Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Фармако-токсикологические свойства гепавета и его применение в животноводстве

ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Фармако-токсикологические свойства гепавета и его применение в животноводстве"

На правах рукописи

ИВАНАСОВА ЕЛЕНА ВЛАДИМИРОВНА

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ГЕПАВЕТА И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ В ЖИВОТНОВОДСТВЕ

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

005550792

2 4 ИЮЛ 2014

Краснодар-2014

005550792

Работа выполнена в лаборатории терапии Государственного научного учреждения Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии и в хозяйствах Краснодарского края

Научный руководитель: Антипов Валерий Александрович, доктор ветеринарных наук, член-корреспондент РАСХН, заслуженный деятель науки РФ, профессор

Официальные оппоненты: Никулин Иван Алексеевич, доктор ветеринарных

наук, профессор кафедры терапии и фармакологии ФГБОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет имени императора Петра I»

Кильметова Инна Робертовна, доктор ветеринарных наук, доцент, заместитель директора по ветеринарии ООО «Поли вит»

Ведущая организация: ГНУ Всероссийский научно-исследовательский вете-

ринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии

Защита состоится «05» сентября 2014 г. в «1400» часов на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13.

Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» http://www.kubsau.ru «03» июля 2014 г. и официальном сайте ВАК РФ - http://vak.ed.gov.ru

Автореферат разослан »¿¿4й^£-2014года

Ученый секретарь

диссертационного совета Родин Игорь Алексеевич

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Качественный или количественный недостаток элементов питания в рационе, концентратный тип кормления, интоксикация (эндогенные и экзогенные токсины), недостаток одного, а чаще одновременно нескольких жизненно важных витаминов способствуют нарушению функции печени и гомеостаза в организме животных. Круглогодовое содержание животных в закрытых помещениях на ограниченных площадях, использование некачественных кормов, прошедших механическую и термическую обработку, сопровождаются нарушением обменных процессов, снижением защитных сил организма животных, уменьшением их продуктивности (Самохин В. Т., 1984; Антипов В. А., Трошин А. Н., 2010).

В практике уровень продуктивности животных, состояние в их организме обмена веществ и функции печени во многом определяются мероприятиями с применением витаминных и гепатотропных препаратов (Уша Б. В., 1979; Байматов В. Н., 2000; Кузнецов Н. И. и др., 1999, Кузьминова Е. В., Семенен-ко М. П., 2014). Гепатотропные препараты блокируют действие токсинов в организме животных, чем способствуют антитоксической функции печени и тем уменьшают в определенной степени, функциональную нагрузку на этот жизненно важный орган и предупреждают развитие нарушений его морфофункци-онального состояния (Колб В. Г., Камышников B.C., 1982; Левченко В. И., 1984; Байматов В. Н., 1990; Кузнецов Н. И., 1990).

Наиболее перспективной группой в этом направлении являются эссенци-альные фосфолипиды, которые входят в состав гепавета.

Оригинальный препарат гепавет, автором и производителем которого является компания ООО «ЮВИКС-ФАРМ» совместно с ЗАО «Премикс», предназначен для профилактики и лечения болезней печени животных и птиц. Поэтому изучение токсикологических параметров и фармакологических свойств гепавета, послужило основанием для выбора темы исследований.

Цели и задачи исследований. Целью настоящей работы является ранее не изученное комплексное исследование фармако-токсикологических свойств гепавета и экспериментальное обоснование его гепатопротекторной эффективности в птицеводстве и свиноводстве.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

- изучить основные токсикологические и фармакологические свойства гепавета;

- изучить параметры общетоксического действия гепавета на организм подопытных животных (острая, хроническая токсичность, местно-раздражающие свойства);

- изучить механизм фармакологического гепатопротекторного действия гепавета на биохимические показатели крови продуктивных животных;

- изучить профилактическую и лечебную эффективность гепавета на продуктивных животных.

Научная новизна. Впервые проведены комплексные токсикологические исследования и изучены основные стороны фармакологического действия гепавета, а также использование препарата в качестве гепатопротектора на сельскохозяйственных животных.

Впервые в результате проведенных экспериментальных исследований нового препарата гепавет разработаны его показания к применению при гепатозах в птицеводстве и свиноводстве.

Практическая значимость. Для сельского хозяйства и ветеринарной практики предложен новый препарат гепавет, обладающий выраженными гепа-топротекторными свойствами. Установленная фармакодинамическая характеристика может служить основанием его использования в условиях современной повышенной заболеваемости гепатозами и гепатитами. Гепавет рекомендуется применять в практике ветеринарии в качестве профилактического и лечебного средства при патологиях печени.

Данные проведенных нами экспериментов учтены при разработке НТД. Разработана временная инструкция по применению, утвержденная начальником Управления ветеринарии Краснодарского края В.Н. Шевкопляс. Препарат выпускает ООО «ЮВИКС-ФАРМ» (г. Краснодар).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Характеристика физико-химических свойств гепавета.

2. Экспериментальные данные токсикологических и фармакологических свойств гепавета.

3. Результаты изучения ростостимулирующего действия гепавета на птице и свиньях.

4. Результаты изучения лечебно-профилактических свойств гепавета на птице и свиньях.

5. Практические предложения по применению гепавета в ветеринарии.

Степень достоверности и апробация результатов. Экспериментально

полученный цифровой материал обрабатывали методом вариационной статистики с применением пакета прикладных программ Мсгада/г Ехсе1. Для получения достоверных результатов все опыты проводили повторно не менее трех раз.

Результаты экспериментальных и клинических исследований, являющихся основой диссертации, доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях Ученого совета Краснодарского НИВИ (2006-2011 гг.); на Международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИ-

ВИ «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях» (Краснодар, 2006); на Международной научно-практической конференции, посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани (Краснодар, 2011).

Публикации материалов диссертации. Основные материалы диссертации опубликованы в 5 научных статьях, 2 из которых - в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК Минобразования РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 123 страницах машинописного текста и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Список использованной литературы включает 143 источника, в том числе иностранных - 35. Работа иллюстрирована 35-ю таблицами и 19-ю рисунками.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в период с 2006 по 2013 год на базе лаборатории терапии ГНУ Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института, а так же в хозяйствах Краснодарского края: ЗАО «Премикс» Тнмашевского района, ООО «Кубанский бекон» Павловского района, ОАО племзавод «Индустриальный» Тимашевского района, ФГУП ППЗ «Русь» Кореновского района и ООО «Первомайская ИПС» Ленинградского района в соответствии с научной темапжой Краснодарского НИВИ (№ госрегистрацш 150703666026906.06.08.004.5).

В ходе исследований была проведена серия научных экспериментов и производственные испытания. Общая схема представлена на рисунке 1.

Кровь для морфологических и биохимических исследований брали от животных до кормления. При гематологических исследованиях проводили подсчет форменных элементов крови на автоматическом счетчике крови «Пико-скель» (ВР). Уровень гемоглобина определяли гемоглобинцианидным методом. Уровень глюкозы определяли с помощью наборов фирмы «¿вйдуЛеяю» (Финляндия), общий белок, креатинин и мочевину, а также активность щелочной фосфатазы - с помощью наборов фирмы «Диаком-Синтеко» (Россия). Уровень содержания и активность аспартат- и аланинаминотрансфераз определяли с помощью наборов фирмы «КОЫЕ» (Финляндия), уровень общего холестерина с помощью наборов фирмы «ЯАИООХ» (США).

Биохимические показатели и активность ферментов определяли на биохимическом полуавтоматическом анализаторе ФП-901, «¿аЬ.чу.Мепт) (Финляндия).

Острую и хроническую токсичность, в том числе раздражающее действие на слизистую оболочку глаза и кожно-резорбтивное действие гепавета определяли согласно методическим рекомендациям по изучению общетоксического дей-

ствия фармакологических средств, методическим указаниям по токсикологической оценке новых препаратов для лечения и профилактики незаразных болезней животных; ГОСТ Р 54063-2010 «Средства лекарственные для животных. Методы определения безвредности»; Методическим указанием по изучению общетоксического действия фармакологических веществ (Хабриев Р. У., 2005).

Рисунок 1 - Общая схема исследований Раздражающее действие препарата проводили в двух сериях опытов на 4 молодых кроликах-альбиносах, массой 2300-2700 г и 20 морских свинках массой 250-270 г в соответствии с Методическими указаниями по токсикологической оценке новых препаратов для лечения и профилактики незаразных болезней животных, разработанных сотрудниками ВНИИНБЖ (Воронеж, 1987).

Реакцию кожи учитывали ежедневно по шкале оценки проб через 1 час после удаления образца. После последней аппликации регистрировали состояние каждого участка через 5 мин, 30 мин, 1, 24,48 и 72 часа после снятия образцов.

Во второй серии опыта нами измельчался препарат до пылеобразного состояния и вводился в нижний отдел конъюнктивального мешка глаза кролику. Во второй глаз закапывали 0,1 мл дистиллированной воды в качестве контроля.

После инсоляции веки соединяли и удерживали в течение 1 сек. Осмотр обеих глаз кроликов проводили через 1, 24, 48 и 72 часа после воздействия и оценивали по приведенной шкале в ГОСТе.

Терапевтические свойства препарата проверяли на больных гепатозами животных и птице (цыплята-бройлеры), профилактические свойства исследовали на клинически здоровых животных. И здоровые, и больные животные, и птица, участвовавшие в экспериментах, подвергались клиническим испытаниям по общепринятым методикам.

Комплексные испытания велись с учетом условий кормления подопытных животных, их содержания и ухода.

При проведении экспериментов на больных животных учитывали их общее состояние, активность, снижение упитанности, замедление в росте и отставания развития.

Выводы о положительном влиянии препарата делали по полученным результатам комплексных клинических, биохимических, гематологических методов исследования.

Постановка опытов, состав рационов каждой группы животных и птиц (цыплят-бройлеров), представлен в работе. В экспериментах был использован концентратный тип кормления животных.

За всеми подопытными животными в период назначения гепавета вели клинические наблюдения и регистрировали их общее состояние, изменения аппетита, продуктивность, заболеваемость и сохранность животных. Показателем продуктивности считали прирост массы тела животных. Взвешивали животных индивидуально до применения препарата и по завершению опытов. Используя полученные данные, высчитывали средний прирост массы животного и его среднесуточный привес.

Для патоморфологического исследования образцы свежей ткани подвергали криостатированию с получением срезов в 5-7 мкм или фиксировали их в 10%-м нейтрализованном растворе формалина для получения в последующем парафиновых срезов толщиной в 2-5 мкм.

Обезвоживание, обезжиривание и проводку тканей с их уплотнением в парафинах с различной температурой плавления (37-57 °С) проводили в микропроцессорном автомате «Сакура» (Япония) по заранее составленной программе. Запивка тканей в парафин с воском и формирование тканевых блоков - ручным способом. Микротомирование парафиновых блоков тканей осуществляли с помощью санного (Россия) и ротационных (Райхерт, Австрия; АО-820, США) микротомов, что позволяло получить серийные срезы. После депарафинирования, срезы окрашивали гематоксилин-эозином, заключали в пихтовый (канадский)

бальзам под покровные стекла и готовили для визуального просмотра постоянные микропрепараты.

Результаты исследований проходили биометрическую обработку с помощью программного обеспечения фирмы Microsoft Excel 2007. Критерий достоверности определяли по таблице Стъюдента.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1 Фармако-токсикологическне свойства гепавета

Гепавет представляет собой сухой порошок серого цвета без запаха и вкуса. Для производства гепавета применяют следующее сырье и материалы:

1. Фосфолисан, полученный из пищевого фосфатидного продукта или фосфатидной эмульсии по ТУ 9146-002-57531875-2000.

2. Экстракты натуральные растворимые из растительного сырья по ТУ 9140-004-57531875-004.

3. Бентонит по ТУ 2164-002-00136716-2001.

4. Диацетофенонилселенид, получаемый организацией - производителем (ООО «Сульфат», г. Саратов) по ТУ, утвержденному Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия РФ, 02.07.1996 г.

5. Мука кормовая по нормативной документации.

Гепавет по содержанию токсичных элементов, микотоксинов, пестицидов, нитратов и нитритов, радионуклеидов, по микробиологическим показателям и токсичности не должен превышать нормативы, установленные ветери-нарно-санитарными требованиями, утвержденными в установленном порядке. Гепавет в воздушной среде в присутствии других веществ не образует токсичных соединений и в организме не аккумулируется. Хранят гепавет при относительной влажности 75 % - 6 месяцев со дня изготовления.

3.2 Оценка острой токсичности гепавета

Изучение токсичности гепавета проводили в остром опыте на лабораторных животных (крысах). С этой целью было взято 72 белых крысы массой 180-200 г.

Животных разделили на 9 групп по 8 крыс в каждой и поместили в специальные клетки для адаптации. Кормили животных полноценным кормом, состоящим из смеси пшеницы, овса, ячменя, подсолнечника. Доступ к воде - свободный.

Гепавет задавали с кормом, предварительно смешав его с вареным яичным желтком. Каждой группе соответствовала своя доза гепавета от 1,4 г/идо 24 г/кг. Контрольным животным 9-й группы вводили яичный желток в тех же количествах. Введение гепавета крысам в выше представленных дозах не вызывало каких-либо признаков интоксикации. У крыс не отмечали изменений

в поведении, сохранялись рефлексы. Гибель животных не зарегистрирована. Данные опыта представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Определение острой токсичности для крыс при применении гепавета

№ Масса тела, г Доза, г/кг массы тела Доза, г/ животное Смертность

1 187±2.08 1,4 0,26 _

2 190±1.15 2,1 0,40 _

3 189±3.04 3,2 0,61 _

4 194±3,12 4,7 0,91 _

5 _ 186±2.46 7,1 1,32 _

6 193±1.93 10,7 2,07 _

7 196±2,38 16,0 3,14 _

8 195±3,01 24,0 4,68 _

9 - - - -

При паталогоанатомическом исследование внутренних органов опытных крыс патологических изменений в организме животных обнаружено не было.

Гепавет по степени воздействия на теплокровных животных относится к веществам малоопасным 4 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76.

3.3 Параметры хронической токсичности гепавета

Исследования выполнены на 80 крысах массой 150-200 г, которые были разделены на 4 группы по принципу аналогов по 20 животных в каждой. Гепавет задавали с кормом, предварительно смешав его с вареным яичным желтком.

Первая опытная группа животных получала терапевтическую дозу гепавета (1 г/кг массы тела), вторая опытная группа - трехкратную дозу гепавета (3 г/кг массы тела), третья опытная группа - пятикратную (5 г/кг массы тела) дозу препарата Четвертая группа животных служила контролем.

В течение всего эксперимента отмечали изменения в общем состоянии и поведении животных (изменения массы тела, подвижность, аппетит, состояние шерсти и кожного покрова).

В начале, середине и конце опыта у крыс исследовали морфологический состав периферической крови, а также биохимические показатели сыворотки крови.

На протяжении хронического эксперимента не выявлено статистически значимых отклонений в количестве эритроцитов, тромбоцитов и уровне гемоглобина у животных, получавших гепавет, по сравнению с контролем. Также не замечено существенных изменений в уровне общего белка в сыворотке крови, что подтверждает стабильность белковообразующей функции печени.

Исследования активности аспартат- и аланинаминотрансфераз, щелочной фосфатазы сыворотки крови показали, что через 3 месяца введения крысам гепавета активность этих ферментов не выходила за пределы нормы для данного

вида лабораторных животных и поэтому ее колебания могут быть расценены

как функциональные.

Применение гепавета не влияло на уровень глюкозы, мочевины и креати-нина, а также уровень холестерина в крови опытных крыс.

При измерении массы тела крыс, выявили возрастание массы тела животных всех опытных групп. Отмечено, что максимальный прирост наблюдался при введении гепавета в дозе 3 г/кг массы тела. Непосредственно в первой группе прирост массы тела на 1 крысу составил 115,8 %, во второй - 121,9 %, а в третьей - 117,1 % по отношению к контролю.

Таким образом, по результатам проведенных экспериментов установлено, что в период длительного назначения препарата гепавет не только не оказывал негативного влияния на рост и развитие лабораторных животных, но и способствовал увеличению их массы тела.

3.4 Местно-раздражающее действие гепавета

Местно-раздражающее действие гепавета изучали на 4-х кроликах и 20 морских свинках. В период наблюдения за морскими свинками контролировали толщину кожной складки на месте аппликации, а в частности наличие эритемы, пузырей, микровизикул, определяли местную кожную температуру. Каких-либо изменений в месте аппликации гепавета не обнаружено как в период использования препарата, так и после его применения. Эластичность и упругость кожи подопытных животных оставалась в пределах нормы. При пальпации в местах аппликации болевая реакция не выявлена. Покраснения, отека кожи и геморрагии не отмечалось.

Кроликам под верхнее веко правого глаза вводили измельченный гепавет. Для контроля в левый глаз этим же животным закапывали дистиллированную воду. Через 5 мин у кроликов регистрировалось повышенное выделение слезы, которое исчезало через 15-20 мин. Наблюдение за животными велось в течение 14 дней. Гиперемии конъюнктивы, химатоза, помутнения роговицы и сужения зрачка не наблюдалось. Радужная оболочка оставалась без видимых изменений.

На основании всего перечисленного местно-раздражающую реакцию организма животных оценили как отрицательную.

3.5 Действие гепавета на биохимические и морфологические показатели животных

Изучение действия гепавета на морфо-биохимические показатели крови свиней проводилось на свиньях 122-дневного возраста в период откорма в сравнении с фосфатидным концентратом.

По принципу аналогов было сформировано 3 группы: 1-я опытная (26 голов - задавали с кормом 3 % фосфатидного концентрата); 2-я опытная -(26 голов - 5 % гепавета) и контрольная группа, которой никаких препаратов не давали.

Установлено, что при проведении опыта животные опытных групп вели себя активно и не страдали потерей аппетита.

Было установлено, что в контрольной группе вначале опыта отмечали уменьшение количества эритроцитов, а в дальнейшем данный показатель недостоверно возрастал. С 22-го дня было отмечено незначительное снижение количества эритроцитов, которое фиксировалось до завершения опыта. Нами также отмечалось, что количество гемоглобина у животных на начало опыта составляло в контроле 115,2±1,52 г/л, на момент завершения эксперимента снижалось до 112,45±0,45 г/л, в то время как в двух опытных группах количество гемоглобина крови увеличивалось к концу опыта до 108,2±1,47 г/л и 108,5±1,22 г/л соответственно.

Количество лейкоцитов в контрольной группе было ниже физиологической нормы и составляло на 20 день опыта 6,12±0,22 109/л, а на 60 день опыта 8,78±0,39 1 09/л, в то время как количество лейкоцитов у опытных животных было в пределах возрастной нормы.

Результаты биохимического анализа крови показали, что количество общего белка в опытных группах находилось в пределах нормы, чего нельзя сказать об этом показателе в контрольной группе. Он возрастал, начиная с 40 дня, превышая верхние границы нормы, и был выше, чем в опытных группах на 12,9 % относительно группы животных, которым применяли фосфатиды и на 4,2% по сравнению с группой, в которой применяли гепавет. В опытных группах показания общего белка находились в пределах нормы. В группе, получавшей гепавет, отмечено повышение количества общего белка в сравнении с начальными показателями в данной группе животных. Показания аланинами-нотрансферазы снизились на 21,5%, а аспартатаминотрансфераза на 44% в сравнении с контрольной группой.

Резюмируя выше приведенные результаты, мы отмечаем, что применение гепавета приводит к стабилизации функциональной работы печени и к нормализации биохимических и морфологических показателей крови.

Во втором опыте исследования гепавета были проведены на цыплятах-бройлерах кросса «CK Русь 6» с 7-го дня вылупления до 7-ми недельного возраста. В период выращивания цыплят-бройлеров использовали гепавет в дозе 5 % к корму и изучали его влияние на развитие и рост птицы.

Контрольную и опытную группы подбирали по принципу аналогов. В качестве сравнения использовали фосфотидный концентрат, как добавку к основному корму. По результатам опыта были получены следующие данные (таблица 2).

Таблица 2 - Содержание общего белка и белковых фракций, щелочной фосфатазы, кальция и фосфора в сыворотке крови цыплят-бройлеров, (п=20)

Показатели Группы

1 контрольная 2 опытная (фосфот.) 3 опытная (гепавет)

Общий белок, г/л 42,7±2,16 43,3±3,18 44,3±2,14

Альбумины. % 31,9±0.16 33,7±0,16 34,9±0,25

а-глобулины. % 18,8±1,13 18.2±4,18 17.2±3,21

В—глобулины. % 11,9±0.08 10.6±0,09 10,2±0,15

у—глобулины. % 37,4±5,15 37,5±5,18* 37,7±6,18*

Глобулины всего. % 68,1 66,3 65,1

Отношение альбуминов к глобулинам 0,47 0,51 0,54

Щелочная фосфатаза, Ед. 505.2±3.68 430,8±0,9 440,3±1,36

Кальций, ммоль/л 2,7±3,16 2.6±0,18 2,8±2,14

Фосфор, ммоль/л 2.01±0,07 1,96±1,07 1,98±0,07

АлАТ, Е/л 4,27±0.15 3,34±!,12 3,17±9,13*

АсАТ, Е/л 221,3±2,21 198,1±5,43* 183,8±8,83*

"Разница с контролем достоверна (Р< 0,05)

Согласно приведенным данным можно отметить незначительное повышение общего белка в опытных группах, которое превысило контроль на 1,4% и на 3,7 % соответственно. Небольшое повышение альбуминов в крови цыплят-бройлеров опытных групп на 5,6 % и на 9,4 % соответственно. Вероятно, содержание альбуминов повышает синтез белков в тканях. Отмечено незначительное повышение у-глобулинов, которое способствует повышению защитных функций организма. Щелочная фосфатаза в опытных группах находилось в пределах нормы и составила 430,8±0,9 Ед и 440,3±10,36 Ед, а в контрольной группе было выше нормы (505,2±3,68 Ед). Фосфор в контроле чуть превышал норму, но в опытных группах показания стабилизировались и составили 1,96±0,07 ммоль/л и 1,98±0,07 ммоль/л соответственно. Активность аланинами-нотрансферазы в группах, которых применяли препараты, была ниже контрольной на 21,8 % и 25,8 % соответственно. Активность аспартатаминотранс-феразы в опытных группах понижается на 10,5 % и на 17 % соответственно.

На основании полученных данных этого опыта можно судить о стабилизирующем действии гепавета на биохимический состав крови цыплят-бройлеров. Снижение активности трансаминаз указывает на отсутствие патологии печени у подопытной птицы.

3.6 Патморфология и ВСЭ при применении гепавета

Исследования были проведены на поросятах, которые участвовали в эксперименте по изучению морфо-биохимических показатели крови. Был проведен убой по 1-му животному в каждой группе (опытной и контрольной). При осмотре внутренних органов поросенка опытной группы, макроскопически па-тологоанатомических изменений не обнаружено. Расположение органов в полостях было анатомически правильным. Печень не увеличена, края ее заостренные. Капсула гладкая, блестящая. Цвет с поверхности и на разрезе темно-вишневый. Рисунок хорошо выражен, соскоб с поверхности разреза небольшой, кровянистый. Консистенция органа умеренно плотная. Желчный пузырь заполнен желчью темно-зеленого цвета, жидкой консистенции. Проходимость желчных протоков сохранена. Проведенные гистологические исследования печени животных, находящихся в опытной группе, указывают на отсутствие в ней различных патологических процессов. При гистологическом исследовании органов поросенка контрольной группы выявлена гидроническая дистрофия эпителия канальцев почек. В цитоплазме обнаружены вакуоли. Клетки увеличены в размере, округлой формы, в отдельных клетках наблюдается кариолизис.

В печени животного контрольной группы выявлена белковая зернистая дистрофия печени. В цитоплазме отдельных гепатоцитов отмечена ацидофильная зернистость. В отдельных местах наблюдалось дискомплексация балочной структуры, атрофия гепатоцитов.

Таким образом, данные исследований показали, что введение в корм свиней гепавета не оказывает токсического действия на органы и ткани и не вызывает в них структурных изменений.

По результатам ветеринарно-санитарной экспертизы, которая включала в себя органолептическую и дегустационную оценку мяса и бульона, а также биохимические исследования, состоящие из определения концентрации водородный ионов с помощью рН-метра, реакции на пероксидазу и с сернокислой медью в бульоне, установили, что использование гепавета в дозе 5 % к корму отрицательно не влияет на качество и вкусовые особенности мяса свиней.

3.7.Фармакологические свойства гепавета 3.7.1 Ростостимулнругощее действие гепавета

Исследования были проведены на цыплятах-бройлерах ППЗ «Русь». Зо-огигиенические и технологические параметры выращивания были идентичными для птиц и соответствовали технологическим нормам. Вся подопытная птица находилась в одинаковых условиях ухода, кормления и содержания, кроме

дополнительного включения в рацион опытных групп испытуемых препаратов. Схема научно-хозяйственного опыта приведена в таблице 3.

Таблица 3 - Схема опыта на цыплятах-бройлерах при применении гепавета

Группа Характеристика кормления

1-контрольная Стандартный комбикорм (СК)

2-я опытная СК + фосфотидный концентрат

3-я опытная СК + 1 % гепавета

О влиянии исследуемого препарата гепавет на организм подопытных цыплят судили по динамике массы. В таблице 4 приведены данные об изменении массы птиц.

Таблица 4 - Динамика массы и сохранность бройлеров при применении гепавета, г

Возраст, недель Группы

1-я контроль 2-я опыт (фосфотид.) 3-я опыт (гепавет)

2-я 157,6±2.21 159,1±3,72 155,1±2,11

3-я 413,6±7,65 424,3±3,01 425,6±3,22

4-я 793,3±4,05 822,1±3,48 808Д±2,05

5-я 1243,6± 1,97 1259,1±1,71 1238,6±1,39

6-я 1752,3±2.21 1755,1±2,07 1742,6± 1,06

7-я 2212,6±7,73 2250,1±1,48 2261,6±3,29

Сохранность, % 94 96 98

Так, к 7-ми недельному возрасту средняя масса цыпленка 3-опытной группы составила 2261,бг, что на 49г (2,2 %) превысило показатели контроля. Цыплята 2-й опытной группы по живой массе примерно были равны 3-й опытной группе. Следовательно, мы можем сделать вывод, что введение гепавета в количестве 1 % к корму оказало положительное действие на рост и развитие цыплят. Сохранность бройлеров всех подопытных групп была довольно высокой и находилась в пределах 94-98 %.

Также нами установлено, что суточный расход корма у цыплят-бройлеров третьей опытной группы, в которой применяли гепавет, постепенно увеличивается до 5-недельного возраста по сравнению с контролем. На 6-й неделе расход корма уменьшается на 1,36 %. К концу опыта расход корма в третьей опытной группе превышает контроль на 0,43 %. Установлено, что включение гепавета в кормосмеси для цыплят-бройлеров, способствует повышению перевариваемое™ и усвояемости питательных веществ корма. Положительное влияние гепавета отразилось на более высокой скорости роста опытной группы, по сравнению с контролем, при меньших затратах корма на прирост массы.

Исследование ростостимулирующего действия препарата гепавет проводили на свиньях 120-дневного возраста, порода - крупная белая. По принципу

аналогов было сформировано две группы - опытная (25 голов) и контрольная (23 головы).

Результаты проведенного опыта показали, что свиньи переносили применение препарата в указанных выше дозировках хорошо. Животные во все дни наблюдения были активными, поведением и аппетитом не отличались от поросят контрольной группы. Заболеваний среди поросят всех групп не регистрировали в течение всего срока опыта.

Полученные данные указывают, что препарат гепавет стабильно стимулирует рост массы тела свиней. Средняя масса тела опытной и контрольной группы составила 58 и 55,5 кг соответственно. Среднесуточный прирост в опытной группе на 21,7 % выше, чем в контроле.

Результаты исследований биохимии сыворотки крови в начале опыта, как в контрольной, так и в опытной группах у большинства животных, показали на наличие нарушения обменных процессов в организме, а в частности в печени, которые отразились в виде снижения содержания общих белков от нормы, снижения количества у-глобулинов и понижения а-глобулиновых фракций. После 30 дней опыта результатами исследований биохимии сыворотки крови установлено, что включение в рацион препарата оказало нормализующее влияние на обмен веществ и состояние печени свиней. У животных опытной группы на конец опыта уровень белковых фракций: альфа-, бетга-, глобулинов- стал выше на 8,2 % и 7,3 % по сравнению с контролем, количество гамма глобулинов поднялось на 31,5 % за период опыта ,тогда как в контроле этот показатель снизился. Наблюдалось понижение содержания билирубина на 4,6 % по сравнению с контрольными данными. Активность аланинаминотрансферазы (АлАТ) в сыворотке крови понижалась на 36,3 % по сравнению с фоном, а по сравнению с контролем на 43,1 %, уровень аспартатаминотрансфиразы понизился (АсАТ) на 43,1 % в сравнении с фоном за период опыта.

Таким образом, применение препарата свиньям в первый период откорма способствует лучшему усвоению корма, стимулирует рост массы тела, а также нормализует основные показатели работы печени в организме.

3.7.2 Действие гепавета на обменные процессы поросят-сосунов

Изучение проводили на глубоко-супоросных свиноматках и поросятах-сосунах. В первой серии опытов было подобрано 3 группы глубоко-супоросных свиноматок. Животным опытных групп за 15-20 дней до опороса назначали гепавет, свиноматкам первой группы (п=12) в дозе 1 % и второй (п=12) - 3 % гепавета к корму. Свиньям третьей группы (п = 35) препарат не назначали, и они служили контролем.

Данные свидетельствуют о том, что назначение гепавета глубокосупоросным свиноматкам положительно влияло на развитии новорожденных поросят. При опоросе свиноматок в контрольной и опытных группах количество поросят было практически одинаковыми по (9,2-10,1 поросенка на свиноматку). Осмотр новорожденных поросят, как в опытных, так и в контрольной группах показал, что поросята были хорошо и удовлетворительно развитыми. Однако уже к 30-дневному возрасту количество поросят на 1 матку в опытных группах было на 2,9-3,5 % больше, а хорошо и удовлетворительно развитых на 4,3-5,9 % больше.

К отъему в опытных группах свиноматок в помете в среднем было 8,7-8,75 поросенка, что на 7,2-7,8 % больше, чем в контрольной группе, а количество хорошо и удовлетворительно развитых - на 1,5 % и 8,6 % больше.

Таким образом, назначение гепавета глубоко-супоросным свиноматкам существенно сказалось: на приросте массы тела поросят к отъему. Поросята от свиноматок первой опытной группы, получавших гепавет в дозе 1 % к корму имели массу тела к отъему на 3,9 кг (на 38,6 %), а второй (3 % к корму) -на 2,1 кг (на 20,7 %) больше, чем свиньи контрольной группы.

Во второй серии опытов по применению гепавета под наблюдением находились 3 группы глубоко-супоросных свиноматок: контрольная и 2 опытные, по 10 голов в каждой.

Свиноматкам первой и второй опытных групп гепавет назначали в течение 10-15 дней до и после опороса в дозах соответственно 1 и 3 % к корму. Свиньям контрольной группы препараты не назначали. Результаты исследований представлены в таблице 5.

Таблица 5-Эффективность действия препарата гепавета на прирост поросят,(п-10)

Группы Доза гепавета (% к корму) Получено поросят на 1 свиноматку Масса тела поросят, дни Среднесуточный прирост, г

1 6 35

Контрольная _ 8,5 1,06 2,5 7,7 220

Опытная 1 1 8,75 1,12 2,8 8,2 234,3

% к контр. 102,9 105,7 112,0 106,4 106,5

Опытная 2 | 3 8,8 1,08 2,6 9,2 262,8

% к контр. 103,5 101,9 104,0 119,4 119,4

Данные таблицы 6 дают основание утверждать, что назначение свиноматкам гепавета до и после опороса благоприятно влияет на рост и развитие поросят. Так, масса тела поросят опытных групп на 6 день после рождения была на 0,1-0,3 кг (на 4,0-12,0%) выше, чем у поросят контрольной группы. Эта же

тенденция сохранилась и к 35 дню.

Среднесуточный прирост массы тела был наиболее высоким у поросят полученных от свиноматок опытных групп - на 19,4 % выше, чем у поросят контрольной группы.

Назначение гепавета свиноматкам до и после опороса способствовало значительному улучшению состояния обмена веществ в организме поросят опытных групп. Результаты гематологических и биохимических исследований проб крови от поросят на 20 день после их рождения отражают, что применение гепавета оказывает положительное влияние на организм животных, что проявляется увеличением в сыворотке крови общего белка на 19,5 %; 21,1 % и снижением в крови поросят количества лейкоцитов на 26,6 %; 20,4 % относительно контроля. Активность аланинаминотрансфераз снизилась на 30,8 %, 35,8 % в сравнении с контролем, активность аспартатаминотрансфераз снизилась на 68 %, 73,1 % в сравнении с контролем, что говорит о снижении патологии печени.

После 45 дней опыта изучена оплодотворяющая способность семени путем искусственного осеменения свиноматок разбавленными эякулятами.

Установлено, что у хряков, получавших комбикорм с 3 % гепавета к корму, объем эякулята, концентрация спермиев и их общее количество в эякуляте были выше, чем у животных других групп (таблица 6).

Таблица 6 - Качество спермы хряков после применения гепатета

Показатели Тип комбикорма

контроль опытна^

1-я 1 % П-я 3 % Ш-я 5 %

Уровень гепавета в составе комбикорма. % - 1 3 5

Кол-во исследованных эякулятов 48 48 48 48

Объем эякулята, мл 307 239,8 351 275,6

Концентрация спермиев, млн/мл 190 210 162 146

Общее кол-во живых спермиев в эякуляте, % 58,3 69,2 73,7 44,6

Оплодотворяющая способность семени (при двухкратном осеменении), % 76 78 79,4 78

Количество полученных спермодоз от одного хряка 187 189 236 223

Итак, объем эякулята в I опытной группе снизился на 21,9 %, во II опытной группе увеличился на 14,3 % и в III опытной группе уменьшился на 10,3 % в сравнении с контролем. Концентрация спермиев в I опытной группе увеличилась на 10,5%, во II опытной группе уменьшилась на 14,8% и в III опытной группе уменьшился на 23,2 % в сравнении с контролем. Общее количество спермиев в эякуляте в первой опытной группе выросло на 18,6 %, во второй опытной на 25,5 %, в третьей опытной уменьшилось на 23,5 % по сравнению с контролем. Увеличилась оплодотворяющая способность семени во всех опытных группах на 2,6 %; 4,4 % и 2,6 % соответственно. Количество полученных спермодоз выросло на 1 %, на 26,2 % и на 13,1 % соответственно. Снижение эффективности гепавета в других опытных группах скорее связано с известной закономерностью: при повышении липидов после определенного

уровня на каждый процент ввода в состав комбикорма необходимо увеличить на 0,5 % уровень протеина.

Оплодотворяющая способность спермы хряков всех подопытных групп составила 78 % и превысила на 4 % технологический норматив. Использование комбикорма с уровнем гепавета 3 % отмечено как более эффективное.

3.8. Лечебно - профилактическое действие гепавета 3.8.1 Лечебно-профилактическое действие гепавета при гепатозах птиц

Группа цыплят-бройлеров из 100 голов трехнедельного возраста была разделена на три равные группы. Первая группы была контрольной и получала обычный кормовой рацион. Во второй опытной группе цыплятам-бройлерам добавляли 3 % фосфотидный концентрат к основному корму. В третьей опытной группе добавляли гепавет 1 % к основному корму. В начале опыта четыре цыпленка было забито для взятия сыворотки крови. Цыплят всех групп подвергали систематическим исследованиям, в начале и конце опыта взвешивали. Данные представлены в таблице 7.

Таблица 7 - Динамика массы и сохранность цыплят-бройлеров при профилактике

гепатозов (п=32), г

Возраст, недель Группы

контроль % 2-я опытная (фосфотид.) % 3-я опытна (гепавет 1 %) %

3-я 403,5±5,03 100 426,3±5,02 105,6 428,7±8,21 106,2

4-я 793,8±3,25 100 821,2±6,41* 103,4 818,4±2,25 103,1

5-я 1243,3±9,93 100 1269,3±5,71 102 1280,6±3,41* 103

6-я 1738,3±2,25 100 1765,1±2,34 101,5 1748,6±4,36* 100,5

7-я 2212Д±3,72 100 2251,5±1,49 101,7 2281,7±3,26 103.1

Сохранность. % 69 100 85 130 94 136,2

"Разница с контролем достоверна (Р< 0,05)

К концу опыта средняя масса цыпленка 3-й опытной группы составила 2281,7±3,26 г, что на 3,1 % превысило показатели контроля. Был отмечен падеж животных, в контрольной группе погибло 10 цыплят-бройлеров, во 2-й опытной 2 цыпленка. Сохранность третьей опытной группы превысила контроль на 36,2 %.

Отсюда можно сделать вывод, что введение гепавета в количестве 1 % к корму положительно сказалось на росте и развитие цыплят. Использование гепавета в рационах исследуемой птицы оказало стимулирующее действие на развитие внутренних органов.

По данным убоя мы установили, железистый желудок цыплят-бройлеров, получавших гепавет, имеет большую массу, чем в контроле (на 8,6 %). Тогда как мышечный желудок у цыплят опытных групп имеет сниженную массу,

а в отношении развития кишечника у цыплят-бройлеров, получавших гепавет, масса его выше, чем в контроле, что создает условия для более полного усвоения питательных веществ рациона в организме подопытной птицы.

Вычисление процентного отношения массы печени цыплят к массе непотрошеной тушки установило, что печень составляет следующее отношение: 2-я опытная - 2,27 %; 3-я опытная - 2,12 %. Эти значения не выходят за пределы норм для птиц.

Показатели массы печени в опытных группах ниже на 15,7 %, чем в контрольной, так как гепавет оказывает благоприятное влияние на процессы обмена, происходящего в печени.

Анализ биохимических показателей сыворотки крови цыплят-бройлеров показал, что в течение опыта во всех группах цыплят-бройлеров показатели общего белка находились в пределах физиологической нормы. Опытная группа, получавшая фосфотидный концентрат, снизила показатели белка в сравнении с контролем на 3,4 %, а получавшая гепавет превысила на 4,4 % в сравнении с контролем. Альбумины в опытных группах увеличились соответственно на 12,5 % и на 15,6 % и составили 34,04±1,03 % и 34,98±0,12 %. Уверенно снизились показания у-глобулинов в опытных группах на 3,4 % и 12,1 % соответственно и составили 38,81±0,56 и 35,29±0,54. Аланинаминотрансфераза снизилась в опытных группах на 10,3% и на 17,2%, аспартатаминотрансфераза уменьшила свои показания в опытных группах соответственно на 6,5 % и 7,4 %. Общий билирубин снизился на 37,1 % и 39,5 % соответственно.

3.8.2 Лечебно-профилактическое действие гепавета при гепатозах свиней

Эффективность применения гепавета, с целью профилактики гепатозов проводилась на поросятах отъемного возраста в 60 дней. По принципу аналогов было сформировано 4 группы поросят крупной белой породы по 10 голов в каждой. Первая группа служила контролем. Поросятам второй группы внутримышечно вводили селенит натрия в дозе 0,1 мг/кг массы тела в виде 0,1%-ого водного раствора однократно. Поросятам третьей и четвертой опытных групп ежедневно скармливали гепавет в дозах соответственно 1% и 3% к корму. При наблюдении за поросятами общее состояние животных было удовлетворительным, аппетит хороший, щетина гладкая, не наблюдалось отклонений в поведении. Поросята контрольной группы были менее активны при поедании корма, отмечалась взъерошенность шерстного покрова, жажда. Падежа в данном опыте не наблюдалось. Результаты исследований изложены в таблице 8.

Данные свидетельствуют, что назначение поросятам гепавета положительно сказалось на их привесах. Так, среднесуточный привес у поросят второй

опытной группы был на 45,6 % больше, а в третьей на 72,5 %, чем у поросят контрольной группы.

Таблица 8 - Показатели продуктивности поросят-отъемышен после назначения

им разных доз гепавета

Группы Препарат Масса тела (кг) Среднесуточ н ы й прирост массы, г

до опыта после опыта

Контрольная _ 7,2 12,4 186,0

Опытная 1 селенит № 0.1 % р-р, 0,1 мл/кг 10,2 14,2 183,0

Опытная 2 гепавет 1 % к корму 6,0 13,6 271,0

Опытная 3 гепавет 3 % к корму 7,8 16,8 321,0

О степени дистрофических изменений в печени судили по активности трансфераз, снижение уровня которой во второй и третьей опытной группе говорило о положительном влиянии гепавета на функцию печени. Так апанина-минотрансфераза снизилась на 32,5 % и на 29,9 % соответственно^ аспартата-минотрансфераза снизилась на 22,7 % и на 27,8 %, соответственно в сравнении с контролем.

Научно-производственный опыт по применению гепавета в качестве про-филактирующего средства гепатозов у молодняка свиней в период доращива-ния проведен на поросятах 3,5^1-х месячного возраста.

Результаты свидетельствуют, что за время проведения опыта масса тела поросят в контрольной группе увеличилась на 5,2 кг, а в опытной группе - на 10,7 кг, что почти в 2,1 раза больше. Падежа поросят в опытной группе не наблюдалось, в то время как в контроле три поросенка пало. Кроме того, назначение поросятам гепавета способствовало значительному улучшению их общего состояния.

По результатам биохимического анализа крови поросят нами отмечено, что повысилось содержание общего белка на 63,6 % в опытной группе, количество альбуминов выросло на 13,9 %. Также отмечается в опытной группе понижение гамма-глобулинов по отношению к фоновым данным на 44,3 %. Нами выявлено, что после применения препарата происходит понижение аланинаминотрансфера-зы по сравнению с фоновыми показателями на 32,3 %. Также отмечено снижение аспартатаминотрансферазы на 35,1 % по сравнению с фоновой группой.

Таким образом, проведенные биохимические исследования крови до постановки опыта, дают нам основание утверждать о возможном развитии у поросят гепатоза, а использование гепавета в качестве профилактического нормализует показатели крови и снижает риск заболеваемости поросят гепатозом, повышая при этом привесы и снижая падеж.

выводы

1. Гепавет, новый отечественный препарат, представляет собой сухой порошок серого цвета без запаха и вкуса. В состав гепавета входят: фосфолисан, растительные экстракты натуральные, бентонит, диацетофенонилселенид, мука кормовая.

2. Гепавет является малотоксичным препаратом для животных, и в острых, и в хронических опытах гепавет не вызывал гибели животных в диапазоне доз от 1,4 г/кг до 24 г/кг массы тела. Также для гепавета не выявлена средне-смертельная доза (иэ50) и доза, провоцирующая появление клинической картины токсикоза, что по ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества» дает возможность отнести его к 4-му классу опасности (малоопасные вещества).

3. Длительное введение гепавета в дозах 1 г/кг; 3 г/кг; 5 г/кг не оказывает отрицательного воздействия на общее состояние подопытных животных и изменения их клинического статуса, на функциональную активность печени, на процессы пищеварения и мочеотделения, на работу центральной нервной системы, на морфологические и биохимические показатели крови и на патомор-фологию внутренних органов.

4. Гепавет не проявляет местного раздражающего действия, не нарушает физико-биохимических свойств, а также и вкусовые качества мяса.

5. Гепавет обладает хорошо выраженной фармакологической активностью, нормализующей основные виды обмена веществ, в том числе белкового - за счет увеличения показателей от 20 % до 60 %. Повышает синтеза белка в организм в результате увеличения альбуминов до 15% в сыворотке крови.

6. Гепавет оказывает выраженное ростостимулирующее действие при выращивании цыплят-бройлеров, увеличивая среднесуточный прирост массы на 11,29% при введении в объеме 1 % к корму, уменьшая при этом затраты корма на 1,53 % на 1 кг прироста. При введении 1 % гепавета к корму свиньям среднесуточный привес увеличивается в среднем от 19 % до 27,6 %, уменьшая затраты на 1 кг прироста на 9 %.

7. Гепавет повышает оплодотворяющую способность хряков-производителей на 3,4 %, а количество живых спермиев увеличивает на 26,4 % при введении 3 % препарата к корму.

8. Гепавет обладает профилактической и лечебной эффективностью при ге-патозах цыплят-бройлеров и поросят. Под действием препарата прекращается падеж, исчезают признаки заболевания, увеличивается прирост массы тела у цыплят-бройлеров на 3,1 %, у поросят на 33 %, происходит увеличение белка у цыплят-бройлеров на 4,4 %, у поросят на 21,1 % и 63,6 %, происходит снижение аланина-минотрансферазы у цыплят-бройлеров на 32,5 %, у поросят на 57,4 %, снижение аспартатаминотрансферазы у цыплят-бройлеров на 27,8 %, у поросят на 52,1 %.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для практического животноводства и ветеринарии предлагается препарат гепавет. Это малотоксичный препарат, очень удобный для группового применения, обладающий хорошо выраженным гепатопротекторным действием. Препарат гепавет рекомендуется для профилактики и лечения болезней печени животных в дозе 1 % и 3 % к корму. Применение препарата регламентируется временной инструкцией по применению, утвержденной начальником Управлении ветеринарии Краснодарского края.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Якимов, Г. В. Эффективность гепавета при гепатозах свиней / Г.В.Якимов, В. А. Антипов, Б. В. Иванасова // Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях». -Краснодар. - 2006. - С. 93-94.

2. Антипов, В. А. Применение гепавета в птицеводстве / В. А. Антипов, Е. В. Иванасова, В. В. Чикова // Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях». - Краснодар. - 2006. - С. 260-261.

3. Антипов, В. А. Влияние фосфолипидов на резистентность и продуктивность свиней / В. А. Антипов, Е. В. Иванасова // Труды Кубанского государственного аграрного университета. - 2009. - № 1. - Ч. 2. -С. 236-237.

4. Антипов, В. А. Использование препарата гепавет при выращивании цыплят-бройлеров // В. А. Антипов, Е. В. Иванасова // Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани «Актуальные проблемы современной ветеринарии». - Краснодар. - 2011. - Ч. 1. - С. 19-20.

5. Иванасова Е. В. Оценка эффективности премикса гепавет при профилактике гепатозов поросят-отьемышей /Е. В. Иванасова // Ветеринарный врач - Казань. - 2014. - № 3. - С. 47-50.

Подписано в печать 10.07.2014г. Бумага офсетная Печ. Л.-1 Тираж ЮОэкз

Формат 60X84 1/16 Офсетная печать Заказ№ 207

Отпечатано в типографии «Нонпарель» 350000, г. Краснодар, ул Красноармейская, 64, лит.В

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Иванасова, Елена Владимировна, Краснодар

Государственное научное учреждение Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук

На правах рукописи

ИВАНАСОВА ЕЛЕНА ВЛАДИМИРОВНА

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ГЕПАВЕТА И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ В ЖИВОТНОВОДСТВЕ

06.02.03 - Ветеринарная фармакология с токсикологией

Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, член-корреспондент РАСХН, заслуженный деятель науки РФ профессор Антипов Валерий Александрович

Краснодар - 2014

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ......................................................................................................................................................3

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ................................................................................................................................7

1.1 Фосфолипиды и их роль в организме животных и человека........................7

1.2 Характеристика основных компонентов фосфолипидов................................15

1.3 Применение фосфолипидов в животноводстве и птицеводстве..............25

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ............................................................34

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ................................................41

3.1 Фармако-токсикологические свойства гепавета......................................................41

3.1.1 Состав, физико-химические свойства гепавета..........................................41

3.2 Оценка острой токсичности гепавета..............................................................................45

3.2.1 Параметры хронической токсичности гепавета......................................44

3.2.2 Местно-раздражающее действие гепавета................................................55

3.2.3 Действие гепавета на биохимические и морфологические показатели животных........................................................................................................................54

3.2.4 Патморфология и ветсанэкспертиза при применении гепавета 59

3.3 Фармакологические свойства гепавета..............................................................................64

3.3.1 Ростостимулирующее действие гепавета......................................................64

3.3.2 Действие гепавета на спермопродукцию хряков....................................74

3.3.3 Действие гепавета на поросят-сосунов..........................................................76

3.4 Лечебно-профилактическое действие гепавета при гепатозах птиц... 79 3.4.1 Лечебно-профилактическое действие гепавета при гепатозах свиней..........................................................................................................................................................88

3.5 Экономическая эффективность гепавета при использовании

в животноводстве........................................................................................................................................94

ЗАКЛЮЧЕНИЕ..................................................................................................................................................99

ВЫВОДЫ................................................................................................................................................................107

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ............................................................................................109

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ........................................................................................................................110

ПРИЛОЖЕНИЯ................................................................................................................................................123

II л

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В специализированных хозяйствах с промышленной технологией производства, в птицеводстве и свиноводстве, одной из основных проблем является организация полноценного кормления.

Качественный или количественный недостаток элементов питания в рационе, концентратный тип кормления, интоксикация (эндогенные и экзогенные токсины), недостаток одного, а чаще одновременно нескольких жизненно важных витаминов способствуют нарушению функции печени и гомеостаза в организме животных. Круглогодовое содержание животных в закрытых помещениях на ограниченных площадях, использование некачественных кормов, прошедших механическую и термическую обработку, сопровождаются нарушением обменных процессов, снижением защитных сил организма животных, уменьшением их продуктивности (Самохин В. Т., 1984, Антипов В.А., Трошин А.Н.,2010).

Печень - как основной орган процессов метаболизма, обмена многих гормонов, витаминов, ферментов и микроэлементов, нейтрализации эндогенных и экзогенных токсинов, часто не выдерживает функциональной нагрузки, в результате чего возникают гепатодистрофические процессы. Поэтому в практике интенсивного ведения животноводства уровень продуктивности животных, состояние в их организме обмена веществ и функции печени во многом определяются мероприятиями с применением витаминных и гепатотропных препаратов (Уша Б. В., 1979; Байматов В. Н., 2000; Кузнецов Н. И. и др., 1999, Кузьминова Е.В., Семененко М.П., 2014).

Гепатотропные препараты блокируют действие токсинов в организме животных, чем способствуют антитоксической функции печени и тем уменьшают, в определенной степени, функциональную нагрузку на этот жизненно важный орган и предупреждают развитие нарушений его морфофункционального состояния (Колб В. Г., Камышников В. С., 1982; Левченко В. И., 1984; Байматов В. Н., 1990; Кузнецов Н. И., 1990).

Всестороннее решение проблемы обменных процессов в организме и функционального состояния печени за счет введения в рацион гепатотропных препаратов представляет важный резерв повышения эффективности отрасли. В первую очередь, настоятельно требуется система расширения арсенала и рациональных способов использования с лечебно-профилактической целью биологически активных веществ.

На сегодняшний день поиск, разработка и внедрение в современную ветеринарную практику новых гепатопротекторных препаратов продолжает оставаться актуальным. Это вызвано тем, что разработка методов лечения, направленных на восстановление утраченных функций печени, нуждается в таких препаратах, которые обладают эффективными фармакологическими свойствами, малой токсичностью и незначительным побочным действием, и небольшой себестоимостью (Оковитый С. В. и др., 2010).

Наиболее перспективной группой в этом направлении являются эссенци-альные фосфолипиды, которые входят в состав гепавета.

Оригинальный препарат гепавет, автором и производителем которого является компания ООО «ЮВИКС-ФАРМ» совместно с ЗАО «Премикс», предназначен для профилактики и лечения болезней печени животных и птиц. Поэтому изучение токсикологических параметров и фармакологических свойств гепавета, послужило основанием для выбора темы исследований.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является ранее не изученное комплексное исследование фармако-токсикологических свойств гепавета и экспериментальное обоснование его гепатопротекторной эффективности в птицеводстве и свиноводстве.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

- изучить основные токсикологические и фармакологические свойства гепавета;

- изучить параметры общетоксического действия гепавета на организм подопытных животных (острая, хроническая токсичность, местно-раздражающие свойства);

- изучить механизм фармакологического гепатопротекторного действия гепавета на биохимические показатели крови продуктивных животных;

- изучить профилактическую и лечебную эффективность гепавета на продуктивных животных.

Научная новизна. Впервые проведены комплексные токсикологические исследования и изучены основные стороны фармакологического действия гепавета, а также использование препарата в качестве гепатопротектора на сельскохозяйственных животных.

Впервые в результате проведенных экспериментальных исследований нового препарата гепавет разработаны его показания к применению при гепатозах в птицеводстве и свиноводстве.

Практическая значимость. Для сельского хозяйства и ветеринарной практики предложен новый препарат гепавет, обладающий выраженными гепатопро-текторными свойствами. Установленная фармакодинамическая характеристика может служить основанием его использования в условиях современной повышенной заболеваемости гепатозами и гепатитами. Гепавет рекомендуется применять в практике ветеринарии в качестве профилактического и лечебного средства при патологиях печени.

Данные проведенных нами экспериментов учтены при разработке НТД, препарат выпускает ООО «ЮВИКС-ФАРМ» (г. Краснодар).

Апробация работы. Результаты экспериментальных и клинических исследований, являющихся основой диссертации, доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях Ученого совета Краснодарского НИВИ (2006-2011гг.), на Международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях» (Краснодар, 2006), на Международной научно-практической конференции, посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани (Краснодар, 2011).

Публикации. Основные материалы диссертации опубликованы в 5 научных статьях, 2 из которых - в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК Минобразования РФ.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- характеристика физико-химических свойств гепавета;

- экспериментальные данные токсикологических и фармакологических свойств гепавета;

- результаты изучения ростостимулирующего действия гепавета на птице и свиньях;

- результаты изучения лечебно-профилактических свойств гепавета на птице и свиньях;

- практические предложения по применению гепавета в ветеринарии.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 123 страницах

машинописного текста и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений, списка литературы. Список использованной литературы включает 143 источника, в том числе иностранных - 35. Работа иллюстрирована 35-ю таблицами и 19-ю рисунками.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Фосфолипиды и их роль в организме животных и человека

Фосфолипиды, фосфотиды, сложные липиды, отличительным признаком которых является присутствие в молекулах остатка фосфорной кислоты. Фосфолипиды состоят из глицерина, жирных кислот, альдегидов и азотистых соединений. Одним из важнейших представителей фосфолипидов является фосфатидил-холин (лецитин).

Фосфолипиды широко распространены в природе. В качестве основных структурных компонентов они входят в состав клеточных мембран животных, растений и микроорганизмов, определяя их строение и проницаемость, а также активность ряда локализованных в мембранах ферментов (Ленинджер А. А., 1974).

Фосфолипиды являются структурным элементом митохондрий и называются «эссенциальными» (незаменимыми), так как необходимы для роста, развития и надлежащего функционирования всех соматических клеток. В дополнение к их роли в строительстве клеточных мембран можно сказать, что фосфолипиды -важные составляющие липопротеидов, «легочных сурфактантов» и желчи. Они принимают участие в работе нервной системы, в мембранных ферментативных реакциях, играют важную роль в метаболизме и окислительных процессах и влияют на концентрацию холестерина в крови (Ушкалова Е. А. 2003).

Фосфолипиды, находящиеся в тромбоцитах, принимают участие в процессе свертывания крови, что в конечном итоге показывает их влияние на защитную функцию крови и гемодинамику в организме млекопитающих. Химическая структура фофолипидов, их дифильность, наличие заряженных групп определяет уникальность их физиологических свойств. Но главная функция фосфолипидов - формирование двойного липидного слоя в мембранах клеток (Скатков С. А., 2001).

X. Бергнер (1973) считает, что фосфолипиды и белки являются важнейшими структурными компонентами клеточных мембран. С соотношением и молекулярной формой отдельных подклассов структурных липидов связаны важнейшие

функции биологических мембран: ферментативная, барьерно-транспортная, а также функция биологического распознавания.

Фосфолипиды также обладают внекалорийным эффектом и в определенных условиях стимулируют рост и производительность животных. Фосфолипиды выполняют защитную роль. Являются основой ряда биологически активных веществ - гормонов, служат источниками незаменимых жирных кислот, принимают непосредственное участие в связывании ферментов с внутриклеточными структурами, способствуют ретенции азота и т.д. (Бергнер X., Кетц X. А., 1973).

«Эссенциальные» фосфолипиды представляют собой высокоочищенную фракцию фосфатидилхолина, выделенную из бобов сои. Несмотря на их схожесть с эндогенным фосфатидилхолином по химическому строению, «эссенциальные» фосфолипиды отличаются от него очень высоким содержанием полиненасыщенных жирных кислот.

«Эссенциальные» фосфолипиды встраиваются в мембраны клеток печени и их органеллы, замещая эндогенные фосфолипиды. Улучшаются свойства «текучести» мембран, а также их функции, например, активность ферментных систем в митохондриях или эндоплазматическом ретикулуме. Встраиваясь в мембраны тромбоцитов, «эссенциальные» фосфолипиды повышают их эластичность. Под их воздействием снижается повышенная тенденция тромбоцитов и эритроцитов к адгезии и агрегации, являющаяся результатом повышенного накопления холестерина в мембранах и аккумуляции окисленных липидов. Улучшаются реологические свойства крови (Кузьминова Е.В., 2014).

По данным Бодровой О. В. (2000) в организм человека поступает в сутки 1-2 г фосфолипидов; еще примерно 10-12 г попадает в тонкий кишечник с желчью, где все они подвергаются расщеплению и всасыванию. Больше всего фосфолипидов находится в тканях головного мозга и нервов; в 2 раза меньше - в печени; еще меньше — в почках и сердце.

Установлено, что фосфолипиды непосредственно принимают участие в иммунологических процессах, в реакциях, связанных с системой свертывания крови, в пролиферации и восстановлений клеток, в проведении импульсов по

нервным тканям и многих других процессах, которые интенсивно исследуются в последние годы.

Если рассматривать сам липидный обмен, фосфолипидам принадлежит огромное значение в формировании липопротеидов (непосредственно липопротеи-дов высокой плотности, где их количество максимально).

Образование фосфолипидов происходит практически во всех тех же органах, но наиболее продуктивно - в печени и клетках кишечника. Наибольшее количество фосфолипидов приходится на фосфотидилхолин (лецитин), азотсодержащее основание которого - холин. Установлено, что если долгое время не покрывается пищевая потребность в холине, то вместо образования фосфолипидов происходит сдвиг в сторону образования липопротеидов, содержащих огромный процент таких липидов, как триглицериды и холестерин, которые вызывают жировую инфильтрацию печени (Кильметова И. Р., 1993).

Катаболизм фосфолипидов возможен во многих тканях организма под действием специальных ферментов (фосфолипаз). Главные липиды в плазме крови человека присутствуют в комплексе с белками, синтезируя сложные соединения - липопротеи-ды, которые выполняют функцию транспорта и запасания липидов, являются незаменимой составляющей различных структур клетки (Бодрова О. В., 2000).

Фосфолипиды являются одним из основных компонентов биомембран, среди них есть биологически активные вещества, они довольно широко используются в пищевой и фармацевтической промышленности. Различают два основных фосфолипида - это фосфатидилхолин и фосфатидилэтаноламин. Основным является фосфатидилхолин, его содержание обычно составляет не менее 50 % суммы фосфолипидов.

Вторым по значению фосфолипидом у животных обычно является фосфатидилэтаноламин. Однако, по данным В. Е. Васьковского (1997 г.), в эритроцитах некоторых животных, а в частности овец, фосфатидилхолин заменяется сфинго-миелином (рисунок 1).

н*с—о—со—к,

НС-0-СО--Л;

.0

—о—^-0—СН^-Щ—1Г— щ

сн

Рисунок 1 - Химическая структура фосфатидилхолина

Отечественными и зарубежными учеными доказано, что фосфолипиды активно участвуют в процессе свертывания крови. Мембрана тромбоцита представлена двойственным слоем фосфолипидов и находящимися между ними белковыми молекулами. Молекулы фосфолипидов способны перемещаться по слою или с одной стороны на другую. Такие превращения способствуют адсорбции и последующей активации факторов свертывания и защите их от ингибирующего действия антитромбина III.

Присоединение индуктора активации к своему рецептору на поверхности тромбоцита активирует фосфолипазу С, которая путем отщепления от фосфолипидов мембраны диацилглицерола и инозитолтрифосфаты, способствует высвобождению ионов Са2+ из системы плотных канальцев в цитоплазму, а также активации фосфолипазы А2.

В цитоплазме Са соединяется с кальмодулином и образует комплекс, активирующий сократительную систему филаментов: тромбоцит из дискоидного превращается в шиповидно-сферический, в это время перефирически расположенные микротубулы перемешаются в центр клетки, увлекая за собой гранулы.

Активированная фосфолипаза А2 отщепляет от фосфолипидов мембраны свободную арахидоновую кислоту. Из нее путем метаболических превращений образуется тромбоксан, который вызывает высвобождение содержимого тромбо-цитарных гранул, локальный сосудистый спаз