Эндогенные модуляторы вегетативной регуляции сердца (опиоидергические и адренергические механизмы)

Соколова, Наталия Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Эндогенные модуляторы вегетативной регуляции сердца (опиоидергические и адренергические механизмы)
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Эндогенные модуляторы вегетативной регуляции сердца (опиоидергические и адренергические механизмы)"

121 Г, 5 9 2

МОСКОВСКИЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА, ОРДЕНА ОКТЯБРЬСКОЙ РЕВОЛЮЦИИ И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНА1ЛЕНИ ГОСУДАРСТВШНЫЯ УНИВЕРСИТЕТ им. М.В.ЛОМОНОСОВА

Биологический факультет

На правах рукописи

СОКОЛОВА Наталия Александровна

ЭНДОГЕННЫЕ МОДУЛЯТОРЫ ВЕГЕТАТИВНОЙ

ГЕГДЯЦИИ СЕР.0ДА

(опиоидергические и адренергическиэ механизмы)

03.00.13 - физиология человека и животных

ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора биологических наук в форме научного доклада

Москва - 1992

рГ.Г Л'!!,' ,-------

IС'¿'<аГ*£ННАЯ ;

БИБЛИОТЕКА ^^ад/

Работа выполнена но кафедре физиологии человека и хиноп.их / зав. кафедрой - академик РАЖ, профессор И.И.Лшиарин / биологического факультета М1У им. М.В.Ломоносова.

кучьчи консультант - академик РАМН И.П.Лшмаргн

Официальные оппоненты: Медведев В.П., член-корреспондент РАК 1: член-корреспондент РАЖ, профессор, доктор биологических наук, Титов СЛ., доктор биологических наук, Каменская М.А., профессор, доктор биологических наук.

Ведущее учреждение - Российский государственный медицински?! уг...г сьтет.

Защита состоится " _ " _1992. г. в _ т

из заседании специализированного совета Д.053.Сб.35 по присущени' ученой степснк доктора биологических наук в Московском государств университете им. М.В.Ломоносова по адресу: 119899, Москва, Ленинские горн, МГУ, биологический факультет.

Диссертация разослана " _ " _ 1992 г.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке биологического факультета МГУ.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат биологических наук

/Ь1У

Б.Л.Умаровя

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы.

В физиологии вегетативной нервной системы в настоящее время накопилось много фактов, не укладывающихся в рамки классической концепции о с имп ат о-парасимп атиче с ком взаимодействии вообще и, в ¡ частности, применительно к регуляции деятельности сердца.

По отношению к регуляции сердца систематический анализ тако- j го рода данных проводился в русской физиологической школе под j руководством профессора М.Г.Удельнова, а за рубежом - в школе Э.Браунвальда. Этими учеными была творчески обоснована идея о роли парасимпатической системы в регуляции сердца в условиях относительного покоя; согласно этим представлениям симпатическая система приспособлена для регуляции сердца при патологических и стрессорных состояниях, в частности, при значительной физической нагрузке, т.е. тогда, когда требуется поддержание невысокого уровня гемодинамической производительности в течение длительного времени.

В отсутствие стрессорных ситуаций симпатический аппарат оказывает скорее модуляторные влияния на регуляторные эффекты парасимпатического происхождения.

В дальнейшем эти работы были продолжены в исследованиях С CD» (б), СЮ), (16) проводимых на кафедре физиологии с нашим участием.

Однако особенно четко модуляторные влияния выявляются при анализе действия на сердце регуляторных пептидов.

В последнее десятилетие представление о вегетативной регуляции сердца значительно усложнилось в связи с открытием нехолинер-гических-неадренергических нейронов в центрах вегетативной регуляции сердца и на периферии - в экстракардиальных и инуракарди-

льных вегетативных ганглиях.

Появилось множество работ, в которых предприняты попытки ыяснения роли различных регуляторных пептидов в регуляции сердце настоящее время экспериментально доказано, что на деятельность ердца влияют нейропептид У, вазоактивный интестинальный полипеп-ид, соматостатш, нейротензин, вещество Р, кальцитонингенрод-твенный пептид, целый ряд опиоидных пептидов и др.

Основное функциональное значение регуляторных пептидов, частвугацих в регуляции сердца, заключается в модуляции передачи озбуждения в вегетативной нервной системе.

При анализе закономерностей пептидергической модуляции нельз :е учитывать и отдаленных последствий изменения концентрации того ¡ли иного регуляториого пептида в организме. "Каскадный" тип 1еакций в ответ на возрастание уровня активности какого-либо пеп-■ида, по определению Й.Л.Апмарина, может изменить на длительное фемя состояние всего пептидного континуума, что в конечном счете [риведет к сложному взаимодействию отставленных во времени изме-[ений функционального состояния организма, в том числе и сердечно юсудистой системы.

В настоящем исследовании мы провели анализ участия в регуляции сердечно-сосудистой системы опиоидергической системы, традиционно считающейся основной стресслимитиругацей системой организма )днако сведений об участия этой системы в регуляции сердца и со-;удов в нестрессорных ситуациях явно недостаточно, а имеющиеся з литературе данные крайне противоречивы; в частности, практически ничего не известно о взаимодействии эндогенных спиоидов и 1арасимпатической регуляции сердца.

В данной работе предлагается обзор и обобщение данных, по-пученных нами в период с 1976 по 1992 г.г. в острых и хронических экспериментах на холоднокровных и теплокровных животных, а также

в экспериментах на изолированных препаратах сердца.

Цель и основные задачи исследования.

Целью исследования явилось изучение модуляторных влияний ь сердечно-сосудистую систему, возникающих при активации в опреде ленных условиях парасимпатического и симпатического отделов вег тативной нервной системы или . при изменении функциональной а тивности эндогенной опиоидергической системы.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить сл> дующие задачи:

1. Изучить различные формы влияний на парасимпатические эффекты со стороны симпатической системы и механизмы, обусловливш щие эти влияния.

2. Исследовать прямые эффекты ряда опиоидных пептидов на ш кард и провести фармакологический анализ этих эффектов.

3. Исследовать взаимодействие между опиоидными п5птидами и холинергическими эффектами на сердце в условиях активации параси патической системы и при действии экзогенного ацетилхолина.

4. Проанализировать влияния изменений функциональной активности эндогенной опиоидной системы на деятельность сердца в поко и при физической нагрузке и оценить изменения физической выносли вости организма в этих условиях.

Настоящее исследование проводилось в соответствии с планом научно-исследовательских работ кафедры физиологии человека и животных биологического факультета МГУ им.М.В .Ломоносова Гссре-гистрации 01870037146/, а также планом научных исследований РАН по проблеме "Физиология висцеральных систем".

Научная новизна работы:

I. Впервые проведен систематический анализ механизмов различ ных форм адренергических модуляторных влияний на парасимпатически хронотронные эффекты; филогенетический аспект исследований показа

универсальность адренергической модудяции для разных классов позвоночных животных.

2. Впервые в экспериментах 1п у1гго показана выраженная штихолинергическая активность ряда опиоидных пептидов по отноше-шк> к хронотропным эффектам экзогенного и эндогенного ацетилхолина

3. Впервые выявлено потенцирование хронотропньк эффектов аце-■илхолина под влиянием синтетического аналога лей=энкефалина да-[аргина.

4. Впервые показано ингибирование ганглиозносинаптической передачи возбуждения а сердце под влиянием параопиоида дерморфмна.

5. Впервые проанализировало изменение хронотропии и вегета-ивного баланса регуляции ритма сердца при остром и хроническом зменении активности эндогенной опиоидной системы в условиях физи-еской нагрузки разных степеней.

6. Впервые проведен анализ влияния хронической блокады и ак-ивации эндогенной опиоидной системы на физическую выносливость и ыявлено двуфазное изменение физической выносливости: первичное одавление, за которым следовало увеличение вьяосливости в после-ействии после скончания хронического введения агонистов и антаго-иста опиоидных рецепторов.

Положения, вынесенные на защиту:

1. Существенную роль в организации парасимпатических регуля-эриых влияний на сердце играют модуляторные процессы, возникающие а периферии, в самом сердце.

2. Модуляторные влияния на парасимпатическую регуляцию оказы-ают опиоидные пептиды, которые могут как ослаблять, так и усили-ать холинергические эффекты. Кроме того, опиоиды оказывают и пря-к влияния на миокард; по характеру развития эти эффекты такке

те дует отнести к модуляторным воздействиям.

3. Длительные изменения активности эндогенной опиоидергичес-)й системы приводят к изменениям реакции сердца на физическую

нагрузку и оказывают значительные влияния на физическую выносливость.

4. Наряду с опиоидергической осуществляется и адренергичес-кая модуляция парасимпатических эффектов. Таким образом, в пределе сердца возможны совместные модуляторные влияния на парасимпатическую регуляцию со стороны пептидергической и адренергической систем Такого рода периферическая сочетанная модуляция приобретает особое значение при регуляции деятельности сердца в условиях физической нагрузки.

Научно-практическая ценность работы:

1. Адекватная оценка регуляторных влияний на сердце со стороны вегетативной нервной системы невозмоша без учета полифункциональных модуляторных воздействий, имеющих пептидергическое (опио-идное) и медиаторное (адренергическое) происхождение.

2. Выявленные нами прямые отрицательные инотропные эффекты некоторых экзогенных опиоидных пептидов на миокард и значительные сдвиги вегетативного баланса регуляции деятельности сердца, а также двуфазные изменения физической гиносливости при хроническом изменении активности эндогенной опиоидной системы позволяют предвидеть и в перспективе использовать некоторые результаты применения опиоидных агонистов и антагонистов в экспериментальной и клинической практике.

Апробация работы:

Материалы диссертации доложены и обсуждены на заседаниях кафедры физиологии человека и животных биологического факультета МГУ, на Ломоносовских чтениях 1988 г., на конференции "Нейромедиа-торы в норме и при патологии" /Казань, 1979/, на XIII съезде Всесоюзного физиологического общества /Алма-Ата, 1979 /, на конференции "Проблемы сравнительной электрокардиографии" /Сыктывкар,1979/, на УН Всесоюзной конференции по электрофизиологии ЦНС /Ереван,138( на Х1У Закавказской конференции педвузов по современным проблемам

физиологии человека и животных /Ереван, 1981 /, на УШ Совещэн; по эволюционной физиологии /Ленинград, 1982 /, на конференциях "Общие проблемы экологической физиологии /Сыктывкар, 1982 /, "1 тральная регуляция кровообращения" /Ростов/Дон, 1984 /, на Х1У съезде Всесоюзного физиологического общества /Ленинград, 1983 , на симпозиуме "Физиология Пептидов" /Ленинград, 1988 /, на 112 Всесоюзном совещании "Культивирование клеток животных и челове! /Пущино, 1990 /, на симпозиуме "Физиологическое и клиническое г чение регуляторных пептидов" /Горький, 1990 /, на конференции "Применение малых регуляторных пептидов в анестезиологии и ИНТ' сивной терапии" /Москва, 1991 /.

Публикации:

По материалам диссертации опубликовано 45 работ.

в.

ГЛАВА Г О-20, 22, 24} АДРЕНЕРГИЧЕСКАЯ МОДУЛЯЦИЯ ПАРАСИМПАТИЧЕСКИХ ХРОНОТРОПНЫХ ЭШНТОВ НА СЕРДЦЕ

Модуляция вегетативной регуляции сердца при симпато-парасим- ¡| патическом взаимодействии может осуществляться на разных уровнях 1* вегетативного рефлекса, причем в различных условиях модуляторную >5 роль может играть как симпатический, так и парасимпатический отделы вегетативной нервной системы. Более того, каждый из указанных отделов может оказывать модуляторные влияния и на собственную активность, действуя по принципу автомодуляции. | В настоящем исследовании был проведен анализ одного из при- ? веденных выше видов модуляции, а именно, модуляторных влияний ад-ренергического звена на парасимпатические хронотропные эффекты.

Интерес именно к этому виду модуляции объясняется тем, что ранее в обширной системе экспериментальных данных было получено доказательство регуляторной полифункциональности парасимпатической иннервации в отношении регуляции частоты сердечных сокращений С I 3. Было установлено, что тормозные парасимпатические эффекты возникают при активации большого числа парасимпатических волокон или при стимуляции ограниченного числа волокон в течение относительного большого промежутка времени с высокой частотой следования импульсных залпов во внутрисердечных путях, тогда как кратковременная активация небольшого числа волокон стимулами низкой частоты приводит к развитию парасимпатического учащения.

Таким образом, парасимпатический иннервационный аппарат сердца в отсутствие массированной активации вегетативной системы

(к) Цифры в скобках - ссылки на оригинальные работы, список которых приведен в конце доклада.

.е. в условиях относительного покоя, способен как уменьшать, так увеличивать производительность этого органа.

В связи с этим возникает вопрос о роли, которую играет в та->й ситуации симпатический отдел. Было предположено, что в отсут-гвие стресса основной задачей симпатической системы является не збственно регуляция, а скорее модуляция наличных регуляторных [фектов парасимпатического происхождения, цель которых заключайся, с одной стороны, в ослаблении сильных, а с другой стороны, -потенцировании слабых парасимпатических эффектов, что в конечном 1ете, должно обеспечить адекватные изменения кардио- и гемодина-1ки CID.

Первая форма модуляции описана в литературе как "антагонисти-;ское взаимодействие" симпатического и парасимпатического отделов достаточно хорошо исследована. Что же касается адренергического этенцирования парасимпатических влияний, то систематического ана-1за этой проблемы не проводилось, хотя свидетельства такой формы здуляции встречаются в ряде работ (см.сводка данных в С I J и в

16 Э.

Так, в опытах; на сердце кошек и собак установлено, что слабое 1здражение звездчатого узла значительно повышает чувствительность *окарда к влиянию блуждающего нерва (Камардина, 1975 У. Это выдается в увеличении длительности остановки сердца при раздракени iryca, а также в уменьшении величины напряжения стимулов, необхо-ямой для вызова остановки сердца. В то же время при сильном раз-эажении звездчатого узла чувствительность сердца к раздражению иуждающего нерва резко снижается.

При регистрации потенциала действия ( ЦЦ ) латентных пейсме-зров сердца кролика было доказано, что одновременная аппликация детилхолина (2 х Ю-'' г/мл) и адреналина (в той ке концентрации) риводит к отчетливому углублению холинергических влияний на ПД:

наблюдается большее, чем при использовании одного ацетилхолин падения скорости нарастания медленной диастолической деполяри ции и уменьшение частоты возникновения ПД. М=холиноблокатор а пин блокирует выявленные реакции (Макарычев и др., 1976). 06h¡ ружено потенцирование катехоламинами тормозных влияний ацетил: лина на сердце крыс в условиях гипоксии (Хитров и др., 1979).

В целом ряде других исследований также было выявлено зна* тельное изменение чувствительности пейсмекерных образований к тормозным парасимпатическим воздействиям под влиянием низких i центраций катехоламинов или слабого раздражения симпатических тей, т.е. в условиях, моделирующих функциональное состояние ск тического аппарата в отсутствие стрессорных ситуаций (Каграман и др., 1975; Лунх A.A., 1976; Удельнов М.Г., 1975).

Задачей нашего исследования было изучение изменения актив ти пейсмекерных структур сердца холоднокровных при разных вида адрэнергических модуляторных воздействий на парасимпатические нотропнне эффекты с целью выявления некоторых общих закономерн тей симпато-парасимпатического взаимодействия.

I.I. Методика экспериметов.

В 1-й серии в качестве объекта исследования нами было выб] сердце лягушки rana temporaria l. ( о" (ff). Основные показател! гемодинамической активности сердца лягушки регулируются вегетативной нервной системой так же, как и у теплокровных животных, то же время морфологическая специфика организации пейсмекерной области и внутрисердечного аппарата облегчает применение элект] физиологических методов регистрации нервной и миокардиальной ai тивности.

Препарат, использованный в опытах, представлял собой изолк

иную область венозного синуса сердца лягушки с сохраненной язьго с продолговатым мозгом и симпатическими цепочками, В ряде ытов отпрепаровывали также и внутрисердечные нерва.

Внутрисердечные нервы у данного вида лягушки идут по межпред-рд^Ской перегородке в виде двух хорошо оформленных стволиков т.н. "перегородочные" нервы); в их состав входят сравнительно льшое число постганглионарных волокон блуждающего нерва, пара-млатические преганглионары, переключающиеся ниже по ходу внутри-рдечных нервов, симпатические постганглионары, а также аксоны еток II типа по Догелю, представляющие собой афферентное звено утрисердечных рефлексов, и центральные афферентные волокна, рдца друтих позвоночных животных обладают диффузной внутрисер-чной нервной системой, что значительно затрудняет проведение ектрофизиологические исследования.

Методика приготовления препарата подробно описана в С 3, 4,

Регистрировали электрограмму синусной области и внутриклеточ-е потенциалы действия ( ЛД ) пейсмекерных структур; кроме этого, специальных сериях проводили регистрацию электронейрограмма (ЭНГ утрисердечных нервов.

Отведение электрограммы осуществляли с помощью ватных фитиль-вых электродов, смоченных раствором Рингера, через усилитель био-генциалов УБП2-03 на самописце Н338-1П со скоростью записи 25мм/< гистрацию пейсмекерных ЦЦ проводили с помощью стеклянных микро-эктродов с диаметром кончика менее 0,5 мкм, заполненных ЗМ КС1. Г регистрировали биполярными серебряными электродами с мекэлек-одным расстоянием 0,5 - I мм через УЕП2-03. Запись вели с помощы горегистратора Ф0Р-2 с катодного осциллографа С1-18 со скоростью отяжки ленты 250 мм/с.

Раздражение наносили на продолговатый мозг и на симпатическую

цепочку, или на общий ваго-симпатический ствол, в котором произ дили предварительную полную дегенерацию симпатических волокон, на интактную симпатическую цепочку контралатеральной стороны. В одной из групп опытов для активации парасимпатического иннервац онного аппарата использовали раздражение не экстракардиальных, внутрисердачных нервных путей.

Стимуляцию проводили прямоугольными стимулами со стимулЯГО ЭСУ1-2; длительность стимулов была 0,5 - 0,1 мс, частота, напряж ние стимулов и длительность стимуляции варьировали в зависимост от задачи исследования. Во всех случаях последовательность акти вации нервных структур была одинаковой: сначала раздражали отде. но симпатические и парасимпатические пути, а затем проводили их совместную стимуляцию.

Исходя из зависимости характера парасимпатичеких влияний н. сердце от количественных параметров, можно было ожидать, что и форма симпато-парасимпатического взаимодействия будет зависеть I интенсивности активации того и другого отделов иннервационнсго аппарата сердца. Поэтому в ходе работы специальное внимание был< обращено на изменение характера взаимодействия в условиях вовлечения в активность разного числа парасимпатических элементов.

С этой целью в экспериментах применялись различные методик! позволявшие варьировать количественные характеристики парасимпач ческого нервного воздействия на пейсмекер: постепенное выключен! из активности центральных парасимпатических нейронов в ходе длительного повторного раздражения ядер вагуса в продолговатом моз! раздражение блуждащего нерва в процессе постепенной дегенерацш в нем нервных волокон, а также раздражение вагуса припороговыми силами.

Изменялась в ходе опытов и интенсивность симпатической акт1 вации.

Для анализа качественной природы наблюдаемых эффектов примели стандартные фармакологические тесты: блокаду М-холинорецеп-ров атропином или метацином ( - Ю-^ г/мл ), блокаду р-ад-норецепторов обзиданом (индералом; 10"^ г/мл ); для анализа рактера .импульсной активности во внутрисердечных путях использо-

ли ганглиоблокатор арфонад ( 10 г/мл ).

Подробное описание примененных в этой серии опытов методики едставлено в следующих работах: С 3, 4, 14, 18 Всего в 1»й се и было проведено более 250 опытов.

Во 2-й серии исследовали влияние на разнонаправленные пара-мпатические хронотропные эффекты экзогенного адреналина; направ-нность парасимпатических эффектов в этом случае определялась сенной зависимостью.

Опыты проводили также на о"«/ лягушки травяной в весенне-тний и осенне-зимний периоды. Изменение температуры окружающей еды вызывает глубокие сдвиги в реактивности сердца холоднокров-х животных вследствие изменения температуры тела животного, ин-нсивности дыхания, изменения рН крови, общего уровня обмена ществ £2. 7. Изменения чувствительности рецепторных образований рдца и внутриклеточного метаболизма могут привести к появлению знозначных в регуляторном отношении влияний со стороны парасим-тического нервного аппарата. Было высказано предположение, что в этих условиях симпатический медиатор может оказывать модуляторе влияния на разнонаправленные парасимпатические эффекты.

Эксперименты проводили на препарате синусной области сердца гушки с отпрепарованными'внутрисердечными и зкстракардиальными рвами. В ряде опытов сохраняли связь с продолговатым мозгом.

Экстракардиальные нервы после перерождения в них симпатически: локон или ядра вагуса в продолговатом мозгу раздраяали прямо-ольными стимулами длительностью 0,5 не, частотой 4 Гц, околопо-говой силой.

Проводили, как и в 1=й серии, регистрацию электро^^грэл сердца и ЭНГ внутрисердечного нерва. Изучаемые вещества (адре лин гидрохлорид, 10~® - I0"9 г/мл; атропин сульфат, 10~° - 1С арфонад, 10" г/мл) вводили в перфузат; в ряде опытов для ист ния запасов катехоламинов в симпатических нервных окончаниях варительно ( за 48 ч. ) вводили в/б резерпин ( 50 мкг/кг ): р было показано, что такая обработка полностью устраняет влияни пейсмекер со стороны симпатической системы ¿"1 J.

Концентрации адреналина, применяемые в опытах, были о кол роговыми по показателям изменения частоты сердечных сокращен«' для определения этих концентраций в каждой группе опытов осущ< ствляли предварительное исследование влияний адреналина на ве. ну пейсмекерного ритма препаратов.

Подробное описание использованной в этой серии методики i ставлено в £ I Jf. Всего во 2=й серии было проведено 174 экспе; мента.

В 3=й серии исследование адренергической модуляции napaci тических хронотропных эффектов проводили на сердцах рыб.

Интерес к этому объекту связан с тем, что у рыб впервые i филогенезе позвоночных животных появляется симпатическая систе регуляторные влияния которой на сердце, по одним данным, отсуч вуют, а по другим - могут приводить к увеличению частоты серде сокращений ( £19 J ).

С другой стороны, парасимпатическая регуляция у рыб хорои развита и обладает потенциальными возможностями для осуществле двунаправленных регуляторных влияний /Cl9j.

Исходя из этого, можно предполагать, что одним из основнь назначений симпатической системы у рыб является не собственно гуляция, а скорее модуляция регуляторных парасимпатических эфф

Опыты проводили на беломорской треске Gadus morhua maris ( Der.).

(отр.Трескообразных). Волокна блуждающего нерва иннер-ругот сердце трески в составе сердечной веточки вагуса, идущей оль протока Кювьера и входящей в сердце в области венозного сиза. Адренергическая иннервация сердца трески, особенно отчетливо раженная в области венозного синуса и предсердий, была выявлена специальных гистохимических исследованиях с применением метода уоресцентной микроскопии ( НоЗдегсп, 1974; миббоп, 1976). локна, обладахщие специфической флуоресценцией, подходят к серд-в составе 1=го и 2=го спинальных нервов.

Исследование было выполнено на фиксированных и свободноплава-их рыбах. В первом случае рыба фиксировалась в станке с проточ-й морской водой спинным плавником вверх. С правой стороны отпре-ровывали блуждамций нерв и ветвь спинального нерва; нервы пере-зали и стимулировали периферические концы стимулами длительно-ью 0,1 - 0,5 мс; частоту и длительность стимуляции варьировали зависимости от условий экспериментов. Регистрировали электрокар-ограмму ( ЭКГ ) с помощью игольчатых электродов на электрокарди-рафе типа ЭКСПЧТ.

Во втором случае рыбы свободно плавали в ванне с проточной рекой водой; регистрацию ЭКГ и стимуляцию нервов проводили с мощью хронически вживленных электродов.

В ряде опытов исследовали влияние экзогенных катехоламгаов норадреналина ) на парасимпатические эффекты. Опыты этой группы ,кже проводили на фиксированных и свободноплавающих рыбах. В обо: случаях норадреналин вводили в/б в дозах 0,2 - О,В мг/кг.

У рыб раздражали неперерезанный вагус до и после введения радреналина. С целью фармакологического тестирования, как к в 'едшествующих сериях, применяли атропин сульфат или метацин (0.4 8 мг/кг ) и обзидан ( 0,8 мг/кг ); оба соединения вводили в/б.

Аналогичные исследования были проведены и на другом предста-

вит еле костистых рыб - керчаке МуозосерЬгЛиБ всогр!иа (отр Скорпионообразных). Выбор другого объекта был связан с тем, ч разных отрядах костистых рыб адренергическая иннервация выразк в неодинаковой степени. Различия в уровнях организации экстра диальной иннервации могут сказываться и на характере адренерг ческой модуляции.

В данных экспериментах рыб фиксировали в станке и раздра ядра блуждающего нерва в продолговатом мозгу; варьировали час и силу раздражения. Регистрацию ЭКГ проводили при стимуляции : вагуса в продолговатом мозгу до и после в/б введения адреналш ( 0,3 мг/кг- ).

Подробное описание использованных в 3=й серии методик пр< дено в работах: £9, 19, 20^7. Всего в этой серии было выполн« более 70 опытов.

Во всех случаях, когда в олытах вводили экзогенные катехс мины, проводились контрольные эксперименты с введением того же объема физиологического раствора.

Для оценки изменений производительности сердца использовг хронотропный показатель; выбор именно этого показателя был св* с тем, что адаптация производительности сердца к различный по ностям режимам мышечной работы, как известно, осуществляется г ным образом за счет изменения именно частоты сердечных соьраще

Хронотролные эффекты рассчитывали вбк исходной частоте сердечных сокращений. При анализе пейсмекерных ЦЦ измеряли ско нарастания медленной диастолической деполяризации ( ВДЦ ) по в чине наклона МДЦ ( tgcL , где -угол наклона ) и длительност на уровне 90?£=ной реполяризации. При анализе ЭНГ измеряли "эне залпа импульсов - условную величину, объединяющую в себе все о ные параметры импульсной активности: число осцилляций в залпе, амплитуду и длительность, - и выражали ее в условных единицах ед.).

Статистическую обработку материалов проводили с испольэова-ем непараметрических критериев.

Выбор непараметрических критериев был обусловлен рядом их щественных преимуществ, главным образом тем, что применение па-метрических критериев требует заведомо нормального распределен«; которому принадлежит данная выборка, что в случае физиологичес-х переменных весьма затруднительно предвидеть или проверить.

Мы использовали в основном критерий и (Вилкоксона-Манна -тни) и критерий Ч (Розенбаума), рассчитанные для независимых борок. В некоторых случаях применяли также точный метод Фишера ГМ5 ), позволяющий оценить различия в частоте появления некоторс личины анализирующего показателя, превышающей определенный уро-ль ( Апмарин и др., 1975; Гублер и др., 1973 ).

1.2. Нейрогенная адренергическая модуляция парасимпатических хронотропных эффектов у амфибий.

Общий анализ результатов, полученных в 1=й серии, позвох нам выявить две основные формы симпатических модуляторных влк на парасимпатические эффекты: инц^биторнуга ( "антагонистичес и потенцирующую.

При первой форме взаимодействия присоединение стимуляции патических путей к начавшейся раньше парасимпатической стимул приводило к ослаблению исходного отрицательного парасимпатиче хронотропного эффекта. В опытах этой группы исходные парасимп ческие и симпатические эффекты были хорошо выражены и статист ки достоверно превышали величину соответствующих эффектов в р группах экспериментов, где наблюдался иной тип взаимодействия ( табл. I, А ).

При второй форме взаимодействия присоединение раздражени симпатической цепочки к уже развивающемуся парасимпатическому медлен™ ритма или одновременная активация симпатических и па симпатических путей вызывали потенцирование исходно регистрир мого парасимпатического замедления ( табл. I, В ).

Такая форма взаимодействия наблюдалась только в условиях носительно слабой активации симпатической цепочки, вызыващей ма незначительное учащение ритма; раздражение парасимпатичесн путей также приводило в этих опытах к слабовыраженному замедл Особенно ярко потенцирующее влияние симпатической систем парасимпатические эффекты проявлялось в тех опытах, в которых дранение парасимпатических путей было допороговым и не привод изменению ритма. Присоединение к такому раздражению слабой ак ции симпатической цепочки сопровождалось замедлением частоты дечных сокращений.

парасимпатических к симпатических путей в случао антагонистической цюрмы

симпатического—парасимпатического взаимодействия (А, Б) и в случае потенциирующего влняшш на парасимпатические эффекты (В, Г)

Серия

Число опытов

Хроиотропиый Эффект (изменение интервала Р—Р па ЭКГ, 1) мс). (—) — отрицательный, (+) — положительный хроиотроппый эффект

стимуляция парасимпатических путей

стимуляция симпатической цепочки

III

совместная стимуляция

Критерий достоверпости разности (р)

А Б В Г

35 • 17

. 29 14

Критерии. достоверности 1 разности (р)

—3120 + 750 —281G + 321 ■ -56+20 +61±17

р <0.01 (между А ц В)

Р<0.01

(между Б и В) /з < 0.001 (между А и Г)

+164+24 +1s7+37 +100+24 +75+19

р <0.05 (между А и В) р<0.01 (между Б и В) /><0.01 (между А и Г)

— 1400 + 624 +109+28 —224+60 +178f 31 ■

Р< 0.01

(между III и I) р < 0.05 (между III и Ily

Р<0.01 I

(между III я I) /><0.05 (между III и 3 >

.Примечание: во всех сериях объектом исследования была лягушка травяная.

При уменьшении количества активных парасимпатических элемен тов в ряде опытов в ответ на раздражение парасимпатических путей наблюдалось увеличение частоты сердечных сокращений. Изучение си пато-парасишатического взаимодействия в этих условиях показало, что симпатическая система может оказывать потенцирующие модуляторные влияния и на парасимпатическое учащение: совместное раздражение симпатических и парасимпатических путей в этих опытах приводило к развитию учащения, величина которого превышала сумм} симпатического и парасимпатического эффектов ( табл.1, Г ).

Аналогичные данные были получены и при совмещении стимуляц; симпатических путей и эфферентного звена внутрисердечных рефлексов, существование которых в сердце было доказано в обширной с» теме экспериментов, проведенных на кафедрах физиологии МГУ и И МШВД £4, I8J.

В рамках этих исследований нами, в частности, было показан что стимуляция центрального конца одного из внутрисердечных нер .вор.после полной дегенерации энстракардиальных нервов, ¡«ожет- вь зывать на сердце возникновение как отрицательных, так и положительных хронотропных реакций, имеющих хоякнергическое происхождение £4 Присоединение к такой стимуляции околопорогового симпатического раздражения также приводило к потенцированию хрс нотропных эффектов ( табл. П ).

Введение в перфузаг блокатора ß =адренорецепторов обзида]

( 10"° г/мл ) устраняло как положительные хронотропныа эффекты регистрируемые при стимуляции только симпатической цепочки, та и тот прирост хронотропных эффектов, который возникал при совм ной стимуляции симпатических и парасимпатических нервов. На ос вании этого следует полагать, что потенцирование хронотропных фектов парасимпатической иннервации осуществляется симпагичесв

эрвной системой через активацию р =адренорецепторов. ТАБЛИЦА Д. '

Изменение хронотропного эффекта при раздельном и совместном раздражении внутрисердечных парасимпатических путей и симпатической цепочки. Влияние холино- и адреноблокаторов на хронотроп-тае эффекты от совместного раздражения нервных путей.

группа Хронотропный эффект ( уд/мин ) при активации:

опытов симпатической(внутрисер-!симпатической цепочки и внутри-цепочки ¡дечного ¡сердечного нерва совместно

!нерва . I ! ! ¡Исходно !После атро- После ат-

\ | ¡пина ! \ ! ! ! ! ропина и обзидана

I (эО (х) (хх) (Хт€) +1,57±0,49 1-3,75±0,971-6,4±Г,01 |-1,32±0,37 ->-1,2^0,51 |+2,2±0,9 |+5,3±0.85 [+Т,03±0,42 1 1 ! 0

2 0

: хх ) - эффект статистически достоверно отличается от эффекта ( х ); Р ^ О,СО.

[ хх ) - эффект не отличается достоверно от эффекта ( х ); Р > 0,05.

Объект исследования - лягушка травяная.

Выло исследовано также влияние М-холиноблокатора мет ( Ю-4 - 10"*° г/мл ) на эффекты от совместной активации с тичвских и парасимпатических путей. Во всех опытах такая I да приводила к исчезновению потенцированного хронотропног фекта; на фоне раздражения симпатической цепочки и параси ческих путей наблюдали лишь незначительное учащение, разв! щееся с большим латентным периодом; этот эффект был адрен! ческим, т.к. устранялся обзиданом.

Таким образом, результаты фармакологического тестиро] показываит, что модуляторные эффекты опосредуются через а; цию адренорецепторов, а возникающий в результате такой мо; потенцированный эффект стимуляции парасимпатических путей ется чисто холинергическим.

Одним из уровней адренергической модуляции парасимпат ких хронотропных эффектов могут быть собственно пейсмекерн разования. Для проверки этого предположения были предприня опыты с внутриклеточной регистрацией пейсмекерных ДЦ. Реп* ция ДД одной и той же клетки пейсмекерной области в условк раздельного и совместного раздражения симпатических и пара тических путей позволила выявить некоторые интересные закс мерности.

Совместная стимуляция симпатических и парасимпатическ тей при антогонистическом характере адренергической модуля приводила к тому, что уменьшение скорости нарастания МЩ, вакхдееся при исходном парасимпатическом раздражении, стано менее выраженным; менее выраженным оказывалось и характерн парасимпатического влияния укорочение длительности ЦЦ, а т степень гиперполяривации мембраны.

В случае потенцирующего модуляторного влияния со стор симпатической системы на парасимпатические эффекты были зз

стрированы более глубокие изменения ряда характеристик пейсме-керных ЦЦ, чем при раздельном раздражении одних только парасимпатических путей. В некоторых опытах этой группы одновременно проявлялись и парасимпатические влияния на форму ЦЦ, что могло выражаться, например, в одновременном развитии гиперполяризации и увеличении скорости нарастания МДЦ. Однако при этом изменения параметров ЦЦ, характерные для действия холинергического медиатора, оказывались превалирующими и более выраженными, чем исходные .

Иллюстрацией сказанного могут быть результаты, приведенные на рис. I и 2.

Припороговое раздражение симпатических путей, как правило, слегка увеличивало крутизну нарастания ВДЦ пейсмекерного ЦЦ; при этом развивалось небольшое учащение ритма ( рис.1, А и 2, а ). Припороговое раздражение продолговатого мозга или центрального конца внутрисердечного нерва незначительно замедляло скорость зарастания МДЦ и уменьшало длительность ЦЦ ( рис. I, Б и 2, б ). Ритм при этом не изменялся или незначительно замедлялся. Присоединение околопорогового симпатического раздражения к активации парасимпатических путей в обоих случаях приводило к появлению отчетливого замедления ритма ( рис.1, В и 2, в У. На ПД при этом отмечалось уменьшение крутизны нарастания ЦЦД, длительности ЦЦ 1 развитие небольшой гиперполяризации.

В другой группе опытов активация внутрисердечного рефлекторного аппарата околопороговыми силами вызывала небольшое учащение ( рис. 3, б ). Это .учащение было обусловлено увеличением <рутизны нарастания ЦОД ПД пейсмекерной клетки. Совмещение этого заздражения с активацией симпатической цепочки, раздельное раздражение которой слегка ускоряло ритм ( рис. 3, а ), приводило к развитию положительного хронотропного эффекта, величина которого

ммшиши

ллтлмлшша

ШШллиииОХГ

Рпс. 1 . Изменение биоэлектрической активности пеисмо-керной "клетки венозного синуса сердца лягушка прп раздельном п совместном раздражении симпатической цепочки н продолговатого мозга.

— раэзражгннс симпатической цепочки, Б — рзэдражсине продолговатого .мозга, В — совместнее раздражение сныпашческой цепочки и прололговатегоыогга. Обозначения те же, что н иа рлс. 1.

.2 . Влияние активации симпатической цепочки на

щательный хронотропный эффект, возникающий при

фаженин внутрисердечных парасимпатических путей,

1 ПД клетки пейсмекерной области.

ЭГ синусной области, £ — ПД пейсмекерной клетки; при-ны результаты наложения исходного ПД (сплошная линия) Д, зарегистрированного во время максимального эффекта аздражения (прерывистая линия), а — раздражение снмпа-ской цепочки (стрелка на ЭГ); 6 — раздражение централь-конца внутрнсердечного. нерва (стрелка на ЭГ); е — совме-е раздражение симпатической цепочки и внутрнсердечного а (момент подключения раздражения внутрнсердечного а к начавшемуся ранее раздражению симпатической це-и отмечен двумя стрелками на ЭГ).

кт исследования - лягушка травяная.

Рис. з. Влияние активация симпатической цепочки на положительный хронотропный эффект, возникающий при раздражении внутрисердечных парасимпатических путей, и на ПД клетки пейсмекерной области.

Обозначения те же, что на рис. 2-Объект исследования - лягушка травяная.

превышала алгебраическую сумму обоих эффектов, т.е. наблюдалась описанная выше адренергическая потенцирующая модуляция парасимпатического учащения. Регистрация ЦЦ в этих условиях выявила еще большее увеличение крутизны нарастания ЭДД; иногда одновременно развивалась и небольшая гиперполяризация (_ рис. 3, в ).

Таким образом, околопороговая симпатическая стимуляция, не приводящая к сколько-нибудь существенным изменениям пейсмекер--юго ритма, способна вызывать сдвиги реактивности пейсмекерных образований на действие эндогенного ацетилхолина, в результате чего значительно изменяются парасимпатические хронотропные эффекты.

Модуляторные адренергические влияния на парасимпатические кронотропные эффекты могли быть обусловлены и воздействием адре-^ергического медиатора на внутрисердечной ганглиозно-синапти-ческий аппарат, в пределах которого в сердце происходит оконча-гельное формирование парасимпатической импульсной активности за :чет временного и пространственного дисперсирования возбуждения

С16 7.

Изменение функциональной активности этого аппарата может эказать существенное влияние на характер постганглионарной пара-зимпатической активности и привести к тем модуляторным эффектам, которые мы наблюдали в наших экспериментах. Вероятность такого предположения подтверждается тем, что в специальных исследова-1иях было показано как ингибиторное, так и облегчающее влияние экзогенных катехоламинов на передачу возбуждения в вегетативных ^англиях ( Аронова, 1974; Копылова и др., 1980; илст , 1965 ).

В связи с этим нами были поставлены эксперименты, целью которых явилось исследование функционального состояния внутри-¡ердечного ганглиозносинаптического аппарата в условиях различил форм взаимодействия между парасимпатической и симпатической шнервацией.

ТаблицаЩ

Изменение «энергии» импульсного аалпа во внутрпсердечпъи путях

прп раздельной и сопместпой стимуляции парасимпатических и спипатичоских нервов в случав угнетения (А) и потенциации (Б) парасимпатической ииоульсадви

Серия Число опытов Исходная «эпер-гия» парасимпатического залпа (усл. СП.) Исходная «энергия» симпатического залпа (усл. ед.) «Эаергии» парасимпатического залпа на фоне активации симпатической цепочки Критерий достоверности р между I и III

1 Н Ш

А 15 12.1+3.8 7.1 + 1.2 10.8 + 2.7 < 0.05

Б 14 10.3 + 2.3 4.3+0.8 12.0+1.9 <0.05

Критерий р достоверности разности между А и Б <0.05 <0.05-

Объект исследования - лягушка травяная.

25мхб

Рис. 4. Влияние на потенциацпю парасимпатической: активности, вызванную на фоне .одновременной стимуляции блуждающего нерва и симпатической цепочки, р-адреноблокатора обзидана.

Л — исходная парасимпатическая активность во внутрисердечных путях при раздражении блуждающего нерва; Б — то же, на фоне одновременной стимуляции симпатической цепочки; В — влияние обзидана (Ю-5 г/мл) на активность, зарегистрированную в Б.

Объект исследования - лягушка травяная.

1000 MC a -V—

а -V-

-V

"Ч-

б ^-

-И

гомс

-V-

/л

КД//W-

Рис? . Потенцпация всходаой парасимпатической актодностл л.отрицатвльдал хропотр вых эффектов на сердце на фоне совместной стимуляции симпатически п параспшмтдчес;

щчей.

С.ива представлены ЭГ синусной области, спра<га — ЭНГ виутрпсердечиого|яерва. I — нсходаый хронот) иыЯ эффект il парасимпатическая импульсная активность при раздражении блуждающего нерва (8-й ; после BaroTovnii); II — то же, на фойе одноеремеаной стюгуляцшг парасимпатических и симдатачес путей; III — хронотрочный эффект и юшульсвая активность при контрольном раздражении блуждали верва. а — псюдная ЭГ; 6 — ЭГ йа фоне раздражения нервных путей; представлено яаксималькое ра;

тие хровотропяого эффекта.

Объект исследования - лягушка травяная.

Регистрация ЭНГ внутрисердечного нерва при стимуляции блуж-^ax)щeгo нерва на фоне низкочастотной симпатической стимуляции ! с частотой I Гц ) выявила, как и в случае парасимпатических :ронотропных эффектов, две" формы адренергических модуляторных сияний4, угнетение и потенциацию парасимпатической постганглио-[арной импульсной активности. Первая форма взаимодействия возник гала в 52%, а вторая - в 48% случаев, причем была показана чет-гая зависимость направленности модуляторного влияния от исход-юго уровня парасимпатической активности: при относительно вы-юкой "энергии" парасимпатического залпа наблюдалось ингибиро-|ание, а при низкой - потенциация активности ( табл. ТП ).

Для исследования качественной природы модуляторных влияний о стороны симпатической системы на постганглионарную парасим-:атическую активность мы, как и в предыдущих экспериментах, при-:енили =адрен об локатор обзидан ( 10"^ г/мл ). На рис. 4 пред-тавлены результаты одного из таких опытов. 8 этом опыте умерен-ая активация симпатической цепочки привела к увеличению исход-ой парасимпатической активности на 36,0%. После аппликации об-идана на синусную область уровень парасимпатической активности а фоне совместной активации симпатических и парасимпатических утей вернулся практически к исходному.

Таким образом, адренергическое потенцирование передачи воз-уждения было опосредовано через активацию ^ =адренорецептсров.

Следует подчеркнуть, что потенцирующие влияния на постгангл! нарную парасимпатическую активность во внутрисердечных путях и а хронотропные эффекты на сердце наблюдали только при относи-ельно низкой величине "энергии" залпа в постганглионарных сим-атических волокнах. При больших значениях симпатического залпа, ак правило, возникало угнетение парасимпатической импульсации и ронотропных эффектов на сердце, что совпадает с данными о влия-

нии высоких концентраций катехоламинов на ганглиозно-синапп ческуго передачу в сердце ( Аронова, 1974; Копылова и др., IÍ Сопоставление изменений характера импульсной активност! постганглионарных путях блуждающего нерва с хронотропными эс фектами на сердце при разных формах адренергической модуляц] передачи возбуждения показало наличие четкой корреляции мелу количественными характеристиками импульсной активности и ве; чиной и направленностью парасимпатических хронотропных эффе| На рис. 5 и б приведены результаты опытов, в которых о< ществляли одновременную регистрацию ЭНГ внутрисердечного не] . и электрограммы синусной области в условиях раздельной и coi местной стимуляции симпатических и парасимпатических путей, сперименты проводили на разных стадиях дегенерации вагусных ганглионарных волокон после предварительного полного переро? ния в ваго-симпатическом стволе симпатических волокон; конт] латеральная симпатическая цепочка при этом оставалась интам Околопороговая стимуляция интактной симпатической цепочки ш не раздражения парасимпатических преганглионаров на разных < диях их перерождения привела к потенциации как отрицательно] ( на 8-й день по^се]вагогомии ), так и положительного ( на IÍ день после ваготомии) парасимпатического хронотропного эффе! в обоих случаях эта потенциация развивалась на фоне выражен! увеличения постганглионарной активности.

Таким образом, полученные данные показывают, что гангл1 зносиналтический аппарат сердца является важным звеном во в: имодействии парасимпатического и симпатического отделов вег< тивной нервной системы при регуляции ритма пейсмекера. Моду; передачи возбуждения на этом уровне может оказывать существ« влияние при организации хронотропных реакций пейсмекера.

1000 нс

_^ 25**3

20ис

пацпя исходной парасп.мнатпческоп активности и положительного хроно-га на сердце на фопе совместной стпмуляцпп парасимпатические п спмпатп-ческпх путей (12-й день после ваготоипи).

Ойознтчелпл те псе, что л на рис. 5.

цования - лягушка травяная.

а-i-

i JLv-Л—v-^-

ß—A-

-А— 2

н if.

iii

Л'12

t 1 "5

¿-Л-

Рис. 7. Изменение эффекта парасимпатического учащения ритма сокращений сердца при действии адреналина. А, Б — весенне-летний период (первая серия опытов); В, Г — осенне-зимний период (вторая серия опытов); А, В — электрограммы синусной области, зарегистрированные при раздражении продолговатого мозга; Б, Г — изменения эффекта парасимпатического учащения ритма под влиянием адреналина и атропина (по результатам статистической обработки данных всех опытов каждой серии); I — исходный ритм сокращений при раздражении продолговатого мозга; // — ритм сокращений после введения адреналина (10~5 г/мл); III—блокада эффекта атропинЬм (Ю-4—10-5 г/мл):

а — исходный ритм. С—максимум развития эффекта от раздражения продолговатого мозга. / — »сходный положительный хронотропныЛ эффект. 2—изменение эффекта под влияние* адреналина, 3 —блокада эффекта атропином. По оси ординат — учащение ритма (уд/мин) по отношению к исхоллочу. Стрелкой отмечен момент подачи раздражения

Объект исследования - лягушка травяная.

Общий анализ приведенных результатов позволяет сделать вывод ) существовании в сердце выраженных потенцирующих модуляторных щренергических влияний на парасимпатические хронотропные эффект

Результаты фармакологического тестирования указывают, с >дной стороны, на холинергическуга природу возникающего при по-■енцировании "прироста" хронотропного эффекта, а с сругой сто-юны - на адренергическую природу самого потенцирования. Этот ¡ывод подтверждается и в представленной ниже серии эксперименте I которых исследовали влияния на парасимпатические хронотропные ффекты не эндогенных катехоламинов, выделяющихся при стимуля-;ии симпатических путей, а экзогенных адренергических медиаторов

1.3. Модуляция парасимпатических хронотропных эффектов под влиянием экзогенных симпатических медиаторов.

Эксперименты по анализу влияний на парасимпатические эф-екты экзогенных катехоламинов проводили также на сердцах лягу-ек; для исследований был выбран адреналин, т.к. известно, что лягушек именно адреналин является основным медиатором в симпа-ической системе.

Как и в предыдущих сериях перед нами стояла задача иссле-овать влияния адренергического медиатора на разнонаправленные арасимпатические эффекты. Хорошо известно, что реактивность ми-карда у амфибий на воздействие медиаторов значительно изменятся в зависимости от времени года ( Покровский, 1976; Kunos, Э75). Связано это с тем, что изменение температуры окружающей реды вызывает глубокие сдвиги в общем уровне обмена веществ у ойкилотермных животных, сопровождающиеся и изменениями чувстви-эльности рецепторных образований сердца.

Опыты первой серии проводили в весенне-летний период, к раздражение продолговатого мозга или общего ваго-симлатическ ствола после предварительного введения резерпина вызывало, к правило, выраженный положительный хронотропный эффект, холин гическая природа которого подтверждалась блокадой его атропи В экспериментах этой группы добавление в перфузат, омывающий

изолированную синусную область сердца, адреналина ( 10 - I г/мл ) приводило к резкому уменьшению парасимпатического уча! ния, т.е. проявлялась ингибиторная форма модуляторного эффек катехоламинов. Сам адреналин в указанных концентрациях не ок зывал хронотропного влияния. После отмывки препарата синусно ласти раствором Ригнера вновь появилось парасимпатическое уч. ние ( рис. 7 ).

В опытах второй и третьей групп изучали влияния адрена на хронотропные эффекты парасимпатического происхождения на I паратах венозного синуса, полученных в осенне-зимний период.

В начале этого периода ( сентябрь - октябрь ) раздражен] парасимпатических путей продолжало вызывать учащение ритма, I нако введение в перфузат адреналина в подпороговых по отноше! к его собственному хронотропному эффекту концентрациях оказы: иное влияние на эти эффекты. На рис. 7 ( В,Г ) приведены рез; таты одного из таких опытов. Исходно раздражение продолговат! мозга вызывало слабое учащение, составившее 3 уд/мин. На фон« действия адреналина ( г/мл ) такое же раздражение при в о;

к более значительному учащению; хронотропный эффект увеличил* в 2 раза. После атропинизации эффект исчезал.

В аналогичных экспериментах, проведенных в более поздни! риод ( ноябрь - февраль ) раздражение парасимпатических путе] замедляло ритм. При аппликации припороговых концентраций адр(

a -J___

5~,\—

,7—U

Ö-Jl-

—vL-*^-.

-jU

-JL

- Б

I 2 5

-i-4-I'T

■

. 1 Т

-J,—-—

Рис. В- Изменение эффекта парасимпатического замедления ритма сокращений сердца под действием адреналина (осскис-знмииЛ период; опытьг третьей серии). А — эдектро-граммы синусной области: ß—изменение эффекта парасимпатического замедления под кднянисм адреналина и атропина (по результатам статистической обработки данных); / — нслоднос замедленно ритма при раздражении продолговатого мозга: II— углубление замедления ритма сокращеьнй после цосдсния адреналина (\0~9 г/мл); III— блоки-роиаинс эффсл~а под влиянием атропина (Ю-5 г/мм):

а — исходный ритм, б—максимум раэонтпя эффекта от раздражения продолговатого моага, i — исходный отрицательный хроиотиочныд эффект. 2 — изменение эффекта под влиянием адреналина. J — блокада эффекта aTfcnjmoM. СгрслкоЛ отмечен момент подачи раздражения

Объект исследования - лягушка травяная.

ц>

•>3

-лина это замедление усиливалось; добавление атропина блокирс хронотропный эффект ( рис. 8 ).

В экспериментах данной серии адреналин в использованных концентрациях не влиял на ганглиозносинаптическую передачу в буждения, т.к. регистрация ЭНГ внутрисердечного нерва при ра жении вагуса не выявила изменений импульсной активности на ф действия адреналина { рис. 9 ).

Таким образом, изменения парасимпатических хронотропных фектов под влиянием адреналина возникали, по-видимому, вслед непосредственного взаимодействия этого медиатора б эффекторн структурами пейсмекера, функциональное состояние которых зав село от сезона; видимо, именно этот фактор и определял в дан] случае направленность модуляторного адренергического воздейс

Способность экзогенного адренергического медиатора обеа вать те же формы модуляторных влияний ( ингибиторнуто и потен! рукщую ), которые мы наблюдали при стимуляции симпатических 1 служит, с нашей точки зрения, дополнительным доказательствам собственно адренергической природы обеих форм модуляции.

1.4. Адренергическая модуляция парасимпатических хронотропных эффектов у рыб.

Изучение адренергической модуляции парасимпатической ре1 ляции сердца у рыб представляет собой интерес в связи с тем,* в ряду филогенетического развития позвоночных у костных рыб I вые оформляется двойная - симпатическая и парасимпатическая регуляция сердца, причем основная роль принадлежит парасимпаа ческой иннервации, т.к. влияния со стороны симпатической сисч очень ограничены и проявляются в основном в увеличении инотрс

• —-уМ^—-

л -.....--г'/^у/»^^»-

-^Гу/"—---

Рис.9. Изменение импульсной активности во внутрнсердечньк путях при.-раздражении общего ваго-снмпатического ствола под влиянием различных фармакологических аген-. тов. Л — исходная ЗНГ; Б, В — после действия адреналина в концентрации Ю-' г/мл и 10-а г/мл (В); Г, Д—после действия атропина в концентрации 10~8 г/мл (Г) и Ю-* г/мл (Л); £ — после действия ганглиоблокатора арфоиада (10_э г/мл)

Объект исследования - лягушка тр-эвяная.

со о

мс

3000 г

2000

ЮНО

I п

I и

РлсДО. Изменение отрицагслыгого хропотропного эффекта пргг раздельной п стном раздражении парасимпатических л симпатических вервпых путей

Л—осдабленпе относительно большого отрицатслшого хропотропного эффекта прпеовыест1 Яражеишт; £ — усиление относительно слабого отрицательного хронотропвого эффекта при иои раздражении. Ло оси ординат — средняя величина эффекта, выравненная в разности дл1 стей максимального интервала во время раздражения и исходного интервала, и мс. I — в исходпого аффекта, Л — величина эффекта при совместном раздражении.

Объект исследования - треска беломорская. г-

Таблица ]_у, Изменение длительности интервала Р—Р ЭКГ при раздельном п совместном раздражении экстракардналышх парасимпатических и симпатических путей

Серия аисперн-неигов Длительность »н-гервала (в мс) КрнтеркЛ достоверности (р)

Ч исяо опытов Условия опытов исходные данный при раэдраже* 1ПМ1

1 2 | 7 7 0 6 Раздражение блуждающего нерва Раздражение симпатического и блуждающего нервов соииестно Раздражение блуждающего нерпа Раздражение симпатического и блуждающего иериовсоиместно 1290.91122.7 1363.6 + 154.5 1365+12.7 1-122.7+51.8 3622.7+304.5 2545.5 + 372.7 1Я27.3 + 313.6 2931.81365.2 <0.05 <0.05

Объект исследования - треска беломорская.

оказателя деятельности сердца или в ускорении проведения возбуж-вния между синусной областью и предсердием ( Шидловский, 1941; ;ЯШ.еМо, 1930 ).

Однако несмотря на ограниченность регуляторных возможнос-ей симпатической иннервации, нервный регуляторный аппарат серд-а рыб обладает способностью как увеличивать, так и уменьшать эмодинамическую производительность; было показано, что эти двой-гвенные влияния осуществляются за счет парасимпатической регу-яции ( Каменская, 1976; Кулаев, 1957; Родионов, 1959; Самонина, Э74; Удельнов, 1961 ).

В связи с этим можно предполагать, что у рыб основное зна-зние симпатической системы заключается не в собственно регуля-эрных влияниях, а в модуляции полифункциональной парасимпатичес-эй регуляции сердца.

В 1-й группе опытов этой серии осуществляли раздельную и звместную активацию периферического конца блуждапцего нерва и "гинального нерва, в составе-которого к сердцу идут симпатичес-<е волокна.

Раздражение блуждающего нерва сверхпороговыми стимулами при-здило к замедлению частоты сердечных сокращений; величина эф-зкта прямо зависела от интенсивности стимуляторного воздействия, ктивацмя спинального нерва ни в одном опыте не вызвала увеличе-1я ритма. Однако при совместном раздражении блуждающего нерва симпатических нервных путей в составе спинального нерва, суще-евенно изменялся, причем эти изменения были разнонаправленными.

В тех случаях, когда раздражение вагуса приводило к глубо-)му замедлению, такое же раздражение на фоне стимуляции спкналь-зго нерва вызывало лишь слабый отрицательный хронотропный эффект рис. 10, А ). Наблюдаемое ослабление тормозного эффекта было

статистически достоверным ( табл. 1У ).

Если же неходкое раздражение вагуса вызывало умеренное медление, то тогда совместная стимуляция симпатических и па; симпатических путей приводила к отчетливому, статистически ; верному углублению исходного замедления ( рис. 10,Б и табл.

В некоторых опытах вагус раздражали припороговыми стим; не вызывавшими изменений частоты сердечных сокращений. В та1 случаях совместная стимуляция позволяла выявить отрицательн< хронотропное влияние со стороны блуждающего нерва.

Данные, полученные при стимуляции симпатических путей 3 были подтверждены и при анализе взаимодействия парасимпатич« хронотропной регуляции с экзогенными катехолэминами - адреи; ном и норадреналином.

Опыты этой группы проводили на фиксированных в станке I бодноплаващих рыбах ( треске и керчаке ); в последнем случ? условия эксперимента практически совпадали с нормальными ус ями жизнедеятельности животных.

Исходно введение норадреналина и адреналина ( 0,05 и О, мг/кг,в б ) не вызывало изменений ритма ни у фиксированных, у свободноплавающих рыб, однако при стимуляции вагуса на фон действяя катехоламинов были обнаружены те же формы адренерп-кой модуляции, что и при симпатической стимуляции: выраженнь рицательные хронотропные эффекты подавлялись, а слабые - ус и вались ( табл. У и 1У ). Следовательно, у рыб, как и у амфиб модуляторные симпатические влияния имеют адренергическую при т.к. воспроизводятся при введении медиаторов симпатической с темы.

Таким образом, у рыб впервые появившийся симпатический ный аппарат не способен еще вызывать изменений хронотропного

поиеивнне длительности интервала Р—Р ЭКГ при разиитии' парасимпатических эффектен до и после пиедепип цорадреявлина

Серил зксперимен-тоа

Число опытов

Условия опытов

Длительность интервала (в мс)

исходный данные

при раздражении

Критерий

достоверности (Р)

Фиксированные рыбы

Фикс lipona ix-иые рыбы

Свобод-яоила-вающие рыбы

G 6

Í8 1S

8 12

Раздражение блуждающего нерпа То же раздражение на фоне норадреналнна

Равдраженпе блун.-даю-

щегр нерва То же раадраженне на фойе норадреналнна

Раздраженно блуждающего церва или гипо-таламической области То же раздражение на фопа аорадреналаяа

Раздран!впие блуяздаю-щего нерва или гипо-таламической области То же раздражение на фопе иорадреналипа

1130+77. а 1204.5x54.0

13G3.G + 40.9 1454.5 + 77.2

992 ±24

101б±36 996+72 •

1012+24

3l50±'i22.7 1213.13 + 200

1727.3±150 2909+190.9

1204 + 45

1204+48 1488+76

1240+72

< 0.01

<0,01

<0.05-

< 0.01"

Объект исследования - треска беломорская.

со.

Т а б лиц а VI

Влияние адреналина (0.3 мг/кг впутрибрюшинно) и физиологического раствора (0.1 мл внутрнбрюшинно) на парасимпатические хронотропные эффекты на' сердце

Группа Число Изменение интерпала Р—Р на ЭКГ (мс) Число Изменение интервала Р—Р на ЭКГ (мс)

опытов опытов до впеденпп нп Фопе адреналина опытов до сведения на фоне физиологического раствора

1 2 24 9 — 1268 —544 —ПВО * — 1.4.42 * 14 11 —996 -516 $ —652 ** —■764'**

тт а и и а к л 1» п л.... — - -

жазателя, однако оказывает значительные модуляторные влияния э. регуляторные хронотропные эффекты парасимпатического проис-ждения. В этом случае мы наблюдаем те же формы адренергической гйрогенной модуляции, что и на более поздней стадии филогенеза амфибий, у которых симпатическая система вызывает в дополнение модуляторным и выраженные регуляторные влияния.

На этом основании можно предположить, что модуляторная фун-*ия симпатической системы является более древней, чем появляются позднее мощная симпатическая регуляция.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ к 1-й глава

Приведенные выше результаты показывают, что относительно ■абая стимуляция симпатической системы создает условия для вы-)ления потенцирующей формы адренергических модуляторных влияний |.к на отрицательные, так и на положительные парасимпатические юнотропные эффекты.

Потенцирование парасимпатических влияний наблюдалось тогда, 1гда стимуляция симпатических нервов была околопороговой, приче№ 'язательным условием в случае потенциации отрицательных хроно-юпных эффектов была их слабая выраженность.

Если же парсимпатические влияния были более выраженными, то 1исоединение слабой симпатической стимуляции практически не вли-ю, а присоединение сильной - уменьшало парасимпатический эф-

!КТ .

Фармакологический анализ показал, что прирост хронотропных фактов в случае потенцирующей формы адренергической модуляции юл холинергическуго природу, а само потенцирование было спосре->вано через активацию ^-адренорецепторов.

Выявление одинаковых форм адренергической модуляции у п; ставителей разных классов ( кл.Амфибии и кл.Костистые рыбы ) разных отрядов в пределах одного класса ( отр.Трескообразные отр.Скорпионообраэные в кл.Костистых рыб ) свидетельствует о1 определенной универсальности этой, модуляции; кроме того, моле предполояить, что модуляторная функция симпатической системы ляется более древней, т.к. проявляется на таком этапе филога позвоночных животных, когда собственно симпатическая регуляц сердца еще не имеет регулягорного значения.

Таким образом, главную роль при определении характера а, нергической модуляции играет степень активации парасимпатиче! и симпатических нервных аппаратов, причем потенцирующая форм; дуляции выявляется в условиях, наиболее приближенных к адапт: ной регуляции сердца в состоянии относительного покоя.

В пределах самого сердца обе формы адренергической моду, могут осуществляться по меньшей мере на двух уровнях - гангл косинаптическом и пейсмекерном, причем, как показывают наши , ные, возможно участие как одного, так и обоих уровней модуля

Можно предполагать, что при этом возникают определенные рестройки клеточных мембран, что приводит к изменению реакти ти нейронов ганглиозносинаптического аппарата и пейсмекерних ток на воздействие холинергического медиатора.

В наших экспериментах мы создали модель только одного и фрагментов сложной картины вегетативной модуляции сердца, а адрензргических модуляторных отношений, складывающихся в пре, самого сердца. В целом организме в формировании парасимпатич ких хронотропных влияния, несомненно, участвуют и многие дру типы модуляций, оказывающие свои влияния на разных уровнях в тативной регуляции сердца.

ГЛАВА П.

¿21, 23 , 25 - 30, 32 - 37, 39 - 43 J

ОПИОИДЕРГИЧЕСКАЯ МОДУЛЯЦИЯ СЕРДЦА: ИССЛЕДОВАНИЯ ти vitro

В последние девятилетия представление о медиаторной м функциональной организации вегетативной нервной системы значительно усложнилось в связи о открытием различных типов нехолкнвргичес-хих - нвадренергических нейронов. Успехи« достигнутые иммуногиато-химией, позволили во многих вегетативных нейронах выявить существование рвгуляторных пептидов, содержащихся преимущественно в больпих граниллрных везикулах, часто вместе с классическим медиатором ( Bartffti, 1985; Bell, 1983; Caapbell, 1986; Luadbcrg •t id., 1983 ).

Большое число регуляторных пептидов было обнаружено в центрах вегетативной регуляции сердца и в самом сердце.

Среди множества пептидов, участвующих в регуляции сердца, особенное внимание в последние годы уделяетоя системе ендогенных опиоидов. Объясняется ето тем, что, как известно, ендогенная опи-оидная система занимает важное место в регуляции сердца и сосудов в уоловиях эмоционального отреооа, разных видов ооков, травм и при некоторых патологиях. Согласно общепринятой точки зрения, ен-догенные опиоиды являются одной иэ главных стресслимитируоцих систем организма, т.к. они уменьшают обусловленную стрессом активацию симпато-адреналовой системы.

Значительный вклад в определение общей опиоидаой реакции организма мояет внести активация интракардиального звена опиоидер-гической системы, на существование которого указывает рад имцуно-гистохимических данных.

Так, опиоидная иммунореактивность была обнаружена в миокарде млекопитающих ( морские свинки, кролики, крьюы ) и по некоторые

данным в сердце может содержаться от 7 до 9 различных опиоидов; кроне того, в миокарде показана высокая активность анкефаяиназ

£26 7.

Полагают, что опиоидные пептиды могут находиться в интракар- 1 диалькых симпатических и парасимпатических нервных окончаниях, а танке в малых интенсивно флуоресцирующих клетках ( МИФ - клетках) , ганглиозносииаптического аппарата сердца.

В миокарде обнаруживают и опиоидные рецепторы. В основном 8ти исследования носят косвенный характер: на изолированных мио-кардиальных препаратах наблюдают те или иные' эффекты опиоидных пептидов, которые исчезают на фоне действия антагонистов опиоидных рецепторов; однако имеются и прямые радиоавтографические дан- : кые о наличии опиоидных рецепторов в мембранах предсердных кар-диомиоцитов С 26 7.

Обнаружение в миокарде иммунореакти вности, соответствующей опиоидным пептидам, и опиоидных рецепторов дает основание думать, что ендогенные опиоиды могут играть важную роль в определении регуляторных аффектов вегетативной нервной системы, действуя на уровне самого сердца.

Влияния ети могут выражаться как в прямых эффектах на хроно- ; и кнотропию, так и в интракардиальной модуляции симпатических и : парасимпатических аффектов.

Данные, имеющиеся по етоцу поводу в литературе (см. ¿267 ), крайне противоречивы и недостаточны; что же касается сведений об интракардиальной опиоидергичеокой модуляции парасимпатических эффектов, то они практически отсутствуют.

Дальнейшее развитие и уточнение представлений в механизмах { локального действия опиоидов на сердце представляет большой интерес и для физиологов, и для клиницистов, т.к. наличие 'йнкАрди-альной опиоидергической модуляции вегетативной регуляции сердца

может существенным образом изменить сложившиеся представления с, механизмах нервной регуляции этого важнейшего органа.

Кроме того, местные эффекты опиоидов необходимо учитывать центральном и системном введении опиоидных пептидов.

Интересом к этому вопросу и обусловлен выбор темы нашей р боты: исследование действия рада опиоидных пептидов на хроно- I инотропию изолированных препаратов сердца и на регуляторные эф: ты парасимпатического происхождения, регистрируемые в эксперт.?' тах

Сложность исследований опиоидергических влияний связана в большой мере с многообразием опиоидных рецепторов и эндогенных опиоидов; для получения общего представления необходим анализ у ствия различных представителей этого обширного семейства регул;-, торных пептидов. В настоящее время выделяют не менее 5 типов ог идных рецепторов, среди которых наиболее широко представлены в центре и на периферии два основных типа - = и /Г=опиоидные цепторы.

В связи с этим для исследований нами были выбраны селектиг-агонист Ц =опиоидных рецепторов дерморфин, неселективный агонис

=рэцепторов р> =зндорфин, селективный агонист <^=рецептсрогэ лей=энкефалин и синтетический аналог лей=энкефалина даларгин, я ляющийся смешанньш агонистом с = и =рецепторов; кроме того, было исследовано действие еще двух' представителей семейства энд финов- ¿у = и ^ =эндорфина, физиологическая роль которых до. на' тояцего времени мало изучена.

Для выбранных нами пептидов характерны следующие основные свойства:

ДерморфИН /СН -Туг-О-аип-РЬя-^Иу-Туг-Рго-Зег-ИН 3 ,

который по классификации И.Л.Ашмарина следуот отнести к параош' ным пептидам, это природный гептапептид, выделенный впервые из •

лягушки Hvllomadusa ihodei в 1981 г. и обнаруженный позднее в тканях млекопитающих ( Monteeucchi, 1931; Tsou, 1985 ), интересен он тем, что в его молекуле содержится D =А1а, благодаря чему этот пептид более стоек к действию энкефалиназ, чем другие опиоиды. '

Показано, что анальгетический эффект дерморфина в 30-40 раз превосходит эффект морфина и что этот пептид является селективным i агонистом М =опиоидных рецептаров. ■

г.

Представитель эуопиоидной группы известный опиоид лей =энке- , фалин - один из эндогенных энкефалинов, широко распространенных в ; вегетативной нервной системе. Лей=энкефалину посвящено множество физиологических и фармакологических исследований; в наших экспериментах он использовался как эндогенный селективный агонист ^рецепторов.

Синтетический аналог лей-энкефалина даларгин £о-А1а »Leu , Arg энкефалин 2 является одним из наиболее интенсивно исследуемых сейчас опиоидов, применяемых в клинике при лечении язвенной болезни и инфаркта миокарда; этот пептид с высокой аффинность» вза- . имодействует с ¿^рецепторами и имеет несколько меньше сродство к 1*\ =рецепторам ( Ярыгин, 1989 ). Даларгин выгодно отличается от своего природного аналога значительно большей стойкостью к действию энкефалиназ.

Еще один эуопиоид - р -эндорфин - типичный эногенный опиоид. ^ -эндорфин - производное (э -липотропина (jbLPH gj- _ gj) и, по некоторым данным, преимущественный агонист -рецепторов; однако наряду с этим существуют и другие точки зрения; так, например, пола гаит, что он обладает более выраженным аффинитетом к £=рецепторам ( Fojas, 1985 ).

Два других производных р =липотропина - </.= и <£"=эндорфины ( соответственно p>L.PHgj_?g и 61-77^' насколько нам известно, не

5Í.

исследовалиоъ • отнопении аффектов на сердце; физиологическая роль их • организме также не ясна; яавестно -гояько, что JL «ендорфин действует как стимулятор эмоционального поведения я двигательной активности, а у-вндорфмн - как нейролептик. Собственно, опкокд-ная акткшооть у етих пептидов выражена слабо.

Для фармакологического т»откровения получаемых аффектов использовал« налокоон - соединенна, которое рассматривается сейчас как иеоелехтивиыЯ антагонист опиохдоих рецепторов с преимущеетвеннш аффинитетом к Ц -рецепторам.

Таким обра»ом, выбранные нами представителя оемейотва огшомдов позволяет оценить участие етюс пептидов в регуляции сердца о учетом активации двух основных груш опхоидных рецепторов,которые, предположительно, тш существуют, лрияем по представлениям, развиваемым некоторыми авторами ( fipurm, 1988 ), експрессируится не мио-шрдиальними элементами, а лмпь нейронами интремуральных ганглиев i некоторыми минорными клеточными элементами, как, например, 1ШФ-слетками.

2.1. Методика експеримеитов.

Анализ прямых аффектов опиоидов на миокардиальные препараты в ахой-то отепени может дать ответ на вопрос о существовании огогоид-ых рецепторов в оамих мнокардяильных структурах. С етей целью в -й серки било проведено несколько групп експериментов.

В 1-Й группе исследовали прямыя еффекты на иеолированные оерд-1 холоднокровных животных ( ллгуаки ) и теплокровных животных крысы, кролики ). В первом олуча» сердца изолировали по Штраубе ш проводили вкопермменты на оердцах, изолированных in situ, > втором случае изолировали к перфувировали аердца по Лангендсрфу; грфузию сердец лягупек проводили раствором Рикгера для холодкокров-

них, а сердец крью м кроликов - модифицированным раствором Кребса-Хенаеляйта при температуре 30°С к при рН 7,4; аэрацию осуществляли смеоьп 9556 (>£ и СО^. Скорость перфузии сердца крысы составила 6,5, а сердце кролика - 15 мл/мин. Подробное описание мето- | дик приводится в £25, 33 I

Во 2-й группе аналогичные исследования проводили на изолированной папиллярной мышце левого желудочка сердца крысы. Препаровку

мышцы и регистрации сократительной активности в изометрическом ре- | жиме осуществляли по стандартной методике при температуре 31*0,5°С. :

В 3-й группе еффвггы опиоидиьос пептидов оценивали в культуре кардиомиоцитов крысы. Работу проводили совместно с сотрудниками кафедры гистологии биологического ф-та МГУ Н.Л.Ивановой и М.ИЛей-киной. Культуру кардиомиоцитов получали из сердец двух - пятидневных крысят. Кардиомиоцкты выделяли из оердец диссоциацией раствором трипсина и культивировали на покровных стеклах в пенициллино-вых пувырысах в среде 199 с добавлением 10%-ной эмбриональной сыворотки крупного рогатого окота.

Сократительную активность регистрировали под микроскопом с помощью специальной установки, состоящей из микроскопа, фотометрической насадки и самописца КСП-4; о величине активности судили по изменении оптической плотности. Подробное описание метода приводится в /137, 43 1.

Всего в 1-й серии было проведено более 300 вкспериментов.

Во второй серии аналивхровахи действие ряда опиоидов на хроно-и инотропные аффекты холинергического происхождения.

В этой серии опыты проводили на тех же миокардиальных препаратах, что и в 1-й серии; холинергкческие эффекты на сердце вызывали стимуляцией парасимпатических путей или введением экзогенного ацетилхолина.

В первой группе опыты проводили на сердцах лягушек с сохранен-

Ъо.

\ связью с продолговатым мозгом. Парасимпатические пути стимулизали с помощью биполярных: электродов, введенных в область лока-вации ядер блуждающего нерва в продолговатом мозгу (длительность -шула 0,1 мс, частота 10 Гц, напряжение 15-20 В).

Л Г1

Во второй группе ацетилхолин ( 10 - 10" М ) апплицировали синоатриальнуто область на препаратах изолированных сердец ля-аек, а на изолированных сердцах кроликов и крыс вводили в коро-эный перфузат.

Во 2-й серии было выполнено более 150 опытов.

В 3-й серии исследовали действие некоторых из опиоидов на пе-ia4y возбуждения во внутрисердечных ганглиях. Методина регистра-i импульсной активности во внутрисердечных щггях и ее оценка ш теми ко, что и в 1-й серии опытов, описанных в 1-й главе ;м. раздел I.I. ).

Для фармакологического тестирования использовали антагонист гондных рецепторов калоксон гидрохлорид и антагонист И-холино-(епторов атропин сульфат или метацин.

Величины хроно- и шотропных эффектов оценивали по данным ЭКГ 1вханограмм и выражали ъ %% к исходным значениям сэответствую-: показателей.

Как и в 1-й главе, статистическую обработку данных проводили [спользованием непараметрических критериев.

Исследуемые пептиды были синтезированы в ВККЦ, а также по щиальному заказу в СП "Импульс" ( Новосибирск ); налоксон ги->хлорид от j)u pont dn Humours.

2.2. Анализ прямых хроно- и инотропннх арестов опиоидных пептидов.

Анализ хронотролных эффектов дерморфина, лей=энкефалина,

А%

80.

60-1 40

.1-Й"1'

-Н-Н

123456789 Ю

'г,ЯК

Рис. 13.Динамика развития'отрицательного инотроп-_ ного эффекта ацетилхолина (I) и дерглорфи-на (2).

По оси ординат - величина отрицательного инотропного эффекта, выраженная в %. Эксперимента выполнены ка изолированном по Штраубе сердце лягушки. Дцетилхолин и дерморфин использовал.; в эквкмолярных концентрациях / 10_Ь ¡,1). .

дорфинов и даларгина проводили на изолированных сердцах холодно-теплокровных животных и в культуре кардиомиоцитов крыс; концен-ации опиоидньпс пептидов изменяли в. пределах от Ю-4 до Ю-** М.

Ни один из опиоидов во всем диапазоне концентраций не окаэы-л достоверных влияний на хроногропный показатель ни у холодно-овных, ни у теплокровных животных; колебания этого показателя еле введения опиоидов не отличались достоверно от изменений, блюдаемых в контроле после введения физиологического раствора.

В то же время некоторые из опиоидов изменяли инотропный по-затель, причем, как правило, это влияние было отрицательным.

Наиболее четкие эффекты были получены при исследовании дер-

рфика. На препаратах изолированного по Штраубе сердца лягушки —5 -12

рморфин ( Ю- - 10 М ) при введении его в перфуэат в объеме 2 мл оказывал отрицательное инотропное влияние, однако эффект блюдался только при действии максимальной концентрации опиоида.

На рис.II показано развитие эффекта во времени. Как следует рисунка, максимальный эффект, достигался-через 7-10 мин и сос-влял 30-45%; латентный период реакции был равен 3 мин. Дерморфин концентрации 10~° М не влиял на инотропию сердца; введение 0,2 раствора Рингера также не вызывало изменений этого показателя.

При сопоставлении отрицательного инотропного эффекта высоких -щентраций дерморфина с аналогичным эффектом классического ме-атора ацетплхолина обращает на себя внимание существование раз-чий в динамике эффектов ( рис. II ): максимальный эффект при Яствии ацетилколина в той же концентрации, что и дермерфин, раз-вается уже через 25с после введения и достигает существенно пьшей величины.

Было предположено, что отрицательный инотропный эффект опио-1 опосредован через активацию М=опиоидных рецепторов; с другой

50 ~М0

■ I

'■1

I 2345 6786 10 •

мин.

Рис.1?-. Зависимость отрицательного инотропного эффекта от времени: (I) - дерморфин, (2) - дерморфин на о)оне налоксона. ^ - Р ^ 0,05 По оси ординат - величина отрицательного инотроп ного эффекта, выракенная в %.

______ ______Описание рис. см. в тексте.

Обьокт исоледопг'г"я'~-''лягугжа травяная.

Рис.13. Подавление сократительной активу ности папиллярной мышцш крысы под влиянием дерморфяна.

По оси абсцисс - концентрация дерморфина £ логарифмическая шкала У; по оси ординат - величина отрицательного инотропного эффекта в %% к исходной амплитуде сокращения.

стороны, не исключалась и возможность неспецифической реакции, 1-связанной с активацией этих рецепторов.

С целью выяснения того, какой именно механизм лежит в осног отрицательных инотропных эффектов дерморфина, была проведена се} опытов, в которой эффекты опиоида исследовали на фоне предварит.-ного введения в сердце антагониста опиоидных рецепторов налоксор Налоксон ( М ) полностью блокировал эффект дерморфина ( рис. 12 ), причем сам налоксон в данной концентрации достоверк го инотропного действия на сердце не оказывал. Таким образом, сч рицательное инотропное действие дерморфина было связано с актив; цией Ц =рецепторов.

На изолированной папиллярной мышце крысы дерморфин также вг зывал подавление сократительной активности. Характеристики иноту ного влияния в этом случае имели много общего с действием опиои, I на сердца холоднокровных животных, однако эффект регистрировался при действии дерморфина в достаточно широком диапазоне концентр? ' Т п

^ - 10 М ) л зависел от концентрации; зависимость имела

образный характер; ^^зо ^ыла Раша Ю М. Максимальный эффект составил 20$ ( рис. 13 ).

Сходные данные были получены и при исследовании действия де морфина на культуру кардиомиоцитов новорожденных крысят.

В этой культуре, начиная с 1-2-го дня культивирования, набл даются спонтанные сокращения кардиомиоцитов; после образования г тактов ( на 4-й - 7-й дн. ) сокращения становятся синхронными. Ч тота сокращений в среднем составляет 40-50 уд/мин.

Стабильная сократительная активность устанавливалась у;~е че 5-10 мин после начала регистрации и сохранялась в течение всего эксперимента. Замена исходной среды культивирования раствором де.1

г. о

морфина ( 10 - 10 М ) приводила к развитию медленного пацени

гз

% 100

Гпс.14. Зпплышость разпптлл отрицатслi.noro лпотроппого эффекта дерморфниа от лрсмспп.

Ло оси абсцисс — лремп после ломелта ллсдслпл дер-ыорфипл (10~ь М); по оси ордииат — отрицательный шютрошгмй эффект, ш.трпжешп.тй п процентах 1; исходной амплптуле сокращений. Капитал точка naYpa-фике еоотпетстпует средней 10 эксперимент»)! (укапаны стандартные отклонении средней).

S 7 В 5

Рлс15. Зависимость отрпцательпого пыо-троппого эффекта дерморфипа от его концентрации.

По оси абсцисс — отри.чятелwit логарифм концентрации дерморфниа: по оси ординат — относительная пелтпша отрицательного лнотропиого пффекта (максимальный эффект принят за 100 %). Каждая точка соотостстнует средней 10 опытов (указаны стандартные отклонении средней).

сл Со

"Объект исследования - культура кардиомиоцитов крысы.

сократительной активности: максимальный эффект достигался чере? 20-25 мин. Латентный период эффекта варьировал в пределах 5-10 мин. Максимальный отрицательный инотропный эффект при действии дерморфина составил 67% ( рис. 14 ). Падение сократительной активности зависело от концентарции опиоида; дозозависимость име Б =образный характер; Ю^д = х ^ (рис.15).

В последних двух группах экспериментов, так же как и в оп тах на сердце лягушки, предварительное введение налоксона (10~ не изменявшего исходной амплитуды сокращений, приводило к сиче новению отрицательного инотропного эффекта дерморфина.

Следует отметить, что падение сократительной активности с ранялось в течение длительного времени и восстановление исходи активности происходило только после нескольких повторных "отмы вок" средой культивирования в случае проведения экспериментов \ культуре кардиомиоцитов или перфузатом в остальных случаях.

Влияний на хронотропнуп активность обнаружено ни в одном случае не было.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют п потенп. альной способности параопиодного пептида дерморфина подавлять инотропную активность сердца, действуя непосредственно на уроп; кардиомиоцитов или папиллярной мышцы. Эффект этого пептида опо редован через активацию опиоидных рецепторов, скорее всего ^ па, т.к. дерморфин рассматривается в настоящее время как селективный агонист этого типа рецепторов.

Сопоставление инотропных эффектов дерморфина на изолирова; сердцах холоднокровных животных, папиллярных мышцах крысы и в культуре кардиомиоцитов крысы выявляют ряд общих черт: во всех случаях эффекты развиваются с относительно большим латентным ж риодом, медленно достигают максимального значения и блокиругото налоксоном.

<00

го

Рис. 16. Отрицательное ино-тропное влияние <^=эндорфи-на в культуре кардиомиоцитов крысы.

По оси абсцисс - логарифм кон- ^ .,<, центращш пептида; по осп ординат - величина отрицательного инотропного эффекта В /"/О.

к а>

ЕЕ И

о го о,

£4

12 10 8 6

- 100 - ЕЮШРШНЕ) '( М )

Рис. 17. Отрицательное кнотропное ¡о. влияния - эвдорфша в куль- ^ туре кардиошюцитов крисы. По осям отложены те же величины, что на рис. 16.

•К 40 т

^ 30

£ 10 в о о,

Е-1 О

в: К

- 100 1су- ЕМХЖРН! КЕ1 СМ)

(А

Однако при анализе дозозависимости эффектов дерморфина были свлены существенные различия: на сердцах холоднокровных отрицаний эффект наблюдали только при действии относительно высокой [центрации и зависимости эффекта от концентрации выявить не иось. На папиллярных мышцах и в культуре кардиомиоцитов крысы шорфин оказывал достоверное отрицательное инотропное действие шачительно более низких концентрациях; наблюдалась четкая за-¡имость эффекта от концентрации. Эти отличия, возможно, свиде-[ьствуют о более высокой инотропной чувствительности сердец 1локровных животных к действию опиоидных пептидов; однако не ис-)чено, что они объясняются разными условиями, в которых действо-[ пептид ( в одном случае непосредственно на папиллярную мыпцу [ кардиомиоциты, в другом - на эндокардиальную поверхность пер-1ируемого желудочка ).

Следует подчеркнуть также тот факт, что в культуре кардиомио-'ов дерморфин вызывал отрицательные инотропныэ эффекты, действуя безнервные структуры, т.к. нервных элементов в дшшсЯ туре было.

Среди других исследованных нами опиоидов отрицательный инот-:ный эффект вызывали только эндорфины, тогда как лей=энкефалин .аларгин достоверных изменений сократительной активности ни на ом из препаратов не вызывали.

Бзта-эндорфин подавлял сократительную активность миокарди-ных препаратов, полученньк от теплокровных, но не от холоднс-вных животных. На папиллярной мышце крысы и в культуре кардио-цитов крысы р =эндорфин действовал соответственно в диапазоне

_Г. _п _г. п

центраций от о х 10 до 5 х 10 л и от 5 х 10 до 5 х 10 М; 0= 5 х 10~"М и 5 х 10"^ К. Зависимость эффектов от концентрации я сигмоидальной. В культуре кардиомиоцитов иногда отмечалось вление следового положительного инотропного эффекта, который

-не зависел от концентрации. Максимальная величина отрицательного инотропного эффекта в опытах на папиллярной мышце составила 14.7. а в опытах на кардиомиоцитах - 38,2%. Эффект, как и в случае дер-морфина, характеризовался большим латентным периодом ( 3 мин. на папиллярной мышце и 7 мин. на кардиомиоцитах ) и медленным развитием во времени с длительным последействием.

Налоксон ( 10" Ы ) блокировал первую фазу и не влиял на вторую фазу эффектов.

Такой же анализ действия и ^=эндорфинов был проведен нами на культуре кардиомиоцитов крысы, т.к. из предыдущих данных следовало, что культура кардиомиоцитов более чувствительна к действию опиоидов.

(л то

Альфа-эндорфин ( 10 - 10 М ) зависимо от концентрации уменьшал амплитуду сокращений кардиомиоцитов; зависимость от концентрации была сигмоидальной ( рис Л 5 ).

Гамма-эндорфин ( 10"° - 5 х Ю-*** М ) также подавлял инот-ропную активность, но зависимость от концентрации была колоколо-образной (рис.17). В обоих случаях эффекты блокировались налон-соном.

Следует отметить, что при действии </„ = и )(=эндорфинов, | как и при действии р =эндорфина, в ряде случаев наблюдали положи- | тельный инотропный эффект, который развивался в последействии и не шокировался налоксоном.

Таким образом, эндорфины осуществляли свое отрицательное : инотропное влияние через активацию опиоидных рецепторов, возможнс ! ^ =типа "Колоколообразная" форма кривой дозозависимости в случае | ^ =эндорфина дает основание думать о парциальном агонизме этого ' пептида. Сохранность положительных инотропных эффектов на фоне

налоксона свидетельствует о возможности прямого неопиоидного дей- | ствия этих пептздов на миокардиальные мембраны.

Изменений частоты спонтанных сокращений кардиомиоцитов при эйствии инотропно активных опиоидов, как правило, не наблюдали, тдако положительные инотропные эффекты, возникающие периодичэс-1 при действии эндорфинов, обычно сопровождались увеличением астоты сокращений; этот эффект также не блокировался налоксоном.

Полученные нами данные свидетельствуют о потенциальной спорности некоторых оплоидов и их производных влиять на сократи-;льнук) активность сердца опосредованно через активацию опиоид-к рецепторов. Наличие таких влияний у полных (дерморфин) и частых ( р> =эндорфин ) агонистов ^ =рецепторов и их отсутствие агонистов Б" =рецепторов (лей=энкефалин и даларгин) дает осно-ние думать, что основную роль здесь играют именно ^ =опиоид-е рецепторы.

Достоверные изменения хронотропного показателя пр-л действии следованных опиоидов, как уже было сказано, отсутствовали; оме того, инотропные эффекты не достигали больших величин, иск-чая эффектов высоких концентраций пептидов и» кар.и.исмиоциты; фекты характеризовались медленным развитием и по своим основньм рактеристикам были значительно слабее эффектов классического рицательного инотропного медиатора ацетилхолина. Следует отметь также, что максимально выраженные инотропные эффекты опиои-в регистрировались при действии пептидов в высоких концентрате, значительно отличающихся от их содержания в плазме.

Все это, как нам кажется, свидетельствует о функциональной эаниченности собственных кардиодинамических влияний пептидов.

В связи с этим мы считаем, что в организме 1п тЗлго пря-> инотропные Эффекты агонистов опиоидных рецепторов на сердце 'я и потенциально возможны, но в регуляторном отношении мало 1чимы; эти влияния могут играть роль в определении производи-;ьности сердца только при патологических состояниях, когда

содержание опиоидов в плазме возрастает на несколько порядке

С другой стороны, медленно развивающиеся и длительное 1 сохраняющиеся незначительные сдвиги инотропии могут привест! изменению реактивности рабочих структур миокарда на воэдейст классических медиаторов. Исходя из такого представления, нас емые нами инотропные эффекты пептидов следует отнести к одне форм модуляторного влияния, а именно, влияния, направленного сами эффекторные структуры.

2.3. Опиоидвргическая модуляция холинергичесгих мпокар-диальных эффектов.

Во второй серии экспериментов было предпринято изучение ляторных влияний опиоидов и родственных им пептидов на холин ческие хроно- и инотропные эффекты.

Ка препаратах изолированного 1п бЗЛи сердца лягуш вскрытым правым предсердием и сохраненной связью с продолгов мозгом показали, что сверхпороговая стимуляция центров блужд щего нерва в продолговатом мозгу на фоне дерморфина вызывает товерно меньший отрицательный хронотропный эффект, чем в стс вне дерморф:яа. Ингибированке парасимпатических хронотропных фектов зависело от концентрации Юг^ = Ю-^® !>1 (рис. 18). Та же рода данные были получены и в тех случаях, когда отрнцате хронотропный эффект вызывали аппликацией на предсердие ацети лина ( 2 х 10 М ); дерморфина в этом случае была равн Ю-9 М ( рис. 18,А ).

Антагонист опиоиднык рецепторов налоксон ( Ю-0 М ) не кировал эффекты дерморфина ( рис. 18,Б ).

Сравнение холинолитического действия дерморфина с наибо эффективным из блокаторов периферических М=холинорецепторов :

G5 •

А. • Подавление дерморфнном отрицательных хронотропних эффектов на сердце лягушки, вызванных стимуляцией парасимпатических путей (/) и аппликацией на синоатриальную область ацетнлхолнна (2). Ось абсцисс — логарифм концентрации дерморфина (М), ось ординат — степень подавления исходного отрицательного хронотропного эффекта, %

г(р-р),Х

100 г

АЦХ АЦХ

¿1

АЦХ АЦХ ¿¿¡Г НАЛ НАД ДМ

■ Б.'- Величины отрицательных хроко-тропных эффектов на сердце лягушки (°/о к исходной длительности Р—Р-ннтер-вала на электрограмме) при аппликации на -синоатриальную область ацетнлхолнна» ' ..•"'^гцетнл.холина на фоне дермор-'? фнна • ч : Л ацетнлхолнна на фоне налоксонау\\ и ацетнлхолнна на

фоне налоксона и дерморфина: AUX — ацетилхолин, ДМ — дерморфнн, НАЛ — калоксон

цином показало, что дерморфина примерно в 1000 раз меньше

метацина.

Следует еще раз отметить, что ни в одной из исследованных концентраций дерморфин не влиял на исходную частоту сердечных сокращений.

В другой группе опытов было проведено исследование влияний дерморфина на отрицательные инотропные эффекты ацетилхолина. В этой группе опыты ставили на изолированном перфузируемом по Штр убе сердце лягушки; исследуемые соединения вводили в перфузат лудочка. Изменения сократительной активности оценивали по показ! ниям механограммы. Введение ацетилхолина ( 10" г/мл ) вызывало развитие отрицательного инотропного эффекта, достигавшего в cpeJ нем 55%. После отмывки препарата раствором Рингера в перфузат д(

г.

бавляли дерморфин. В концентрации 10 М дерморфин также вызывaJ отрицательный инстропный эффект (см. 2.2.), который отличался от аналогичного эффекта ацетилхолина значительно более медленным развитием и меньшей величиной.

Повторное введение ацетилхолина на фоне продолжающего действовать дерморфина еще большо усиливало уже развившееся снижет сократительной активности, причем суммарный отрицательный инотрс эффект не превышал исходный отрицательный инотропный эффект ацетилхолина (рис. 19). Это наблюдение позволило предположить, что существует антагонистическое взаимодействие между опиоидом и аце тилхолином. Теоретически были допустимы два варианта: ацетилхоли подавляет уже развившийся эффект дерморфина или дерморфин оказывает ингибиторное влияние на отрицательней инотропный эффект аце тилхолина.

По аналогии с ингибиторным, не блокируемым налоксоном влиян ем дерморфина на отрицательные хронотропные эффекты ацетилхолина было предположено, что и в случае отрицательных инотропных эффек"

Чо 10

кО

°Ь 80

«О

го 20 10

тН-

Ш 17

1 и ш ш

Рис. 19,Отсутствие изменений отрицательного пнотропного эффекта ацетилхолина на фоне вызываемого дерморфнном подавления сократительной активности. I — исходный отрицательный инотропный эффект ацетилхолина; 11 — реакция на отмывку препарата раствором Ринге-ра; 111— отрицательное инотропиое действие дерморфина; IV — отрицательный инотропный эффект ацетил-холина на фоне продолжающегося действия дерморфина. Звездочкой отмечено недостоверное различие (Я>0,05). На этом и остальных рисунках по оси ординат — величина отрицательного ниотропного эффекта (в %)

Рис. 20Подавление отрицательного ниотропного эффекта ацетилхолина на фоне совместного действия нало-ксона и дерморфина. / — исходный отрицательный инотропный эффект аиетилхолина; П— реакция на введение налоксона после отмывки препарата раствором Рингера; ///— реакция на введение дерморфина на фоне продолжающегося действия налоксона; IV ■— отрицательный инотропный эффект при повторном вве-' дении гцетмлхолина на фоне совместного действия налоксона и дерморфина. Отмечено достоверное различие (/><0,01)

Объект исследования - изолированное сердце лягушки.

проявляется такая же активность опиоида.

Это допущение было проверено в экспериментах, в которых взаимодействие дерморфина и ацетилхолина анализировалось на фоне блокады опиоидных рецепторов налоксоном.

На фоне налоксона собственный отрицательный инотропный эффект дерморфина не развивался (см.2.2). Введение в перфузат ацетилхолина в таких условиях приводило к развитию отрицательного инотроп-ного эффекта, который был достоверно менее выражен, чем при исходном введении ацетихолина (рис. 20). При действии в меньших концентрациях дерморфин не изменял эффектов ацетилхолина. 1

В контрольной группе опытов совместное введение налоксона и раствора Рингера ( вместо опиоида ) не влияло на отрицательный инотропный эффект ацетилхолина ( рис. 21 ).

Таким образом, впервые была показана холинолитическая активность эндогенного опиоида амфибий дерморфина в отношении хроно- и инотропных эффектов, вызываемых как нервной стимуляцией, так и действием, акаог.енного ацетилхолина. В обоих случаях ингибиторные- -эффекты опиоида оказались резистентными к действию антагониста опиоидных рецепторов. Вероятнее всего дерморфин оказывал прямое влияние на реактивность пейсмекерных клеток и клеток сократительного миокарда; т.к. эффекты опиоида воспроизводились при введении экзогенного ацетилхолина, то, видимо, они не были связаны с инги-бнрованием выделения эндогенного ацетилхолина.

Анализ влияний опиоидных пептидов на холинергические эффекты был продолжен с применением даларгина, который по приведенным в предыдущем разделе данным (см. 2.2), не оказывал достоверных влияний на ино- и хроногропию сердца.

Эксперименты проводили на том же препарате, что и при исследовании влияний дерморфина на холинергические хронотропные эффекты вызываемые экзогенным ацетилхолином.

Рис. 21 .Отсутствие изменении отрицательного инотропного эффекта ацетилхолина на фоне введения налоксона совместно с раствором Рннгера. /— исходным эффект ацетнлхолина; II — реакция на отмывку препарата раствором Рннгера; III—реакция на введение на-.локсона; IV — реакция на введение раствора Рннгера на фоне налоксона; V — отрицательный инотропный эффект аиегилхолнна на фоне введения налоксона и раствора Рннгера. Отмечено недостоверное различие (Я>0,05)

SO 70 60 50 44 30 20 10

-Ф

J±L

д ш ш

Объект исследования - изолированное сердце лягушки.

Даларгин ( 10" M ) вызывал отчетливую потенциацию отрицательных хронотропных эффектов ацетилхолина; налоксон полностью устранял это потенцирование (рис. 22). Таким образом, в данном слу чае влияния опиоида были опосредованы через активацию опиоидных рецепторов.

Потенцирующий эффект проявлялся только при действии даларгина в высокой концентрации; более низкие концентрации были неэффективны .

Так псе как и ингибиторные влияния дерморфина, потенцирующий эффект даларгина нельзя было объяснить действием пептида на прес-инаптическоы уровне, т.к. ацетилхолин вводился извне.

Ранее в работе Мураневича и др. ( £25 "J ) была выявлена способность даларгина подавлять активность холинэстеразы; ингибирую-щий эффект также наблюдался при действии даларгина в относительно большой концентрации

(Ю-5 - 10-5М). На этом основании мы предположили, что наблюдаемое усиление эффектов ацетилхолина в наших экспериментах связано в какой-то мерз с антихолинэстеразной активностью даларгина.

Сравление потенцирующего влияния даларпина на хронотропные эффекты ацетилхолина с действием обратимого. ингиб1ГТ)гора холинэстеразы прозерина показало, что в последнем случае потенцирование выражено значительно сильнее. При совместном введении даларгина и прозерина отмечалось аддитивное действие обоих соединений. Возможно, это объясняется неконкурентным взаимодействием опиоида и прозерина при ингибировании холинэстеразы.

Таким образом, исследование взаимодействия даларгина и ацетилхолина позволило выявить еще одну форму модуляторного влияния опиоидов - потенцирующую; в основе этой формы модуляции, возможно, лежит влияние опиоида на метаболизм медиатора.

/х/

100

II III ГУ

Рис. 22. Изменение отрицательных хронотропных эффектов при бее дении ацетилхолкна в контроле С П ), ьа фоне действия даларг;. /^111), и даларгина к налоксона Исходный эффект аиет;;

лина (¿У принят за 100)"г>.

С х - эффект достоверно отличается от контроля; Р-С 0,001. Объект исследования - изолированное сердце лягушки.

Среди других исследованных нами опиоидов модуляция холинер-■гических эффектов была выявлена при действии - и ^-эндорфи-нов, тогда как |Ъ-эндорфин и лей-энкефалин достоверных влияний на эти эффекты не оказывали.

Альфа- и ^ -эндорфины действовали на отрицательные хронотроп ные эффекты ацетилхолина подобно дерморфину: они вызывали зависимое от концентрации подавление исходного эффекта ацетилхолина. Однако антихолинергическоа влияние эндорфинов было значительно ела бее: максимальное подавление не превышало 32%, тогда как в случае дерморфина эффект достигал 100$. Значения для дерморфина, -и ^-эндорфинов были соответственно равны 0,5x10"% и

Ю~°М (рис.23). Кроме того, эффект дерморфина сохранялся на фоне налоксона, а эффекты эндорфинов на этом фоне уменьшались, но полностью не исчезали (действие налоксона в данном случае исследовали по отношению к максимально эффективным дозам эндорфинов).

Существенные отличия наблюдались и в развитии ингибиторных влияний во времени. Так, латентный период при действии дерморфина составлял в среднем 3,5 мин, а при аппликации /-и ^-эндорфино1 - около 20 мин. Кроме того, в последнем случае латентный период зависел от концентрации, увеличиваясь при уменьшении концентрации (рис.24). Общим в действии всех опиоидов, обладающих антихолинер-гической активностью, было длительное последействие.

Такой же анализ, проведенный в отношении -эндорфина, не выявил достоверных изменений отрицательного хронотропного эффекта ацетилхолина.

Сравнение по эффективности блокирующего влияния ^- и ^-эндорфинов и блокатора М-холинорецепторов атропина показало, что при действии в одинаковых концентрациях атропин был более эффективен.

Одно из объяснений наблюдаемого ингибиторного влияния / - и

Рис.23,Степень подаплсшг. рицательного хронотропноп

,а,1с™лхолима X 10 г/мл) при дсПстп.п, • их концентрации а-эпдоп, (/) н у-эндорфниа (2)- сп-ниесдозозависимостью'длн

«орфина (3). По оси абсцт отрицательный логарифм Цснтрацни опиоидоз по ординат-степень ннгибир ""я исходного отрицател!, -чропотроппого Эффекта а но «мина; для каждого „епт максимальный эффект при за 100 %

Объект исследования -изолированное сердце ;

Рис. 24,Зависимость датеит. ного периода (ЛП) аитихо-линергических эффектов а-эн-дорфина (/) и уэндорфина (г) от концентрации пептидов. По оси абсцисс — отрицательный логарифм концентрации иептилоо

^-эндорфинов можно связать со способностью этих пептидов изменять активность холинэстеразы: в той же работе, в которой исследовалась антихолинэстеразная активность даларгина, было показано, что в отличие от даларгина, ^- и ^-эндорфины активируют холин-эстеразу, тогда как р-эндорфин не влияет на ее активность, причем эффекты эндорфинов блокируются налоксоном.

Таким образом, среди исследованных нами опиоидных пептидов три пептида подавляли хроно- и инотропные эффекты ацетилхолина (дерморфин, с1- и ^-эндорфины), один пептид потенцировал эти эффекты (дапаргин) и два пептида оказались "инертными" ( ¡3 -эндор-фин и лей-энкефалин).

Разный характер влияния на эффекты опиоидных пептидов блока-тора опиоидных рецепторов налоксона (отсутствие эффекта в случае дерморфина, полная блокада в случае даларгина и частичная блокада в случае ^ - и у'-эндорфинов), а также существенные разлиния зависимости эффектов от концентраций пептидов, свидетельствуют о различиях механизмов, обусловливающих опиоидергическую модуляцию холинергических эффектов.

Выявленная нами модуляторная полифункциональность опиоидных пептидов в отношении холинергических эффектов указывает на глубокие связи между опиоидергической и холинергической системами, существующие на интракардиальном уровне.

Сходная модуляторная полифункциональность была показана нами и при интракардиальном симпато-парасимпатическом взаимодействии (см. глава I). Одним из уровней, на котором адренергическое звено оказывало модуляторные влияния на парасимпатическую регуляцию, были внутрисердечные ганглии. В связи с этим было высказано предположение, что и опиоидергическая модуляция может быть опосредована через влияния опиоидов на передачу возбуждения в ганглиозно-

синаптическом аппарате сердца.

Для проверки этого предположения были предприняты опыты, ) зультаты которых представлены ниже.

2.4. Влияние опиоидных пептидов на передачу возбуждения в гаиглиозносинаптическом аппарате сердца.

Исследования в 3-й серии экспериментов проводились на npei рате изолированного правого предсердия сердца лягулки с отпреп' рованными внутрисердечньши нервами, дву:<ш экстракардиальными в симпатическими стволами и продолговатым мозгом (см. раздел I.I)

Для исследований был выбран дерморфин, т.к. его модулятор! эффекты были наиболее выраженными.

г Т 2

Аппликация этого опиоида в концентрациях 10 J - ЮМ пр; дила к зависимому ст концентрации ингибировашш импульсном акт, ности во внутрисердзчном нерве, выражавшемуся в снижении чу.сла импульсов в залпе, максимальной амплитуды и дл;;тел:ностк заллг; ICjq = I0"8i.l - I0"IOM (рис. 25).

Анализ снижения импульсации во времени показал, что при дс ствии пептида в максимальной концентраций Ю-°1<1) падение shtw: ности, достоверное по отнопению к контрольной, достигается ко второй минуте после аппликации, а максимальный эффект - к чатве той минуте; при применении более низких концентраций эти показа увеличивались. Регистрация ЭКГ в течение 10 мин и более после тижения максимального эффекта не выявляла постепенного восстанс ления активности (табл. УП).

Налоксон ( 10" М ) значительно уменьшал эффекты дерморфин

С целью выявления возможного влияния дерморфина на проведе ние возбуждения в "транзитных" волокнах регистрировали ЭНГ внут

-12 -Ю -8 -6 -1д[м]

Рис 25. Изменения основных показателен импульсном активности во вкутрисердечном нерве, выраженные в процентах, при действии ДМ в концентрации 10~в— Ю-12 Л\.

Действие каждой концентрации оценивали по максимальному изменению исходных показателен. 1 — амплитуда залпа; 2—число импульсов в залпе; 3—длительность залпа.

По оси ординат—максимальный эффект (в ^ к исходной величине).

Объект исследования - яя^шка травяная.

Таблица Ш.

'Изменение импульсной активности во впутриссрдсчнсм нерве в процессе действия Д/У1 (п концентрации 10-°—Ю-13 М) -о л в контроле при аппликации раствора Рннгера I

Изменение числа пмпульсоп, % | * Изменение амп.ипуды, %

дм. м Нрсмя от момента агпишкацин, мим

1 ■2 3 •1 3 0 7 1 о I 3 1 '' 1 о 7 1 3

Ю-« (10) 11 23* 30* 6 55** 48** 55** 48** 48" 13 10" 30** 40" 51** 59** 59** 60**

Ю-5 (10) 4 12 27** 39** 50** 50** 46** 50** 5 8 17** 16** 50** 51** 50** 50**

Ю-10 (10) 7 10 13* 29** 33** 43** 41** 43** 3 9 9* 9* 18** 27** 27** 27**

ю-11 (С) 0 + 1 0 —3 — 1 0 _2 0 —2 0 —2 —3 -И 0 0 — 1

ю-12 (10) —2 _О —4 — 1 + 1 0 — 1 — I —5 0 0 — 1 0 0 0 — 1

Контроль (30) —4 3 —3 0 0 —2 0 —1 —С —4 — 1 -М 0 0 + 1 — 1

Примечание. Приведены изменении числа импульсов н максимально!! амплитуды залпа и % к исходным величинам в течение 8 мни после аппликации. Одной и двум» звездочками отмечены эффекты, достоверно отличающиеся от действия раствора Рингера и соответствующую минуту после япнЛпкацпн: одна звездочка—/;<0,01, две — /»<0,001. Величины эффектов, приведенные и таблице Оез знаков (-¡-) или (—) соответствуют снижению актниностн. В скобках указано число

■опытов в каждой ссрпн.

сердечного нерва при стимуляции 2 - 3-го симпатических ганглиев; при этом активировались постганглионарные симпатические аксоны, проходящие во внутрисердечном нерве без переключения. Дерморфин в концентрации I0~d - 10"° М не влиял на такую "транзитную" им-пульсацию.

Итак, результаты экспериментов позволяют утверждать, что опиоидный пептид дерморфин способен при периферическом действии существенно изменять парасимпатическую регуляцию сердца за счет подавления передачи возбуждения во внутрисердечных ганглиях, опосредованного через активацию опиоидных рецепторов, и независимого от этой активации подавления холинергических хронотропных эффектов развивающегося на уровне эффекторных элементов.

Это дает основание предполагать существование разных путей, по которым один и тот ;;;е опиоидный пептид может влиять на парасимпатическую регуляцию сердаа, действуя в пределах самого сердца.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ ко 2-й главе

Результаты исследований опиоидергической модуляции сердца, проведенных нами в экспериментах in vitro ; показали, что модуляторные влияния могут осуществляться как минимум на двух уров нях: на уровне миокардиальных структур и внутри ;ердечного гангли-озносинаптического аппарата.

В первом случае они могут выражаться в изменении реактивности самих эффекторных структур вследствие прямого влияния на них или же в изменении метаболизма холинергического медиатора; во втором случае - в изменении передачи возбуждения, поступающего по парасим патическим преганглионарным волокнам.

У полных (дерморфин) и частичных ( jb-эндорфин) агонистог. ^-рецепторов, но не у агонистов 5"-рецепторов, быдо выявленс собственное отрицательное инотропное действие на миокард, блокг емое налоксояом; такие же эффекты вызывали и JL- и ^-эндорфт1 пептиды, не обладающие m -vivo выраженным опиоидным влияя На ииокардиальных препаратах сердец теплокровных животных завис мость Эффекта от концентрации при действии дерморфина, jb -эндс фина и ¿L-эндорфша была сигмоидальной, а при действии j^-эндо фина - колоколообразной.

Кроме блокады налоксоном общим для всех инотропноактивнкх ; тидов были слабая выраженность и медленное развитие эффектов во времени; наряду с этим, как следует из приведенного выше анализ' отмечалось много различий, связанных с индивидуальной специфике; пептидов.

Достоверных влияний на хронотропный показатель ни один из исследованных пептидов не оказывал.

При изучении влияний опиоидных пептидов на эффекты парами*"-

тического происхождения основным оказалось ингибирование холинзр

ческих отрицательных хроно- и инотропных эффектов: такое действи

было свойственно дерморфину, Л - и ^-эндорфинам, но не jb-SH.-j

фину или лей-энкефалину; влияния дерморфина были наиболее выра-ке!

гу

ними. Ингибирование, вызываемое эндорфиначи, подавлялось,Хцермор-фином - не изменялось при действии налоксоиа. 3 связи с тем, что пептиды одинаково действовали на эффекты, вызываемыеЛЭндогенным ацетилхолином, был сделан вывод, что эти влияния осуществляются i: постсинаптическом уровне, возможно, за счет активации холинэстэ-разы или прямого влияния на реактивность г.ейсмекеркых клеток и к.-ток сократительного миокарда.

Предположение о связи между модуляторными эффзктамл пептидо? и изменениями активности холинэстеразы получило косвенное подтээр

ждзниз в результатах опытов по исследованию действия даларгина, который в отличие от предыдущих пептидов оказывал потенцирующее влияние; этот эффект коррелировал с выраженной антихолинэстераз-ной активностью даларгина (Мураневич, 1980).

В экспериментах по анализу действия дерморфина на передачу возбуждения в ганглиозносинаптичзском аппарате сердца был выявлен еще один уровень, на котором в пределах сердца могут осуществляться модуляторные влияния опиоидов: дерморфин дозозависимо подавлял передачу, причем налоксон значительно уменьшал этот эффект.

Итак, в предэлах самого сердца нами была продемонстрирована модуляторная полифункциональность ряда олиоидных и родственных им пептидов; был сделай вывод, что в обеспечении интракардиачьной опиоидергической модуляции участвуют различные механизмы.

В совокупности с другими типами модуляции, в частности, описанным нами в 1-й главе адренергическим типом, такая интракарди-альная опиоидёргическая модуляция может участвовать в обеспечении фунгциональной "настройки" органа, создавая фон для собстьеьно- ■ •■ регуляторных эффектов вегетативной системы.

ПЛАВА И).

£20, 31, 38 , 44, 45 J

ЗНАЧЕНИЕ ОШОИДЕРГИЧЕСШ/t СИСТЕМЫ В РЕГУЛЯЦИИ СЕРВДА in vivo В ПОКОЕ II ПРИ ФИЗИЧЕСКОЙ НАГРУЗКЕ

В организме in vivo эндогенная опиоидэргическая спет принимает активное участие в регуляции нардио- и гемодинамики условиях эмоционального страсса, разных видов шогов, травм, се дечнэ-сосудистых патологий: в настоящее время имеется ;,тнокестг • работ, в которых доказывается четкая взаимосвязь между различи стресссрными воздействиями на организмы и увеличением содержал: эндогенных олкоидов в плазме и спинномозговой жидкости ( см.об:

ст>.

Однако активация этой систе:ш может возникать не только nt патологиях, но и в обычных физиологических условиях. В ряде ::с( дований есть указания на то, что в состоянии относительного по-организма эндогенные ошоиды не оказывают выраженного влияния » сердце и сосуды: после введения блокаторов олиоидных рецепторот сколько-нибудь значительных изменений частоты сердечных сокращу ний и артериального давления не возникает /С38 2- С другой стот имеются данные о значительном ( в 3 - 4,5 раз ) увеличении урог циркулирующих в крови опиокдов, превде всего ^-эндорфина п msi энкефалина, во время интенсивной физической нагрузки ( кгаешег

1985 ). Выло показано, что степень увеличения содержа.;', опиоидных пептидов.зависит от интенсивности нагрузки к возраст« при тренировке. Повышение утомляемости, отмечаемое некоторыми ь торами после введения налоксона, свидетельствует о физиологичен кой значимости активации оплоидергической системы при нагрузге, однако достоверных изменений кардио- и гемодгаамичоских показа-

лей в этих условиях при острой блокаде опиоидных рецепторов обнаружено не было.

Таким образом, физическая нагрузка может рассматриваться ка! адекватный стимулятор эндогенной опиоидергической системы; следовательно, целенаправленно изменяя состояние этой системы в условиях физического напряжения можно выявить ее влияния на вегетатш ную регуляцию деятельности сердца

В связи с этим, целью нашей работы явилось продолжение анализа роли опиоидергической модуляции в определении вегетативной регуляции хронотролного показателя деятельности сердца в организме у1то в условиях покоя и при физической нагрузке разной интенсивности.

3.1. Методика экспериментов.

В 1-й серии опытов бал проведен анализ изменения вегетативного баланса регуляции хронотропного показателя деятельности сердца в покоз и при умеренной физической нагрузке при хронической блокаде или активации эндогенной опиоидной системы.

Опыты проводили на нелинейных самцах белых крыс массой 180203 г. Для хронической блокады опиоидной системы использовали антагонист опиоидных рецепторов налоксон, который вводили в/б в дозе 0,3 и I мг/кг в течение 5 дн. ( 2 р/дн. с интервалом 4ч. ); на о-й день делали последнее введение и через I ч. начинали эксперимент. Такой режим введения был выбран на основании того, что "острое" введение налоксона не влияло на антиноцицептивный эффект морфина и не вызывало увеличения числа участков специфического связывания с опиоидными пептидами в ЦНС; все эти реакции, характерные для развития налоксоновой блокады опиоидных рецепторов, наблюдалис лишь при хроническом введении налоксона или антагонистов налоксоно

лзого ряда ( Уоьиг15 1907) 2ик1п et л1., 1902

Известно, что ингибиторы знгиотенэинконпертирующего фермента, которьм относится каптоприл, способны не только уменьшать обра, в гаже ангиотензина Л, но и усиливать эффекты эндогенных брадкг; нина и энкефалинов за счет угнетения активности деградирующих ; ферментов / вдаа^а et а!., ., 1979/. По данным Шварца ( Швар! др., 1987 ) каптоприл в дозе 20-25 мг/кг усиливал и пролонгирс анальгетические эффекты лей= и метанкефалинов; налоксон блокпр эти эффекты. Снятие налоксоном энкэфалжпотенцпрующего действа каптоприла свидетельствует об участии энкефалинов в реализации анальгетического эффекта каптоприла. Б этой жз работе была эыя; лена зависимость между дозой каптоприла и направленностью его ; ствия: при введении в дозе I мг/кг каптоприл замедлял инактивап образутоцихся при ноцицеептивной стимуляции кининов и, соствэтст венно, усиливал и пролонгировал болевой эффект; при введении г. бысокой дозе (25 мг/кг) каптоприл действазал ка;: ингибитор ис таболизма эндогенных энкефалинов.

Ка основании этих данных в наших экспериментах ;.гы осущест.. ляли введение талтоприла I р/дн. в дозе 20 мг/кг ( п/к ); вгед° ние проводили в течение б дней.

Б контрольной группе вместо налоксона и каптоприла беод;;~: физиологический раствор.

После окончания введения проводили измерзния артериального давления ( АД ) и частоты сердечных сокращений ( ЧСС ) у крыс в состоянии покоя и сразу после физической нагрузки. 3 качестве ф: зической нагрузки использовали бег на трэдбале при постепенном увеличении скорости протяжги лекты от 4,5 до 30 и/мкн. в следуя последовательности: бег со скоростью 4,5 ;»г/мин. в течение I мин. 10 м/мин. - 1,5 мин., 30 м/мин. - 3,5 мин. С целью устранения веденческого" компонента реакции, который мог маскировать влили:

на собственно вегетативный компонент, крысы не проходили предварительной тренировки.

Измерения АД проводили на хвосте бескровным способом по методу Рива-Рочи в модификации Д.Н.Лапшина и В.Б.Кошелева. О ЧСС судили по пульсовой волне, отражающей длительности интервала К -R ЭКГ, регистрацию вели на скорости 100 мы/с на самописце Н-338-1П; на каждой записи регистрировали не менее 100 циклов.

При оценке полученных данных использовали метод вариационной пульсометрии, позволяющий выявить закономерность в распределении случайных процессов, какими являются колебания ЧСС, и охарактеризовать эти процессы количественно.

Для оценки вегетативного баланса рассчитывали коэффициент монотонности (вариантности) К^ по стандартной формуле (Баевскнй, 1979; цит. по: 8J, характеризующий соотношение степени активации обеих отделов вегетативной нервной системы.

Во 2-й серии мы исследовали влияние острой и хронической блокады или активации эндогенной опноидо^ической системы на хроно-тропные реакции не на умеренную, а на максимальную физическую нагрузку и на физическую выносливость при двух видах физической нагрузки: беге и плавании.

Опыты проводили такие на самцах нелинейных крыс, которым за 24 часа вживляли под легким эфирным наркозом электроды для регистрации ЭКГ в хронических условиях.

Для блокады опиоидных рецепторов снова использовали налоксон, а для активации - синтетический аналог лей=энкефалина даларгин, являющийся агонистом 0- и ^-рецепторов, и агонист -рецепторов дерморфин; описание основных свойств этих опиоидных пептидов приводится в разделе 2.1 главы 2.

Введение проводили по следующей схеме: при остром введении

!ЗЬ.

?а I час до опыта; при хроническом - б течение 4 дн. 2 р/дк. с тервалом 4 час.; на 5-й день делали последнее введение и чере^ I час начинали эксперимент. Налоксон вводили в дозе I мг/кг в/ а даларгин - дозе 10 мкг/кг, в/б.

Последовательность экспериментов, в которых в качестве фи зической нагрузки использовали бег на тредбане, была следующей крысы через 20 мин. адаптации начинали бег при постепенном увс чении скорости протяжки ленты с 5 до 22 м/мин.; в первом пери с-нагрузки животные бежали со скоростью 5 м/мин., во втором - 10 мин., в 3-м - 22 м/мин.; длительность нагрузки в соответствуй' периоды составляла 1,5; 1,5 и 3 мин. Б тех случаях, когда физической нагрузкой служило плавание, последовательность была следующей: крысам прикрепляли на хвост груз, составляющий 105» от сы животного, после чего животных погружали в квмеру размгро:! 1 48 х 42 см, заполненную водой при температуре 37°С, и определяв время от начала плавания до момента отказа от плавания.

Измеряли"время утомления" ( Тут ), т.е. время от момента \ чала нагрузки до отказа от нагрузки. Кроме того, рассчитывали 1 эффициснт выносливости ( К ) как ' отношение числа "сильных" с бел, (выдерживающих физическую нагрузку свыше 30 мин ), к числу "слабых" (выдерживающих нагрузку менее 15 мин. ) в данной выб;г Хронотропкыз реакции оценивали в %% к исходному значению V Проводили также оценку изменения вегетативного баланса по коэф; циенту вариативности (монотонности; К^ ). О степени выраженност парасимпатического компонента регуляции ЧСС косвенно судили по изменению среднеквадрагического отклонения <о -показателя, отрз ющего частоту встречаемости аритмий. Зсе расчеты проводили пс с дартньм формулам ( Базвсний, 1979 У

При статистической обработке материала пользовались непараметрическими критериями и экспрессным методом оценки вэрыгрсзал.

данных (Ашмарин, 1975; Гублер и др., 1973)>

В каждой группе опытов 1-й и 2-й серий проводили не менее 20 экспериментов. Всего было проведено более 200 опытов.

3.2. Влияние эндогенной опиоидергической системы на вегетативный баланс регуляции частоты сердечных сокращений: исследования в покое и при физической нагрузке.

В 1-й серии анализ участия эндогенной опиоидергической системы в вегетативной регуляции сердца проводили при остром и хроническом изменении активности этой системы в условиях покоя и .при умеренной физической нагрузке, не вызывающей развития утомления.

Е таблице УШ представлены значения ЧСС, АД и К^,, регкстрируе мые у крыс контрольной группы, при хроническом введении калоксо;;а ( I мг/кг, в/б ) или каптоприла ( 20 мг/кг, п/к ) в состоянии покоя и при физической нагрузке. Из приведенных данных следует, чтс в состоянии покоя ни хроническая блокада, ни хроническая активация эндогенной опиоидергической системы не вызывают достоверных изменений ЧСС, АД и показателя вегетативного баланса.

Иную картину дает анализ изменений тех же показателей при умеренной физической нагрузке ( табл.ГШ и IX ). В контроле увеличение ЧСС составило 35,3%, а увеличение АД было недостоверным ( табл. УШ При хронической блокаде опиоидных рецепторов прирост хронотропкого показателя и увеличение показателя вегетативного баланса оказались достоверно меньшими, а при хронической активации эндогенной опиоидной системы - достоверно большими, чем в контроле. Изменения АД во всех случаях были недостоверными, однако в последней серии при действии каптоприла увеличение АД при нагрузке было более выраженным, чем в контроле.

Таким образом, при физической нагрузке выявляется участие эндогенной опиоидергической системы в регуляции прежде всего хро-

Таблица®. Гсмодинамические показатели » коэффициент монотошн у крыс при разных условиях активации опиоидергнческой системы в пе м при физической нагрузке

Показатель

Контроль

нагрузка

Хроническое оведеппе

н ялоксона

покоП

нагрузка

каптопрнла

покоП

нагруз)

ЧСС, уд/мин АД, мм рт. ст. Км

47б±7,9 122±5,7 1,б±0,5

580±б,2**

135il0,l

4,5±0,9**

465±9,1 120i9,8 1,4±0,3

531 ±7,3" 131=Ь6,4 1,9±0,2

472±6,4 125±9,7 1,3±0,4

6I3±G, 146±7, 8,7+0,

• Примечание. Здесь и в таблице . отмечены данные, достоверно отличающий" соответствующих данных б покое; одно!! эвездочкоП — Р<0,05, дсумя —Я<0,0 I, тро-Ж0.001.

1 ^ Изменен"е„основных! гемодт.амнческих показателен и показателя вегетативного баланса при физической нагрузке в рази-условиях активации опноидергической системы

Хроническое введение

Показ атель Контроль налоксона каптопрнлп

ЧСС, уд/мин АД, мм рт. ст. Ю4±3,1 13±3,1 2,9±0,3 66+2,7*** И±1,9 0,5+0,07** 141+3,9** 21±2,3 7,4+0,8*

Примечание. Приведено

нагрузке и в покое.

увеличение соответствующих значений при физич<к

Объект исследования - крысы ( erf сг*)

Рис.26. Нормированные вариационные пульсограм.мы, построенные по данным контрольной серии (/) и серии опытов с хронической блокадой (Я) н

хронической активацией (1/1) эндогенной опиоидергической системы: 1—пульсогралшз при физической нагрузке, 2 — сульсагрэлгма в покое. По оси абсцисс — длительность интервала Гч—К (в мс), по осп ординат — частота встречаемости интервалов данной длительности (в С|Э к общему числу интервалов; АМо)

/ > \

Объект псслецовашш - крысы (. о, о )

нотропного показателя деятельности сердца, хотя следует отметит что при хронической активации этой системы становятся более чет ними и изменения АД.

На рис. 2-3 приведены нормированные вариационные пульсограч: построенные для каждого из рассмотренных вариантов опыта.

Отчетливо видны различия в распределении R - R - интервале по их длительности в покое и при нагрузке в каждой из трех груг. опытов.

Если в контроле при физической нагрузке выражен сдвиг кри? влево ( в сторону более коротких интервалов ) при одновременно;.' увеличении амплитуды моды (т.е. числа интервалов, имеюцих чаце всего встречаемую длительность, в 7S к общему числу интервачов; то в опытах с хроническим введением налоксона эти показатели существенно уменьшены ( рис. 25, А,Б ).

На фоне хронически активированной опиоидергкческол системы указанные параметры выражены более ярко, чэм в контроле (рис.23,

Заметно также и различие в значениях вариационного размаха кардиоинтервалов, что находит отражение в величине основания вг-риационных пульсограмм при физической нагрузке в разных группах опытов: при хроническом введении налоксона величина эта гораздо больше, чем в других группах, и близка к значениям в состояния покоя.

Следует отметить, что по некоторым данным налоксон блокиру опиоидные рецепторы, действуя в более низких дозах ( 0,3 мг/кг : данным Glllaan, , 1987), дцнако в условиях наших эксперименте! введение таких доз налоксона не вызывало изменений показателя вегетативного баланса и ЧСС при физической нагрузке.

Полученные результаты свидетельствуют о способности эндогег ных опиоидов влиять на вегетативную регуляцию при адаптивном прг. способлении гемодинамики к физической нагрузке в условиях,далек;'

от экстремальных. Эти влияния выражаются в поддержании более высокого уровня адаптации ЧСС и показателя вегетативного баланса и следовательно, могут рассматриваться как положительные в отношении поддержания сердечно-сосудистого гомеостаза. Как именно при этом складываются взаимоотношения между симпатическим и парасимпатическим компонентами регуляции ЧСС, судить достаточно сложно. Известно, что на уровне ЦИС опиоидные пептиды могут активировать и тот, и другой отделы, тогда как при действии на нижележащих уровнях регуляции (на уровне вегетативных ганглиев, в частности, как это следует из наших собственных данных, и на уроЬне внутри-сердечного ганглиозносинг.птического аппарата, а также на уровне периферических пресинаптических окончаний) они оказывают в большинстве случаев тормозное влияние на передачу возбуждения Оз, 25 При таком сочетанием воздействии конечный результат будет зависеть от того, как сложатся взаимоотношения между модуляторньь влияниями на оба отдела вегетативной норвной системы на всех этих

...........-уровнях..Возможно, что при тотальной гиперактивации симпатической

системы, наблюдаемой при стрессе, преобладающим окажется тормозная опиоидергическая модуляция симпатического отдела, тогда как г условиях умеренной физической нагрузки направленность суммарного модуляторного вектора будет зависеть от соотношений в модуляторных влияния эндогенных опиоидов на оба отдела вегетативной нервной системы.

Выяснение этих отношений было продолжено нами в следующей серии экспериментов, в которых использовались в качестве эндогенного стимулятора опиоидергической системы большие физические нагрузки.

3.3. Исследование роди эндогенной опиоидергической систе' в регуляции хронотропии сердца и физической выносли вости при максимальных нагрузках.

Во 2ой серии активацию эндогенной опиоидергической систе; вызывали в условиях максимальной физической нагрузки, приводя к развитию утомления; как уже говорилось выше, в этих условия" содержание эндогенных опиоидов в плазме возрастает в 3,5 - 4 ] Блокада или дополнительная активация эндогенной опиоидной сие; за счет действия экзогенных факторов давала возможность оцени-! ее участие в реакциях сердца на физическую нагрузку в процесс? нагрузки и в момент развития утомления.

Острое введение антагониста опиоидных рецепторов налоксон агониста р -опиоидных рецепторов дерморфина и смешанного агонг 'О - и ^-рецепторов даларгина не оказывало достоверных влиянг ни на ЧСС в покое, ни на изменения ЧСС при нагрузке; время ра? тия утомления ( Т^ ) и значения коэффициента выносливости ( Г также оставались без изменений.

Однако при хроническом введении каотлна былр ¡¡ной . Так, хроническое введение налоксона, даларгина и дерморфина пр водило к достоверному уменьшению Т.^ и К0, т.е. к увеличению у ляемости. Сравнительный анализ влияний хронического введения р нистов и антагониста опиоидных рецепторов показал, что уменьше Т^ значительно сильнее выражено при хронической блокаде опиои системы (соответственно - 55,3% при действии налоксона, - 21,4 при действии даларгина и - 35,2$ при действии дерморфина). Был: выявлены также достоверные изменения прироста ЧСС при максимат физической нагрузке: на фоне даларгина и дерморфина этот лриро( был больше, а на фоне налоксона - меньше, чем в контроле (тайл.

В опытах с введением даларгина и дерморфина было показано,

одновременно с регистрируемым при физической нагрузке приростом хронотропного показателя при хроническом введении агонистов воз растает и прирост К^; степень аритмогенности, оцениваемая по значениям среднеквадратичного отклонения ( б" ) при этом достоверно снижается (табл. XI). При введении налоксона К^ увеличивался в меньшей степени, чем в контроле, а степень аритмогеннос ти возрастала.

Оценка вегетативной регуляции ЧСС по таким косвенным показателям, как Ку и £Г , дает основание предполагать, что при хронической активации опиоидной системы происходит относительно! возрастание симпатического и подавление парасимпатического компонентов регуляции в период физической нагрузки по сравнению с соответствующими данными в контроле .•

Сопоставление данных, полученных в этой серии эксперименто] с данными 1-ой серии, позволило выявить ряд аналогий. Так, хроническое введение агонистов опиоидных рецепторов или активация эндогенной опиоидной системы вследствие введения ингибитора эн-кефалиназ каптоприла в обоих случаях приводила к увеличению прироста ЧСС при фиксированном уровне физической нагрузки и к сдвигу вегетативного баланса регуляции ЧСС в сторону более высокого уровня активации симпатической системы, что назодило отражение в соответствующих изменениях К.^. В случае же хронического введения антагониста опиоидных рецепторов как при умеренной, та! и при максимальной физической нагрузке прирост ЧСС был достовер* меньшим, а сдвиг вегетативного баланса происходил а направлении более выраженной активации парасимпатической системы (табл.ХП.

Полученные результаты свидетельствуют о способности хронически активированной опиоидной системы поддерживать бодее высокий уровень производительности сердца в момент максимальной фи-

Эо

ТАБЛИЦА X.

енения прироста ЧСС ( Д- ЧСС), времени утомления ( Т^ ) и ко: иента выносливости ( К0 ) при хроническом введении налоксона, аргина и дерморфина крысам через I ч. и 24 ч. после окончанш ия в условиях максимальной нагрузки ( все величины выражены т оответствующим контрольным значениям ).

димые ¡динения Изменения ЧСС , Изменения Т^ Изменения Г

Через 1Ч|Через 24 ч ! Через I ч Через 24 ч Через I ч{ Ч ! 2

юксон -10,7 ±0,75 -2,3 (хх) +0,11 -55,3 (х) ±4,5 +31,5 ±2,9(х) (х) -94 +1

[аргин +14,1 ¿1,7 <х) +16,2 ±0,83 (х) -21,4 ±1,31 (х) -19 ±1,75 (х) -59 -4

морфин (х) +17,8 ±1,01 (хх) ±2,7 (х) -35,2 ¿4,9 (х) +98,6 ±7,3 (х) -33 +2,

) - Р 0,05; (хх) - Р ^ 0,05.

эимечание: значения Р рассчитаны по отношению к соответствующие энтрольным значениям; в случае Д ЧСС и Т^ применяли критерий случае К - критерий 0.

ТАБЛИЦА. XI.

Изменения коэффициента монотонности ( Ку ) и среднеквадратичного отклонения (СГ ) при максимальной физической нагрузке в условиях хронического введения налоксона, даларгина и дерморфина (все величины выражены в %% к соответствующим контрольным значениям)

Вводимые соединения Изменения К^ (в %7о) Изменения (в %%)

Налоксон (хх) -82,7 - 6,3 +17,1 ± (х) 3,4

Даларгин (хх) +108,1 ± 11,3 -15,8 ± (х) 1,9

Дерморфин ! (хх) +118 ± 9,7 -19,3 (х) - 2,8

(х) (хх)

- Р 0,05; ' - Р О,О! .

зической нагрузки по сравнению с системой, находящейся в неактг вированном или заблокированном состоянии. Возможно, что именно этот фактор и обусловливает значительно менее выраженный эффект утомления, регистрируемый при хроническом введении агониста опг идных рецепторов, по сравнению с таким же введением антагонист;

Возможно, что относительно длительное повышение уровня опи идных пептидов в организме приводит к падению чувствительности рецепторного алпарата опиоидной системы (явление "йо-.га гс£и1а-). В результате модуляторные влияния эндогенных опиоидов вегетативную регуляцию сердца оказываются подавленными, что и о словливает достижение более высокого уровня ЧСС при физической нагрузке и увеличение утомляемости. При длительной блокаде опис них рецепторов ситуация может быть прямо противоположной, что и ходит отражение во влияниях на прирост ЧСС при нагрузке и на сл вегетативного баланса регуляции ЧСС.

Однако наряду с этим очевидно, что любой относительно длит ный сдвиг эндогенного статуса опиоидной системы приводит к сни:; нию выносливости при максимальной физической нагрузке.

Вероятно, такое однонаправленное, но в разной степени выр--женное влияние прямопротивоположных хронических изменений акти^ ности эндогенной опиоидной системы на утомляемость объясняется множественностью факторов, участвующих в развитии этого процесс Сейчас известно немало ситуаций, в которых длительное действие эндогенных опиоидов может рассматриваться как благоприятн Таковы анальгетические эффекты, некоторые формы иммуностимуляци: ( активация клеток-киллеров ), противоязвенное действие, антипс хотические эффекты и др. Однако наряду с этим могут возникать и нежелательные побочные эффекты, одним из которых, по налим дани■ может быть увеличение утомляемости при физической нагрузке.

Специальный интерес представляет анализ влияний хроническог введения агонистов и антагонистов опиоидных рецепторов в последействии.

Представления, разрабатываемые в школе акад. И.П.Ашмарина о каскадном типе действия нейропептидов, дают основание для предположения о существовании отставленных во времени эффектах,' ини цированных хроническим изменением активности эндогенной опиоидн системы.

Для проверки этого предположения была проведена серия олыто по оценке изменений хронотропного показателя деятельности сердц и утомляемости при максимальной физической нагрузке ( бег или плавание ) через 24 часа после окончания введения агонистов или антагонистов опиоидных рецепторов.

Через 24 часа после одноразового введения налоксона, далар-гина или дерморфина достоверных изменений этих показателей по сравнению с контролем получено не было, тогда как через тот же период времени после окончания хронического введения были выявлены в некоторых случаях существенные изменения хронотропии и физической выносливости.

Как следует из табл. X, направленность изменения прироста 41 осталась той же, что и через I час после окончания введения: в группе,в которой вводили налоксон, прирост ЧСС был выражен слаб' а в группе, в которой вводили дерморфин, - сильнее, чем в контр! однако в обоих случаях изменения эти были меньше, чем через I ч: после введения соответствующих соединений.

В то же время изменение времени утомления и коэффициента выносливости ( ) были иными: через 24 часа после введения нало: сона и дерморфина, но не даларгина, отмечалось значительное увеличение обоих показателей, особенно ярко выраженное в последействии после введения дерморфина. Даларгин не вызвал такого

последействия: все параметры изменялись в этом случае так же, i и через I час после введения (табл. X ).

Практически полное совпадение данных, полученных через I v и 24 часа после введения, возможно, отражает более длительное развитие во времени первой фазы эффекта на хроническое введение этого агониста; возможно, что в более поздние сроки (через 48 -72 часа) также проявилась бы вторая фаза - улучшение физическо:1 выносливости при нормализации хронотропного показателя, однако такие эксперименты проведены не были.

Следует отметить, что при обоих видах физической нагрузки (бег и плавание) были получены сходные результаты; принципиальн различий между этими нагрузками мы не обнаружили.

Таким образом, мы показали, что воздействия хронических иг менений эндогенной опиоидной системы на организм проявляются в течение длительного времени, причем в ряде случаев направленное влияний может со временем изменяться на противоположную: сразу после окончания введения налоксона и дерморфина утомляемость ™ вышается, а через 24 часа после введения - уменьшается, причем последний э'ффект развивается на фоне нормализации регистрируемо при максимальной физической нагрузке прироста ЧСС. Этот факт ei" раз указывает на существование определенной зависимости между изменениями хронотропного показателя при физической нагрузке и зической выносливостью организма.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ к 3-й главе

Модуляторная полифункциональность опиоидных пептидов, прод монстрированная нами в экспериментах ¿п vitro » нашла свое подтверждение и в опытах ire vivo , в которых в качестве аде ватного стимулятора эндогенной опиоидной системы использовалась физическая нагрузка разной интенсивности.

При всех степенях физической нагрузки острое одноразовое введение агонистов и антагониста опиоидных рецепторов не окаэывг ло достоверных влияний на хронотрогото сердца и на физическую выносливость. В то же время хроническое введение этих соединений показало, что хроническая блокада опиоидной системы налоксоном приводит к уменьшению, а хроническая активация - к увеличению прироста ЧСС как при умеренной, так и при максимальной физическс нагрузке, вызывающей развитие утомления. Изменения вегетативногс баланса в этих условиях выражались в сдвиге в сторону более вырг женной активации соответственно парасимпатической и симпгтическс системы. Несмотря на разнонаправленные сдвиги показателей вегета тивной регуляции хронотропии сердца изменения утомляемости были в обоих случаях однонаправленными и выражались в ее увеличении, однако выраженность эффекта была значительно большей при хрониче кой блокаде опиоидной системы.

Анализ развития тех же влияний в отдаленном во времени поел действии выявил тенденцию к нормализации хронотропной реакции на физическую нагрузку как после введения антагониста, так и после ввеления агониста опиоидных рецепторов; одновременно с этим в об их случаях наблюдалось значительное увеличение физической выносл вости, выражавшееся в увеличении времени развития утомления и коэффициента выносливости; в данном случае эффект был более выра женным в последействии после окончания введения агониста.

Исходя из представлений о процессах " up " - и "dorai " _ regulation , можно сделать вывод, что подавление модуляторных влияний эндогенных опиоидов, развивающееся при длительном повыше их уровня в организме, в меньшей степени подавляет физическую выносливость и оказывает более выраженное благотворное влияние в последействии на этот показатель, чем потенциация этих влияний п

хронической блокаде опиоидных рецепторов.

Наблюдаемые нами отставленные во времени влияния на фиэи" кую выносливость вероятнее всего обусловлены запуском каскада реакций, приводящих к перестройке реактивности организма на фп ческую нагрузку. С нашей точки зрения, одной из составляющих р этом каскаде являются модуляторные влияния эндогенной опиоидно системы на вегетативный баланс регуляции хронотропного показат деятельности сердца.

ОБЩЕЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ПЕРСПЕКТИВА ИССЛЕДОВАНИЯ.

Исследование модуляторных влияний на деятельность сердца > экспериментах in vitro и при разных фуцкциональных состоян. организма in vivo позволяет сделать вывод, что эти влия:

могут существенно изменять направленность вегетативной регуляц

Предпринятый нами систематический анализ участия в napacir патической регуляции сердца пептидергического ( опиоидного ) и медиаторного ( адренергического ) модуляторных компонентов, вх дящих в состав общей сложной картины модуляции сердца, показал невозможность искусственного расчленения единого модуляторного процесса: оба компонента характеризовались полифункциональност; влияний, имели одинаковые точки приложения и общую конечную це: обеспечение адекватного изменения кардио- и гемодинамики.

Как показали наши исследования, в пределах самого сердца ; тижение этой цели возможно вследствие изменения процесса перед-' возбуждения в интракардиальном парасимпатическом ганглиозном ат парате и/или в результате прямых влияний на эффекторные структ;. миокарда; в совокупности эти воздействия могут привести к энач: тельным изменениям реакции сердца на парасимпатические регулятг ные влияния.

При анализе участия эндогенной опиоидергической системы в регуляции сердца в целом организме стала вполне очевидной тесная взаимосвязь между активностью этой системы и общим вегетат! ным балансом регуляции сердца: изменение активности опиоидерги-ческого компонента неизбежно приводило к сдвигу вегетативного С ланса между парасимпатическим и симпатическим отделами регуляцу

Очевидно, что в организме ta vivo в модуляции деятель ности сердца помимо исследованных нами компонентов участвуют множество других факторов, адекватная оценка роли которых необх ма для создания общего представления о функциональной значимост модуляторных влияний.

Подводя итоги всей проделанной работы, целесообразно намет перспективы дальнейшего изучения роли, модуляторных влияний в об печении вегетативной регуляции сердца.

В организме m vivo модуляции подвергается не только п. расимпатическая, но и симпатическая регуляция сердца, и в такой модуляции участвует множество регуляторных: пептидоп. обнаружива* мых в настоящее время в пределах самого сердца; очевидно, что д; создания более полного представления о механизмах симпато-парас! патического взаимодействия необходим систематический анализ модц ляторных влияний разных регуляторных пептидов на оба отдела веге тативной регуляции сердца.

Весьма важным является также выяснение влияний, оказываемы} на пептидергическую модуляцию со стороны других систем. Так, известно, что в самом организме существует сложно организованная антиопиоидная система. В последнее время было показано существование эндогенного блокатора опиоидных рецепторов - параопиоидног тетрапептида, выделенного из нервной системы моллюсков ( Ff®F а) Изучение этого пептида с точки зрения его участия в функционирон нии опиоидной системы может открыть новые перспективы как для

еоретических исследований роли опиоидной системы, так и для рименения опиоидон в клинике.

Кроме того, необходимо расширение диапазона исследуемых с ояний организма? в связи с этим предполагается изучение роли пиоидных и некоторых других регуляторных пептидов в регуляциг ардио- и гемодинамики при разных видах шоков, в частности, п] ипоксическом и геморрагическом шоке: несмотря на обширное чис кспериментальных данных эта проблема до настоящего времени ос тся нерешенной.

Ш30ДЫ

1. Парасимпатическая регуляция хронотропного показателя деят ости сердца характеризуется широкой вариабельностью. Существ.: оль в организации конечного парасимпатического влияния играют одуляторные процессы, возникающие на периферии, в пределах сг ердца. К таким процессам относятся эффекты, оказываемые опиог ыми ПеПТИДаш, присутствие кот^рых г.^.^-.з,^ ~ г/н огиот охю.глч-ими методами в интракардиальных нервных элементах и в миокард

2. Исследование действия агонистов различных типов опиоидных эцепторов на хронотропные эффекты экзогенного и эндогенного г илхолина, проведенное на изолированных сердцах холоднокровных згаюкровных животных, выявило возможность осуществления разно травленных модуляторных влиянии разных типов опиоидных пептг ) Параопиоидный пептид дерморфин, являющийся селективным агон зм ^рецепторов, зависимо от концентрации подавлял холинерпг 1е хроно- и инотропные эффекты, причем эффективность дерморфн1 тчительно превышала эффективность селективного блокатора пер зрических М-холинопецепторов метацина.

) Дериваты проопиомеланокортина X - и у'-эндорфины (но не [ адорфин) такке ингибировали холинергические эффекты, однако о

фективность их была значительно меньше, чем у дерморфина. Мнгибиторные модуляторные влияния дерморфина и / - и ^-ЭВДО финов на холинергические эффекты осуществлялись с участием разн механизмов, т.к. антагонист опиоидных рецепторов налоксон не вл ял на эффекты дерморфина и значительно уменьшал эффекты Л - и "ft -эндорфинов.

в) Даларгин, являющийся преимущественным агонистом 6^-рецепторо потенцировал отрицательные хроногропные эффекты ацетилхолина; налоксон блокировал потенцирующее влияние даларгина.

3. Местом приложения периферического модуляторного действия опиоидов могут быть различные интракардиальные структуры. Нашим исследованиями выявлены два возможных уровня интракардиальных м дуляторных влияний опиоидов: внутрисердечный ганглиозносиналтич кий аппарат и собственно пейсмекерные структуры сердца. Показан возможность подавления передачи возбуждения в пределах внутрисе; дечных ганглиев (на примере дерморфина) и модуляция хронотропньг эффектов экзогенного ацетилхолина, осуществляющаяся непосредств' но на уровне пейсмекерных образований (на примере всех исследованных опиоидов).

4. Адекватная оценка участия опиоидов в парасимпатической xpoi тропной регуляции сердца невозможна без анализа прямых эффектов этих пептидов на миокардиальные структуры. В опытах in vitro hi один из исследованных опиоидов не влиял существенно на хронотр* ный показатель, однако некоторые опиоидные пептиды оказались ин< тропноактивными.

а) Полные или частичные агонисты |м -рецепторов (дерморфин и эндорфин) вызывали отрицательные инотропные эффекты; в некоторьп случаях ( р-эндорфин) вслед за подавлением развивалась усиленн: сократительная активность.

Подавление сократительной активности отмечалось и при де!: ствии и ^"-эндорфинов.

б) Отрицательный инотропньгй эффект опиоидов зависел от концент ции, однако характер зависимости был различным: при действии д морфина, -эндорфина и /-эндорфина зависимость была сигмоидп а при действии ^"-эндорфина - колоколообразной.

в) Эффекты инотропноактивных опиоидов блокировались налоксоном характеризовались, как правило, слабой выраженностью и медлешг развитием во времени. Таким образом, опиоидергическая модуляцн холинергических эффектов может сочетаться с прямым инотропным действием этих пептидов.

5. В экспериментах, выполненных ш у-^о > был впервые в-явлен ряд закономерностей, характеризующих модуляторную полифу циональносгь эндогенной опиоидергической системы: хроническая < када опиоидной системы приводила к более выраженной активации парасимпатического отдела регуляции частоты сердечных сокращен: и, соответственно, к уменьшению прироста хронотропного показат при всех степенях физической нагрузки. При хронической активац, закономерность была противоположной: активация симпатического < дела при физической нагрузке была больше, чем в контроле; в со! ветствии с этим и прирост хронотропного показателя был увеличен

6. Модуляторные воздействия эндогенной опиоидной системы на хронотропный показатель деятельности сердца проявлялись в наших экспериментах только при физической нагрузке в условиях хроничг кого изменения активности этой системы. В состоянии покоя орган ма и при одноразовых введениях соединений, используемых для изм нения состояния эндогенной опиоидной системы, влияний на хронот пию и на вегетативный баланс показано не было.

7. Анализ влияния хронической блокады и хронической активацг

эндогенной опиоидной системы на физическую выносливость показа снижение этого показателя, причем при хронической блокаде зффе был более выраженным. Однако в последействии (через 24 часа пс окончания хронического введения агонистов или антагонистов энд генных опиоидов) наблюдалось повышение физической выносливости в этом случае эффект был бг.льпг после хронической активации оп идной системы.

8. Наряду с опиоидергической осуществляется и адренергическ периферическая модуляция холинергических эффектов. Полученная нами система экспериментальных данных показывает, что условиям для проявления потенцирующей формы этой модуляции является низ степень активации как симпатического, так и парасимпатического отделов. При сверхпороговой симпатической стимуляции потенциру форма сменяется ингибированием парасимпатических эффектов.

Как и в случае периферической опиоидергической модуляции, явлены два уровня в пределах сердца, на которых возникают адре> нергические модуляторные влияния: ганглиозносинаптический и пе? смекерный.

9. Таким образом, в пределах сердцаУсовместные модуляторные влияния на пат&импатичесную регуляцию со стороны пептидергичес; и адренергической систем. Такого рода периферическая сочетанна модуляция приобретает особое значение при регуляции деятельное сердца в целом организме в условиях физической нагрузки.

шовные результаты диссертации опубликованы в следующих с:

тьнов М.Г., Соколова H.A., Копылова Г.Н. Взаимоотношение трасимпатической и симпатической иннервацией при регуля-управлении активности сердца и других внутренних органов, физиол. наук - 1977.-Т.8, № т._ с.19 - 43. злова H.A., Удельнов М.Г. Электрофиэиологический анализ i катехоламинов на разнонаправленные парасимпатические хроме эффекты // Биол. науки - 1978,- ',"» 9. - С. 75-81. шова НД., Удельнов М.Г. Изменение активности пейсмекера в условиях взаимодействия парасимпатических и симпатичес-уляторных влияний // 5изиол.журн. СССР. - 1978. - Т.54, С.984-989.

лова H.A., Каверин М.А., Удельнов М.Г. Биоэлектрический регуляторного взаимодействия симпатических и парасимпати-нервных влияний на ритм сердца // Бюлл.эксперим.биол., -!Г° 2. С.195-197.

лова H.A., Удельнов М.Г. Анализ изменения активности лейс-х структур в условиях взаимодействия парасимпатических и ческих регуляторных влияний // В сб.: Нейромедиаторы в ри патологии. - Г979. - Казань. - С.325-328. ьнов М.Г., Копылова Г.Н., Самонина Г .Е., Соколова H.A. нальное соподчинение нервных механизмов, участвующих в ре-сердца // Тез. докл. ХШ съезда Всес.физиол. об=ва, Алма-1979. - T.I. - С.285-285.

лова H.A., Каверин М.А. Электрофизиологический анализ вза-гвия симпатических и парасимпатических нервных влияний на пейсмекера // В сб.: Проблемы сравнительн. электрокардиог-- Сыктывкар. - 1979. - С.54.

в. Аронова Г.К., Копылова Г.Н., Соколова H.A. Влияние i минов на импульсацию во внутрисердечных нервах и хронс эффект на сердце при раздражении парасимпатического не аппарата // Б сб.: Мат=лы УШ Всес.конф. по электрофиз* Ереван. - 1980. - С.316.

9. Певцова Е.И., Самонина Г.Е., Соколова H.A., Удельнс Взаимодействие парасимпатических и симпатических нейрс ных влияний при регуляции ритма сердечных сокращений т Зизиол. журн. СССР.-1980. - Т.65.- № 7. - C.I093-II00.

10. Копылова Г.Н., Самонина Г.Е., Соколова H.A., Удель Принцип функционального соподчинения центральных и пер ких нервных аппаратов при парасимпатической регуляции Биол.науки. - 1981. - 3 4. - С. 5-9.

11. Соколова H.A., Копылова Г.Н., Павленко Е.П., Кавер Взаимодействие симпатической и парасимпатической экстр ной иннервации на уровне интрамурального ганглиозносин кого аппарата сердца // В сб..: Тез. докл. Закавказск конф. педвузов по соврем, проблемам физиол.человека и i Ереван. - 1981. - С.132.

12. Соколова H.A., Копылова Г.Н. Изменение парасимпат) регуляторных влияний на пейсмекер сердец низших позвон< вотных (костистые рыбы и амфибии) на фоне действия экз( и эндогенных катехоламинов // В сб.: УШ совещание по : физиологии. Л. - 1982, - С.279.

13. Копылова Г.Н., Соколова H.A., Удельнов М.Г. Роль ш ных ганглиозных структур в механизмах адаптации сёрдца В сб.: Общие проблемы экологической физиологии. - Сыкп 1982. - С.33.

Соколова H.A., Копылова Г.Н., Павленко Е.А., Каверин И.А., :лънов М.Г. Изменение активности внутрисердечного ганглиозно-:алтического аппарата при взаимодействии симпатических и пара-патических регуляторных влияний на ритм пейсмекера // иол. журн. - 1982. - Т.58. - № II. - С.1537-1543. Соколова H.A., Копылова Г.Н., Каверин М.А., Крупнова Е.П. лиз биоэлектрической активности пейсмекера при регуляторном имодействии парасимпатических и симпатических влияний на ритм цца лягушки // Виол.науки. - 1983. - Деп. в ВИНИТИ 11,03.83. 320-83Д.

Самонина Г.Е., Соколова H.A., Копылова Г.Н. Функциональная анизация вегетативной нервной системы // Биол. науки. - 1983. 3. - С. 5-20.

Самонина Г.Е., Удельной М.Г., Копылова Г.Н., Соколова H.A. еграцня центральных и периферических механизмов регуляции готы сердечных сокращений // В сб.: Центральная регуляция воображения. - Ростов/Дон. - 1984. - С.155-155. Соколова H.A., Копылова Г Л!., Самонина Г.Е., Каверин М.А. «тропные эффекты на сердце при взаимодействии парасимпати-тих и симпатических нервных влияний // Зизиол.журн.СССР. -3. Т.71. - * 4. - С.515-521.

Самонина P.S., Соколова H.A., Павленко Е.А., Наша Л.П. зние катехоламинов на ритм сердечных сокращений трески // 1.науки. - 1985. - № 10. - С.45-50.

Соколова H.A., Самонина Г.Е., Павленко Е.А., Удельнов М.Г. югуморальная регуляция частоты сердечных сокращений керчака ¡cocephalus scorpius П *УРН. эвол. биохим. и физиол. -i. - Т.21. - iT» 2. - С. 144-149.

■21. Соколова H.A. Медиаторно-рецепторные модуляторные систем вегетативных ганглиев // Иэд-во ВИНИТИ. - 1985. - С.45.

22. Копылова Г.Н., Соколова H.A. Особенности парасимпатическ хронотропных реакций в сердцах рыб и амфибий // В сб..: У1 Б конф. по физиол. вегет. нервной системы. - Дилижан, - 1985. -С .23.

23. Соколова H.A. Медиаторные и модуляторные системы вегетат; ных ганглиев Ц Виол.науки. - 1987. - № 10. С.13-28.

24. Удельнов ?<1.Г., Самонина Г.Е., Копылова Г.Н., Соколова Н.А Сухова Г.С. Актуальные вопросы функционального взаимодействи] симпатических и парасимпатических механизмов регуляции сердца В сб.: Рефераты лекций, тезисов докл. и сообщений на симпозиу! Х1У съезда Всес. физиол. об-ва. - 1983. - Л. - Наука. - Т.Т. -С.259-250.

25. Красильникова В.Б., Соколова H.A., Дейгин В.И., Ярова Е.П

. Ашмарин И.П. Кнотропное действие опиоидного пептида дерморфт - на сердце лягушки // Биол.науки. - 1988 - Деп. в БИК'ИТС- 23.0' - Я 495S-B88.

23. Соколова H.A. Регуляторные пептиды и вегетативная регуля! сердца // Патологич.физиол. и эксперимент, терапия. - 1988. -№ 5. - С.74-79.

27.Соколова H.A., Дейгин В.И., Ярова E.H., Ашмарин И.П. Опиоид дерморфин подавляет холинергические хронотропные эффекты на се це лягушки // ДАН СССР. - 1988. - Т.298. - !," I. С.254-255. 28.Соколова H.A., Дейгин В.П., Ярова Е.П., Ашмарин И.П. Моду; торные влияния опиоидного пептида дерморфина на интракардиальь холинергическую передачу // В сб.: Симпозиум "Физиология пег дов". - 1988. - J!.- 182-183.

29. Соколова H.A., Дейгин В.И., Ярова Е.П. Модуляция пердач! возбуждения во внутрисердечном ганглиозносинаптическом аппарг

опиоидным пептидом дерморфином // Бюлл. эксперим.биол. и мед. 1988. - Т.105. - 1? 4. - С.438-439.

30. Соколова H.A., Кулигина Л.Д., Ашмарин И.П. Даларгин поте! цирует хронотропные эффекты ацетилхолина на сердце лягушки // Вестн. МГУ. Сер.16. Биология. - 1989. № 3. - С. 9-12.

31. Кулигина Л .Д., Соколова H.A. Исследование влияния анало! лей-энкефалина даларгина на развитие утомления при физичесно" нагрузке у крыс // Биол.науки. - 1989. - Деп. в ВИНИТИ. -09.11.89. - I? 5721-В89.

32. Sokolova N.A., Achmarin I.P. Effects of opiod peptides on heart r,%te and cholinergic chronotropic reactions // X11 Congrí International Society for Heart Research.-Michigan.-1989.-P. 14'"

33. Соколова H.A., Кулигина Л .Д., Красильникова B.Ii. Делстзг опиоидного пептида дерморфина на сердца холоднокровных и теп." кровных животных // Вестн.МГУ. Сер.15. Биология. - I9S9. - '.'

- С. 23-2В.

3'1. Иванова К.Л., ?ейкина М.П., Соколова H.A. Сократительная активность культивируемых кардиомноцитов при действии опиоидн пептидов. - В сб.: Тезис, докл. И Всесоюз.совещания "Культив/ рование клеток животных и человека". - Пущино. - 1990. - С.2" 35. Соколова К.А., Иванова ПЛ., Лейкина М.И. Участие опиоиг ных пептидов в модуляции хронотропного и инотропного показате лей деятельности сердца // В сб.: Симпозиум "Физиологическое . клиническое значение регуляторных пептидов". - Горький. - 199

- С.47.

35.Соколова H.A., Ашарин И.П. Опиоидные пептиды модулируют : линергические хронотропные эффекты // В сб.: Центральные и пе-ферические механизмы регуляции физиол.функций. - Москва. - 19'.

- С.22.

•37. Иванова Н.Л., Лейкина M.И., Соколова H.A. Подавление coi тигельной активности кардиомиоцитов дерморфином в культуре с( ца новорожденных крысят // Физиол.курн.СССР. - 1990. - Т.76, № 3. С.351-356.

38. Кулагина Л.Д., Соколова H.A., Ашмарин И.П., Шварц Г.Я. Изменение вегетативного баланса регуляции частоты сердечных с ращений в условиях физической нагрузки при хроническом подав; нии или потенциации эндогенной оли<йергической системы у крыс Биол.науки. - 1990. - № 2. - С.70-75.

39. Соколова H.A., Красильникова В.Г., Ашмарин И.П. Опиоид f. морфин оказывает атропиноподобное действие на отрицательные t тропные эффекты на сердце лягушки // Биол .науки. - 1990. - !.'

- С.80-80.

40. Соколова H.A., Иванова Н.Я., Лейкина М.И. Изменение фут циональной активности миокарда при действии опиоидных аналгет ков // Тез.на конф. "Применение малых регуляторных пептидов i анестезиологии и интенсивной терапии". - Москва.; - 1Ü9I. - С, 17.

41. Соколова H.A., Кулигина Л.Д., Зозуля М.П., Ашмарин И.П. Исследование прямых эффектов параопиоидного пептида на сокраа тельную активность миокарда in vitro // Тез.докл.на конф. "Применение малых регуляторных пептидов в анестезиологии и интенсивной терапии". - Москва. - 1991. - С.121.

42. Соколова H.A., Ашмарин И.П. Альфам и гамма эндорфшы поде лятат ронотропные эффекты экзогенного ацетилхолина // Биол.на

- 1991. -II.- С.102-105.

43. ßokolova U.A., Iwanowa N.L., Xeikina Я.Х.,Achmarln I.P.Alp} and ^-endorphins inhibited the contzactile activity in the cu]

of tho rat cardiomyocytes // Biomedical Sei.-1991.-V.2.-N 2,

Iii.

солова H.A., Кулигина Л .Д., Ашмарин И.П. Влияние острого шеского введения даларгина на хронотропию сердца в покое физической нагрузке у крыс // Биол.науки. - 1991. - № 9. ■92.

голова H.A., Кулигина Л.Д., Ашмарин И.П.. Влияние острого веского введения антагониста опиоидных рецепторов налок-l развитие утомления при физической нагрузке у крыс Ц [ауки. - 1992. - Й С. 84 - 89.

Информация о работе

Соколова, Наталия Александровна
доктора биологических наук
Москва, 1992
ВАК 03.00.13

Автореферат

Похожие работы