктивы век и роговицы, высушивали их на воздухе затем фиксировали спирт - эфиром и окрашивали по Романовскому - Гимзе (Б.И. Антонов, 1987).

Сыворотку крови, головной мозг больных животных с разной степенью развития заболевания исследовали в научно - производственном центре «Биопоиск» ФГОУ ВПО «Кубанский государственный университет» методом люминисцентной микроскопии в непрямой модификации согласно «Наставлению по применению сухих люминесцирующих антител к риккетсиям Бернета (1972)». Каждая из этих сывороток крови параллельно исследовалась на антигенных пятнах из коксиелл Бернета 1 и 2 фазы.

С целью дифференциальной диагностики от Moraxella bovis проводили посевы на МПА, МПБ, среду Китт - Тароцци и на 2% глюкозо - кровяной агар (А.Ф. Русинов, 1986; Е.П. Копенкин, 1988). Для исключения телязиоза промывали глаза больных и условно здоровых телят раствором йода в разведении 1:2000 с последующим исследованием смывов на темном фоне.

Для изучения уровня естественной резистентности, согласно классификации РКК крупного рогатого скота по клиническим признакам (М.В. Плахотин, В.И. Захаров, P.C. Алахвердиев, 1966; В.Н. Авроров, 1973), больных телят разделили на шесть групп по принципу парных аналогов по 7 животных в каждой, седьмая группа состояла из семи здоровых телят, без клинических признаков болезни, при отсутствии риккетсий в мазках-отпечатках с конъюнктивы и роговицы и была контрольной. Во всех группах в течении года (весна, осень) брали кровь и исследовали фагоцитарную активность нейтрофилов, фагоцитарный индекс и фагоцитарное число - по B.C. Гостеву (С.И. Плященко, В.Т. Сидоров, 1979), приняв за тест-культуру - Stafhyilococcus aureus, комплиментарную активность - по Ф. Вагнеру (1963), бактерицидную активность сыворотки крови — по О.В. Смирновой, Т.А. Кузьминой (1966), лизоцимную активность — по В. Дрофейчук (1968).

Отбор структурных образований глаза для макроскопических, гистологических и гистохимических исследований проводили при убое животных на мясокомбинатах и убойных пунктах хозяйства. При этом весь отобранный материал фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина и жидкости Карнуа, затем проводили в спиртах возрастающей крепости и заливали в целлоидин-касторовое масло - парафин. Резали на ротационном микротоме. Срезы толщиной 7 мкм окрашивали гематоксилином и эозином, по Ван-Гизону (А. Меркулов, 1969; Р. Лили, 1969). Определение резорбтивной способности линимента Сальвадоры персидской

и исследование её гидрофильных свойств проводили по общепринятой методике (Ю.И. Попов, 2004).

Токсикологические свойства препарата изучали путем определения параметров острой, подострой и хронической токсичности, общего влияния на организм, органы и системы, а также ветеринарно-санитарной оценкой продуктов убоя и па-томорфологическими исследованиями органов и тканей животных после назначения им линимента Сальвадоры персидской.

Изучение острой токсичности проводили на белых крысах, при назначении в разных дозах однократно внутрь, О токсическом действии препарата судили по картине интоксикации и результатам патологоанатомического вскрытия убитых животных после его применения, Подострую токсичность препарата изучали на белых крысах при ежедневном в течение 28 дней внутреннем введении в различных дозах. О токсическом действии препарата судили по картине интоксикации и по изменению показателей крови. При ежедневных наблюдениях учитывали клинические показатели; общее состояние, аппетит, показатели дыхания, пульса и температуры тела, функции органов пищеварения и мочеотделения, динамику прироста массы тела. При изучении влияния линимента Сальвадоры персидской на кровь животных исследовали её основные морфо-иммуно-биохимические показатели общепринятыми методами.

Антимикробную активность препарата in vitro изучали по отношению штаммов микроорганизмов, являющихся возбудителями коньюнктиво - кератита у коров. Эксперименты проводили методом серийных разведений в бульоне Хоттинге-ра, МПБ и МПА, для чего делали разные концентрации препарата в питательных средах. Бактериостатические свойства определяли визуально по отсутствию роста культур в пробирках после суточной и двухсуточной инкубации при температуре 37 °С. О степени активности препарата судили по его концентрации в 1 мл. питательной среды, вызывающей полное угнетение роста тест - культур. Определение антимикробной активности линимента Сальвадоры персидской проводили также с использованием метода диффузии в агар.

Лечение больных животных проводили жидкой мазью - линиментом Сальвадоры персидской. Линимент закладывали следующим образом. Оттягивали нижнее веко книзу и в область нижней переходной складки (свода коньюнктивы) помещали стеклянной лопаточкой небольшое (0,2 - 0,3 гр.) количество линимента. Стеклянную палочку (лопатку) погружали за нижнее веко плашмя. После того, как животное закрывало глаз, стеклянную палочку вынимали. Остатки мази на краях век удаляли тампоном, а мазь, оставшуюся в коньюнктивальном мешке, распределяли лёгким поглаживанием по нижнему веку. С лечебной целью линимент Сальвадоры персидской закладывали под нижнее веко через каждые 72 часа. С профилактической целью летом линимент Сальвадоры персидской применяли 1 раз в 15 дней, а зимой - один раз в месяц.

Для профилактики РКК среди крупного рогатого скота нами была применена аэрозольная обработка помещений в присутствии животных с использованием хлористого алюминия по методике предложений ВНИВС и ВНИВИПФиТ(1990).

Математическую обработку полученных данных, а также их статистический анализ проводили общепринятыми методами на компьютере Intel Pentium-4 с ипо-льзованием программы Microsoft Word (В.Ю. Урбах,1975).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Распространение риккетсиозного конъюнктиво-кератита среди крупного рогатого скота

Как для любой инфекционной болезни, так и для РКК характерны общие тенденции возникновения, распространения с определенным охватом восприимчивого поголовья, тяжести и продолжительности течения, исхода и т.д. Поэтому изучение всех этих эпизоотологических вопросов имеет большое значение в разработке методов диагностики, лечения и профилактики.

С целью необходимости оценки зональных особенностей проявления РКК, мы изучили эпизоотологические особенности этой инфекционной болезни в одном из сельскохозяйственных предприятий Краснодарского края.

По нашим наблюдениям в последние годы наметилась тенденция к распространению реккитсиоза у крупного рогатого скота.

Заболеванию подвержены в первую очередь телята, особенно с трёх -дневного возраста до года. У взрослых животных болезнь диагностируется реже и воспалительный процесс у них протекает более доброкачественно.

На протяжении нескольких лет в ОАО Агрокомплекс «Гиагинский им. Ю.Х. Тхайцухова» нам удалось проследить развитие энзоотии РКК у крупного рогатого скота. В этом хозяйстве у телят голштино-фризской породы болезнь прогрессировала очень быстро. Заболевание с поражением глаз разной степени тяжести регистрировали еще в 2007 году (табл. 1).

Лечение больных животных в хозяйстве осуществляли ретробульбарной новокаиновой блокадой по В.Н. Авророву с одновременным введением в конънкти-вальный мешок 10% синтомициновой мази. Это позволило замедлить развитие и распространение заболевания, но не ликвидировать его.

Таблица 1- Заболеваемость телят РКК в ОАО Агрокомплекс «Гиагинский им. Ю.Х. Тхайцухова» по годам

Года Всего телят (голов) Количество заболевших (голов) % к общему количеству животных

2007 411 27 6,57

2008 398 61 15,32

2009 356 112 31,46

2010 315 161 32,06

Проведя в 2010 году тщательное обследование всего поголовья, нами были выявлены больные со всеми шестью стадиями патологического процесса согласно классификации В.М. Плахотина, P.C. Алахвердиева, В.И. Захарова (1966) в модификации В.Н. Авророва (1973).

Данные результатов исследования представлены в таблице 2. Как видно из таблицы 2 около половины больных животных имели поражение лишь одного правого глаза (49,5%). Заболевание и вовлечение в патологический процесс только одного левого глаза составляло 38,6%, что на 10,9% меньше чем правого.

Еще меньше было случаев, когда заболевание сопровождалось поражением обоих глаз (10,9% от общего количества больных). На день обследования у животных нами установлены все шесть стадий проявления РКК. Это говорит о затянувшемся процессе, когда у одних заболевание находится в стадии разрешения, у дру-

гих - активного развития, у третьих - лишь в начальном периоде. Количество больных в разных стадиях было различным, однако превалировали животные с 1-3 стадиями заболевания. Мы считаем, что это характеризует динамику эпизоотического процесса и свидетельствует о прогрессировании болезни.

Таблица 2 - Структура поражения глаз у телят больных риккетсиозом на МТФ № 1

№ Глаз СТАДИИ Итого % поражения от количества больных

1 2 3 4 5 6

1 Правый 13 9 10 7 5 6 50 49,5

2 Левый 10 8 7 8 2 4 39 38,6

3 Оба 4 — 4 — 1 3 12 11,9

4 Всего 27 17 21 15 8 13 101 100,0

Преобладание ранних стадий патологического процесса, развивающегося в глазах у больных животных характерно для обострения энзоотии РКК на фоне длительно текущей инфекции. Это, а так же отдельные факты поражения обоих глаз у телят, говорят еще и о сравнительно низкой общей неспецифической резистентности организма.

Кроме этого, на организм животных в стойловый период неблагоприятно влияет микроклимат помещений, где они содержатся. Он характеризуется высокой температурой воздуха, его влажностью, повышенным содержанием углекислого газа, аммиака и сероводорода. В 1м3 воздуха содержится микробных тел больше в 2 раза по сравнению с нормой. Все это вместе взятое способствует быстрому распространению РКК среди животных.

Обобщая проведенные нами эпизоотологические исследования по РКК в обследованном хозяйстве можно сделать следующие выводы:

в силу того, что болезнь не всегда вовремя и правильно диагностируется, она приобрела массовый и затяжной характер;

в результате проведенных нами работ были апробированы новые эффективные средства, способы, методы лечения и профилактики этого заболевания, которые нуждаются в дальнейшем изучении и совершенствовании; риккетсионный конъюнктиво-кератит регистрируется в течении всего года, но наиболее ярко проявляется в весенне-летний период. В возникновении и развитии энзоотии РКК, по нашему мнению, большую роль играют предрасполагающие факторы: Главный из них — уровень общей неспецифической резистентности, который зависит от целого ряда причин, таких как: раздражитель в виде яркого солнечного света после долгого пребывания в закрытых помещениях; попадание мелких частиц пыли на слизистую глаз и развитие микротравм. В последующем они являются воротами инфекции; активный лет мух (переносчики возбудителя и др.);

наличие широкой возможности контактов больного риккетсиозом крупного рогатого скота с дикими животными, синантропными гры зунами и бродячими собаками на пастбищах, у водоемов, на территории молочных комплексов, в животноводческих фермах свидетельствует о существовании активного природного очага с образованием паразитоциноза: се-

рые крысы-риккетсии - крупный рогатый скот - бродячие собаки; заболевание риккетсиозом чаще сопровождается поражением лишь правого глаза, реже обоих глаз одновременно. Данный вывод вполне согласуется с результатами исследований Б.Н. Алтухова (1997); во всех случаях в основном заболевали молодые животные в возрасте до года, однако не редко, риккетсиоз наблюдали и у взрослого крупного рогатого скота. Заболеваемость РКК колебалась в разные годы от 6,6 до 32 % от всего поголовья телят.

