Эпизоотологический мониторинг и совершенствование серологического контроля эффективности вакцинопрофилактики бешенства

Гулюкин, Алексей Михайлович

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Эпизоотологический мониторинг и совершенствование серологического контроля эффективности вакцинопрофилактики бешенства
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Эпизоотологический мониторинг и совершенствование серологического контроля эффективности вакцинопрофилактики бешенства"

На правах рукописи

ГУЛЮКИН АЛЕКСЕЙ МИХАЙЛОВИЧ

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СЕРОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ БЕШЕНСТВА

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

4845578

1 2 МАЙ 2011

Казань-2011

4845578

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении "Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных (ФГУ "ФЦТРБ-ВНИВИ" (г. Казань))"

Научный руководитель: Заслуженный деятель науки РТ,

доктор биологических наук, профессор Хисматуллина Наиля Анваровна

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Садыков Нариман Султанович

кандидат биологических наук, Каримов Мидхать Минвалеевич

Ведущее учреждение: Московская государственная академия

ветеринарной медицины и биотехнологии им.К.И.Скрябина

Защита состоится « » мая 2011 г. в 10°° часов на заседании диссертационного совета Д-220.012.01 при ФГУ "Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных" (420075, г.Казань, Научный городок - 2, ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ "Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных".

Автореферат разослан апреля 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук, л

старший научный сотрудник "^ЗШ^

В.И.Степанов

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1 Актуальность темы. Несмотря на определенные достижения в изучении этиологии, диагностики, профилактики, эпизоотологии и эпидемиологии бешенства, остаются не решенными и актуальными дальнейшее изучение и совершенствование эпизоотолого-эпидемиологического надзора, средств и методов контроля эффективности вакцинопрофилактики.

В большинстве регионов России эпизоотическая ситуация по бешенству чрезвычайно сложна - резко активизировались природные очаги этой инфекции, увеличилось число случаев заболеваний среди диких плотоядных, домашних и сельскохозяйственных животных, ежегодно регистрируются случаи заболеваний людей с летальным исходом (Макаров В.В. и соавт., 2004; Бардина Н.С. и соавт., 2008; Хадарцев О.С., Федоров Ю.М., Жилина Н.Я. и соавт., 2006; Гулюкин М.И., Ведерников В.А., 2008; Полещук Е.М. и соавт., 2009; Сидоров Г.Н. и соавт., 2010 и др.).

Научно обоснованные противоэпизоотические и противоэпидемические мероприятия, по данным ряда авторов (Авилов В.М., Седов В.А., Коломыцев С.А. и соавт., 1998; Иванов A.B., Хисматуллина H.A., Юсупов Р.Х. и соавт., 2009; 2010 и др.), должны основываться на изучении особенностей краевой эпизоотологии этого зооноза, своевременном выявлении возбудителя бешенства и изучении его биологических свойств, а также контроле за иммунным состоянием животных и людей, вакцинированных против бешенства.

В этом направлении установлена перспективность использования твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) для обнаружения антител в сыворотке крови людей, привитых антирабическими вакцинами, а также у иммунизированных животных (Сазанова Э.Я. и др., 1988; Ботвинкин А.Д., Селимов М.А., Клюева Е.В. и соавт., 1990; Клюкина В.И. и соавт., 2008; Atanasiu Р., Savy N.. Perrin Р., 1977; Nicholson K.G., Prestage Н., 1982 и др.). Однако вопросы совершенствования эпизоотолого-эпидемиологического надзора и разработки новых средств контроля эффективности вакцинопрофилактики бешенства по-прежнему остаются важной проблемой ветеринарии и медицины.

1.2 Цель и задачи исследований. Цель исследований - комплексное проведение эпизоотологического мониторинга бешенства в Российской Федерации в целом, а также в Смоленской области в частности, и усовершенствование системы противоэпизоотических мероприятий.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Изучить эпизоотолого-эпидемиологическую ситуацию по заболеваемости бешенством в Российской Федерации и Смоленской области за период 1996 - 2009 гг. и разработать карту эпизоотологического районирования территории области по данной инфекции.

2. Изучить влияние численности диких животных на энзоотию бешенства в Смоленской области для прогнозирования ситуации по данному заболеванию.

3. Разработать иммуноферментную тест - систему для контроля эффективности вакцинопрофилактики бешенства.

4. Изучить иммунный статус у животных, вакцинированных против бешенства.

5. Усовершенствовать систему противоэпизоотических мероприятий по борьбе с бешенством в Смоленской области.

1.3 Научная новизна. Впервые разработана и апробирована иммуноферментная тест-система на основе антирабического глобулина и антирабического пероксидазного конъюгата для определения специфических антител в сыворотках крови различных видов животных, вакцинированных против бешенства, в блок - варианте ИФА. Представленная иммуноферментная тест-система является универсальной, так как не требуется наличия антивидовых пероксидазных конъюгатов к каждому виду животного.

Проведен эпизоотологический мониторинг распространения бешенства на территории Смоленской области за 1996-2009 гг., картографирование неблагополучных районов и усовершенствованы меры борьбы с этой инфекцией. Установлена высокая степень активизации неспецифических, клеточных и гуморальных факторов иммунитета после вакцинации лисиц и собак различными антирабическими вакцинами.

1.4 Практическая значимость. Результаты проведенных исследований вошли в «Инструкцию по применению иммуноферментной тест-системы для определения уровня антирабических антител в сыворотках крови животных, вакцинированных против бешенства, методом непрямого иммуноферментного анализа (ИФА)», а также «Инструкцию по применению иммуноферментной тест-системы для определения уровня антител к вирусу бешенства в сыворотках крови животных методом блок-иммуноферментного анализа (блок-ИФА)», утв. директором ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 21.07.2010 г., «Программу мероприятий по изучению эффективности поедаемости антирабической вакцины для перорального применения на ограниченной территории в Смоленской области», согласованную с начальником ГУВ Смоленской области, директором ФГУ «ВГНКИ», начальником Департамента Смоленской области по охране, контролю и регулированию использования объектов животного мира и среды их обитания, утв. директором ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 14.01.2011г., а также в Учебно-методическое пособие в иллюстрациях: «Бешенство. Этиология. Эпизоотология. Диагностика» (изд. «Колос», М., 2010). Издан плакат: «Бешенство. Этиология. Эпизоотология. Диагностика и меры борьбы» (500 экз.).

1.5 Апробация результатов исследований. Основные положения диссертации представлены в квартальных информационных сводках Бюллетеня Европейского Центра ВОЗ Rabies Bulletin Europe (Information surveillance

research) за 1998 - 2002 гг. и доложены на ежегодных отчетных научных сессиях ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по итогам НИР за 2006-2010 гг.; Международной научно-практической конференции «Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными и экзотическими болезнями животных» (Покров, 1998); Московской международной научно-практической конференции «Биотехнология: экология крупных городов» (Москва, 2010); Юбилейной научно-практической конференции, посвященной 85-летию кафедры инфекционных болезней Казанского государственного медицинского университета (Казань, 2010).

1.6 Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 17 научных работ, в том числе 7 статей - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, издано Учебно-методическое пособие в иллюстрациях.

1.7 Основные положения диссертации, выдвигаемые на защиту:

-характеристика эпизоотолого-эпидемиологической ситуации по заболеваемости бешенством в Российской Федерации и Смоленской области за 1996-2009 гг. и районирование территории области по степени распространения заболевания;

-разработка и применение иммуноферментных тест-систем для контроля эффективности вакцинопрофилактики бешенства;

-усовершенствование эпизоотолого-эпидемиологического надзора за бешенством.

1.8 Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 181 странице и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов собственных исследований, выводы, практические предложения, библиографический список использованной литературы (всего 234 источника, в том числе 57 иностранных) и приложения. Диссертация иллюстрирована 32 таблицами и 19 рисунками.

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в лаборатории иммунологии ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» МСХ РФ в соответствии с тематическим планом НИР (№ № госрегистрации 01200202602 и 01200202604). Отдельные фрагменты работы были выполнены с участием в.н.с., к.в.н. В.Г. Гумерова, в.н.с., к.б.н. Елакова А.Л. и к.б.н. Т.А.Савицкой.

В опытах использовали 2 штамма вируса бешенства: производственный, фиксированный - "Овечий" ГНКИ и стандартный - CVS. В работе использовали животных: 5 овец, 40-50 кг; 20 кроликов, 3,0-3,5 кг; 2000 белых мышей — беспородных, 6-7 г; 6 красных лисиц, принадлежащих ЗАО племзавода «Бирюлинский» Республики Татарстан (РТ); 19 собак Зонального Центра кинологической службы МВД, г. Казань, 2 кошек. В опытах применяли

перевиваемую культуру клеток невриномы Гассерова узла крысы (НГУК-1) (Авцын A.B. и соавт.,1984).

Проводили исследования сывороток крови: овец, гипериммунизирован-ных антигеном вируса бешенства, штамм «Овечий» ГНКИ - 20 проб, собак и кошек, вакцинированных против бешенства различными антирабическими вакцинами, соответственно 32 и 2 пробы; крупного рогатого скота, вакцинированного антирабической культуральной вакциной «Рабиков» из штамма «Щелково-51», доставленных из различных неблагополучных районов РТ и Смоленской области - 153 пробы; плотоядных, вакцинированных против бешенства - 34 пробы; а также 63 пробы глазной жидкости лисиц для исследования на наличие антирабических антител, доставленных в период отстрела из неблагополучных по заболеваемости бешенством районов РТ и Смоленской области. В качестве контрольной положительной сыворотки использовали отраслевой стандартный образец антирабической сыворотки (референс-сыворотка) ВГНКИ, сер NCA с активностью 20МЕ/мл, а также антирабические сыворотки животных, оттитрованных в РН.

Кроме того, в экспериментах применяли калибровочный набор белков для электрофореза (Pharmacia Biotech, USA), блокирующий раствор "NEW LAV BLOT IR2", 5X ("Sanofi diagnostics Pasteur, France") и др.

Метод иммунофлуоресценции (ИФ) проводили в прямом варианте по ГОСТу 26075-84 с использованием «Флуоресцирующего антирабического глобулина», разработанного ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», ТУ 9388-027-004923742007.

Иммуноферментный анализ (ИФА) проводили на 96-луночных микро-титрационных планшетах для иммунологических реакций из полистирола «Пл-Б-М», ТУ 9393-009-16548645-2005. Для определения антигенов вируса бешенства применяли прямой сэндвич-вариант ИФА, с использованием «Набора препаратов для лабораторной диагностики бешенства животных методом иммуноферментного анализа (ИФА)», ТУ 9388-025-00492374-2007, для определения антител в сыворотках крови вакцинированных животных -непрямой вариант ИФА, с использованием антивидовых пероксидазных конъюгатов - антител диагностических против иммуноглобулинов быка и овец, меченных пероксидазой (НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи РАМН).

Реакцию нейтрализации (РН) проводили по P.Atanasiu (1975) на белых беспородных мышах, живой массой 14-16 г., с использованием вируса бешенства, штамм CVS, взятого в дозах от 30 до 300 LD50/0,03 мл.

Для получения культурального вируса бешенства (штамм "Овечий" ГНКИ) заражали культуру клеток НГУК-1 путем внесения 10%-ной вируссодержащей суспензии мозга белых мышей в суспензию клеточной культуры в концентрации 5x105 кл/мл в соотношении 1:1.

Освобождение вирусного материала от клеточного дебриса проводили по методу H.A. Хисматуллиной, Р.Х. Юсупова (1988), с последующей очисткой и

фракционированием в линейном градиенте плотности сахарозы (15-50%) - по В. Dietzschold (1996). Степень очистки рабического вируса и его белковых фракций изучали методом диск-электрофореза в 12,5%-ном ПААГ в присутствии додецилсульфата натрия по U.K. Laemmle (1970) и В.Dietzschold (1996). Контролем служил набор белков стандартной молекулярной массы (94.0, 67.0, 43.0, 30.0, 20.1, 14.4 кД). Специфичность белковых фракций определяли иммуноблотгингом по Н. Towbin et al. (1979).

При получении антивидовых пероксидазных конъюгатов в качестве доноров антивидовых сывороток крови использовали кроликов живой массой 2,8-3,0 кг, в качестве антигенов - иммуноглобулины сывороток крови собак и лисиц. Иммунизацию кроликов проводили по Л.А.Зильбер (1979), из полученных сывороток крови выделяли иммуноглобулин насыщенным раствором сульфата аммония по M.M.Kaplan и H.Koprowski (1975), выделение глобулина класса G (Ig G) - методом хроматографии на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой по Ю.М.Федорову (1981), конъюгирование Ig G с пероксидазой хрена - по P.K.Nakane et al. (1974) в модификации Б.Б.Дзантиева (1974).

Гематологические исследования проводили общепринятыми методами. Мазки крови окрашивали по Романовскому-Гимзе (Кондрахин И.П., 2004). Оценку специфического иммунного статуса проводили стандартными методами (Воронин Е.С., 2002), включающими определение относительного и абсолютного содержания Т- и В-лимфоцитов в периферической крови по методу M.Julius et al. (1973). Количество Т-лимфоцитов определяли общепринятым методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК) по методу M.Jondal et al. (1972), количество Т-хелперов и Т-супрессоров - в реакции розеткообразования (Е-РОК) с теофиллином по методу A.Shore (1978).

Фагоцитарную активность нейтрофилов (ФАН) и фагоцитарное число (ФЧ) определяли по методу Е.А.Кост и М.И.Стенко (1981) с использованием тест-культуры Staphilococcus aureus.

Для решения отдельных вопросов краевой эпизоотологии бешенства (распространение, эпизоотичность, сезонность, источник и факторы передачи возбудителя инфекции, математическая обработка материалов) применяли различные приемы и способы, описанные в «Рекомендациях по методике эпизоотологического исследования» под редакцией И.А.Бакулова (1975). Эпизоотологическое районирование территории Смоленской области, а также количественную оценку напряженности эпизоотической ситуации проводили по методике, описанной М.Г. Таршисом и В.М. Константиновым (1991,1994).

Цифровой материал обрабатывали методом вариационной статистики с применением пакета прикладных программ Microsoft Excel 2000.

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Анализ эпизоотолого-эпидемиологической ситуации и мер борьбы с бешенством в Российской Федерации

Анализ эпизоотической ситуации за 1996-2009 гг. показал, что за указанный период бешенство в России зарегистрировано у 43620 животных, в том числе 19002 диких, 11135 сельскохозяйственных (с.-х.) и 13483 домашних животных. Эпизоотическая обстановка по бешенству была наиболее тяжелой в 2007 г., когда эта инфекция охватила территории 61 субъекта РФ с общим количеством заболевших животных 5502 головы и 8 случаев гидрофобии. За 2008-2009 гг. бешенство зарегистрировано у 9078 животных, в том числе у ■1488 с.-х. животных, что составило 16,4% от всех заболевших животных, у 2837 домашних (31,3%) и у 4753 диких (52,3%) животных. При этом основным источником и распространителем бешенства в стране являются лисицы, на долю которых среди заболевших диких животных приходится 81,0%. Повышается эпизоотологическая и эпидемиологическая значимость бешенства енотовидных собак. Так, число зарегистрированных случаев болезни у этих хищников возросло с 24-х в 2001 г. до 211 - в 2009 г. В Псковской, Тверской, Смоленской и Московской областях енотовидная собака уже включилась в число важнейших распространителей бешенства, активность которых не снижается и в зимние месяцы (результаты потепления климата). Необходимо отметить, что вновь возросла «волчья опасность», которая временно снизилась в 2006 г. За 2007-2009 гг. установлено 68 случаев бешенства волков.

На фоне подъема природной эпизоотии закономерно возрос риск заражения домашних животных. Случаи бешенства собак чаще всего регистрировались в Республиках Северного Кавказа и Краснодарском крае. Необходимо отметить, что крупный очаг эпизоотии городского типа, при которой собаки и резервируют вирус и распространяют болезнь, действует в настоящее время только в зоне города - курорта Сочи.

Таким образом, в последние годы отмечается ухудшение ситуации в РФ, связанной с бешенством среди животных. Число неблагополучных пунктов за исследуемый период увеличилось более чем в 3 раза. При этом вырос удельный вес территорий, связанных с дикими животными. В многолетней динамике заболеваемости бешенством животных отмечается выраженная тенденция к росту со средним темпом 10% ежегодно. Дикие плотоядные животные в структуре заболевших составили в 2009 г. практически более половины всех зарегистрированных случаев (52,7%).

По официальным данным ФГУ «Центр ветеринарии», в 2010 г. зарегистрировано 3923 неблагополучных по бешенству пункта, где заболело 4437 животных. При этом заболеваемость бешенством диких животных составила 53,7% от всех зарегистрированных случаев.

В Российской Федерации ветеринарной службой проводятся мероприятия по оральной иммунизации против бешенства диких плотоядных животных.

Однако эти мероприятия наряду с мерами по снижению численности наиболее значимых видов пока остаются малоэффективными.

Анализом заболеваемости бешенством по Федеральным округам (ФО) РФ за 2004-2009 гг. установлен максимальный уровень заболеваемости бешенством в Центральном (33,2%), высокий - в Приволжском (29,9%) и Южном (13,0%), минимальный - в Дальневосточном (1,0 %) ФО.

Отмечены существенные региональные различия видовой структуры заболеваемости. Так, для Центрального, Северо-Западного, Приволжского, Уральского, Сибирского и Дальневосточного ФО характерно преобладание бешенства диких животных, для зоны Урала - заболеваний крупного рогатого скота, Северного Кавказа - бешенства собак.

Установлена двух-пятилетняя периодичность заболеваемости бешенством в РФ с максимальным его проявлением в весенние месяцы года - 30,5%, на зимние месяцы приходится 27,2%, осенние - 24,7%, на летние - 17,7%.

Анализ эпидемиологической статистики по заболеваемости гидрофобией в РФ свидетельствует о том, что с начала 70-х годов в нашей стране ежегодно регистрируется от 4-х до 22-х случаев заболевания с циклическими колебаниями в 2 - 3 года.

Ежегодно в России антирабическую помощь получают от 250 до 450 тысяч человек, пострадавших от укусов животных, из которых 25% составляют дети.

В соответствии с Постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.08.2008 № 53 «Об усилении мероприятий по борьбе с бешенством в Российской Федерации» в регионах издано 430 организационно-распорядительных документов. В большинстве территорий подготовлены нормативно-правовые акты в адрес местных органов исполнительной власти и органов управления здравоохранением.

Кроме того, для ликвидации очагов стационарного неблагополучия по бешенству и создания защитных иммунных барьеров необходимо, на наш взгляд, с учетом данных литературы разработать единую государственную Программу одновременного проведения широкомасштабных кампаний оральной иммунизации диких плотоядных, позволяющую проводить планомерную вакцинацию в регионах РФ на протяжении не менее 8 лет в сочетании с регулированием их численности. В этой Программе должны быть определены цели, обоснования, технические н организационные детали и бюджетные потребности проекта, а также установлены сферы ответственности участвующих учреждений.

3.2 Анализ эпизоотолого-эпидемиологической ситуации н совершенствование мер борьбы с бешенством в Смоленской области

Системный анализ эпизоотической ситуации за 1995-2009 гг. показал, что в Смоленской области бешенство регистрировалось в 25 районах у 758 животных, в том числе у 557 диких, что составило 73,5% от всех

заболевших животных в области, 25 сельскохозяйственных (3,3%) и 176 домашних (23,2%) животных. Среди диких животных бешенством болело 427 лисиц (56,3%), 106 енотовидных собак (14,0%), 8 волков (1,1%), 5 хорей (0,7%), 4 барсука (0,5%). Кроме того, в единичных случаях бешенство регистрировалось в различные годы у рысей, лосей, нутрий (по 0,3%) и ондатры (0,1%). При этом основным источником и распространителем бешенства в области являются лисицы, на долю которых среди заболевших диких животных приходится 76,7%.

Таким образом, по зараженности бешенством первые позиции занимают лисы - 56,3%, собаки - 17,4%, енотовидные собаки - 14,0%, кошки - 5,8% и КРС-2,24%.

Необходимо отметить, что за 2005-2009 гг. по сравнению с 1995-1999 гг. количество заболевших бешенством животных возросло в 3,1 раза, в том числе среди диких животных в 3,8 раза (среди лисиц в 2,9 раза, енотовидных собак в 9,4 раза), домашних животных в 2,3 раза, среди сельскохозяйственных животных в 2,1 раза (среди КРС в 2,8 раза).

В 2010 г. зарегистрировано 66 случаев бешенства в 15 районах области у различных видов домашних и диких животных, в том числе у 5 собак (7,6%) и 4 кошек (6,1%), 29 лисиц (43,9%), 27 енотовидных собак (40,9%) и волка (1,5%). При этом среди заболевших диких животных лисицы составили 50,9%, енотовидные собаки - 47,4%, волки - 1,7%. В то же время среди с.-х. животных заболевание бешенством не регистрировалось.

Таким образом, лисы остаются главным источником и распространителем бешенства в Смоленской области, возросла эпизоотологическая значимость енотовидных собак. По данным Департамента Смоленской области по охране, контролю и регулированию использования объектов животного мира и среды обитания, плотность популяции лисиц в среднем по области соответствует 0,26 гол./кв.км, то есть ниже пороговой плотности, упомянутой в литературе (от 0,6 до 1 гол./кв.км - по М.БШЬЬе, 1981 и 0,2 гол./кв.км - по В.Тоша, 1977), однако в целом по Смоленской области обстановка по заболеваемости бешенством сохраняется напряженной.

Вместе с тем, расчеты показали, что заболеваемость бешенством в Смоленской области имеет значимую (Р<0,05) среднюю корреляцию с численностью лисиц (г=0,37), сильную - с численностью енотовидных собак (г=0,71) и слабую - с численностью волков (г=0,01).

В связи с вышеизложенным, считаем целесообразным рекомендовать снижение плотности популяции лисиц в районах Смоленской области до 0,2 гол/кв.км, где плотность популяции превышает это значение, а в очагах бешенства - поголовное истребление лисиц, уничтожение волков и енотовидных собак.

По данным ГУВ Смоленской области, наиболее неблагополучным по заболеваемости бешенством в 2009 г. был Вяземский район, где установлено 22

случая бешенства. За 1995-2009 гг. заболеваемость в указанном районе зарегистрирована в 22 сельских поселениях и г. Вязьма у 100 животных, в том числе у 70 диких, 3-х с.-х. и 27 домашних животных. Главным источником и распространителем бешенства являются лисицы, на долю которых среди диких животных приходится 85,7%.

Далее было выявлено, что в Смоленской области за период 1995-2009 гг. заболевание бешенством встречалось во всех 25 районах области. Проведено картографирование неблагополучных по заболеваемости бешенством районов и разделение их по степени напряженности эпизоотической ситуации на 4 условные группы. Первая группа - наиболее опасная зона, где за исследуемый период регистрировали 50 и более случаев бешенства в 5 районах: Вяземском, Демидовском, Краснинском, Монастырщинском и Смоленском. Вторая группа - опасная зона, в которой за исследуемый период количество случаев бешенства варьировало от 30 до 50 в 5 районах области: Починковском, Сычевском, Гагаринском, Рославльском и Руднянском. Третья группа - средняя зона, где за указанный период регистрировали от 10 до 30 случаев бешенства в 12 районах области: Велижском, Глинковском, Дорогобужском, Духовщинском, Ельнинском, Кардымовском, Новодугинском, Темкинском, Угранском, Хиславичском, Холм-Жирковском и Шумячском. Четвертая группа - слабая зона, где регистрировали от 1 до 10 случаев заболевания бешенством, к ней отнесены 3 района области: Ершичский, Сафоновский и Ярцевский.

Выделенные районы первой, второй и третьей групп характеризуются соответствующим риском заражения человека и животных. Выявление зон повышенного риска распространения болезни позволяет уточнять оптимальные масштабы и сроки профилактической вакцинации животных, своевременно регулировать численность диких животных и борьбу с бродячими животными.

Не исключается возможность трансграничного переноса возбудителя болезни на территорию Смоленской области из граничащих с ней неблагополучных по бешенству областей Центрального и Северо-Западного ФО Российской Федерации, а также Республики Беларусь, среди которых наиболее неблагополучными являются Московская область, где за 2008-2009 гг. зарегистрировано 476 случаев бешенства; Витебская область -407; Тверская - 397; Могилевская - 264, Калужская - 235 и Брянская -125 случаев.

При анализе периодичности эпизоотии бешенства в Смоленской области за последние 15 лет обращает на себя внимание увеличение амплитуды кривой заболеваемости бешенством через 4 5 -, 2 - и 5 лет: в 1998 г. - 53-, 2001 г. -75-, 2003 г. - 83 - и 2008 г. - 100 случаев с максимальным проявлением в весенние месяцы - 32,6%, минимальным - в летние месяцы — 14,5%, на зимние месяцы приходится - 29,8%, осенние -23,1%. Сезонность болезни должна учитываться при проведении профилактической иммунизации животных. Так,

иммунизацию собак в сельской местности целесообразно проводить в осенние месяцы.

По данным Главного санитарного врача по Смоленской области, за 20042008 гг. число лиц, обратившихся за медицинской помощью из числа пострадавших от животных, составило 19088 человек, из них курс антирабических прививок получило 12624 (67,0%) человек.

Вызывают тревогу факты отказов от прививок и самостоятельного прекращения их проведения на территории области, что свидетельствует о недостаточной информированности населения об опасности бешенства. Так, за указанный период самостоятельно прекращали или отказались от вакцинации 909 человек, то есть в среднем по области 7,5% вакцинируемых.

В целях предупреждения заболевания населения Смоленской области бешенством вышло Постановление Главного государственного санитарного врача по Смоленской области №2 от 10.02.2009 г. «Об усилении мероприятий по борьбе с бешенством на территории Смоленской области».

Ветеринарной службой организованы профилактические вакцинации с.-х. животных, охотничьих, служебных и хозяйственных собак и кошек. Осуществляется наблюдение за животными, покусавшими людей. Необходимо отметить, что профилактическая антирабическая вакцинация е.- х. животных, главным образом крупного рогатого скота в Смоленской области, начатая с 2008 г. и проводимая в течение 2-х лет, дала положительный эффект: в 2009 г. бешенство среди крупного рогатого скота не регистрировалось.

Для профилактики бешенства в дикой фауне в 2008-2009 гг. применялась вирус-вакцина для оральной иммунизации диких плотоядных животных против бешенства «Оралрабивак» из штамма «РБ-97», которая была распределена rio охотничьим хозяйствам в 25 неблагополучных районах области с учетом площади ареала обитания лисиц, количества жилых и нежилых нор лисиц, енотовидной собаки и барсука.

Опрос на местах эпизоотологов и егерей относительно поедаемости приманок с вакциной показал, что согласно их наблюдениям, в большей степени приманка съедается, а капсула с вакциной ввиду своей жесткости не раскусывается лисицей и не заглатывается; если вирус-вакцина разбрасывается машиной типа «Буран», то распределение между лисьими особями происходит неравномерно или поедается представителями других семейств, то есть к целевым животным вирус-вакцина поступает в малых количествах. В этой связи нами разработана Программа мероприятий по изучению эффективности поедаемости антирабической вакцины для перорального применения на ограниченной территории в Смоленской области Российской Федерации, согласованная с начальником ГУВ Смоленской области, директором ФГУ «ВГНКИ», начальником Департамента Смоленской области по охране, контролю и регулированию использования объектов животного мира и среды их обитания и утверждена директором ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 14.01.2011 г.

Сложившаяся в Смоленской области неблагоприятная эпизоотоло-гическая и эпидемиологическая ситуация может быть в значительной мере оптимизирована, принимая во внимание тот факт, что заболевание бешенством является иммуноуправляемой инфекцией и применяемые антирабические иммунобиологические препараты (при условии их своевременного и адекватного использования) являются достаточно эффективными и безопасными как для людей, так и для животных.

