Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ФАКТОРЫ, ВЛИЯЮЩИЕ НА ВЫЖИВАЕМОСТЬ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ПРИ НЕХИРУРГИЧECKOЙ ПЕРЕСАДКЕ

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "ФАКТОРЫ, ВЛИЯЮЩИЕ НА ВЫЖИВАЕМОСТЬ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ПРИ НЕХИРУРГИЧECKOЙ ПЕРЕСАДКЕ"



ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНа.ЧЕЖ; НАУЧНО- ИССЛЕДОВАТЬ л ьскил институт

ЖИВОТНОВОДСТВА * .

На иравчх рукотиси Для слуэчебнггс польооасивя

Тарасайник Татьяна Егоровна

ФАКТОРЫ, ВЛИЯЮЩИЕ НА ВЫЖИВАЕМОСТЬ ЭМБРИОНОВ - КРУПНОГО РОГАТОГО.СКОТА ПРИ НЕХИРУРГ ИЧ£СКО£.

ПЕРЕСАДКЕ

03.00.13 - физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических

наук

п. Дубровины Московской облает» 1992

cf y

Работа вшюляена Eu Всероссийском Н£?члс-::сследовательско*' институте лшёот.чо водства.

Каучкяй руководитель - доктор йподогячоеюос наук * профессор Сергеев Н.И.

Офишальяый ошгоненты: доктор баологическсс наук

Башкеев Е.Д,

кандидат йпологичеокюс наук Совяткин С,В.

Вацучее предприятие - Высшая селекционная генетическая

школа

Saisira состоится n ^0 " г, в 10 часов на

заседали соваиалиэироэанного Совета Д.020.16.02 прл ЁЩИ якьотмеводс гва,.

Адрес: I420I2, Дубровица Подольского района Московской области.

С диссертацией можно ознакомиться б библиотеке института-Автореферат разослан " " CisCCftiM^i 1992 г.

Учзкцй секретарь с IT6 циалиэ яро ванного Совета И.И. Идац-ин

кандидат биологических наук

I. 0НГ.4Я ХАРАКТЕРИСТИК РЛБОГЛ

/кш^льт-ос^ь. Интэнся^якэдая гдвстководсхэа оСуеловжззвг »еобходкглость ускорения ' темпов еостроиззсдстэа крупного рогзтого скопз -.е.татбдъяого т:тпа от Еыс-скодродуктиБНш: коров и ьндзвплх-сл 'Кг:о в-др-си зв одителе 2. "

Одянм вэ перстаетивных путей интенсивного использования генетического потенциала самок з условиях крушгомасатайкой селок-îeir в скотоводстве на современном этапе является транслягзтацйя змЗрлонов цеинкх в племенном отношении коров. Метод позволяет увеличить коэффициент рагмноаения высокоценных зшвотгп: в 2-5 раз я соответственно повысить селекционный эффект на

Однако МН0Г2Э вопросы трансплантации эмбрионов недостаточно ззучзнн," что сдерялвает ешрокое внедрение иетода в практгау животноводства. Главным торысэом является относительно kobiïcokos число лрлгодннх дая пересадка эмбрионов; получаемых от доноров.

Установлено,- что определенный процент гибели эмор^опов всегда имеет место независимо от метода i ж чем большему воздек-ctbïib подвергается эмбрион в процессе трансплантации,' тем ше эмбриональная смертность, по мере совершенствования метода результаты становятся успешней. Следовательно;' некоторые вредные фактор« когут бьть определены и устранены.

Однако существу внешних причин; влияющих, на-выживаемость эмбрионов крупного рогатого скота уделено мало внимания и они недостаточно изучены, Кроме тогопрактически невозможно подобрать дйкэ пару жшотннх, чтобы все факторы бши аналогичны. ■ Ото одна из лр;гчин значительной вариабельности реакции яичников корон via гсшдотрошгко препараты и выхода пригодных для трано-пяантацчи эмбрионов. Дта устранении или

центральная НАУЧНАЯ БИбЛИОТГЕ^Л Моск. сельскоиоз а^д^-з..:^: ; мм. Н. А, Тиыиря:;„; а

потерь гмбрзонов яз-зй вк$енлг л внутрэштгх факторов необходило првгде всего определять размер этих потерь; срзчана и время действия.

Гель кссл9^95ян:;1* ззклгчзлась в определен;;;) пр;тч2Н в степени влвянзя да жизнеспособность экбргоков внешних фзпторов, сьл-занных со все„щ звеньями технологии немфургкческой трансплантанта эмбрионов.

Црз этой была составлены следующие задачи:

- азучить влияние на качество эмбрионов а их приживляемость у рещютентов рэзных-схем гормонального вызывания суперовуляцкз у доноров с учетом типа к дозе гонадотрошшв» разных сочетании гормсзальных препаратов," дея обработки от начала астрального такла, качэогва желтого тела в яичниках^

- вьмснить степень влияния темперэтурного факторе при получении эмбрионов,- прсдолгительиоста их подготовки для пересадки или криойонсэрвдровабия, дерэсадка на ферме а в лаборатория;

- определить влияние стадии развития,' качества,' условий хрэнакэя эмбрионов не ах прлживляэмость при нехирургичеькой пересади; '

- изучить возможность повышения праживляэмостй эмбриоыоз путем усиления эмбрионального сигнале добавкой к эмбриону клеток э р л от рофо б ласта ■-.-■■.■■

Т&учнз^ ноалзна работы состоит £ определения степени влля-нля экзогенных факторов на жизнеспособность эмбрионов крупного рогатого скота при иехирургяческой пересадке; в изучении возможностей повышения праживляемости путем введения в среда с эмбрионом клеток эмбряотрофоблэ ста.

•.• т- ' ■ >>

Т И.' * ' *

(

Прзктстеекпо значение работы состоит в разработке способов; позволнздах снизить степень влияния некоторых экзогенных факторов на казне лособиость эмбрионов и подучить более 50^ стельноо-тей при нехирургической пересадке свежаполученных в замороженно-оттэянкых эмбрионов. ,

Апробадия р^бо^т}. результаты исследований, докладывались на екэгодных конференциях молодых ученых (г.Пушкин; 1Э37,г.Харьков, 1938, п.Дубровицы, 1988,- IS9I).

Объем -работы.. Диссертация далояена на 101 страницах: каваношсного текста. Состоит из введения^ обзора литературы,-собственных исследований и результатов,' выводов и практических лредогояений. Иллюстрирована I? таблицами и 5 рисунками; Список использованной литература включает 240 наименований в том числе 147 иностранных.

. 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДУ ИССЛЕДОВАНИЯ .■;

Исследования проведены в опытных хозяйствах ШЕа "Щапово" и^дубровицн" Московской области, ь колхозах "Новая жизнь", им. В.И.Ленина Тульское области. В опытах использовали лэктирупцих коров черно-пестрой породы с продуктивность!) от 4^5 до 8,5 тыс. кг молока за лактацию. Выла также создана группа постоянных доноров высокопродуктивных коров из числа выбракованных для многократного использования.

В качестве реципиентов использовали телок случного возраста цшицкой и черно-пеотройпородаживой массой 350-380-кг.

Для гормонального вызивания суперовуляции у коров применяла нятлвнкй препарат СЗК» подученный в ВИе; лнофялкзировакную CîiîK Покровского биокомбината (серия 4),' стандартный препарат Сй'К "фоллигон"; гааофяэаршШ'горюн ФСГ-п (США), фолликотропин

iЧССР) е фсллотроплн (Хягва) и в,сочетании гонадогрсп;:нк с су, $sгоном,

Препараты ФСГ врсзумл по 4-х и 5-днсвноЯ схемам с лсты.ть-зованиви разных доз. Проста глащщн "э строфан" вводлле дабо в дозе 500 ккг однократно, лийо в дозе 750 мкг-дез.1^ (500 и 250 мкг).

Извяэчекае эмбраозов, оценку их . качества проводили по •эдтодикйм ШЯа.

; Пересаживали эмбрионы реципиентам с помощь» катетеров фнт> ма "ifei^stadt". а "FSccy" на пунктах трансплантации и непосредственно не фермах.

Для усиления эмбряоеигнала использовали условно годный и ■ дагенерированныо эмбрионы, которые пересаки вала'в одной паЗете с основными эмбрионами. Дня получения клеток трофо- и эмбрио-блвстэ испольэозал-j поздние мору.ш я раянле бластсцисты с по~ вревдвнной зоной пелладида. Эмбрион ировали в кзплэ среды с помощью вакуумной системы. ШтзяличвскоЯ яглоЗразрезалл оболочку я удаляли осторожным шгаетированием. Внутреннею клеточную ьесс; долили иглой г перееэвгавали шесте с пригодными ?мбрг.-онэми в одной еоломшже. Дтл псэзянения праямшкшооти эмбрионов группе реципиентов после пересадка вводили внутримышечно по 5 мл Et-ro масляного раствора прогестерона.

3. РЕЗУЛЬТАТУ ИСС-ЭДОЗАЕЙ

3.1. Птаянле pa 3X14! я к способов прилтонечая гормональных т^этарзтеэ л'!я шзкганзя су перову лше: л на клзнеспособность ■

ЗМбр(!0;гое.

',;звесл:;з способу горлом л пюго гньта^кая сушр<Сг./.~ч1г;т;1 у до нет,;, а нь позй'^л'С'/г ;/д ^ i'-; <;. т хюр. i т iv: l () .■: pv3>.;bT:i'iOB

у 25-35SE жквотшос, & индустрование высокой стегени сульровуля-цяг далеко не всегда обеспечивает выход эмбрионов, пригодных для пересагк^. 3 экспериментах было определено влияние типа,' дозы те схемы введения гокадотропнна на уровень суперовуляпии. качество и прггавлдемость эмбрионов.

Сравнительные данные эффективности1 вызывания суперовуляпта а качества гмбрионов у корсв-доаорсв при использования катавио-го и стандартного препаратов СЕК приведена в тайл. I. ■':

Таблица I

Уровень суперовуляции и качество эмбрионов у коров-

доноров, обработанных разные зрепаратами CHX

. , — • | — : СЕК 7 ' '

Показатель ■ •---:---

______BIS Покровская Солзигон

Обработано коров - ■ .'■■;.- 29 30 3£

Реагировало суперовуляциой 22-75,9 , 25-83,3 26-72,7

Число озуляшй на донора 9,3*1,1 7,6*0,8 : 6,3*0,8

i!

иОЛОЗЩТеДЬШК ДСНОрОВ СО

рз^оченио эмбрионов \ 14-63,6 20-60,0 ■■;■'." 21-80,8

Число эмЗрионоа на донора 2,8*0,8 3,7*0,6 . 3,7*0,7 втом числе нормальных','.1,6*0,5 2,5*0,4 3,0*0,6

дегекерироьаяных 0,5*0,4 0,9*0,5 0,5*0,2 ■

SSofpäKK:ß 0,3*0,2. 0.2*0,05

Б группе коров, обработанных нативнкм препаратом СКК, извлечению; эмбрионов било 30,1$, из них нормальных 17,23 от чис ла овуляций, а при обработке лмофклазированшм препаратом С£К.. и фоллигсном -48,а 32.и 58,7^ и 47,соответственно.

..z^iszesiKs za^HHe гозгслявт заклЕчзтъ, чтг стивлъ^е os-■ рзп ■ ci;: hs устти^шт по азсэ;^" бго-токг?«гйс^)'' действия ггссрт-ясдг ^трзпарату "фаялагов" н могут успешо лспользоваться для sa-, зыьагси супйроЕуллцш у коров-доноров.

3 гссладованаяг быяа опрахалева эффективность биологического 2вйствая различны! препаратов ФСГ отечественного я зарубежного прсгзводства (тайл. 2).

Таблзпа 2

7ровень суперовулщсги а качество эмЗргонев у коров зри прымёнеаза раздачн^х препаратов ФСГ

Показатель ОСГ-п фолдгтрспан фолллжотропян

Обработано коров 73 47 10

Срт9р0Б7ЛЯ" ' 53-72,6 : 40-05,1 : 9-90.0

Число овуляш» на донора 7,133,3 I0,0±Ô,9 . 8,4*0,2

а^^яв6^^080^® П0 36-90 6-66,7

Число эиЗриоков на доно- 5,о±0.6 5,9±0,9 6.7±0,2 ?а

3 т.ч. нормальных 3,5±0,5 2.9±0,9 3,3±0,2

дэгекерярозанщсс 0,9±0,2 1,7^0,6 2,5±0,1

.: ■ Каш?оГ -0.63b.-3,:. 1.3*0.5 0,9±0,3

Обработка доноров фолла тропа ном обеспечивала супвроэуллихю у 85£ короя, что аа IZZ больоэ, чем пра использовании ФСГ-п • (СН) к несколько нала, чем при обработке коров препаратом "•(оллАкотрозин". Число озуляш:Й. на донора было в пользу короз, обработанных тропиком ÎI0,G протаз 7,Г и в,4). 'Чхс-ю нор-мальн^х эиЗрзснов на донора Ошо несколько с^лэ в груштэ короз,

oJpaiiTaKir.s: ггрепарзтсм vCT-п (3,5 ¡трогав 2.9 л 3,3}.

Число saco^'^îii ь грузла коров, сера; о так: -хГ-п iî (îû-vt;;-:-t0Tp0is:H0:.î, < --гтаЕпло 70,4 л 7?,6£ о? чг.сла 0Булл:д;Л, ;;с-

полъэовашк фодллтрэплка - 5S3.

Зксоклй уроьекъ сулеровуля^л не к:г ыэ сказаться ¿.а к з? заролка^г к оплсготюрята яйцеклеток. Так, ;тр;. оСраЗотке коров фэлг.^-гр^плнам чгсло ггйрмков, Ерхгсдльз: для пересади:, еще MSHiae, а дегс кс рлроеанhld: зародышей :: кеэплодотбср€shux лги«клеток аольев, че<м в других группах.

Г.рт сравнен:!:: результатов суд&рсьудлплл. к Buxoza оьйрисксь на донора после обработки препарата*« îCT s CIK пре^узоствс оказалось в пользу птзо£язарных препаратов. Получена достовернее различи в числе подогпгелънис доноров по извлечен::» згродь^ей и качеству эг.йрлсков.

00 эффективности трансплантант* сулят по прк^вляи.ю стг эмЗрлонов у реципиентов еог - переегдхг. 3 назеие опытах ке выявлено достоверных различай в прадявляемости гародыдей в зависало с-те тдпа а дозы гонадотрогкна, схемы его введения (табл. 3).

Таблица 3 -

Приживляемость эмбрионов, полученных от коров» . обработанные разнимя црепаратами .

г^мпптплгггя" Пер а сажено Стельках Процент

lO-wtpjLsn ЭКОрйОНОЗ peUIIILîeHTOD стельности

CZK 100 41 41,0

¿'j-U^roH 42 23 54,6

î-СГ-а 33 16 54,5

<!-0.."ьл::тр01Г,:;! 80 41 51,3

■I Û.Vj{SOTPO:Î:îh 30 16 53,3

Итого ' 285 139 48,6

3 опытах сало дэучеяо влияние кг р^э^льтатк &роз >**--. -л качество эморноноз пр'ло.тглтэлъносгг астра.1Ь:1&го кср"

от oxûTtf "о cöpaöOTic: дрддарато;.; 5СГ. При этом зклэ т&нгэн^гл уьвел ч^сла c3j.iczi2 с уд.—гетрал;ног; ла от оаотк до начала езработнл (табл. 4).

Таблица 4

Ур?2э;гь cj—epcзулязпд z стэо э!.гЗр::снсБ s заз^стмзот:: зт проло.'затлтвкойтя зстрального

Лекь обработка

Показатель

8 Ç го II 12

Обработана коров 42 27 IS 12 13

гэапгрсьало отп«р-озулл^бЛ 33' 21 II . 3 10

Г-сиент от чгсла С** pcu^G TâHK^X 78,6 77,3 91,7 66,7 76,9

Чксло на докара 6,3*0.5 6,9*0,5 6,2*0,7 7,1*1,2 8.7*0,9

Сслсзктальных дсяо-роз до ::э~-1эчвааэ 20 "II 5 7 6

Г^ои-кт от числа коссз, allait CJTISpCIJjVlT^ieÄ 60,6 52,4 45,5 87,5 60,0

Чхоло з аренде Я ка в тем часла: S,:*Q,Ü 5.0*1,4 4.6*1.1 5.9*1,5 7,3*2,6

МСГЛЯЛЬНЩС змбрл-■ CK;;Í 3,5*0.8 3,4*0.9 2,0*1,1. •1.6*1,4 6,5*2,8

ст со. 6 63,0 42.5 77,5 63,3

Пси сСраЗотке препарате« £СГ-п в дозе 50 кг, начиная с 8-го а 9-го дня астрального щула, не Омо разл^чкй в тсслз корсв, реагирутаих г иерсвулядией (78,6? и 77,8?) часлз овуляций (6,3 и 6,9) и нормальных эмбрионов (3,5 и 3,4) на донора. Несколько другие результаты получена при обработке коров по 4-дневкой схе^е препаратом <5СГ-а в.дозе 40 га- на 10-й, 11-Й и 12-5 дни эгтраль- . него пккла. Суперовуляцкой реагировало 91,72, 66,7? я 76,93! коров соответственно, С увеличением продолжительности астрального гакяа число реагировавших супэровуляцаей коров снижалось из 25 и а число овуляций (6,2; 7,1 и 8,7) и нормальных

э™*0рЕО1ЮЬ (2,0; 4,6 и 6,6) увеличивалось, Вероятно, четарехднзэ-дую схему гормональной обработки препаратом ФСГ-п целесообразней применять с II и 12-го дня астрального цикла.

В условиях практического внедрения метода трансплантации эмбрионов не всегда удается точно зафиксировать начало астрального цикла доноров,, особенно при привязном их содержания. Поэтому нами был проведен опнт по гормональному вызыванию супероЕуля-цз© У коров при чаличш хорошо выраженного желтого тела в одном ■из яичнкков.

При обработке коров-доноров по желтому телу суперовуляцней реагировало на 10% меньше животных, чем при фиксированной астральном цикле. При обработке доноров препаратом ФСГ-п по наличии желтого тела было получено 12,6 овуляций, 8,3 зароды-оа, в том числе 4,7 нормальных эмбриона на донора, что совтвет-етвует этим хэ показателям при обработке на 8-10-й день факел-ровагаого цикла.

В колхозе "Новая зшзнь" Тульской^ сбластл были проведены исследования по действию различных доз ФСГ-п на уровень супер-олуллпл;; и качество эмбрионов у коров. Было испытано три доза

. - :: -

Пг-рва.-: грутг:^ коре о 50 1СГ-Я з-т^чвгаэ гтятл •

л:«.) в охгназсео'т о.топке зной лозе (Ю да), зюрэл группа - 4Э тяг а ТъЧ-эыдэ гтрл етздне-взэй доз« ТО мг, гр-этья груп-

па - 0-2 :£Г з течэнаэ четырех дне2 э увнвазизй яонззЕтьа^п; С12, 10, 5, 2 мг). Результата прлглэкзния разил доз ФСГ-п прл-зздеза з таЗл. .5.

ТаЗллца 5

Уроззнъ супзроБуллшгп л качэстзо змбрг.эноз ...

у коров в от дозы £СГ-з ■ .

Дэза, да

Показатель -

50 40 О-О

СсраЗотано коров 69 37 . 50

Г-з-аггровадо суп еро вуляпог г-й 54 г, ^ 40

ТГзонзнт от числа обраОотан-кьа: 73.3 72.4 £0,0

Члсло овуляшгй на донора 6,6±0,5 7,3*0,9 8,7*0,8

Поло хмельных доноров по извлечению зайрионов 31 Г8 32

Процент от ~:сла коров о сулзрозулягдей 57,4 62.1 60,0

Члаас зароди ей на донора 5,14,1 6.1*1.7 4,9*0,5

з т.ч. нормальных эмЗрионсз д^ г е и £ р л ро ваняах 3,5-0,9. 0,8*0,3 4,4*1,8 0,4*0,1 3,3*0,6 0,7*0,2

н-оолл одотзоренгпдс яйцеклеток 0,3*0,6 1,3-0,7 0,4*0,1

Л^яылз таЗллш 5 пзЕсазыпаит, что у^гньаз-ае о'^д} дэз^ ;с'Г-1 т скас^ает существенного злхл'.ал на урогзнь еупэрееулл

л 'и--1:о нормялыио: элЗрлскоз. Доза .тр-о парат а мохзт

гать с^-'.аи-г 2 о 22 г^изотнг,?. уху^л^н'.'--: результатов,

тс го, *СТ з

ооотгетствуег зг од о пп е с к с ку азм-к4нхс kosüiehtíó^;; о тс го ГС Томска В ОрГ£-ЧИЗК8 КСрСЕ Ь еСТ&СТ35КЕЮС условиях.

3.2. сезона reta h¿» уровень суперовулиии,

качество к кизнеспособность эмбрионов коров

НаСлкяа&тся определенная зависимостьмножественной сь;тля-шга у коров от сазока года. При гормональной обработке коров «ой (декабрь - февраль) к весной (март - май) прспгкт реагкруг-щшс с yn еро зуляци е Й коров был выше, чем осекьа (сентябрь-коя5) z летом {июнь - август), соответственпо 80 я EI.6Í пс- орагк^нпЕ с 69,6 к 6S,4í (табл. 6),

Tac л; Ti а С

Блаянко сезона года на уровень суперовуляи^

и качество эмбрионов у Киров-доноров

Сезон года (мес.тл) Показатель -:-

сентябрь-ноябрь декабрь-февраль карт- июнь-маг: август

Обработано коров 23 IS II 19-

?е!гяровало суперовуляцией 16 12 9 13

Процент от «ела обработанных 69,6 80,0 81,8 £8.4

Число овуляций на донора 9,6*0,7 11,7*1,2 12,2*1,0 7,8*0,9

Положительных доноров по извлечена» зародшбй 15 . II 9 10

Пооцент от члела коров с* суперовуляшей 93,7 91.7 100 76,9

Число эмбрионов на донора 8',0±i ,2 6,8*0,9 6,e*i,i 4,6*0,8

в т.ч. числе нормальных 4,1*0,7 3,010,2 6.8Í0.S 3,1*0,3

Ср-гднэе число o*y.ií:uüi на донора ь з;;>шо-в<?сенккп период соста-й:тло 1,7 и 12,2 и в осекне-летшх пзркод 5,6 и 7,6. Нормальных

эмбрионов у тавотных. обработанных зесной, выло болъле, чем в другие сезоны, года. ВесаннаЗ перяод оказался самым благоприятным ж в отношения аргаживляемоста эмбрионов у решпаентов после пересадка (табл. 7).

Таблица 7

Пркживляемость эмбрионов 7 реципиентов до сезонам года

Созон года Смесяп) Пересажено эдарионов Стелька реципиентов Цродент стельности

Сентябрь-ноябрь ; 60 , 26 43,3

Декабрь-февраль' 54 V 21 ' ■ 38,9

Март- май 82 ■: 38 46,3

йюкь-август 70 .;,. 28 40,0

Итого 266 ■.'■-■ - : ИЗ - 42,5

.Аналогичные результаты щяыивляемости экйраоноз получены -в повторной опыте в ОПХ "Щааово". Процент стельности решниек-тов составил осенью 52,5; зимой- 45,в; весной - 52,9 а летом - ■ 43.9. . .

На эффективность траясплантацми оказывают определенное влияние > и другие фактор« - возраст, уровень корьиеяия, условия со -держания, лактаикояный статус, всевозможные стрессы и др. Трудно подобрать даже двух идектичанх жгвоткюс, у которых влияние пвретуслекнгсс фахтсров было бы аналогичным. ' ■

При формировании донорского стада елздуот иметь в ..заду, что у к^яэторых жиаотя:« отсутствует реакция яич:-гиков на гормональную обработку. 3 каавс опятах не было еуперовуляииЯ у коров многоразового использования. Р«акш1Д ялтлкоъ на гонадо-тропик у остальной ко ров варьировала от 4 до, 20 овуляций на

дс-нсрз., зг.йкюнов Сало от 0 до 10. Далеко кг о^дка-

ково К била а гмСр?.оиса ст раглтчшл: доноров и

оЕлась с. С до 60 а оолев процентов.

Лчл яоаазекзя эЗф&ктгзноста гормонального Бнэыванлл супер-обтляшк в ейзЕу» схвглу обработка 33 коров-донороь бал введен аналог гонэдотроппн-радкзйкг-горуона (Гн-рг) - сур&агок, кото; аньепсрсвалл прз втором осеменении э дозе 5 мл. Результаты учг тывали б зависимости ст Физиологического состояния гпгвотк^з:. т.е. отдаяьно у л&ктдругаты к ькбракованных коров. Коктрсл&м служили корова, обработанные только гокадотропиком без Гк-Рг (табл. 8).

• Таблица в

Уровень супероврлши к качество эмбрионов от коров, обработанных гояадотропиком в сочетания с сурфагоном

Коровы Лактгрук>-

Показатель --аке

лактлрузо- выбракован- (контроль)

яаэ нае

б&раОотано коров 16 29

Реагировало суперовуля- . jg 22

от тасла Обрабо- 100 93,8 75,9

Число овуляций на донора 9,2*0,7 П,1±1,0 9,3±1,2

Полотателькьи доноров по a tp та извлечению зародышей . ■

процент от числа спериро- i ^ - ^ ^

Число зародышей надонора 2,5+0,2 6,£¡±I,I " .2,8*0,8

г T.i. ног^алькд ^йрдопоз 1,4-^010£ 3,£-0,7' ; 1,6±0,5

дйгенер/рокакнкх С,64,01 2,6^0.8 ' 0,5±0,4

н i*Vi од о тво ре кнкх 0,5±0,02 0,4*0,9 0,7-0.6 яЗцаклчТок

- 15 -

i' коров с~;;ТгГ03 грутггп; уровень суперов;

а гыход э:.йр;юкэз бкд rrp-iKTïnecxz одпкакова с контролем (9,2 а 9.3 онзмщаЗ; 1,4 а 1,6 noctis toa эмбрионов ка донора). У EBtípscíOsaHKia- короз члодо эародхзеЗ z корг.-ллькш: э^ог::сноё öiLio достоверно вкээ, ч=?* s опытней я контроль но г гругпэ лактп-рупЕСС rapos. ~pz этом возрастало чзело э:,ripi-

osos. '

3.3. З^^-иэ темпзрагурко го фактора и■ услок;5 хранекм рконоз на zx ггр^лзязллег.юсть после перэсажл

3 а с ел s до ваш еэс. выявлена зезис^.юсть cp:cas'В'лти эмЗрго-нсв от "^¿парзт/рк скружашзй среди грп маняпуллш^зд: с эглбряоиа-jes з пёргсд от иэз.Т9Чэж1Я до перэсадкл. Так, в зл:ж:2 период ( д зкаб р ь -рззраль ) колзбашьд тэ^урасуры бокс-тармостат-тчеж для пзрзсадкз составляли.+16 °С, +37 °С л +12 °С. Приживляемос-гь э?я5слсное составила 45,Весной к осенью коле5ан:*-я тамлорагч-pa были незначатальЕйкк: от +15 °С до +20 °С вэокой к от +1? °С до +18 °С осенью, 3 этаж условиях цр:гжпзляе'.юсть эмбрионов у ро -Сзтаентоз в марте-дае составила 52,9,í, сектлбре-нолбрэ 52,5?í. Еолез казкзл-приживляемость б^'З в лэтклЛ пэркод (43,5/2), что можно ойьяскдть тйплоб^ стрессом у заЕотных-редагэгнтов. В то

sp;.xï оплодотзоряемость талок после /скусстеенного осеменения состаг:'-та тл:,гЛ 71%, веской - 71,3%, летом - 63,7, осенью -агрс^тро^ "щадок»").

Г.сгно предположить, ..что cieiïsicw пр-ж^ллвмост;: э^р;:онов в 3x>c-lî,î пэр.;од сьл33.40 с бс льиКС'лдбзьз1Л.\с; тздаератур при чагигуллцялх. с

пзслолсвакля по оф^ят^внзет;! п^ресадкл сз^й.толу-ЧвШпдс л з гчэ рз ? з к;-: с - о Г 73." í:-íh jx o.v:Sp:íCHo:->. Г.^ло п^р^сзя^нс 293 а полутень: одинакова результаты - 41,-lí

- If -

СсЕк^е^тз-чек.т^б) ^ 27,3Í isa.M;poK€Ka:—ОТТЕЯТ-П::^ ;, ъ -г?:-,-?;-:;,

СЕ^зано с солее vzare^Ki^r o Tú с por.: sis'.pr.civ-iz zo v. кт.:*:;:;';-

серефсгазгя 'табл. s).

Приживляемо с ть свежепэлученнлХ и задарожекно-оттаянкых экЗргонС'В

Показатель -

свежеполучен- за.чоэо-Епнс— _ ЕНв_' отта-:нкье

Пересажено эмбрионов 70 228

Стельных решютентов 29 65

Процент стельности 41,4 37,3

В опытах била установлена зависимость приживляемое?:: сведе-полученных эмбрионов от длительности кх хранения вне оргажэма от извлечения до пересадки реципиентам (табл. 10).

Таблица 10

О

Приживляемость эмбрионов в зависимости ст срока их хранения от. извлечения до пересадки

Срок хранения, Пеоесажено Стельных Процент

час э^йрйонов реципиентов стельности

до I 95 47 49,5

1-2 164 79 48.2

2-3 139 76 54,7

3-4 S3 45 54.2

4-5 ■ 20 в 40,0

5-6 '. 12 3 25.0

Итого 513 258 50,3

'._ tn _ * л-1

йратзогрэ'г'эязо в храяечле змбриэнов до 4-х часов в1 срзд« для дзрэсадки не оказывает отражательного влгчная на их'прижявлн-■емссть. Хранение змЗрионов в течение 2-4 часов в питательной среде с повторной оценкой жх качества позволяет провести более тщательный отбор эжЗраоноа дляиэросадшж. ,. ■ - ..'

3.4. Цриживляешсть эмбрионов в зависимости от стадии их развитая л качества . .

Уорфо лотеское исследование стадяж 'развития эмбрионов, состояния их оболочки я внутренних структур является экспр е сс-методом по оценке их жизнеспособности, который широко используется в практике трансплантация и криоконсарвлроваяая эмбрлонов селвс\0' хозяйственных, гавотныг.,.Жизнеспособность и физиологическое состояние зародыааЗ:,зависит от степени долиовуляцжи, Так, больаз ёЛ*-го неоплодотворэннах яйцеклеток, пустых прозрачных зон и нормальных зародышей было прж 16 овуляциях й&.оба ягчннка» Пс--дучено больше нормальных эмбрионов (47,4^) от доноров с умеренной сэлиовуляцией от L 6 до 10.

. Необходимо отметить, что праживляемость эмбрионов зависит от стадии их.развития (табл. IT).. . .

... . Таблица XI

. Прпжавлаемость эмбрионов в зависимости от стадии

их развлтяд

Ггап-л* взтая-гия ■ - " Пбсзсажеко Стэльйюс Процент

итацлл развития ,v . .. эмбрионов роиил/.ен- стель-

___• ■'■•• ,,.,,-_133_но ста ■

Морулы: ранние ;■"■'■'. 32 8 . " 25,0

поздние . 246 100 40,7*

Чдастошсты: ранние 2о0 ■': IC5 . . 37,5

поздние ' 202 ■ 110 54,5'

экслаядированные- .15 ■■■; . 5 ■■ - ' 33,3

Ранние ас рулы после н еххрур гтгч е ад о й перссо^т* х.лГ^лали стельность у 25* реципиентов, корулз гсздкие - у бласто-

аксты ранние - у 57,поздние - у 5-1,5^ икипо-шгоог^ю^е -у 33,55. Счаандне, что наиболее раыдЕ'^ес.? ь;.тор:1они луч-

зле есгмоитсотк эый^ть после транстшакталпа. Ьмбриокн, псгучтти-гае наэкуто оценку по мор&сдогячасклм прйзкак&м, к Солеи

низку» тхр-икЕЛЛсть поело пересалю: (табл. 12).

. Таблица 12

Приживляеьгость эмбрионов в зависимости от их ..качества

Качество эмбрионов, " Пересажено Стельных Просе: и балл эморгонов реципиентов стельности

Отличные С 5) 80 40

Хорошие (4) -262 131

Удовлетворительные (3) 358' 86

Условно годные 75 6

о Приживляемо с тъ з;*брионов отличного и хорошего качестза составила 50$, удовлетворительных в два раза ниже (24?) н условно годных только 8$.

3.5. Факторы, определяйте приживляемоеть эмбрионов у реципиентов.после пересадки

Нормальная.стельность обеспечивается при наличии биохимических взаимосвязей швду эмбрлонсм и нижележащими слоями.эндометрия рогов матки. Критическая. ситуация этих взаимосвязей определяется двумя основными условиями..Во-первых, для успешного приживления эмбрионов при пересадке необходимы адекватные условия в матке со стадией развития вибриона. Во-вторых, обязательным

50,0 50,0 24,0 8,0

является наличие хорошо развитого циклярущего желтого тела в одном из яичников. Процэсс, при котором пр2крепля]шц:3ся к стенке маткя зародыш сигнализирует о своем существовании называется "материнским опознанием беременности". Объективно он характеризуется сохранением желтого тела и интенсификацией погеншаль-ного механизма поддержания беременности. В опытах била сделана сопытка усолить эмбриональный сигнал путем пересадки двух эмбрионов (нормального в дегенерироваяного) или добавлением в среду с эмбрионом клеток эмбриотрофсхЗласта. Приживляемоеть эмбрионов, пересаженных, по одному каждому решпнвнту, составила 47$, пера-садка двух эмбрионов позволила повисать.стельность реципиентов до 56% (табл. 13). . . ^

: ■ / Таблица 13

Влияние клеток этлбрио трофобласта на прикшнвмость амбрионов при пересадке

Гтптгти Пересажено Стальных ■ Процент

л^удшы зшрноков реципиентов стельности

Контроль ПЭ : 53. 47

Два эмбриона 80 45. /. 56

Один эмбрион с клетками эмбраотрофоблас-та й ; . 9 . 50

Итого 211 107 61

.Добавление клеток эмбриотрофобл&ста б сряду с качественным эы5р::онс:.! дало гозмолкость получить ст^ькооть у 50% рецйак£1( тоа несла нж рургл чо с с: о 2 пбресадкк. Особенно было" заметки« ува-ЛйЧБШЗ процента ствлънист;: посла -пересадки л,:5р;:ансв удо.члет-вор^тсльшго качества. Процент отелъкос™ лэбаме!Ш'. уг.йр1/-оначьшлс клеток узолачлдся с до Ей. Уб«ллЧЬ!Ыз-числа родным*

го -

ся двоен было незначительны«. При пересадке эмбрионов по одному в рог катки отелсз двойнями бкло получено II?, после пересадки двух 3MSpv.0K'",i в один рог - 16?.

Пр/^вляешсть эмбрионов, зависит от качества желтого тела у реципиентов на.день пересадки. Качество желтого тела опреле-лплд методом пальпации по его выраженности и величине, Еелтыо тела по этому признаку бкли разделаны на хороЕо и слабо ььра"*'энные. После пересанки эмбрионов рецлетентач с хорони вирах?лнн-ма желтгекл телами стельность была получена 7 45% реципиентов. При слабых желтых. телах этот показатель составил лишь 20%*

Для совкшекая функции эндометрия и снижения моторке.й функции ыатхи применили 1%-Ъ масляный раствор прогестерона, которьй вводила внутримышечно"в день пересадки в дезе 5 мл реципиентам со слабо выраженными желтыми телаш в яичнике. Контролем служили аналогичные по качеству желтого тела телкн-реципиинт^ (табл. 14).., *

Таблица 14

0 Пргш:вллеьгость эмбрионов у решгаиентов при введении прогестерона в день пересадке

Группы

Показатель . -

(пр^Грон) контрольная

Пересажено эмбрионов 10 10

Стельяшс реципиентов" . 5 3

Процент стельности 50 . 30

Инъекция прогестерона реципиентам с удовлетворительными желтыми телами в яичнике' в день пересадки позволила повысить лриживляемость эмбрионов яв. 20%.

визла

Г. Отдельные серки С2К о т еч с с гг, е:д;о го ггрензвсдства не-уступал? ¿о се о ему биологическому действию стандартно;^- препарату ГСЖК "¿оллигон". Фоллитроплн и фоллихо трсгсш" по эг&'бктязнсс^а апалогл'гаы ачеракансяоыу *СГ-п, Прнхгвляэыость эг/.3рлоыов но зарисит от типа го над отро пана, его дозы и схемы введения. Деза ССГ-1 »охет йягь енлаена до 32 мг на ¿явсмое без ухулшеггл результатов. При 4-х дневной схеме обработки коров-доноров ФСГ-а -пюло овуляшй л количество нормальных эмбрионов возрастает с увеличением продолжительности эстралъного цикла до 11-12 дней.

2. При обработке коров-до коров гормональными Препаратгвд

по хорошо выраженному-желтому телу з одном из яичников результата "стиерэву-ипди и показатель выхода нормальных эмбрионов не сни-жзятся по сравнению с фяксаровакнььг эстраяьныи циклом. Аналог Гн-Рг "сурфагон" наиболее эффективен у выбракованных коров-доноров.

3. Результаты гормонального вызывания суперозулящм и приставляемо сть эмбрионов зависят от сезона года. Хранение эмбрионов до 4-х часов в среде для пересадки не оказывает отрицательного' . влияния на их- приживляемость л позволяет проводить более тщатель-пуп оценку кх качества. Критическим фактором является перепад / температуры во гремя мандпуляццЗ с эмбрионами.

4- Прижавляемость.эмбрионов зазгепт от их качества ж ста-_ дзгг раззития. Процент стельности выше прк пересадке поздгих М'зрул л бластопист отличного и хорошего качества. Различий в гркллймОСти св&жеполучекшк и ьакореженно-оттаянних: эмбрио- ■ нов к*» заявлено. . ■

5. ГТрижкышемость смйр,;оноа о? кьчоства долгого те-

ла у реципиента в дшь Бь-одши: .--о р-аот-

прогестерона реют::ента\: со слабо вч-рая&нкш.-:: ^^лт^' тела;.я з день пересадкк псэтз-.тчйт погасать принял« змостъ э'.сс.г-оноз н?

6. Усиление зибркосигкала су тем пересылки не ух ьчвр^зксн кля добавлением к основному гмбркону меток э^ргтотро-роблгста позволяет1 еовускть щиюгавдяеищста'' ом^р^ьнов с 47 до -I при пересадке эмбрионов удзвле твори гель но го качества - с 37 до Ь2я

"V/ ЛРШИЧЕШФ.пршокеюя-

Для повыыешм уровня суперсвуляшг а выхода нормальных эмбрионов у-, выбракованных коров рекомендуется под второе осеменение инъецировать. 5 мл сурфагска. Реципиентам со слабо вц-ражетшда жедтьъм телами кньецлровать в день пересадки по & и>т 1%-го раствора прогестерсва и для усиления эмбриосигнала прн пересадке эмбрионов удовлетворительного качества добавлять к иер-эсекиваэшму атариопу' дегенерлрованний или клетки эмбрио-тро^юбласта.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Воронцова A.C.. Таеааайник Г. £., Дрсич/А.П.

Опыт трансплантат ил эморао«са /ЛЧолочное к мясное скотоводство. - 1S3S. - - С. 19-2Q.

2* Тарааайкик Т.Е. Применение транспланташга »мбрноноп s раамножонни крупного рогатого скота. //Бюл. науч1Ь работ. /ЗИЖ. - 1988. - Зып. 39. - С. 67-70. •

3. Пересаакл ;юлликулираых яйцехдеток коров н неполовозрелых. телек в а елях получения максимального числа эмбрионоа. /Ельчаняаов В.В., Бараков 3.11. Олегов В.В., Тарадайакк Т.Е.. Шейкин И.В. //Сб. науч. трудов. Новочеркасск* -.1991. - С. 17-21.-

Подписано к печати 2.04.1992 г. Зяказ 727.-

Тираж 100 экз. Объем 1,0 уч.-азд. д.

ПМП ВИЖа