3.2. Патогенез болезни

Существенное влияние на развитие РКК, особенно в стойловый период содержания животных, оказывает уровень общей неспецифической резистентности. К факторам, способствующим ее снижению, относятся: нарушения ухода, кормления и содержания, переболевание в молодом возрасте желудочно-кишечными и легочными заболеваниями.

Эндотоксин риккетсий играет существенную роль в патогенезе РКК. С интоксикацией связаны клинические симптомы — блефароспазм, слезотечение, депрессия. Эндотоксин обусловливает развитие альтеративных, экссуда-тивных процессов и врастание кровеносных сосудов со стороны лимба. По степени их выраженности можно судить о вирулентности риккетсий и реактивности организма.

Исследования с помощью СЭМ, проведённые на базе центра «Биопоиск» Кубанского государственного университета показали, что в начале болезни имеет место отек роговицы. У многих эпителиоцитов наблюдаются выпуклые круглые ядра, расположенные эксцентрично. Из-за обильного слезовыделения бактерицидная активность ее лизоцима падает, а активность риккетсий, находящихся на поверхности роговицы, усиливается. Это ведет к ускорению некробиоза эпителиоцитов и деструкции лизосомальных мембран. Появляются эрозии, язвы. В них активизируются риккетсий и вторичная микрофлора. Отсюда они проникают вглубь стромы роговицы, происходит абсцедирование и ее изъязвление. Длительное пребывание риккетсий в глазу способствует сенсибилизации его тканей и развитию аллергической реакции замедленного типа, так как она развивается сравнительно долго. На это указывает развитие стромального кератита в 3—5-ю стадии патологического процесса со значительно выраженной лейкоцитарно-лимфоцитарной инфильтрацией стромы роговицы. В стадии рубцевания и эпителизации роговицы острые явления воспалительного характера исчезают. Дно язвы очищается, рубцуется. Поверхность роговицы становится неровной, собранной в складки. Частота и величина складок увеличивается от периферии к центру, поэтому напоминает собой каракуль. Роговица в этом месте становится непрозрачной, зрительная способность животного нарушается.

Полученные нами данные дополняют и расширяют существующее представление о патогенезе РКК у крупного рогатого скота и дают возможность более правильно понять клинические признаки и морфологические изменения в глазу больных телят.

3.3. Диагностика риккетсиозного конъюнктиво-кератита крупного рогатого скота

По мнению специалистов, риккетсиозный конъюнктиво-кератит у крупного рогатого скота обладает выраженным полиморфизмом. Это значительно затрудня-

ет возможность диагностики РКК на основании только клинического симптомо-комплекса. В пределах энзоотических поражений при знании наиболее характерных клинических признаков болезни РКК можно заподозрить, чтобы в последующем подтвердить или исключить с помощью соответствующих лабораторных исследований.

Диагноз на риккетсиозный конъюнктиво-кератит у крупного рогатого скота ставили на основании эпизоотологических, клинических и лабораторных данных.

При проведении эпизоотологического обследования на РКК учитывали стационарность болезни, процент заболевших животных и их возраст, породу, время года, условия кормления, содержания и многое другое.

При первоначальном обследовании хозяйства предварительный диагноз на РКК ставили после просмотра мазков-отпечатков с конъюнктивы и роговицы больного глаза животного, окрашенных по Стемпу или Романовскому-Гимзе. При цитологическом исследовании среди эпителиальных клеток нормального строения обнаруживали единичные клетки с неравномерно окрашенной цитоплазмой, некоторые из них частично разрушены. Между ними регистрировали лейкоциты, макрофаги, кокковидные или палочковидные микробы, преимущественно стафилококки.

Большинство эпителиальных клеток и их ядра увеличены; в цитоплазме их находятся риккетсии в виде точечных включений или мелких палочек. Отдельные эпителиоциты полностью разрушены, вблизи их расположены "голые ядра". Встречаются клетки в состоянии деструкции. Цитоплазма многих из них вакуоли-зирована, а ядра пикнотичны. Местами имеет место цитолиз.

В пораженной роговице больных животных под электронным микроскопом в условиях центра «Биопоиск», мы постоянно отмечали разрыхление клеток, особенно шиповатого слоя, переднего эпителия и утолщение передней пограничной пластины за счет осмиофильного слоя. В просвете капилляров и на месте разрушенных эпителиоцитов обнаруживаются риккетсии.

Эпителиоциты находятся на разной стадии некроза из-за выделяемого эндо-тотоксина. Ядра деформированы, видно множество псевдомиелиновых структур. Выявляется набухание митохондрий и фрагментация эндоплазматической сети. В капилляре с риккетсиями размыты границы отростков эндотелиальной клетки. В его просвете множество мембранных остатков, очень похожих на оторвавшиеся микроворсинки. В связи с этим нарушается целостность мембраны сосуда и риккетсии проникают в строму роговицы.

В поле зрения электронного микроскопа риккетсии располагались одиночно, попарно, нередко и большими скоплениями. Встречались фигуры бинарного деления. Они имели компактную мелкогранулированную цитоплазму и плотный круглый нуклеоид, расположенный в центре. Часто наблюдаются макрофаги, в цитоплазме которых содержатся риккетсии, окруженные лизосомальными вакуолями. Мелкие из них сливались в крупные, в результате ядра клеток оттеснялись к периферии и гибли, а риккетсии попадали в окружающее пространство.

В заключение следует особо подчеркнуть, что в связи с большими трудностями распознавания РКК у крупного рогатого скота по клиническому сим-птомокомплексу, правильный диагноз может быть установлен лишь с учетом эпизоотологических, клинических и лабораторных (просмотр мазков-отпечатков с конъюнктивы и роговицы больного глаза животного, серологических, бактериологических, вирусологических) данных.

3.4. Экспериментальные и клинические исследования по разработке, применению и изучению свойств линимента Сальвадоры персидской для лечения коров, больных риккетсиозным конъюнктиво - кератитом

Интенсификация производства в животноводстве не может быть успешно решена без использования высокоэффективных медикаментозных средств для лечения животных, успех которых во многом зависит от умения врача выбрать соответствующие лекарственные вещества и назначить их в наиболее рациональной лекарственной форме.

В настоящее время, для лечения риккетсиозного конъюнктиво-кератита, разработаны и апробированы многокомпонентные мази на водорастворимой основе, гидрофильной основой которых служат полиэтиленоксиды. Главное их свойство состоит в том, что они обладают дегидратирующим действием, которое распространяется не только на поражённые ткани, но и на содержащиеся в ней микробные клетки (Блатун JI.A., Светухин А.М. и др., 1999).

Проведённый нами анализ данных литературы свидетельствует, что для лечения болезней коньюнктивы и роговицы различного генеза в настоящее время предложено большое количество препаратов. Однако у многих из них лечебное действие проявляется только на поверхности глаза, не распространяясь вглубь воспалённых тканей, или они характеризуются однонаправленностью действия. Анализируя литературные данные нельзя не отметить что, большое количество предложенных препаратов так и остались на уровне научных разработок. Кроме того, многие из представленных в обзоре препаратов импортные. В состав ряда лекарственных форм в качестве анестезирующего компонента входит тримекаин, также являющийся в настоящее время импортным препаратом.

3.4.1. Разработка, получение и свойства линимента Сальвадоры персидской

Целью настоящего исследования явилась разработка эффективного метода лечения коров с риккетсиозным конъюнктиво-кератитом, эффективного и недорогого с использованием сырья растительного происхождения (Пустырский И.Н., Прохоров В.Н., 2000).

Материалом для исследований служили образцы коры дерева Сальвадора персидская (Salvadora persika), собранные в соответствии с наставлениями Мергани Хасана М.О. (2009) в апреле месяце в период интенсивного сока наполнения, предварительно высушенных при комнатной температуре, а также образцы полученных фракций методом «сухой возгонки коры» и полиэтиленгликоль с молекулярным весом -1500.

Лабораторные исследования относятся к области получения дегтя из продуктов термической переработки коры и древесины.

Изучив производственные недостатки получения берёзового дёгтя, мы усовершенствовали методику получения продуктов пиролиза древесины, и с внесением соответствующих корректив предложили свою схему.

Ветки коры дерева Сальвадоры персидской, собранные в апреле месяце в период интенсивного сока наполнения, предварительно подсушивали при комнатной температуре для уменьшения выхода объема кислой воды. Затем перегонную колбу заполняли сухими измельчёнными ветками Сальвадоры персидской размером 1,5х 1,5 см, не более чем на 3/5 её объема. С помощью аллонжа колбу подсоединя-

ли к холодильнику. Далее колбу Вюрца с сырьём помещали в термостат, который предварительно прогревали до 500 °С, затем подключали холодильник к водопроводной сети. По истечении 10-15 минут включали холодную воду. В процессе пиролиза в течение 30-40 минут вели сбор фракции кислой воды, с началом прохождения первых порций креозоловых лёгких масел путём увеличения напора холодной воды понижали температуру в рабочей камере холодильника до 240 °С и постепенно доводили до 180 °С. Процесс пиролиза возгонки длится в течении пяти часов при данном температурном режиме до получения необходимых кислородо-содержащих фракций.

Полученные необходимые фракции смешивали с полиэтиленгликолем-1500, предварительно расплавленного до 35-40 °С в соотношении 1:1,2.

В результате получалась однородная мазь, тёмно-коричневого цвета с резким запахом дыма. В предложенной нами разработке существует ряд преимуществ: -контролируемая разница температурных величин, как в печи, так и в холодильнике от начала и до конца всего цикла;

-сокращение сроков получения необходимых фракций, за счёт ускорения выделения кислой воды при повышении температуры до 500 °С;

-своевременный контроль качества получаемых полифенольных масел и первых порций дегтя, содержащего малое количество фенолов за счет своевременного снижения температуры в печи до 180 °С.

Физико-химические свойства линимента Сальвадоры персидской должны соответствовать временному наставлению по применению линимента Сальвадоры персидской от 10.04.2009 г.(таблица 3).

Таблица 3 - Физико-химические свойства линимента Сальвадоры персидской

№п/п Наименование показателя Норма по НТД

1. Описание препарата Жидкая мазь со специфическим запахом дыма

2. Прозрачность и цветность Линимент тёмно-коричневого цвета, непрозрачный

3. Кислотность Водородный показатель 6,8-7,2

4. Специфическая активность Проявляет противовоспалительное, смягчающее, рассасывающее, а также акарицид-ное, фунгицидное, фунгистатическое и антимикробное действие; стимулирует регенеративные процессы, повышает локальную резистентность.

5. Подлинность Соответствует временному наставлению по применению линимента Сальвадоры персидской от 10.04.2009 г.

Все работы по изготовлению препарата должны производиться с соблюдением норм и правил по технике безопасности, применяемых при работе с токсичными веществами, а также общих правил применения индивидуальных средств защиты согласно типовым нормам, утвержденным в установленном порядке.

Для определения внешнего вида, цвета, наличия посторонних примесей, все контейнеры с препаратом просматривали визуально на белом фоне. При наличии дефектов в отдельных флаконах их выбраковывали. ГФ XI, 2 т., стр. 142.

3.4.2. Исследование антисептических свойств динимента Сальвадоры персидской

При обследовании коров на молочном комплексе ОАО Агрокомплекс «Гиа-гинский им. Ю.Х. Тхайцухова» были выявлены животные с коньюнктиво - кератитом у которых взяли смывы из коньюнктивы пораженных глаз.

При бактериологическом исследовании семнадцати проб смывов из пораженных глаз коров кроме специфической (риккетсии), выявили и штаммы стафил-лококков, протей и кишечную палочку.

Кишечная палочка проявила чувствительность к неомицину, гентамицину, канамицину, левомицетину и ампициллину.

Данные проведенных исследований по антибиотико-чувствительности выделенных микроорганизмов при коньюнктиво - кератите свидетельствуют о приобретении значительной устойчивости микрофлоры к наиболее широко применяемым антибиотикам (табл. 4).

Таблица 4 - Чувствительность выделенных штаммов к антибиотикам

№ Антибиотики Staphylococcus aureus Proteus mirabilis Escherichia coli

1. Эпитпоминип + _

2. Неомицин + _ +

3. Оксациллин + _ _

4. Гентамицин + + +

5. Тетрациклин + _ _

6. Канамииин + _ +

7. Левомицетин + _ +

8. Ампициллин _ + +

9. Фузидин _ _ _

10. Стрептомицин _ _ _

11. Бензилпенициллин - - -

Антисептические свойства линимента Сальвадоры персидской изучали при помощи следующих методов: диффузии в агар, с использованием лунок.

Изучение антимикробной активности линимента Сальвадоры персидской проводили в сравнительном аспекте со следующими препаратами: мазь ихтиоловая и йодоформ.

Опыт проводили в пяти повторностях, используя линимент Сальвадоры персидской выработанный в одной серии. В качестве тест культур использовали одно-двухдневные «полевые» очищенные культуры микроорганизмов, выделенные от коров больных коньюнктиво- кератитом. Результаты опыта представлены в таблице 5.

Культуры условно-патогенной микрофлоры оказались высоко чувствительны к линименту Сальвадоры персидской. Зона задержки роста у линимента по отношению к культурам микроорганизмов золотистого стафилококка, кишечной палочки и протея составляла от 19,2 до 21,4 мм, что превосходит применяемые пре-

параты: мазь ихтиоловая, йодоформ от 9,2% до 54,3 %. Линимент Сальвадоры персидской задерживает рост золотистого стафилококка на 7,2 мм лучше по сравнению с мазью ихтиоловой и на 9,4 мм лучше в сравнении с йодоформом. Так же к линименту оказались высокочувствительны кишечная палочка и протей. По сравнению с препаратами мазь ихтиоловая и йодоформ линимент Сальвадоры персидской показывал задержку роста культур кишечной палочки на 4,6 мм выше чем мазь ихтиоловая и 11,2 мм йодоформа, протея вульгарного на 2,2 и 10,3 мм, сине-гнойной палочки на 3,7, 10,3 мм по сравнению с мазью ихтиоловой и йодоформом.

Таблица 5. Сравнительные данные антимикробной активности препарата линимент Сальвадоры персидской (ЗЗР в мм)

Культура микроорганизмов Пинимент Сальва-юры персидской мм Мазь ихтиоловая мм Йодоформ мм

Staph, aureus 19,8 12,6 10,4

Proteus mirabilis 20,5 15,9 9,3

E.coli 21,4 19,2 11,0

Ps. aeruginosa 19,2 15,7 9,6

В следующем эксперименте изучалось антибактериальное и антимикозное действие линимента Сальвадоры персидской. Учитывая многочисленные сведения специалистов (В.Н. Никулина, 2005; Ч.Р. Персаев, 2007; A.A. Кириллов, 2007 и др.) о наличии в смывах из глаз при коньюнктиво- кератите у коров и других микробов, а также грибов - использовали в качестве тест-микробов (суточные микробные культуры) 2 штаммов стрептококков (Str. hemoliticus), 5 штаммов стафилококков ( Staph, aureus - 2 шт., Staph, albus -3 шт.), 3 штамма кишечной палочки (E.coli), 2 штамма протея (Proteus vulgaris) и 3 штамма синегнойной палочки (Ps. aeruginosa) выделенных из смывов больной коньюнктиво- кератитом коровы.

Из представленных материалов таблицы 6, видно, что препарат линимент Сальвадоры персидской обладает выраженной антимикробной активностью в отношении к основным возбудителям коньюнктиво- кератита у коров. Судя по зоне задержке роста микробов, установленной методом диффузии в агар, стафилококки, синегнойная палочка, стрептококки, кишечная палочка, протей проявили о хорошую чувствительность к препарату (ЗЭР микробов варьирует в пределах 24-19,6 мм); грибы из рода Кандида оказались чувствительными к линименту (ЗЗР микробов = 15 мм); грибы аспергилы — слабо чувствительны к нему (ЗЗР микробов немногим менее 15 мм). Методом серийных разведений препарата мы установили, что его бактериостатическое действие проявляется , в основном, в разведении от 1:1024 до 1:256, т.е. МБсК=0,5-2,0 мг/мл, а бактерицидное действие — в разведении от 1:512 до 1:128, т.е. МБцК=1,0-4,0 мг/мл; фунгистатическое действие препарат проявляет в разведении от 1:2048 до 1:128, т.е. МФсК=0,25-4,0 мг/мл, а фунги-цидное — в разведении от 1:512 до 1:32,т.е. МФцК=1,0-15,6 мг/мл.

Следовательно, в среднем МБцК препарата содержится 0,07 мг/мл антисептических веществ, а в средней МФцК препарата — соответственно 0,24 мг/мл.

Таблица 6 - Антимикробная активность препарата линимент Сальвадоры персидской методом диффузии в агар

Тест - микробы ЗЗР микробов, мм Экспозиция бактерицидного и фун-гицидного эффекта препарата, мин

Стрептококки 24±0,50 5-40

Стафилококки 19,6±0,71 0-30

Кишечная палочка 20,6±0,43 0-45

Синегнойная палочка 20,0±0,30 10-60

Протей 21,6±0,25 5-50

Грибы из рода Кандида 15,1±1,20 15-60

Грибы из рода Аспиргиллюс 14,2±0,08 25-90

Примечание: Экспозиция губительного действия, устанавливалась методом серийных разведений препарата в разных его концентрациях.

По нашим наблюдениям, губительное действие препарата на основных возбудителей коньюнктиво - кератита в зависимости от концентрации его проявляется при их контакте в течение от 0 до 60 минут. Также установлено, что после 25 пассажей стафилококков, стрептококков, кишечной и синегнойной палочек, а также грибов из рода Кандида на питательных средах, содержащих суббактериостатиче-скую или субфунгистатическую концентрацию препарата, микрофлора оставалась чувствительной к линименту Сальвадоры персидской.

3.4.3. Определение резорбтивной способности и гидрофильных свойств линимента Сальвадоры персидской

Определение резорбтивной способности линимента Сальвадоры персидской и исследование её гидрофильных свойств проводили по методике предложенной А.Н. Турченко и Ю.И. Поповым (2004).

При морфологическом исследовании нижнего века коровы, на который наносили только краску родамин без препарата линимент Сальвадоры персидской, хорошо определялись все структурные компоненты.

Краску наносили на середину нижнего века. При визуальном осмотре нижнего века родамин обнаруживался лишь на поверхности. При этом он хорошо вытирался 70% раствором этилового спирта. На волосках, которые располагались на границе с эпидермисом краска хорошо удерживалась и спиртом не смывалась.

При гистологическом исследовании тканей нижнего века хорошо определялась микроскопическая структура ее отдельных компонентов.

Ткань в области века состояла из эпидермиса, дермы и подкожной клетчатки. В эпидермисе выделялись роговой, блестящий, зернистый, шиловидный и базаль-ный слои. Дерма была представлена рыхлой и плотной неоформленной соединительной тканью и единичными жировыми клетками. При этом, ни в каких структурах краска родамин не обнаруживалась, лишь в единичных волосяных луковицах (которые располагались на границе с эпидермисом) отмечались ее отложения.

Глубже располагался производящий слой основы кожи, который продуцирует мягкий трубчатый рог, представленный виде сосочков. В области века под основой кожи залегает довольно мощный подкожный слой, который состоит из переплетающихся между собой прочных эластических и коллагеновых волокон с про-

слойками жировой ткани, что обусловливает его упругость и рессорную функцию. В этом структурном компоненте краска родамин не обнаруживалась.

При исследовании нижнего века коровы, на которое наносили смесь, состоящую из препарата линимент Сальвадоры персидской и родамина, также хорошо отмечались все структуры.

При осмотре века снаружи краска не проявлялась, так как кожу перед осмотром также протирали 70%-ным раствором этилового спирта. Волоски, находящиеся на границе с эпидермисом имели стойкую красную окраску.

При гистологическом исследовании все структуры века имели четкую микроскопическую картину. При этом препарат подкрашенный родамином хорошо проникал через все слои эпидермиса (роговой, блестящий, зернистый, шиловидный, базальный), дерму подкожную клетчатку.

Наличие краски под основой кожи, где залегает довольно мощный подкожный слой, который состоит из переплетающихся между собой прочных эластических и коллагеновых волокон с прослойками жировой ткани, свидетельствовало о том, что препарат свободно проникал через волокна плотной и рыхлой соединительной ткани.

Зерна краски обнаруживали вокруг поверхностных сосудов , а также вокруг капилляров и альвеол.

Таким образом исходя из вышеизложенного, можно сделать вывод, что препарат линимент Сальвадоры персидской обладает хорошей способностью проникать через разные типы гистологических структур.

3.4.4. Изучение токсичности линимента Сальвадоры персидской

Для нахождения параметров острой токсичности препарата использовали метод Deichmann & Le Blans (1943), позволяющий использовать небольшое количество животных (8).

Каждую дозу вводили одному животному из интервала доз предложенного авторами: 550,800,1200,1500,1800,2000,3000 мг/кг.

В опыте участвовали крысы, которые были отобраны по методу пар-аналогов. Животным вводили определенную дозу препарата per os после чего за ними велось постоянное наблюдение.

За 4 часа до начала опыта кормление, и поение животных было прекращено. Выбранные дозы препарата вводились крысам внутрь в виде водного раствора при температуре +37°С, после чего они обратно помещались в клетки, и за ними велось постоянное наблюдение. Через два часа после применения препарата животным предоставляли свободный доступ к воде и пище.

В процессе проведения опыта было установлено, что после введения препарата животным №№ 6,7,8, у крыс проявлялось сильное беспокойство в течение 15-30 минут, которое затем переходило в угнетение. Через 3 часа после введения препарата отмечалась диарея. Спустя 5 часов, с момента введения линимента Сальвадоры персидской, у животного №8 наблюдали: клонические судороги, непроизвольное мочеиспускание, животное не отвечало на внешние раздражители и, через несколько минут, констатировали гибель животного.

Исходя из факта гибели подопытного животного № 8 не перенесшего дозу 3800мг/кг массы тела, и оставшегося в живых животного № 6 - 2000мг/кг массы тела по условию методики была выбрана средняя между двумя крайними дозами.

После предварительного нахождения LD50 доза 2000мг/кг живой массы была введена 10 крысам подобранных по принципу пар аналогов по полу и живой массе. С соблюдением всех условий, как в опыте по предварительному нахождению смертельной дозы. По результатам опыта установлена гибель 4 животных.

Доза 1800 мг/кг живой массы тела, не вызвавшая гибель является максимально переносимой дозой препарата при однократном его пероральном введении (LD0)

Доза 2000 мг/ кг живой массы - является средне смертельной дозой при однократном введении (LD50). Доза 3000 мг/кг массы тела является абсолютно смертельной LD(10o)

Субхроническую токсичность препарата изучали по методу Lim (1961).

Целью изучения субхронической токсичности является выявление избирательного влияния препарата на функциональное состояние органов, тканей и систем, а также способность его к кумуляции. Выявление кумулятивной способности препарата указывает на его способность

оказывать хроническое отравление. При многократном поступлении в организм вещество может накапливаться непосредственно в исходном виде или в виде метаболитов, либо вызывать суммирование патологических эффектов.

Субхроническую токсичность изучали на 30 белых крысах, подобранных по методу пар-аналогов, в течение 28 дней. Препарат задавался ежедневно в дозах от LD50 (2000мг/кг массы тела) по схеме представленной в таблице 7.

Дозу препарата вводили через зонд внутрижелудочно. За животными велось ежедневное наблюдение, учитывали их общее состояние и аппетит. Также проводились морфологические исследования крови перед каждым повышением дозы препарата. Гибель животных регистрировали на 16, 18, 19, 20, 22, 24, 26, 27 сутки от начала опыта.

Таблица 7- Субхроническая токсичность линимента Сальвадоры персидской

Номер пе- 1 II III IV V VI VII

риода

Сутки от 1-4 5-8 9-12 13-16 17-20 21-24 25-28

начала

опыта

Доли от 0,1 0,15 0,22 0,34 0,5 0,75 1,12

1Х>50

Доза от 200 300 440 680 1000 1500 2240

1Ао

Гибель (%) 0 0 0 3,3 20 10 10

Суммарная

доза за период (на 1 кг 800 1200 1760 2720 4000 6000 8960

массы тела)

Суммарная

доза (на 1

кг массы 800 2000 3760 6030 10030 16030 24990

тела)

В 4-й период погибло 3,3% животных - 1 крыса, на 16-е сутки. В 5-й период погибло 20% животных - 2 крысы на 18-е сутки, 3 крысы на 19-е сутки, 1 крыса на 20 -е сутки. В 6-й период погибло 10% крыс от общего числа крыс до начала опыта. 1 крыса погибла на 22-е сутки, 2 крысы на 24-е сутки. В 7-й период также погибло 10% животных. 2 крысы на 26-е сутки и 1 крыса на 27-е сутки.

ЬО50 при многократном скармливании препарата равна суммарной дозе препарата за 1-5 периоды опыта (800+1200+1760+2720+4000) = 10480 мг/кг массы тела животного.

Коэффициент кумуляции (Кк) при многократном применении препарата линимент Сальвадоры персидской рассчитываем по формуле Кагана Ю.С. и Станкевича В.В.(1964):

К(к)=1ЛЭ5о хроническая/ ЬО50 острая

Кк=10480мг/кг: 2000мп= 5,24

Коэффициент кумуляции равен 5,24, что относит препарат к 3-ей группе -средне токсичных препаратов (по Л. И. Медведю, 1964).

3.4.5. Исследование фармакологических свойств линимента Сальвадоры персидской

С целью комплексного изучения фармакологических свойств линимента Сальвадоры персидской были проведены тест-исследования противовоспалительного действия и регенеративных свойств изучаемого препарата.

Для выяснения противовоспалительного действия было сформировано 4 группы лабораторных животных: по 3 морские свинки в каждой группе; из них 2 опытные и 2 контрольные группы.

Животным первой группы после депиляции в области спины наносили три капли ксилола, который стеклянной палочкой в течение 2 минут втирали в кожу для вызывания дерматита. В этот же день, спустя один час, и в последующие дни на обработанный ксилолом участок кожи диаметром 10 мм наносили 3-4 капли линимента Сальвадоры персидской.

У животных второй опытной группы после депиляции в области спины вызывали термический ожог кожи диаметром 10 мм путем воздействия нагретого металлического предмета до 60-70°С. После этого, сразу же, и в последующие дни на пораженный участок кожи наносили несколько капель линимента Сальвадоры персидской.

Животным 3 и 4 группы, служившим контролем, экспериментальное воспаление вызывали также, как и у животных первой и второй опытной группы.

Полученные данные позволяют сделать заключение о том, что препарат обладает выраженным противовоспалительным действием.

Изучение влияния линимента Сальвадоры персидской на течение регенеративных процессов осуществляли в сравнительном аспекте модели экспериментально воспроизведенных инфицированных кожно-мышечных ран у 20 молодых белых крыс массой 80-100г, взятых из одних пометов и равномерно распределенных в опытную и контрольную группы. Им наносили кожно-мышечные раны без соблюдения правил асептики. На спине всех животных тщательно выстригали участок 2x2 см. Затем трафаретом (острыми краями пробочного пробойника) намечали контуры раны диаметром 10мм и вырезали глазными ножницами лоскут кожи и мышц.

Десяти опытным крысам на раневую поверхность наносили линимент Сальвадоры персидской, а 10 контрольным ихтиоловую мазь. После этого раны покрывали марлевой салфеткой, поверх которой накладывали лоскут марли, и ее края приклеивали к шерсти животного густым коллодием. Для более надежной фиксации повязки ее укрепляли бинтом. Перевязки проводили каждый день.

О ходе заживления экспериментальных ран судили по следующим показателям: время проявления грануляций в ране, закрытие дна раны грануляциями, качество грануляций, ход эпителизации состояние тканей вокруг раны. Как показали наблюдения, у животных опытной группы заживление ран (выполнение их грануляцией, исчезновение гиперемии, отечности и боли, эпителизация с образованием рубца) проходила в среднем на 6 дней раньше, чем у животных контрольной группы.

Полученные данные позволяют сделать заключение о том, что линимент Сальвадоры персидской благотворно влияет на регенеративные процессы, стимулируя их.

3.5. Лечение риккетсиозного конъюнктиво-кератита крупного рогатого скота на разных стадиях его развития

С целью определения сроков повторного введени5^линимента, мы провели исследования его концентрации в конъюнктиве век, роговице и камерной влаге здоровых и больных телят в разные сроки (табл.8).

Полученные данные свидетельствуют, что скорость накопления линимента Сальвадоры персидской и его концентрация, а так же время выведения препарата зависят от вида ткани и состояния организма животных (больные или здоровые).

Таблица 8 - Концентрация линимента Сальвадоры персидской в роговице, камерной влаге и конъюнктиве (п=5, М±ш)

Объект Время убоя с момента введения линимента Сальвадоры персидской (час)

6 12 24 36 48 72 84 96 108

о ч со Роговица (мкг/г) 21,1±0,3 36,5±0,6 38,7±0,7 37,1 ±0,4 28,3±0,3 17,5±0,3 12,3±0,4 5,4±0,2 0,5±0,2

Камерная влага (мкг/мл) 1,2±0,22 0,8±0,33 0,7±0,21 0,6±0,16 0,4±0,21 0,2±0,41 0,!±0,П - -

Конъюнктива (мкг/г) 32,3±0,3 28,6±0,2 27,4±0,7 22,1±0,3 18,6±0,5 12,8±0,2 6,4±0,48 4,1±0,12 -

Болььны Роговица (мкг/г) 26,4±0,7' 37,6±0,3 39,7±0,3 38,5±0,5 27,6±0,1 14,3±0,1* 6,1±0,3* 1,5±0,32 -

Камерная влага (мкг/мл) 1,4±0,12 1,2±0,20 0,8±0,1 0,5±0,32 0,3±0,22 0,2±0,13 0,1±0,14 - -

Конъюнктива (мкг/г) 31,8±0,2 28,6±0,3 23,5±0,3* 17,8±0,3* 12,6±1,7' з,3±0,72* 2,1±0,45 1,1±0,3< -

*- разница статистически достоверна, Р < 0,05

Через 24 часа после введения линимента нами была отмечена максимальная его концентрация в роговице как у здоровых (39,7 ±0,3 мкг/г), так и у больных (37,1±0,4 мкг/г) животных. Начиная с 6 часов и до суток, содержание линимента в роговице больных было выше, чем у здоровых животных. Через 48 часов после введения жидкой мази произошло значительное снижение концентрации линимента в роговице здоровых и больных животных, на 28,3±0,3 и 27,6±0,1 мкг/г соответственно. Во все последующее время содержание препарата в роговице больных было ниже по сравнению со здоровыми, а по истечении 4 суток он исчезал полностью. Снижение концентрации линимента у здоровых животных было более плавным. Так, через 108 часов после введения линимента Сальвадоры персидской он все еще оставался в роговице, а его концентрация была 0,5 ± 0,2 мкг/г. Максимальное содержание линимента в камерной влаге наблюдали через 6 часов после его введения. У больных животных этот показатель был 1,4±0,12 мкг/г, а у здоровых несколько ниже - 1,2±0,22 мкг/г. Через 108 часов у здоровых и через 84 часа у больных линимент в камерной влаге глаза уже не обнаруживали. В течение суток содержание препарата в камерной влаге глаз больных животных было выше, чем у здоровых, но через 36 часов произошло быстрое снижение его концентрации.

В конъюнктиве, как и в камерной влаге, наивысшая концентрация линимента наблюдалась через 6 часов после его введения, а с 12 часов началось постепенное снижение и к 96 часам его концентрация у здоровых животных была 4,1 ± 0,12 мкг/г. В дальнейшем линимент в конъюнктиве глаз у здоровых животных не обнаруживали. Что касается больных животных, то у них начиная с 12 часов происходило довольно быстрое снижение концентрации линимента в конъюнктиве глаза и к 96 часам его содержание было 1,1 ± 0,39 мкг/г, а через 96 часов после введения линимента он не выявлялся.

На основании полученных данных можно сделать закономерный вывод: у больных животных накопление препарата, как и его выведение, происходит быстрее, чем у здоровых. Так как по прошествии 96 часов после введения линимента Сальвдоры персидской обнаруживалось его наличие в роговице больных животных в концентрации 1,5 ± 0,32 мкг/г, то целесообразно говорить о его применении через такой промежуток времени.

Для того, чтобы определить эффективность линимента Сальвадоры персидской в сравнении с наиболее употребляемыми в хозяйствах края глазными лечебными плёнками, мы сравнили его с ГЛП с фуракрилином и новокаином, которые рекомендует применять Б.Н. Алтухов (1997), а так же с комплексным лечением (ретробульбарная новокаиновая блокада по В.Н. Авророву (1973) и 30% сульфа-цил-натриевая мазь).

Линимент Сальвадоры персидской в количестве 0,2-0,5 г вводили больным животным стерильной стеклянной палочкой под третье веко с кратковременным, легким нажатием на сомкнутые веки глаза, для его уверенной фиксации. Кратность введения для линимента и новокаина была 96 часов, а для плёнок с фуракрилином и новокаином - 84 часа.

Новокаиновая блокада проводилась 0,5% раствором новокаина по методу В.Н. Авророва (1973) один раз в три дня с соблюдением правил асептики и антисептики. При этом мы закладывали в конъюнктивальный мешок стеклянной глазной палочкой 30% сульфацил-натриевую мазь в количестве 0,2-0,5 г и легким массирующим движением пальцев через веки равномерно распределяли ее по всему

конъюнктивалыюму мешку и роговице. Такие манипуляции проводили до исчезновения клинических признаков болезни.

Нами было проведено два опыта. В первом мы сравнивали эффективность линимента Сальвадоры персидской и эффективность применения ретробульбарной новокаиновой блокады в комплексе с 30% сульфацил - натриевой мазью. Для этого было использовано 90 телят в возрасте от 3-х дней до года с разной степенью проявления риккетсиоза. Все животные были разделены на 6 групп, в каждой из которых находилось по 15 телят, 10 из них лечили линиментом Сальвадоры персидской и новокаином, а 5 - ретробульбарной новокаиновой блокадой по В.Н. Авророву и мазью. При подборе телят в каждую из 6 групп мы руководствовались тем, что каждая группа должна быть представлена одной из шести стадий развития болезни с учетом клинического проявления, характерного для каждой из этих стадий (табл.9).

Таблица 9 - Продолжительность лечения РКК (дни) у телят при использовании разных методов терапии (п=5, М±т)

Метод лечения Стадии болезни

1 2 3 4 5 6

Линимент Сальвадоры персидской с новокаином 2,43±0,09 4,15±0,23 7,38± 0,31 13,61±0,26 15,45±0,2* 17,11 ±0,54

Ретробульбарная новокаиновая блокада, 30% сульфацил-натриевая мазь 5,14±0,12 7,86±0,17 13,51±0,26 18,64±0,32 21,33± 0,4 24,22±0,76

*- разница статистически достоверна, Р < 0,05

Во втором опыте мы провели сравнение эффективности действия линимента Сальвадоры персидской, в сравнении с лечебными пленками с фуракрилином и новокаином. Подбор животных в группы осуществлялся также как и в первом опыте (табл.10).

Таблица 10 - Продолжительность лечения РКК (дни) у телят линиментом Сальвадоры персидской и ГЛП (п=5, М±т)

Наполнитель Стадии болезни

1 2 3 4 5 6

Линимент Сальвадоры персидской и новокаин 2,58±0,09 5,16±0,17 8,32±0,32 14,74± 0,3 16,1±0,22* 18,09±0,6*

Фуракрилин и новокаин 3,15±0,43 6,14±0,28 10,52±0,7 16,84±0,29 19,81±0,16 21,4±0,49

*- разница статистически достоверна, Р < 0,05

Для определения эффективности применения препаратов ежедневно проводился учет изменения состояния конъюнктивы, роговицы и общего состояния организма животных. Кроме того, мы учитывали интенсивность острых явлений, наличие инфильтратов, поверхностной и глубокой васкуляризации, начало просветления роговицы, ее эпителизации, рубцевание и величину образующихся рубцов на месте дефекта, продолжительность лечения и степень восстановления зрительной способности по общей ориентации животных в окружающей среде.

В первую группу мы отобрали телят, у которых отмечались слезотечение, светобоязнь, припухание краев век, серозные, а в некоторых случаях серозно-слизистые выделения из конъюнктивального мешка, болезненность и блефа-роспазм, волосы кожи век были увлажнены, а ресницы смочены и собраны в пучки. Конъюнктива гиперимирована, набухшая, ее сосуды умеренно инъецированы.Со стороны роговицы видимых изменений не наблюдалось, она оставалась гладкой, прозрачной, влажной и блестящей. При этом общее состояние животных оставалось практически неизменным. Лишь у отдельных телят наблюдали легкое угнетение, которое проявлялось замедленностью движения.

Эти животные, с клиническими признаками серозно-катарального конъюнктивита (1 стадия), довольно легко поддавались лечению. Так, ретробульбарная но-вокаиновая блокада проведенная 1 -2 раза с интервалом в 3 дня и ежедневное двукратное закладывание 30% сульфацил-натриевой мази в течение 3-5 дней давали положительный результат. Уже после однократной блокады у телят значительно снижалось количество истечений, резко уменьшалась болезненность век. После второй инъекции новокаина, как правило, клинические признаки серозно-катарального конъюнктивита исчезали.

Применение в эту стадию риккетсиоза линимента Сальвадоры персидской и новокаина значительно сокращало сроки лечения (в 1,5 - 2 раза) по сравнению с вышеописанной терапией. Уже после однократного введения линимента Сальвадоры персидской клинические признаки исчезали. ГЛП с фуракрилином и новокаином так же дали положительный лечебный эффект. Но по эффективности они уступали линименту Сальвадоры персидской с новокаином. Выздоровление наступало в среднем через 3,15±0,43 дня, что на 0,6 суток позже, чем при использовании испытуемого линимента Сальвадоры персидской.

Вторую группу животных мы подобрали с учетом признаков серозно-катарального конъюнктивита и эрозии роговицы (2 стадия). Учитывались и другие характерные изменения, такие как: мацерация и выпадение волос у внутреннего угла глаза, полное смыкание век. На роговице отмечалось появление небольших дефектов (размером 1-2 мм) разнообразной формы, величины и глубины. Животные вели себя беспокойно, отмечалось ухудшение аппетита, проявлялась светобоязнь.

На следующий день после первого введения линимента Сальвадоры персидской и новокаина общее состояние телят, с клиническими признаками эрозии роговицы, становилось удовлетворительным. Глазная щель была открыта, из конъюнктивального мешка имело место умеренное слизистое истечение. Конъюнктива век и глазного яблока была розово-красного цвета, бархатистая, блестящая. На месте эрозий - голубовато-дымчатое помутнение, дефект покрыт эпителием. На 2-3, реже на 4 день лечения у животных наблюдали значительное улучшение общего состояния. Оно проявлялось тем, что веки становились подвижными, безболезненными,

конъюнктива розово-красного цвета, гладкая, блестящая. Роговица также гладкая, блестящая, в редких случаях с точечными помутнениями.

Изменения при лечении комплексом «мазь - блокада» наступали значительно позже, лишь на 5-6 день лечения. Использование ГЛП с фуракрилином и новокаином давало общее улучшение на 3-4 день.

Третью группу животных с клеточной инфильтрацией роговицы (3 стадия) мы подбирали по следующим клиническим признакам. Сильно выраженный отек век и конъюнктивы, сопровождающийся гиперимией. Выделение из конъюнкти-вапьного мешка слизисто-гнойного экссудата.

Наблюдали ограниченные или диффузные молочно-белые с голубоватым оттенком помутнения в роговице, которые были наиболее интенсивны в центре, пе-рекорнеальную инъекцию сосудов в зоне лимба. У тдельных телят отмечалась поверхностная васкуляризация. Температура иногда была повышена на 1,0 - 1,5 °С.

Лечение животных с такими клиническими признаками линиментом Сальвадоры персидской и новокаином длилось от 4 до 8 дней (7,4± 0,3). Это на пять-шесть дней (6,1 суток) короче, чем при терапии «мазь - блокада» и на полтора - два дня (2,6 суток) короче, чем при использовании ГЛП с фуракрилином и новокаином.

При небольших инфильтратах (до 5 мм) после 2-3 дневной терапии линиментом Сальвадоры персидской и новокаином все признаки серозно-катарального конъюнктивита и клеточный инфильтрат исчезли. При более значительном распространении инфильтрата (до 2/3 поверхности роговицы) все эти признаки пропадали уже на 5-6 день лечения.

Четвертую группу телят со стадией созревания абсцесса (4 стадия) мы подбирали с учётом следующих клинических признаков: наличие обильного, слизисто-гнойного выделения из конъюнктивального мешка, склеенные экссудатом ресницы, а иногда и век, которые отличались сильной болезненностью при пальпации, повышенной местной температурой. На роговице были видны выпячивания, с ограниченной припухлостью, величиной от 3 до 6 мм желтоватого цвета разной интенсивности. Общее состояние животных было угнетенным, отмечалось снижение аппетита, вялая, неактивная жвачка, взъерошеность шерстного покрова. Температура тела была повышена на 1,5 — 2,0 °С. Зрительная способность больного глаза полностью нарушена.

При применении линимента Сальвадоры персидской с новокаином, выздоровление больных животных на стадии созревания абсцесса, наступало на 12-14 день лечения. Это на 5 - 6 дней раньше, чем от применения блокады и мази, и на 2 -3 дня быстрее по сравнению с использованием ГЛП с фуракрилином и новокаином. На 4-5 день от начала лечения у телят наблюдали значительное уменьшение признаков серозно-катарального конъюнктивита. К 7-8 дню происходило снижение отека, инфильтрации и васкуляризации роговицы. На месте рассосавшихся абсцессов оставались белые, несколько возвышающиеся, ограниченные, плотные помутнения.

Пятая группа животных с изъявлением роговицы была с интенсивно выраженными признаками предыдущих стадий, а кроме того, обнаруживали язвы роговицы различной величины от 6 до 15 мм в диаметре разной глубины, блефароспазм и отек век, значительное выпячивание сохранившихся тканей (5 стадия).

Поверхность конъюнктивы была гладкой, но резко отечной, покрасневшей с сильно инъецированными сосудами и со слоем гнойного экссудата. Сосуды склеры

кровенаполнены. Значительно повышена местная температура век, отмечалась сильная их болезненность. При глубоких и обширных поражениях роговицы, нередко были видны выпячивания в виде кератоконуса с язвой на его верхушке. Дно язв серо-желтое, покрыто гнойным отделяемым, края язвы неровные, серо-белого цвета. Роговица помутневшая. По лимбу появляется хорошо выраженная перекор-неальная инъекция, инфильтрация и поверхностная васкуляризация роговицы. Общее состояние животных угнетенное, аппетит снижен, шерстный покров матовый, взъерошен. Температура тела у телят повышена на 1,5 - 2,0 °С.

Лечение телят в этой стадии РКК линиментом Сальвадоры персидской и новокаином длилось от 15 до 16 дней, что на 6 - 7 дней быстрее лечения таких же больных мазью и блокадой, и на 3 - 4 дня короче лечения глазными пленками с фу-ракрилином и новокаином.

Продолжительность лечения сильно зависела от величины и глубины язв. Так, заживление малых язв в наших опытах наступало уже на 3 - 7 сутки, исчезали и признаки серозно-катарального конъюнктивита. Уменьшался отек, исчезала инфильтрация, поверхностная васкуляризация и перикорнеальная инъекция. Дефекты роговицы находились в стадии эпителизации. У основной массы животных (77,8%) к этому времени наступало полное просветление роговицы. Описанные выше изменения, при лечении больных с большими язвами наступали лишь на 9-15 день с начала терапии. При лечении мазью и блокадой, особенно животных с большими язвами, полной регенерации поврежденной роговицы не наступало. Как правило, впоследствии оставались стойкие помутнения роговицы на месте бывшей язвы в виде довольно грубых, обширных рубцов размером от 2 до 6 мм.

Последняя, шестая группа состояла из животных с рубцеванием роговицы (шестая стадия). В ней были представлены телята, у которых были отмечены следующие клинические признаки: со стороны конъюнктивы и роговицы затухали острые воспалительные явления, которыми характеризовались предыдущие стадии, прекращалось слезотечение, конъюнктива оставалась слегка гиперемирован-ной, отсутствовала припухлость век, болевая реакция, наступало просветление роговицы, улучшение общего состояния животных. Глазная щель полностью раскрывалась, а блефароспазм отсутствовал. Характерным для этой стадии болезни являлось наличие рубца на роговице.

Рубец, образовавшийся на месте язвы был плотной консистенции, серовато-беловатого цвета, во многих случаях он выступал над поверхностью роговицы. Иногда к рубцу подходили несколько мелких, но хорошо заметных сосудов. Размеры рубца напрямую связаны с тем, какая им предшествовала язва.

Лечение этой группы животных проводилось с целью сокращения срока рубцевания и минимального образования рубцовой ткани в роговице. Результатом применения линимента Сальвадоры персидской с новокаином было рассасывание небольших рубцовых помутнений на 16-18 сутки. У животных с обширными рубцами, после больших язвенных поражений, рубцовая ткань рассасывалась не полностью, но наступало просветление значительной части роговицы (около 3/5), что обеспечивало животному частичное восстановление зрительной способности.

Лечение животных с 6 стадией РКК ГЛП с фуракрилином и новокаином заканчивалось на 20 - 22 сутки, а блокадой и мазью завершалось только частичным просветлением роговицы лишь на 23 -25 сутки.

Таким образом, предложенный нами линимент Сальвадоры персидской оказался эффективным в борьбе с риккетсиозом на разных стадиях его проявления.

Сравнительные данные сроков клинического выздоровления в зависимости от применяемого метода лечения и стадий болезни представлены в таблицах 9 и 10. Из них видно, что лучший результат лечения на всех стадиях риккетсиоза был получен от применения линимента Сальвадоры персидской и новокаина.

На начальных этапах болезни (1-3 стадии) хороший результат был отмечен и при использовании лечебных пленок с фуракрилином и новокаином, сроки выздоровления при их применении были лишь на 2-3 дня продолжительней, чем при лечении линиментом Сальвадоры персидской.

Продолжительность терапии РКК ретробульбарной новокаиновой блокадой по В.Н. Авророву и 30% сульфацил-натриевой мазью была в 2-2,5 раза больше, чем при лечении линиментом Сальвадоры персидской и ГЛП с фуракрилином.

Другая ситуация сложилась в период абсцедирования и изъязвления роговицы. Применение линимента Сальвадоры персидской и новокаина на этих стадиях болезни сокращало сроки лечения на 6 - 7 дней по сравнению с комплексом «мазь -блокада» и на 3-4 дня относительно ГЛП с фуракрилином и новокаином.

Сокращение сроков лечения больных с 4 - 6 стадиями риккетсиоза после применения линимента Сальвадоры персидской и новокаина можно считать успешным результатом нашего исследования, учитывая и то, что линимент оказался эффективным и на других стадиях болезни.

3.6. Профилактика риккетсиозного конъюнктиво-кератита крупного рогатого скота

С целью предотвращения развития РКК крупного рогатого скота необходи-моучитывать все факторы, определяющие возникновение, развитие и характер его течения.

Особую роль в организации кормления отводят насыщенности кормов каротином и витамином А..

Для профилактики гиповитаминоза А необходимо осуществлять контроль за сбалансированным кормлением по всем питательным и особенно биологически активным веществам (каротин и др.) и следить за состоянием здоровья животных.

Изучая особенности течения данной офтальмопатии на разных фермах обследуемого хозяйства с учётом состояния микроклимата в помещениях нами было отмечено, что при избытке вредных газов, повышения запыленности и бактериальной обсемененности, которые наблюдали на МТФ №1, развитие РКК у крупного рогатого скота имела тенденцию к быстрому охвату находившихся в помещениях животных и более тяжелому течению заболевания.

Терапию больных животных необходимо проводить предложенными нами или другими авторами способами. После полного курса лечения и отсутствия у них клинических признаков РКК в течение 30 дней они должны содержаться отдельно. В этот период им трехкратно применяют лечебные мази (линименты) или пленки.

Условно здоровым животным следует провести курс профилактических обработок. Для этого мы рекомендуем использовать линимент Сальвадоры персидской и новокаин, а так же глазные лечебные плёнки, которые вводят в конъюнкти-вальный мешок обоих глаз один раз в месяц зимой и 2 раза в месяц в весенне-летний период. Также можно применять различные глазные мази (30% сульфацил-натриевая, 5-10% синтомициновая, 1% тетрациклиновая, 0,25% оксолиновая) которые с профилактической целью закладывают 1 раз в 10 дней.

С целью борьбы с вышеуказанной офтальмопатией, большое значение имеет разрыв эпизоотической цепи. Беря это во внимание, мы использовали метод санации помещений в присутствии животных аэрозолем однохлористого йода. Для этого на один литр однохлористого йода мелко нарезается алюминиевая проволока. Все это помещается в оцинкованное ведро и привязывается к потолку. Этого раствора хватает на 100 м3. Экспозиция составляет 10-15 минут.

Учитывая широкое распространение возбудителя в помещениях и локализацию его на коже и слизистых оболочках животных, мы ежедневно в течение семи дней применяли этот способ санации, затем выдержали десятидневный интервал и повторили эту обработку еще раз.

Аэрозольная обработка проводилась в помещении, где находилось на привязи 120 телят 5-7 месячного возраста у 12 из которых отмечены клинические признаки РКК.

Наблюдения за животными в процессе обработки показали, что уже после 23 кратной обработки у больных с первой и второй стадиями болезни клинические признаки уменьшались или исчезали полностью.

Строгое соблюдение противоэпизоотических мероприятий, активная борьба с мухами, бродячими собаками, синантропными грызунами, использование с профилактической целью линимент Сальвадоры персидской или ГЛП с новокаином, а так же санация помещений в присутствии животных аэрозолем однохлористого йода, сводит к минимуму вероятность возникновения РКК.

ВЫВОДЫ

1. В курируемых хозяйствах риккетсиозный конъюнктиво-кератит диагностируется у 32% телят разного возраста и породы. Наиболее часто и тяжелее болеют телята в возрасте от 3 дней до года.

2. Главным образом, клинические признаки болезни проявлялись острым конъюнктиво-кератитом с поражением правого глаза 49,5 % случаев, левого — 38,6 %. Оба глаза поражались у 11,9 % больных телят. На распространение риккетсиоза глаз среди телят разного возраста оказывает большое влияние уровень общей неспецифической резистентности организма.

3.Линимент Сальвадоры персидской, оказался препаратом средней токсичности. Доза 1800 мг/кг живой массы тела, не вызывает гибель и является максимально переносимой дозой препарата при однократном его пероральном введении (LD0). 6. Доза 2000 мг/ кг массы тела - является средне смертельной дозой при однократном введении (LD50). Доза 3000 мг/кг массы тела является абсолютно смертельной LD(]0r>), коэффициент кумуляции равен 5,24, что относит препарат к 3-ей группе - средне токсичных препаратов.

4. При изучении всасывающей способности и гидрофильных свойств линимента Сальвадоры персидской установлено, что данный препарат обладает хорошей способностью проникать через разные типы гистологических структур, а также благоприятно воздействует на эпидермис, улучшая его эластичность. Линимент Сальвадоры персидской обладает высокой антимикробной активностью в отношении основных возбудителей коньюнктиво-кератитов у коров. Бактериостатическое действие проявляется , в основном, в разведении от 1:1024 до 1:256, т.е. МБсК=0,5-2,0 мг/мл, а бактерицидное действие — в разведении от 1:512 до 1:128, т.е. МБцК=1,0-4,0 мг/мл; фунгистатическое действие препарат проявляет в разведении

от 1:2048 до 1:128, т.е. МФеК=0,25-4,0 мг/мл, а фунгицидное — в разведении от 1:512 до 1:32,т.е. МФцК= 1,0-15,6 мг/мл.

5.Линимент Сальвадоры персидской и новокаин оказывают большую терапевтическую эффективность относительно ГЛП с фуракрилином и новокаином, и в большей степени первый эффективнее сочетанного применения ретробульбарной новокаиновой блокады в сочетании с 30% сульфацил-натриевой мазью. Максимальное содержание линимента Сальвадоры персидской в конъюнктиве и камерной влаге было через 6 часов после введения жидкой мази, а в роговице - через 24 часа. Минимальное количество линимента Сальвадоры персидской выявилось: в роговице - через 108 часов (контроль) и 96 — (опыт); в конъюнктиве - через 96 и 96 часов; в камерной влаге - через 96 и 84 часа соответственно.

6. Сокращение сроков лечения больных с 4 - 6 стадиями риккетсиоза после применения линимента Сальвадоры персидской и новокаина можно считать успешным результатом нашего исследования, учитывая и то, что линимент оказался эффективным и на других стадиях болезни приводя к выздоровлению животных на 2 - 6 дней раньше в сравнении с другими способами лечения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. При диагностике, лечении и профилактике риккетсиозного конъюнктиво-кератита крупного рогатого скота следует использовать комплекс эпизоотоло-гических, клинических и лабораторных методов с учетом локализации и распространения возбудителя болезни.

2. С лечебной целью линимент Сальвадоры персидской с новокаином следует вводить в конъюнктивальный мешок или под третье веко больного глаза через каждые 4 дня. С профилактической целью линимент Сальвадоры персидской рекомендуем применять каждые 15 дней в весенне-летний период и 1 раз в месяц осенью и зимой. Для профилактики риккетсиозного конъюнктиво-кератита крупного рогатого скота следует проводить санацию помещения методом аэрозольной обработки однохлористым йодом в присутствии животных и отсутствии обслуживающего персонала.

3. Основные положения диссертации могут быть использованы при написании учебных пособий, учебников, монографий, диссертаций, чтении лекций по офтальмологии, микробиологии, эпизоотологии среди студентов факультетов ветеринарной медицины ВУЗов и колледжей.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Дрожжина, A.C. К вопросу распространения и этиологии риккетсиозного ко-ньюнктиво - кератита крупного рогатого скота /A.C. Дрожжина //Эффективное животноводство. - 2012. - № 10 (84). - С. 18 - 19.

2. Дрожжина, A.C. Применение гидрофильной мази и изучение её влияния в эксперименте /М.О. Мергани Хасан, A.C. Дрожжина// Эффективное животноводство. - 2009. - № 3 (40). - С. 26 - 27.

3. Дрожжина, A.C. К вопросу о динамике обмена веществ при использовании средств неспецифической терапии / И.А. Родин //Материалы научной конференции. - Краснодар. - 2013. - С. 115 - 122.

4. Дрожжина, A.C. Этиология коньюнктиво - кератита в ОАО Агроком-нлекс «Гиагинский им. Ю.Х. Тхайцухова» и ОАО ГПЗ «Гулькевичский» / И.А. Родин //Ветеринария Кубани. - 2013. - № 4. - С. 5 - 6.

о

Подписано в печать 22.09.2013г. бумага офсетная

Формат А5 60x84 1/16 Печать цифровая Усл. печ. л. 1,0 тираж 100 экз.

Заказ № 1860

Типография «Световод» 350004, г. Краснодар ул. Калинина 134/2

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Дрожжина, Анастасия Сергеевна, Краснодар

ГОСУДАРСТВЕННОЕ НАУЧНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ КРАСНОДАРСКИЙ НАУЧНО - ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК

04201 364165

На правдз4-р^ковщси Дрожжина Анастасия Сергеевна а

ФАРМАКОТЕРАПИЯ И ПРОФИЛАКТИКА КОНЬЮНКТИВО -КЕРАТИТА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

06.02.04 - ветеринарная хирургия

Диссертация на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор В.А. Антипов

Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор И.А. Родин

Краснодар - 2013

и

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ..................................................................................4

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.................................................................8

1.1. Распространение и этиология риккетсиозного конъюнктиво-кератита крупного рогатого скота...................................................................8

1.2.Патогенез и клиническая картина офтальмопатий.............................16

1.3. Диагностика, лечение и профилактика болезней глаз........................22

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ................................31

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.........................35

3.1. Распространение риккетсиозного конъюнктиво-кератита среди крупного рогатого скота................................................................'..35

3.2.Патогенез болезни.....................................................................40

3.3. Диагностика риккетсиозного конъюнктиво-кератита крупного

рогатого скота..............................................................................42

3.4.Экспериментальные и клинические исследования по разработке, применению и изучению свойств линимента Сальвадоры персидской для лечения

коров, больных риккетсиозным конъюнктиво - кератитом...........................44

3.4.1. Разработка, получение и свойства линимента Сальвадоры персидской...........................................................................................46

скои.............................................................................

3.4.3. Определение резорбтивной способности и гидрофильных линимента Сальвадоры персидской.....................................

свойств ..........58

3.4.4. Изучение токсичности линимента Сальвадоры персидской...............61

3.4.5. Исследование фармакологических свойств линимента Сальвадоры персидской......................................................................................65

3.5.Лечение риккетсиозного конъюнктиво-кератита крупного рога

того скота на разных стадиях его развития..........................................68

3.6.Профилактика риккетсиозного конъюнктиво-кератита крупного рогатого скота...............................................................................................90

4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.............................96

5. ВЫВОДЫ..............................................................................107

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.............................................109

7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ..........................................................110

ПРИЛОЖЕНИЯ..........................................................................136

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Наиболее часто, среди болезней, поражающих глаза животных, встречается инфекционный конъюнктиво - кератит крупного рогатого скота, возбудителем которого является Rickettsia conjunctive bovis, относящаяся к семейству Rickettsicae. В последние годы данная офтальмопа-тия во многих хозяйствах Российской Федерации имеет довольно широкое распространение (В.А. Антипов, 1992; В.А. Черванев, 1993, 1994; Б.Н. Алтухов, 1997; Р.И. Ситдиков, 2000; И.А. Золочевский, 2002; М.Ю. Лебедев, 2002; Y. Rehasek, V. Lisak, 1989; J.A. Smith, L.W. George, 1995 и др.), поэтому она наносит значительный экономический ущерб, как в нашей стране, так и за рубежом (В.Н. Авроров, 1973; А.Ф. Русинов, 1986; Е.П. Копенкин, 2000; Е.П. Щербакова, 2013; Y.R. Saunders, 1975; A.N. Rilliger, 1978 и др.). Около 30% переболевших животных остаются слепыми, столько же теряют зрение на 50 % и более (А.А. Габбасов, 2000; С.М. Воробьев, 2001; Н.Н. Даричева, 2002; И.З. Зарипов, 2002; И.А. Родин, 2013).

В тоже время необходимо отметить недостаточную разработку лечебно-профилактических мероприятий. Вследствие этого разработка и внедрение новых препаратов и методов терапии больных животных является актуальной.

Настоящая работа посвящена проведению исследований по разработке оптимальной лекарственной формы и определению режимов применения нового лечебного средства наружного применения при риккетсиозном коньюнктивио - кератите у крупного рогатого скота. Данная тема является разделом общей тематики лабораторий ГНУ Краснодарский научно - исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии п о заданию 4.12 (№ госрегистрации 01910049842).

Цель и задачи исследования. Основная цель настоящей работы состоит в том, чтобы на основе различных сторон этиопатогенеза, усовершенствовать лечебно - профилактические мероприятия при риккетсиозном

коньюнктиво - кератите у крупного рогатого скота, путём разработки нового лекарственного средства наружного применения. Исходя из цели исследования, были поставлены следующие основные задачи:

• уточнить некоторые аспекты этиологии, патогенеза и клинического проявления коньюнктиво - кератита у коров в Краснодарском крае;

• изучить распространение риккетсиозного конъюнктиво-кератита у крупного рогатого скота в возрастном аспекте внекоторых хозяйствах края;

• разработать новый, эффективный, экологически безвредный препарат для терапии риккетсиозного конъюнктиво-кератита у крупного рогатого скота и провести фармако-токсикологическую оценку данного препарата;

• определить эффективность предложенных методов лечения инфекции -онной патологии глаз у телят в зависимости от стадий проявления;

• разработать и внедрить в практику животноводческих хозяйств новый комплексный метод лечения телят больных риккетсиозным конъюнк-тиво-кератитом.

Научная новизна. Впервые в условиях юга России проведена разработка и дана фармакотокси-кологическая оценка и научное обоснование применения жидкой мази - линимента Сальвадоры персидской при риккет-сиозном конъюнктиво-кератите у крупного рогатого скота в сравнительном аспекте с другими препаратами, применяемыми при вышеуказанной офталь-мопатии.

Теоретическая и практическая значимость. Разработана схема комплексного лечения при риккетсиозном конъюнктиво-кератите у телят.На основании проведенных исследований предложен новый эффективный препарат - линимент Сальвадоры персидской для лечения риккетсиозного конъюнктиво-кератита у крупного рогатого скота.

Основные положения выносимые на защиту:

Распространение и этиопатогенез риккетсиозного коньюнктиво - кера-

тита в некоторых хозяйствах края. Комплексный метод лечения коров больных вышеуказанной офтальмопатией. Диагностика и клинические исследования у коров при конъюнктиво-кератите. Фармако-токсикологическая оценка нового эффективного препарата для лечения телят больных риккетсиоз-ным конъюнктиво-кератитом.

Объект и предмет исследования. Объектом исследования является крупный рогатый скот, предметом исследования линимент Сальвадоры персидской, предназначенный для лечения телят больных риккетсиозным конь-юнктиво - кератитом.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на ученых советах Краснодарского научно - исследовательского ветеринарного института в течение 2010 - 2012 гг., на международной научно - практической конференции «Актуальные проблемы современной ветеринарии», посвящённой 65-летию ветеринарной науки Кубани (г. Краснодар - 2011г.), на международной научно - практической конференции «Опыт международного сотрудничества в области экологии, лесного хозяйства, ветеринарной медицины и охотоведения» посвящённой 90 - летаю со дня образования Кубанского государственного аграрного университета (г. Краснодар - 2011), на международной научно-практической конференции, посвящённой 35-летию факультета ветеринарной медицины Кубанского государственного аграрного университета (г. Краснодар -2009г.).

Публикации. Основные материалы диссертации опубликованы в 4-х печатных работах, в том числе одна в рецензируемом издании, рекомендованном ВАК России - «Ветеринария Кубани»

Структура и объем диссертационной работы. Диссертация изложена на 136 страницах машинописного текста в компьютерном варианте и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследований и их обсуждения, выводов, практических предложе-

ний, библиографического списка и приложений. Список литературы включает 257 источников, в том числе 102 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 11 таблицами, 6 рисунками,7 графиками.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Распространение и этиология риккетсиозного конъюнктиво-кератита крупного рогатого скота

Риккетсиозный конъюнктиво-кератит (РКК) охватывает многие страны мира, особенно те регионы, в которых широко применяются современные промышленные технологии ведения животноводства. Это связано с содержанием большого количества животных на малых площадях. Такая технология производства облегчает возбудителю болезни поражать многих восприимчивых животных в стаде, а хорошо развитые межхозяйственные связи дают возможность сравнительно легко распространяться РКК на значительные территории. Доказательством этого является, то, что Z. Seguljev, В. Vukovic, S. Stefano vie et al. (1988) выявили случаи риккетсиоза на трех фермах крупного рогатого скота в области Тришебонь (Чехословакия), a J. Vosta, I. Rehacek, V. Lisak (1989) зарегистрировали РКК среди телят в разных районах страны.

Риккетсиозный конъюнктиво-кератит представляет серьезную проблему во многих странах дальнего и ближнего зарубежья. Не является исключением и Российская Федерация. В Татарстане по данным В.А. Ложкевича (1958) поражено до 75 % крупного рогатого скота. По данным Э.Д. Иманова (1961), в среднем по республике Киргизстан процент пораженных животных был равен 8%, а в отдельных регионах колебался от 27,4 до 50%. Л.Д. Васильева (1964), исследуя поголовье крупного рогатого скота в Ленинградской области установила, что в среднем поражено 1,4% всех животных, иногда процент заболевших доходил до 24,4%.

Распространение РКК с охватом большого количества восприимчивых животных прогрессирует с каждым годом. В Новой Зеландии с 1979 года было зарегистрировано увеличение заболевших РКК. Из 183 хозяйств болезнь установлена в 29, а уровень инфицирования составил 15,9% (R. Harris, Т. Cooper, I. Steffert, 1980). В Швеции на острове Южный Эланд болезнь, встречалась до 1979 года спородически, а в 1980 году получила широкое распространение. По данным S. Winso, N. Carlsson, G. Widigs (1980) было поражено

до 90% всех животных.

В Австралии с 1975 по 1979 год в среднем, было поражено 53,8% стада, а в штате Новый Южный Уэльс 96% (D.H. Slotter, М.Е. Edwa, G.E. Wilox et al., 1982).

J. Wedder и L. Selbi (1981) при исследовании стад животных мясного направления в США свидетельствуют, что в 53-64% из них ежегодно появляются ИКК, а уровень инфицирования поголовья составляет 3-5%. Болезнь регистрируется не только у домашних животных, но и у диких. Так, зимой 1988-1989 гг. у муфлонов во Франции (С. Sarrazin, I. Oudor, М. Prave, et al., 1990), а в 1985-1988 гг. в Польше, у свободно обитающих животных (зубры и 70 видов дичи) были выявлены антитела к Coxiella burned. В естественных условиях РКК болеют лошади, овцы, козы, свиньи, птицы и другие виды животных. Наиболее восприимчивы к нему крупный рогатый скот, особенно молодняк с 3-х месячного возраста до 1 года (А.Ф. Русинов, 1965; М.В. Пла-тохин, В.И. Захаров, P.C. Алахвердиев, 1968; М.В. Плахотин, P.C. Алахвер-диев Е.П. Копенкин, 1971; В.А. Черванев, Л.П. Трояновская, 1994; В.Р. Маг-mion, M.G. Stoker, 1958; P.I. Punch, D.H. Slatter, 1984; P. Merlin 1987). Чувствительность животных к инфекции зависит от породы (П. Мингев, В. Желев, В. Костов, 1962). Наиболее восприимчивы герефорды, шортгорны, голштины и джерсеи, помесный скот болеет реже (I.E. Frisch, 1975; G.R. Scott, 1976).

Резервуаром реккетсий в природе являются: европейский суслик, серые крысы, домашние мыши и многие другие животные (Н.К. Токаревич, 1979; F.R. Adinanti, E.H. Lennette, I.P. Winn et al., 1953; D. Combiescu, 1957).

Болезнь чаще поражает молодых животных. У взрослых она диагностируется реже и протекает в доброкачественной форме (Н.И. Кереев, 1965; В.Н.Авроров, 1973; P.I Punch; D.H. Satter, 1984; P. Merln, 1987). По данным И.А. Каракулова, В.Д. Борисова (1966) взрослые животные являются основным источником риккетсиоза. Несмотря на то, что болезнь регистрируется круглый год, все же чаще она проявляется в весенне-летний период. В это время РКК принимает форму энзоотии, охватывает до 72 % восприимчивого

поголовья (В.Н. Авроров, 1973; D.E. Hyghes, Ct.W. Pugh.T.I. McDonald, 1965; W.T. Hybbert, G.I. Hermann, 1970; A. Killinger, M.E. Mansfild, G.E. Ricketts, 1977), в некоторых случаях, среди молодых животных заболеваемость достигает 90% (А.Ф. Русинов, 1986; В.А. Черванев, 1993; B.C. Михайлович, 2001; H.A. Золо-чевский 2002; P. Merlin, 1987).

При выгульной содержании скота трансмиссивный путь заражения является основным В.Н. Биклемишев, 1955; Ю.С. Балашов, 1971; С.С. Scheparol, 1947). После появления больных животных внутри стада ведущую роль приобретают контактный, воздушно-капельный и алиментарный пути заражения (П.Ф. Здродовский, 1955; I.E. Smadel, 1959; Е. Sadesku, 1981).

Активность эпизоотического процесса протекает значительно быстрее при контактном и воздушно-капельном путях заражения. (Н.И. Федорова, 1968; P.I. Huebner, G.A. Bell, 1951). В.А. Черванев (1993) считает, что нельзя отрицать и внутриутробного инфицирования сформировавшегося плода. W. Erwerth, G. Herman, V. Bretscheider (1989). Говорят об этом же. Они исследуя абортированный плод коровы, выявили в нем риккетсии, а Югославские специалисты N. Bajalon, A. Nevjestic, I. Sola (1990) выделили их из абортированного плода козы.

После аборта у 19,4% коров имел место самый высокий титр антител к риккетсиям. Среди животных с задержанием последа и клинической формы мастита положительная реакция на риккетсиоз была снижена. Она отмечена соответственно у 10,9% и 10,2% коров (В. Vidic, В. Mihajlovic, M. Galic, 1990).

Основными факторами передачи являются молоко, вода, мясо, шерсть, корма, воздух помещений. Не маловажное место в распространении болезни занимают мухи и другие насекомые (А.Ф. Русинов, 1994; I.I. Arends, R.E. Wright, P.B. Barto et al., 1984; PJ Punch, D.H. Slotter, 1984; P. Merlin, 1987).

Экономический ущерб от PKK очень значителен. Он складывается из снижения молочной продуктивности коров, прироста живой массы тела телят, преждевременной потери племенной и хозяйственной ценности, вынуж-

денной выбраковки больных и переболевших животных, в связи с частичной или полной потерей зрения (В.А. Поляков, Е.А. Гульянс, Ш. Турахсджаев, 1975; Н.С. Островский, Ю.А. Морозов, А.Т. Иванеев, 1978; К. Paska, L. Sejru-cek, 1956).

Удои у больных животных снижаются на 50%, а прирост массы тела у молодняка - на 31 — 37% (М.В. Плахотин, В.И. Захаров, P.C. Алахвердиев, 1966; М.В. Плахотин, P.C. Алахвердиев, Е.П. Капенкин, 1971).

По данным S. Winso, N. Carlosson, G. Widigs (1980) в Швеции уменьшение прироста массы телят при поражении обоих глаз достигает 33 кг/гол. В Австралии экономический ущерб наносимый болезнями глаз крупного рогатого скота составляет более 22 млн. долларов в год (D.H. Slatter, М.Е. Edwards, С.Е. Wilcoxetal.,1982).

По данным В.А. Черванева (1993) во время энзоотии РКК у больных телят голштино-фризской породы средне суточный прирост массы тела был ниже на 56,9% относительно клинически здоровых животных. Хозяйства вынуждены были преждевременно сдавать на мясокомбинат от 58,7% до 61,1% больных телят, лечение которых было не рентабельно.

Анализ данных отечественной и зарубежной литератур показывает, что РКК является широко распространенным заболеванием, которое представляет серьезную проблему для животноводства во всем мире и наносит хозяйствам значительный экономический ущерб.

Массовые заболевания глаз среди домашних животных известны очень давно. Еще в конце XVII столетия на территории Западной Европы они были описаны Хузардом и Конветом, а позже Шеньо (1827) и Ван Бенеденом (1845). Заболевание глаз со сходными признаками чаще всего отмечались у крупного рогатого скота, затем у овец, коз, свиней, лошадей, а из диких животных у горной серны. Заболевание отмечали на территории Франции, Австро-Венгрии, Германии, Швеции, Северной Америки и России. Они имели массовый и явно контагиозный характер и в течение короткого промежутка времени охватывали значительное поголовье скота, распространялись на жи-

вотных соседних населенных пунктов и даже регионов. Не смотря на это возбудителя этих болезней долгое время найти не удавалось (В.А. Черванев, 1997).

Сведения о массовых заболеваниях глаз у крупного рогатого скота, особенно у молодняка, встречаются в работах A.B. Вольфа (1890) и В. Дом-брови-ча (1892), описываются как «Заразный конъюнктивит и кератит» или «Повальное заболевание глаз» (В. Бенкевич, 1900; А. Башкирцев, 1901), рик-кетси-оз конъюнктивы (J.Coles, 1931).

Выржиковский (1893) писал, что развитие болезни всегда начинается с конъюнктивы век и лишь за тем в патологический процесс вовлекается роговица. К сожалению и более 100 лет спустя после данного сообщения в научных и литературных источниках пишут «Керато-конъюктивит» (В.Г. Борзен-ков, 1963; М.В. Назаров, 1984; А.Ф. Русинов, 1986; Е.П. Копенкин, 2000; Р. МегПпД987). Хотя давно следовало бы писать конъюнктиво-кератит (В.А. Черванев, 1989, 1993, 1997; В.А. Черванев, O.A. Сапожкова, С.М. Панинский, 1999).

Инфекционные заболевания глаз у продуктивных животных были установлены в Голландии (J. Poels, 1917), в Канаде (LA. Allen, 1919), в Австралии (W.I. Beveridge, 194