Вместе с тем, необходимо организовать контроль за численностью диких и безнадзорных животных, являющихся источником заболевания, а также за поедаемостью вакцин с приманкой для перорального их применения дикими плотоядными, проводить серологический контроль эффективности вакцинопрофилактики бешенства животных, вести более жесткий контроль за выполнением Постановления Главного государственного санитарного врача Российской Федерации «Об усилении мероприятий по борьбе с бешенством в Российской Федерации» (№53 от 29.08.2008 г.).

3.3 Разработка и применение иммуноферментнои тест-системы для контроля эффективности вакцннопрофилактики бешенства

Для получения гликопротеина вируса бешенства, штамм "Овечий" ГНКИ, использовали культуральные вируссодержащие жидкости с титром инфекционности не ниже 5,7 Ь050/0,03мл. С целью частичной очистки и концентрирования антиген подвергали ультрацентрифугированию при 25 тыс.об/мин на ультрацентрифуге Весктап, ротор ТьбО. Осадок ресуспендировали в ОТЕ-буфере, рН 7,5. Вирус очищали в линейном градиенте плотности сахарозы (15-50%) в течение 120 мин при 50000 g и 4°С.

Наличие антигена вируса бешенства контролировали в сэндвич-варианте метода ИФА. Фракция, содержащая гликопротеин, располагалась в зоне 15-20% плотности сахарозы. Методом электрофореза в 12,5%-ном ПААГе установлена мол. масса этой фракции, соответствующая 67 кД.

Специфичность гликопротеина была подтверждена методом иммуноблотинга. В результате исследований получен специфический антиген на основе гликопротеина вируса бешенства, штамм "Овечий" ГНКИ, активность которого в ИФА составила 1:2560 (К„,=2,1), концентрация белка -338 мкг/мл.

В дальнейшем проводили эксперименты по разработке антивидовых пероксидазных конъюгатов (иммунизация кроликов, получение 1° О, конъюгирование его с пероксидазой хрена). Активность и специфичность антивидовых пероксидазных конъюгатов определяли шахматным титрованием с использованием гомологичных и гетерологичных сывороток. В качестве гомологичных сывороток использовали пул антирабических сывороток крови лисиц и пул антирабических сывороток крови собак для соответствующих конъюгатов. При этом гетерологичные сыворотки иммобилизовывали непосредственно на полистироловый планшет, тогда как отрицательную и

положительную контрольные сыворотки наслаивали на специфический антиген вируса бешенства. В результате проведенных исследований установлена высокая специфичность разработанных антивидовых пероксидазных конъюгатов - антител кроликов, против лисиц и собак, меченных пероксидазой хрена, так как они реагируют с антителами соответствующих контрольных положительных сывороток и не реагируют с антителами гетерологичных сывороток. Полученные антивидовые пероксидазные конъюгаты были активны в разведениях 1:100 - 1:400.

На основе гликопротеина вируса бешенства и антивидовых пероксидазных конъюгатов разработана иммуноферментная тест-система, включающая гликопротеин вируса бешенства, штамм "Овечий" ГНКИ; контрольные положительную и отрицательную сыворотки; антивидовой глобулин (или белок А), меченный пероксидазой; концентрат фосфатно-буферного раствора, рН 7,4, с твином; карбонатно-бикарбонатный буфер, рН 9,6; фосфатно-цитратный буферный раствор, рН 4,9; орто-фенилендиамин.

Разработанная иммуноферментная тест-система в дальнейшем испытывалась при выявлении специфических антител в сыворотках крови животных, вакцинированных против бешенства, для контроля за их иммунным состоянием. Исследовали 174 пробы сывороток крови вакцинированных с.-х. и домашних животных, поступивших из неблагополучных по заболеванию бешенством хозяйств РТ и Смоленской области, а также 6 красных лисиц. Результаты ИФА сопоставляли с РН на белых мышах.

В результате исследований показано, что титры антител в сыворотках крови овец и крупного рогатого скота, вакцинированных против бешенства, варьируют в ИФА от 1:800 до 1:6400, собак-от 1:320 до 1:1280, лисиц-от 1:20 до 1:1280 (К>2,1). При этом титры антител в сыворотках крови по ИФА были выше, чем в РН в 4-8 раз. Иммуноферментным анализом сывороток крови крупного рогатого скота и собак в динамике иммуногенеза установлена высокая степень защиты животных (титр антител в сыворотках крови соответствовал 2,5-20 МЕ и более) к заражению бешенством в течение 12 мес после вакцинации (срок наблюдения). Установлена также прямая корреляция результатов ИФА и РН (г=0,9; Р<0,05). При этом по чувствительности и быстроте получения результатов ИФА (6-7 ч) превосходит РН на мышах (14 сут).

Разработанная тест-система была применена для иммуноферментного обнаружения антирабических антител в образцах глазной жидкости лисиц, добытых в природных очагах бешенства РТ и Смоленской области, где проводилась оральная вакцинация. Результаты ИФА (глазной жидкости 63 лисиц) выборочно сопоставляли с результатами реакции вирусной нейтрализации на белых мышах (32 пробы). В целом получено совпадение результатов ИФА и РН в 87,5% случаев. При этом из 63 исследуемых образцов

глазной жидкости лисиц положительными оказались 37, т.е. 58,7% исследуемых проб с титром антител в ИФА 1:100-1:200 при 1^=2,1 и более.

Необходимо отметить, что исследованием мозга лисиц, отстрелянных в лесных урочищах Смоленской области и Республики Татарстан, где проводилась оральная вакцинация, методами иммунофлуоресценции и иммуноферментного анализа, а также биопробой на белых мышах и в культуре клеток НГУК-1, показано отсутствие антигена вируса бешенства.

По итогам исследований разработана инструкция по применению «Иммуноферментной тест-системы для определения уровня антирабических антител в сыворотках крови животных, вакцинированных против бешенства, методом непрямого иммуноферментного анализа (ИФА)», которая утверждена директором ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 21.07. 2010 г.

На следующем этапе исследований представляло интерес расширение возможностей применения иммуноферментного анализа для определения антирабических антител в сыворотках крови животных, вакцинированных против бешенства, используя принцип подавления титров специфического антигена сывороточными антителами исследуемых сывороток в блок - сэндвич-варианте ИФА.

В результате проведенных исследований разработана и апробирована иммуноферментная тест-система на основе антирабического глобулина и антирабического пероксидазного конъюгата для определения специфических антител в сыворотках различных видов животных, вакцинированных против бешенства, в блок-ИФА. В качестве специфического антигена использовали гликопротеин вируса бешенства, штамм «Овечий» ГНКИ в концентрации 30 мкг/мл или стандартный вирус бешенства, штамм CVS, с титром 4 lg LDS0, применение которых в рабочих разведениях не изменяло чувствительность иммуноферментного анализа.

Сравнительный анализ показал, что чувствительность блок-ИФА при последовательном внесении и инкубации антигена вируса бешенства, штамм CVS и сывороток превосходит таковую блок-ИФА при одновременном их внесении. Поэтому в дальнейших исследованиях использовали последовательный вариант проведения блок-ИФА.

Антирабический глобулин и антирабический пероксидазный конъюгат реагируют со специфическими антигенами вируса бешенства и не реагируют с контрольными положительными и отрицательными сыворотками различных видов животных, что свидетельствует об их высокой специфичности.

Сравнительное исследование 72 проб сывороток крови собак, кошек, лисиц и е.- х. животных, вакцинированных против бешенства, методом ИФА и РН в культуре клеток выявило соответствие результатов этих методов, составляющее 88,6% и преимущество блок-ИФА по чувствительности и экспрессности перед РН.

Разработанная иммуноферментная тест-система является универсальной для определения специфических антител в сыворотках крови различных видов животных в блок-ИФА с помощью антирабического глобулина и антирабического пероксидазного конъюгата, так как не требуется наличия антивидовых пероксидазных конъюгатов к каждому виду животного.

Таким образом, в результате проведенных исследований установлена высокая специфичность иммуноферментной тест-системы с использованием в качестве специфического антигена гликопротеина вируса бешенства и стандартного вируса бешенства, штамм CVS, для определения уровня антител к вирусу бешенства в сыворотках крови вакцинированных овец, крупного рогатого скота, собак, кошек и лисиц методом блок-ИФА.

Результаты блок-ИФА коррелируют с данными РН на белых мышах (г=0,9; Р<0,05). При этом ИФА превосходит РН на мышах по чувствительности и быстроте получения результатов (7-8 ч против 14 сут).

В результате проведенных исследований разработана инструкция по применению «Иммуноферментной тест-системы для определения уровня антител к вирусу бешенства в сыворотках крови животных методом блок-иммуноферментного анализа (блок-ИФА)», которая утверждена директором ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 21.07. 2010 г.

3.4 Изучение иммунного статуса организма собак и лисиц, вакцинированных против бешенства

Как известно, в Российской Федерации для профилактики бешенства собак используют различные отечественные и зарубежные антирабические вакцины: «Рабикан» (ФГУП «Щелковский биокомбинат»), «Мультикан» (ЗАО «НПО Нарвак», Москва), «Дипентавак» (ЗАО «Ветзвероцентр»), «Нобивак -Рабиес» («Интервет Интернэшнл», Нидерланды), зарегистрированные в Российской Федерации. В этой связи на следующем этапе исследований представляло интерес изучение иммунного статуса организма собак после вакцинации различными антирабическими вакцинами. Сыворотки от вакцинированных собак были любезно предоставлены начальником ветслужбы Зонального Центра кинологической службы МВД по РТ А.О.Горлик. Изучение гематологических и иммунологических показателей крови собак проводили в различные сроки после вакцинации различными антирабическими вакцинами.

В результате исследований показано, что через 1 мес после вакцинации антирабической вакциной «Рабикан» из штамма «Щелково - 51», количество лейкоцитов в крови превышало таковое у интактных животных на 17,4%. В этот срок исследований в крови вакцинированных животных отмечено увеличение содержания Т- и В-лимфоцитов на 24,7- и 13,4% соответственно. Уровень фагоцитарной активности нейтрофилов (ФАН) крови и фагоцитарного числа (ФЧ) увеличился на 21,1- и 6,5% соответственно. Спустя 3 мес после вакцинации у животных отмечено повышение количества лейкоцитов на 24,2%, лимфоцитов - на 12,3%, содержание иммунокомпетентных клеток -

Т- и В-лимфоцитов возросло, в среднем на 22,9- и 30%, показатели фагоцитоза - на 65,8%. В результате исследований установлено также, что через 6 мес после вакцинации продолжает отмечаться повышенное содержание в крови лейкоцитов - на 32,0%, иммунокомпетентных клеток - на 19,7- и 42,7%, повышается также ФАН - на 32,8%. Вместе с тем, через 10 мес после вакцинации, содержание лейкоцитов, лимфоцитов, Т- и В-лимфоцитов, показатели ФАН и ФЧ восстанавливались до пределов физиологической нормы.

При исследовании крови собак через 9 и 10 мес после вакцинации антирабической вакциной «Мультикан-8» количество Т-лимфоцитов было выше нормы на 25,3- и 29,9%, а В-лимфоцитов - на 16,8- и ¡6,7% соответствен но.

Исследованием крови собак, проведенном через 6 мес после иммунизации их антирабической вакциной «Дипентавак», установлено повышенное содержание в крови по сравнению с нормой: лейкоцитов - на 25,3%, лимфоцитов - на 11,2%, Т- и В-лимфоцитов соответственно - на 14,2- и 24,1%, ФАН - на 23,7% .

Значительные изменения наблюдались при исследовании крови собак, иммунизированных вакциной «Нобивак-Рабнес». Так, через 3 мес после вакцинации количество лейкоцитов и лимфоцитов повысилось - на 21,3- и 16,2%, иммунокомпетентных клеток - на 24,5- и 32,0%, показатели ФАН и ФЧ -на 42,3- и 69,2% соответственно.

Изучением иммунологической реактивности лисиц при вакцинации антирабической культуральной вакциной «Рабикан» из штамма «Щелково - 51» было установлено увеличение количества лейкоцитов и лимфоцитов. При этом содержание лейкоцитов в крови вакцинированных лисиц было выше, чем у невакцинированных животных на 28,4%, а лимфоцитов - на 4,3%.

Установлено также повышение количества Т- и В-лимфоцитов на 25,7- и 35,4% соответственно. У вакцинированных лисиц по сравнению с невакцинированными отмечен повышенный уровень показателей ФАН на 19,2- и ФЧ - на 14,2% и увеличение числа Т-хелперов на 17,8- и коэффициента дифференцировки Т-лимфоцитов - на 50,0% при уменьшении количества Т-супрессоров.

Таким образом, установлена высокая степень активизации неспецифических, клеточных и гуморальных факторов иммунитета после вакцинации собак и лисиц различными антирабическими вакцинами.

4 ВЫВОДЫ

Максимальный уровень заболеваемости бешенством отмечен в Центральном (33,2%), высокий - в Приволжском (29,9%) и Южном (13,0%), минимальный - в Дальневосточном (1,0%) Федеральных округах. Для Центрального, СевероЗападного, Приволжского, Уральского, Сибирского и Дальневосточного Федеральных округов характерно преобладание бешенства диких животных, для зоны Урала - заболеваний крупного рогатого скота, Северного Кавказа — бешенства собак. Установлена двух-пятилетняя периодичность заболеваемости бешенством в Российской Федерации с максимальным его проявлением в весенние месяцы года - 30,5%, на зимние месяцы приходится 27,2%, осенние -24,7%, на летние - 17,7%.

2. В Смоленской области РФ за 1995-2009 гг. бешенство установлено у 758 животных, в том числе у 557 диких (73,5%), 25 сельскохозяйственных (3,3%) и 176 домашних (23,2%) животных в 25 районах и 7 городах. Наиболее неблагополучным районом области является Вяземский, где за исследуемый период бешенство установлено у 100 животных, в том числе у 70 диких, 3 сельскохозяйственных и 27 домашних животных в 22 сельских поселениях и г.Вязьма. Основным источником и распространителем бешенства в Смоленской области являются лисицы, на долю которых среди заболевших диких животных приходится 76,7%, возросла эпизоотологическая значимость енотовидной собаки (19,2%). За последние пять лет по сравнению с 1995 - 1999 гг. выявлена тенденция роста заболеваемости среди диких животных в 3,8-, домашних - в 2,3- и сельскохозяйственных — в 2,1 раза.

