Характеристика анаэробных бактерий при гнойно-воспалительных и желудочно-кишечных заболеваниях

Сухина, Марина Алексеевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Характеристика анаэробных бактерий при гнойно-воспалительных и желудочно-кишечных заболеваниях
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Характеристика анаэробных бактерий при гнойно-воспалительных и желудочно-кишечных заболеваниях"

На правах рукописи

СУХИНА Марина Алексеевна

ХАРАКТЕРИСТИКА АНАЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ ПРИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ И ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ

03.00.07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ставрополь, 2005 г.

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении науки Ставропольском научно-исследовательском противочумном институте Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Научный руководитель: доктор медицинских наук,

старший научный сотрудник В.Н. Савельев

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор Б.А. Шендеров доктор медицинских наук, профессор С.С. Белокрысенко

Ведущая организация: Саратовский государственный

медицинский университет

Защита диссертации состоится »2005г. в

_на заседании диссертационного совета Д 208.046.01 при

Московском научно-исследовательском институте эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского по адресу: 125212, г. Москва, ул. Адмирала Макарова, д. 10.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московского НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского.

Автореферат разослан

«Л/ » ЯА

2005г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

СЮ. Комбарова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

Анаэробная инфекция известна более 150 лет, когда A. Velpean впервые в 1839 г. описал клинику газовой гангрены. В начале XX в. заболевания, вызываемые анаэробами; выделились в самостоятельный раздел, в который входят 3 группы болезней: гнойно-воспалительные, столбняк, ботулизм и гангрена мягких тканей. Последние две группы, обусловленные клостридиями, в представлении врачей являются главенствующей формой анаэробных поражений. Вместе с тем клостридии составляют очень небольшую часть встречающихся у человека анаэробов - около 5%. В то же время существует гораздо более значительная группа патогенных для человека анаэробов, которые не образуют спор. Среди них клиническое значение имеют представители родов Bacteroides, Fusobacterium (грамотрицательные палочки), Peptococcus и Peptostreptococcus (грамположительные кокки), Veillonella, Actinomyces. Вызываемые ими заболевания часто называют неклостридиальными анаэробными инфекциями.

Анаэробные бактерии представляют существенную часть нормальной микрофлоры человека и имеют большое значение при смешанных инфекциях. Смешанный характер клинических инфекций объясняется тем, что при повреждении слизистых оболочек в ткани попадают все бактерии, населяющие данный участок тела. При углублении гипоксии анаэробы становятся ведущим фактором деструктивного процесса. По данным D. Scevola (1998) ответственными за хирургическую инфекцию являются 7 видов бактерий, 2 из которых- анаэробы (бактероиды и клостридии). Большинство анаэробных инфекций эндогенны, отсюда вытекает их клиническая особенность - близость к местам естественного обитания анаэробов - желудочно-кишечный тракт, верхние дыхательные пути, половые органы. При этом анаэробная инфекция развивается на фоне повреждения слизистых оболочек.

Известна роль анаэробов в поражении желудочно-кишечного тракта. Так, С. регМщет считается самым распространенным видом при пищевых отравлениях микробной природы. Другой представитель клостридий - С. ШШсйе является этиологическим фактором псевдомембранозного колита и причиной внут-рибольничных диарей.

Однако роль анаэробов в возникновении широкого спектра хирургических инфекций, равно как и при поражении желудочно-кишечного тракта, до настоящего времени исследована недостаточно. Это объясняется трудностями, связанными с обнаружением и выделением анаэробов, их идентификацией, а также слабой изученностью факторов патогенности этой группы микроорганизмов. В последние годы сообщается об увеличении резистентно ста анаэробов к различным антибактериальным препаратам. Поэтому знание чувствительности региональных клинически значимых штаммов анаэробных бактерий к антибиотикам приобретает важное значение при выборе эффективных эти-отропных средств. Вышеизложенное явилось обоснованием актуальности проведения настоящего диссертационного исследования, направленного на определение спектра доминирующих анаэробных бактерий, причастных к возникновению желудочно-кишечных и гнойно-воспалительных заболеваний, и детальное изучение их биологических свойств.

Цель работы: охарактеризовать анаэробные бактерии, являющиеся возбудителями желудочно-кишечных и гнойно-воспалительных заболеваний человека, по широкому спектру биологических свойств, включая факторы патогенности и чувствительность к антимикробным препаратам; разработать критерии внутривидового типирования анаэробных бактерий для последующего мониторинга госпитальных инфекций, вызванных ими.

Задачи исследования:

1. Изучить частоту обнаружения и таксономическую принадлежность анаэробных бактерий, выделенных от больных с раз-

личными гнойно-воспалительными и желудочно-кишечными заболеваниями, а также от здоровых людей, проживающих в Ставропольском крае.

2. Охарактеризовать штаммы анаэробных бактерий, обнаруживаемых у больных и здоровых людей, по широкому спектру морфологических, культуральных и биохимических свойств. Оптимизировать схему выделения и идентификации анаэробных бактерий, присутствующих в клиническом материале.

3. Изучить наличие и частоту встречаемости отдельных факторов патогенности (способность к адгезии, антилизоцимная и каталазная активности, продукция а-гемолизинов) у штаммов анаэробных бактерий, выделенных из клинического материала различной локализации.

4. Разработать критерии и схему внутривидового типирова-ния клинических изолятов анаэробных бактерий на основе определения присутствия у них отдельных факторов патогенности и их комплексов.

5. Изучить чувствительность клинических штаммов анаэробных бактерий к антимикробным препаратам. Предложить эффективные антибактериальные препараты для терапии больных в Ставропольском крае с гнойно-воспалительными и острыми кишечными анаэробными инфекциями.

Научная новизна работы:

Оптимизирована по срокам проведения анализа схема выделения и идентификации анаэробных бактерий, присутствующих в различном патологическом материале.

Проведена детальная таксономическая характеристика более 500 штаммов анаэробных бактерий, выделенных от здоровых людей и больных гнойно-воспалительными и желудочно-кишечными заболеваниями. Среди клинических изолятов преобладали представители В. й^Ик, Рер1»81;гер1;ососсш, Б. пис1еа1ит, С. 8ерИсит и С. ЬМо1уИсит.

Штаммы анаэробных бактерий, причастные к гнойно-воспа-

лительным и желудочно-кишечным заболеваниям, обладали различными наборами факторов патогенности (способность к адгезии, антилизоцимная и каталазная активности, образование а-гемолизинов); определена возможность типирования штаммов анаэробных бактерий на основании наличия у них совокупности отдельных факторов патогенности, что имеет значение для оценки их патогенетической роли при гнойно-воспалительных и желудочно-кишечных заболеваниях, а также при мониторинге госпитальных инфекций, обусловленных анаэробами.

Установлено отсутствие достоверной взаимосвязи между наличием у госпитальных штаммов анаэробных бактерий тех или иных факторов патогенности и локализацией инфекционного процесса (гнойно-воспалительные гинекологические заболевания, гнойные раны хирургических больных, острые кишечные заболевания).

Практическая значимость работы.

Определен спектр доминирующих анаэробных бактерий, присутствующих в клиническом материале больных с гнойно-воспалительными и желудочно-кишечными заболеваниями в Ставропольском крае. Показано широкое распространение полирезистентных к антибиотикам клинически значимых штаммов анаэробных бактерий, в том числе устойчивых к антимикробным препаратам последнего поколения. Для экстренной терапии анаэробной инфекции в качестве химиопрепаратов выбора рекомендуется использовать имипенем и метронидазол.

Внедрение результатов работы.

следовательского противочумного института. Указанные методические документы используются в работе бактериологических лабораторий больниц и центров Госсанэпиднадзора Ставропольского края (подтверждено соответствующими актами о внедрении результатов НИР).

Апробация работы.

Материалы диссертации представлены на юбилейной научной конференции, посвященной 50-летию Ставропольского научно-исследовательского противочумного института (Ставрополь, 2002), научно-практической конференции, посвященной 70-летию санитарно-эпидемиологической службы России (Ставрополь, 2002), на конференции «Актуальные проблемы медицины» (Томск, 2004), на конференции «Социально-гигиенические и эпидемиологические проблемы сохранения здоровья военнослужащих и населения» (Нижний Новгород, 2004), на Всероссийской научно-практической конференции «Медицинская микробиология - XXI век» (Саратов, 2004), на научно-практической конференции «Региональные особенности здоровья населения Ставропольского края и среда обитания» (Ставрополь, 2004).

Публикации.

Основное содержание работы отражено в 10 публикациях.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Анаэробные неспорообразующие бактерии, наряду со спо-рообразующими, играют существенную патогенетическую роль в возникновении гнойно-воспалительных заболеваний у гинекологических и хирургических больных, а также при острых кишечных инфекциях в Ставропольском крае.

лизоцимной и каталазной активностей, продукция а-гемолизи-на) и нозологическими формами инфекционных поражений, вызываемых этими микроорганизмами.

3. Наличие и совокупность отдельных факторов патогеннос-ти у клинических штаммов анаэробных бактерий могут быть использованы для оценки их патогенного потенциала, а также для внутривидового типирования с целью мониторинга госпитальных инфекций, вызванных этими микроорганизмами.

4. Госпитальные штаммы анаэробных бактерий, изолированные от больных в Ставропольском крае, обладают полирезистентностью к широкому кругу антимикробных препаратов. Для экстренной химиотерапии гнойно-воспалительных и острых кишечных анаэробных инфекций рекомендуется в качестве препаратов выбора использовать имипенем и метронидазол.

Структура и объем диссертации.

Работа состоит из введения, обзора литературы, 5 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего 242 цитируемых источников, в том числе 130 отечественных и 112 зарубежных авторов. Общий объем диссертации 155 страниц. Текст иллюстрирован 40 таблицами и 13 рисунками.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

Материалы и методы

Материалом для исследования служили: -159 штаммов анаэробных микроорганизмов, выделенных от пациентов инфекционного отделения Кировской центральной районной больницы г. Новопавловска Ставропольского края с диагнозом острая кишечная инфекция неясной этиологии. Из них: 42 штамма относились к бактероидам (в том числе: В. уи^1из - 5 штаммов, В. - 37 штаммов); 1 штамм- к превотеллам (Р. те1аппо£етса); 25 штаммов - к грамположительным анаэробным коккам (в том числе: роду Рер1ю811гер1юсоссш -17 штаммов, роду РерШсоссш - 8 штаммов); 13 штаммов - к РшоЬаСтит

nucleatum; 3 штамма - к Veillonella parvula; 75 штаммов - к кло-стридиям (в том числе: С. septicum - 36 штаммов, С. histolyticum -14 штаммов, С. novyi - 8 штаммов, С. sordellii - 7 штаммов, С. perfringens - 8 штаммов, С. sporogenes - 2 штамма).

-166 штаммов анаэробных микроорганизмов выделены от пациентов с гнойно-воспалительными заболеваниями хирургического и гинекологического стационаров Кировской центральной районной больницы г. Новопавловска Ставропольского края. Из них: 43 штамма были отнесены к бактероидам (в том числе: В. ovatus -2 штамма, В. urealyticus - 2 штамма, В. fragilis - 39 штаммов); 1 штамм - к Actinomyces israilii; 40 штаммов - к грамположительным анаэробным коккам (в том числе: род Peptostreptococcus - 35 штаммов, род Peptococcus - 5 штаммов); 8 штаммов - к Fusobacterium nucleatum; 6 штаммов - к Veillonella parvula; 68 штаммов к клостри-диям (в том числе: С. septicum - 27 штаммов, С. histolyticum - 10 штаммов, С. novyi - 7 штаммов, С. sordellii - 5 штамма, С. perfringens -13 штаммов, С. sporogenes - 4 штамма, С. tetani - 2 штамма).

- 267 штаммов анаэробных микроорганизмов выделены в бактериологической лаборатории Кировской центральной районной больницы г. Новопавловска Ставропольского края от клинически здоровых людей.

Выделение анаэробных бактерий и их идентификацию проводили в соответствии с «Anaerob Laboratory Manual» (1977), а также руководствуясь «Методами микробиологического анализа не-спорообразных анаэробных бактерий» (Москва, 1996), «Микробиологической диагностикой гнойно-септических инфекций» (Санкт-Петербург, 1996). Для родовой и видовой идентификации микроорганизмов пользовались «Определителем бактерий Берд-жи» (1997). Для создания бескислородных условий применяли комбинированный метод с использованием вакуумного насоса (Россия, НВР-1,25 Д), микроанаэростата (Россия, АЭ-01).

Схема выделения анаэробных микроорганизмов из патологического материала, модифицированная нами, представлена на рисунке 1.

У анаэробов, выделенных от больных с кишечными инфекциями неясной этиологии и с гнойно-воспалительными инфекциями, изучали следующие факторы патогенности: адгезивность, персистенцию (антилизоцимная активность), токсичность (продукцию гемолизинов), каталазная и гемагтлютинирующая активности. 1 День.

Материал: гной, экссудат, аспират,

пунктат, кусочки тканей, кровь, -~===_объеюгы внешней среды.

11основныхтестов: ферментация глюкозы,лактозы, сахарозы, рамнозы, мальтозы иманнита; образование сероводорода, индола; восстановлениенитратов;гидролизэскулина, желатина.

6 дополнительных тестов: ферментация маннозы, ара-бинозы, инозита, ксилозы; чувствительность к желчи'разложение свернутой сыворотки.

4 День. Окончательная идентификация. Выдача результата

Рисунок 1. Схема выделения анаэробныхмикр о организмов изпатологического материала

Адгезивную способность бактерий определяли по методике В.И. Брилиса с соавт. (1986). Использовали эритроциты группы О (I) Rh+. При оценке адгезивных свойств микроба использовали показатели К и ИАМ: К (коэффициент участия эритроцитов в адгезивном процессе) - процент эритроцитов, имеющих на своей поверхности адгезированные микробы; ИАМ (индекс адге-зивности микроорганизма) — среднее количество микробных клеток на одном участвующем в адгезивном процессе эритроците. Бактерии дифференцировали на неадгезивные (ИАМ <= 1,75), низкоадгезивные (ИАМ = 1,76-2,5), среднеадгезивные (ИАМ = 2,51-4,0), и высокоадгезивные (ИАМ >= 4,0). Подсчет вели на 50 эритроцитах.

Антилизоцимную активность (АЛА) изучали по методике О.В. Бухарина с соавт. (1984), основанной на принципе «отсроченного антагонизма». Определения проводили в диапазоне концентраций от 1 до 7 мкг/мл. Для оценки уровня антилизоцим-ной активности были приняты следующие критерии: низкий уровень АЛА-1 -2 мкг/мл, средний - 3-5 мкг/мл, высокий - свыше 5 мкг/мл (Бозиев А.Б., 1993). В качестве тест - культуры использовался штамм Micrococcus luteus № 2665 (Институт им. Л.А. Тарасевича). Антилизоцимную активность микроорганизмов выражали в мкг/мл инактивированного лизоцима.

