Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Факторы, влияющие на выживаемость эмбрионов крупного рогатого скота при нехирургической пересадке

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Факторы, влияющие на выживаемость эмбрионов крупного рогатого скота при нехирургической пересадке"

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО НАУЧНО-ИССЛНДОВАТЬЛЬСКЗ'1}-': И Р.СП ЖИВОТНОВОДСТВА

На правах рукописи Для служебного пользования

Тарааайник Татьяна Егоровна

ФАКТОРЫ, ВЛИЯЮЩИЕ НА ВЫЖИВАЕМОСТЬ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ПРИ НЕХПРУгП!Ч£СКОЙ

ПЕРЕСАДКЕ

03.00.13 - физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

п. Дубровины Московской области 1992

Раоота ватоляеаа во Всероссийском научао-ксследовательског лйстстуте животноводства.

Нэучккй руководитель - доктор оиодогическах наук

профессор Сергеев Н.И.

Офлшальныв онпоненгы: доктор бсолох-ичезхах наук

Башкеев Е.Д.

кандидат бяологжчеоккх наук Советккн C.B.

Вйдучее предприятие - Высшая селекционная генетическая

школа

Занята состоится " " iHÜÓЬ 1992 г. в 10 часов на заседании специализированного Совета Д.020.16.02 при ВШИ хнБотнэво детва

Адрес: I42012, дубровицы Подольского района Московской области.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института, ^¡торэферат разовая " /^ " /ШлЩлЯ^IS92 г.

Ученей секретарь специализированного Совета кандидат биологических наук

И.И. Шыыган

I. ОБГЛЯ ХАРАКЕШКЛШ РЛЕОтл

/кгуяльность. йнтэнся|:якапкя :таЕСть*ово~стза оСусловлгэзог >бход;с.:ость ускорения тестов воспроизводства крупного рогатого телзтельяого тпла от Еысскощюдуктявншс коров ендзкцлх-бкхов-производителей.

Одним пз перспективных путей интенсивного иснользовангл гэ-;ического потенциала самок з условиях крупномзсзтабной селок-! в скотоводстве на современном этапе является транеялзггтация ¡р;гонов ценнкх в племенном отношения коров. Метод позволяет стать коэффициент разложения высокоценных животин:* в 2-5 I а соответственно повысить селекционной эфЬект на ярЗ.

Однако многие вопросы трансплантация эмбрионов недостаточно чекк," что сдеркявает широкое внедрение метода в практ^ тс-.-новодства. Глэвяш тормозом является относительно пешеокл?' л о лрлгодннх для пореездкя эмбрионов,- получаошх от доноров.

Установлено,- что определенный процент гибели эмор;;онов гда алеет место независимо от метода, и чем большему эоздеи-¡го подвергается эмбрион в процессе трансплантации, тем выше аюнальная смертность. По мере совершенствования метода ре-ьтаты становятся успешней. Следовательно, некоторые вредные горк могут быть определена и устранены.

Однако существу внешних прятан, влияющих на выживаемость рлсаоБ крупного рогатого скота уделано мало внимания и она эст-угочно изучена. Кроме того,'-практически невозгдашо подоб-

дглв пару хквотнцх, чтобы все факторы были аналогичны, одна па причин значительной вариабельности реакции яичников ж на генядотрошко препараты и ни хода пригодных для транс-ггш'ии эмбр;гоноа. устранение или хотя бы сокращения числа

потзрь эиЗряояов яз-зз внешних л внутренних дактороз нео5и прежде всего определять рэзт.1ер этих потерь, гричины к врем действия.

Мель йсслэзо'ваняЗ ззклзчзлась е определенна причин п < на влияния на нлзнеспозобнэсгъ эмбрионов -внеаних факторов,-данных со все..ш звеньями технологии нехирургпческой гранен; ол эмбрионов.

Прз этом были посгазлена следующие задача:

- изучить влияние нз качество эмбрионов и их прннявдж у реципиентов разных схем гормонального вызывания суперову. у доноров с учетом тяпа и доза гонадотронина, разнях сочег гормональных препаратов; дня обработки от начала астрально] цякла, качества язятого тела в яичниках}

- выяснить степень влияния температурного фактора пра лучении эмбрионов, продолкательноста иг подготовки для пер! ки или криоконсервнрования, пересадки на ферме и в лаборак

- определить влияние стадия развития," качествау слов] хрзнэкая эмбрионов нз их пригивяяамость пра нехирургичесш ресадхе;

- изучить возмояность повышения прпгизлязмости эмбрио: путем усиления эмбрионального сигнала добавкой к эмбриону : ток эмЗриогрофобласта

Каучкэя новизна работы состоят в определения степени ния экзогенных факторов на жизнеспособность эмбрионов круп рогатого скота при нехирургяческой пересадке; в изучении в носгей повышения пригивляемости путам введения в среда с ■ оно« клеток эмбриотрофэбласта.

ГКяктгтчеокоо значение работы состой? в разработке способов» эзеолящих снизить степень влияния некоторых экзогенных факто-эв на зазне дособность эмбрионов я полечить более 50% стельнос-эй при нехирургичэской пересадка свежаполучеяшх и заморожонно-гтаянных эмбрионов.

Аггообапия таботы. Результата исследований докладывались на ¡игодных конференциях молодых ученых (г.фпкин,- 1937, г.Харысов, Э88, П.Дубровяцы, 1988,- 1991).

Объем работы. Диссертация залогена на 101 странице* иплношюного текста. Состоит из введения^ обзора литературы,-•бственных исследований и результатов, выводов и практических юдлояеяий. Иллюстрирована 17 таблицами и 5 рисунками, ясок использованной литературы включает 240 наименований,' том числе 147 иностранных.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОД» ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проведены в опытных хозяйствах ВИЕа "Щапово" "Дубровицы" Московской области, ь колхозах "Новая жизнь",им. И.Ленина Тульской области. В опытах использовала лакирующих ров черно-пестрой порода с продуктивностью от 4,5 до 8,"5 тыс. молока за лактацию. Была также создана группа постоянных до-ров высокопродуктивных коров из числа выбракованных дая много-зтного использования.

В качество реципиентов использовали телок случного возрас-швицкой и черно-пестрой породы живой массой 350-380 кг.

Для гормонального вызгаания суперовуляции у коров применя-ш> таяний про парат СЖК, полученный в НЕЙ," лиофилизировакную \ Пикиоьского биокомбинзта (серия 4); стандартный препарат { "'-{елл;:гон", гипскрязарнш'} гормон ФСГ—п (США), фолликотропин

г фолдотрохпя (Хэтва) и с сочетай;:;: гонздогрсп^ны СОЙ гоном.

Препараты* ФСГ внолил:: по 4-х п 2~днсвкой схема« с а< зозанпем рззких доз. Простзгландин "зстрофан" В£Од:ш: ли дозэ 500 мкг однократно, либо в дозе 750 ¡.:кр. дез:-г^к (500 250 жг).

йзвяэчекае эмбряозоз, оценку ях . качества проводят •детодякем ЗИЕэ.

Переса жвал:; эмбрионы реципиентам с помощью' катетер ш •• я "Кассу" на пунктах трансплантация и

родст-векно на Фермах.

Для усиления эибргоситнала использовала условно год дагенерлрованяыо эмбрионы, которые пересакивали'в одной с основными эмбрионами. £яя получения клеток трофо- и эк блгета использовал:г поздние морулы л ранние бластоцистн врезденной зоной педлацида. Элбрион ¿'нксдрозалк в кзплэ с помощьв вакуумной системы. Металлической иглой раьреза оболочку и удаляли сстороннш шшетирозакием. Внутренних кую массу долили иглой п пересаживали вместе о пригодны?; онами в сдноЗ соломинке. для повеления прзяипяяеиости э.\ группе реципиентов после перссадкя вводили внутришиечне 5 мл масляного раствора прогестерона,

2. РЕЗУЛЬТАТА КССгРДОВ.АЕЙ

3.1. Зднтт рэгялчшк способов пржонечля гор'¿она; т;рзюраюв для вызывании су перову лтяз на клзнеспосоояос ЭМбрЯОНС-Я.

Кэт^с-Л".» способ!! гор:.;с<п- л'.нсго .

у донор:, а ко поьлол'^с ¡ю;..^:';.":^:;^.': р..>>.

г 25-35? животных, а индупарозэлие высокой степени суп&ровуля-ии далеко не всегда обеспотавает выход змбряонов, пригодных уш перэсадкл. 3 экспериментах было определено влияние типа, ¡озы г схемы введения гонадотропика на уровень суперовудяют:, :ачзство и приживляв:,гасть эмбрионов.

Сравнительные данные эффективности зазывания суперовуляяий [ качества эмбрионов у коров-доноров при использовании кагавно-"0 а стандартного препаратов СЕК приведены в табл. I.

Таблица I

Уровень суперовулягют и качество эмбрионов у коров-доноров, обработанных разными препаратами СКК

Показатель С 2 К

Ш2 Покровская Фоллигон

Обработано коров 29 30 36

Реагировало суперовуляпдей (п-%) 22-75,9 25-83.3 26-72,7

Число овуляций на донора 9,3*1,1 7,6*0,8 6,3*0,8

Золозителъных доносов по ^зв^ечению эмбрионов 14-63,6 20-80,0 21-80,8

Число эмбрионов на донора 2,8*0,8 3,7*0,6 3,7*0,7

в тем числе нормальных 1,6*0,5 2,5-0,4 • 3,0*0,6

,дегекерхрованных 0,5*0,4 0,9*0,5 0,5*0,2

неоплодотзорэкных яйцеклеток 0,7±0,6 0,3*0,2 0,2*0,05

Б группе коров, обработанных нативнш препаратом СаК, излечениях омбрионов было 30,1%, из них нормальных 17,22 от чис 1а овуляций, а яри обработке лиофилазированным препаратом С1К { йоллигоном - 48,и 32,9$ и 58,и 47,соответственно.

..:отолльт згллгчить, '-:?: '.'сдвльни ГИ\ не устугаат гс сзсз.'лу- сиодоглчегксзгу действию 2 нему препарату ''фсллигон" и могут успезно использоваться д знгангхя оупероБулацгг у коров-доноров.

В исследованиях была определена эффективность биолога го действия различных препаратов ФСГ отечественного и зар; кого производства (табл. 2).

Таблзц

Уровень суперовуляша и качество эмбрионов у коров зри применении. различных препаратов 2СГ

Показатель 4СГ-П фоллитрспан фоллико:

Обработано коров 73 47 10

Реагитюаало суперовуля-Ш1з2 Хп-%) 53-72,6 40-85Д 9-90,0

Число овулягкй на. донора 7,133,3 Ю,0±0,9 . . 8,4*0,1

Положительных доноров по хзвлечению (п-%) 53-100 36-90 6-66,7

Число д?,йрионов ка донора 5,0^0,6 5,9±0,9 6,7±0,2

з т.ч. корг-алыса 3,5^0,5 2,9±0,9 3,3±0,2

дегэнзрярованккх 0,9^0,2 1.7±0,6 2,5±0,1

неоплодотзооен-ных яйцеклеток 0,6^0,3 1,3^0,5 0,9^0,с

Обработка декоров фоллнтропином обеспечивала супвровуля у 85* коров, что на 12% больп», чем при использовании ЗСГ (С21А) и несколько ниха, чем при обработке коров препарате "фолликогропия". Число овуляций ка донора было в пользу к обработанных фоллптрояико:,! (10,0 протяв 7,1 и 8,4). 'Число иальнас рисков на донора бшю несколько шж £ группе к

пр-я:гагатом УЛ-п (2,5 грог.:? 2,9 3,С).

"5:оло зароди с-й в группе коров. сорсс-отьгсдд: ХГ-:: :; 40.vr.r-;ожнок, г стагидо 70,4 я 7?,££ о? числа ОБуля::;:;:. йрз г.с-ьзованпн фоллитропика - 59;».

Высоки;: уровень суперОБуляппн не ко г не сказаться ..а качг:г-зарсдыде2 :: одлсдотворле:.:эс?2 яйцеклеток. Так, (.-оработку зв холлнтрогганом 42ело 5:.йргоков, пригедке: для псраоздкн, 5 а лбгснсрзрсгаякас зародыааЗ и яеэплодств:реннид

=клеток оольпе, в других градах.

При сравнен:!:: результатов суп&рсвуляцни и вцхода оггбрнспсь юкора после обработки препаратам 5СГ и С1К прег^-пс-сггс ске-эсь з пользу гдпефгзарньк препаратов. Получена достс2гр:-::;а штая в числе положительных доноров по извлечению зародкгей гчеству эмбрионов.

Об эффективности траясплактации судят до лрк^зляылост:: эяонов у реципиентов по с пересадка. 3 насус опытах но вняв-з достоверных различай з приу-ивляетасги зародышей в згвиси:,:ос-¿т типа и дозы го надо тропика, схем его введения (табл. 3).

Таблица 3

Прнжявляемость эмбрионов, полученных от коров, обработанных разная препаратами

Гонадотропкн

ГЗэпзсакеко эмЬпионов

Стелышх Псоцент реципиентов стельности

г^пгон Г-л

оггиз! гдлкоуролин

•¡того

100

42

33

80 30

41

23 18 41 16

41,0 54,8 54,5 51,3 53,3

265

133

48,Б

- э -

3 опктах енло изучено злалнне кг результаты сузерогудя.г я качество эьйрионоз про~о.тглтельно^тн астрального ккла кс от охоты до обработка цркаратси ФСГ. Dpa этом был* сту.еч-г тбнмнщя уавлзпмнил члсла овудяшй с зстрьлькогс

ла от охоты до начата обработки (табл. 4).

Таблица 4

Уровень с'/'парсзу.иЕЕИ и качество зкбрзонов в зазгсимэстл от продо-зиталвностз затратного пзкла

Лень обработки

в 9 10 II I:

Обработано короз 42 27 12 12 I.

Рэггзоовалэ суп$р-сзуля^ибЯ 33 21 II 8 n

Hzcuea? от ~ола обработанных 78,е 77,8 91,7 66,7 7i

сгуя~;гй на донора 6,3^0,5 6,Э±0,5 6,2±0,7 7,1*1,2 8

ПОЛСЗКТеЛЬНЫХ лс норов 20 КЗЗЛЗЧвЖШ зародыпеЗ 20 II 5 7 6

Процент от числа ксс-оз, пгатятозаз-zzx супвоозуллцк^й 60,6 52.4 45.5 87,5 6C

'ízzj-.n зарод^ей на доне ра 5,1^0,8 5.0*1,4 4,6-1,I 5,Sil,5 7,

в тем числ*:

НОКСУТЬНШС ЗМбрЛ- 3,5*0,8 3,4*0,9 2,0*1,1 4,e±i,4 6,

■ rp.;;:-.-;rr ст 65, е 68,0 42,5 77, S 6

К-СПЛОДО тзорзшьос 1.2-;. 3 С, 4-0.4" С , J • J С,4-0,4

Пси обработке препаратом ССГ-п в дозе 50 .«¿г, начиная с 8-го : 9-го дня э с траль него галла, не било различай в число коров, ■еагирувщнх < иерсвуляшей (78,6? и 77,6%) часле овуляций (6,2 : 6,9) и нормальных эмбрионов (3,5 и 3,4) на донора. Несколько ругие результаты получена при обработке коров по 4-дневной схем репаратом ФСГ-п в дозе 40 ыг на 10-й, 11-Е я 12-3 дни эотраль-:сго цикла. Сулэровуляцкей реагировало 91;7$, 66,7% к 76,9% ко-■ов соответственно. С увеличением продолжительности астрального икла числи реагировавши суперовуляцией коров снижалось на ;5 и 14,8$, а число овуляций (6,2; 7,1 и 8,7) и нормальные ййриокоь (2,0; 4,6 и 6,5) увеличивалось. Вероятно, четнрехднев-гув схему гормональной обработки препаратог* ФСГ-п целесообразна применять с II и Т2-го дня эстрального цикла.

3 условиях практического внедрения метода трансплантация «брионов не всегда удается точно зафиксировать качало эстраль-юго цикла доноров, особенно при привязном их содержании. Позто-!у наш был проведен опыт по гормональному вызыванию суперовуля-у коров при наличии хорошо выраженного желтого тела в одном 13 яичников.

При обработке коров-доноров по желтому телу суперовуляцией »еагкровало на 1055 мэныве згавотных, чем при фиксированном ютральном цикле. При обработке доноров препаратом ФСГ-п по галичаю желтого тела было получено 12,6 овуляций, 8,3 зароды-за, в том числе 4,7 нормальных эмбриона на донора, что соответ-:твует эткн же показателям при обработке на 8-10-й день фиксированного цикла.

В колхозе "Новая жизнь" Тульской, области были проведены ^следования по действию различных доз ФСГ-п на уровень супер-эяуляц ли и качество эмбрионов у коров. Было испытано три дозы

ля«3 в о~1наксЕа:! о^алк-зкол доз» (10 иг), зхссал группа - 4 б г^чйнлэ четырех дней лрп ехэдневяой дозе ГО ¡с, третья гру пз - 32 -ЧГ з Т5Чэклэ четырех дней в убывающей хокцаЕтрадхз (12, 10, 3, 2 :,с). Результаты прлмс-кзнил разных доз ФСГ-п пр зедены в таз л. 5.

Таблзша 5

Уровень сухтеров/ляцлп я качэстзо эмбрионов у коров б зазптх'осгл от дозы ФСГ-п

зза, :лг

иилеизеив^ь — С Л 40 3£

Ссрасотако кор-оз 69 37 . 50

Геагирозало супзровуляцдоЗ 54 23 40

Процент от -с:сла обработанных 73,3 78,4 ео,о

Часло ов7ляцай ка донора 6, 6±0,5 7, 3-0,9 6,7-0,

Поло.лдтелышх доноров по извлечению эмбрионов 31 18 32

Процент от чкола коров с сулзроаулягдшй 57,4 62,1 80,0

Члоло зародышей на донора 5, 1-1,1 6, 1-1,7 4,9±0,

т.ч. Еориальных эмбриоксз /Л О, 5^0,9 4, 4-1,6 3,8±0,<

дг.-гэкерлрэзанкых 0, 8±0,3 0, 4-0,1 0,7-0,:

л-:-ол.1одотзорённшс 3•СТО!' Г\ > 5±0,6 I. 3±0,7 0,4-0,

га.'липы э пэказг.извт, что умекьа^нхэ оза ;СГ-л не окапает суу«;гзекного злх-.ххя на уро;-знь «: чи-*;ло нзрчальных эмбрионов. Лоза К!

;цть лз 22 мг нд .ул^отюе без ухуд^н::.-: р-:-оу

ТЛврОГ-у. г: .\п;г:зт

Хромя того, гг;.;г:ератоь 'ЮГ

■ге-тспл-уг с;:зголспггеоксиу лзм*в«нив концентр зцг.."; о? с го гсс-

г осган>::>м5 ксрсг- в еотестгеигкзс условиях.

З.С. Влг.-..1::з сезона года на уровень суперовуляцяп, качество и жизнеспособность эмбрионов коров

Наглодается определенная зависимость множественной сб/ля-у коров от сезона года. При гормональной обработке корсэ зл-(декабрь - февраль) х весной (март - май) срссеат реагируг-суперовуляцдей коров был вше, чем осеньз (сентлЗрь-ноябр* 5 той (июнь - август), соответственно 60 и ?1,8£ по сравнс-нпв ,5 и 6£,4£ (таол. 6).

Та'лгд-а В

Влияние сезона года на уровень супероЕуляют и качестзо омбрлокоз у коров-донороз

Сезон года (кеслц)

liUnclocilfcvIb сентябрь-ноябрь декабрь-февраль глаот-ма£ лжнь-азгуст

зйотано коров 23 15 II 19

гяровало сулеровуля- \ 16 12 9 13

1ент от ^сла обрабо- ib'X 69,6 80,0 81,8 68,4

ю овуляшш на донора 9,6^0,7 11,7-1,2 I2,2±I ,0 7,8±0,9

зкхтельных доноров пс хзченхю зародышей 15 II 9 10

хект от члсла кооов гперовуляшей Э3,7 91,7 100 76,9

ю эыбр;;онов на донора 8,0+1,2 6,8±0,9 6,6-1, I 4,8io,8

л. числе нормальных 4,1*0.7 3,0±0,2 6,81o, 8 3,1*0,3

?ее число овул-лц-Ш на донора в зжне-весенннй пер лод соста-

1,7 и 12,2 в осекне-леткип г ?р;-.од 5,5 1« 7,b. Нормальных

эмбрионов у животных, обработанных весной, было больше, другие сезона года. Весенний период оказался самым благогг пым и в отношении приживляемоста эмбрионов у реципиентов пересадки (табл. 7).

Таблиц;

Црктавляемость э.\!брионог у реципиентов по сезонам года

Созон года Пеоесажеао Стельных Процент

(месяц) эмбрионов решшизнтов стэльност:

Сентябрь-ноябрь 60 26 43,3

Декабрь-февраль 54 21 38,9

Март май 82 38 46,3

Июнь-август 70 28. 40,0

Итого 266 ИЗ 42,5

.Аналогичные результаты циигквляеыости эмбрионов полу в повторно« опыте в ОПХ "Щалово". Процент стельности ре: тов составил осенью 52,5; зимой - 45,8; весной - 52,9 и л< 43,9.

На эффективность трансплантации оказывают определен» кие и другие факторы - возраст, уровень кормления, уело: держания, лактационный статус, всевозможные стрессы и др. но подобрать даже двух идентичных•животных, у которых бл перечисленных факторов, было бы аналогичным.

При формировании донорского стада следует иметь ь в: что у некоторых язшоткгос отсутствует реакция яичкикоз на кальку» обработку. В наших о гитах не было суперовуляций у коров многоразового использования. Реакция яичк:;к.оь на го тропик у остальных коров варьировала от 4 до 20 овуляции

нор?,, нсрмагЫЕОГ эмбрионов было о? О до 1С. Лалэко не одкка-бок была н пр^^ьля&лость гыОрпопоз с? различных доноров ~л зебатась е.. О до 60 и Оолее процентов.

Идя повышения эффективности гормонального вызывание супер-гаяппи в сбдую схему обработка 33 коров-доноров был введен •йог гонадотрошгн-рндизикг-гор:.:ок& (Гн-?г) - суртагон, коте ьеспровалн при втором осеменения' з дозе 5 ;лл. Результаты ут.г галл в зависимости ст физиологического состоя ни.? лизотшд:, >. отдельно у л&хтирувдих к выбракованных коров. Контроле:.: тли коровы, обработанные только гонздотропиком без Гк-Рг Iбд. 8).

Таблица б

Уровень суперовуляции и качество эмбрионов от коров, обработанных гонадотропинои в сочетании с сурхагоном

Показатель

Коровы

лактярую- выбоакован-жле юге

Лакткрую-шке (контроль)

работано коров 17 16

агировало суперовуля- ^ ^

зцент от числа обрабо- дд 8

хяо овуляций на донора 9,2*0,7 11,1*1,0

ю.тлтелькых доноров по о Тл

злечеккю зародышей

>центст числа опериро- ,2>д ^

ло зародышей на донора 2,5±ог2 о,№1,1

.ч. «огчааы&х г-с-,йрионсв 1.4-1С',С£ 3,8*0,7

дс-генерировакас: С, 6*0,01 2, 6*0,8

нес^^одотворонннх 0,5*0,02 0,4*0,9 яйцеклеток

29 22

75,9 9,3*1,2 14

63,6

2,8-0,8

1,С*0,5 0,5*0,4 0,7*0,6

У лалтигую-г/о. коров спитной гругдпг урэвень супер^вул»! л выход э.нбрпоксз был практически олпнакозкм с контролем (3, 2 9,3 сьуллцай; 1,4 д 1,6 норуалвкц:: эмбрионов на донора). 7 вкбракозгккзс короз члоло зародазей я нсргодоких з:.:0р::ено= было достоверно внпе, в опытней к контрольной группе лаз-ругшд короз. Лрп -эте:,' возрастало число дегенертаованккх

3.3. Злз.5.=С!9 тежературного Фактора и-усдок::! хранена? з;л5р::оноз на гх прдлдзляемость после перзсадкл

3 асследозакаях. заявлена заз::с;г.*эсть дрхтавляекости эмб нов от ?е:п&ра?урк округахцей среда при манипуляциях с з:.:5р;; ма в период ог извлечения до пересадка. Так, в з.тг:5 перле (дзкабръ~.резраль) колебания те^пьсатурц бокс-термостат-глачез пересадки составляла +16 °С, +37 °С л +12 °С. Принпвляб.мос-! э:др;:сЕОЕ составила 45,8%. Весной и осенью колебания теетер ры бклк незначительными:: от +16 °С до +20 °С веской к от +Г7 до т18 °С осеньа. В этих условиях прпзкзляечость эмбрионов у шплентоэ в .•дарге-,:ае составила 52,5.?, сентябре-ноябре 52,5?< Еолез назкая прхзивляемоегь была в летнлЗ период (43,52), ч мсако объяснить тешгов-м стрессом у ждБОТках-рецхпиентов. В .те врс-.чя оплодогзсряе:.;остъ телок псслэ искусственного оее.мек составила веской - 71,35, летом - 63,?, осень» -

1 комплекс агрофирмы "далово").

предположить, что сгсдгенл-э прахгг-ляемост;: эмбрион в зич:-:,<-.{ период связано с больепмз кслебанх-лс: температур пр ■ ^!."у.-ТуГ " о:.тбс::она:.{И.

Лод&г&и исследования по эффективности переезд:-:;! сьчхн ч«ак:ас :* 5бУ->ннз-отта.тнн.« з:гор;юно.ч. Скяс Пересах'-ко 2'~: з:.ср.;спсн 2 п-.л/чени практически одинако.^е р*муль7ааи - -51,

связано с солее тщательны/ отберем ^-'т дс и г.т.л:::гн-

сервированил 'т.гбл. -5).

Дргжквляемость с в ее п ое : и за.'.горсяекнс-оттгянных эмбрионов

ЭмбЬЕОНЫ

Показатель -

СЕеас полтч ек- замосо.~егшг-

кые сттялнк1.'?-

Пересажено эыбркоков 70 228

Стельных реципиентов 29 85

Процент стельности 41,4 37,3

В опытах была установлена зависимость щшквдяюжсе: свеге-полученных эмбрионов от длительности их хранения вне организма от извлечения до пересадки реципиентам (табл. 10).

Таблица 10

о

Прикивдяемость эмбрионов в зависимости ст срока их хранения от извлечения до пересадка

Срок хранения, Пеоесакено Стельных Процент

час эмбрионов ретдгнектоз стельности

до I 95 47 49,5

1-2 164 79 48,2

2-3 139 76 54,7

3-4 83 45 54,2

4-5 20 8 40,0

5-6 12 3 25,0

Итого 5ГЗ 253 50.3

— 7 7 —

Кратковременное хранение забриенов до 4-х часов в средв ддя ларезадки Ее оказывает*отражательного влияния на их приживля-емость. хранение эмбрионов в течете 2-4 часов в питательной среде с повторноЗ оценкой их качества позволяет провести более тщательный отбор эмбрионов для пересадка.

3.4. Приживляеыость эмбрионов в зависимости от стадии их развитая и качества

Морфологическое исследование стадии развития-эмбрионов, состояния их оболочки и. внутренних структур является экспресс-методом по оценке яг жизнеспособности, который широко используется в практике трансплантации и криоконсарвированет эмбрионов сельс.\о хозяйственных: гавотшг. -Жизнеспособность и физиологическое соск> яние зародыаей. зависит от степени полиовуляции. Так, больше гл---го неоплодотворенных яйцеклеток, пустых прозрачных зон и ьэкьаэ нормальных зародышей было при 16 овуляциях' на оба яичника» Получено болъээ..нормальных эмбрионов (47,4?) от доноров с умерен- ■ ной полиовуляцией от 6 до 10.

Необходимо отметить,- что прижзвляемость эмбрионов зависит от стадии зх.развития (табл. П).

Таблица II

. Приживляемооть эмбрионов в зависимости от стадии их развития

Стадия развития Ст^ннх_ Процент

_TOB нооти

Морулы: ршсгие ,32 8 2 5,0

поздние - 246 100 40,7"

эластоцхсты: рання е 2В0 105 37,5

поздние 202 ПО 54,5 '

эксдаяпированныв- 15 5 33,3

Ранние меру.":: после нехзрусгпч='.ког.с-р осади"'. л.угул}^: стельность у 25й реципиентов, кор\\"-; поз;,:-:хе - у ,ол^стс-цкетн раншге - у поадь.е - у с-'.,5Д к акстюндкоэь'&тп;*- -

у 32,.3*. Счез::дко. что на/.5г деь pactXE^ec.- риски :: -г::т лучшие всклоююстк «ызлть после трапепла!;-:^-:. смбр::от-:'-, по.-~--:"7~ ие низку» оценку то мэрЬг.'пгжвасас ::p;:si:ai:av, rwji я;:зкуп чр-^спЕлл^с-сгь после п-эрьсакха (табл. 12).

Таблица 12

Прккивляекость экбриоков в блвискмости от их качества

Качество эмбрионов, Пэгюсакено Стельных Пропент балл эмбрионов ропипиентов стельности

Отличные (5) 80 40 50,0

Хорошие (4) 262 131 50,0

Удовлетворительные (3) 358 86 24,0

Условно годные 75 6 8,0

'j Брижлвляемость эмбрионов отличного и хорошего качества составила 501?, удовлетворительных в два раза ниже (2455) н условно годных только

3.5. Фактора, определяющие прютвляемость эмбрионов у регапиентов после пересадки

Нормальная стельность обеспечивается при наличии биохимических взаимосвязей чезоту эмбрлонсм и нижележаппми слоями эндометрия рогов r.fâiKH. Критическая ситуация этих взаимосвязей определяется двудет основными условиями. Во-первых, для успешного при-дмвления эмбрионов при пересадке необходимы адекватные условия в матке со стадией развитая эмбриона. Во-вторых, обязательным

является наличие хорошо развитого циклирукщего желтого тела в одном из яичников. Процэсс, при котором прикрепляющийся к стенке матки зародыш сигнализирует о своем существовании называется "материнским опознанием беременности". Объективно он характеризуется сохранением аэлтого тела и интенсификацией потенциального механизма поддержания беременности. В опытах была сделана попытка усилить эмбриональный сигнал путем пересадки двух эмбрионов (нормального и дегэнерироданного) или добавлением в среду с эмбрионом клеток эмбраотрофобласта. Приживляемость эмбрионов, пер?,-законных по одному каждому реципиенту, составила 47%, пересадка дзух эмбрионов позволила повысить стельность реципиентов до сб* (табл. 13).

"Таблица 13

Влияние клеток эмбриотрофобласта на щмшшляемость эмбрионов при пересадке

Группы

Пересажено эмбрионов

Стельных реципиентов

Процент стельности

Контроль ИЗ

Два этриона 80

Один эмбсион с клет-

ка'.с: эыбриотрофоблас- 18

та

Итого 211

53. 45.

9

107

47 56

50'

51

Добавление клеток эмбрлотрофобласта в среду с качестъэнкьк эмбрионом дало г.сзмо&носгь получить стельность у 50;? рещшкеи тов лоель ксглрурх'^чозкой пересадку.. Особыно бнло зшь<тнж ува-jUHboze процента стелькоси посла перэсадки ыйЗрионсь удовлетворительного качества. Процент стьльн^сти при добаьлени/. öwo'pv оначьных клеток увол:гиися с 3? до 52. Уьоя.гчыма числа родник.

ся двоен было незначительным. При пересадке эмбрионов по одному в рог катки отелсз двойнями было получено 11%, после пересадки двух эмбрион'" "э в один-рог татки - 1Ъ%.

Прптавляемость эмбрионов зазпечт от качества нелюго тела у реципиентов на.день пересадки. Качество желтого тела определяли методом пальпации по его выраженности и величине, Хелтыо тела по этому признаку были разделены на хорспо и слабо Еыра-'ен-ные. После пересадки эмбрионов реципиентам с хоросо выраженными у.блтгл.!И телами стельность была получена у 45? реципиентов. При слабых желтых телах этот показатель составил лишь 20%.

Для повышения функции эндометрия и снижения тлоторкой функции матки применяли 1%-Ъ масляный раствор прогестерона, который вводили. внутримышечно'в день пересадки в дозе 5 мл реципиентам со слабо вырааеннши желтыми телами в яичнике. Контролем служили аналогичны? по качеству желтого т&яа телки-репипишты (табл. 14)..

Таблица 14

0 Прилшвляемость эмбрионов у реципиентов при введении прогестерона в день пересадки

Показатель

Группы

(пр^Грон) контрольная

Пересажено эмбрионов Стельных реципиентов" Процент стельности

10

5

50

30

10

3

Инъекция прогестерона реципиентам с удовлетворительными желтыми телами в яичнике' в день пересадки позволила повысить приживляедасть эмбрионов на 20$.

ВЫБСИЫ

1. Отдельные серии СЗК от&чос.-зенного производства нэ уступав? -а своему биологическому действию стандартному препарату ГС2К "¿.о.тллгок". Фоляитропин и фоллихотроппн по ос'рбл^знсстл аналогичны американскому $СГ-п, Прняпвлявмость эмбрионов не зарпсгг от типа гоаадотропина, его дозы и схем:; введения. Доза 5СГ-1 мозэт быть сниаена до 32 иг на завотяое без ухудшения результатов. При 4-х дневной схеме обработки коров-доноров ФСГ-п число овуляций и количество нормальных эмбрионов возрастает с увеличением продолжительности эстрального цикла до 11-12 дней.

2. При обработке коров-доноров гормональными првпаратаг,п

по хорого вкракенно.-гу желтому телу з одном из яичников результаты суперэвуляппи и показатель выхода нормальных эмбрионов не снижаются по сравнению с фиксирозаншы астральным циклом. Аналог Гн-Рг "сурфагон" наиболее эффективен у выбракованных коров-доноро

3. Результаты гормонального вызывания суперозуляции и при-яиЕЛяемость эмбрионов зависят от сезона года. Хранение эмбрионов до 4-х часов в среде для пересадки не оказывает отрицательного влияния на их прижявляемость и позволяет проводить более тщател яую оценку их качества. Критическим фактором является перепад температуры во ьрекя манипуляций с эмбрионами.

4. Приживляемость эмбрионов зависит от их качества и ста-, дзл развития. Процент стельности визе при пересачке поздних морул и бластоцист отличного и хорошего качества. Различий в стпг-тинллогл&сти свежеполученных к замсроженно-оттаянннх эмбрионов не выявлено.

5. Прйкяьляемоать омбриокоь :^квис.-:т от кччоотва долгого тела у реципиента в дояь асдесадки. бьадел'е Г/ у о учетного рис:?-

вора прогестерона репаялентач со слэоо вкрашим«. тг&тхгс.: телхга э день псресадкк поззсля&т повысить т^-ж'-Бляемость онов к-?. 20%.

6. Усиление зкбркосагкаяо. путем пересадка двух с-ч'рпсксв кля добавлением к основному эмбриону клеток о^брпогрсооглсста позволяет повнсить ири^лкл.чег.ост:- ькбр;.оков с 47 до л при яересадкь эмбрионов удовлетворительного качества - с 37 до 52,Г

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕШЮШШ

" Для повышения уровня супарсвуляпип я выхода нормально: 4 эмбрионов у внбракованннх коров рекомендуется под второе осе-.менегоге инъецировать 5 ил сурфзгона. Реципиентам со слабо ви-раженюгш келткд! телами инъецировать в день пересадки по 5 мл 1%-го раатЕора прогестерона и для усиления амбриосигнала при пересадке отлбркснов удовлетворЕтельного качества добавлять к пересежзаемому эмбриону дегенерпровашшй или клетки эибрио-тр9|юбласта.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Зоро:шова A.C.. Тасадайккх Г.£., Дрснчн А. П. Опыт трансплантации змсриокоа /ЛЧолочное и ."».ясное скотоводство. - 1S38. - .«3. - С. 19-20.

2. Тарадайшик. Т.Е. Применение трансплантации эмбрионов а размножении крупного рогатого скота. //Бюп» научн. работ. /ЗИЖ. - 1988. - Вып. 30. - С. 67-70.

3. Пересаака сюлликулярных яйцеклеток коров и неполовозрелых телок а целях получения максимального числа эмбрионов. /Ельчаяинов В.В., Баранов 3.11, Олегов В.В., Тарадайнкк Т.Е., Шейкш И.В. //Сб. науч. трудов. Новочеркасск. - 1991. - С 17-21.

Подписано к печати 2.04.1992 г. Заказ 727.

Тираж 100 экз. Объем 1,0 уч.-кзд. л.

ПАШ ВИЖа