3. Установлено увеличение амплитуды кривой заболеваемости бешенством в Смоленской области через 4-, 3-, 2- и 5 лет. Пики заболеваемости возрастали и составили в 1998 г. - 53-, 2001 г. - 75-, 2003 г. - 83- и 2008 г. -100 случаев. Максимальное проявление бешенства регистрируется в весенние месяцы года - 32,6%, на зимние месяцы приходится - 29,8%, осенние - 23,1%, летние - 14,5%.

4. Проведено картографирование неблагополучных по заболеваемости бешенством районов Смоленской области и разделение их по степени напряженности эпизоотической ситуации на 4 условные группы. Наиболее неблагополучные по бешенству районы расположены в западной, северовосточной и юго-восточной части области.

5. На основании проведенного графического анализа влияния численности диких животных на заболеваемость бешенством в Смоленской области установлена значимая (Р<0,05) корреляция заболеваемости бешенством средней степени с численностью лисиц (г=0,37), сильной — с численностью енотовидных собак (г=0,71) и слабой - с численностью волков (г=0,01).

вакцинированных собак, лисиц и сельскохозяйственных животных. Сравнительное исследование проб сывороток крови методом ИФА и РН выявило прямую корреляцию этих методов (г=0,9; Р<0,05) и преимущество метода ИФА перед РН на мышах по чувствительности в 4-8 раз и экспрессности (7-8 ч против 14 сут).

7. Разработана и апробирована иммуноферментная тест-система на основе антирабического глобулина и антирабического пероксндачного конъюгата для определения специфических антител в сыворотках различных видов животных, вакцинированных против бешенства, в блок - варианте ИФА. Сравнительное исследование сывороток крови вакцинированных собак, кошек, лисиц и сельскохозяйственных животных методом ИФА и в РН в культуре клеток выявило соответствие результатов этих методов, составляющее 88,6% и преимущество блок-ИФА по чувствительности и экспрессности перед РН.

8. Установлена высокая степень активизации неспецифических, клеточных и гуморальных факторов иммунитета у собак и лисиц, вакцинированных различными антирабическими вакцинами, выражающаяся повышением количества лейкоцитов, иммунокомпетентных клеток и показателей фагоцитоза.

9. Проведенным анализом эффективности вакцинопрофилактики бешенства крупного рогатого скота и собак в неблагополучных хозяйствах Республики Татарстан и Смоленской области в динамике иммуногенеза установлена высокая степень защиты животных (титр антител в сыворотках крови соответствовал 2,5-20 МЕ и более) к заражению бешенством в течение 12 мес после вакцинации (срок наблюдения).

5 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для контроля эффективности вакцинопрофилактики бешенства рекомендуем использовать в ветеринарной практике разработанные иммуноферментные тест-системы для определения уровня антирабических антител в сыворотках крови различных видов животных, вакцинированных против бешенства, а также Программу мероприятий по изучению поедаемости антирабической вакцины для перорального применения.

С целью снижения энзоотии бешенства в Российской Федерации в целом рекомендуем разработать единую государственную Программу одновременного проведения широкомасштабных кампаний оральной иммунизации диких плотоядных, позволяющую проводить планомерную вакцинацию в регионах РФ на протяжении не менее 8 лет в сочетании с регулированием их численности.

Результаты проведенных исследований и учебно-методическое пособие в иллюстрациях: «Бешенство. Этиология. Эпизоотология. Диагностика», выпущенное издательством «Колос» (М., 2010), используются в практике специалистами государственной ветеринарной службы Российской Федерации,

ветеринарных лабораторий, научными сотрудниками, а также при чтении

лекций студентам и слушателям курса повышения квалификации.

6 СПИСОК РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Гулюкин, A.M. Необходим учет новых особенностей эпизоотологии бешенства / В.М.Авилов, В.А.Седов, A.M.Гулюкин и др. // Ветеринария, 1998.-Х» 6. -С. 3-6.

2. Гулюкин, A.M. Особенности современного этапа эволюции эпизоотического процесса бешенства / В.А.Седов, В.А.Ведерников, А.М.Гулюкин и др. // Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными и экзотическими болезнями животных. Матер межд. науч-практич. конф., посвящ. 40-летию ВНИИВВиМ - Покров, 1998. - С. 153-156.

3. Гулюкин, A.M. Бешенство животных в РФ. Некоторые пути совершенствования системы надзора и контроля / В.А.Седов,

B.А.Ведерников, А.М.Гулюкин и др. // Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными и экзотическими болезнями животных. Матер межд. науч-практич. конф., посвящ. 40-летию ВНИИВВиМ - Покров, 1998. -

C. 156-159.

4. Гулюкин, A.M. Обзор эпизоотической ситуации бешенства в Российской Федерации в 2000 году и прогноз на 2001 год / В.А.Ведерников, А.А.Шабейкин, А.М.Гулюкин и др. // Ветеринарная патология, 2002. - № 1,-С. 52-58.

5. Гулюкин, A.M. Бешенство животных в России: особенности современной эпизоотической обстановки / В.А.Апапькин, В.А.Ведерников, А.М.Гулюкин и др. // Ветеринария, 2004.- № 12,- С.З - 7.

6. Гулюкин, A.M. Бешенство в Российской Федерации в 2000 - 2005 гг. / О.С.Хадарцев, Ю.М.Федоров, А.М.Гулюкин и др. // Информационный бюллетень, М.:Роспотребнадзор, 2006.- 38 с.

7. Гулюкин, А.М. Социально-экономическое значение бешенства / А.М.Гулюкин, Ю.С.Смолянинов, Г.Н.Сидоров // «Актуальные проблемы ветеринарной медицины продуктивных и непродуктивных животных», Сб. науч. тр., Омск, 2006. - С.64-70.

8. Гулюкин, A.M. Обзор эпизоотической ситуации по бешенству в Российской Федерации в 2007 году и в 1 полугодии 2008 года / В.А.Ведерников, И.В.Балдина, А.М.Гулюкин и др. // Информационный бюллетень, М. - 2008.25 с.

9. Гулюкин, A.M. Бешенство в Восточной Европе: актуальный вектор развития эпизоотического процесса / В.В.Макаров, О.И.Сухарев, А.М.Гулюкин, Б.В Боев // Вестник РАСХН. - 2008. - № 4. - С.58 - 60.

10.Гулюкин, A.M. Бешенство енотовидных собак: статистический анализ заболеваемости / В.В.Макаров, О.И.Сухарев, А.М.Гулюкин, Б.В.Боев // Ветеринария, 2009. - № 6. - С. 20 - 25.

11. Гулюкин, A.M. Пути усовершенствования мероприятий по борьбе с бешенством / A.M. Гулюкин // Актуальные вопросы инфектологии. Матер, юбилейной науч.-практич. конф., посвящ. 85-летию кафедры инфекционных болезней Казанского государственного медицинского университета,- Казань, 20] 0. - С.66-67.

12. Гулюкин, A.M. Оценка эффективности вакцинопрофилактики бешенства с помощью иммуноферментной тест-системы / A.M.Гулюкин, Н.А.Хисма-туллина, А.Н.Чернов и др. // Биотехнология: экология крупных городов. -Матер. Московской межд. науч.- практич. конф. 15-17 марта. - 2010.- С.465-466.

13. Гулюкин, A.M. Бешенство. Этиология. Эпизоотология. Диагностика / А.В.Иванов, Н.А.Хисматуллина, А.Н.Чернов, А.М.Гулюкин // Учебно-методическое пособие в иллюстрациях, М., «Колос», 2010. - 50 с.

14. Гулюкин, A.M. Эпизоотологический и иммунологический надзор за бешенством / А.В.Иванов, Н.А.Хисматуллина, А.М.Гулюкин // Ветеринарный врач. - Казань, 2010. - № 4 (17). - С. 3 - 6.

15. Гулюкин, A.M. Информационно-образовательная работа по профилактике бешенства / Н.А.Хисматуллина, Т.А.Савицкая, Г.Х.Муртазина, А.М.Гулюкин // Актуальные вопросы инфектологии. Матер, юбилейной науч.-практич. конф., посвящ.85-летию кафедры инфекционных болезней Казанского государственного медицинского университета,- Казань, 2010. -С. 72-73.

16. Гулюкин, A.M. Совершенствование мер борьбы с бешенством в Смоленской области / Н.А. Хисматуллина, A.M. Гулюкин, С.Р. Кулакова, И.В. Амирова // Ветеринария.-2011. - №4. - С.24-27.

17.Gulyukin, A.M. Summary of Rabies in the Russian Federation - Particularities of the Present Situation / V.A.Vedemikov, V.A.Sedov, A.M.Gulyukin et al. // Rabies bulletin Europe. Information surveillance research, Ns 4, 1999. - P.13 - 15.

ГУЛЮКИН АЛЕКСЕЙ МИХАЙЛОВИЧ

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ и СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СЕРОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ БЕШЕНСТВА

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань - 2011

Подписано в печать 01.04.2011 г. Сдано в набор 06.04.2011 г. Заказ № 70

Формат 60x84/16. Гарнитура Times New Roman Усл. печ. л. 1,1. Бумага офсетная

Тираж 100 экз. Отпечатано с оригинал-макета В типографии ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 420075, г.Казань, Научный городок-2

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Гулюкин, Алексей Михайлович

Введение.

1 Обзор литературы.

1.1 Распространение и источники вируса бешенства.

1.2 Биологические свойства возбудителя бешенства.

1.3 Методы диагностики и эпизоотологического мониторинга бешенства.

1.4 Профилактика и меры борьбы с бешенством.

2 Собственные исследования.

2.1 Материалы и методы исследований.

2.1.1 Материалы исследований.

2.1.2 Методы исследований.

3 Результаты собственных исследований.

3.1 Анализ эпизоотолого-эпидемиологической ситуации и мер борьбы с бешенством в Российской Федерации.

3.2 Анализ эпизоотолого-эпидемиологической ситуации и совершенствование мер борьбы с бешенством в Смоленской области.

3.2.1 Природно-географическая и экономическая характеристика Смоленской области.

3.2.2 Характеристика эпизоотического состояния по заболеваемости бешенством в Смоленской области.

3.2.3 Характеристика территориальной приуроченности вспышек бешенства, картографирование неблагополучных пунктов.

3.2.4 Характеристика эпизоотической ситуации по заболеваемости бешенством в Смоленской области по годам и сезонам года.

3.2.5 Изучение связи заболеваемости бешенством животных с плотностью популяции диких животных.

3.2.6 Анализ эпизоотолого — эпидемиологической ситуации и мер борьбы с бешенством в Смоленской области.

3.2.7 Эпизоотологическое обследование Вяземского района Смоленской области.

3.2.8 Пути усовершенствования противоэпизоотических мероприятий.

3.2.9 Разработка Программы мероприятий по изучению эффективности поедаемости антирабической вакцины для перорального применения на ограниченной территории в Смоленской области.

3.3 Разработка и применение иммуноферментной тест-системы для контроля эффективности вакцинопрофилактики бешенства.

3.3.1 Разработка и применение иммуноферментной тест-системы на основе гликопротеина вируса бешенства, штамм "Овечий" ГНКИ, для контроля иммунного состояния животных, вакцинированных против бешенства, методом непрямого иммуноферментного анализа (ИФА).

3.3.2 Разработка и применение иммуноферментной тест-системы для контроля иммунного состояния животных, вакцинированных против бешенства, методом блок - иммуноферментного анализа (блок-ИФА).

3.3.3 Серологический контроль уровня антирабических антител у вакцинированных животных методом иммуноферментного анализа

3.4 Изучение иммунного статуса организма собак и лисиц, вакцинированных против бешенства.

4 Обсуждение результатов собственных исследований.

5 Выводы.

6 Практические предложения.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Эпизоотологический мониторинг и совершенствование серологического контроля эффективности вакцинопрофилактики бешенства"

Актуальность темы. Несмотря на определенные достижения в изучении этиологии, диагностики, профилактики, эпизоотологии и эпидемиологии бешенства, остаются не решенными и актуальными дальнейшее изучение и совершенствование эпизоотолого-эпидемиологического надзора, средств и методов контроля эффективности вакцинопрофилактики.

В большинстве регионов России эпизоотическая ситуация по бешенству чрезвычайно сложна — резко активизировались природные очаги этой инфекции, увеличилось число случаев заболеваний среди диких плотоядных, домашних и сельскохозяйственных животных, ежегодно регистрируются случаи заболеваний людей с летальным исходом (Макаров В.В., Воробьев A.A., 2004; Бардина Н.С. и соавт., 2008; Хадарцев О.С., Федоров Ю.М., Жилина Н.Я. и со-авт., 2006; Гулюкин М.И., Ведерников В.А., 2008; Полещук Е.М. и соавт., 2009; Сидоров Г.Н. и соавт., 2010 и др.).

В этом направлении установлена перспективность использования твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) для обнаружения антител в сыворотке крови людей, привитых антирабическими вакцинами, а также у иммунизированных животных (Сазанова Э.Я. и др., 1988; Ботвинкин А.Д., Селимов М.А., Клюева Е.В. и соавт., 1990; Клюкина В.И. и соавт., 2008; Atana-siu Р., Savy N., Perrin Р., 1977; Nicholson K.G., Prestage Н., 1982 и др.). Однако вопросы совершенствования эпизоотолого-эпидемиологического надзора и разработки новых средств контроля эффективности вакцинопрофилактики бешенства по-прежнему остаются важной проблемой ветеринарии и медицины.

Цель и задачи исследований. Цель исследований — комплексное проведение эпизоотологического мониторинга бешенства в Российской Федерации в целом, а также в Смоленской области в частности, и усовершенствование системы противоэпизоотических мероприятий.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

3. Разработать иммуноферментную тест — систему для контроля эффективности вакцинопрофилактики бешенства.

4. Изучить иммунный статус у животных, вакцинированных против бешенства.

Научная новизна. Впервые разработана и апробирована иммунофер-ментная тест-система на основе антирабического глобулина и антирабического пероксидазного конъюгата для определения специфических антител в сыворотках крови различных видов животных, вакцинированных против бешенства, в блок-варианте ИФА. Представленная иммуноферментная тест-система является универсальной, так как не требуется наличия антивидовых пероксидазных конъюгатов к каждому виду животного.