Определение каталазной активности: на поверхность покровного стекла наносили 2-3 капли 1% раствора перекиси водорода и вносили микробную культуру, взятую с плотной питательной среды в чашке Петри. Появление пузырьков газа свидетельствовало об образовании кислорода в результате расщепления перекиси водорода под действием каталазы анаэробных бактерий (Добрынин В.М., Каргальцева Н.М., Добрынина И.А.,1996).

Гемолитическую активность анаэробов изучали на агаре с добавлением 5% эритроцитов барана или человека. Культуры засевали уколом.

Наличие гемолиза учитывали через 24-48 ч. (Якушенко О.С. с соавт., 1991). Гемагглютинирующую способность изучали в

реакции гемагглютинации на полистероловых планшетах с 3% взвеси эритроцитов человека группы 0(1) Rh+.

Изучение наличия капсулы проводили путем окраски мазков методом негативного изображения капсул (R. Burn, 1909) и методом позитивного изображения капсул по модифицированному методу А.Н. Книга (Савельев В.Н., 1968).

Для определения патовара использовали схему И.М. Габриловича (1997).

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам проводили методом диффузии в агаре с помощью стандартных дисков производства ЗАО НИЦФ (г. Санкт-Петербург). Изучение продукции 6-лактамазы проводили с помощью дисков с нит-роцефином производства фирмы «БиоМерье» (Франция).

Полученные результаты подвергали статистической обработке общепринятыми методами на персональном компьютере PENTIUM 300 с использованием статистической программы Biostat (Гланц С, 1999) и с определением средней арифметической величины (М), показателей средней ошибки средней арифметической (m), среднего квадратичного отклонения (6). Для оценки достоверности распределения полученных данных в наблюдаемых группах использовали р критерий Стьюдента как обычный, так и с применением поправки Бонферонни, для большого количества групп - критерий согласия X2. (Каминский Л.С., 1964). Кроме того, определялся коэффициент корреляции (г).

Результаты и обсуждение

Частота выделения анаэробных бактерий от больных и здоровых людей представлена в таблице 1, из данных которой следует, что неспорообразующие анаэробные бактерии обнаруживаются у значительной части клинически здоровых людей - 77 - 84%. Это подтверждает известные факты о том, данные микроорганизмы являются представителями нормальной микрофлоры человека.

Вместе с тем, обнаружение бактероидов у больных, особенно при выявлении их в чистой культуре, не исключает их патоге-

нетическую роль в возникновении гнойно-воспалительных заболеваний. Спорообразующие анаэробы - клостридии - преимущественно обнаруживались в клиническом материале, взятом от больных людей.

Таблица 1. Частота выделения анаэробных бактерий

от больных и здоровых людей

Категории обследованных Количество обследованных Процент обнаружения анаэробов

Неслорообразующих Спорообразующих

1 .Гинекологические 66 70 30

больные

2.Хирургические больные с 77 48,8 51,2

гнойными ранами

3.Больные ОКИ не-

установленной

этиологии:

а) дети до 1 года; б) дети от 1 года до 54 59 66,7 52,5 33,3 47,5

14 лет;

в) взрослые 35 31,5 68,5

4.Клинически

здоровые люди: а)женщины (цервикальный канал); б) дети до 1 года (фекалии); в) дети от 1 года до 14 лет (фекалии); г) взрослые (фекалии) 100 51 52 52 82,6 77 80,4 84 17,4 23 19,6 16

Анализ данных по соотношению числа изолируемых споро-образующих и неспорообразующих анаэробных бактерий свидетельствует о преобладающем выделении штаммов неспоро-образующих анаэробов по сравнению со спорообразующими бактериями (в 2,3 раза чаще от больных и почти в 5 раз чаще, чем от клинически здоровых женщин). Это соотношение становится практически равным при обследовании людей с гнойно-воспалительными хирургическими заболеваниями.

Особый интерес представляли результаты микробиологического исследования больных с острыми кишечными инфекциями (ОКИ) неясной этиологии. Нами было установлено, что с увеличением возраста детей, страдающих ОКИ, возрастал процент выделения спорообразующих анаэробов с 33,3% до 47,5%; у взрослых частота выделения последних увеличивалась до 68,5%. У клинически здоровых детей в возрасте от 0 до 14 лет и у взрослых соотношение изолированных штаммов спорообразующих и неспорообразующих анаэробов в кишечнике составляло 1:3 (дети до 1 года); 1:4 (дети от 1 до 14 лет) и 1:5 (у взрослых).

1996). Вместе с тем следует отметить, что 87,2% штаммов Bacteroides fragilis, выделенных от больных гнойно-воспалительными заболеваниями гениталий и при гнойной раневой инфекции, имели хорошо выраженную капсулу. У клинически здоровых женщин изолированные представители этого вида анаэробных бактерий были инкапсулированы только в 33,3% случаев. 100% штаммов В. fragilis, обнаруженные у больных с острыми кишечными инфекциями, также характеризовались отчетливым капсулообразованием. Напротив, лишь 18,6% культур этих бактерий, выделенных из стула здоровых людей, имели капсулу.

Штаммы Clostridium perfringens, изолированные из организма гинекологических и хирургических больных с гнойно-воспалительными заболеваниями и острыми кишечными инфекциями, образовывали капсулу соответственно в 77 и 62,5% случаев. Лишь 25 % штаммов клостридий фекального происхождения, выделенных от клинически здоровых людей образовывали капсулу.

Родовые и видовые показатели биохимических тестов у всех изученных нами анаэробных бактерий совпадали с таковыми, полученными другими авторами (John G., Holt, Noel R. et al.,

1997). В то же время в ходе проведенных исследований нами было установлено, что преобладающая часть штаммов спорооб-разующих бактерий, выделенных от больных гнойно-воспали-

тельными и желудочно-кишечными заболеваниями, характеризовалась более выраженной биохимической активностью, чем культуры изолированные от здоровых людей. Биохимическая активность клинических штаммов Bacteroides, Fusobacterium, Peptostreptococcus anaerobius также была более выраженной, чем у изолятов этих бактерий, полученных от здоровых людей.

Основываясь на данных изучения культурально-морфологи-ческих и биохимических свойств 592 штаммов анаэробных бактерий, нами была предложена оптимизированная схема выделения и таксономической идентификации анаэробов из различного патологического материала. Данная схема, предусматривающая использование в качестве основных 11 биохимических тестов (ферментация глюкозы, лактозы, сахарозы, рамнозы, мальтозы, маннита; образование сероводорода, индола; восстановление нитратов; гидролиз эскулина, желатина) и 6 дополнительных тестов (ферментация маннозы, арабинозы, инозита, ксилозы; чувствительность к желчи; разложение свернутой сыворотки), дает возможность обнаруживать анаэробные бактерии с определением их чувствительности к антибактериальным препаратам на 1-2 суток быстрее, чем это предусмотрено существующими инструктивно-методическими документами.

Анализ частоты распространения различных групп микроорганизмов в структуре анаэробных бактерий показал, что среди грам-положительных микроорганизмов преобладали представители спо-рообразующих бактерий рода Clostridium и неспорообразующие представители родов Peptococcus и Peptostreptococcus. В структуре выделенных грамотрицательных анаэробных палочек доминировали Bacteroides fragilis. Представители Bacteroides vulgatus, Bacteroides ovatus, Bacteroides urealyticus, Prevotellamelaninogenica, Fusobacterium nucleatum, Veillonellaparvula, Actinomyces israilii изолировались из клинического материала в единичных случаях.

Среди анаэробных бактерий, выделенных от больных гнойно-воспалительными заболеваниями, доминировали штаммы неспорообразующих анаэробных бактерий, принадлежащие к родам Bacteroides, Peptostreptococcus, Peptococcus, Veillonella,

Fusobacterium. Спорообразующие анаэробы составляли одну треть от общего числа выделенных микроорганизмов.

Анаэробные микроорганизмы, выделенные от больных желудочно-кишечными заболеваниями, также преимущественно были представлены бесспоровыми анаэробами родов Bacteroides, Peptostreptococcus, Peptococcus, Veillonella, Fusobacterium, Prevotella; доля штаммов спорообразующих анаэробов рода Clostridium была немногим более одной трети от общего числа выделенных микроорганизмов.

Таким образом, штаммы анаэробных микроорганизмов, выделенные от больных с гнойно-воспалительными и желудочно-кишечными заболеваниями, чаще всего в таксономическом плане были представлены неспорообразующими бактериями, относящимися к родам Bacteroides, Peptostreptococcus, Peptococcus, Veillonella, Fusobacterium, Prevotella, что согласуется с наблюдениями и других отечественных и зарубежных авторов (Bartlett J. et al., 1977; Trevoux R. et al., 1977; Цвелев Ю.В., Кира Е.Ф., Ko-черовецВ.И., Баскаков В.П., 1995).

Представители вида В. fragilis выделялись из цервикального канала преимущественно в чистой культуре; при этом у гинекологических больных штаммы этих бактерий встречались в 2 раза чаще, чем у здоровых женщин. Штаммы Bacteroides ovatus изолировались только из материала, взятого от больных женщин. Пептострептококки практически одинаково часто встречались в цервикальном канале, как у больных, так и у клинически здоровых женщин. Частота изоляции В. urealyticus, F. nucleatum, Peptococcus niger, V. parvulla у женщин с гнойно-воспалительными процессами гениталий была в 2-3 раза ниже по сравнению с клинически здоровыми женщинами.

Схожая закономерность прослеживалась и при оценке роли клостридий как этиологических агентов гнойно-воспалительных процессов у гинекологических больных: штаммы С. perfringens обнаруживались только у больных женщин; С. septicum, С. novyi, С. histolyticum в 1,5 раза чаще встречались у здоровых людей; количество изолированных культур С.

sporogenes и С. sordellii было в 1,5-2 раза меньше у больных, чем у клинически здоровых женщин.

От больных с поражением желудочно-кишечного тракта штаммы В. fragilis выделялись с частотой, не превышающей уровень обнаружения данного вида анаэробов от здоровых людей во всех возрастных группах. Представители видов В. urealyticus и В. vulgatus обнаруживались в пробах стула только от больных старше 14 лет. Частоты обнаружения штаммов F. nucleatum, P. niger, Peptostreptococcus spp. у больных с острыми кишечными инфекциями практически не отличались от таковых у клинически здоровых людей. Следует отметить, что в группе людей старше 14 лет, больных острыми кишечными инфекциями, пептострепто-кокки вообще не обнаруживались.

Более определенно можно судить об этиопатогенетической роли клостридий в возникновении острых кишечных инфекций. Представители видов С. novyi, С. histolyticum, С. sporogenes были обнаружены только у больных во всех возрастных группах людей; С. perfringens, С. septicum выявлены у больных старше 14 лет, а С. sordellii - у больных детей в возрасте от 1 до 14 лет. В пробах стула здоровых детей в возрасте 1-14 лет были изолированы штаммы вида С. septicum, в группе старше 14 лет- С. sordellii.

Из гнойных ран хирургических больных преимущественно выделялись штаммы, таксономически принадлежащие видам В. fragilis и Peptostreptococcus spp., реже F. nucleatum, Actinomyces israilii, Peptococcus niger, V. parvulla, а также клостридий видов С. septicum, С. novyi, С. histolyticum, С. perfringens, С. sporogenes, С. sordellii, С. tetani.

Полученные данные свидетельствуют о неоднозначной патогенетической роли не только представителей различных видов, но и штаммов внутри видов анаэробных бактерий в развитии гнойно-воспалительных процессов у гинекологических больных и больных с острыми кишечными инфекциями.

Проблеме патогенности анаэробных микроорганизмов уделяется большое внимание при изучении их биологии. К сожалению, данные о патогенном потенциале этих микроорганизмов

остаются неполными и разрозненными. Лучше других изучены патогенные свойства клостридий, основными факторами пато-генности и вирулентности которых являются разнообразные экзотоксины и энзимы (ВИ±лег 1,1989).

При оценке патогенных свойств выделенных анаэробных микроорганизмов нами были исследованы такие факторы их па-тогенности как способность к адгезии, персистенции (антили-зоцимная и каталазная активность), токсичность (гемолитическая активность). В результате проведенных исследований нами было показано, что выделенные от больных гнойно-воспалительными и желудочно-кишечными заболеваниями культуры анаэробных бактерий, обладали различными наборами факторов па-тогенности: адгезинами, с помощью которых происходит фиксация возбудителя на эпителиальных клетках слизистых оболочек организма; антилизоцимной и каталазной активностями, обеспечивающими микроорганизмам способность к длительной персистенции, а так же гемолитической активностью.

Нами установлено, что из 592 исследованных культур анаэробов 424 (71,6%) обладали адгезивной активностью. В группе больных с гнойно-воспалительными заболеваниями из 166 штам-мов'анаэробов 152 (91,5%) обладали подобной активностью. В группе больных кишечными инфекциями 97,5 % штаммов были способны адгезироваться к эритроцитам. Напротив, штаммы анаэробных бактерий, выделенные из цервикального канала и фекалий здоровых людей, характеризовались адгезивной активностью лишь соответственно в 43,5 % и 44 % случаев. При этом от больных с гнойно-воспалительными заболеваниями гениталий выделялись анаэробы с высокой и средней степенью адгезивнос-ти; схожие результаты наблюдались и у анаэробных микроорганизмов, выделенных от больных с кишечными инфекциями. Адгезивная активность штаммов, выделенных из цервикального канала и фекалий здоровых людей, была достоверно ниже (р< 0,05). При этом штаммы цервикального и фекального происхождения обладали низкой и реже - средней адгезивной активностью.

Таким образом, адгезивность как признак, характеризующий

патогенность бактерий, обнаруживался у анаэробных возбудителей гнойно-воспалительных и желудочно-кишечных заболеваний в среднем с частотой 94,5%. Нами не было отмечено статистически достоверных различий в частоте обнаружения адге-зивноактивных штаммов анаэробных бактерий, выделенных от больных с гнойно-воспалительными заболеваниями женской репродуктивной системы, гнойными хирургическими и желудочно-кишечными заболеваниями. Так же не было выявлено статистически достоверных различий в адгезивной активности изученных анаэробов, выделенных от больных с кишечными инфекциями в разных возрастных группах (р>0,05).

Установлено, что антилизоцимной активностью (АЛА) обладали 52,3 % изученных штаммов анаэробных микроорганизмов. Частота данного признака у культур, выделенных от больных с гнойно-воспалительными и желудочно-кишечными заболеваниями, была выше и составила 73,8% и 74,8% соответственно, по сравнению с 23% (из цервикального канала здоровых женщин) и 24,8% (из фекалий здоровых людей) в контрольной группе.

При изучении каталазной активности (КА) было показано, что этот признак характерен только для представителей рода Бас1его1ёе8, у остальных изученных нами анаэробных микроорганизмов данный признак не наблюдался. Примечательно, что все штаммы Бас1его1ёе$, выделенные от больных гнойно-воспалительными, кишечными заболеваниями и из цервикального канала здоровых женщин, обладали каталазной активностью. Штаммы же бактероидов из фекалий здоровых людей лишь в 71,1% случаев обладали КА.

Способность вызывать патологические изменения в клетках организма человека у анаэробных бактерий связана с продукций различных токсинов, в число которых входят и гемотоксины. У анаэробных микроорганизмов нами было изучена продукция а-гемолизинов, которые обеспечивают гемолиз эритроцитов человека. Установлено, что среди анаэробных бактерий, выделенных от больных с гнойно-воспалительными и желудочно-кишечными заболеваниями, наиболее часто выделялись штаммы, обладающие гемолитической активнос-

тью (82,4% и 74,2% соответственно). Гемолитическая активность анаэробных бактерий, выделенных из цервикального канала здоровых женщин и из фекалий здоровых людей, наблюдалась значительно ниже (24% и 19,6% штаммов соответственно).

Проведенные исследования дают основание характеризовать культуры анаэробных микроорганизмов, изолированные при гнойно-воспалительных и кишечных заболеваниях, как обладающие различным набором отдельных детерминант вирулентности: способность к адгезии, антилизоцимная, каталазная и гемолитическая активности. Полученные данные подтверждают, что перечисленные факторы могут обеспечивать патогенный потенциал анаэробных бактерий при развитии инфекционных процессов различной локализации. Однако, по нашему мнению, рассмотренные признаки патогенности у изолированных нами анаэробных бактерий ответственны скорее за степень выраженности протекания патологического процесса, но не связаны с детерминированием его локализации.

У изученных нами штаммов анаэробных бактерий маркеры патогенности присутствовали в разных сочетаниях, то есть каждый штамм обладал специфическим спектром этих признаков. Это дало нам основание использовать данную микробиологическую характеристику анаэробных бактерий для дифференциации (типирования) клинических изолятов этих бактерий.

На основании определения комплекса факторов патогеннос-ти возможно осуществить маркирование штамма, выделенного при каждом гнойно-воспалительном или желудочно-кишечном заболевании. Каждый штамм по нашим данным мог быть отнесен к тому или иному патовару на основании совокупности трех основных факторов патогенности: адгезивности, персистенции (АЛА) и токсичности (гемолитической активности). Распределение изученных штаммов анаэробных бактерий по патоварам показало, что штаммы, выделенные от больных гнойно-воспалительными заболеваниями в Ставропольском крае, были представлены 4 патоварами, от больных желудочно-кишечными заболеваниями - 5-ю; штаммы, выделенные из цервикального ка-

нала здоровых женщин - 5-ю; из фекалий здоровых людей - 6-ю патоварами.

Наибольшее количество изолятов по всем нозологическим формам инфекционных поражений было отнесено к 1-му, 2-му и 5-му патоварам, которые характеризовались наличием у них таких факторов патогенности, как способность к адгезии, пер-систенции (АЛА) (исключая 5-й патовар) и токсичности (исключая 2-й патовар). Изученные анаэробные микроорганизмы, выделенные от здоровых людей, в большинстве своем относились к 3-му и 7-му патоварам; при этом 3-й патовар характеризовался только наличием фактора адгезии; а штаммы 7-го патовара характеризовались отсутствием всех факторов патогенности. Анализ полученных нами результатов позволил нам придти к заключению, что патовар может характеризовать эпидемическую значимость конкретного штамма анаэробных бактерий, хотя патогенное воздействие изолятов других патоваров на организм человека это полностью не исключает.

Увеличение роли анаэробных микроорганизмов в возникновении различных поражений человека связано не только с их патогенностью. Важной причиной распространения анаэробной инфекции является формирование штаммов анаэробов, резистентных к антибиотикам, в том числе и к новым антибактериальным препаратам. Это обуславливает необходимость поиска наиболее эффективных средств этиотропной терапии при анаэробной инфекции.

С этой целью нами изучена чувствительность 323 штаммов анаэробных микроорганизмов к широко применяемым в клинической практике антибиотикам. Установлено (таблица 2), что все исследованные штаммы анаэробов оказались чувствительными к метронидазолу и имипенему. В то же время 29,7 % больных с гнойно-воспалительными и 32,1% штаммов от больных желудочно-кишечными заболеваниями обладали полирезистентностью, то есть были одновременно устойчивы к 5 антибиотикам (бензилпенициллин, цефотаксим, тетрациклин, эритромицин, левом ицетин).

Таблица 2. Чувствительность анаэробов к антибиотикам

^Антибиотики Вид анаэробов4 Пенициллин Ампициллин Цефокситин 2 s 9 s •е. ä Имипенем Тетрациклин Эритромицин Азитромицин Клиндамицин Левомицетин § Ж 0 fr 0)

В. ftagiüs R 62/81 70/92 33/42 4Ш о/о 44/58 31/41 15/21 28/37 7/9 о/о

S 14/19 6/8 43/58 30/40 76/100 32/42 45/59 61/79 48/63 69/91 76/100

Bacteroides R 7/78 5/56 3/33 3/33 о/о 6/67 5/56 2/22 4/44 1/11 0/0

другие S 2/22 4/44 6/67 6/67 9/100 3/33 4/44 7/78 5/56 8/89 9/100

F. ouclea- R 15/71 16/76 8/38 11/52 о/о 10/48 18/86 10/48 9/43 8/38 0/0

tum S 6/29 5/24 13/62 10/48 21/100 11/52 3/14 11/52 12/57 13/62 21/100

Veillonella R 3/33 8/89 1/11 2/22 о/о 7/78 5/56 4/44 0/0 6/67 0/0

parvula S 6/67 1/11 8/89 7/78 9/100 2/22 4/44 5/56 9/100 3/33 9/100

Peptococ- R И/85 9/69 4/31 5/39 о/о 8/62 8/62 2/15 1/8 13/100 0/0

cusmger S 2/15 4/31 9/69 8/61 13/100 5/38 5/38 11/85 12/92 0/0 13/100

Peptostrepto- R 32/62 39/75 32/62 29/56 о/о 35/68 48/87 23/44 12/23 18/35 о/о

coccusspp S 20/38 13/25 20/38 23/44 52/100 17/32 4/13 29/56 40/77 34/65 52/100

Clostndium R 85/59 140/98 41/29 101/71 о/о 125/87 56/39 45/32 47/33 126/88 2/1

SPP- S 58/41 3/2 102/71 42/29 143/100 18/13 87/61 98/68 96/67 17/12 141/99

, Примечание: R - штаммы анаэробов резистентные к антибиотикам; S

- штаммы чувствительные; в числители - число штаммов; в знаменателе

- процент штаммов

Учитывая данные литературы об устойчивости анаэробов к ß- лактамным антибиотикам (Hedberg M., Nord C.E., 1986; Nord C.E., 1986; Nord C.E., Hedberg M, 1990;BushK, 1989;Rasmussen B.A., Bush K., Tally F.P., 1989), мы провели дополнительные исследования по оценке распространенности признака продукции ß-лактамаз у выделенных штаммов анаэробных микроорганизмов. При этом нами было установлено, что 3 3 % изученных штаммов образовывали ß- лактамазу. Из 68 штаммов анаэробов, выделенных при гнойно-воспалительных заболеваниях, продуцировали ß- лактамазу 50% культур; из 95 штаммов анаэробов, выделенных от больных с желудочно-кишечными инфекциями, этим свойством обладали 43,2% штаммов. Анаэробные бактерии, выделенные от здоровых людей, и способные продуцировать ß- лактамазу,

наблюдались в основном у людей, которым в течение последних 6 месяцев проводили антибактериальную терапию 6-лактамны-ми антибиотиками. Распределение штаммов анаэробных бактерий, продуцирующих р - лактамазу, при гнойно-воспалительных и острых кишечных заболеваниях представлены на рисунке 2.

Рисунок 2. Частота обнаружения штаммов анаэробных бак -терий, продуцирующих В-лактамазы приразличных гнойно-воспалительных и острых кишечных заболеваниях

Полученные результаты позволяют сделать заключение о необходимости предварительного определения чувствительности выделенных культур анаэробных микроорганизмов к антибактериальным препаратам, в том числе последних поколений, с целью назначения адекватного лечения. Для рационального использования большой группы 6-лактамных антибиотиков у исследуемых культур целесообразно также определять продукцию 6-

лактамаз. Для экстренной терапии анаэробной инфекции оправдано назначение имипенема (6- лактамного антибиотика группы карбопенемов) и метронидазола (группы 5-нитроими-дазолов).

Таким образом, нами на достаточно большом клиническом материале изучена частота обнаружения анаэробных бактерий у больных гнойно-воспалительными заболеваниями различной локализации. Сформирована коллекция, состоящая из более 500 штаммов таксономически охарактеризованных анаэробных бактерий, изолированных от больных и здоровых людей; оптимизирована схема выделения и идентификации анаэробных бактерий из патологического материала. Штаммы анаэробных бактерий, возбудителей гнойно-воспалительных и желудочно-кишечных заболеваний, также охарактеризованы по наличию у них как отдельных факторов патогенности, так и их комплексов. Определена возможность типирования штаммов анаэробных бактерий, причастных к гнойно-воспалительным и желудочно-кишечным заболеваниям, на основании наличия у них совокупности отдельных факторов патогенности. Установлено отсутствие достоверной взаимосвязи между наличием у госпитальных штаммов анаэробных бактерий способности к адгезии, антилизоцим-ной и каталазной активности, наличие а-гемолизинов и клинической формой инфекционного процесса (гнойно-воспалительные гинекологические заболевания, гнойные раны хирургических больных, острые кишечные заболевания). Предложено на основании наличия у отдельных штаммов анаэробных бактерий совокупности признаков (адгезивности, персистентности и токсичности) проводить их дифференциацию (типирование), что имеет определенное значение для оценки их патогенного потенциала, а также для осуществления эпидемиологического мониторинга госпитальных инфекций, обусловленных анаэробными микроорганизмами.

Выявлена широкая циркуляция в Ставропольском крае штаммов анаэробных бактерий, обладающих полирезистентностью

ко многим антибиотикам, применяемым в настоящее время в практическом здравоохранении, в том числе и к препаратам последнего поколения. Это определяет необходимость перед назначением адекватной этиотропной терапии, определять чувствительность клинически значимых штаммов анаэробных микроорганизмов к антимикробным препаратам. Рекомендовано для экстренной терапии анаэробной инфекции у больных в Ставропольском крае использовать как химиопрепараты выбора ими-пенем и метронидазол.

ВЫВОДЫ.

1. Оптимизирована схема выделения анаэробных бактерий, присутствующих в различном патологическом материале, позволяющая сократить время бактериологического исследования на 1-2 суток, и схема родовой / видовой идентификации подавляющего большинства клинических изолятов этой группы микроорганизмов на основе использования 11 основных и 6 дополнительных тестов.

2. При бактериологическом исследовании 546 больных с различными гнойно-воспалительными и желудочно-кишечными заболеваниями, а также здоровых людей, выделено и таксономически охарактеризовано 592 штамма анаэробных бактерий. Среди изолированных штаммов доминировали неспорообразующие анаэробные бактерии (до 70%), преимущественно представленные представителями родов Bacteroides, Peptococcus, Peptostreptococcus, Veillonella, Fusobacterium и Prevotella. Среди спорообразующих анаэробов преобладали представители видов С. perfringens, С. septicum и С. histolyticum.

3. Штаммы анаэробных бактерий, выделенные от больных гнойно-воспалительными и острыми кишечными инфекциями, обладали признаками патогенности в различных сочетаниях. 71,6% изолированных культур обладали адгезивной активностью, 52,3% - антилизоцимной активностью, 87,2% штаммов продуцировали каталазу и 78,3% - а-гемолизины.

4. Разработана схема типирования штаммов анаэробных бактерий, ассоциируемых с гнойно-воспалительными и острыми кишечными заболеваниями, на различные патовары в зависимости от наличия у микроорганизмов тех или иных факторов пато-генности (способность к адгезии, каталазная, антилизоцимная активность, продукция гемолизина) или их сочетаний. Клинические изоляты анаэробных бактерий преимущественно относились к 1-му, 2-му или 5-му патоварам. Штаммы анаэробных бактерий, выделенные от здоровых людей, как правило, относились к 3-му и 7-му патоварам.

5. Клинические штаммы анаэробных бактерий, изолируемые от больных, обладали резистентностью к большинству антибактериальных препаратов, используемых в лечебных целях в Ставропольском крае. 43,5% культур этих микроорганизмов продуцировали 6-лактамазу. Для экстренной химиотерапии анаэробной инфекции в данном регионе в качестве антимикробных препаратов выбора рекомендовано использовать имипенем и мет-ронидазол.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Сухина МА Морфологические и биохимические свойства анаэробных микробов, выделенных от больных с гнойно-воспалительными заболеваниями. - // Актуальные проблемы эпидемиологической безопасности: Матер, юбилейной науч.-практ. конф. «Эпидемиологическая безопасность на Кавказе. Итоги и перспективы», поев. 50-летию СтавНИПЧИ (16-16 октября 2002 г.). - Ставрополь, 2002 г.-С. 259-263.

2. Сухина МА, Савельев В.Н. Видовой состав анаэробов при гнойно-воспалительных заболеваниях. - // Актуальные проблемы эпидемиологической безопасности: Матер, юбилейной науч.-практ. конф. «Эпидемиологическая безопасность на Кавказе. Итоги и перспективы», поев. 50-летию СтавНИПЧИ (16-16 октября 2002 г.). - Ставрополь, 2002 г.-С. 263-265.

3. Сухина МА, Шатохина Т.Г. Характеристика возбудителей анаэробной инфекции при гнойно-воспалительных и кишечных заболеваниях. -//Материалы науч.-прак. конференции «Здоровье населения и среда обитания», поев. 80-летию образования государственной санитарно-эпидемиологической службы Российской Федерации. - Пятигорск, 2002 г. - С. 116-119.

4. Сухина МА Адгезивная активность анаэробных бактерий. // Актуальные проблемы медицины (Сборник научных трудов) том 3 № 2, Томск, 2004 г. - С. 326-327.

5. Сухина М.А. Патотипирование анаэробных бактерий. // Актуальные проблемы медицины (Сборник научных трудов) том 3 № 2, Томск, 2004 г.- С. 325-326.

6. Сухина МА., Савельев В.Н. Анаэробная микрофлора гнойных хирургических больных. - // Социально-гигиенические и эпидемиологические проблемы сохранения

здоровья военнослужащих и населения. Научные труды Федерального научного центра им. Ф.Ф. Эрисмана, вып. 11, Нижний Новгород, 2004 г. - С. 385.

7. СухинаМА, Савельев В.Н. Анаэробная микрофлора при поражении желудочно-кишечного тракта у детей. - // Материалы науч.-прак. конф. «Здоровье населения и среда обитания», «Восьмая ежегодная неделя медицины Ставрополья», Ставрополь, 2004 г. - С. 134-136.

8. СухинаМ.А., Савельев В.Н. Продукция ß-лактамаз у анаэробных бактерий, выделенных от больных и здоровых людей. - // Материалы Всероссийской науч.прак. конф. «Медицинская микробиология - XXI век» (28-30 сентября 2004 г., Саратов). - Саратов, 2004 г. - С. 213-214.

9. Сухина М.А., Савельев В.Н., Герасименко A.A. Роль анаэробных микробов в патологии человека. Факторы пато-генности анаэробов (обзор литературы). - // Рукопись депонирована в ВИНИТИ, 08.01.04 г., № 22 - В.

10. Сухина М. А., Савельев В. Н. Эпидемиология и пато-генность клинически значимых анаэробов. - // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. - 2005 г. - № 1.

Подписано в печать 20.01.2005 г. Зак. № 156. Тираж 100 экз. Усл. п. л. 1,75

ГУП СК «Кировская районная типография»

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Сухина, Марина Алексеевна

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИИ И СОКРАЩЕНИИ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Роль анаэробных микробов в патологии человека.

1.2. Номенклатура и классификация анаэробов.

1.3. Факторы патогенности анаэробов.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. 2.1. Материалы.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Методика создания анаэробиоза.

2.2.2. Подготовка транспортных сред и приспособлений для взятия проб.

2.2.3.Посев патологического материала, приготовление нативных мазков.

2.2.4. Видовая идентификация выделенных культур анаэробных микроорганизмов.

2.2.5. Изучение вирулентности анаэробов.

2.3.Определение чувствительности анаэробов к антибиотикам.

2.4. Статистическая обработка результатов исследований.

ГЛАВА 3. ЧАСТОТА ОБНАРУЖЕНИЯ АНАЭРОБОВ У БОЛЬНЫХ

И ЗДОРОВЫХ ЛЮДЕЙ.

3.1. Видовой состав анаэробов у больных и здоровых людей.

3.2. Патогенетическая роль анаэробных микроорганизмов.

ГЛАВА 4. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА АНАЭРОБОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ БОЛЬНЫХ И ЗДОРОВЫХ ЛЮДЕЙ.

4.1. Изучение морфологических, культу ральных и биохимических свойств анаэробов.

4.1.1. Морфологические свойства.

4.1.2. Культуральные свойства анаэробов.

4.1.3. Биохимические свойства анаэробов.

ГЛАВА 5. ФАКТОРЫ ПАТОГЕННОСТИ АНАЭРОБОВ, ИЗОЛИРОВАННЫХ ОТ БОЛЬНЫХ ПРИ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ И ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ.

5.1. Исследование адгезивных свойств.

5.2. Персистирующая способность анаэробов при гнойно-воспалительном процессе в организме человека.

5.3. Гемолитические свойства анаэробов.

5.4. Распределение изученных штаммов анаэробов по патоварам.

ГЛАВА 6. ИЗУЧЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АНТИБИОТИКАМ

ШТАММОВ АНАЭРОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ПРИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ПРОЦЕССАХ РАЗЛИЧНОЙ ЛОКАЛИЗАЦИИ В ОРГАНИЗМЕ ЧЕЛОВЕКА.

6.1. Чувствительность анаэробов к антибиотикам.

6.2. Тактика лечения острых кишечных и гнойно-воспалительных заболеваний, обусловленных или осложненных анаэробами.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Характеристика анаэробных бактерий при гнойно-воспалительных и желудочно-кишечных заболеваниях"

Актуальность проблемы

Анаэробная инфекция известна более 150 лет, когда A. Velpean впервые в 1839 г. описал клинику газовой гангрены. В начале XX в. заболевания, вызываемые анаэробами, выделились в самостоятельный раздел, в который входят 3 группы болезней: гнойно-воспалительные; столбняк, ботулизм; гангрена мягких тканей. Последние две группы, обусловленные клостри-диями, в представлении врачей являются главенствующей формой анаэробных поражений. Вместе с тем клостридии составляют очень небольшую часть встречающихся у человека анаэробов - около 5%. В то же время существует гораздо более значительная группа патогенных для человека анаэробов, которые не образуют спор. Среди них клиническое значение имеют представители родов Bacteroides, Fusobacterium (грамотрицательные палочки), Peptococcus и Peptostreptococcus (грамположительные кокки), Veillonella, Actinomyces. Вызываемые ими заболевания часто называют неклостридиальными анаэробными инфекциями.

Анаэробные бактерии представляют существенную часть нормальной микрофлоры человека и имеют большое значение при смешанных инфекциях. Смешанный характер клинических инфекций объясняется тем, что при повреждении слизистых оболочек в ткани попадают все бактерии, населяющие данный участок тела. При углублении гипоксии анаэробы становятся ведущим фактором деструктивного процесса. По данным D. Scevola (1998) ответственными за хирургическую инфекцию являются 7 видов бактерий, 2 из которых - анаэробы (бактероиды и клостридии). Большинство анаэробных инфекций эндогенны, отсюда вытекает их клиническая особенность - близость к местам естественного обитания анаэробов - желудочно-кишечный тракт, верхние дыхательные пути, половые органы. При этом анаэробная инфекция развивается на фоне повреждения слизистых оболочек.

Известна роль анаэробов в поражении желудочно-кишечного тракта. Так, С. perfringens считается самым распространенным видом при пищевых отравлениях микробной природы. Другой представитель клостридий - С. difficile является этиологическим фактором псевдомембранозного колита и причиной внутрибольничных диарей.

Однако роль анаэробов в возникновении широкого спектра хирургических инфекций, равно как и при поражении желудочно-кишечного тракта, в литературе освещена недостаточно. Это объясняется трудностями, связанными с обнаружением и выделением анаэробов, их идентификацией, а также слабой изученностью факторов патогенности этой группы микроорганизмов. В последние годы сообщается об увеличении резистентности анаэробов к различным антибактериальным препаратам. Поэтому знание чувствительности региональных клинически значимых штаммов анаэробных бактерий к антибиотикам приобретает важное значение при выборе эффективных этиотропных средств.

Вышеизложенное явилось обоснованием актуальности проведения настоящего диссертационного исследования, направленного на определение спектра доминирующих анаэробных бактерий, причастных к возникновению желудочно-кишечных и гнойно-воспалительных заболеваний, и детальное изучение их биологических свойств.

Задачи исследования:

1. Изучить частоту обнаружения и таксономическую принадлежность анаэробных бактерий, выделенных от больных с различными гнойно-воспалительными и желудочно-кишечными заболеваниями, а также от здоровых людей, проживающих в Ставропольском крае.

4. Разработать критерии и схему внутривидового типирования клинических изолятов анаэробных бактерий на основе определения присутствия у них отдельных факторов патогенности и их комплексов.

5. Изучить чувствительность клинических штаммов анаэробных бактерий к антибактериальным препаратам. Предложить эффективные антибактериальные препараты для терапии больных в Ставропольском крае с гнойно-воспалительными и острыми кишечными анаэробными инфекциями.

Научная новизна работы.

Проведена детальная таксономическая характеристика более 500 штаммов анаэробных бактерий, выделенных от здоровых людей и больных гнойно-воспалительными и желудочно-кишечными заболеваниями. Среди клинических изолятов преобладали представители В. fragilis, Peptostreptococcus, F. nucleatum, С. septicum, С. histolyticum.

Штаммы анаэробных бактерий, причастные к гнойно-воспалительным и желудочно-кишечным заболеваниям, обладали различными наборами факторов патогенности (способность к адгезии, антилизоцимная и катал аз ная активности, продукция а-гемолизинов); определена возможность типирова-ния штаммов анаэробных бактерий на основании наличия у них совокупности отдельных факторов патогенности, что имеет значение для оценки их патогенетической роли при гнойно-воспалительных и желудочно-кишечных заболеваниях, а также при мониторинге госпитальных инфекций, обусловленных анаэробами.

Установлено отсутствие достоверной взаимосвязи между наличием у госпитальных штаммов анаэробных бактерий тех или иных факторов патогенности и локализацией инфекционного процесса (гнойно-воспапитель-ные гинекологические заболевания, гнойные раны хирургических больных, острые кишечные заболевания).

Практическая значимость работы.

Внедрения результатов работы.

По результатам работы подготовлены «Методические рекомендации по патотипированию анаэробных бактерий» и «Методические рекомендации по выделению и идентификации возбудителей анаэробной инфекции», которые одобрены Ученым Советом (протокол № 10 от 27 ноября 2003г. и № 1 от 29 января 2004 г.) и утверждены директором Ставропольского научно-исследовательского противочумного института. Указанные методические документы используются в работе бактериологических лабораторий больниц и центров Госсанэпиднадзора Ставропольского края (подтверждено соответствующими актами о внедрении результатов НИР).

Апробация работы.

Публикации.

Основное содержание работы отражено в 10 публикациях.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Анаэробные неспорообразующие бактерии, наряду со спорообра-зующими, играют существенную патогенетическую роль в возникновении гнойно-воспалительных заболеваний у гинекологических и хирургических больных, а также при острых кишечных инфекциях в Ставропольском крае.

2. Клинические изоляты анаэробных бактерий характеризуются отсутствием достоверной взаимосвязи между наличием у них факторов патогенности (адгезия к эритроцитам, наличие антилизоцимной и каталазной активности, продукция а-гемолизина) и нозологическими формами инфекционных поражений, вызываемых этими микроорганизмами.

3. Наличие и совокупность отдельных факторов патогенности у клинических штаммов анаэробных бактерий могут быть использованы для оценки их патогенного потенциала, а также для внутривидового типирования с целью мониторинга госпитальных инфекций, вызванных этими микроорганизмами.

Структура и объем диссертации.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Сухина, Марина Алексеевна

ВЫВОДЫ.

2. При бактериологическом исследовании 546 больных с различными гнойно-воспалительными и кишечными заболеваниями, а также здоровых людей, выделено и таксономически охарактеризовано 592 штамма анаэробных бактерий. Среди изолированных штаммов доминировали неспорообразующие анаэробные бактерии (до 70%), преимущественно представленные представителями родов Bacteroides, Peptococcus, Peptostreptococcus, Veillonella, Fusobacterium и Prevotella. Среди спорообразующих анаэробов преобладали представители видов С. perfringens, С. septicum и С. histolyticum.

4. Разработана схема типирования штаммов анаэробных бактерий, ассоциируемых с гнойно-воспалительными и острыми килечными заболеваниями, на различные патовары в зависимости от наличия у микроорганизмов тех или иных факторов патогенности (способность к адгезии, каталазная, антилизоцимная активность, продукция гемолизина) или их сочетаний. Клинические изоляты анаэробных бактерий преимущественно относились к 1-му, 2-му или 5-му патоварам. Штаммы анаэробных бактерий, выделенные от здоровых людей, как правило, относились к 3-му и 7-му патоварам.

5. Клинические штаммы анаэробных бактерий, изолируемые от больных, обладали резистентностью к большинству антибактериальных препаратов, используемых в лечебных целях в Ставропольском крае. 43,5% культур этих микроорганизмов продуцировали {3-лактамазу. Для экстренной химиотерапии анаэробной инфекции в данном регионе в качестве антимикробных препаратов выбора рекомендовано использовать имипенем и метронидазол.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Исследования последних лет свидетельствуют, что анаэробные микроорганизмы и их ассоциации с аэробами играют важную роль в развитии острой и хронической инфекции. Несмотря на то, что клостридиалъные и не-клостридиальные инфекции представляют собой по сути одну группу анаэробных воспалительных процессов, они обладают многими клиническими особенностями, обусловленными, прежде всего, различными биологическими свойствами возбудителей. Исследования по определению численности и состава нормальной микрофлоры человеческого тела являются основным критерием оценки его функционального состояния (Macfarlane S., 1990; Brook I., 1999). Эндогенный характер большинства анаэробных инфекций обуславливает их клиническую особенность. При этом спектр анаэробной микрофлоры является доминирующей по численности и наименее изученной частью микроорганизмов, вызывающих гнойно-воспалительные и желудочно-кишечные заболевания (Дедов И.И. с соавт., 1993; Елагина М.М., 2000).

В настоящей работе нами изучено 592 штамма анаэробных бактерий, изолированных от больных с гнойно-воспалительными заболеваниями из хирургического и гинекологического стационаров (166 штамма), острыми желудочно-кишечными инфекциями неясной этиологии (159 штаммов) и от клинически здоровых людей (267 штаммов).

Морфологические и культуральные характеристики выделенных нами анаэробных микроорганизмов в целом не отличались от данных литературы (Кира Е.Ф., 1988; Зубков М.Н. с соавт., 1996). Вместе с тем отмечено, что Bacteroides fragilis, выделенные от больных гнойно-воспалительными заболеваниями гениталий и при гнойной раневой инфекции, образовывали в 87,2% случаев капсулу. У клинически здоровых женщин этот вид анаэробных бактерий был капсулирован только в 33,3% случаев. У 100% штаммов В. fragilis, обнаруженных у больных острыми кишечными инфекциями, также выявлена хорошо развитая капсула. Данный вид анаэробов, выделенный из стула здоровых людей, имел капсулу лишь у 18,6% штаммов.

Clostridium perfringens в организме гинекологических и хирургических больных гнойно-воспалительными заболеваниями и острыми кишечными инфекциями образовывал капсулу соответственно в 83,3 % и 62,5% случаев. В пробах стула клинически здоровых людей капсулообразование отмечено только в 25% случаев.

Значения биохимических тестов у изученных нами бактерий соответствуют биохимической характеристике анаэробных микроорганизмов как на уровне рода, так и на уровне вида (John G., Holt, Noel R. et al., 1997). В то же время в ходе проведенных исследований установлено, что преобладающая часть спорообразующих бактерий, выделенных из диагностических материалов больных гнойно-воспалительными и желудочно-кишечными заболеваниями, характеризовалась большей биохимической активностью, чем штаммы, выделенные от здоровых людей. Так же более биохимически активными оказались штаммы Bacteroides, Fusobacterium, Peptostreptococcus anaerobius, выделенные от больных людей.

На основании изучения культурально-морфологических и биохимических свойств 592 штаммов анаэробных бактерий разработана схема выделения и идентификации анаэробов из различного патологического материала. Данная схема, предусматривающая использовать в качестве основных 11 тестов (ферментация глюкозы, лактозы, сахарозы, рамнозы, мальтозы, маннита; образование сероводорода, индола; восстановление нитратов; гидролиз эску-лина, желатина) и 6 дополнительных (ферментация маннозы, арабинозы, инозита, ксилозы; чувствительность к желчи; разложение свернутой сыворотки), дает возможность обнаруживать анаэробы с определением чувствительности к антибактериальным препаратам на 1-2 суток быстрее, чем предусмотрено существующими инструктивно-методическими документами.

При изучении частоты встречаемости различных групп микроорганизмов в структуре анаэробных бактерий было отмечено, что среди грампо-ложительных микроорганизмов преобладали представители спорообразующих бактерий рода Clostridium и неспорообразующие представители родов Peptococcus и Peptostreptococcus. В структуре выделенных грамотрицатель-ных анаэробных палочек доминировали Bacteroides fragilis. Остальная часть выделенных микроорганизмов была представлена единичными штаммами: Bacteroides vulgatus, Bacteroides ovatus, Bacteroides urealyticus, Prevotella mellaninogenica, Fusobacterium nucleatum, Veillonella parvula, Actinomyces israilii.

Среди анаэробных бактерий, выделенных от больных гнойно-воспалительными заболеваниями, доминировали неспорообразующие анаэробы родов Bacteroides, Peptostreptococcus, Peptococcus, Veillonella, Fusobacterium. Спорообразующие анаэробы составляли одну треть от общего числа выделенных микроорганизмов.

Анаэробные микроорганизмы, выделенные от больных желудочно-кишечными заболеваниями, так же представлены бесспоровыми анаэробами родов Bacteroides, Peptostreptococcus, Peptococcus, Veillonella, Fusobacterium, Prevotella; доля спорообразующих анаэробов рода Clostridium составила немногим более одной трети от общего числа выделенных микроорганизмов.

Таким образом, анаэробные микроорганизмы, выделенные от больных с гнойно-воспалительными и желудочно-кишечными заболеваниями, чаще всего были представлены неспорообразующими бактериями родов Bacteroides, Peptostreptococcus, Peptococcus, Veillonella, Fusobacterium, Prevotella, что согласуется с данными литературы отечественных и зарубежных авторов (Bartlett J. et al., 1977; Trevoux R. et al., 1977; Цвелев Ю.В., Кира Е.Ф., Кочеровец В.И., Баскаков В.П., 1995).

Что касается частоты обнаружения отдельных видов анаэробов, то установлено, что В. fragilis, выделенные из цервикального канала преимущественно в чистой культуре, у гинекологических больных встречались в 2 раза чаще, чем у здоровых женщин. Только у больных обнаружены Bacteroides ovatus. Пептострептококки практически одинаково часто встречались в цервикальном канале, как у больных, так и у клинически здоровых женщин. В то же время количество В. urealyticus, F. nucleatum, Peptococcus niger, V. parvula при гнойно-воспалительных процессах гениталий было в 2-3 раза снижено по сравнению с клинически здоровыми женщинами.

Такая же закономерность прослеживается и при оценке роли клостри-дий как этиологических факторов гнойно-воспалительных процессов у гинекологических больных: С. perfringens обнаруживались только у больных женщин; С. septicum, С. novyi, С. histolyticum в 1,5 раза чаще встречались у здоровых женщин, а количество С. sporogenes и С. sordellii было в 1,5-2 раза меньше, чем у клинически здоровых женщин.

От больных с поражением желудочно-кишечного тракта В. fragilis выделены с частотой, не превышающей уровень обнаружения данного вида анаэробов от здоровых людей во всех возрастных группах. В. urealyticus и В. vulgatus обнаруживались в пробах стула только от больных людей старше 14 лет. Частота обнаружения F. nucleatum, P. niger, Peptostreptococcus spp. у больных с острыми кишечными инфекциями практически не отличались от таковой у клинически здоровых людей. Следует отметить, что в группе людей старше 14 лет, больных ОКИ, пептострептококки вообще не обнаруживались.

Более определенно можно судить об этиопатогенетической роли клост-ридий в возникновении острых кишечных инфекций. С. novyi, С. histolyticum, С. sporogenes обнаружены только у больных во всех возрастных группах людей; С. perfringens, С. septicum выявлены у больных старше 14 лет, а С. sordellii - у больных детей в возрасте от 1 до 14 лет. В пробах стула здоровых детей в возрасте 1-14 лет изолированы С. septicum, в группе старше 14 лет - С. sordellii.

Из гнойных ран хирургических больных преимущественно выделяли В. fragilis и Peptostreptococcus spp., реже F. nucleatum, Actinomyces israilii, Peptococcus niger, V. parvula, а также клостридии: С. septicum, С. novyi, С. histolyticum, С. perfringens, С. sporogenes, С. sordellii, С. tetani.

Полученные данные свидетельствуют о неоднозначной патогенетической роли не только различных видов, но и штаммов внутри видов анаэробных бактерий в развитии гнойно-воспалительных процессов у гинекологических больных и больных с острыми кишечными инфекциями.

Проблема патогенности анаэробных микроорганизмов занимает важное место в изучении их биологии. Тем не менее, данные о патогенности анаэробов неполные и разрозненные. Лучше других изучены патогенные свойства клостридий, основными факторами патогенности и вирулентности этой группы бактерий являются экзотоксины и энзимы (Bittner J., 1989).

Для определения патогенности выделенных анаэробных микроорганизмов нами были рассмотрены такие факторы патогенности как способность к адгезии, персистенции (антилизоцимная и каталазная активность), токсичность (гемолитическая активность). Показано, что выделенные культуры от больных гнойно-воспалительными и желудочно-кишечными заболеваниями, обладают целым рядом факторов патогенности: адгезинами, с помощью которых происходит фиксация возбудителя на эпителиальных клетках слизистых оболочек организма; факторами, обеспечивающими микробу определенное время персистировать в организме человека (АЛА, КА), а так же фактором токсичности (гемолитической активности).

Для изучения адгезивных свойств бактерий нами была использована известная методика В.И. Брилиса (1986). Адгезивные свойства определяли по способности микробных клеток к адгезии на формализированных эритроцитах человека группы 0(I)Rh+.

Установлено, что из 592 исследованных культур анаэробов 424 (71,6%) обладали адгезивной активностью. В группе больных с гнойно-воспалительными заболеваниями из 166 штаммов анаэробов 152 (91,5%) обладали адгезивной активностью. В группе больных кишечными инфекциями (97,5 %) обладали этим свойством. В то же время штаммы анаэробных бактерий, выделенные (из цервикального канала и фекалий) здоровых людей в 56,5 % и 56 % случаев характеризовались адгезивной активностью. При этом от больных с гнойно-воспалительными заболеваниями гениталий выделялись анаэробы с высокой и средней степенью адгезивности; такая же картина наблюдалась и у анаэробных микроорганизмов, выделенных от больных с кишечными инфекциями. Адгезивная активность штаммов, выделенных из цервикального канала и фекалий здоровых людей, была достоверно ниже (р< 0,05). При этом данные штаммы обладали низкой и реже - средней адгезивной активностью.

Таким образом, адгезивность как признак, характеризующий вирулентность бактерий, обнаруживается у анаэробных возбудителей гнойно-воспалительных и желудочно-кишечных заболеваний в среднем с частотой 84,5%. При этом нами не отмечено статистически достоверных различий в частоте выявления адгезивноактивных штаммов анаэробных бактерий, выделенных от больных с гнойно-воспалительными заболеваниями женской репродуктивной системы, гнойными хирургическими и желудочно-кишечными заболеваниями. Так же не было выявлено статистически достоверных различий в адгезивной активности изученных анаэробов, выделенных от больных с кишечными инфекциями в разных возрастных группах (р>0,05).

Установлено, что АЛА обладали (52,3 %) изученных штаммов анаэробных микроорганизмов. Частота данного признака у культур, выделенных от больных с гнойно-воспалительными и желудочно-кишечными заболеваниями, была выше и составила 73,8% и 74,8% соответственно, по сравнению с 23% (из цервикального канала здоровых женщин) и 24,8% (из фекалий здоровых людей) в контрольной группе.

При изучении каталазной активности было показано, что этот признак характерен только для представителей рода Bacteroides, у остальных изученных нами анаэробных микроорганизмов данный признак не наблюдался. Примечательно, что все штаммы Bacteroides, выделенные от больных гнойно-воспалительными, кишечными заболеваниями и из цервикального канала здоровых женщин, обладали каталазной активностью. Штаммы же бактероидов из фекалий здоровых людей только в 71,1% случаев обладали КА.

Способность вызывать патологические изменения в клетках организма человека у анаэробных бактерий связана с токсинами микроорганизма, в число которых входят гемотоксины. С этой целью у анаэробных микроорганизмов изучено наличие а-гемолизинов, которые обеспечивают гемолитическую активность анаэробов по отношению к эритроцитам человека.

Установлено, что у штаммов анаэробных бактерий, выделенных от больных с гнойно-воспалительными и желудочно-кишечными заболеваниями, наиболее часто выделялись анаэробы, обладающие гемолитической активностью (82,4% и 74,2% соответственно). Гемолитическая активность анаэробных бактерий, выделенных из цервикального канала здоровых женщин и из фекалий здоровых людей наблюдалась значительно ниже (24% и 19,6% соответственно).

Проведенные исследования дают основание характеризовать штаммы анаэробных микроорганизмов, изолированные при гнойно-воспалительных и кишечных заболеваниях, как обладающие набором отдельных детерминант вирулентности: адгезивности, антилизоцимной, каталазной и гемолитической активностью. Полученные данные подтверждают, что перечисленные факторы вирулентности обеспечивают реализацию инфекционных свойств бактерий. Возможно, что данные признаки вирулентности определяют тяжесть течения процесса, но не его локализацию.

Однако, как было показано выше, не у всех штаммов анаэробных бактерий изученные маркеры патогенности присутствуют в одинаковой степени, то есть каждый штамм обладает определенным набором этих признаков. Полученные результаты свидетельствуют, что это свойство может быть использовано для дифференциации (типирования) анаэробов.

На основании определения комплекса факторов патогенности возможно осуществить маркирование штамма, выделенного при каждом гнойно-воспалительном или желудочно-кишечном заболевании. В этом плане мы использовали схему определения патоваров, разработанную для условно-патогенных микробов семейства Enterobacreriaceae И.М. Габриловичем (1997). Согласно этой схеме каждый штамм может быть отнесен к тому или иному патовару на основании совокупности трех основных факторов патогенности: адгезивности, персистенции (АЛА) и токсичности (гемолитической активности). Распределение изученных штаммов анаэробных бактерий по патоварам показало, что штаммы, выделенные от больных гнойно-воспалительными заболеваниями, представлены 4 патоварами, от больных желудочно-кишечными заболеваниями - 5; штаммы, выделенные из цервикального канала здоровых женщин - 5; из фекалий здоровых людей - 6 патоварами.

Наибольшее количество изолятов по всем нозологическим формам инфекционных поражений было отнесено к 1,2 и 5 патоварам, которые характеризуются наличием факторов адгезии, персистенции (АЛА) (исключая 5 патовар) и токсичности (исключая 2 патовар). Изученные анаэробные микроорганизмы, выделенные от здоровых людей, в большинстве своем относились к 3 и 7 патоварам; при этом 3 патовар характеризовался только наличием факторов адгезии; а 7 патовар характеризовался отсутствием всех факторов патогенности. Поэтому очевидно, что патовар может характеризовать эпидемическую значимость конкретного штамма анаэробных бактерий, хотя патогенное воздействие изолятов других патоваров на организм человека совсем не исключается.

Увеличение роли анаэробных микроорганизмов в возникновении различных поражений человека связано не только с их патогенностью. Важной причиной распространения анаэробной инфекции является формирование штаммов анаэробов, резистентных к антибиотикам, в том числе и к новым антибактериальным препаратам. Это обуславливает необходимость изыскания наиболее эффективных средств этиотропной терапии при анаэробной инфекции.

С этой целью изучена чувствительность 323 штаммов анаэробных микроорганизмов к широко применяемым в клинической практике антибиотикам. Установлено, что все исследованные штаммы анаэробов оказались чувствительными к метронидазолу и имипенему. В то же время 29,7 % больных с гнойно-воспалительными и 32,1% штаммов от больных желудочно-кишечными заболеваниями обладали полирезистентностью, то есть были одновременно устойчивы к 5 антибиотикам (бензилпенициллин, цефатоксим, тетрациклин, эритромицин, левомицетин), относящимся к различным группам.

Учитывая данные литературы об устойчивости анаэробов к р- лак-тамным антибиотикам (Hedberg М., Nord С.Е., 1986; Nord С.Е., 1986; Nord С.Е., Hedberg M., 1990; Bush К., 1989; Rasmussen B.A., Bush К., Tally F.P., 1989), мы изучили продукцию Р-лактамаз у выделенных штаммов анаэробных микроорганизмов.

Установлено, что 33% изученных штаммов продуцировали (3- лак-тамазу. Из 68 штаммов анаэробов, выделенных при гнойно-воспалительных заболеваниях, 50% обладали продукцией Р- лактамаз, а из 95 штаммов анаэробов, выделенных от больных с желудочно-кишечными инфекциями, -43,2%. Штаммы анаэробных бактерий, выделенные у здоровых людей, и способные продуцировать р- лактамазу, наблюдались в основном у людей, которым в течение последних 6 месяцев проводили антибактериальную терапию Р-лактамными антибиотиками.

Полученные результаты позволяют сделать заключение о необходимости определения чувствительности выделенных культур анаэробных микроорганизмов к антибактериальным препаратам, в том числе последних поколений, с целью назначения адекватного лечения, а так же определения продукции Р-лактамаз с целью рационального использования большой группы р-лактамных антибиотиков. Для экстренной терапии анаэробной инфекции оправдано назначение имипенема (Р~ лактамного антибиотика группы карбопенемов) и метронидазола (группы 5-нитроимидазолов).

Таким образом, нами на достаточно большом клиническом материале изучена частота обнаружения анаэробных бактерий у больных гнойно-воспалительными заболеваниями различной локализации. Сформирована коллекция, состоящая из более 500 штаммов таксономически охарактеризованных анаэробных бактерий, изолированных от больных и здоровых людей; оптимизирована схема выделения и идентификации анаэробных бактерий из патологического материала. Штаммы анаэробных бактерий, возбудителей гнойно-воспалительных и желудочно-кишечных заболеваний, также охарактеризованы по наличию у них как отдельных факторов патогенности, так и их комплексов. Определена возможность типирования штаммов анаэробных бактерий, причастных к гнойно-воспалительным и желудочно-кишечным заболеваниям, на основании наличия у них совокупности отдельных факторов патогенности. Установлено отсутствие достоверной взаимосвязи между наличием у госпитальных штаммов анаэробных бактерий способности к адгезии, антилизоцимной и каталазной активности, наличие а-гемолизинов и клинической формой инфекционного процесса (гнойно-воспалительные гинекологические заболевания, гнойные раны хирургических больных, острые кишечные заболевания). Предложено на основании наличия у отдельных штаммов анаэробных бактерий совокупности признаков (адгезивности, персистентности и токсичности) проводить их дифференциацию (типирование), что имеет определенное значение для оценки их патогенного потенциала, а также для осуществления эпидемиологического мониторинга госпитальных инфекций, обусловленных анаэробными микроорганизмами.

Выявлена широкая циркуляция в Ставропольском крае штаммов анаэробных бактерий, обладающих полирезистентностью ко многим антибиотикам, применяемым в настоящее время в практическом здравоохранении, в том числе и к препаратам последнего поколения. Это определяет необходимость перед назначением адекватной этиотропной терапии, определять чувствительность клинически значимых штаммов анаэробных микроорганизмов к антимикробным препаратам. Рекомендовано для экстренной терапии анаэробной инфекции у больных в Ставропольском крае использовать как химиопрепараты выбора имипенем и метронидазол.

Продолжением настоящих исследований является клиническая апробация разработанного метода выделения и типирования анаэробных микроорганизмов и клиническая оценка антибактериальных препаратов, обладавших в условиях in vitro высокой эффективностью.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Сухина, Марина Алексеевна, Ставрополь

1. А.с. 1693062 СССР, МКИ С 12Q 1/04. Питательная среда для выявления тиолзависимых гемолизинов энтеробактерий / О.С. Якушенко, И.М. Габрилович, В.М. Бондаренко, И.А. Руднев; Заявлено 25.09.89; опубл. В.Б.И., 1991. -№43.-№475979/13.

2. Агапова О.В., Бондаренко В.М., Поликарпов Н.А. Ферменты патогенности клинических штаммов Klebsiella pneumoniae // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1999. - № 2. - С. 5-8.

3. Азмаипарашвили Г.А. Некоторые особенности клиники, диагностики и лечения неклостридиального анаэробного перитонита //Автореф. дис. . канд. мед. наук. Тбилиси, 1992.- 24 с.

4. Анаэробная инфекция: Этиология, патогенез, антибактериальная терапия // Методические рекомендации / Л. П. Титов. Минск, 1998. - 47 с.

5. Андрейченко В. В. Роль аэробной и неклостридиальной анаэробной микрофлоры в возникновении и развитии гнойного перитонита // Новости хирургии. 2001. - № 2. - С. 9 - 13.

6. Анкирская А. Е. Бактериальный вагиноз // Акуш. и гинек.— 1995.— №6.—С. 13-16.

7. Баженов Л.Г. Выделение и идентификация строго анаэробных микроорганизмов при гнойно-воспалительных процессах // Автореф. дис. . канд. мед. наук. Ташкент, 1986.-20 с.

8. Барановский Ю. А., Кондрашина Э.А. Дисбактериоз и дисбиоз кишечника.— СПб., 2002. 224 с.

9. Баскаков В.П., Кочеровец В.И., Цвелев Ю.В. Неклостридиальные анаэробные гнойно-септические заболевания женских половых органов // Не-клостридиальная анаэробная инфекция. Л.,1982.- с 37-41.

10. Белобородое В.Б. Сепсис современная проблема клинической медицины // Русский медицинский журнал. - 1997. - № 24. - С. 1591 - 1596.

11. Бозиев А.Б. Антилизоцимная активность условно-патогенных энтеро-бактерий // Актуальные вопросы инфекционной патологии. Нальчик, 1993,-С. 42-44.

12. Бондаренко В.М. Факторы патогенности бактерий и их роль в развитии инфекционного процесса // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1999. - № 5. - С. 34 - 39.

13. Бондаренко В.М., Wu Yang, М.М. Barcus. Адгезивная активность клинических штаммов клебсиелл // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1996.- № 2,- С. 104-109.

14. Бондаренко В.М., Ценева Г.Я., Березина JI.A. Адгезивная активность Klebsiella pneumoniae, контролируемая плазмидой 55МД // Журн. Микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1996.- № 4.- С.3-6.

15. Борисов И.А. Некоторые особенности перитонита как аэробно-анаэробной инфекции // Автореф. дис. . канд.мед.наук. -JI., 1986-22с.

16. Борисова О. К., Яковлев В. П., Кулешов С. Е. Некоторые подходы к эмпирической антибиотикотерапии раневого процесса, осложненного анаэробной неклостридиальной инфекцией //Антибиотики и химиотерапия. -1989.-№9.-С. 707- 1111.

17. Брилис В. И. Адгезивные свойства лактобацилл // Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1983,- 24с.

18. Брилис В. И., Брилене Т. А., Ленцнер X. П. Адгезивные и гемагглюти-нирующие свойства лактобацилл //Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1982. - № 9. - С. 75—78.

19. Брилис В. И., Брилене Т.А., Левков Л.А. Методические возможности изучения адгезии в колонизирующей способности микроорганизмов //

20. Теоритические и практические проблемы гнотобиологии. М., 1996. - С. 206211.

21. Брилис В.И., Брилине Г.А., Лендпер X. П. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов // Лаб. дело. 1986. - № 4. - С. 22 - 26.

22. Бухарин О. В. Персистенция патогенных бактерий. М., - 1999. - 365 с.

23. Бухарин О. В., Брудастов Ю. А., Дерябин Д. Г. Изучение антикомплиментарной активности // Клинич. лаб. диагностика. 1992. - № 11 - 12. - С. 68 -71.

24. Бухарин О. В., Зыкова Л. С., Соколов В.Ю. Способ выявления инфекционного агента воспалительного процесса//А. с. 1688883 СССР.

25. Бухарин О. В., Константинова О.Д., Черкасов С.В. Факторы персистенции микрофлоры при воспалительных заболеваниях внутренних женских половых органов // Вестн. рос. Ассоц. акушеров гинекологов. -1998. - № 3. -С. 62-64.

26. Бухарин О. В., Усвяцов Б. Я. Бактерионосительство. Екатеринбург, 1996.-206 с.

27. Бухарин О. В., Усвяцов Б. Я., Малышкин А. П. Метод определения антилизоцимной активности микроорганизмов // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1984. - № 2. - С. 27 - 28.

28. Бухарин О.В. Биомедицинские аспекты персистенции бактерий // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 1994.- №3.- С.4-13.

29. Бухарин О.В., Васильев Н.В., Усвяцов Б.Я. Лизоцим микроорганизмов. -Томск, 1985.

30. Бухарин О.В., Литвин В.Ю. Патогенные бактерии в природных экосистемах. -Екатеринбург, 1997.- 227 с.

31. Бухарин О.В., Соколова В.Ю. Способ определения «антиинтерфероно-вой» активности микроорганизмов / А. с. 156491СССР // Открытия. 1990. -№18.

32. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я. Антилизоцимный тест как маркер персистенции микроорганизмов // Теоретическая и прикладная инфекционная иммунология: Тез. докл. I Всесоюзной конф. М., 1982. - С. 87-88.

33. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я. Теоретическая и прикладная инфекционная иммунология М., 1982. - 87 с.

34. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Шеенков Н.В. Характеристика антилизоцимной активности золотистого стафилококка при разных типах течения экспериментальной инфекции // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1993. -№2.-С. 178-180.

35. Вертиев Ю.В. Бактериальные токсины: биологическая сущность и происхождение // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.1996.-№3.-С. 43-46.

36. Воробьев А.А., Абрамов Н.А., Бондаренко В.М. Дисбактериозы актуальная проблема медицины К Вестн. РАМН. - 1997. - №3. - С. 3-9.

37. Воробьев А.А., Миронов А.Ю., Пашков Е.П. Современные методы лабораторной диагностики инфекций, вызванных неспорообразующими анаэробными бактериями // Кпинич. лаб. диагностика.- 1996. -№ 1. С. 14 - 16.

38. Габрилович И.М., Блиева Л.З., Габрилович М.И. Патотипирование в диагностике внутрибольничных инфекций // Материалы VII съезда Всероссийского общества эпидемиологии, микробиологии и паразитологии. М.,1997. -Т.2. С. 172-173.

39. Габрилович И.М., Бозиев В.Б., Габрилович М. И. Гетерогенность антилизоцимной активности в популяциях условно-патогенных энтеробакте-рий // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1994.-Приложение.- С. 32-33.

40. Гельфанд Б. Р., Гологорский В. А., Бурневич С. 3., Савельев В. С. Антибиотикотерапия абдоминальной хирургической инфекции. М., 2000. -144 с.

41. Гельфанд Б. Р., Гологорский В. А., Бурневич С. 3., Савельев В. С. Антибиотикотерапия абдоминальной хирургической инфекции. М., 2000. -144 с.

42. Гельфанд Б. Р., Филимонов М. И., Бурневич С. 3. Абдоминальный сепсис // Рус. мед. журн. 1999. - № 5/7. - С. 6.

43. Гельфанд Б.Р., Бурниевич С.З., Цыденжапов Е.Ц. Антибиотикопро-филактика и терапия при панкреонекрозе // Инфекция и антимикробная терапия. 1999. - № 2. - С. 36-40.

44. Гланц С. Статистика. М., 1999. - 459 с.

45. Голубев В.А., Воропаева С.Д. , Соколова З.П. Современное состояние проблемы воспалительных заболеваний в гинекологии. М., 1986, вып.1.-51с. (Обзорная информация).

46. Голубев В.А., Воропаева С.Д., Соколова З.П. Современное состояние проблемы воспалительных заболеваний в гинекологии. Обзор, информ.- М., 1986.-50с.

47. Гусейнов С.А. Комплексная диагностика и антибактериальная терапия неклостридиального анаэробного перитонита // Анналы хирургии. 2000. № 6.-С. 62-65.

48. Далин М.В., Филе Н.Г. Адгезины микроорганизмов: Итоги науки и техники, М., 1985 —Т. 16.

49. Дедов И. И., Анциферов М. В., Токмакова А. Ю., Галстян Г. Р. Синдром диабетической стопы //Клинич. фармакол. и терапия. 1993. - №. 3. -С. 58-62.

50. Дмитриева Н. В., Петухова И. Н., Дронова О. М., Солдатова Н. Г. Цефоперазон в комбинации с метронидазолом при профилактике послеоперационных инфекционных осложнений у онкологических больных //Антибиотики и химиотерапия. -1992. №8. - С. 11 - 13.

51. Добрынин В.М., Каргальцева Н.М., Добрынина И.А. Микробиологическая диагностика гнойно-септических инфекций: Реком. для врачей. -СПб., 1996. 53с.

52. Езепчук Ю.В. Проблемы инфектологии. М., 1991. - С. 121-127.

53. Елагина Н.Н. Факторы персистенции неспорообразующей анаэробной микрофлоры кишечника человека // Автореф. дис. . канд.мед.наук. Оренбург.-2000. - 24 с.

54. Землянкина Л.П., Мартыненко Л.Д. Определение адгезивных свойств клебсиелл и их оценка //Лаб. дело. 1989. - №10,- С. 68-70.

55. Зубков М.Н., Меньшиков Д.Д., Васина Т.А. Микробиологическая диагностика и антибактериальная терапия неспорообразующих анаэробных инфекций при неотложных состояниях И Вестник РАМН. 1996. - № 2. - С. 49-52.

56. Зубков М.Н., Меньшиков Д.Д., Гугуцидзе Е.Н. Микробиологическая диагностика смешанных анаэробно-аэробных инфекций в хирургии. // Антибиотики и химиотерпия. 1995. -№2. - С. 46-50.

57. Зыкова Л. С. Факторы персистенции уропатогенов в диагностике, прогнозировании лечении пиелонефрита у детей // Автореф. дис. . д-ра мед. наук. Оренбург, 1998. - 34с.

58. Каминский Л.С. О применение геометрической средней в биологии // Применение математических методов в биологии. — 1964. С.6-18.

59. Каминский М.И. О методических погрешностях в статистических отчетах // Здравоохранение РФ. 1971. - №1. - С. 28-29.

60. Каргальцева Н.М. Таблицы к лекции «Анаэробная инфекция». СПб., 1997.- 12 с.

61. Качерес М., Норд К.Э., Веинтрауб А. Экологические аспекты чувствии-тельности к антибиотикам анаэробных бактерий // Клинич. микробиология и антимикробная химиотерапия. 2001. № 1. - С. 39 - 47.

62. Кира Е. Ф. Инфекции и репродуктивное здоровье (часть 1) // Журн. акушерства и жен. болезней.— 1999.— № 2.— С. 71-78.

63. Кира Е. Ф. Инфекции и репродуктивное здоровье (часть 1) // Журн. акушерства и жен. болезней.— 1999.— № 4.— С. 50-53.

64. Кира Е. Ф. Инфекции и репродуктивное здоровье (часть 1).// Журн. акушерства и жен. болезней.— 1999.— № 3.— С. 60-66.

65. Кира Е.Ф. Клиника, диагностика и лечение неклостридиальной анаэробной инфекции в акушерско-гинекологической практике // Автореф. дис. канд. мед. наук. Д., 1988.~20с.

66. Кира Ю.В., Кочеровец В.И., Кира Е.Ф., Баскаков В.П. Анаэробная инфекция в акушерско-гинекологической практике. СПб., 1995 - 320с.

67. Колесников И. С., Лыткин М. И., Лесницкий Л. С. Гангрена легкого и пиопневмоторакс. Л., - 1988. -224с.

68. Колесов А. П., Столбовой А. В., Кочеровец В. И. Анаэробные инфекции в хирургии.- Л., 1989. 160 с.

69. Колкер И. И., Вишневский А. А., Борисова О. К. Неклостридиальные анаэробы основные возбудители абсцессов легких // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1987. -№ 3. - С. 21 - 26.

70. Коршунов В.М., Володин Н.Н., Ефимов Б.А. Микроэкология влагалища. Коррекция микрофлоры при вагинальных бисбактериозах: Уч. Пособие. -М., 1999.- 80 с.

71. Кочеровец В.И. Неклостридиальные анаэробные инфекции ведущая этиологическая форма полимикробных инфекций в хирургии // Автореф. дис. д-ра.мед.наук.- Л., 1990.- 39с.

72. Кочеровец В.И., Косинец А.Н., Стручкова Ю.В. Перитонит как аэробно-анаэробная инфекция // Первый Московский международный конгресс хирургов. М. - 1995. - С. 132-133.

73. Кочеровец В.И., Михайлова B.C. Методы микробиологического анализа неспорообразных анаэробных бактерий // Науч. метод, центр по клинич. лаб. диагностике МЗ и мед. пром-сти РФ. - М., 1996. - 56 с.

74. Кочеровец В.И., Петраков А.А., Пономарева Т.Р. Методические рекомендации по микробиологической диагностике заболеваний, вызванных неспорообразующими анаэробными бактериями. М., 1986.- 49с.

75. Крамарь B.C., Крамарь JI.В., Бородина О.И. Облигатно-анаэробные микроорганизмы в микробиоценозе кишечника здоровых людей // Вест. Волгогр. мед. акад. 2000. - № 6. - С. 183-184.

76. Кригер А.Г. Анаэробный неклостридиальный перитонит: (Диагностика, лечение) // Автореф. дис. . д-ра. мед. наук. М., 1989.- 27 с.

77. Кузин М. И., Костюченок Б. М. Раны и раневая инфекция: Руководство для врачей. М., 1990. - 525 с.

78. Кузин Н.И., Костюченко А.А., Вишневский А.А. Анаэробная неклостридиальная инфекция в хирургии: Метод, рек. М., 1987.- 29с.

79. Кулешов С.Е. Клиника, диагностика и лечение анаэробной неклостри-диальной инфекции // Сов. медицина. 1991. - №5.- С. 3-7.

80. Лобзина Ю. В. Руководство по инфекционным болезням СПб., 2000. -932с.

81. Малафеева Э.В., Граменицкий А.Б., Шевьева Е.Н. Микробиология и иммунология гнойной хирургической инфекции, вызванной неспорообразую-щими анаэробами // Вест. РАМН. 1996. - № 2. - С. 44 - 45.

82. Малов В.А., Пак С.Г., Суджян Е.В. Синдром интоксикации в инфекционной патологии: новый взгляд на старую проблему // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1994.

83. Маянский А.Н. Микробиология для врачей: очерки патогенетической микробиологии. Ниж. Новгород., 1999.- 400с.

84. Медицинская микробиология./Под ред. В.И. Покровского, O.K. Поздеева М., 1998.-1200 с.

85. Мельников В.Н., Мельников Н.И. Анаэробные инфекции (клостридиозы). М., - 1973.-287с.

86. Мирзабалаева А. К. Актиномикоз половых органов у женщин // Проблемы медицинской микологии. Ботриомикоз. М., 2000 - Т.2. - С. 11 - 16.

87. Муравьева В. В. Микробиологическая диагностика бактериального вагиноза у женщин репродуктивного возраста // Автореф. дисс. . канд. мед. наук,—М., 1997.-27с.

88. Мухина Ю. Г. Диагностика и коррекция дисбактериоза у детей // Рус. мед. журн. 1999.-№11.-С. 36-38.

89. Назарова Е. И., Гиммельфарб Е. И., Созаева Л.Г. Дисбактериозы влагалища: этиология, патогенез, клиника, лабораторная диагностика.— М., 2000.

90. Об утверждении отраслевого стандарта «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника» (ОСТ 91500.11.0004-2003) // Приказ МЗ РФ от 09.06. 2003 N231.

91. Павлова М.В. Изучение этиологической роли облигатных анаэробных неспорообразующих микроорганизмов при хирургической инфекции // Автореф. дис. . канд.мед.наук. -М., 1989. 26 с.

92. Падейская Е.Н. Некоторые вопросы антимикробной терапии кишечных инфекций //. Рус. мед. журн. 1997. - №24. - С. 36-38.

93. Первушина Л. А. Антилизоцимный признак микроорганизмов в бактериологической диагностике и лечении воспалительных заболеваний внутренних женских половых органов // Автореф. дис. . канд. мед. наук. -Челябинск, 1990. 23 с.

94. Петровская В.Г., Бондаренко В.М. Общие принципы генетического контроля патогенности бактерий // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии 1994.- № 3.- С. 106-110.

95. Петровская В.Г., Бондаренко В.М., Гостева В.В. Роль антилизоцимного признака для выживания бактерий в макрофагах периферической крови человека // Эпидемиология и микробиология раневых инфекций. М., 1986. -С.34-35.

96. Поздеев O.K. Медицинская микробиология М., 2001. - 768 с.

97. Покровский В.И. Руководство по инфекционным болезням. М., 1998. -330с.

98. Покровский В.И., Бондаренко В.М., Полоцкий Ю.Е., Ющук Н.Д. Современные взгляды на патогенез дизентерии: роль инвазии и токсического действия шигелл // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии 1990.- № 5.- С. 101-110.

99. Рахманова А. Г., Неверов В. А., Пригожина В. К. Кишечные инфекции: стратегия и тактика лечения. СПб., 1995. - 53с.

100. Саакян А.Б. Тактика лечения острого анаэробного парапроктита // Автореф. дис. . канд. мед. наук. Ереван. 1996. - 23 с.

101. Савельев В.Н. Характеристика клебсиелл, выделенных от больных и здоровых людей // Дис. . канд. мед. наук. Саратов, 1968. - 247с.

102. Савельева И.С. Современные аспекты этиопатогенеза, диагностики и лечения хронических воспалительных заболеваний внутренних половых органов // Рус. мед. журн. 1999.- №3. - С. 14 - 25.

103. Савицкая К.И., Воробьев А.А., Русанова Е.В., и др. Роль неспорообразующих анаэробов в формировании микробного пейзажа содержимого толстой кишки у больных с воспалительными процессами различной локализации // Веста. РАМН. 1996. - № 2. - С. 15 - 23.

104. Светухин А. М., Земляной А. Б., Изотова Г. Н., Павлова М. В. Антибактериальная терапия в комплексном лечении больных с синдромом диабетической стопы. 2000.

105. Сергеева Т. И., Земляницкая Е. П., Курбанова И. 3. Лабораторная диагностика газовой гангрены и определение чувствительности к антибиотикам возбудителей этого заболевания: Метод, рек. М., 1984. - 50 с.

106. Соколов В.Ю Антиинтерфероновая активность микроорганизмов. // Персистенция бактерий: Сб. науч. тр. Куйбышев . - 1990.- С.83-93.

107. Соколов В.Ю. Механизм антилизоцимной активности микроорганизмов // Автореф. дис. . канд. мед. наук. Челябинск, 1990.-28с.

108. Соколова И.Э. Роль неспорообразующих анаэробных бактерий в этилогии послеродового и послеабортного эндометрита // Автореф. дис. . канд.мед.наук. -М.; 1986.-16с.

109. Соколова К. Я., Соловьева И. В., Попова Е. В. Аутофлора человека в норме и патологии и ее коррекция // Сб. науч. тр.- Горький, 1988. С. 144 -148.

110. Соловьева И. В. Характеристика микрофлоры влагалища в норме и патологии // Автореф. дис. . канд. мед. наук. — М., 1987.- 27с.

111. Спивак Н.Я., Зуева B.C., Белоцкий СЛ. Интерферон и бактериальные инфекции // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии -1987.-№12.- С. 920-925.

112. Столбовой А.В. Клиника, диагностика и лечение неклостридиальных анаэробных инфекций // Автореф. дис. . канд.мед.наук. Д., 1981.-24с.

113. Тавердян Н.А. Патогенетические звенья раневой инфекции, протекающей с участием смешанной аэробно-анаэробной (неклостридиальной) микрофлоры // Автореф. дис. канд.мед.наук. Ереван, 1989.-22 с.

114. Тец В.В. Справочник по клинической микробиологии.- Стройлеспечать, 1994.- 224с.

115. Титов Л.П. Анаэробная инфекция: Этиология, патогенез, антибактериальная терапия: Метод, рекомендации. Минск, 1998. - 47 с.

116. Ткаченко Н.Л. Адгезия условно-патогенных микроорганизмов // Некоторые вопросы теории медицины. Куйбышев, 1990. - С. 19-23.

117. Урбадаев Ж.К. Этиологическая роль анаэробных микроорганизмов и их ассоциаций с аэробными бактериями в развитии гнойно-воспалительных заболеваний брюшной полости у детей // Автореф. дис. . д-ра мед. наук. -Актюбинск, 1989. 31 с.

118. Французов В.Н., Шестопалов А.Е., Костенко Н.С. Современные представления о диагностике и лечении тяжелой анаэробной неклостридиальной инфекции мягких тканей // Неотложная медицинская помощь

119. Состояние, пробл., перспективы развития): Тез. докл. науч.-практ. конф. -М., 1998.-С. 60-61.

120. Халатов А.О. Роль анаэробной микрофлоры в развитии воспалительных заболеваний урогенитальной области у мужчин // Автореф. дис. . канд. мед. наук. -М, 2001.- 17 с.

121. Цвелев Ю.А., Кира Е.Ф., Баскаков В.П. Бактериальная инфекция в акушерстве и гинекологии. Итоги и перспективы // Журн. акушерства и женских болезней. 1998, спец. вып. - С. 188-189.

122. Цвелев Ю.В., Кира Е.Ф. Бесспорное и спорное в проблеме гнойно-воспалительных заболеваний придатков матки // Акушерство и гинекология. 1990.-С. 72-76.

123. Цвелев Ю.В., Кира Е.Ф., Баскаков В.П., Кочеровец В.И. Клинико-микробиологическая диагностика неклостридиальных анаэробных инфекций в гинекологии // Акушерство и гинекология.-1984.- №2.- С. 62-64.

124. Цвелев Ю.В., Кира Е.Ф., Кочеровец В.И. Современные методы антибактериальной терапии и профилактики неклостридиальных анаэробных послеродовых эндометритов // Вопр. охраны материнства и детства.-1988. -№7. С. 44-48.

125. Цвелев Ю.В., Кочеровец В.И., Кира Е.Ф., Баскаков В.П. Анаэробная инфекция в акушерско-гинекологической практике. СПб., 1995.-320с.

126. Цыбуляк Г.Н. Анаэробная инфекция: обзор // Вестн. хирургии им. И.И. Грекова. 1995. - № 1. - С. 105 - 110.

127. Чадаев А. П., Зверев А. А., Серажим О. А., Алексеенко М. Э. Особенности клиники, диагностики и лечения неклостридиальной анаэробной инфекции мягких тканей // Рос. мед. журн.- 1996. № 3. - С. 33 - 36.

128. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. М.,1998, Т. 1. - 288 с.

129. Шендеров Б.А. Роль анаэробных неспорообразующих бактерий в поддержании здоровья человека. Вестн. РАМН. - 1996. - №1 .-С. 8-11.

130. Эфендиев И.Х. Клиника, диагностика и лечение неклостридиальной анаэробной инфекции у больных абсцессами легких // Автореф. дис. канд.мед.наук. -М. 1986. - 21с.

131. Йорданов Г., Катранушкова Н. Бактериальная инфекция в акушерстве и гинекологии. София, 1980.-11 Ос.

132. Anaerob Laboratory Manual. Washington. 1977.

133. Anderson J.D., Sykes R.B. Characterization of a P-lactamase obtained from a strain of Bacteroides fragilis resistant to beta-lactam antibiotics // J. Med. Microbiol. 1973. - № 6/ - P. 201-206.

134. Banwell J.G., Branch W.J., Gummings J.H. The microbial mass in the human large intestine // Gastroenterology. 1981. - Vol. 80. - P. 1104.

135. Barker H.A. Amino acid degradation by anaerobic bacteria // Ann. Rev. Biochem. 1981. - Vol. 50. - P. 23-40.

136. Bartlet J.G., Polk B. F. Bacterial flora of the vagina: quantitative study // Rev. Infect. Dis. 1984. - Vol. 6, № 1. - P. 67 - 72.

137. Bartlett J.G., Moon N. E., Goldstein P. R. Cervical and vaginal bacterial Flora: ecologic niches in the female lower genital tract // AM. J. Obstet. Gonecol. -1987.-Vol. 130.-P. 658-661.

138. Bartlett J.G., O'Keefe P., Tally F. P. Bacteriology of hospital acquired pneumonia // Arch. Intern. Med. - 1986. - Vol. 146. - P. 868 - 871.

139. Bartlett J.G., Onderdonk A.B., Drude E. Quantitative bacteriology of the vaginal flora // J. Infect Dis.- 1977. Vol.l36. - P. 271.

140. Bergan T. Pathogenicity of anaerobic bacteria // Scand. J. Gastroenterol. Suppl.-1984.-Vol. 91.-P. 1-11.

141. Billington S. J., Wieckowski E. U., Sarker M. R., et al. Clostridium perfringens type E animal enteritis isolates with highly conserved, silent enterotoxin gene sequences // Infect. Immun. 1998. - Vol.66. - P. 4531-4536.

142. Bittner J. Patogenitatea bacteriilor anaerobe // Bacteriol. Virusol. Parazitol. Epidemiol. -1989. Vol. 34, № 1. - P. 85.

143. Botta G.A., Arzese A., Minisini R., Trani G // Clin Infect Dis 1994. Vol. 18,№ 4. - P. 260-264.

144. Brook I. Anaerobic infections // Med Microbiol. 1999. - Vol. 10. - P. 137153.

145. Brook I. Diagnosis and management of anaerobic infections of the head and neck // Ann Otol Rhinol Laryngol. 1992. - Vol. 101. - P. 9 - 15.

146. Brook I. The role of encapsulated anaerobic bacteria in synergistic infections // FEMS Microbiol. Rev. 1994. - Vol. 13, № 1. - P. 65 - 74.

147. Brook I., Calhoun L., Yocum P. p -lactamase-producing isolates of Bacteroides species from children // Antimicrob Agents Chemother. 1980. -Vol.18.-P.164-166.

148. Brook I., Coolbaugh J., Walker R. Pathogenicity of piliated and encapsulated Bacteroides fragilis // Eur. J. Clin. Microbiol. 1984. - Vol.3. - №3. - P. 207-209.

149. Brook I., Frazier E. H. Microbiology of periapical abscesses and associated maxillary sinusitis // J. Periodontol. 1996. - Vol. 67, № 6. - P. 608 - 610.

150. Brook I., Randolf Y.G. Aerobic and anaerobic bacterial flora of burns in children // Y. Trauma. 1981. - Vol. 21. - P. 313 - 318.

151. Burri R. Das Tuscheverfahren als einfaches Mittel zur Losung einiger schwierigen Aufgaben der Bakterioskopie // Jena, Fischer. 1909.

152. Bush K. Characterization of b lactamases // Antimicrob Agents Chemother . - 1989. - Vol. 33. - P. 259 - 263.

153. Caceres M., Carera E., Palma A., et al. Antimicrobial susceptibility of anaerobic and aerobic bacteria isolated from mixed infections in Nicaragua // Span J Chemother. 1999. - Vol. 12. - P. 332-339.

154. Caceres M., Carera E., Palmgren A. C., Nord С. E. Antimicrobial susceptibility of anaerobic bacteria from the intestinal microflora of healthy children and antimicrobial treated children in Nicaragua // Span J Chemother. -1998.-№3.-P.221 -228.

155. Caceres M., Zhang G., Weintraub A., Nord C.E. Prevalence and antimicrobial susceptibility of enterotoxigenic Bacteroides fragilis in children with diarrhea in Nicaragua // Anaerobe. 2000. - №6. - P. 143-148.

156. Corbach S.L., Menda K.B., Thadepalli H., Keith L. Anaerobic microflora of the cervixin healthy women // Am. J. Obstet. Gynecol. 1973. - Vol. 117. - P. 1053-1055.

157. Coyne M. J., Tzianabos A. O., Mallory В. C., et al. Polysaccharide Biosynthesis Locus Required for virulence of Bacteroides fragilis // Infect. Immun. 2001. - Vol. 69. - P. 4342-4350.

158. Duerden B.I. Virulence factors in anaerobes // Clin. Infect. Dis. 1994. -Vol. 18,№4.-P. 253-259.

159. Durmaz В., Durmas R., Tastekin N. Evaluation of culture results of specimens from patients with suspected anaerobic infection // Microbiologica. -1999.-Vol.22. P. 155-159.

160. Elmer G.W., McFarland L.V., Surawiez C.M. Bioterapeutic agentsand infectious diseases. New Jersey, 1999. - 316 p.

161. Finegold S.M. Anaerobic infections in humans: An overview // Anaerobe. -1995. -№ l.-P. 3-9.

162. Finegold S.M., Strong C.A., McTeague M., Marina M. The importance of black-pigmented gram-negative anaerobes in human infections // FEMS Immunol. Med. Microbiol. 1993. - Vol. 6, № 2-3. - P. 77-82.

163. Finegold S.M., Murray P. Anaerobes in burn wound infections // Rev Infect Dis. 1994. - Vol. 6, № 1. -P.184-186.

164. Freney J., Renaud F., Hansen W., Bollet C. Manual de bacteriologie clinique // Elsevier. Paris, 1992.

165. Freter R. Interdependence of mechanism that control bacteria colonisation of the large intestinale // Microecol. and therapy. 1984. - Vol.14.

166. Ful ler К //J. appl.3. appl. Bact. 1973. - Vol.36.- P. 131—139.

167. Funegold S.M. Anaerobic bacteria in human disease. New York, San-Francisco, London, 1977. - 710 p.

168. Funegold S.M. Antimicrobial therapy for anaerobic infections // Scand. J. of Gastroenterol. 1984. - Vol. 19, № 1. - P. 64 - 72.

169. Gabrilovich M. Pathotyping of opportunistic bacteria // IMBEM IV Forth Internation Meeting on Bacterial Epidemiological Markers. Elsinore, Denmark. -1997.-147 p.

170. Garcia-Rodriguez J.A., Garcia-Sanchez J.E., Munoz-Bellido J.L. Antimicrobial resistance in anaerobic bacteria: Current situation // Anaerobe. -1995.-№ 1,-P. 69-80.

171. Gerding N. //Clin Infect Dis. 1995. - Vol. 20. - № 12. - P. 283-288.

172. Gorbach S. L. Antibiotic treatment of anaerobic infections // Clin Infect Dis. 1994. - Vol. 18. - P.305 - 310.

173. Grayson M. // Infect Dis Clin North AM. 1995. - Vol. 9, №1. - P. 143161.

174. Guerin Danan C., Andrieux C., Popot F. Pattern of metabolism and composition of the fecal microflora in infants 10 to 18 months old from day care centers // J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. - 1997. - Vol.25, № 3. - P. 281-289.

175. Hackford A. Polymicrobial intraabdominal infection: medical/surgical therapy // Infections in Surgery. 1990. - Vol.9, № 1. - P. 40 - 46.

176. Hedberg M., Edlund C., Lindqvist L., Rylander M., Nord С. E. Purification and characterization of a new imipenem hydrolising metallo b - lacatamase from Bacteroides fragilis // J. Antimicrob Chemother. - 1992. - Vol. 29. - P.105 - 113.

177. Hedberg M., Nord С. E. Beta lactam resistance in anaerobic bacteria // J. Chemother. - 1996.- Vol.8. - P. 3 -16.

178. Heimdahl A., Nord C.E. Antimicrobial prophylaxis in oral surgery. Scand II J. Infect Dis.- 1990.- Vol.70.-P. 91 101.

179. Heimdahl A., Von Konow L., Nord С. E. b Lactamase producing Bacteroides species in the oral cavity in relation to penicillin therapy // J. Antimicrob Chemother. - 1981. - Vol.8. - P.225 - 229.

180. Hentges D.J. The protective function of the indigenous intestinal flora // Pediatr. Infect. Dis. 1986. - Vol. 5. - № 1.

181. Hoellman D. В., Spangler S. K., Jacobs M. R., Appelbaum P. C. In vitro activities of cefminox against anaerobic bacteria compared with those of nine other compounds // Antimicrob. agents chemother. 1998. - Vol.42. - P. 495 - 501.

182. Hofstad T. Virulece determinants in nonsporeforming anaerobic bacteria // Scand. J. Infect. Dis. 1989. - Vol.3 - P. 15-24.

183. Hofstad T. Virulence factors in anaerobic bacteria // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1992. - Vol.11, N 11. - P. 1044-1048.

184. Isenberg H. D. Pathogenicity and virulence: another view // Clin Microbiol Rev.- 1988. № 1. - P. 40 - 53.

185. John G. Holt, Noel R. Krieg, Peter H. A. Sneath, James T. Stenley T. Williams Определитель бактерий Берджи // T.l. Пер. с англ. - М., 1997. -432с.

186. John G. Holt, Noel R. Krieg, Peter H. A. Sneath, James T. Stenley T. Williams Определитель бактерий Берджи // T.2. Пер. с англ. - М., 1997. -368с.

187. Jonson S., Lebahn F., Peterson L., Gerding D. // Clin Infect Dis. 1995. -Vol. 20,№2.-P. 289-299.

188. Keith L.G., Berger G.S. Причины инфекционных заболеваний органов малого таза // Общие инфекции. Пер. с англ. М., 1988. - С. 270-294.

189. Larson В. Vaginal flora in health and disease // Clin Obstet Gynec. 1993. -Vol. 36. -P.107-121.

190. Levinson M.E., Treasman J., Onach R. Quantitative bacterialogy of the vaginal flora in vaginitis // Am. J.Obstet. Gynecol.- 1979. Vol.133. - P. 139-142.

191. Levison M. E., Carman L.C., Carrington E. R., Kayo D. Quantitative micriflora of the vagina // Am. J. Obstet. Ginecol. 1977. - Vol. 127. - P. 80-85.

192. Lindner J.G., Ptantema F.H., Hoogkamp-Kirstanje A.A. Quantitative studies of me vaginal flora of healthy women and of obstetrics and gynecologic patients // J. Med Microbiol.- 1978.-Vol. 11.-P. 233.

193. Lubbe M.M., Botha P.L., Chalkley L.Y. Comparative activity of eighteen antimicrobial agents against anaerobic bacteria isolated in South Africa // Eur J. Clin Microbiol Infect Dis. 1999. - Vol.18. - P. 46-54.

194. Macfarlane G. Т., Macfarlane S. Utilization of pancreatic trypsin and chymotrypsin by proteolytic and non proteolytic Bacteroides fragilis type bacteria // Curr. Microbiol. 1991. - Vol. 23. - P. 143 - 148.

195. Macfarlane S., Macfarlane G. Т., Hay S., Gibson G.R. Effect of different carbohydrates on growth, polusaccharidase and glycosidase production by Bacteroides ovatus, in batch and continuosus culture // J. Appl. Bacteriol. 1990. -Vol. 68.-P. 179-187.

196. Macy J.M., Probst I. The biology of gastrointestinal bacteroides // Ann.Rev.Microbiol. 1979 - Vol.33. - P. 561-594.

197. Mancuso S., Oliva G. A. Long acting cephalosporins in short - term prophylaxis in obstetric and gynecologic surgery. Eur. Surgical Res // World Congr. Inter College of Surgions. - 1988. - Vol.21, № 1. - P. 19 - 25.

198. Minami M., Okuda К., Furusawa S., et al. Analysis of T cell hybridomas. I. Characterization of H-2 and Igh- restricted monoclonal suppressor factors // J. Exp. Med., Nov. 1981. - Vol. 154. - P. 1390 - 1402.

199. Miragliotta G., Mosca A., Del R. Prete Microbios // Med Hypotheses. 1993. -Vol. 41, №5.-P. 462-464.

200. Murray P.R., Baron E.J. Manual of Clinical Microbiology. Wasphington. -1995.

201. Nord С. E., Hedberg M. Resistance to beta lactam antibiotics in anaerobic bacteria // Rev Infect Dis. - 1990. - Vol. 12. - P. 231 -233.

202. Nord C.E. Mechanisms of beta lactame resistance in anaerobic bacteria // Rev Infect Dis. - 1986. - Vol. 8. - P. 543 -547.

203. Nord C.E. Mechanisms of beta-lactame resistance in anaerobic bacteria // Rev Infect Dis. 1986. - Vol.8. - P. 543-547.

204. Nord C.E. Treatment of intraabdominal infections. World wide clinical trials // Infect Dis Clin Pract. 1995. - № 4. - P. 17 - 25.

205. Nord C.E. Use of newer quinolones for the treatment of intraabdominal infections: Focus on clinafloxacin // Infection. 1999. - Vol. 27. - P.166 - 172.

206. Nugent R.P., Krohn M.A., Hillier A.L. Reliability of diagnosing bacterial vaginosis is improved by standardized ^method of Gram stain interpretation // J. Clin Microbiol. 1991. - Vol. 29. - P. 297-301.

207. Nyfors S., Kononen E., Takala A., Jousimies Somer H. b - Lactamse production by oral anaerobic Gram - negative species in infants in relation to previous antimicrobial therapy // Antimicrob Agents Chemother. - 1999. - Vol. 43.-P.1591 - 1594.

208. Okuda K., Minami M., Furusawa M., Dorf M.E. Analysis of T cell hybridomas. II. Comparisons among three distinct types of monoclonal suppressor factors Hi. Exp. Med., Dec. 1981. - Vol. 154. - P. 1838 - 1851.

209. Okuda K., Minami M., Sherr D.H., Dorf M.E. Hapten-specific T cell responses to 4-hydroxy-3-nitrophenyl acetyl. XI. Pseudogenetic restrictions ofhybridoma suppressor factors //Journal of Experimental Medicine, Aug. 1881. -Vol 154.-P. 1390-1402.

210. Olsen I., Solberg C.O., Finegold S.M. A primer on anaerobic bacteria and anaerobic infections for the uninitiated // Infection. 1999. - Vol.27. - P. 159-165.

211. Olsson В., Nord C.E., Wadstrom T. Formation of b lactamase in Bacteroides fragilis: Cell bound and extracellular activity // Antimicrob. Agents Chemother. - 1976. - № 9. - P. 727 - 735.

212. Rasmussen B.A., Bush K., Tally F. P. Antimicrobial resistance in anaerobes // J. Infect Dis.- 1997. Vol.24. - P. 110 - 120.

213. Rosebury T. Microorganismus indigenous to man. New York, 1962. - 435 P

214. Ruseler-van Embden J.G., Schouten W.R., van Lieshout L.M. Pouchitis: result of microbial imbalance? // Gut. 1994.- Vol.35, № 5. - P. 658-664.

215. Sato K., Inoue M., Mitsuhashi S. Activity of b lactamase produced by Bacteroides fragilis against newly introduced cephalosporins // Antimicrob. Agents Chemother. - 1980. - Vol. 17. - P. 736 - 737.

216. Sato K., Matsuura Y., Inoue M., Mitsuhashi S. Properties of a new penicillinase type produced by Bacteroides fragilis // Antimicrob. Agents Chemother. 1982. - Vol.22. - P. 579-584.

217. Sato K., Matsuura Y., Miyata M., Inoue M., Mitsuhashi S. Characterization of cephalosporinases from Bacteroides fragilis, Bacteroides thetaiotaomicron and Bacteroides vulgatus // J. Antibiot. 1983. - Vol.36. - P. 76-85.

218. Savage D.C. The normal human microflora composition // The regulatori and protective role of thenormal microflora (eds. Grubb R. et al.). M- stocton Press. -New York, 1989.

219. Scevola D. La profilassi antibiotico nella pratica chirurgica e medica. L., 1998. -128 p.

220. Spiegel C.A. Bacterial vaginosis // Clin Microbiol Rev. 1991. - № 4. - P. 485-502.

221. Spiegel C.A., Amsel R., Eshenbach D. Anaerobic bacteria in non-specific vaginitis //N. Engl. J. Med.- 1980. Vol. 303. - P. 271.

222. Stark C., Edlund C., Nord C.E. Ecological balance and disturbance in the oropharyngeal and gastrointestinal microflora // Span J Chemother. 1996. -№ 4. -P. 250-259.

223. Stark P.L., Lee A. The microbial ecology of the large bowel of brest-fed and formula-fed infants during the first year of life // J. Med. Microbiol. 1982. -Vol.15,№2.-P. 189-203.

224. Stephent A.M., Gummings J.H. The microbial contribution to human faecal mass // J. Med. Microbiol. 1980. - Vol. 13. - P. 45 - 56.

225. Sutter V., Finegold S.M. Wadsworth anaerobic bacteriology manual. 1980.

226. Tally F.P., Goldin В., Sullivan E. Nitroimidazoles: in vitro activity and efficacy in anaerobic infections // Scand J. Infect Dis. 1981. - Vol.26. - P. 46-53.

227. Taniguchi N., Usui M., Okuda K., Matuhasi T. Hapten-pullulan conjugate-induced CMI suppression: demonstration of a common pathway of suppressor cells involving idiotypic interactions // J. Immunol., Nov. 1982. - Vol.129. - P. 1816 -1822.

228. The Biology of anaerobic microorganisms. / Ed. A. J. B. Zehnder. — N. Y., 1988.

229. Trevoux R., Fan A., Sebald M. Infections gynecologiques anaerobies // Rev. Prat. (Paris). 1977. - Vol. 27, № 3. - P. 149 - 154.

230. Tuner К., Lindqvist L., Nord C.E. Purification and properties of a novel p-lactamase from Fusobacterium nucleatum // Antimicrob. Agents Chemother. -1985.-Vol. 27.-P. 943-947.

231. Ueshima J., Shoji M., Ratnayake D. B. Purification, Gene Cloning, Gene Expression, and Mutants of Dps from the obligate anaerobi Porphyromonas gingivalis // Infect. Immun., March 1. 2003. - Vol.71, № 3. - P. 1170 - 1178.

232. Van der Waaij D. The Immunoregulation of the infestinal flora: experimental investigations on the development and the composition of the microflora in normal and thymusless mice // Microecol. Therapy. 1984. - Vol. 14.

233. Van der Waaij D., Limburg P.C., Mesander G., van der Waaij L.A. In vivo Ig A coating of anaerobic bacteria in human faeces // Gut. 1996. - Vol.38, № 3. - P. 348-354. ■ ,

234. Wang De-Wang, Ngao Li, Kiao Guang-Xia Anaerobic infections of burns // Burns.-1985.-Vol. 11.-P. 192-196.

235. Wexler H.M., Molitoris E., Mollitoris D., Finegold S.M. In vitro activity of levofloxacin against a selected group of anaerobic bacteria isolated from skin and soft tissue infections // Antimicrob Agents Chemother. 1998. - Vol. 42. - P. 984986.

236. Wilson S.E., Hopkins J.A. Clinical correlates of anaerobic bacteriology in peritonitis // Clin. Infect. Dis. 1995. - Vol. 20, № 2. - P. 251 - 256.

Информация о работе

Сухина, Марина Алексеевна
кандидата биологических наук
Ставрополь, 2005
ВАК 03.00.07

Диссертация

Характеристика анаэробных бактерий при гнойно-воспалительных и желудочно-кишечных заболеваниях - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы