Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Экспериментальное обоснование методов экстренной активной иммунопрофилактики газовой гангрены

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Экспериментальное обоснование методов экстренной активной иммунопрофилактики газовой гангрены"

г* ^

" РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НШ НАУЧНО-ИССВДОВАТЕЯЬСКИЙ ИНСТИТУТ Э1ВДЕЖ010ГИИ И ГЛЧШЮШОЛОПМ имени ПОЧЕТНОГО АКлДЕШКА Н.в .ГАМАШ

На правах рукописи

Чзрикова Елена Васильевна

ЗКСПЕРИЖНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ МЕТОДОВ ЭКСТРЕННОЙ АКТИВНОЙ МШОТРОШАШЕИ ГАЗОВОЙ ГАНГРЕНЫ

03.00.37 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

Дйооертации на соискание ученой степени яалдидага бяолопгчесншс наук

Мооква - 1993

Работа выполнена в Назгшо-нослбдовательском институте • эшдемколояяи е шкробиодокш им.Н.Ф.Гамаяеи Российской АМН.

Научный руководителе - доктор ыедздиноиих лаук,

лрофаооор Т.И.Сергеева

Ос^ициельвыв сшюаеят -

дол тор биолсгичоочшс иаув,профе..оор А.Ф.Мороз доитор медивднских ваук,профессор В.П.Ненашев

Бадущеа учрегдешо: Ыооковокай кауодо-исследовательсяий иьогитук ешщемислогия п микробиологии иы.Г.Н.Габричевокого

Защита состоится " _ 199\^ода в "-¿У"

часов на заседания Спешализированногс Совета К ОШ .07.01 Научно-исследовательском институте эпидемиологии и микробиологии нм.Н.Ф.Гамалеи Розояйоьой АМН, {1230Э8, х.Мосвва, ул.Гамалеи ,18).

О диссерташз£ когнс ознакомится в библиотеке НИИЭ»< иы.Н.Ф.Гамалеи Роосийоиой АМН. Авиореферст разослан " Ж" ^ 1930.

Ученый секретарь Сдецпашгаиров^чпого Совета,

доктор медицинских я&ун

Е.И.Коптелова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТй Актуальность проблема, Газозая галгрена - ралевся аяаэребяая инфекция, обусловленная преимущественно c.perfiin^er.a, С .oedoraa.tisnp, ff.^epctirun; Р .histelyii^^ECTpe^aeTCi В разЛНЧ-.

пек ялиштаеенвх формах (посттраБыетотескпя,поогопераэдо1шая, поотаборгальаая .бсотинеьц.чоняая) л отличается еысоксй летапь-ностьи (50-80£) ('что определяем зр.атательку» медишекуэ к со-пиаяьпуп значимость ssoro заболевания э патолоиш двдей

( d .G.Bar tlett, 1990 5 J.Reuneat,1S90).

Вместе с те» зопрссн экстренной (по поводу травм, осерашй е s.u.) аатпвпой' и/л^еопрофздаечйьл газовой :сангрэш! изучена чрезвычайно «ало а праятз-еокк ка_обоснозанн не-года ашунсло- . гической зецятн ups ярздрасполахащих к развятию газовой тап-граш травмах ,Г.ЙДнсяияД990; А.т.Willis, 1905/

Прк газоао! гамрзаа воегда имеется четно диагностируемое •место входных ворот гтфзяцшт - раян,трудно поддавшиеся хирургической обработке (разиегжвяяне,с наьичием^ишеиЕй,некроза, иаородиых гел).Аат.гвко фуякшоЕяр_ущнй лонус йнфегада.з которое определяющим является иккробпай фактор (адгезкя.размиоавние, токеклообразованке) ,кграет_ ведудуп_рол:ь в патогенезе газовой 1 гаягреня/А.Й.Гркцаков и др. ,1587 •.c.L.H&ihewey, 1?90 /.

В этой связи в целях ограшгзекия первой,баятзряашюй фаза инфекционногопрогресса я предотвращения ";го перехода ь последующие фазы - толсячеекуя я аллергическую,представляется вакшш я an Ho.wo более раннее локальное (на ралу)воздействие для подавления а_возможной шединаади возбудителя,а paaso одновременное воздействие ва процесс тоясяяообразовааия и токе е.мм ,/Г.И.СергееЕа я др. ,1991 /.

Если яа возбудителей газовой г ширена...» раяе козао а определенной степени воздействовать антабаоппг&чя,то деСотвде тоя-

орчоб возможно нейтрализовать 'только соответствующими алти-токсинамя,щ>одоцируешш в организмз активно иммунизированных падиеягов.яли готовыгли еягатсксинаш;,введенными з виде онворогочных препаратов /Е.В.ПуЕйар9ьа,1938;Б.Д,Сеыеяйва_Д989/.

■Примеяевио ае для профилактики аямстащрзнозннх оыворо-точнах препаратов мало- рационально в виду бвстрото выведения из организма гетерогенных сывороточншг антитоксинов и юс высокой эятсргизирувде* способности / ДФ.Папко и др. ,1987 /.

Учлтываа особенности ллхшлчеслого теченля газовой гангрены, отличащейоя быотрнм развитием-и прогрессировакием симптоматики,пойся методов создания анмгачгренозного иммунитета или ею стимуляции по еисгреяшм показ англ« приобретает ооо- . бо вглаое азачэяяе в целях быстрейшей детонсикацкя организма»

В плане пелеяеправлешого воздействия на локуо инфекции персцеятизнш можно считать изучение возможность" формирования региоаальаой кие точной иммунной реаншш на уровне поврезден-яых Тканевых покровов и региональных лимфоиднях органов,а также возможности стимуладиа ^морального антитоксического ишунигета б результате региональной (на раяу) ашшжадаи гангрезозяш: айтыенных препаратов /Г,И.Сергеева,1Э92 /.

Целью коследования яеилоо: изучение на экспериментальной модели раневой гнзобой тавгреня возможности создания активной еиунологичеокой защиты от тазовой гангрены по эдстрен-нал показании^ _ . _ _'

- Основные задачи иооледозаяия;

1.Дать экспериментальное обоснование иммунологической эффективности региональной (на раяу) аппликации гангренозных ынатэксивов для стимуляции протявогаяхренозного иммунитете.

2'.Нь эвспериу.ентапьной модели газовой тангрены ыакскиаяь-

- з -

по приближенной к естественном? пути заражения,двть оценку протей -тиепости раневой ревашганашя гангренозная .нопо-гг полионатокся-памп'.- на фоне предшествующей иммунизации,

3. Разработать оппмалшые схемы ппяйенйнм гангрпновното тстраанатоксипа и полях остренной стимуляпки иммунитета,а трпжп создания в коротяле срока активной иммунологической згздщтн у раи'.е непрквитхи прэтпэ хезовоИ галгреян.

4. Отработать дсстугрыЯ я спещфлчянй метол экспрэос-здвчти-фпкацил зида возбудитэдя газовой тавгрояи в катериаздх йя рая.

Научная нсшизна.йпзуваа на эяспергшенталыюй иоделя.какоимрлъ-но прябшткешюй л еогеотгглпочу путл заранения при газоээй гангрене (заражение мизробпой ззвесыо в размояжзппую рану),показана возможность формирования туморадымй и региональной (к месту рапевоге локуса) клеточной пммуявой зэлпга в отлег яа раневую пппликатши гангренозных моно- я тетрааттоксилов.

Впервые теоретически й экспериментально обоснованы методпчеа-< ию подходы для сргаяизашш системы экстренной юмуноярофялаптяки 'езовой хайгренм, определена контингента,подлежащие вшукопрофя-гактике,препарата а метода их пркмевекпя в зависимости от пред-юс гвупцег о ям>/уи!ото статуса пашеятоэ.

Практическая зпачжость. Элсперямеагатано обоснован патогене-ическк пьлесообразаддяцгй и удобный,чем инъекция,епо-об стимуляция гшя соэдрлпя заково прогивогаягренознохо иммунятз-а по экстренном показаниям с помощью ашшиналии гангренозных ватоксЕнов на раау.

Впервые разработаны: схема энспреос-ишупизации гангренознш тетраан&гонсином.лозво-топая в течение 6 дней создать хороиуп иммунологическую подго эвлениость (грундикмуиитег) для посладущей ревакцинагш по по-ОТ травм ;

- 4,- fxeua экстренной игшунязации'путем аппликации тетраанатоксика

аа рану, обеспечквакщая через 6 дней повышение титров антитоксинов ,а также' защищенность давотшх в отношении каддого из четы-рех'видов возбудителей газовой гангрены.

Отработала технология приготовления имыуноглобулиновых эрит-роалтаряых диагностиков (моно- и поливалентных) на основе оря'-'рошгов ш!дша,позволяющих через 15-20 минут после постановки РИГА снрёдедать ыи^возбудктеля газовой гангрены.

Разработана "Методические рекоаевда-дяи по использованию хро-«аг'сграфетеикях методов длй даагяоотлкн газовой гангрены" и приняты Проблемней попсовей "Раны а раневая инфекция" Ш РФ (1992).

Материалы диссертации использованы при составлении "Программы испытаний' методов экстренной и/иунопро^илайтики газовой гангрены в на&пздеяиях на лкдах" (1993),что будет являться предметом дальнейших исследований.'' '

Апробация диссертационной работы состоялась на научной конференции отдела бактериальных инфекций КйШ иы.Н.Ф.Гачелеи FÄVi'I (23 апреля I2S3r.) .По материалам диссертации оздбякковано 4 печатные р<збогы.Материалы диссертации доложены на 18 съезде Всесоюзного общества эпидемиологов.микробиологов и паразитологов км.И.И,Мечникова (1989г. ,Ал.га-Ата) ,на Юбилейной конференции Таджикского Hl® эпвдемиологии и гигиены (1991г.Душанбе).

Оо'ьем и сгоукт.ура диссертации.Работа изложена на 153 етра-ницах машинописного текста и иллюстрирована 7-ю рисунками и 13-к ■ таблицами,Состоит яз введения,обзора литературы,описания материалов и методов,результатов собственных исследований и их обсуждения,заключения,выводоз я списка литературы,ъклздчалцего 212 • яст'Ьчаидсв.в том чиле 115 работ отечественных и 57 -зарубежных.

Работа выполнена в лаборатории столбняка и газовой гангрены (руководитель - доктор медпшшоких наук,профессор Т.К.Сергеева),

Гистокорфологическов исследование тканей, проводили о канд.биол. наук М.П.Ермановой.Динашку функциональной адтивностя клеток ы'о-нопуклеаркой фагоштируиц&й системы (MÍG) исследовали со ст.я.о., яавд.биол.яаук Л.Г.Зайвевой (л йбораторьл естзственного иммунитета) .метаболическую азтивчоеть ялосгр -дай изучали хроматотрафичес-аими методами совместно с ст.я.о. .вавд.хишгч.наук Т.Г.Суховой ( ВШИ биолог. приборостроения).

• СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы я методы.

Бактериальные nrawH cioatridiua: C.psrfrLigena ?яп A BpSK, C»03dea5tien3 тп.п А ^»C.aepticua ТИП А 59.c.histolyticua тяп А 247 яз лоллекши лаборатории ялоотрцциэзов ЕИИЭМ см.Н.Ф.Га-/влеп РАМН.

Культивирование ш.аьмов проводили на средах Китт-Таропт.ВаЙн-5ерга,Хоттял1зрз,Попе,лроЕ7яЬы сахарном агарз.

Экспесшснг'альныз яквотныэ:70 кроликов,кассой 3,0 кг,600 моро-;их свинок кассой 300-350 г.

Токсишг.хтшщмяовне огайдартизйрованкиз еидкпо токсины перф- • янгенс.одематяеяо.гастолитикуг получали яз Пермского ШИВС.тзкстн ептийум изУфяксиого ШйЕСу

Аватоасипя: адсорбированпаЗ пер^рзнгеяо ааатоксдя (ПА)" анткв-эстко 30 ЕС/кл я пеоорбировашза перфрщдзпо азатопсил (ПАН)

• • • .. "4 .

О ЕС/мл й 100 ЕС/ал »прккепяля • вак э ймвсм^так и з лпофлльпо еи-гшенном состоянии (Пер^зний TS3JEG) ;

адсорбированный совсгшшгопсип (СА)а яесорбяровашшй секстаапа-1ксля (САН),производство Пер&гакого ШШЗС ; * эксперакент&ташзй адсорбярогажтй тагрэаяагопсий (ТА) я кесорбй-вслпь-й тсгрганатоксял (ТАЯ) ,содор.?яциё з прививочной дозе аяа-ксина перфрмкгеяс - 15 ЕС ,оде«агяепс - 0 ЕС.гпаголятнкум - ЮЕС, атикум - 5 ЕС в жидком п сухом виде получаля пз Уфимского НИШЗС.

Сыворотки: нротивохангренозные лечебные (перфриягенс.эде-матиеяс.септакум.хистодитякум) получаля яз Уфимского НИИЕО¡ - стандартные противогангренозные сыворотки из ГНИИСК ш Д. А. Тарас евина.

Экспериментальную раневую тазовуэ гангрену моделировали путем введения в рану животным 1,2,5 ась суспензий микробов двавды отмытых в стерильном физ. растворе суточных бульонных культур С.verfringens,С.oedemetiene,С.aepticua,С.histolyticuaa

в растворе йалышя хлорида в объеме мл.

' Определение специфической автивности токсиков-анаточсинов.

Величину минимальной летальной дозы (Dim /мл).показатель антитоксиносвязывапцей активности токсинов-анатоксинов ( ь +/мл, ЕС/ил, ь? Д-л) определяли согласно методам,рекомендованным ГНИИСК им. Л.А.Тарасевича (1972 г.).

FIíTa для определения токсинов-анатоксинов ставили с авторскими иммуноглобулияовнми даагностякумами микрометодоы по общепринятой методине с использованием аппарата "Такачи".

Определение активности сывороток. Сыворотки на наличие антитоксинов перфрингенс титровали как методом "in vivo" в реакции нейтрализации со стакдартнши сыворотками на белых кышах, так я методом "in !vitra"«B реакции с лепитовитедлином.Автиток-сины хистолитияуы.эдемагиенс.септикум определяли только в реак-пии нейтрализации с соответствующими стандартными сыворотками.

Тигр ангитовсиг в сыворотке крови определяли до,а также на 3, 7 и 14 день после ревакпинашш.

Дднаиг.ку могЛшогкческгос изменений изучали микроскопически Материалами для исследования служили ткани раневогс локуса,паховых и подколенных регионарных и коктралатералъных лимфоузлов, селезенки,паренхиматозных органов морских свинск.

Динамику функциональной активности кле?о:< МФО е регионе

[рана .лимфоузлы) изучали через 0,5 ; I ; ,4 ; 18 часов после ра-1еьоП ревакцинации иорских свивок (100 гол.) по комплексной ке-•одяке (Л.Г.Зайцева п др. ,1989),определяя фагопитаряую.бактэри-1идную (ВСТ-тест) автввность,с.епень выра&енности лизооомного ппарата клеток (АО-тест).активность затепсляа Д.В условиях экс-ерименгалвной раневой газовой гангрены функциональную аутив-ость клеток MíC исследовали через 0,5 и I час поело заражения орскгос свиное i dcl c.perfringena с последующей экстренной ре-акпинадией ПАН.

Статистическую обработку полученных данных проводили обце-ринятыми методами .определяя достоверность рэзличяй по критерию^ шэдента (И.П.Аимарин,19и2).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ. ' I. Исследование иыунологической и протектявной э|фентивкос-i региональной ревавцинапии (РР) перфргшгенс анатоксином.

На морских свинках и кроликах были отработаны условия применяя антигенных препаратов при аппликации их на рану (вид.фор-,,оптимальные дозы препаратов,методика нанесения их на рану.ке-д фяксаши на раяе).Дпя ?Р пр.шеня.тя яееорбировашшй нерфряя-нс анатоксин (ПАН),как в жидком (0,25 мл),так и лкофилгчо ва-шенном состоянии в виде дозированного поропша.В качестве фактора на ране оптимальным оказалось использование аэрозольного яфузеля".Оптимальными для ранзвой апшшащл оказались дозы 3 для морских свинок 30-35 SC ,для кроликов - 50-70 ЕС .эти до-в 6-7 раз превышали подкожные .однако действущиз дозы мало мчались из-за сорбпии частя анатоксина на повязке Дзерсти.ко-кявотного. 9

3 опытах на 285 морских свиввах иммунизированных подкожно И ПА или СА,изучен отдаленный (через I. 3, 6, 9 месяпев)им-!ннй ответ на РР ПАН я прптэктившй эффект при заражении аи-

в отдых 1, 2, 5г>сь культуры С .регГИпеепз.

Эксперк-чепты были с аранжированы таким образом,чтобы в пределах оптимальных сроков,принятых хирургами дня оказания первой помощи при травках (3 часа) .проследить возможность стимуляции прогтаогаягренозногоимглунятета я обеспечения иммунологической защиты от возбудителя.'* газовой гангрены.

При РР ПАН морских саанон на *? денъ отмечено 3-6-дратное • повышение титров антитоксинов .причем зри отдаленной ревакцинации (через 6-8 ыесяцев)кратносгь увеличения титров была более высокой,что является свидетельством высокого бустер-эффекта на фоне грундш,и.унизвдии ПА.,Сходные данные получены при подкожной ревакцинация животных.,

Раневая екстренная (одновременно о заражением) и'отсроченная' (через 3 часа после заражения) ревакцинацы ПАН на фоне груядгашункзащк ПА обеспечивала 100$ защиту от 1ось -100/, от 2СС1> ,50? - 01- 5 ЕСЬ микробной взвеси С.регЛипаепа..

На фоне грудашунизацаи сенсгааяагоксинок,создававшим более "низкий исходный уровень антиховсяна.РР ПАН вызывала 3-5-г.ратное нарастание титра антитоксина перфрингенс:уровень защиты от I, 2, 5ось микробной взвеси с.рег*г1пеепз составил соответственно 75, 50, 0%,

2. Изучение морфологических изменений в раневом локусе, •

лайфоидакх я наршшшатознах органах. С помощью гистоморфологичеекпх методов показано отсутствие отрицательного влияния сравнительно больших доз антигена,нанесенного на рану,на ход репарационных процессов в ране,а также отсутствие патологических изменений з паренхиматозных органах ■ морских свинок.

Наряду с этим отмечено усиление плеточной иммунологической реаяы-'и в регионаршьс лимфоузлах (гиперплазия когно&огои мозго -

вого вещества'с обилием фолликулов,содержащих активные центры, пролиферация лимфо- я плазмобластических элементов) ,а также развитие всех фаз репаратквногэ процесса в области раны (про-лифератизяая,макрофагальная и фаброблас.шчеекая реакция .ведущая к формированию сэединительаитяаалом рубпа).

3. Опенка функшояачьной активности клеток МФО 'в регионе

(раяа и лимфоузлы) на фоне раневой ревакцинации ПАН. Анализ динамики функциональной активности клеток МФС на 100 морских свинках позволяет констатировать два типа рвавши 'клеток МФО я.а фоне иммунизации и РР ПАН в зависимости от заражения возбудителем тазовой гантроны. .

• В отсутствии заражения,Р? обеспечивает ьоалечение в иммунологический процесс широкою спектра функциональных активностей макрофагов: наряду.с усилением фагоцитарной,наблкгдлось повыше-пйз бактерицидной (ЕСТ) я переваривающей (АО) активностей унз через 30 кинут после нанесе/шя раны л РР (рисЛ),а таяяе быстрое и стойкое увеличение активности латзпсина Д в сыворстяе крови (через I час послз РР в 3 раза больше,чем в контроле

(р < 0,05) /табяЛ/.Контроль - интактяке морение сьяякп. . .

Таблица I

Активность катепсина Д в скворотье крови шреких свинок.

Группы ?Грунд-пшму--низа-ряя -! РР ! •• Катепсин Д в мкг 1 -—-:-: гзрозина/(/л /час 5

! ! •.. 30 ! I час | ■ МИН. | 1 1"4 часа ! та 1 .13 час. ' } !

I ■ - ' V . 6,2*0,9.3,1*0,9. 13,2*2,2 , 1

II. . . -5 ЕС п/д . ' 5,4^0,7 ?,Э*0,9 9,4± 2,1 10,е£г,8 * !

III ПА 60 ВС ПАН 5,2*0,9 9 ,8±0,6 12 ,2*4 ,4 12,0£Г,0 ' ' » ! !

» ю -

САГСЦЯТИ нет АО

I н I й I ¡1

у ' А V 1 ¡^Г \ /

(/ V «1 * II «М * <1 1 ^ 1 V Л^! К Щ» Н 1» Ъ 1 * 11 К« к —

РиеД Динамика функциональной активнойти клеток М3£ в ране

(-г—г.)и в регионарных лимфоузлах (---)у неревакдиниро-

ванных (I) и после РР ПАН (II) морских свинок.По оси абсцисс - время в часах,по оои ординат - % к контролю.

Рис ,2 Динамика функциональной активности клеток Ш5. рана (А) а лимфоузлов (Б)у интакгных (I), неревакцинированных (II) и после РР ПАН (III) морских свинок в условиях заражения возбудителем газовой гангрены По оси абспясс - время в часах,по оси ординат - % к контролю.

В условиях заражения ?Р обуславливает "взрыв" фагоцитарной активности в клетках раневого локуса и лимфоузлов (рис.2), ' а также вовлечение ферментных систем иакрофагоз рапы, к скео-ротяс крови.что обеспечивает б~локальнуя) защиту всего региона раян. ' ' -

Таким.образок.раяевая ревакшяядая ЛАЕ наряду со стимуляцией гуморачьного иммунного ответа обеспечивает рашию, целенаправленную яа первичное звено инфекционного процесса,активизацию мононуклеаряых'фагоцитаруицс!х клеток региона.

4„-Изучение, иммунологической е проттивдэй вффективности различных схем иммунизации ломшгеяеякм гангренозным тетраанатоксином. Учитывая полго/кнробннй характер этн;логгга тазовой гангрены I необходимость создаыя по экстренным показания}.! иммуаэлохи-геской защиты одновременно к четырем, основный возбудителям ха-ювой гангрены.предпочтительнее осуществлять иммунизацию ассо-ишрованнкм препаратом - тотраанатоксааоы (ТА).состоящим из ан-'ИГенОЗ С .рогГгчг^епэ, С .оебещаНепз, С. зерЬ1 сия, С .Мз1о Исиа. Нами била сравнительно испытана иммунологическая и лротеи-

■ивпая эффективность.различных схем иммунизации ТА.-. *-.„ / № * ' ' ' . Обычная двухкратная подкожная иммунизация морских сбянок ТА

интервалом 20-25 дней обеспечивала хорошую подготовленность

ивотных для ревакцинации через 45-60 дяей.Гаяезая эх;с грешз&я и

тороченная ревакцинация ТАН на боне этой схемы грудциммунизаг

аи способствовала повышении в 4-5 раз тигров антитоксинов в

*

гяошеяяи всех четырех компонентов препарата я за>дищала^5-100# ивотных от 2 ось с.рег^1пяепз иля с.овасиаНепз .тогда как ез резакшнаши погибало более -50$ янвотшк от I ось.

Схемы ускоренной подвояеой дммухшзашш: ¡трехкратная о интералом в I день и двухкратная через 5 дней создавали сходную с

обычной схемой по уровню антитоксинов напряженность иммуните-. та у мвотннх и хорошую подготовленность дал отдаленной ревакцинации по поводу травмы.

_ • РР ТАН на фона '.ускоренной трехкратной труздинмущзадаи давала лучше результаты ^повышение титров антитоког-нов в 2-3 раз и 100^-ную завдту от варааешя 2 вех, a.periringeaa шш c.o3d№atieïio и 50;t-ayp 8ЩЯТ,/ от 2 DCL куовы-уры O.saptictm, c.histolytictra при гчбели 50-75$ Е»вогакх не получивших ревакцинации от I ирь кульгуры кадцого из возбудителей.

5. Изучение возможности создания экстренной иммунологической защита пря трарм8.: При сравнительном испытании двух схе^зкстреняой шшушза-Ш1И тетраакатокоином ы.орких свинок: трехкратной инъекции через .1 день дли трехкратной апшшашя на рану показано ,что ./ уровень титров "аи'ШЮКсЕНоз на 7-е к 14-е сутки после начала иммунизация яак по первой,так и по второй схемам был сходным. На 14-е сугки титры антитоксинов С, perfringens.c.oepticua и C.bistslyticiKs возрастали в 2-3 раза,с.&ейашь11епз - в 3 раз (табл.2).

Протеятивмость <, экстренной иммунизация оценивали выживаемости морових свинок с ррчевой гавовой гангреной,Выживаемость азвотньос на 7-е ' сутки после начала иммунизация при заражении I ось микробной взвеси каждого из четырех возбудителей была 40-80$,на 14-е сутки после подкожной идаунизации выжило 70$ свинок .после раневой иммунизации - б0-10С^.На.7-е сутки после отдаленной РР (через 90 дней) ТАН кратность увеличения-титров в отношения различяых антигенов составила от 3 до 12.

Выявленная е$фегтив,4ость экстренной иммунизация морских ■ свинок путем трехкратной аппликации на рану ТАН была подтверждена при последовательной зэраженки Idcl микробной взвеси '

маоллца г

Иммунологи0 ее ная и протезгивная эффективность экстренной иммунизации .тетраанатоксином

Группы Схема иммуни- Вид..' Титр антитоксинов ji вызова- Кратность прироста -титров аяти-в чио- задав зозбу- емость животных к■ роь ..токсинов-после"FP-TAH...........

ломор- дителя 'день на 14-й день --L---^-----

СКИХ -^--C.perfr. O.oedea. С.hist. C.aeptic.

СВИНОЙ'..... " X Ibbi' ■ X ■ 1 SGL

I-15 3-х кратно O.p^ft. 0,35 5/3 0,77 5/4 3,2 8 9 7,5

через день . .

-------2.П.Д.7ГАН. ............................................ w

на рану : • ' :.

со

11-15 C.oedenat.O.SS 5/4 6,0 '' Е/5 3,5 12 9 8,5

■ '■, ' V . ••. • • • •

III-I5 C.histol.. 0,25 5/2 • 0,5 5/3 ■ 3 9 та' 5,5 '

Ii-15 ' С.septic . ' 0,33 5/2 0.75 5/4 . 3 12 7 3

У-15 3-х кратно чет>ез 'день 1/З.п.д.ТА-подкояно C.perfr. 0,4 5/3 0,65 3/2 3 • 10. .6 5

Обозначения: X - средний геометрический титр в 1"Е/цл. дробь - число аивотних/число ВЫЖ1.П-И! ИХ.

с.регггзлгйепз о учетом возкседой реальной ситуации,когда ш-

... - • % ...

фэкгаоннкй процесс в ране мши.*1 развшаться постепенно с оп-хтдельнкым Енкубатгоньш периодом (табл.3).'

Таблица 3

ПротсЕтиваосаь экстренной схеш ишунизеодя тетраанатон-_____сккэ;/, в_0'ли>шеннЕ раневого заражения с .регГгм^епв.. ' '

мнк яммуни- - Гррппы мотх г их станок __;

"запик...........I'-'О*" '""'II "." Ш : ..... ' '17 ""

Первый ТАН+1ЭСГ, .ТАН * ТАН ТАН

Третий 'ГАК ТАК+таь ТАН. ТАН

Пятый ТАН ТАК ТАН+1 ОСЬ ТАБ

Седьмой - • - . - 1ваь

Пали..... 8.7 6. 4

Пролонпгсо- ' >

вакие' глзял . ■ ™ . " • ~

Хеутли). 2-4 ■ " 3-4 5-9 • ^ . 7-23

Еыгето • -2 - - ■ • . 3 ■ - 4-' • -----6--

■ Показано,что' экстренная радевая. иммунизация ТАН на. фоке заракеяигабссюгяо смертельной дозоЗ_возбудителя оказывает протективннй'гффекг,который проявляется пролонгированием жизни -ивотшх г выживаемостью части из них,примем урсвань выкиваемосгя повышался по кере завершения курса ин-йушгавди. ■' // •■

__В опытах ;?а_ кроликах прослежена динамяка .гуморального

(_а_чткголслчесвого) ответа на ТАН на фоке экстренной ра-'кезой ишунизадза яееорбироваяши тетраадатокспноч.

Каи показано на графике (рас^З) на фоае трехкратной ' раяевей иммунизации ГАЕ чепез день (схема I) пли через 2 дня (схема? 2) с отдаленной Г? (спустя 80 я 140 дней) каблада-'

лясь циклические изменения титров' всех четырех антитоксинов: подъем к 7 суткам с максимумом на 14-з сутки после завершения первиччого курса,постепенное онькение к периоду ревакцинации, резкий подъем после РР.

• Отдаленная РР кроликов 4 п.д. ТАН,проведенная через 30140 дней после начала курса иммунизации де только ЕЫзичаля резкое увеличение титров антитоксинов С.регМпвепй.С.ооао-тааепз,п.аерасиш, с.Ыэ1о1уь1сиш ,но я зедищача 700$ ая-

вотных от I сс1| кеадого яэ возбудителей.

КГкЬтлЪ папш ммщмцт П)М«М*М4М«1 м И*М1И> Л тЫННМЦМ «'МММ ев I ОЛ <«НI

Л » ьГ Ся<м] )*дм (гтиммянм*им» /-гт*ьтг»ч |.....*ими*«« —

Рис.З. Иммунологическая эффективное»ь^РР ТАН на фо'не трехкратной раневой иммунизации ТАН через день.

Зое эти данные свидетельствуют о создании о помощью •котреяной раневой или подкожной хчмуаизаш.ч ТА хорошей^ шунологической подготовленности организма для яоеледук-1вй,в случае надобности ревакцинации при травмах.

6. Отработка методов зкспресс-идентификагщи'ввда

ведущего возбудитачя газовой гангрен«, 6.1. Разработка метода РНГЛ.

э

-16 -

Для целенаправленного применения средств тетапяи и шму«.. шпрсяигавтякя тазовоЗ гедгрэян ь_л=ша экслресс-иденгифи.чапия л организмебольшого есдудех видов клострвдий - возбудителей газовой гаахрэны.В этих целях 1ши бала предпринята отработка j слове v. получения ялгмуноглобулияоьнх эргтропитарных даагности-ур.оз для вшвления в РНГА четырех видов возбудителей газовой * гйяхреяа.Подучешше на основ* лечебны;-; моно (П перфрянгено Г - гистслчтявугО я полавэлентиш: (2С - эде^атиенс-^ептикум, IÏ3C - дер& шенс-эдема^еас-статинуь:) онвороток,зрлтропитов барана (б) яли ивдэкэ (к)лдагкосига умы (ДЭ) при испытания в РИГА на чувстзигельяоста и спешгфячксогь о. гомологичными к ге-теролэгичныш токсинами к токсигевяша вультураки показали вполне приемлемые для лабораторной диагностики- параметры чувствительности и слепяфзчас ли (табл.è)

Чувствительность л ссогветсгвушцзку токсину ДЭ моновалеят-/ aero (ДЗГл) и солиЕалентных-:. (ДЭЭСи а ДЭПЭСя) на'основе кздр-шнкх эритроцитов была несколько нике (0,5-2,0п1а /мл) ,чем на основе бараньих зрлгроштов (0,01-0,05 1Ша/мя\ао применение первых сдравлаао ,в виду более быстрого получения ответа - укэ через 15-20 минут после постановки РНГА (в 5-6' раз быстрее, чей на основе бараньих эргтропитев),

Следует отметить ,что нам удалось -зшервне получать би-;; ' вглентикй а урс;гЕ:аяе.нтяые_1анхренозные ДЭ,а тшше преложить удобную схему ях применения и учзта'результатов.

Исследования в РНГА с помощью ДЭ .госевов с ¿.швов с объектов внесшей среда,материалов• от больных ладей,а танне патологи-" чески-.: катеразлов от эксг.ершЕ£таль!шх яивотних показало, пол- . ностыо сопоставимые результаты с данными баятеряолохичесяою исследована зт>ос ыатеряалов,что свидетельствует о надежности уетода РР7Х '

«у

Таблица 4

Специфичность поливалентных и уоновал«чткых гангренозных зрдтропигарных диагностичуыов

Диагнос -тикум

......Ш.т.а^м.ы-ы. Р.Ло.'я.г

рег^1п£епз оесЗетьг. Кхэго!,

«1. У. Щ., .. .

зерЪЛс. эрог. дру~

А В,С,1).В

гяе

ДЭПб

20 20

8

"5"

6

"О"

II ' 2"

II ' О'

10 3:

п

" о

ДЭБи

.25 '25

8

*4"

6

"О'

Л

'о

II

' о

10 2'

п " о

ДЗЭСб

25

" О

5 "б"

о о

II ' О"

II II

II.

' О

•ДЭЭСи

.20. :0

-4. О

ДЭПЭСб.

25.

25

.10. _10, • 'б. 6

.II. -.0

.II. II

..10. .0

.11. "о

.10. 10

.10. о

•1 ДЭПЗСи..

,25. 25"

.5. О

ДЭГб.

20

.0

ДЭГи

20

"О"

.4. П_ ~4 О

.6. А.

О

п. о

.II. II

.10 о

.II, II

.II. .0

•I-0

.о. 0

б: "о*

II II'

п "о"

I

"оГ

о

Обозначения: чис.лтслз - число испытанных культур, зне"енатель - число долскигельных результатов;..'■• другие : с.ригг1Псия|с.гогаа1|с.вогйе1111>С.|111/1с11с, С.ЬоЪдИтнл.

......-.186.2. ¡1з7че;:пе^Еэзкожост^пок«енакия газозой. и жидкостной хрокатог^аоии ¿raя зкспресс:^циггностЕки _газовой

галхтены^

С помощью газовой хроматографии,хромато-масс-спектрометрии к 53К5Г изучена метаболическая автизность четырех видов клострядий при асследовании культуральной жидкости посевов и йатаввкх патологических тканой от экспериментальных жквот--вых с тазовой гангреной и от больных лвдей.Ка основании состава летучих жирных ''ислог' (ЛПК) предчояек метод дифферент®- 1 алия кдос?ридий лс с оотноиени:о_кониенграции масляной й про-пиойозсй кислот з качестве первичного быстрого геста (I час).

Применение метода хромато-масс-спектромзтрии позволило . получить дряные по составу нелетучих нориткоцьаочечных кислот, онсикислст,аыиаов и других химических маркеров клостри-дий и покачать,что спепиф-гческим мара ером, присущим c.perfrin-£sr>a янсявтия ТО-экслстеаркаовая дислота,которая обнаружена з цатсте шческлх материалах при всех к»тническпх_и экспери-медтальЕНх случаях газовой' гангрены .время анализа - 2,5 час.

По составу аминов (кадаЕерин.путресшн )в культуральных хидкостлх можно различить четыре ведущих возбудителя газо- " ЬО'2 С.oedemstiens, С .septicua, С.hiato -

iytis.,время анализа составляет 4-5 часов.

Диагностика по составу'ЛЕК и 10-онсикислот апробирована в Институте хирургии им.Ь^невсного при обследовании больных, с положительный результатом .На.основании полученных результатов разработана "Методические рекомендации по исполь-зозан:п) хроматографичесяих методов дня .диагностики газовой га«греяг (1091 г.)...... .

'•7, Кснпвпшя экстренной иммунопрофилактики газовой гангрекн/

- - 19 -

На основании полученных нами результатов л нерспектиз дальнейших работ сформулирована кочпгтпия экс^реляи; иммунопрофилактики гэзоеой гангрркн,которая Бюгючепа в качестве одного из_ основных _элементов в врядлокеннук Т.И.Сергзедзн систему шгкунопрофс'лакткки газовой гакгреяк г столбняка(1933),

Система ¡шлувоЕфофалавтики газовой гангрены должна складываться из плановой активной я^унизавди "угро:заэких" кон-тиагеатов в иаиях их иад/.унологячепкол подготовил да: стяку--*лирущей_иммунитет ревакшшацкя в случае кудобаосгп (по поводу ранений),а такл:е экстренной га/муяопрофиягятикя при уже имеющейся ране,предрасположенной к развитию газовой гангрены. "Угрожаемыми'1 контингента:/!? могут быть люди,по роду деятельности (возяяослу£31Г'1(3,отр.<уы_" быстрого реагяровааня"-,служащие ШОН.мклчции и дрл) более подверженные травматизму.

Экстренная икыунслрофалактиаа газовой гапгренч преду смат^ ривает создание ехгетрогб (-при имеющейся травме .ранениях,экстренной операции) кмуисдогической защиты путем стимуляция ймевдегося ыротлвег&нгреяознего гакулитага ¿итя формирование активного иммунитета заново в результата введения антигенных препаратов (анатоксинов)',дябс созданпэ пассивного и\ш:уяятета п$тем введения прот:*вогангренсзаых пмуукоглобулиновьаг препаратов (аятигангренозной "трехвалентной лошадиной сыворотки, гомологичного пэрфряягеяс иммуноглобулина.гомологичной про-Тйвс_ерфрингенс плазма).

Экстренной иммунопрофилактике газовой гаш.'ре:ш подлежат ладя с травмами д ранениями, ^д^спояогенйымл я развитию

этой ин£екпй' ,а -галке икса,готовящиеся к ароктолот^ческиу.

•---•.-•■■ ..... .......

операциям или операциям пс поводу обллтерирущего зпдар?ер;:-ита конечностей.3 зависимости с* пр.-даесгзуюкйй иммунизации подходы для экстренной иммунопррфдлаягккя будут разные. Для

- 20 -

симуляции активного тиунитета у ранее пр.чвитых применяют додкогнув инъекции ТА /¿ля., есл"_ имеете лабораторное подт-?ерздедие вида возбудителя,то вводится ааатадсккг аналогичною вяда.Еслг рана позволяет,а также шеется в наличии форма предназначенная: для адлликагига на рану ,то анатоксин нанося» на рану .что является более предпочтительным, * чем инъекция. '

Раневая апшшкапия аагштинов,помимо целенаправленного и очень "ыстрого воздействия на раневой локус,намного проще в применения,атравматична,полностью исключает постивъекциои-нпе осложнения л ыояет бить применена в Дюбнх мощных условиях.

Экстренная активная иммунопрофилактика тазовой ханхрены у непривитше ранее лиц гэжет осуществляться цутем экстренной иммунизации гангренозными аяатоксякамя с помощью трехкратной' апглиназгя анатоксина на рчну с интервалом в' один день,или ке пс этой кз сх8!.'.е путей подконной пньекдая.Активно-пассивная экстренная иммуа опрофклак гяка' преду см атрявг 1 т одновременное введение в разные участки тала анатоксина (предпочтительно __ в регион пора£енйя)ли специфического антигавгпенозного иммуноглобулина с лоследуащгм повторны;/ введением анатоксина через 5 дней. Люди,лолучивзке экстренную шлкушзашзо по поводу ' , ранения ,подготовлена для последующей ревакцинации в плановом порядке гаи в случае повтораой раны в период минимум одного года после проведения первичного курса. _

?яд методических додхгдоз 'этой'концепции уже получил . обоснование в процессе проведения данной работы,однако они требуют уточнения в наблюдениях да людях,согласно разработанной -¡Програчмн испытаний мсгодов экстренной иммуиопрофилакы-' * * '

. кп газовой гашренц ч1353х.).

ВЫВОДЫ

1. Впервые на экспериментальной -/.одели гчзсвоь гангрсня, максимально приближенной к естественному механизму заражения, показана возможность создания перзичясго или стимуляции иъо-тивогаягренозяэго грундашунятэта^^и 5щш;к£ции_аа рану гангренозных анатоксиноз в виде моаопреларата или гетрса;-:г-•токсяяа. _ _

2. Впервые разработала схема экопреос-жл/уяизадп гангренозным тетргадагсясиноа .позволяющая з течение Ь дне_и создать хорошую им «у в ол о I гг! с с г; у ю подготовленность (трундтему;^-гет) для последующей ревачцскашш по поводу трав;;.

3. Показана высокая иммунологическая (по приросту тигров антитоксинов в гровк) к прэгевтивлгя (защита .•. яизогяых от заражения возбудителем.) эффолтивнсст ь регионарной (р левей) ревакцинации люяэ- я тззрпгаяхрзаезныуг анатоксинами._

4. Впервые дана гис?э-п- па,«;:уасморфэлэгяческая характеристика изменений з тканях ргьеьехо локуса и региональные лимфоузлов при раневой аппликации ^гангренозного анатоксина, а такяе показано отсутствие отрицательного' влияния на_малрс~

организм и характер загшлеаяя рая доз_ анахоксйяа.па коля--'..

................ ■...... " г""«»* •.....

честзу антигенных одениц в 6-7 раз^рзвниахцгх.подконкыё.

Дака комплексная_сцеакафункциональной активности клеток МФО в ралевим локусе и регионарных лимфоузлах при ране .ой аппликация анатоксинов в условиях окспзриыеятал.ьной газовой гангрены,подтвзрядащая активное вовлечение з ж-муяный ответ клеточных мехая! мов запиты на уровнз реглена поражения,чт" способствует пеленаправлеаному воздел-

ствио на первичное звено инфекционного процесса,локализация очага и купированию инфекции. ' . ' -,.-•

■ 6. Экспериментально обоснован иа^огенегичеоки целеезоб- -

- 22 -

разный сри_ранеЕ02 инфекции способ создания и симуляции прэтовогЕЯгрейи-зного дакните та путем ап1Шшаш1й_анатокси-аов ка.^а»?¿я®,уву^вгяшй^са^шунадотеской и протектив-йзЙ ^фектявнооги лодкоглой яягсянин.ио болей щадящий н ярздыочтзгелъный в_вяду диотупностк,удобства применения, исключения постдкъеишонных осложнений.

7. Отработана быстрые я специфичные метода экспресс-одек1и5якации вида возбудителя тазовой гангрзны з-ор.аяизмз больного_ (РИГА,методы газовой и жидкостной хромсяографги).

8. Сформулирована концепция -экстренной шмунопрсфшак-яики газовой • хангрены .определяющая пели .контингента .подле- _ кадше'экстренной профилактике,методы ш/муяопрофилактики в за-завйсякостд от предшествующей иммунизации, пациентов.

СПИСОК РАБОТ,ШУБШОВАЫЫХ ПО ТШЕ ДИССЕРТАЦИИ X«Сергеева Т.И.,"Чиркова Е.В.Экспресс-идентификация основных ' иапов возбудителей газовой гангрены//Актуальныё вопросы про-фкдадэдка ш:**ш!0нншс заболеваний и охраны внешней среда: Котёр.Шид.коьф. Тадеюшо ШШЭГ.-Душанбе,Ш1.-Т.2-СД78-

хаа,;....._ ' '.„... ......

2.Сергеева Т.И «.Данилова И.А. ,Баб&2г>в®а Б.А. .Чирщова Е.В..

Региональная (раневая) ашшшай&а спешфюес-«юсглтегеаов - анатоксинов пр^ рстрешюй вдауноарофракти-л газовой хш^^Дях^твке вопроса орафаявк-вдфеквдоншх заоолевааий и охраны внешней среда:Матер. ЕФис.коа^Тадяакского Ш30Р.-й^аанба ,1991 .-Т.2.-СД50-183. ¿»Сергеева ТЛ, ¡Бао'айпева В»А. .Бакулян ИЛ. .Ермак ова и.П., Чкракоза,Е.В.Теоратячесг.ке и экспераептальиые аспекта шкуно-врофютак гики /газовой галгрена/Думунобиологическиепрепараты - ; нового поколения к {¿етода гос контроля:Сб.научных трудов ШИЭМ 'км.Н.Ф.Радаяеи.-М. ,1938.-0.80-64.

- 2о -

40Сергеева Т.П. .Бабайпева В.А.»Банулин И.Н. .Ермакова К.П., Чирякова Е.В.Эястреяиая икмуяоярофалаятика газовой га^р-э^'// Теэкон 18 съезда Воесоюзп, общества зпядемпол, ,мякроб::ол. .паразита1! . га.И.ИЛсечнлпова.-Алма-Ата,1989-Т.2.-С,86-88.