Практическая значимость. Результаты проведенных исследований вошли в «Инструкцию по применению иммуноферментной тест-системы для определения уровня антирабических антител в сыворотках крови животных, вакцинированных против бешенства, методом непрямого иммуноферментного анализа (ИФА)», а также «Инструкцию по применению иммуноферментной тест-системы для определения уровня антител к вирусу бешенства в сыворотках крови животных методом блок-иммуноферментного анализа (блок-ИФА)», утв. директором ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 21.07.2010 г., «Программу мероприятий по изучению эффективности поедаемости антирабической вакцины для пе-рорального применения на ограниченной территории в Смоленской области», согласованную начальником ГУВ Смоленской области, директором ФГУ «ВГНКИ», начальником Департамента Смоленской области по охране, контролю и регулированию использования объектов животного мира и среды их обитания, утв. директором ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 14.01.2011г., а также в Учебно-методическое пособие в иллюстрациях: Бешенство. Этиология. Эпизоотология. Диагностика (изд. «Колос», М., 2010). Издан плакат: «Бешенство. Этиология. Эпизоотология. Диагностика и меры борьбы» (500 экз.).

Апробация результатов исследований. Основные положения диссертации представлены в квартальных информационных сводках Бюллетеня Европейского Центра ВОЗ Rabies Bulletin Europe (Information surveillance research) за 1998 — 2002 гг. и доложены на ежегодных отчетных научных сессиях ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по итогам НИР за 2006-2010 гг.; Международной научно-практической конференции «Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными и экзотическими болезнями животных» (Покров, 1998); Московской международной научно-практической конференции «Биотехнология: экология крупных городов» (Москва, 2010); Юбилейной научно-практической конференции, посвященной 85-летию кафедры инфекционных болезней Казанского государственного медицинского университета (Казань, 2010).

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 17 научных работ, в том числе 6 статей — в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, издано Учебно-методическое пособие в иллюстрациях.

Основные положения диссертации, выдвигаемые на защиту:

-характеристика эпизоотолого-эпидемиологической ситуации по заболеваемости бешенством в Российской Федерации и Смоленской области за 19962009 гг. и районирование территории области по степени распространения заболевания;

-усовершенствование эпизоотолого-эпидемиологического надзора за бе/ шенством.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 181 странице и включает: введение, обзор литературы, материалы и-методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов собственных исследований, выводы, практические предложения, библиографический список использованной литературы (всего 234 источника, в том числе 57 иностранных) и приложения. Диссертация иллюстрирована 32 таблицами и 19 рисунками.

Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Гулюкин, Алексей Михайлович

5 ВЫВОДЫ

1. Проведенным анализом эпизоотолого-эпидемиологической ситуации в Российской Федерации за 1996-2009 гг. заболевание бешенством установлено у 43620 животных, в том числе у 19002 диких (43,6%), 11135 сельскохозяйственных (25,5%) и 13483 домашних (30,9%) животных. Максимальный уровень заболеваемости бешенством отмечен в Центральном (33,2%), высокий - в Приволжском (29,9%) и Южном (13,0%), минимальный — в Дальневосточном (1,0%) Федеральных округах. Для Центрального, Северо-Западного, Приволжского, Уральского, Сибирского и Дальневосточного Федеральных округов ха- | рактерно преобладание бешенства диких животных, для зоны Урала - заболеваний крупного рогатого скота, Северного Кавказа — бешенства собак. Установлена двух-пятилетняя периодичность заболеваемости бешенством в Российской Федерации с максимальным его проявлением в весенние месяцы года — 30,5%, на зимние месяцы приходится 27,2%, осенние - 24,7%, на летние -17,7%.

2. В Смоленской области РФ за 1995-2009 гг. бешенство установлено у 758 животных, в том числе у 557 диких (73,5%), 25 сельскохозяйственных (3,3%) и 176 домашних (23,2%) животных в 25 районах и 7 городах. Наиболее неблагополучным районом области является Вяземский, где за исследуемый период бешенство установлено у 100 животных, в том числе у 70 диких, 3 сельскохозяйственных и 27 домашних животных в 22 сельских поселениях и г.Вязьма. Основным источником и распространителем бешенства в Смоленской области являются лисицы, на долю которых среди заболевших диких животных приходится 76,7%, возросла эпизоотологическая значимость енотовидной собаки (19,2%). За последние пять лет по сравнению с 1995 - 1999 гг. выявлена тенденция роста заболеваемости среди диких животных в 3,8-, домашних — в 2,3- и сельскохозяйственных — в 2,1 раза.

3. Установлено увеличение амплитуды кривой заболеваемости бешенством в Смоленской области через 4-, 3-, 2- и 5 лет. Пики заболеваемости возрастали и составили в 1998 г. - 53-, 2001 г. - 75-, 2003 г. - 83- и 2008 г. - 100 случаев. Максимальное проявление бешенства регистрируется в весенние месяцы года - 32,6%, на зимние месяцы приходится — 29,8%, осенние — 23,1%, летние -14,5%.

4. Проведено картографирование неблагополучных по заболеваемости бешенством районов Смоленской области и разделение их по степени напряженности эпизоотической ситуации на 4 условные группы. Наиболее неблагополучные по бешенству районы расположены в западной, северо-восточной и юго-восточной части области.

5. На основании проведенного графического анализа влияния чйсленно-сти диких животных на заболеваемость бешенством в Смоленской области установлена значимая (Р<0,05) корреляция заболеваемости бешенством средней степени с численностью лисиц (г=0,37), сильной — с численностью енотовидных собак (г=0,71) и слабой — с численностью волков (г=0,01).

6. Разработана и апробирована иммуноферментная тест-система с применением гликопротеина вируса бешенства, штамм «Овечий ГНКИ и антивидовых пероксидазных конъюгатов, обеспечивающая выявление специфических к вирусу бешенства антител в сыворотках крови вакцинированных собак, лисиц и сельскохозяйственных животных. Сравнительное исследование проб сывороток крови методом ИФА и РН выявило прямую корреляцию этих методов (г=0,9; Р<0,05) и преимущество метода ИФА перед РН на мышах по чувствительности в 4-8 раз и экспрессности (7-8 ч против 14 сут).

7. Разработана и апробирована иммуноферментная тест-система на основе антирабического глобулина и антирабического пероксидазного конъюгата для определения специфических антител в сыворотках различных видов животных, вакцинированных против бешенства, в блок - варианте ИФА. Сравнительное исследование сывороток крови вакцинированных собак, кошек, лисиц и сельскохозяйственных животных методом ИФА и в РН в культуре клеток выявило соответствие результатов этих методов, составляющее 88,6% и преимущество блок-ИФА по чувствительности и экспрессности перед РН.

6 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для контроля эффективности вакцинопрофилактики бешенства рекомендуем использовать в ветеринарной практике разработанные иммунофермент-ные тест-системы для определения уровня антирабических антител в сыворотках крови различных видов животных, вакцинированных против бешенства, а также Программу мероприятий по изучению поедаемости антирабической вакцины для перорального применения.

С целью снижения энзоотий бешенства в Российской Федерации в целом рекомендуем разработать единую государственную Программу одновременного проведения широкомасштабных кампаний оральной иммунизации диких плотоядных, позволяющую проводить планомерную вакцинацию в регионах РФ на протяжении не менее 8 лет в сочетании с регулированием их численности.

Результаты проведенных исследований, а также учебно-методическое пособие в иллюстрациях: Бешенство. Этиология. Эпизоотология. Диагностика, выпущенное издательством «Колос» (М., 2010), используются в практике специалистами государственной ветеринарной службы Российской Федерации, ветеринарных лабораторий, научными сотрудниками и при чтении лекций студентам и слушателям повышения квалификации.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Гулюкин, Алексей Михайлович, Казань

1. Авилов, В.М. Эпизоотическое состояние и эффективность проводимых мероприятий против бешенства животных в России / В.М.Авилов, А.А.Гусев, А.В.Савин // Ветеринария. 2002. - № 6 - С.З - 6.

2. Авилов, В.М. Актуальные проблемы профилактики особо опасных инфекций животных / В.М.Авилов, В.А.Седов // Ветеринария. 1994. -№ 6 — С. 3-6.

3. Авилов, В.М. Необходим учет новых особенностей эпизоотологии бешенства / В.М.Авилов, В.А.Седов, С.А.Коломыцев, В.А.Ведерников, П.Н.Пыталев, А.М.Гулюкин, Г.В.Хакин // Ветеринария. 1998. - № 6. - С. 3-6.

4. Адамович, В.Л. Ландшафтно-экологические предпосылки к существованию природных очагов рабической инфекции / В.Л.Адамович // Зоологический журнал. 1978. - Т. 57- № 2 - С. 260-271.

5. Адамович, В.Л. Природа и охота. Бешеные волки / В.Л.Адамович, Д.И.Бибиков, И.Г.Ротси / Зоологический журнал. — 1995. — № 2—3. С. 72-74.

6. Андерсонс, З.Э. Опыт районирования административной территории по риску возникновения бешенства животных /З.Э.Андерсонс // Тез. докл. Всесо-юз. науч. конф. по проблемам зоонозных инфекций Казань, 1983. — С. 32.

7. Анина-Радченко, Н.Д. К вопросу о применении реакции связывания комплемента для диагностики бешенства /Н.Д.Анина-Радченко// Симпозиум по бешенству. Тез. докл. ин—та полиомиелита и вирус, энцефалитов АМН СССР. — М., 1972.-С. 123-124.

8. Апалькин, В.А. Бешенство животных в России. Особенности современной эпизоотической обстановки / В.А.Апалькин, В.А.Ведерников, И.В.Балдина, Н.А.Яременко, А.М.Гулюкин, А.А.Харькевич, С.А.Коломыцев, А.А.Шабейкина//Ветеринария. 2004. - №12. - С.3-8.

9. Арутюнова, И.П. Бешенство антропургического типа — проблема больших городов / И.П.Арутюнова, Е.И.Будкин, О.М.Швец, И.В.Ермилов // Ветеринарная патология. 2010. - №1. - С.17-19.

10. Бакулов, И.А. Новые проблемы эпизоотологии /И.А.Бакулов// Матер, ме-ждунар. научно-практ. конф., посвященной 40-летию ВНИИВВиМ. — Покров, 1998.-С. 135-138.

11. Бакулов, И.А. Руководство по общей эпизоотологии /И.А.Бакулов, А.Д.Третьяков М.: Колос. -1979. - С.424.

12. Бакулов, И.А. Рекомендации по методике эпизоотологического исследования /И.А.Бакулов, Г.Г.Юрков, А.П.Песковацков, В.А.Ведерников — Покров, 1975.-С.75.

13. Баньковский, Д.О. Иммунобиологические свойства штамма ERA G 333 вируса бешенства для изготовления оральной антирабической вакцины: Авто-реф. дис. .канд. вет. наук.- Щелково, 2010.- 20 с.

14. Бардина, Н.С. Бешенство в России. Оценка риска. Информационно-аналитический обзор /Н.С. Бардина, М.А.Титов, А.К.Караулов и др. // Владимир: ФГУ «ВНИИЗЖ», 2008.-С.12-28.

15. Бегель, К. Особенности распространения эпидемии бешенства среди диких животных в Европе /К. Бегель// Бюллетень Всемирной организации здравоохранения. 1977. - Т. 54. - № 4. - С. 972-987.

16. Белоусов, В.И. О совершенствовании диагностической работы в ветеринарных лабораториях России /В.И. Белоусов// Матер, междунар. научнопрактич. конф., посвященной 40—летию ВНИИВВиМ. — Покров, 1998. — С. 13-14.

17. Бойко, A.A. Создание иммуноферментных препаратов /A.A. Бойко// Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов. Тез. докл. третьей Всесоюз. конф. — М., 1987. — С.201-202.

18. Ботвинкин, А.Д. Особенности эпидемиологии гидрофобии и экология вируса бешенства в условиях преобладания очагов природного типа /А.Д.Ботвинкин: Автореф. дис. . докт. мед. наук. — М., 1992. — 58 с.

19. Ботвинкин, А.Д. Современное состояние и эпидемиологическое значение природных очагов бешенства в Западной Сибири /А.Д.Ботвинкин, Л.Я.Грибанова, Г.Н. Сидоров и др.// Природноочаговые болезни человека. -Омск, 1988.-С.111-113.

20. Ботвинкин, А.Д. Обнаружение антител к вирусу бешенства в сыворотке крови людей с помощью иммуноферментного метода /А.Д.Ботвинкин, М.А.Селимов, Т.Н. Згурская // Вопросы вирусологии. — 1986. — Т. 31. — № 3. -С.ЗЗЗ—334.

21. Ботвинкин, А.Д. Антигенные варианты вируса бешенства, связанные с заболеваниями людей в России и странах ближнего зарубежья /А.Д.Ботвинкин,

22. М.А.Селимов, М.А.Штыкова, В.В.Хозинский// Современные проблемы рабио-логии.-М., 1998.-С.34.

23. Ботвинкин, А.Д. Обнаружение вируса бешенства в головном мозге и слюнных железах животных с помощью иммуноферментного метода /А.Д.Ботвинкин, С.М.Чернов, Л.Я. Грибанова// Вопросы вирусологии. 1987. -№6.-С. 747-750.

24. Ботвинкин, А.Д. Итоги изучения антигенного разнообразия вируса бешенства на территории бывшего СССР /А.Д.Ботвинкин, И.В.Кузьмин, Н.А.Хисматуллина// Ветеринарная патология. — 2004. №3. — С. 117-126.

25. Бусыгин, К.Ф. Диагностика бешенства методом флуоресцирующих антител / К.Ф. Бусыгин //Тез. докл. Всесоюз. конф. Казань, 1983. — С. 136.

26. Бусыгин, К.Ф. Люминесцентная диагностика инфекционных болезней животных /К.Ф.Бусыгин — М.: Колос. 1975. - 160 с.

27. Бусыгин, К.Ф. Применение метода диффузионной реакции преципитации в агаре-геле для изучения специфичности иммунных сывороток /К.Ф. Бусыгин// Ученые записки КГВИ 1964. - Т. 90 - С. 144-149.

28. Бусыгин, К.Ф. Флуоресцирующие иммуглобулины из иммуноасцитиче-ской жидкости белых крыс для диагностики бешенства /К.Ф. Бусыгин, Р.Х. Юсупов// Сб. науч. тр. КВИ- Казань, 1984. — С. 79-81.

29. Бучнев, К.Н. Специфичность и чувствительность реакции преципитации в агаровом геле при диагностике бешенства /К.Н.Бучнев, А.А.Росляков,

30. Э.В. Ивановский// Тр. науч. контрольного института ветеринарных препаратов -М., 1968.-Т. 15. -С.30—35.

31. Бюллетень ВОЗ о распространении заболевания бешенством в Европе. — 1995.-№4.-С. 19-21; 1996. -№ 4-С. 20-23.

32. Вагабов, A.M. Вирусы группы бешенства / А.М.Вагабов, И.Ф.Баринский// Вопросы вирусологии. — 1979. — № 5. — С.451-457.

33. Вакцины для животных // Технический отчет ВОЗ, серия 931, 2004.

34. Ведерников В. А. Современная эпизоотология бешенства / В.А.Ведерников: Автореф. дис. . докт. вет. наук. — М., 1987. — 33 с.

35. Ведерников, В.А. К вопросу о прогнозировании эпизоотической ситуации бешенства /В.А.Ведерников, Б.Е.Землянова// Современные проблемы зооноз-ных инфекций. Тез. докл. — М., 1981. — С. 183 — 184.

36. Ведерников, В.А. Эпизоотологические основы совершенствования мероприятий по профилактике бешенства /В.А.Ведерников, В.А. Седов Львов, 1988.-С. 71-72.

37. Ведерников, В.А. Бешенство животных /В.А.Ведерников, В.А. Седов, Э.В.Ивановский-М.: Колос. 1974. - С.112.

38. Ведерников, В.А. Бешенство животных в Российской Федерации /В.А.Ведерников, И.В.Балдина, А.А.Шабейкин, А.М.Гулюкин, А.А.Харкевич, М.В.Шабейкина // Вакцинация. 2005.- №1.- С.15-19.

39. Ведерников, В.А. И все-таки как лечить бешенство? / В.А.Ведерников, И.В.Балдина// Ветеринарная жизнь. — 2008. №5.- С.4.

40. Ведерников, В.А. Обзор эпизоотической ситуации бешенства в Российской Федерации в 2000 году и прогноз на 2002 год //В.А.Ведерников,

41. А.А.Шабейкин, А.А.Харькевич, А.М.Гулюкин, Н.А.Клементьева, В.А.Седов, С.А.Коломыцев//Ветеринарная патология. 2002. - №1. - С.52-58.

42. Воронин, Е.С. Иммунология / Е.С.Воронин, А.М.Петров, М.М.Серых, Д.А.Девришев // Учебник.- М.: Колос-Пресс. 2002. — 408 с.

43. Горбачев, E.H. Влияние физико-химических факторов на чувствительность и специфичность иммуноферментного анализа / Горбачев E.H., Вербов В.Н., Артюхов А.И.// Твердофазный иммуноферментный анализ. — JL, 1988.- Т. 64.-С. 76-80.

44. Горбачева, П. Рекомбинантная антирабическая вакцина для оральной иммунизации лисиц / П.Горбачева, В.В.Макаров // Ветеринарная патология. -2010.-№2.-С.16-18.

45. Государственный стандарт Союза ССР. Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики бешенства. ГОСТ 26075-84 (CT СЭВ 3452-81).-М.- 1984.-9 с.

46. Грабко, В.И. Рекомбинантный вирус осповакцины, экспрессирующий протективный антиген G рабического вируса /В.И.Грабко, М.А.Селимов, И.И. Фодор и др.// Тез. докл. научн. конф. Современные проблемы рабиологии. -М., 1998.-C.33-34.

47. Грибенча, С.В. Современные аспекты биологии и профилактики лиссави-русных инфекций (экспериментальное исследование) / С.В.Грибенча: Автореф. дис. докт. мед. наук. -М., 1993. — 80 с.

48. Гришок, Л.П. Оральная иммунизация лисиц против бешенства живой культуральной вакциной из штамма "Внуково-32" / Л.П.Гришок, М.А. Селимов Т.А.Аксенова// Актуальные проблемы медицинской вирусологии. — М., 1985. — С. 170-172.

49. Гришок, Л.П. Эпизоотологический надзор при оральной иммунизации лисиц /Л.П. Гришок// Матер. Всесоюз. конф. — Львов, 1988. -С.74 — 75.

50. Груздев, К.Н. Бешенство животных /К.Н.Груздев, В.В.Недосеков -М.: «Аквариум» .- 2001. — 303 с.

51. Гулюкин, М.И. Ситуация уже кризисная / М.И.Гулзокин, В.А.Ведерников // Ветеринарная жизнь. 2008. - №12. - С.6-8.

52. Джупина, С.И. Эпизоотология бешенства животных в Западной Сибири /С.И.Джупина, С.А.Юрик// Эпизоотология, диагностика, профилактика и меры борьбы с болезнями животных — Новосибирск, 1997. — С. 41—42.

53. Егоров, A.M. Теория и практика иммуноферментного анализа / А.М.Егоров, А.П.Осипов, Б.Б.Дзантиев, Е.М. Гаврилова — М.: Высшая школа. -1991.-С.351.

54. Жестерев, В.И. Иммунобиологические свойства штамма РБ-71/10 вируса бешенства / В.ИЖестерев, О.Г.Лаптева, М.А.Филатова // Вестник РАСХН. -2008.-№4.-С. 60-61.

55. Жуков, И.В. Результаты изучения антигенной принадлежности штаммов уличного вируса бешенства с использованием моноклональных антител /И.В. Жуков// Бюл. ВНИИ экспериментальной ветеринарии. 1988. — В.65. — С.54-55.

56. Зибицкер, Д.Е. Бешенство и его профилактика (по материалам Белоруссии) /Д.Е.Зибицкер, Н.А.Ковалев Минск: Урожай - 1968. — С.200 .

57. Зуева, Н.Я. Выявление антигена вируса бешенства реакцией энзим— меченных антител /Н.Я.Зуева, Н.А.Хисматуллина, К.Ф.Бусыгин, Р.Х. Юсупов, Г.П. Новошинов // Сб. науч. тр. КГВИ. Казань, 1984. - С. 104-110.

58. Иванов, A.B. Эпизоотолого эпидемиологический надзор за бешенством /А.В.Иванов, Н.А.Хисматуллина, Р.Х.Юсупов, В.В.Морозов и др. // Методическое руководство, Казань: ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», 2007.- 95 с.

59. Иванов, A.B. Диагностика и профилактика бешенства животных /А.В.Иванов, Н.А.Хисматуллина, Р.Х.Юсупов, А.Н. Чернов М.:ФГНУ "Ро-синформагротех", 2007.- 60 с.

60. Иванов, A.B. Эпизоотологический и иммунологический надзор за бешенством /А.В.Иванов, Н.А.Хисматуллина, А.М.Гулюкин // Ветеринарный врач. — Казань, 2010. № 4 (17). - С. 3 - 6.

61. Иванов, A.B. Бешенство: этиология, эпизоотология, диагностика / А.В.Иванов, Н.А.Хисматуллина, А.Н.Чернов, А.М.Гулюкин // Учебно-методическое пособие в иллюстрациях. — М.: Колос, 2010. — 54 с.

62. Иванов, B.C. Состояние и перспективы борьбы с бешенством животных и человека / В.С.Иванов, П.П.Кузнецов, Е.Э.Школьников // Вестник РАСХН. — 2000.-№2.- С. 63-65.

63. Каплан, М.М. Методы лабораторных исследований по бешенству /М.М.Каплан//ВОЗ.-Женева, 1975.-С. 124-134.

64. Клюева, Е.В. Иммунофлуоресцентный метод индикации антигена вируса бешенства, выращиваемого in vivo и in vitro / E.B. Клюева: Автореф. дис. . канд. биол. наук. -М., 1967. — 17 с.

65. Юпокина, В.И. Иммуноферментная тест-система для определения уровня иммунитета у вакцинированных против бешенства кошек и собак / В.И.Юпокина, П.В.Рахманин, А.В.Проничев // Ветеринария и кормление. — 2008.-№3.-С. 12-14.

66. Коваклова, JI. Твердофазный вариант иммуноферментного анализа к вирусу бешенства в сыворотках людей /Л.Коваклова, М.Ешкенази, Т.Ганчева, В.Вачева// Acta vitol. -1984. № 28. -С. 422-427.

67. Ковалев, H.A. Выделение вируса бешенства / H.A. Ковалев// Новые методы диагностики зоонозных инфекций Минск, 1982. — С. 47— 69.

68. Ковалев, H.A. Иммунофлуоресцентное исследование отпечатков роговицы при бешенстве /Н.А.Ковалев, A.C. Шашенько// Ветеринария. 1970. -№ 9. -С. 44 - 46.

69. Коломакин, Г.А. О постановке, учете и специфичности реакции преципитации в агаровом геле при диагностике бешенства /Г.А.Коломакин, Г.А.Бельченко, М.М. Смирнова// Лаборатор. дело. -1970. № 6. - С. 370-372.

70. Коломакин, Г.А. К вопросу серологической диагностики бешенства. /Г.А.Коломакин, М.С. Тимонина//Ветеринария. 1972. -№ 5. -С. 105-106.

71. Кондрахин, И.П. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики /И.П.Кондрахин, А.В.Архипов, В.И.Левченко, Г.А.Таланов, Л.А.Фролова, В.Э.Новиков // Справочник.- М.: «Колос», 2004.- 520 с.

72. Кост, Е.А. Определение фагоцитарной активности лейкоцитов / Е.А.Кост, М.И.Стенко // Методическое пособие к лабораторным занятиям по основам научных исследований. Саратов. - 1981,- С. 98.

73. Красильников, В.Р. Прогнозирование активности очагов бешенства по биотическим и климатическим факторам /В.Р.Красильников, С.А.Куролап// ЖМЭИ -1987. № 2. - С. 38-42.

74. Крупальник, В.Л. Бешенство собак в Шри-Ланке и меры борьбы с ним /В.Л.Крупальник, Самнат Нагасинг// Актуальные вопросы инфекционных и инвазионных болезней животных. 1995. - С. 130-131.

75. Кузьмин, И.В. Лиссавирус с необычной антигенной структурой, выделенный от летучей мыши на юге Кыргызстана /И.В.Кузьмин, А.Д.Ботвинкин, С.Н.Рыбин, А.В.Баялиев// Вопр. вирусологии. 1992. - № 5-6. - С. 256-259.

76. Кузьмин, И.В. Р-41 положительный штамм рабического вируса выделен от человека на Севере Красноярского края /И.В.Кузьмин, З.С. Лукашенко// Тез. докл. науч. конф.: Современные проблемы рабиологии. — М., 1998. С. 6-7.

77. Мальков, Г.Б. О биологических основах прогноза эпизоотической обстановки в природных очагах бешенства /Г.Б.Мальков, Л.Я.Грибанова// Тез. докл.10.й Всесоюз. конф. по природ, очаговости болезней. — Душанбе, 1979. — Вып. 2. С. 132-134.

78. Макаров, В.В. Эволюционно-экологические особенности эпидемиологии бешенства на современном этапе / В.В.Макаров, В.А.Ведерников, С.И.Джупина и др. // Сводный отчет по пректу ФЦП «Интеграция» № Е 0096. 2001. -С.5.

79. Макаров, В.В. Состояние и возможные направления развития Центрально-европейского суперареала бешенства / В.В.Макаров // Ветеринарный консультант. 2003. - № 7. - С.7.

80. Макаров, В.В. Актуальные проблемы бешенства: природная очаговость, методология исследования и контроля в центре России / В.В.Макаров, А.А.Воробьев // Ветеринарная патология. 2004. - № 3. - С. 102-116.

81. Макаров, В.В. Бешенство в Восточной Европе: актуальный вектор развития эпизоотического процесса / В.В.Макаров, О.И.Сухарев, А.М.Гулюкин, Б.В.Боев // Вестник РАСХН. 2008. - № 4. - С. 58 - 60.

82. Макаров, В.В. Бешенство енотовидных собак: статистический анализ заболеваемости /В.В.Макаров, О.И.Сухарев, А.М.Гулюкин, М.Н.Соколов, О.Б.Литвинов// Ветеринария. 2009. - №6. - С.20 - 25.

83. Метлин, А.Е. Диагностика бешенства животных с использованием реакции иммунофлюресценции / А.Е. Метлин, H.A. Назаров, С.С. Рыбаков, Н.М. Михайлина, К.Н. Груздев, A.B. Чепуркин, A.A. Егоров // Ветеринария с.х. животных. 2007. - №3. - С.29-33.

84. Метлин, А.Е. Оральная вакцинация диких плотоядных животных против бешенства / А.Е. Метлин, С.С. Рыбаков, В.В. Михайлишин, Muller Th.// Ветеринария, 2009. - №8. - С. 18-25.

85. Метлин, А.Е. Молекулярно-биологические характеристики полевых изо-лятов и аттенуированных штаммов вируса бешенства / А.Е. Метлин: Автореф. дис. канд. вет. наук., Владимир, 2004. 27 с.

86. Мовсесянц, A.A. Вопросы экстренной профилактики бешенства /А.А.Мовсесянц, Г.Б. Агеенко// Ветеринарная патология. — 2002. №1. — С. 48-51.

87. Мовсесянц, A.A. Бешенство серьезная проблема наших дней / A.A. Мовсесянц // Эпидемиология и вакцинопрофилактика.- 2003.- №3 (10). -С. 12-15.

88. Недосеков, B.B. Разработка и усовершенствование средств и методов оценки эффективности вакцин против бешенства / В.В.Недосеков: Автореф. дис. канд. вет. наук. — Покров, 1998. — 26 с.

89. Недосеков, В.В. Титрование антирабических антител с помощью теста ингибиции фокусов флуоресценции / В.В.Недосеков, И.Ф.Вишняков,

90. B.ИЖестерев, В.М.Балышева, Т.Ф.Горшкова, К.Н.Груздев // Ветеринария. — 1998.- №7. С.28-30.

91. Павлов, М.П. Волк — реально опасен в очагах бешенства на Вятской земле /М.П. Павлов// Матер, регион, научн — практ. конф., посвященной 85—летию первой антирабической прививке в Вятской губернии. — Киров, 1999.1. C. 38-41.

92. Павловский, В.В. Специфическая профилактика бешенства. /В.В.Павловский, Л.П.Семенова, Э.В.Ивановский// Тр. Всесоюз. госуд. научно-контрольного института вет. препаратов. — М., 1975. — С. 35-40.

93. Пантелеев, O.A. Непрямой твердофазный метод иммуноферментного анализа, его точность и источники погрешностей /О.А.Пантелеев, Л.И. Ванеев// ЖМЭИ. 1986. - №3. - С. 95-99.

94. Онищенко Г.Г. Об усилении мероприятий по борьбе с бешенством в Российской Федерации/ Постановление Главного санитарного врача Российской Федерации от 29 августа 2008 г. №53// Российская газета 21.11.2008 г.

95. Папуниди, К.Х. Иммуноферментный метод для серологической диагностики ботулизма /К.Х. Папуниди, Г.Л. Адгамова// Рациональные методы профилактики, диагностики и терапии незаразных болезней животных: сб. науч. тр. КВИ. Казань, 1993. - С. 94-95.

96. Пиле, Э.Р. Лиссавирусы /Э.Р. Пилле// Вопросы вирусологии . —1996. — № 1.-С. 2-6.

97. Полещук, Е.М. Бешенство в Российской Федерации. Информационно-аналитический бюллетень / Е.М.Полещук, Г.Н.Сидоров, Д.Г.Сидорова, Н.М. Колычев Омск, 2009. - 46 с.

98. Постановление Главного государственного санитарного врача по Смоленской области №2 от 10.02.2009 г. «Об усилении мероприятий по борьбе с бешенством на территории Смоленской области».у

99. Рахманин, П.В. Иммуноферментная тест-система для определения уровня иммунитета у вакцинированных против бешенства кошек и собак / П.В. Рахманин, В.И. Юпокина, А.Б. Проничев // Ветеринария и кормление. 2008. - №3. -С. 12-14.

100. Савицкая Т.А. Изучение иммунобиологических свойств изолятов рабиче-ского вируса и совершенствование эпизоотолого-эпидемиологического надзора за бешенством в Республике Татарстан / Т.А.Савицкая: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Казань, 2007.- 23 с.

101. Сазанова, Э.Я. Иммуноферментный метод определения уровня антител к вирусу бешенства в сыворотке крупного рогатого скота /Э.Я.Сазанова,

102. Е.В.Маслов, С.В.Кузнецова, А.А.Бойко, В.С.Иванов// Тез. докл. Всесоюзн. конф. по проблемам бешенства. — Львов, 1988. — С. 96.

103. Самуйленко, А.Я. Современные биотехнологические методы при промышленном производстве ветеринарных препаратов / А.Я. Самуйленко, Е.А. Рубан, В.И. Еремец, С.А. Гринь, В.И. Клюкина и др. // Матер, междун. на-уч.-практич. конф., Щелково, 2007. — С. 6 10.

104. Сафонов, Г.А. Изучение свойств штамма ERA G333 вируса бешенства / Г.А.Сафонов, Д.О. Баньковский // Вестник РАСХН. 2009. - №6. - С. 70-72.

105. Сафонов, Г.А. Оценка антигенных и иммуногенных свойств штамма ERA G333 вируса бешенства / Г.А.Сафонов, Д.О.Баньковский // Вестник РАСХН. 2010. - №6. - С. 61 - 63.

106. Седов, В.А. Важнейшие инфекции диких парнокопытных животных /В.А.Седов, В.А.Ведерников, С.А.Черниченко// Болезни и паразиты диких животных М., 1992. - С. 4-11.

107. Селимов, М.А. Бешенство /М.А. Селимов М.: Медицина. — 1978. -С.336.

108. Селимов, М.А. Современная эпизоотическая ситуация и перспективы элиминации бешенства /М.А.Селимов// Вопросы вирусологии. —1998. № 5. -С. 196-198.

109. Селимов, М.А. Современные достижения в области рабиологии /М.А. Селимое// Обзорная информация. М.: ВНИИМИ, 1987. - В.4. - С. 35 - 40.

110. Селимов, М.А. Идентификация штаммов лесного и арктического бешенства с помощью моноклональных антител / М.А.Селимов, А.Д.Ботвинкин, А.Г.Татаров // Современные проблемы профилактики и лечения заразных заболеваний и лейкозов — Минск, 1982. — С. 17—18.

111. Селимов, М.А. Идентификация штаммов сильватического и арктического бешенства с помощью моноклональных антител / М.А.Селимов, А.Д.Ботвинкин, А.Г. Татаров // Вопросы вирусологии. 1983. — № 2. — С. 243-244.

112. Селимов, М.А. Новые данные о распространении Р—41 положительных штаммов рабического вируса в арктическом и внеарктическом регионах. / М.А.Селимов, А.Д.Ботвинкин, В.В.Хозинский, Л.Я.Грибанова // ЖМЭИ. -1994.-№2.- С.53-56.

113. Селимов, М.А. Применение реакции связывания комплемента (РСК) для индикации вируса бешенства в культуре ткани /М.А.Селимов, Л.И.Калинина, Т.А.Аксенова и др.// Вопросы борьбы с бешенством — Т. 9. — М., 1967. -С.70—79.

114. Селимов, М.А. Современные методы лабораторной диагностики бешенства /М.А.Селимов, Е.В.Клюева, Е.В.Семенова М.: Медицина. - 1964. — С.58.

115. Селимов, М.А. К проблеме генно-инженерной антирабической вакцины / М.А.Селимов, И.И.Фодор, В.И.Грабко // Генно-инженерные и синтетические вакцины Пущино, 1990. — С. 64— 70.

116. Сидоров, Г.Н. Пространственно-временное прогнозирование эпизоотий бешенства природного типа в России /Г.Н.Сидоров// Тез. докл. науч. конф.: Современные проблемы рабиологии. М., 1998. - С. 11—12.

117. Сидоров, Г.Н. Прогнозирование бешенства в Западной Сибири и регуля-торные факторы эпизоотического процесса / Г.Н.Сидоров, Л.Н.Грибанова, Н.Г.Корсаков и др. // ЖМЭИ . 1990. - № 7. - С. 31-37.

118. Сидоров Г.Н. Особенности поведения диких млекопитающих, инфицированных вирусом бешенства / Г.Н.Сидоров, А.Д.Ботвинкин, И.В.Кузьмин // Зоологический журнал.- 1998.-№77 (11).-С. 1310-1316.

119. Сидоров Г.Н. Природные очаги бешенства в России в XX — начале XXI века / Г.Н.Сидоров, Е.М.Полещук, Д.Г.Сидорова // Ветеринарная патология.-2004.-№3(10).- С.86-101.

120. Сидоров Г.Н. Бешенство диких млекопитающих на территории России в конце 20 начале 21 века / Г.Н.Сидоров, Д.Г.Сидорова, Е.М.Полещук // Зоологический журнал.- 2010.- № 89 (1). - С. 26-36.

121. Сидорова Д.Г. Современные экологические особенности проявления эпизоотического процесса бешенства в природных очагах / Д.Г.Сидорова: Автореф. дис. . канд. биол. наук. — Новосибирск, 2009. — 25 с.

122. Сологуб, Т.В. Выявление антител к вирусу бешенства методом ингибиро-вания твердофазного ИФА / Т.В.Сологуб, В.Н.Никитин, Н.Ф.Вишняков // Вопросы ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии. — Покров, 1992.-Ч. 2-С. 261-262.

123. Субботина, Л.С. Результаты использования метода ELISA при изучении клещевого энцефалита и бешенства / Л.С.Субботина, О.В.Новолохин, А.Д. Бот-винкин, Л.В.Матюхина // ЖМЭИ. 1985. - № 1. - С. 73- 77.

124. Таршис, М.Г. Математические методы эпизоотологии / М.Г.Таршис,

125. B.М.Константинов —М.: Колос. — 1975. С. 174.

126. Таршис, М.Г. Эпизоотологический прогноз и противоэпизоотический план /М.Г.Таршис-М.: Россельхозиздат — 1979 — С.112.

127. Таршис, М.Г. Бешенство животных / М.Г. Таршис, Н.А.Ковалев, П.П.Кузнецов Минск: Ураджай. - 1990. - С. 100 - 104.

128. Татаров, А.Г. Экспресс—диагностика бешенства в линии клеток неврино-мы Гассерова узла крысы (НГУК-1) / А.Г.Татаров, М.А.Селимов, ВЛ.Кармышева, Н.А. Хисматуллина // Тез. докл. Всесоюзн. конф. — М., 1985 —1. C. 172-173.

129. Татаров, А.Г. Выделение рабического вируса и экспресс-диагностика бешенства в культуре перевиваемых клеток невриномы Гассерова узла крысы / А.Г.Татаров, Н.А.Хисматуллина, М.А.Селимов, В.Я.Кармышева // Вопросы вирусологии. 1987. -№ 6. - С. 619 - 621.

130. Тятигачев, Ш.А. Краевая эпизоотология бешенства и усовершенствование мер борьбы с ним в Республике Башкортостан / Ш.А.Тятигачев: Автореф. дис. . канд. вет. наук. Казань, 1998. — 19 с.

131. Фоменко, М.В. Порядок и оценка результатов лабораторных исследований при диагностике бешенства /М.В. Фоменко, И.К.Тутов// Вестник ветеринарии. 1997. - № 6. - С. 47 - 50.

132. Хисматуллина, H.A. Разработка непрямых вариантов иммуноферментно-го анализа для определения антигена вируса бешенства и специфических антител /H.A. Хисматуллина, Р.Х.Юсупов// Матер. Всесоюзн. конф. — Львов, 1988. — С. 98.

133. Хисматуллина, H.A. Разработка и усовершенствование лабораторных методов диагностики бешенства /Н.А.Хисматуллина: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Казань, 1989.-21 с.

134. Хисматуллина, H.A. Разработка средств и методов иммунологического мониторинга и мер борьбы при бешенстве и лихорадке Ку животных /Н.А.Хисматуллина: Автореф. дис. докт. биол. наук.- Казань, 2000.- 45 с.

135. Хисматуллина, H.A. Разработка экспресс-методов иммунологического мониторинга при бешенстве /Н.А.Хисматуллина, Р.Х. Юсупов, М.А. Селимов, С.Р.Янбарисова // Вопросы вирусологии. 2001. - №5. - С.45-48.

136. Хисматуллина, H.A. Иммунологический мониторинг бешенства /Н.А.Хисматуллина, Р.Х.Юсупов, С.Р.Янбарисова, Т.А. Савицкая// Ветеринарный врач.- Казань, 2004. №1 (17).- С. 45-53.

137. Хисматуллина, H.A. Взаимосвязь заболеваемости бешенством с некоторыми биотическими и абиотическими факторами /Н.А.Хисматуллина, Р.Х.Юсупов, И.Д.Ситдикова, О.И.Ишуткина, Н.А.Сахибуллин и др. // Ветеринарный врач. 2003.-№ 4 (16).- С.33-36.

138. Хузин, Д.А. Иммуноферментный метод определения антител к возбудителю некробактериоза /Д.А.Хузин, Е.К.Акимов, Н.А.Хисматуллина, В.В.Сабирова// Матер, международ, конф., посвящ. 125— летию академии. — Казань, 1998. 4.1. - С. 111-112.

139. Цвиль, Л.А. Состояние антирабической помощи и организация эпиднад-зора за бешенством на территории г. Москвы. /Л.А.Цвиль, Л.В .Родина, И.Р.Лебедева// Тез. докл. научн. конф.: «Современные проблемы рабиологии».— М., 1998.-С. 15-16.

140. Целуева, Н.И. Анализ изменений эпизоотической обстановки по важнейшим зооантропонозам в Смоленской области / Н.И.Целуева: Автореф. дис. . канд. вет. наук.- Москва, 2006.- 28 с.

141. Черкасский, Б.Л. Эпидемиология и профилактика бешенства / Б.Л. Черкасский—М.: Медицина — 1985.-288 с.

142. Черкасский, Б.Л. Эпидемиология и эпизоотология бешенства на территории бывшего СССР /Б.Л.Черкасский, А.Г.Кноп, В.А.Ведерников// ЖМЭИ-1995.-№ 1.-С. 21-27.

143. Черкасский Б.Л. Эпидемическая ситуация и меры профилактики бешенства /Б.Л.Черкасский, О.С.Хадарцев, А.А.Мовсесянц// Вет. и мед. аспекты зоо-антропонозов. Покров, 2003. - Ч. I. — С. 98.

144. Чернов, С.М. Анализ эффективности твердофазного иммуноферментного метода для ускоренной диагностики бешенства / С.М.Чернов, А.Д.Ботвинкин, Л.Д.Грибанова, А.С.Чиж // Природноочаговые болезни человека — Омск, 1989. -С. 90.

145. Шафикова, P.A. Применение реакции энзим-меченных антител при диагностике хламидиозного аборта овец / Р.А.Шафикова, Х.З.Гаффаров и др. // Матер. Всесоюзн. конф.-Львов, 1988. — С. 107 — 108.

146. Шесточенко, М.А. Люминесцентный анализ в ветеринарии /М.А.Шесточенко, Н.А Кузьмин М.: Колос. - 1979. - С. 195 - 203.

147. Шубладзе, А.К. Изучение антигенного родства различных штаммов вирусов группы бешенства / А.К.Шубладзе, Е.Н.Бычков // Вопросы вирусологии. -1975.-№6.-С. 571-574.

148. Шустерман, С.З. О случаях нападения бешеных волков в Витебской области / С.З.Шустерман // Современные проблемы профилактики зоонозных болезней и пути их решения. Минск. - 1987 — С. 332 — 333.

149. Юсупов, Р.Х. Эпизоотическая характеристика и динамика заболеваемости животных бешенством в Татарстане / Р.Х.Юсупов, Н.А.Хисматуллина // Болезни и паразиты диких животных. М., 1992. — С. 84-88.

150. Юсупов, Р.Х. Эпизоотологическая значимость различных штаммов вируса бешенства / Р.Х. Юсупов, Н.А. Хисматуллина // Матер, науч. — произв. конф. по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии. — Казань, 2001. — Ч. 1.-С. 113-114.

151. Amano, Т. Neurotransmitter syntesis by neuroblastoma clons /T.Amano, E.Rioheison, M.Nirenberg // Proc. nath. Akaj. Ski. USA. 1972. - V. 69. - P. 258263.

152. Atanasiu, P. Animal inoculation and the Negri body / P.Atanasiu // The Natural History of rabies-T.l. Baer G.M. Ed.—Academic Press.—New York, 1975. — P.373.

153. Atanasiu, P. Epreuve immunoenzymatique pour la detection rapide des anticorpus antirabiques /P.Atanasiu, V.Savy, P.Perrin// Ann. Microbiol. Inst. Pasteur. -1977.-V. 128A.-P. 489-498.

154. Aubert, M. Le Rhin est—il une barriere efficace contre la rage /M.Aubert, E. Masson// Bull. off. Nat. Chasse. 1993. -V. 177. - P. 30-32.

155. Barrat, I. Larage animal en France en 1988 bilan die laboratoire d etudes sur la rage et la pathologie des animaux sauvages a nancy-maize—Ville /I.Barrat, M. Aubert // Rev. Med veter. - 1990. - Y. 141. -№ 5. - P. 369-373.216.

156. Bourhy, H. Ecology and evolution of rabies in Europe /H.Bourhy, B.Kissi, L.Audry// J.Gen.Virol. -1999. Vol.80, №10. P.2545-2557.

157. Breakfield, X. O. Neurobiasmitter metabolism in murin neuroblastoma cells /X. O. Breakfield// Life Sci. 1976. - V. 18. - P. 267- 278.

158. Brochier, B. Elimination of fox rabies from Belgium using a recombinant vaccinia — rabies vaccine: an update /В.Brochier, F.Costy, P.— P. Pastoret// Veter. Microbiol. 1995. - V. 46. - № 1/3 - P.269 - 279.

159. Casey, G. A. Raccon rabies in eastern Canada (1963 to 1994) : A retrospective report /G. A.Casey, A. I.Wandeler, K.M. Charlton// Canad. veter. J. 1996. -V. 37. -№ 6. — P. 347-348.

160. Cleaveland, S. Maintenance of a microparasite infecting several host species. Rabies in the Serengeti /S.Cleaveland, C. Dye// Parasitology. 1995. - V. III. -P. 33-47.

161. Cortes, Valdson de Angelis. Abrigos diurnos e infecca rabica em morcogos de Botuoatu, Sao Paulo Brasil /Valdson de Angelis Cortes, Sonza Luiz Carlos de, Uieda Wilson, Fig-neirecto Antonio Carlos// Vet e Zootecn. 1994. -V. 6. - P. 179-186

162. Crawford-Miksza, L.K. Molecular epidemiology of enzootic rabies in California /L.K. Crawford-Miksza, D.A. Wadford, D.P. Schnürt// J. Clin. Virol. -1999.-V. 14, N.3.-P. 207-219.

163. David, J.M. Computer simulation model of epi-en—zootic disease of vulpene rabias /J.M. David // Ecological Modelling. 1982. - V. 15. - P. 107-125.

164. Dietzschold, B. Techniques for the purification of rabies virus, its subunits and recombinant products /B. Dietzschol / M.M.Kaplan, H.Koprowski, F.X. Meslin // Laboratory techniques in rabies Eds. WHO. - Geneva, 1996. - P. 175-179.

165. Donald, L. Rabies virus glicoprotein expressed in a vacinia virus recombinant vaccine cross protects mise against unique genetic variants of rabies viruses isolated world-wide /L.Donald, I.Smith, C.Larry//1. Cell Biochem. 1995. - V.19a. -P. 312.

166. Durove, A. Orale immunisierung freilebender Rotfuchse gegen Tolewut inder Slowakei im lahre 1994 /A.Durove, S.Svreek, I. Sokol, et al. // Wien. Tierarztl. Monatsschr. 1996. -V. 83. - № 5. - P. 158-163.

167. Engvall, E. Enzyime—linked immunosorbent assay (ELISA). III. Quantitation of specific antibodies by enzyme—labelled anti-immunoglobulin in antigen coated tubes /E.Engvall, P.Perlmann// J. Immunol. 1972. - V. 109. - P. 129-135.

168. Engvall, E. Enzyme—linked immunosorbent assay (ELISA). Quantitative assay of immunoglobulin /E. Engvall, P. Perlmann// Immunochemistry. — 1971. — V. 8. — P. 871-874.

169. Francki, R.I.B. Classification and Nomenclature of viruses / R.I.B. Francki, et al. -Wien, 1991.

170. Glick, M.C. Glicopeptides from membranes of neuroblastoma cells /M.C.Glick, Y.Kimhi, U.Z. Littaner// Proc. nath. Acad. Sei. USA. - 1973. -V. 70. -surface P. 1682-1687.

171. Kat, P.W. Rabies and African wild dogs in Kenya. /P.W.Kat, K. A.Alexander, I.S.Smith, L.Munson// Proc. Ray. Soc. London B. 1995. - V. 262. - № 1364. -P. 229-233.

172. Kissi, B. Genetic polymorphism in the rabies virus nucleoprotein gene /B.Kissi, N. Tordo, HJBorhy // Virology. 1995. - V. 209. - № 2. - P. 526-537.

173. Komarov, A. Diagnosis of rabies in dogs comparing smears, biological tests and fluorescent Antibody staining /A.Komarov, R.A.Goldwasser// WHO Expert Committee on Rabies. Geneva. -1959. - V.19. - P. 107.

174. Krebs, J. W. Rabies surveillance in the United States during 1994. /Krebs J. W., Strine T. W., Smith J. S. et al.// J. Am. Veter. Med. Assn. 1995. -V. 207. -№ 12.-P. 1562-1575.

175. Kuwert, E. The complement fixation test /E.Kuwert// Laboratory Techniques in Rabies. WHO. - Geneva. -1973. - P. 124.

176. Masson, E. Les consequences du ramassage par des personnes d appats vaccinaux antirabiques aux renards et distribues par helicoptere en France /E.Masson, P.Rollin, M. Aubert// Ann. med. vet. 1993. - V. 137. - № 4. - P. 275-279.

177. Meredith, C.D. Rabies confirmed in Megachiroptera in South Africa /C.D. Meredith// Rabies Information Exchange. —1980. —V.3. —P.26.

178. Metlin, A.E. Monoclonal antibody characterization of rabies virus isolates from Russia, Finland and Estonia / A.E. Metlin, J. Cox, S.S. Rybakov, A. Huovilainen, K. N. Grouzdev, E. Neuvonen. // J. Vet. Med. B. 2004. - V. 51. - P. 94-96.

179. Muller, T. Wechselwinkund von oraler Tollwut immunisierund und Fuchs po-putions dinamik /T.Muller, H.Schluter, S. Kautzsch// Tierarztl. Urnsch 1995. - V. 50.— № 1. - P. 743-747.

180. Nadin—Davis, S.A. Identification of regional variants of the Canadian province of Ontario. /S.A.Nadin—Davis, G.A. Casey, A. Wandeler// Gen. Virol. 1993. -V. 74. — № 5. —P. 829-837.

181. Nandi, S. Recent advancement in the diagnosis of rabies /S.Nandi, S.K. Maiti// Asian Livestook.- 1994. -V. 19. -№ II. P. 150 - 152.

182. Nicholson, K.G. Enzyme-linked immunosorbent Assay: A Reaped Reproducible. Test for the Measurement of Rabies Antibody /K.G.Nicholson, H.Prestage// J. Med. Virol. 1982. - P. 43-49.

183. Piegorsch, W.W. Non—Hierarhical logistic models and case-only designs for assessing susceptibility in population — based case — control studies /W.W.Piegorsch, C.R.Weinberg, J.A.Taylor// Statistics in Medicine. 1994. - V. 13. - P. 153-162.

184. Portnoi, D. Use of Neuroblastoma cells (MNB) for the isolation of street rabies virus from field speciment /D.Portnoi, S.Favre, E.P.Sureau// Department of Health. SC. Human Services Pullic Health Service Center for Disease Control. — 1982. — P. 35-36.

185. Rabies Bulletin Europe, http.//www.who-rabies-bulletin.org.

186. Rohman, A. Rabies prevention and control in India from a veterinary perspective /A.Rohman// International Rabies Meeting: Abstracts. Paris, 1997. — P. 504.

187. Rudd, R.G. Tissue culture technique for routine isolation of street strain rabies virus /R.G.Rudd, C.V.Trimarchi, M.K.Abelseth// J. Clin. Microbiol. 1980 12. -590-593.

188. Rupprecht, C.T. Current issues in rabies prevention in the United States /C.T.Rupprecht, J.S.Smith, J. Krebs et al.// Publ. Health Rep. 1996. - V. 3. -P. 400-407.

189. Rupprecht, C.T. Human infection due to a recombinant vaccinia —rabies glycoprotein virus / C.T.Rupprecht, L.Blass, K.Smith et al. // N Engl J Med, 2001.

190. Sacramento, D. PCR technigue as an alternative method for diagnosis and molecular epidemiology of rabies virus /D.Sacramento, H.Bourhy, N.Tordo // Molecular and cellular probes. 1991, 5: 229-240.

191. Schlüter, H. Tollwutbekampfiing in Deutssfolgerungen aus über 10 jahriger bekampfung /H.Schluter, T.Muller// Tierarztl. Umsch. 1995. - V.50. - №11. -S. 748 - 758.

192. Schneider, L.G. The cornea test: a new method for the intravitum diagnosis of rabies /L.G.Schneider// Zentralbl. Veterinarmed. 1969. - V.16. - P. 24.

193. Selimov, M.A. New strains of rabies-related Viruses isolated from bats in the Ukraine /M.A.Selimov, A.M.Smeknov, L.A.Antonova, E.A.Snablovskaya, A.A.King, L.G. Kulikova // Acta virol. 1991. -V. 35. - P. 326-231.

194. Smith, A.L. Isolation of field rabies virus strains in CER and murine neuroblastoma cell cultures /A.L.Smith, G.H.Tignor, R.W.Emmons, J.D.Woodie//. Intervirolo-gy. 1978. - V. 9. -N 6. -P. 359-361.

195. Sureu, P. Epidemiologie analysis of antigenic variations of street rabies virus.i ' ' » "

196. Detection by monoclonal antibodies /P.Sureu, P.Rollin, T.J, Wiktor//Amer. J. Epidem. 1983. -V. 117. -№ 5. - P. 605-609.

197. Thraenhart, O. Aktueller Stand der Epidemioloqie, Diagnostik und Prävention der Tollwut. /O. Thraenhart// Prakt. Tierarzt. 1996. - V. 77. - № 5. - S. 433 - 442.

198. Tierkel, E.S. Reaped microscopic examination for Negri bodies and preparation of specimens for biological test /E.S.Tierkel// In: Laboratory Techniques in Rabies. Kaplan M.M. and Koprowski H. E d s. WHO. - Zeneva. - 1973. - P. 41.

199. Tordo, N. The polymerase chain reaction (PCR) technique for diagnosis, typing and epidemiological studies of rabies /N. Tordo, D. Sacramento, H. Bourhy// Laboratory techniques in rabies Eds. WHO. - Geneva, 1996. - P. 157-170.

200. Tsiang, H. Current concept in rabies /Tsiang H.// Adv. Virus. Res. 1995. -V. 2. - P. 2-4.

201. Vedernikov, V.A. Summary of Rabies in the Russian Federation — Particularities of the Present Situation / V.A.Vedernikov, V.A.Sedov, I.V.Baldina,

202. A.M.Gulyukin, E.G.Troizkaya, B.L.Cherkassky, V.I.Ladnyi, V.V.Seliverstov, V.N.Abramov, S.A.Kolomizev // Rabies bulletin Europe. Information surveillance research. 1999. - № 4. - P. 13 - 15.

203. Webster, W.A. Miyor antigenic groups of rabies Virus in Canada determined by anty-nucleocapsid monoclonal antibodies /W.A.Webster, A.Caseyc, K.M.Charlton// Comp. Immunol, monoclonal antibodies. Microbiol, infect. Dis. — 1986. V. 9. - № 1. - P. 59-69.

204. Weemen, S.K.V. ELISA: Nighlights of the present state of the art. /S.K.V. Weemen// J.Virol. Meth. -1985. -V.10 -№4. -P. 371-378.

205. Weemen, B.K. Immunoassay using antigen — enzyme conjugate /B.K.Weemen, A.H.W.H. Schnurs// TEES letters.- 1971. -V.15.-P.232-236.

206. Wiktor, T.J. Monoclonal antibodies against rabies virus produced by somatic cell hybridization: detection of antigenic variants /T.J.Wiktor, H.Koprowski// Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1978. V. 75. - P. 3938-3942.

207. Wiktor, T.J. Use of monoclonal antibodies in diagnosis of rabies virus infection and differentiation of rabies and rabies-related viruses /T.J.Wiktor,; A.Flamand, H.Koprowski// J. Virol. Meth. 1980. - V. 1. - № 1. - P. 33-46.

208. Zimmermann, Th. Zur Brauchbarkeit des Cornea—Testes bei der Tollwutdiagnose /Th. Zimmermann// Berl. Munch, tierarztl. Eschr. 1971. -V. 84. — N 9. — P. 172-174.

Информация о работе

Гулюкин, Алексей Михайлович
кандидата биологических наук
Казань, 2011
ВАК 06.02.02

Диссертация

Эпизоотологический мониторинг и совершенствование серологического контроля эффективности вакцинопрофилактики бешенства - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Эпизоотологический мониторинг и совершенствование серологического контроля эффективности вакцинопрофилактики бешенства - тема автореферата по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы