Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Изучение фармако-токсикологических свойств препарата дипромоний-М

ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Изучение фармако-токсикологических свойств препарата дипромоний-М"

На правах рукописи

ШАХ-МЕЛИКЬЯН ТАТЬЯНА АНТРАНИКОВНА

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ПРЕПАРАТА ДИПРОМОНИЙ-М

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

1 5 MAP 2012

Краснодар - 2012

005013540

005013540

Работа выполнена в ГНУ Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, член- корреспондент РАСХН профессор, заслуженный деятель науки Российской Федерации Антипов Валерий Александрович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук

Жолобова Инна Сергеевна

доктор ветеринарных наук, профессор Никулин Иван Алексеевич

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет»

Защита диссертации состоится «£_» ОлЬЬсСЛ 2012г. в_^_часов, на заседании диссертационного совета Д 220.058.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, г. Краснодар, ул. КалининаДЗ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» (350044, г. Краснодар, ул. КалининаДЗ).

Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ» - http://www.kubsau.ru «_»_2012 г. и официальном

сайте ВАК РФ - http://www.vak.ed.gov.ru.

Автореферат разослан «_»_2012 г.

Учёный секретарь диссертационного совета,

И. А.

доктор ветеринарных наук, профессор

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время одной из проблем животноводства является рост числа гепатопатий. Печень - как центральный орган процессов метаболизма, обмена ряда гормонов, витаминов, ферментов и микроэлементов, нейтрализации эндогенных и экзогенных токсинов, часто не выдерживает функциональной нагрузки, вследствие чего развиваются гепа-тодистрофические процессы (Уша Б.В., 1979; Байматов В.Н., 2000; Кузнецов Н.И. и др., 1999, 2000). Поэтому, в практике ветеринарной медицины нормальное состояние обмена веществ и функции печени в организме во многом определяются применением гепатопротекторных препаратов. К сожалению, на сегодняшний день, несмотря на обширный арсенал современных гепато-защитных средств, поиск, разработка и внедрение в ветеринарную практику новых гепатопротекторов продолжает оставаться актуальным. Это обусловлено тем, что разработка терапии, направленной на восстановление утраченных функций печени, оставляет актуальной потребность в препаратах, обладающих эффективными фармакологическими свойствами, низкой токсичностью и незначительным побочным действием (Оковитый C.B. и др., 2010; Анохин Б.М., 1999; Кузьминова Е.В., Семененко М.П. и др., 2011). Поэтому, важным свойством современных гепатопротекторных терапевтических средств является способность проявлять широкий спектр фармакологической активности, включая нормализацию метаболических процессов, детоксика-ционное, мембраностабилизирующее и антиоксидантное действие.

Одним из таких препаратов является дипромоний (диизопропиламмо-ния дихлорацетат), вещество, по химической природе и биологической активности имеющее элементы сходства с пангамовой кислотой и обладающее гепатопротекторными свойствами (Никулин И.А., Кузьнецов Н.И., Кудинова H.A., 2004).

Одной из технологических стадий производимого ранее в промышленном масштабе препарата дипромоний был гидролиз этилового эфира дихло-руксусной кислоты. Технология получаемого в ООО «Поливит» (г. Уфа) дии-зопропиламмония дихлорацетата исключает стадию гидролиза. Продукт получил название дипромоний - М.

Актуальность применения данного препарата для лечения гепатопатий у животных, при отсутствии исследований, посвященных изучению токсикологических параметров и фармакологических свойств дипромония-М, послужила основанием для выбора темы исследований.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является комплексное исследование фармако-токсикологических свойств нового препарата дипромоний-М и экспериментальное обоснование его гепатопротекторной эффективности на непродуктивных животных.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

• дать токсикометрическую оценку препарата (острая, субхроническая токсичность, местно-раздражающие и аллергизирующие свойства, эмбриотоксическое и тератогенное действие препарата);

• изучить механизм фармакологического гепатопротекторного действия при применении дипромония-М.на модели экспериментального гепатита;

• разработать экспериментальный метод воспроизведения гепатита у крыс и исследовать клинические, морфо-биохимические и гистологические характеристики вызванной патологии;

• определить терапевтическую эффективность дипромония-М при экспериментальном гепатите крыс и гепатозе собак.

Научная новизна. Впервые проведено экспериментальное исследование широкого комплекса токсикологических показателей дипромония-М, позволившее выявить степень безопасности его применения. Установлено, что препарат относится к группе малотоксичных веществ, при этом не обладает местно-раздражающим действием, не проявляет аллергизирующих, эм-бриотоксических и тератогенных свойств, что свидетельствует о безопасности его использования в широком диапазоне доз и длительности назначения.

Впервые установлены основные стороны фармакологического действия и использования дипромония-М в качестве гепатопротектора при экспериментальном поражении печени четыреххлористым углеродом, а также при гепатозе собак.

Практическая значимость. Для ветеринарной медицинской практики предложен новый препарат дипромоний-М, обладающий гепатопротектор-ными свойствами. Выявленная фармакодинамическая характеристика препарата (на модели экспериментального гепатита) может служить основой обоснования его использования в условиях повышенного риска гепатотокси-ческого эффекта различных лекарственных средств и других токсинов, обладающих сходным с четыреххлористым углеродом механизмом деструктивного влияния на печень. Дипромоний-М рекомендуется применять в практике ветеринарии в качестве лекарственного средства при фармакотерапии гепа-топатий.

Данные проведенных исследований учтены при разработке НТД, препарат выпускает ООО «Поливит» (г.Уфа).

Апробация работы. Результаты экспериментальных и клинических исследований, являющихся основой диссертации, доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях Ученого совета Краснодарского НИВИ (2008 - 2011

гг.), на Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарии и животноводства» (Самара, 2010), на Н-м Сибирском ветеринарном конгрессе «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2010), на X Сибирской ветеринарной конференции, посвященной международному году ветеринарии, 17-18 февраля 2011года «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2011), на 1У-Й Международной научно-практической конференции «Научные основы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных» (Краснодар, 2011) на Международной научно-практической конференции, посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани (Краснодар, 2011).

Публикации. Основные материалы диссертации опубликованы в 7 научных статьях, 2 из которых - в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК Минобразования РФ.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- токсикологическая характеристика препарата;

- фармакологическая эффективность препарата при гепатопатиях животных при экспериментальном поражении печени на модели острого гепатита у крыс;

- гепатопротекторные свойства препарата при гепатозе собак.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 142 страницах машинописного текста и состоит из разделов: введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений, списка литературы. Список использованной литературы включает 165 источников, в том числе иностранных 22. Работа иллюстрирована 29 таблицами и 3-мя рисунками.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена с 2008 по 2012 годы в Краснодарском научно-исследовательском ветеринарном институте на базе лаборатории ветеринарной фармакологии в соответствии с Государственными планами научных исследований и является частью задания 08.04.04. с № госрегистрации 150070.3666026906.06.8.004.5

Основной объект исследований - препарат дипромоний-М (диизопро-пиламмония дихлорацетат), производимый в ООО «Поливит» (г. Уфа).

Экспериментальные и научно-производственные опыты проведены в соответствии с требованиями к врачебно-биологическому эксперименту по подбору аналогов, постановке контроля, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания животных в период проведения работы и учета результатов (Фролов И. Т., 1965). При постановке опытов были использованы физиологические, клинические, токсикологические, морфологические, биохимические и другие методы исследований.

В ходе проведения экспериментальной части работы исследовалось общее, возможное токсическое действие дипромоний-М на организм животных, раздражающее, аллергезирующее, эмбриотоксическое и тератогенное действие, а также его влияние на обменные процессы и терапевтическая активность при гепатопатиях.

Общетоксические свойства диромония-М были изучены и определены в соответствии с «Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве», утвержденными ГУВ СССР и «Методическими рекомендациями по токсико-экологической оценке лекарственных средств, применяемых в ветеринарии», одобренных секцией отделения ветеринарной медицины РАСХН (1998).

Токсикометрическую оценку проводили в остром опыте в трех сериях на лабораторных животных (беспородные белые мыши и крысы), и поросятах по методике Deishmann & Le Blanc (Саноцкий И. В., 1970).

Основной целью проведения эксперимента по определению острой токсичности было установление различных доз LD при однократном внут-рижелудочном введении препарата.

Исследуемый образец препарата дипромоний-М опытным группам лабораторных животных задавали внутрь однократно индивидуально в виде яично-масляной эмульсии в дозах от 0,42 г/кг до 7,1 г/кг, пользуясь шкалой интервалов, составленной авторами метода. Контрольным животным в тех же объемах скармливали только яично-маслянную эмульсию в тех же дозах.

Поросятам дипромоний-М с помощью зонда вводился в виде суспензии в диапазоне доз от 4,7 г/кг до 16,0 г/кг массы тела. Животным контрольной группы в тех же объемах вводили дистиллированную воду

В течение 14 дней после затравки, за животными велись наблюдения. Показателями определения острой токсичности служили: внешний вид, состояние кожного покрова, поведение (возбуждение или угнетение, подвижность, изменение походки, реакции на внешние раздражения, выделения из глаз, рта, мышечные подергивания, тремор, судороги, параличи, парезы и т.д.), потребление корма, изменение массы тела, динамика морфологического состава крови.

Параметры субхронической токсичности изучали по общепринятым методикам в двух сериях опытов на белых крысах и кроликах.

После установления клинического статуса опытным группам животных дипромоний-М задавался ежедневно индивидуально в смеси с кормом в дозах 1/10, 1/20 и 1/50 от максимально введенных доз в течение 30 дней. Контрольные группы животных получали обычный рацион без кормовой добавки.

При ежедневных наблюдениях учитывали клинические показатели: общее состояние, аппетит, показатели дыхания, пульса, температуры тела, функции органов пищеварения и мочеотделения, динамику прироста массы тела. Взвешивание животных осуществляли в начале опыта, через 20 и 30

дней. Кровь для исследований отбирали от 5 животных каждой группы на 1-е и 30-е сутки, в которой определяли морфологические и биохимические показатели.

Влияние дипромония-М на функциональную активность печени крыс проводили на модели гексаналового сна в ходе длительного эксперимента.

По завершении эксперимента был произведен убой животных с целью проведения патологоанатомического анализа органов и тканей согласно «Курса патогистологической техники» (Меркулов Г. А., 1969).

Лабораторных крыс убивали методом декапитации, проводили пато-лого-анатомическую оценку внутренних органов и определение их весовых показателей. Из каждой группы было исследовано по пять животных.

Патоморфологические исследования проведены в условиях кафедры анатомии, гистологии и патоморфологии, клиники факультета ветеринарной медицины Кубанского государственного аграрного университета под руководством доцента, к.в.н. Кравченко В.М.

В работе использовался анатомический и гистологический комплекс методов исследования. Анатомический метод был использован для изучения формы, размеров и топографии органов. Органы и ткани подвергали препарированию и описывали. Гистологический метод использовали для изучения микроструктуры органов и тканей, при котором срезы окрашивали гематоксилином Бемера и водным 0,1%-ным раствором эозина и эозином по Рома-новскому-Гимзе.

Для гистологического исследования фрагменты органов (желудок, двенадцатиперсная кишка, кусочки печени, почек, селезенки, сердца, мезен-териальные лимфоузлы) фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина. Парафиновые срезы окрашивали рутинными красителями (гема-токсином и эозином) и просматривали с помощью светового микроскопа.

У убитых животных опытных и контрольной групп определяли абсолютные и относительные массы внутренних органов, позволяющие проследить отклонения от существующих стандартных норм под воздействием препарата.

Влияние дипромония-М на функциональное состояние пищеварительной системы животных проводили на беспородных щенках 2-3-х месячного возраста, содержащихся в условиях вивария.

О действии дипромония-М на функциональную активность пищеварительной системы животных судили по физико-химическим свойствам фекалий, которые собирали в начале исследования, через 15 дней и по окончанию эксперимента. При этом проводили органолептическую оценку, обращая внимание на форму, консистенцию, запах, цвет, а также присутствие посторонних примесей.

Физико-химические свойства каловых масс изучали путем определения рН с помощью лакмусовой бумаги, а также - наличие крови - бензиди-

новой пробой, желчные пигменты - пробой Терквея, билирубин - пробой Фуше, жир и крахмал - микроскопически с Суданом III и раствором Люголя.

Функциональное состояние почек под влиянием дипромония-М проводили на тех же беспородных щенках и по той же схеме, оценивая физико-химические показатели мочи опытных животных, и сравнивая их с показателями мочи контрольных щенков.

В моче определяли цвет, консистенцию, запах, концентрацию водных ионов, удельный вес, содержание белка, углеводов, гемоглобина, желчных пигментов. Наличие или отсутствие в моче белков определяли пробой Роча, углеводов - пробой Гайнесса, кровяных и желчных пигментов - бензидино-вой и пробой Фуше соответственно.

Исследование местно-раздражающего действия дипромония-М включало изучение действия препарата на кожу и на слизистую оболочку глаза. Опыты по изучению раздражающего действия на кожу тела проведены на кроликах и белых крысах.

Реакцию кожи регистрировали через 1 и 16 часов после однократной аппликации и оценивали в сравнении с симметричным участком кожи того же животного, где была нанесена дистиллированная вода. В ходе исследований учитывали функциональные нарушения кожи, характеризующиеся появлением различной степени выраженности эритемы, отека, трещин, изъязвлений, изменением температуры.

Изучение местного раздражающего действия дипромония-М на слизистую глаза проведено на кроликах, для чего в конъюнктивапьный мешок левого глаза животных препарат наносили в количестве 20 мг.

Кожно-резорбтивное действие дипромония-М проводилось на белых крысах методом погружения хвоста в 20%-ный раствор водной взвеси препарата. Учет реакции проводили через 4 часа, при котором обращали внимание на наличие местных изменений хвоста, смертельных исходов и степени выраженности интоксикации. Критериями кожно-резорбтивного действия препарата служили выживаемость животных, изменения их массы тела и температуры, состав периферической крови, внешний вид, поведение, изменения со стороны кожных покровов.

Оценку аллергизирующего действия дипромония-М проводили методом эпикутанных аппликаций с последующим выявлением сенсибилизации провокационной кожной пробой на морских свинках. Аллергизирующее действие дипромония-М оценивали в течение 6 часов после введения разрешающей дозы по симптоматике аллергического энтерита (обильная диарея) и признакам изотонической дегидратации (сухость слизистых, жажда, вялость, адинамия).

Для изучения функции центральной нервной системы на крысах использовали тест-метод «открытое поле». В течение 3-х минут регистрировали: число пересеченных линий и число вертикальных стоек, что отражает неспецифический уровень возбуждения; число обследованных отверстий, как показатель

исследовательской активности животного; число фекальных болюсов, что является показателем эмоциональной активности.

Влияние препарата на эмбриональное развитие и генеративную функцию животных проводили на белых крысах путем вычисления процента пред- и постимплантационной гибели эмбрионов, обнаружения аномалий и уродств.

О качестве мяса судили по результатам ветеринарно-санитарной экспертизы убоя кроликов, которая включала в себя органолептическую и дегустационную оценку мяса, жира и бульона, а также биохимические исследования, состоящие из определения концентрации водородных ионов с помощью рН метра, определения содержания аммиака в мясе с реактивом Нессле-ра, реакции на пероксидазу, определения кислотного числа и альдегидов в жире.

При гематологических исследованиях определяли количество эритроцитов и лейкоцитов в камере Горяева, выводили лейкоформулу по В.Г. Мухину, содержание гемоглобина (гемоглобинцианидным методом), высчитывали цветовой показатель, СОЭ в аппарате Панченкова,. Биохимические исследования состояли из определения в сыворотке крови общего белка (колориметрически), белковых фракций (нефелометрически), мочевины (цветной реакцией с диацетилмонооксимом и тиосемикарбазидом), общего кальция (с орто-кризолфталеином), неорганического фосфора (с ванадат-молибдатным реактивом), глюкозы (ферментативно). Активность трансами-наз, щелочной фосфатазы, билирубин, холестерин, общие липиды, оценивали с помощью наборов фирмы «ДДС». Микроэлементный состав крови исследовался атомно-абсорбционным методом.

Оценку гепатопротекторного действия дипромония-М проводили при повреждении печени на экспериментальной модели острого гепатита у крыс, вызванного ССЬ4

Оценку эффективности гепатозащитного действия препарата проводили по степени нормализации биохимических показателей основных патологических синдромов, наблюдающихся при поражениях печени; цитолиза -активности в сыворотке АлАт, АсАт; холестаза - активности в сыворотке крови ЩФ, и содержание билирубина, белково - синтетической ( содержание общего белка), липидного (содержание холестерина) обменов, показателей ПОЛ (диеновых коньюгатов и малонового диальдегида) и уровня эндогенной интоксикации (по содержанию МСМ).

Кроме того, о степени гепатозащитного действия дипромония-М судили по его влиянию на клинический статус и выживаемость животных контрольных групп и животных, получавших гепатопротектор.

Гепатопротекторные свойства препарата дипромоний-М оценивались при гепатозе собак. Для опыта было отобрано 10 животных крупных пород в возрасте от 1,5 до 5 лет, которых по принципу парных аналогов разделили на две группы (опытную и контрольную) по 5-ть особей в каждой. Животным

первой группе применяли дипромоний-М в суточной дозе 10 мг/кг массы тела в течение месяца. Собакам второй (контрольной) группы в качестве препарата сравнения использовали карсил в дозе 10 мг/кг массы тела три раза в день. Всем животным дополнительно применяли поливитаминный препарат согласно инструкции по применению. Учет клинического состояния вели постоянно, морфологические и биохимические исследования сыворотки крови проводили на 30-е сутки наблюдений.

Заключение о положительном действии препарата делали на основании результатов комплексных клинических, биохимических, гематологических методов исследования.

Полученные в опытах данные подвергнуты биометрической обработке с помощью программного обеспечения фирмы Microsoft ®, фирмы Carl Zeiss ®. Критерий достоверности определяли по таблице Стьюдента.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1 Токсикологические свойства дипромония-М

Эксперименты по изучению токсикологических свойств дипромония-М проводили на интактных белых мышах, крысах, кроликах, морских свинках, собаках и поросятах.

Острую токсичность препарата определяли при внутрижелудочном способе введения на мышах, крысах и поросятах в диапазоне доз с 0,42 до 24,0 г/кг массы тела.

С этой целью были отобраны 16 белых мышей 2-х месячного возраста со средней массой тела 20,0-23,0 г и 16 белых беспородных крыс 3,5-4-х месячного возраста со средней массой тела 185-195 г, подобранных по принципу парных аналогов (с учетом возраста, пола, массы тела и клинического состояния). Дипромоний-М опытным группам животных задавали внутрь однократно индивидуально в виде яично-масляной эмульсии в дозах от 0,42 г/кг до 7,1 г/кг. Контрольным животным в тех же объемах скармливали только яично-маслянную эмульсию в тех же дозах.

В третьей серии эксперимента острую токсичность препарата дипромоний-М изучали на клинически здоровых поросятах-сосунах с массой тела 3,0-3,5 кг. Животные были подобраны по принципу парных аналогов по 4 особи в группе. Опытным группам животных дипромоний-М с помощью зонда вводился в виде суспензии в диапазоне доз от 4,7 г/кг до 16,0 г/кг массы тела.

Установлено, что в течение периода наблюдения во всех сериях эксперимента, препарат не вызывал гибели и острой интоксикации животных, не влиял на их общее состояние и поведение. Рефлексы оставались сохраненными. Нарушения функциональной активности органов пищеварения и мо-

чеотделения не наблюдали. На основании результатов опытов не удалось определить среднесмертельную дозу (1Х)50) дипромония-М.

Учитывая, что введение препарата дипромоний-М в дозе 7100 мг/кг (белые мыши и крысы) и 16000 мг/кг (поросята) переносится животными без видимых последствий, он классифицируется как препарат малотоксичный и по ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества» относится к 4-му классу опасности (малоопасные вещества).

Поскольку в остром опыте среднесмертельная доза (1Л}50) для препарата установлена не была, при экспериментальных исследованиях по определению субхронической токсичности дипромония-М опытные группы животных получали с кормом исследуемый образец препарата в дозе 1/10, 1/20 и 1/50 от максимально введенной (7,1 г/кг) в течение 30 дней. Четвертая группа служила контролем и содержалась на привычном кормовом рационе. Эксперименты проводились в двух сериях опытов - на белых крысах и кроликах.

В результате проведенных исследований отмечено, что длительное применение дипромония-М в различных дозах хорошо переносится лабораторными животными, не оказывая вредного влияния на организм. На протяжении всего срока эксперимента гибели не наблюдалось, крысы и кролики были клинически здоровы, с хорошо выраженным аппетитом. Визуальное наблюдение не выявило каких-либо изменений в поведении опытных животных в сравнении с контролем.

При длительном скармливании дипромония-М белым крысам была выявлена положительная динамика прироста массы тела в опытных группах (таблица 1), причем, наибольший эффект наблюдали при введении препарата во второй и третьей опытных группах - на 10,5% и 23,4% соответственно (р<0,05).

Таблица 1 - Динамика изменения массы тела крыс при применении дипромония-М в субхроническом эксперименте (М±ш; п=10)

Группа животных Время исследования, сут / масса тела, г

Начало опыта 30-й день эксперимента

1 опытная 154,3±2,8 192,3±3,6

2 опытная 153,6±3,2 195,7±4,0*

3 опытная 152,7±2,6 199,7±2,5*

контроль 155,4±3,7 193,5±3,5

Примечание: * степень достоверности р <0,05

Исследования крови (таблица 2) подтвердили вывод о малой токсичности препарата, поскольку все анализируемые показатели крови опытных животных существенно не отличались от таковых в контроле и находились в пределах границ нормы.

Таблица 2 - Влияние дипромония-М на показатели крови крыс в

субхроническом опыте (М±т; п=10)

Показатели Фон Группы животных

опыт опыт опыт контроль

Эритроциты, 10|2/л 7,0±0,02 6,8±0,09 7,0 ±0,07 7,2±0,11 6,8±0,05

Лейкоциты, 10ч /л 14,7±0,92 13,9±0,58 14,6±0,70 15,6±0,84 14,9+0,92

Гемоглобин, г/л 160,2±7,21 162,1+5,16 167,5±9,20 173,0±6,5* 159,1±7,33

Лейкоформула, %

Базофилы 0 0 1,3±0,05 0 1,1±0,02

Эозинофилы 3,1±0,06 2,4±0,07 2,0±0,02 3,5±0,04 3,1±0,0,3

Нейтрофилы: юные 0 0 0 0 0

палочкоядерные 2,1±0,05 3,6±0,04 4,2±0,05 2,3±0,04 4,4±0,07

сегментоядерные 30,8±3,1 29,7±1,6 28,5+0,9 32,6±1,84 33,4±3,5

Лимфоциты 61,9±5,3 62,5±7,1 62,3±3,8 59,7±5,2 55,4±4,7

Моноциты 2,1±0,6 1,8+0,51 1,7±0,37 2,2±0,44 2,6±0,51

Примечание: * степень достоверности р <0,05

При этом количество эритроцитов во второй и третьей опытных группах отличалось более высокими значениями (7,0±0,07х10п/л и 7,2±0,11хЮ12/л) в сравнении с показателями первой опытной группы и контроля. Повышение данного показателя к окончанию опытного периода составило 2,9% и 5,8% соответственно. В крови крыс опытных групп наблюдалось увеличение гемоглобина (на 1,9-8,7% в среднем по группам). Однако это повышение проявлялось в пределах нормы, характерной для данного вида животных, причем степень достоверности была установлена только в третьей опытной группе (р <0,05).

В биохимических показателях крови опытных животных статистически значимых изменений в сравнении с контрольными аналогами также установлено не было.

Постоянное клиническое наблюдение за животными при длительном скармливании дипромония-М, показало, что состояние животных было удовлетворительным, аппетит сохранен, подвижность соответствовала физиологическому уровню, характерному для данного возраста. Нарушений в координации движений не отмечалось.

Результаты исследований по изучению влияния дипромония-М на функциональное состояние печени при длительном скармливании показали, что применение препарата в различных дозировках не вызывает угнетения ее активности.

При патоморфологическом и гистологическом исследовании органов и тканей экспериментальных животных отклонений и каких-либо особенностей в строении выявлено не было.

Абсолютные и относительные массы внутренних органов крыс, позволяющие проследить отклонения от существующих стандартных норм под воздействием дипромония-М существенно не отличалась от таковых показателей в контроле, что свидетельствует об отсутствии дополнительной нагрузки на органы, токсическом воздействия изучаемого препарата и о его хорошей переносимости организмом.

В эксперименте установлено, что длительное применение дипромония-М не оказывает отрицательного влияния на функции органов пищеварения и мочеотделения.

Введение дипромония-М в коньюнктивальный мешок кроликов при изучении местнораздражающего действия показало, что препарат вызывает повышенное слезотечение и слабое раздражение конъюнктивы лишь в течение первого часа, обусловленное механическим раздражением слизистой оболочки глаза, не вызывая гиперемии конъюнктивы и сужения зрачка. Аппликации дипромония-М на кожные покровы крыс не вызывают гибели животных, не нарушают целостности кожи на месте нанесения, эритемы или ее отеков, а также не оказывают негативного влияния на функционирование организма животных.

Изучение аллергизирующего действия дипромония-М при воспроизведении у кроликов и белых крыс специфических тестов не выявило его негативного влияния, как в месте нанесения, так и на общую ответную реакцию организма.

Препарат не вызывает достоверных изменений в поведенческих реакциях и не оказывает отрицательного влияния на центральную нервную систему животных.

Таблица 3 - Изучение тератогенного действия дипромония-М для белых крыс

Показатели Контроль Опыт

Число желтых тел в яичнике 11,72±0,41 11,7510,45

Число мест имплантации в матке 10,57±0,46 10,59±0,47

Процент предимплантационной гибели 9,96±0,56 9,8710,58

Процент постимплантационной гибели эмбрионов 6,33±0,61 6,24±0,53

Масса эмбрионов 4,06±0,18 4,0710,2

Аномалии развития внутренних органов и скелета отсутствуют отсутствуют

Назначение дипромония-М беременным крысам не оказывает негативного влияния на течение беременности и роды. Показатели пред- и постим-

плантационной гибели эмбрионов, общей эмбриональной смертности у животных опытных и контрольных групп не имели существенной разницы и находились в пределах физиологических значений.

Потомство, рожденное от крыс, получавших дипромоний-М во время беременности, не отличалось от крысят контрольных животных. Различий в их росте, развитии и поведении не обнаружено.

При ветеринарно-санитарной оценке мяса опытных животных по всему комплексу физико-биохимических показателей отрицательного действия ди-промония-М на качества и вкусовые свойства мяса не установлено.

3.2 Оценка гепатопротекторного действия дипромония-М

3.2.1 Фармакологические свойства и эффективность дипромония-М при экспериментальном гепатите

Для установления эффективности препарата дипромоний-М при повреждении печени опыт проводили на экспериментальной модели острого гепатита у крыс, вызванного CCL4.

Опыты проводили на 20-ти белых беспородных половозрелых крысах с массой тела 240-260 г, которых разделили на две группы: опытную и контрольную, по 10 особей в каждой.

У крыс моделировали острый токсический гепатит подкожным введением 0,4 мл 50%-го масляного раствора CCLt на 100 г массы тела в течение 4 суток. Первой группе дополнительно вводили дипромоний-М по 5 мг/кг массы тела per os ежедневно в течение 14 дней от начала опыта. Вторая группа служила негативным контролем.

Оценку эффективности гепатозащитного действия препарата проводили по степени нормализации биохимических показателей основных патологических синдромов, наблюдающихся при поражениях печени: цитолиза -активности в сыворотке АлАт, АсАт; холестаза - активности в сыворотке крови ЩФ, содержанию билирубина, белково-синтетической (содержание общего белка), липидного (содержание холестерина) обменов и уровня эндогенной интоксикации (по содержанию МСМ) и показателей ПОЛ (диеновых коньюгатов и малонового диальдегида). Кроме того, об эффективности гепатозащитного действия препарата судили по изменению клинического статуса и выживаемости животных.

Клиническая картина гепатита в группе без лечения характеризовалась гиподинамией, снижением аппетита, взъерошенностью шерсти, некоторой желтушностью слизистых оболочек и склер. Потеря массы тела достигла 26%, два животных пало.

В отличие от них, животные, получавшие дипромоний-М, были подвижны, летальность в этой группе отсутствовала.

Предложенная схема применения дипромония-М обеспечивала незначительную потерю массы тела у крыс (в среднем 8%), а к месячному периоду эксперимента вес опытных крыс вернулся к исходным (фоновым) величинам.

О степени поражения печени судили по лабораторному анализу крови, проводившемуся через сутки после заключительного введения дипромония-М. Так, в контрольной группе токсическое поражение печени сопровождалось цитолизом гепатоцитов, что отражалось в повышении активностей тран-саминаз - АлАТ - в 3,1 и АсАТ - в 2,3 раза в сравнении с негативным контролем (таблица 4).

Таблица 4 - Биохимические показатели крови крыс при химической интоксикации СС14 и применении дипромония -М (М±т; п=5)

Показатели Интактные СС14 СС14 + дипромоний-М

АсАт мМ/л.ч 0,48±0,09 1,12±0,11 0,86±0,10*

АлАт мМ/л.ч 0,31±0,06 0,78±0,18 0,51±0,14*

ЩФ Ед/л 345,9±10,8 480,2±12,2 378,1±9,2*

Общий белок г/л 63,4±2,7 50,2±3,1 58,6±1,7*

Холестерин мМ/л 3,1±0,31 1,8±0,28 2,6±0,14

Общий билирубин мкМ/л 8,4 ±0,91 16,2±0,37 12,2 ±0,75*

* - различия достоверны (Р<0,05) по сравнению с животными, получавшими СС14 без терапии.

При поражении печени четыреххлористым углеродом нарушения жирового обмена выражаются в прекращении выделения триглицеридов и жирных кислот из печени в составе липопротеидов, нарушении окисления жиров, что вызывает жировую инфильтрацию печени, увеличение образования кетоновых тел и изменение синтеза холестерина. Эти данные нашли подтверждение в наших опытах, поскольку концентрация холестерина в сыворотке крови крыс после введения СС14 была ниже в сравнении с показателями интактной контрольной группы в 1,7 раза.

У контрольных животных была зарегистрирована гипербилирубинемия (концентрация общего билирубина была выше в 1,9 раза в сравнении с ин-тактными крысами), при этом активность ЩФ повысилась в 1,4 раза, что свидетельствовало о наличии синдрома холестаза.

Терапия дипромонием-М сопровождалась регрессом биохимических нарушений, вызванных СС1ц Активность АсАт в крови опытных крыс была ниже на 30,2%, АлАт - на 52,9% в сравнении с таковыми у животных группы контроля, но оставалась выше показателей интактных крыс. Активность ЩФ снизилась на 27%. Препарат препятствовал развитию гипербилирубинемии

(концентрация общего билирубина была ниже на 32,8%) и гипопротеинемии (общий белок регистрировался на уровне нижней границы нормы).

Известно, что пусковым механизмом повреждения клеток печени при воздействии четыреххлористого углерода является активация процессов пе-рекисного окисления с последующими структурными и функциональными изменениями в гепатоцитах. Как установлено в наших исследованиях, в результате введения СС14 наблюдался сдвиг про-антиоксидантного равновесия в сторону усиления ПОЛ. Так, уровень МДА в контрольной группе животных увеличился в 1,6 раз, а ДК - в 1,8 раз. Тогда как применение дипромония-М достоверно снизило эти показатели у опытных крыс на 28,4% и 31,6% соответственно.

Гепатопротекторные свойства препарата были подтверждены результатами гистологических исследований. И хотя в печени крыс, получавшей дипромоний-М, наблюдали признаки гепатита в виде очаговой зернистой и жировой дистрофии гепатоцитов, локализованной преимущественно в центре печеночных долек, тем не менее, по периферии воспалительных очагов отмечался процесс репаративной регенерации, который характеризовался гипертрофией и митозом гепатоцитов. В группе контрольных животных в структуре печени наблюдались признаки диффузного воспаления, зернистая и жировая дистрофия гепатоцитов, отсутствие гликогена на периферии печеночных долек с сохранением небольшого его количества в центре долек. Кроме этого отмечались экссудативные процессы, которые характеризовались отеком стенок и десквамацией эндотелия центральных вен и синусоидных капилляров.

Таким образом, препарат дипромоний-М проявил терапевтическую эффективность при экспериментальном поражении печени четыреххлори-стым углеродом, что свидетельствует о целесообразности его применения в качестве гепатопротектора.

3.2.2 Эффеютшность дипромония-М при гепатозе собак

Целью нашей работы явилось изучение гепатопротекторных свойств препарата дипромоний-М при гепатозе собак.

Для проведения экспериментов по оценке гепатопротекторных свойств препарата было отобрано 10 собак крупных пород с диагнозом «гепатоз» в возрасте от 1,5 до 5 лет, которых разделили на две группы.

Первоначально при проведении клинического осмотра животных выявилось общее угнетенное состояние со сниженной динамической активностью, кахексичный вид, а также отсутствие аппетита со слов владельцев. Наблюдали незначительную истеричность слизистых оболочек ротовой полости и склер глаз у 50% собак, еще у половины слизистые были анемичны. Кожа у всех больных животных была сухая, шерстный покров - тусклый, взъерошенный, регистрировались аллопеции в области бедер, поясницы и основа-

ния хвоста. У большинства собак регистрировался зуд, что приводило к расчесыванию и нарушению целостности кожи этих участков.

При обследовании границ печени выявили болезненность и гепатоме-гапию у 6-ти собак. В 80% случаев были отмечены: диарея, периодическая рвота и метеоризм кишечника.

При фоновых исследованиях биохимический статус больных собак характеризовался гипопротеинемией и низким уровнем мочевины, при этом было снижено количество альбуминов и альфа-глобулинов. Отмечены умеренная гипербета- и выраженная гипергамма-глобулинемия со снижением коллоидной стойкости белков.

Регистрировалась гиперферментемия за счет повышения активности сывороточных трансаминаз, при доминанте аланинаминотрансферазы. В тоже время выявленная гиперферментемия ЩФ, энзима являющегося основным маркером холестаза, не носила черты выраженной манифестации. Результаты анализа пигментного обмена показали явные отклонения от нормы в сторону увеличения содержания общего билирубина.

Животным первой группе применяли дипромоний-М в суточной дозе 10 мг/кг массы тела в течение месяца. Собакам второй (контрольной) группы в качестве препарата сравнения использовали карсил в дозе 10 мг/кг массы тела три раза в день. Всем животным дополнительно применяли поливитаминный препарат согласно инструкции по применению.

Учет клинического состояния вели постоянно, биохимические исследования сыворотки крови проводили на 30-е сутки наблюдений.

При оценке клинического статуса собак, участвующих в эксперименте, установлено, что в процессе применения препаратов изменения в общем состоянии в сторону улучшения были зарегистрированы у животных во всех группах. Но если в контрольной группе стабилизация клинического статуса произошла только к концу эксперимента и только у 3-х собак (60 %), то в группе с терапией дипромонием-М подобные изменения были достигнуты к 15-м суткам лечения.

Лечебный эффект препарата проявился в восстановлении аппетита, прекращении рвоты и диареи, интенсивность зуда снижалась до полного прекращения. На пораженных участках кожа подсыхала и покрывалась корочкой, с последующим очищением. К месячному периоду у собак опытной группы в местах аллопеций наблюдали активный рост волос. При пальпации болезненность в области печени отсутствовала.

В результате проведенных исследований установлено, что дипромоний-М оказывает прямое влияние на основные биохимические показатели крови (таблица 5).

Таблица 5 - Биохимические показатели крови собак, больных гепато-зом при применении препарата дипромоний-М (М±щ; п=5)

Показатель Опыт Контроль

Общий белок, г/л 61,4±1,79* 54,2±1,56

Альбумины, % 50,4±2,11 46,5±2,11

а-глобулин 14,0±1,33 11,9±0,57

Р-глобулин 21,7±0,95 22,0±0,82

у-глобулин 13,9±0,54 17,6±1,24

Глюкоза, мМ/л 4,12±1,02 3,81 ±0,94

Мочевина, мМ/л 3,43±0,36* 2,81±0,18

Холестерин, мМ/л 4,17±0,85 4,01±0,46

ЩФ, ЕД/л 78,3±2,1* 92,7±3,5

АлАт, ЕД/л 85,4±2,5* 94,5±1,9

АсАт, ЕД/л 32,1±1,2* 38,6±1,5

Билирубин общий, мкМ/л 5,4±1,17* 6,9±0,95

Кальций, мМ/л 2,98±0,24 2,67±0,42

Фосфор, мМ/л 1,85±0,32 1,74±0,14

* - различия достоверны (Р<0,05) по сравнению с контрольными животными

При оценке показателей белоксинтезирующей системы печени у животных опытной группы зарегистрировано достоверное увеличение уровня общего белка на 13,2%, в сравнении с контрольными собаками. Репаратив-ный эффект препарата проявился стабилизацией фракционного состава сыворотки крови (протеинограммы опытной группы соответствовали показателям нормы для животных данного вида, а в контроле дисбаланс проявлялся снижением альбуминов и гипергамма-глобулинемией).

У опытных животных отмечено более эффективное восстановление процессов синтеза мочевины. Так, к концу экспериментального периода ее уровень составил 3,43±0,36 мМ/л при высокой степени достоверности (разница с контрольной группой составила 22% в пользу опытных собак).

Использование дипромония-М оказало нормализирующее влияние на активность ЩФ, АлАт и АсАт, что может указывать на более эффективное восстановление мембранных структур клеток органов, прежде всего печени. Так, активность этих энзимов у собак всех групп к 30-м суткам наблюдений практически соответствовали параметрам нормы, но у опытных животных разница с контролем в сторону снижения составила по ЩФ - 18,3%, по АлАт - 10,6% (в контроле еще фиксировались отклонения за верхнюю границу нормы) и по АсАт - 20,2%, что свидетельствует о снижении цитолитического синдрома.

Применение дипромония-М оказало нормализующее влияние на пигментный обмен за счет существенного снижения уровня билирубина. У жи-

вотных опытной группы его концентрация составила 5,4±1,17 мкМ/л против 6,9±0,95 мкМ/л в контроле, или на 27,7% ниже.

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют, что препарат дипромоний-М обладает выраженным гепатопротектор-ным действием при гепатозе собак, что проявляется оптимизацией протеин-синтетической, пигментообразовательной и детоксикацоинной функций печени, а также уменьшением цитолитического эффекта.

4. ВЫВОДЫ

1. Дипромоний-М (диизопропиламмония дихлорацетат) является малотоксичным препаратом для животных как в острых, так и в хронических экспериментах, не вызывая их гибели в диапазоне доз от 0,42 до 24,0 г/кг массы тела. Для дипромония-М не установлена среднесмертельная доза (ЬВ50) и доза, вызывающая появление клинической картины токсикоза, что по ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества» позволяет отнести его к 4-му классу опасности (малоопасные вещества).

2. Длительное применение дипромония-М в 1/10, 1/20 и 1/50 дозах от максимально введенной (7,1 г/кг), не влияет отрицательно на общее состояние лабораторных животных и показатели их клинического статуса, на функциональную активность печени, процессы пищеварения и мочеотделения, центральную нервную систему, морфо-биохимические показатели крови и патоморфологию внутренних органов. Дипромоний-М не проявляет местного раздражающего, аллергизирующего, эмбриотоксического и тератогенного и действия, не изменяет физико-биохимических свойств и вкусовых качеств мяса.

3. Дипромоний-М проявляет гепатозащитное действие при экспериментальном поражении печени четыреххлористым углеродом, снижая активность ферментов печени в крови опытных крыс (АсАт - на 30,2%, АлАт - на 52,9%, ЩФ - на 27%), а также препятствуя развитию гипербилирубинемии и гипопротеинемии.

4. Дипромоний-М способствует ослаблению интенсивности процессов перекисного окисления липидов в организме животных, восстанавливая ан-тиоксидантное равновесие за счет повышения эффективности эндогенной системы АОЗ и снижения уровня малонового диальдегида (МДА) - на 28,4% и диеновых коньюгатов (ДК) - на 31,6%.

5. Дипромоний-М обладает выраженным гепатопротекторным действием при гепатозе собак, улучшая их клиническое состояние. Механизм действия препарата обусловлен нормализацией протеинсинтетической, пигментообразовательной и детоксикационной функций печени, и уменьшением цитолитического синдрома, за счет восстановления работы микросомальной цепи в гепатоцитах, что позволяет нормализовать как продукцию свободных

радикалов, так и детоксикационную функцию печени. Репаративный эффект препарата проявляется повышением уровня общего белка на 13,2%, стабилизацией его фракциионного состава, снижением уровня ферментов печени на 10,6-20,2%, билирубина - на 27,7%.

6. Применение дипромония-М в комплексном лечении хронического гепатоза собак способствует повышению терапевтического эффекта на 40,0% и снижению продолжительности болезни в 1,7-2,0 раза.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для практического животноводства и ветеринарии предлагается препарат дипромоний-М, полученный по новой технологии, и представляющий собой диизопропиламмония дихлорацетат. Это малотоксичный препарат, удобный для группового назначения, обладающий выраженным гепатопро-текторным действием. Препарат рекомендуется для профилактики и лечения болезней печени животных в дозе 10 мг/кг массы тела. Применение препарата регламентируется временной инструкцией по использованию.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Семененко, М.П. Химическое строение и биологическая активность Дипромония-М / М.П. Семененко Т.А. Шахмеликьян, Е.В. Кузьми-нова // Материалы Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарии и животноводства».-Самара, 2010.-С.284-286.

2. Шахмеликьян Т. А. Получение дипромония-М и его биологическая активность при применении в ветеринарии /Т.А. Шахмеликьян // Актуальные вопросы ветеринарной медицины Сибири,- Материалы научно-практич. конференции, Краснообск, 2010,- С. 313-315.

3. Кузьминова, Е.В. Фармакокоррекция детоксикационной печени крыс при экспериментальном отравлении / Е.В. Кузьминова, М.П. Семененко, Т.А. Шахмеликьян, Д.А. Ширяев // Актуальные вопросы ветеринарной мецицины. - Материалы десятой ветеринарной конференции 17-18 февраля, Новосибирск,2011.-С.29-30.

4. Кузьминова, Е.В. Биотехнологические приемы повышения продуктивности и сохранности животных / Е.В. Кузьминова, М.П. Семененко, О.Н. Тюпенькова, Т.А. Шахмеликьян // Актуальные вопросы ветеринарной медицины,- Материалы десятой ветеринарной конференции 17-18 февраля, Новосибирск, 2011.-С.72-73.

20

5. Кузьминова, Е.В. Практические аспекты применения антиоксидан-тов при токсическом поражении печени / Е.В. Кузьминова, Т.А. Шах-Меликьян, Е.А.Старикова // Материалы межд. научно-практической конференции, посвященной 65-летию Краснодарского НИВИ «Актуальные проблемы современной ветеринарии».-Краснодар,2011-4.1. - С.182-184.

6. Кузьминова, Е.В. Комплексная терапия при гипотрофии телят / Е.В. Кузьминова, М.П. Семененко, О.Н. Тюпенъкова, Т.А. Шах-Меликьян // Научный журнал КубГАУ.№70(06),2011.-Мр/ /е]7 kubagro/ru/ 2011/ 06/р(Ш43/р(1Г.

7. Кузьминова, Е.В. Современные подходы к лечению гепатопатин крупного рогатого скота /Е.В. Кузьминова, М.П. Семененко, Т.А. Шах-Меликьян // Материалы 1-ой международной научно-прак-тической интернет-конференции «Современные направления в диагностике, профилактике и терапии заболеваний животных» - ФГБОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет», 2011, Ж. Вестник ветеринарии - № 59. С.

Подписано в печать 11.02.2012г. Формат А5 60x84 1/16 Печать цифровая Усл. печ. л. 1,0 Заказ № 956

бумага офсетная тираж 100 экз.

Типография «Световод» 350004, г. Краснодар ул. Калинина 134/2

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Шах-Меликьян, Татьяна Антраниковна, Краснодар

61 12-16/85

ГНУ КРАСНОДАРСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ РАСХН

На правах рукописи

ШАХ-МЕЛИКЬЯН ТАТЬЯНА АНТРАНИКОВНА

ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ПРЕПАРАТА ДИПРОМОНИЙ-М

06.02.03 - Ветеринарная фармакология с токсикологией

Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, член-корреспондент РАСХН, заслуженный деятель науки РФ В.А. Антипов

Краснодар - 2012

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ..................................................................4

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ....................................................8

2.1. Печень и ее роль в обменных процессах организма животных. . 8

2.2. Основные патологии печени................................13

2.3. Фармакокоррекция гепатопатологий........................30

2.3.1. Препараты растительного происхождения..............32

2.3.2. Препараты животного происхождения.........34

2.3.3. Препараты, содержащие эссенциальные фосфолипиды. . 35

2.3.4. Аминокислоты или их производные....................38

2.3.5. Препараты разных групп...............40

~ _ ^ Витамины-антиоксиданты и витаминоподобные соедине- л-х

2.3.6. ^ ния.......................

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ........................51

4. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ....................................62

4.1 Физико-химические свойства дипромония-М......................62

4.2. Токсикологическая оценка дипромония-М........................64

4.2.1. Острая токсичность............................................64

4.2.2. Суброническая токсичность..................................68

Влияние дипромония-М на функциональную активность

4.2.3. 74

печени............................................'н

. _ . Влияние дипромония-М на патоморфологию внутренних

органов животных......................................'0

Влияние дипромония-М на функциональное состояние

4.2.5.

желудочно-кишечного тракта................................'у

4.2.6. Влияние дипромония-М на мочеотделение................80

4.2.7. Раздражающее действие дипромония-М................82

4.2.8. Исследование аллергизирующего действия дипромония-М 87

4.2.9. Влияние дипромония-М на центральную нервную систему. 89

4 2 ¡о Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия

дипромония-М..........................................91

Ветеринарно-санитарная оценка продуктов убоя приме- ^ нении дипромония-М.. . .

4.3. Оценка гепатопротекторного действия дипромония-М..........96

Фармакологические свойства и эффективность дипромо-

4.3.1.

ния-М при экспериментальном гепатите....................95

4.3.2. Эффективность дипромония-М при гепатозе собак. ... 107

5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ............................................................116

6. ВЫВОДЫ..................................................................126

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ....................................127

8. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ..................................................128

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

актуальность темы. В настоящее время одной из проблем животноводства является рост числа гепатопатий. Печень - как центральный орган процессов метаболизма, обмена ряда гормонов, витаминов, ферментов и микроэлементов, нейтрализации эндогенных и экзогенных токсинов, часто не выдерживает функциональной нагрузки, вследствие чего развиваются гепа-тодистрофические процессы (Уша Б.В., 1979; Байматов В.Н., 2000; Кузнецов Н.И. и др., 1999, 2000). Поэтому, в практике ветеринарной медицины нормальное состояние обмена веществ и функции печени в организме во многом определяются применением гепатопротекторных препаратов. К сожалению, на сегодняшний день, несмотря на обширный арсенал современных гепато-защитных средств, поиск, разработка и внедрение в ветеринарную практику новых гепатопротекторов продолжает оставаться актуальным. Это обусловлено тем, что разработка терапии, направленной на восстановление утраченных функций печени, оставляет актуальной потребность в препаратах, обладающих эффективными фармакологическими свойствами, низкой токсичностью и незначительным побочным действием (Оковитый C.B. и др., 2010; Анохин Б.М., 1999; Кузьминова Е.В., Семененко М.П. и др., 2011).

Одним из эффективных препаратов является дипромоний (диизопропи-ламмония дихлорацетат), вещество, по химической природе и биологической активности имеющее элементы сходства с пангамовой кислотой и обладающее гепатопротекторными свойствами(Машковский М.Д.2008,Никулин И.А., Самотин А.М.1988).

Одной из технологических стадий производимого ранее препарата дипромоний был гидролиз этилового эфира дихлоруксусной кислоты. Технология получаемого в ООО «Поливит» (г. Уфа) разработана новая модифициро-ваннаяэкологически чистая технология получения дипромония.. Продукт получил название дипромоний - М.

Поэтому изучение токсикологических параметров и фармакологических свойств дипромония-М, послужила основанием для выбора темы исследований.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является комплексное исследование фармако-токсикологических свойств препарата ди-промоний-М и экспериментальное обоснование его гепатопротекторной эффективности на непродуктивных животных.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

• дать токсикометрическую оценку препарата (острая, субхроническая токсичность, местно-раздражающие и аллергизирующие свойства, эм-бриотоксическое и тератогенное действие препарата);

• изучить механизм фармакологического гепатопротекторного действия при применении дипромония-М на модели экспериментального гепатита;

• разработать экспериментальный метод воспроизведения гепатита у крыс и исследовать клинические, морфо-биохимические и гистологические характеристики вызванной патологии;

• определить терапевтическую эффективность дипромония-М при экспериментальном гепатите крыс и гепатозе собак.

Научная новизна. Впервые проведено экспериментальное исследование широкого комплекса токсикологических показателей дипромония-М, позволившее выявить степень безопасности его применения. Установлено, что препарат относится к группе малотоксичных веществ, при этом не обладает местно-раздражающим действием, не проявляет аллергизирующих, эмбрио-токсических и тератогенных свойств, что свидетельствует о безопасности его использования в широком диапазоне доз и длительности назначения.

Впервые установлены основные стороны фармакологического действия и использования дипромония-М в качестве гепатопротектора при экспериментальном поражении печени четыреххлористым углеродом, а также при гепатозе собак.

Практическая значимость. Для ветеринарной медицинской практики предложен новый препарат дипромоний-М, обладающий гепатопротектор-ными свойствами. Выявленная фармакодинамическая характеристика препарата (на модели экспериментального гепатита) может служить основой обоснования его использования в условиях повышенного риска гепатотоксиче-ского эффекта различных лекарственных средств и других токсинов, обладающих сходным с четыреххлористым углеродом механизмом деструктивного влияния на печень. Дипромоний-М рекомендуется применять в практике ветеринарии в качестве лекарственного средства при фармакотерапии ге-патопатий.

Данные проведенных исследований учтены при разработке НТД, препарат выпускает ООО «Поливит» (г.Уфа).

Апробация работы. Результаты экспериментальных и клинических исследований, являющихся основой диссертации, доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях Ученого совета Краснодарского НИВИ (2008 - 2011 гг.), на Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарии и животноводства» (Самара, 2010), на П-м Сибирском ветеринарном конгрессе «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2010), на X Сибирской ветеринарной конференции, посвященной международному году ветеринарии, 17-18 февраля 2011 года «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2011), на 1У-й Международной научно-практической конференции «Научные основы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных» (Краснодар, 2011) на Международной научно-практической конференции, посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани (Краснодар, 2011).

Публикации. Основные материалы диссертации опубликованы в 7 научных статьях, 2 из которых - в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК Минобразования РФ.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту: - токсикологическая характеристика препарата;

- фармакологическая эффективность препарата при гепатопатиях животных в том числе при экспериментальном поражении печени на модели острого гепатита у крыс;

- гепатопротекторные свойства препарата при гепатозе собак.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 142 страницах машинописного текста и состоит из разделов: введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений, списка литературы. Список использованной литературы включает 165 источников, в том числе иностранных 22. Работа иллюстрирована 29 таблицами и 3-мя рисунками.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Печень и ее роль в обменных процессах организма животных

Печень - hepar - самая массивная железа организма, однако ее относительная величина не одинакова: среди позвоночных она больше у низших классов (рыбы, амфибии), среди млекопитающих она массивнее у плотоядных по сравнению с травоядными (Акаевский А.И., 1968; Акаевский А.И. с соавт., 1984; Жеденов, В.Н., 1965).

Печень - главнейший орган в поддержании гомеостаза, она, сохраняя динамическое постоянство внутренней среды организма животного, принимает и самое активное участие в ликвидации последствий болезни. Физиологическая роль печени важна и многогранна. Уша Б.В. (1979), выделяет следующие основные функции этого органа: желчеобразование и жёлчевыделе-ние; обезвреживание ядов; участие в обмене белков, углеводов, липидов, витаминов, ферментов, пигментов; водном обмене. Другие авторы (Байматов В.Н., Чумаков В.Ю., 1998) считают, что общее количество функций этого органа доходит до тысячи. Это достигается совместной деятельностью клеток печени: гепатоцитов, клеток Купфера, клеток Ито, эндотелиальных клеток синусоидов. Она выполняет защитную функцию против микробов и чужеродных веществ, поступающих из кишечника в кровь, обезвреживает многие вредные продукты обмена веществ, инактивирует гормоны, биогенные амины, лекарственные препараты (Блюгер А.Ф., Валук В.А., 1982; Гичев С.У., 1993). Печень секретирует желчь, синтезирует белки плазмы крови, образует и накапливает гликоген, участвует в обмене холестерина и витаминов и т. д.

При болезнях печени и желчных путей нарушаются желчеобразование и желчевыделение, сопровождающиеся желтухой, токсикозом, расстройством пищеварения. Поражения гепатоцитов, эндотелиальных (звездчатых) клеток печени ведут к нарушению синтеза и распаду белков, утилизации аммиака. В нормальных условиях в печени синтезируются альбумин крови, около 80% альфа-глобулина, 50% бета-глобулина, фибриноген, глобин, протромбин и

другие факторы свертывания крови (Довганский, А.П., 1989; Мирисси, Дж., 1991; Подымова, С.Д., 1993; Шерлок Ш., Дули Дж., 1999).

Печень является центральным органом, где происходит химическое превращение (трансформация) ксенобиотиков. При болезнях печени нарушаются процессы обезвреживания токсических веществ, поступающих извне или образующихся в ходе межуточного обмена, снижается фагоцитоз звездчатыми эндотелиоцитами микроорганизмов и их токсинов, иммунных комплексов (антиген-антитело), жировых капель и других агентов, то есть страдает барьерная функция. В печени образуется глюкоза из галактозы и других веществ, происходит синтез и распад гликогена. При поражении печени развивается гипогликемия (Байматов В.Н., 1986; Беляков И.М., 1975; Уша Б.В., 1969).

При заболевании печени жиры плохо всасываются в кишечнике, нарушается их обмен и обмен пигментов (Алиев A.A., Мартюшов В.М., 1972).

Функции печени многообразны. К основным из них можно отнести следующие:

- участие в процессах пищеварения, а именно обеспечение энергетических потребностей организма глюкозой, и конвертация различных источников энергии (свободных жирных кислот, аминокислот, глицерина, молочной кислоты и др.) в глюкозу (так называемый глюконеогенез);

- участие в процессах кроветворения, в частности синтез многих белков плазмы крови — альбуминов, альфа- и бета-глобулинов, транспортных белков для различных гормонов и витаминов, белков свёртывающей и противо-свёртывающей систем крови и многих других; печень является одним из важных органов гемопоэза в пренатальном развитии;

- пополнение и хранение быстро мобилизуемых энергетических резервов в виде депо гликогена и регуляция углеводного обмена;

- синтез холестерина и его эфиров, липидов и фосфолипидов, липопротеидов и регуляция липидного обмена;

- синтез жёлчных кислот и билирубина, формирование жёлчи;

- синтез гормонов и ферментов, которые активно участвуют в преобразовании пищи в 12-перстной кишке и прочих отделах тонкого кишечника;

- пополнение и хранение депо некоторых витаминов (особенно велики в печени запасы жирорастворимых витаминов А, D, водорастворимого витамина В i2), а также депо катионов ряда микроэлементов— металлов, в частности катионов железа, меди и кобальта;

- обезвреживание различных чужеродных веществ (ксенобиотиков), в частности аллергенов, ядов и токсинов, путём превращения их в безвредные, менее токсичные или легче удаляемые из организма соединения;

- обезвреживание и удаление из организма избытков гормонов, медиаторов, витаминов, а также токсичных промежуточных и конечных продуктов обмена веществ, например аммиака, фенола, этанола, ацетона и кетоновых кислот;

Печень также служит депо для довольно значительного объёма крови, который может быть выброшен в общее сосудистое русло при кровопотере или шоке за счёт сужения сосудов, кровоснабжающих печень (Уша Б.В.1979).

Рассматривая обмен веществ в организме животного и роль печени в этом процессе, можно отметить следующее:

В процессе обмена белков в организме происходит дезаминирование и переаминирование аминокислот, катаболизм нуклеопротеидов, пуриновых и пиримидиновых оснований, превращение ядовитых продуктов расщепления в малоядовитые (мочевинообразование и синтез белка). Все эти важные процессы обмена протекают в печени животного. Наряду с синтезом собственно печеночных белков, клетки печени синтезируют протеин крови, все альбумины крови, 75-90 % альфа-глобулинов, 50 % бета-глобулинов, протромбин, фибриноген (Кононский А.И., 1980; Логинов A.C., Аруин Л.И., 1985; Базе-люк Л.Т., 2003; Чернова Г.В., 1988).

По данным Байматова В.Н. (1991), в печени синтезируется до 100% альбуминов, до 80% гамма-глобулинов, а также проконвертин, проакцеле-

рин, участвующие в свертывании крови. Белковосинтезирующая функция в гепатоцитах обеспечивается рибосомами, хотя для метаболизма гепатоцита синтез белка и ферментов осуществляют свободные рибосомы и полисомы, для других целей - рибосомы, имеющие связь с мембранами эндоплазматиче-ской сети.

В обмене углеводов печени отводится одна из основных ролей. Кроме того, основной сахар (не менее 70%) сбраживается в рубце с образованием, прежде всего, пропионовой кислоты, которая в печени трансформруется в гликоген, а затем в щавелевоуксусную кислоту. Можно выделить следующие виды метаболизма углеводов, осуществляемые печенью: превращение галактозы в глюкозу, синтез и распад гликогена, процессы глюконеогенеза, в результате которых из соединений неуглеводного характера, образуется глюкоза, окисление глюкозы, а также печень является главным регулятором уровня сахара в крови (Бырка В.И., 1969; Карпенко Л.Ю., Тиханин В.В., 1998).

Липидный обмен, осуществляемый печенью, состоит из двух этапов -эмульгирования и гидролиза молекул триглицеридов под действием липаз (Топарская В.Н., 1970). Так, в клетках печени насыщенные жирные кислоты превращаются в ненасыщенные, там же образуются фосфолипиды, осуществляется метаболизм холестерола, синтез и выведение липопротеидов различной плотности (Кузнецов Н.И., Кудинова H.A., 2007; Мусил Я., 1985; Гулый М.Ф., 1961; Адамушкина Л.Н.,1984).

Пигментный обмен в организме зависит от функционального состояния печени. Этот обмен очень сложен и касается многих сторон жизнедеятельности организма. Особый интерес представляет в нем биотрансформация билирубина (Уша Б.В., 1979; Апинес С.Р., 1974; Антрушин М.С., 1958).

Гепатоциты участвуют в образовании и выделении жёлчи. Её физиологическое значение настолько многообразно, что при нарушении ее выделения в двенадцатиперстную кишку нарушается процесс усвоения углеводов, липидов, белков, обратная реабсорбция жирных кислот, моторная и секреторная функции кишечника. Жёлчь оказывает существенное влияние на вса-

сывание и депонирование витаминов: ретинола, кальциферола, токоферола, филлохинола (Фишер А., 1961; Тареев Е.М., 1965).

Обмен водорастворимых витаминов тоже связан с функцией печени, так как они входят в состав коферментов, участвующих в процессе гликолиза (Хазимухаметова И.Ф., 1986).

Печень осуществляет инактивацию гормонов, предотвращая их избыточное содержание. Поддержание кислотн