Экспериментальное обоснование клинического применения споробактерина в кардиохирургии

Давыдов, Дмитрий Сергеевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Экспериментальное обоснование клинического применения споробактерина в кардиохирургии
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Экспериментальное обоснование клинического применения споробактерина в кардиохирургии"

ДАВЫДОВ ДМИТРИЙ СЕРГЕЕВИЧ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ КЛИНИЧЕСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ СПОРОБАКТЕРИНА В КАРДИОХИРУРГИИ

03.02.03 - микробиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 2010

604603480

004603480

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении науки «Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека и Федеральном государственном учреждении «Федеральный научный центр трансплантологии и искусственных органов им. академика В.И. Шумакова» Министерства здравоохранения и социального развития РФ

Научные руководители: доктор биологических наук профессор

кандидат медицинских наук доцент

Осипова Ирина Григорьевна Габриэлян Нина Индоаровна

Официальные оппоненты: академик РАЕН и РАМТН доктор медицинских наук профессор

доктор биологических наук профессор

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Московская медицинская академия имени И. М. Сеченова» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Защита состоится июня 2010 г. в « \5~» часов на заседании диссертационного

совета Д 212.203.05 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов» по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.8., корп. 1

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов» по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.6

Бондаренко Виктор Михайлович Орлова Валентина Сергеевна

Автореферат разослан «_ мая 2010 г.

« I

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук, доцент

О. Б. Гигани

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. Особенностью кардиохирургических вмешательств с использованием искусственного кровообращения является повышение риска микробной контаминации и эндогенного инфицирования внутренних органов и крови (Coleman C.I., 2007; Deitch Е.А, 2002; Velasco Е., 1996). Для профилактики инфекционных осложнений при операциях с использованием искусственного кровообращения, в зависимости от доминирующих видов возбудителей внутрибольничных инфекций, применяют антибиотики различных групп - цефалоспорины, карбапенемы, гликопептиды, в т. ч. препараты группы резерва, а также сочетания антибиотиков. Тем не менее, несмотря на использование новейших антибактериальных препаратов, процент гнойно-септических осложнений в кардиохирургии остается высоким. Летальность у больных с генерализованными гнойно-септическими осложнениями достигает 40% (Di-ekema D.J., 2005).

Резистентность возбудителей нозокомиальных инфекций к антибактериальным препаратам различных групп, в том числе и препаратам группы резерва (ванко-мицин, линезолид, тиенам), неуклонно повышается (Бокерия Л.А., 2007; Murphy G.J., 2001). Известно, что антибиотики обладают рядом существенных неблагоприятных эффектов — вызывают развитие дисбиозов (в т.ч. кандидозов), снижение иммунитета, нередко являются причиной токсических, аллергических и других клинически значимых осложнений. Затраты на применение антибиотиков составляют ощутимую долю бюджета клинического учреждения (Габриэлян Н.И., 2008; Solomkin J.S., 2001). Проблема предупреждения инфекций в кардиохирургии, как и в хирургии в целом, поиска альтернативных препаратов для профилактики и лечения инфекционных осложнений с каждым годом не теряет актуальности. Особый интерес при этом представляют пробиотики - препараты из живых бактерий. Назначение пробиотиков хирургическим больным позволяет уменьшить отрицательное воздействие антибиотиков (Шевдеров Б.А., 2001; Surawicz С.М., 1989; Bonn D., 2003).

В последние годы в Российской Федерации применяются зарубежные и отечественные препараты на основе живых бактерий р. Bacillus. Бактерии р. Bacillus широко распространены в окружающей среде и являются одним из основных компонентов микрофлоры почв, воды, воздуха, и человек в процессе жизнедеятельности постоянно контактирует с ними. Данные микроорганизмы, будучи одним из важных компонентов экзогенной микрофлоры, являются транзиторными микроорганизмами микробиоценоза человека. Бактерии р. Bacillus характеризуются рядом свойств, определяющих их преимущество перед другими микроорганизмами, используемыми в качестве основы пробиотиков. Многосторонними механизмами действия бацилл являются антагонистическая активность в отношении широкого спектра грамположи-тельных и грамотрицательных микроорганизмов, высокая энзимная активность, продукция лизоцима, антибиотиков и антибиотикоподобных веществ, детоксицирующая активность (Смирнов В.В., 1982; Сорокулова И.Б., 1999; Осипова И.Г., 2005; Muscet-tolla М., 1992; Kosak Т., 1998; Urdaci М.С., 2004).

К числу препаратов, содержащих в основе бактерии p. Bacillus, относится российский споровый пробиотик споробактерин сухой (штамм Bacillus subtilis 534). Препарат рекомендован МЗ РФ с 1992 г для применения в клинической практике для лечения острых кишечных инфекций (ОКИ), воспалительных процессов и ран различного генеза, профилактики гнойно-септических осложнений до и после хирургических операций. В 2000 г в РФ зарегистрирована новая лекарственная форма «Споробактерин жидкий, суспензия для приема внутрь», препарат также показан для лечения ОКИ, дисбиозов, профилактики послеоперационных гнойно-септических ос-

ложнений в гинекологии. Однако споробактерин никогда не применялся в кардиохирургии и трансплантологии.

Осиповой И.Г. (1997) доказана безопасность штамма Bacillus subtilis 534 и препарата споробактерин сухой. Однако в этих исследованиях использовались лиофи-лизат и суточная культура штамма 534, содержащие в основном вегетативные клетки и лишь незначительное количество спор. В препарате споробактерин жидкий содержатся споры штамма Bacillus subtilis 534 в 7% растворе натрия хлорида, и по мнению ряда исследователей, в препарате на конце срока годности могут накапливаться метаболиты, обладающие токсигенными свойствами. Вышеизложенное обуславливает актуальность проведения экспериментального изучения споробактерина жидкого в опытах in vivo и in vitro, в частности безопасности, антагонистической активности в отношении клинических штаммов, выделенных от пациентов кардиохирургического профиля с послеоперационными инфекционными осложнениями (ПИО), антибиоти-коустойчивости и т.д., для дальнейшего применения препарата в кардиохирургии и трансплантологии.

Цель настоящего исследования - экспериментальное изучение эффективности пробиотического препарата споробактерин жидкий (штамм В. subtilis 534) для обоснования его практического применения в целях профилактики гнойно-септических послеоперационных осложнений у пациентов кардиохирургического профиля и внедрения в систему лечебных мероприятий. Задачи исследования

1. Изучить безопасность пробиотика споробактерин жидкий.

2. Исследовать видовой состав микроорганизмов - возбудителей гнойно-воспалительных осложнений, выделенных от пациентов кардиохирургического профиля, провести количественный анализ и определить чувствительность к антибиотикам.

3. Провести сравнительное изучение in vitro ингибирующей активности антибиотиков и споробактерина в отношении клинических штаммов, выделенных от пациентов кардиохирургического профиля с послеоперационными инфекционными осложнениями.

4. Провести сравнительное изучение иммуномодулирующего действия коммерческих иммуномодуляторов и споробактерина in vitro на модели нейтрофилов, выделенных из крови пациентов стационара ФНЦ ТиИО им. акад. В. И. Шумакова.

5. Оценить сравнительную эффективность споробактерина и традиционной анти-биотикотерапии, применяемой для профилактики послеоперационных инфекционных осложнений у пациентов кардиохирургического профиля. Научная новизна

Впервые проведено комплексное изучение безопасности препарата споробактерин жидкий in vivo.

Выявлена стабильно высокая антагонистическая активность препарата споробактерин жидкий в отношении клинических штаммов условно патогенных микроорганизмов, обладающих множественной лекарственной устойчивостью, в т. ч. мети-циллинрезистентностью и ß-лактамазной активностью.

Впервые в опытах in vitro проведена сравнительная оценка модулирующего действия споробактерина жидкого и коммерческих иммуномодуляторов на функциональную активность нейтрофилов человека.

Впервые продемонстрирована равная эффективность бациллярного пробиотического препарата при профилактике послеоперационных гнойно-септических ос-

ложнений в сравнении с антибиотиками при оценке средней продолжительности периода реабилитации.

Впервые выявлены преимущества использования споробактерина в сравнении с введением антибиотиков при оценке клинической эффективности. Практическая значимость

Выявлена антагонистическая активность споробактерина жидкого в отношении клинических условно-патогенных микроорганизмов - возбудителей гнойно-воспалительных послеоперационных осложнений, выделенных от пациентов кар-диохирургического профиля.

Доказано отсутствие побочных действий и высокая лечебно-профилактическая эффективность споробактерина при инфекционных послеоперационных осложнениях у пациентов кардиохирургического профиля.

Соотношение стоимости лечения и пребывания пациентов в стационаре при использовании споробактерина и антибиотиков составляет 1:9, и это подтверждает экономическую целесообразность применения споробактерина.

Результаты проведенных исследований легли в основу методических указаний «Применение пробиотика споробактерина для профилактики послеоперационных осложнений в кардиохирургии», которые применяются в стационаре ФНЦ ТиИО.

Получен патент РФ № 2350329 «Способ профилактики послеоперационных гнойно-септических осложнений в кардиохирургии». Положения, выносимые на защиту

> Результаты доклинического исследования свидетельствуют, что споробактерин жидкий соответствует требованиям безопасности, предъявляемым медицинским иммунобиологическим препаратам, применяемым в качестве лекарственных средств.

> Доминирующими группами возбудителей гнойно-воспалительных осложнений в послеоперационном периоде в кардиохирургии являются Staphylococcus spp., Enterococcus spp., Pscudomonas spp., представители сем. Enterobacteriaceae.

У Споробактерин жидкий проявляет высокую антагонистическую активность в отношении основных возбудителей послеоперационных нозокомиальных инфекций и модулирующую активность в отношении фагоцитов крови человека в опытах in vitro.

> Споробактерин жидкий обладает высокой профилактической и терапевтической эффективностью при послеоперационных инфекционных осложнениях у пациентов кардиохирургического профиля.

Личный вклад соискателя. Автору принадлежат участие в разработке концепции и направления исследований, непосредственное осуществление экспериментальных исследований, анализ и теоретическое обобщение полученных данных, формулирование выводов. В работе использованы материалы, полученные автором в соавторстве с сотрудниками лаборатории диагностических бактерийных препаратов с коллекцией микроорганизмов и клиники лабораторных животных ФГУН ГИСК им. Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора и лаборатории гнойно-ссптических осложнений и эндотоксикозов ФГУ Федерального научного центра трансплантологии и искусственных органов им. акад. В.И.Шумакова Минздравсоцразвития. Автор выражает глубокую благодарность руководителям и всем сотрудникам за неоценимую помощь в выполнении данной работы. Особая благодарность д.м.н. Горской Е.М. и к.б.н. Мефёду К.М. за действенную помощь и поддержку.

Апробация работы и публикации. Основные результаты проведенных исследований были опубликованы и доложены на Всероссийской научно-практической конференции «Вакцинология. Совершенствование иммунобиологических средств

профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней» (Москва, 2006, 2008); XIV Российском научном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007); I Международном конгрессе «Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Фундаментальные и клинические аспекты» (Санкт-Петербург, 2007); Международной конференции, посвященной 110-летию Пермского НПО «Биомед» (Пермь, 2008); II Всероссийском съезде микологов (Москва, 2008); Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Биологическая безопасность в современном мире» (Оболенск, 2009); XXXII Международном конгрессе Общества «Микробная экология и болезни» (SOMED) (Санкт-Петербург, 2009).

Диссертация апробирована и рекомендована к защите на заседании Ученого совета ФГУН ГИСК им. Л.А.Тарасевича.

По теме диссертации опубликованы 16 печатных работ, в т.ч. в рецензируемых изданиях, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки Российской Федерации, получен Государственный патент РФ на изобретение и разработаны Методические рекомендации.

Объем и структура работы. Диссертация построена по традиционному плану и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов, заключения, выводов, списка литературы и приложения. Работа изложена на 105 страницах текста компьютерной верстки и иллюстрирована 17 таблицами и 14 рисунками. Список литературы представлен 218 источниками (85 отечественных и 133 зарубежных).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Материалы:

> «Споробактерин жидкий, суспензия для приема внутрь», производство ООО «Бакорен» (г. Оренбург), производственные серии (п=9);

> патогенные и условно-патогенные штаммы микроорганизмов (п=255'>. выделенные от больных с послеоперационными инфекционными осложнениями, находившихся в стационаре ФНЦ ТиИО на реабилитации после операций по коррекции клапанных поражений сердца и аорто-коронарного шунтирования;

> антибиотики (АБ): ампициллин, оксациллин, доксициклин, эритромицин, стрептомицин, тетрациклин, гентамицин, линкомицин, моксифлоксацин, цефу-роксим, тобрамицин, хлорамфеникол, фузидин, рифампин, амикацин, цефотак-сим, офлоксацин, цефалексин, цефазолин, цефамандол, цефтазидим, ципроф-локсацин, имипенем, цефтриаксон, цефепим, цефоперазон, нетилмицин, меро-пенем, линезолид, сульперазон, ванкомицин, пефлоксацин, левофлоксацин, норфлоксацин, цефокситин, пенициллин, азитромицин, полимиксин, азтреонам, азлоциллин, тикарциллин (+ клавулоновая кислота), амоксициллин (+ клавуло-новая кислота), триметоприм/сульфометоксазол;

> иммуномодулирующие препараты:

• габриглобин, иммуноглобулин человека нормальный для внутривенного введения сухой (Ивановская станция переливания крови, г. Иваново)

• спленопид, лиофилизат для приготовления раствора для внутривенного введения (ЗАО «ПромИнвест», г. Москва)

• тимоген, лиофилизат для приготовления раствора для внутримышечного введения (ЗАО «Цитомед», г.Санкт-Петербург)

• пирогенал, раствор для инъекций (Филиал «Медгамал» НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, г. Москва)

• полиоксидоний, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций и местного применения (НПО «Петровакс Фарм», г. Москва).

> лабораторные животные;

• мыши (обоего пола) линии "¿/ас£" и F(CBAxBl), массой 10-16 г (п=100);

• мыши беспородные (обоего пола), массой 10-16 г (п=200).

> питательные среды, традиционно применяемые в микробиологических исследованиях, в т.ч. пр-ва компании Laboratorios Conda (Испания) и НПО «Микроген»

(РФ).

Методы

Безопасность препарата споробактерин жидкий оценивали по отсутствию токсичности, токсигенности и вирулентности в соответствии с Методическими рекомендациями (Смирнов В.В. с соавт., 1983), острой и хронической токсичности препарата в соответствии с РД 42-28-8-89. В исследованиях использовали серии препарата споробактерин жидкий в начале срока годности и по его окончании.

Критерием оценки являлось отсутствие гибели животных и положительная динамика групповой массы.

При изучении острой токсичности препарат центрифугировали при 5000 об/мин в течение 30 мин, осадок разводили 0,9% раствором натрия хлорида, затем однократно вводили белым беспородным мышам в следующих дозах: per os - 1011 КОЕ/мл, внутрибрюшишю (в/б) - 5хЮ10 КОЕ/0,5 мл, внутривенно (в/в) — 5x10 КОЕ/0,5 мл. Контрольные группы животных получали физиологический раствор аналогично и в соответствующем объёме.

При изучении хронической токсичности животным препарат вводили per os ежедневно в дозе 105 КОЕ/0,5 мл, в течение 21 сут. Первая контрольная группа животных ежедневно per os получала по 0,5 мл физиологического раствора в течение 21 сут, вторая группа животных была интактная.

При выполнении экспериментов на животных руководствовались «Правилами гуманного обращения с лабораторными животными» (СП №1045-73, 2003).

Изучение культурально-морфологических и физиолого-биохимических свойств штаммов патогенных и условно-патогенных микроорганизмов (УПМ) проводили общепринятыми методами (Биргер, 1992; Bergey, 1986).

Определение антибиотикочувствительности (АБЧ) нозокомиальпых штаммов проводили диско-диффузионным методом на среде Мюллер-Хинтона в соответствии со стандартами CLSI (ранее NCCLS). Использовали диски фирмы Becton Dickinson. Диагностическая панель состояла из 42 антибиотиков различных групп. Определение зон задержки роста осуществляли на приборе «Озирис» (Biorad, Франция) с использованием экспертной системы, позволяющей учитывать минимальную ингиби-торную концентрацию антибиотиков, природную резистентность микроорганизмов, метициллин-резистентность и бета-лактамазную активность бактерий.

Для выявления бактериемии образцы крови культивировались в аппаратном комплексе BactAUert (BioMerieux, Франция). Идентификацию выделенных культур условно-патогенных микроорганизмов проводили с применением коммерческих тест-систем API (BioMerieux, Франция). Исследование биологических свойств микроорганизмов (гемолизин-продукции, плазмокоагуляции и др.) осуществляли общепринятыми методами.

Определение антагонистической активности споробактерина в отношении выделенных нозокомиальных штаммов УПМ проводили методом отсроченного анта-

гонизма (ФСП 42-02160735-06). Антагонистическую активность считали нулевой при зоне задержки роста тест-штамма до 5 мм, низкой - от 5 до 10 мм, высокой - от 10 до 20 мм, очень высокой - свыше 20 мм. В соответствии с принятой практикой антагонистическую активность считали эффективной при средних и высоких показателях (Осипова, 2005).

Результаты всех доклинических исследований оценивали на основании данных 3 последовательно проведенных экспериментов.

В течение 2006 - 2008 гг. проводилось клиническое исследование, в которое было включено 276 пациентов стационара ФГУ ФНЦ ТиИО им. акад. В.И. Шумакова. Пациенты были рандомизированы по виду оперативного вмешательства, возрасту, полу, наличию факторов риска ПИО и разделены на 2 группы. К факторам до-операционного риска относили наличие очагов инфекции, сопутствующие заболевания, проведение повторных операций на сердце и др. Все операции проведены в условиях искусственного кровообращения (ИК). В качестве интраоперационных факторов учитывались длительность ИК, искусственная вентиляция легких (ИВЛ), проведение реторакотомии, постановка внутриаортального баллона, объем кровопотери.

Первая группа - основная (в послеоперационном периоде у больных применялся только споробактерин), вторая группа - сравнения (в послеоперационном периоде использованы антибиотики по обычной схеме). Введение антибиотиков пациентам обеих групп проводили до операции, в процессе операции, а также в отделении реанимации, время пребывания в котором больных, как правило, не превышало 24 ч. После перевода в профильное отделение инъекционное введение антибиотиков, назначенных после скриннинговых исследований АБЧ УПМ, выделяемых у пациентов, продолжали только пациентам 2 группы. Пациентам 1 группы после перевода в отделение назначали курс споробактерина. Препарат назначали перорально по 2 - 5 мл 2 раза в день в течение 10 - 14 сут.

Пациентам обеих групп проводили обычные клинико-лабораторные исследования (ЭКГ, ЭХО-КГ, коронарография, гемограммы и др.), мониторинг динамики температурных реакций, состояния ран, мест введения подключичных катетеров; учитывали длительность антибиотикотерапии, смену антибиотиков, необходимость использования проблемных антибиотиков, спектр выделяемой микрофлоры и уровень ее резистентности к антибиотикам и подбор наиболее адекватного иммуномодулято-ра в реабилитационном периоде.

Проводили сравнительное изучение in vitro иммуномодулирующего действия коммерческих иммуномодуляторов и споробактерина на модели нейтрофилов крови пациентов стационара ФНЦ ТиИО методом люминолзависимой хемилюминесцен-ции (Владимиров Ю.А., 1989). Вычисляли индекс стимуляции (ИС) по формуле:

ИС = (0-К)/К,

где О - число импульсов в системе нейтрофилов, полученных от пациентов, в сочетании со споробактерином и/или иммуностимуляторами; К - число импульсов в интактной системе нейтрофилов.

Полученные данные обработаны с помощью методов вариационной статистики, позволяющих вычислять параметры достоверной значимости результатов исследования по общепринятым методикам (Ашмарин И.П., Воробьев A.A., 1962; Гланц, 1999). Статистическую значимость различий между группами оценивали с использованием непарного t-критерия Стьюдента. Различия считали статистически значимыми при р<0,05. Результаты в таблицах и на рисунках представлены в вцде средней арифметической и ее стандартной ошибки (М±ш).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Экспериментальное изучение эффективности пробиотического препарата споробактерин жидкий

Всестороннее исследование биологической безопасности препарата споробактерин жидкий на организм животных показало, что препарат не вирулентен, не токсичен, а его метаболиты не токсигенны. Полученные результаты позволяют считать препарат безвредным. Исследование образцов препарата с истекшим сроком годности подтверждают стабильность показателей безопасности на протяжении всего периода длительного хранения.

При изучении острой и хронической токсичности выявлено, что во время периода наблюдения животные были здоровы, активны, поведенческие реакции не нарушались, масса тела не снижалась; побочные эффекты или осложнения, связанные с введением препарата, не выявлены. Гистологические исследования подтвердили отсутствие патологических изменений в тканях и внутренних органах лабораторных животных. Не отмечено значимой разницы в селезеночном индексе мышей контрольной и опытной групп животных. В процессе исследований не удалось определить величину показателя Ь05(|. Можно предположить, что данные показатели для штамма В.зиЫШя 534 составляют при в/б введении более ЮхЮ10 КОЕ/0,5 мл и при в/в введении - 5х10'° КОЕ/0,5 мл. Таким образом, проведенные исследования острой и хронической токсичности показали, что споробактерин жидкий не вызывает во внутренних органах и ЦНС животных изменений, указывающих на наличие токсического действия при введении доз, даже значительно превышающих человеческие.

Полученные результаты подтверждают, что споробактерин жидкий безопасен даже на конце срока годности и не вызывает каких-либо патологических изменений в организме лабораторных животных, следовательно, данное исследование доказывает полное соответствие препарата требованиям по безопасности, предъявляемым к МИБП.

Следующим этапом работы стало изучение видового состава микроорганизмов -возбудителей послеоперационных нозокомиальных инфекций, выделенных из разных образцов биосубстратов полученных от пациентов кардиохирургического профиля. В рамках данного исследования выделено 255 штаммов грамположительных (гр+) и грамотрицательных (гр-) микроорганизмов разных групп. Наибольшая обсеменен-ность гр+ микрофлорой выявлялась в образцах крови, отделяемого раны, смывов с сосудистых катетеров; гр- микроорганизмы преобладали в отделяемом трахеи и моче (рис.1).

Рис. 1. Распределение по субстратам условно-патогенных микроорганизмов, выделенных от пациентов с ПИО

Анализ видового состава выделенных УПМ (рис. 2) показал, что гр+ микроорганизмы преобладали и составили 68,2% (174 штамма), при этом доминировали коагу-лазоотрицательные стафилококки (КОС) - 44,2%, бактерии рода Enterococcus и S. aureus составили, соответственно, 20,1% и 19,1%. В небольшом количестве (около 16,6%) выделялись бактерии родов: Streptococcus, Lactobacillus, Corynebacterium, Aerococcus. Среди гр- микрофлоры (81 штамм) чаще всего обнаруживались бактерии рода Pseudomonas, в частности, Р. aeruginosa (43,2%); затем представители семейства Enterobacteriaceae (30,9%), бактерии родов Acinetobacter, Stenotrophomonas, Burkholderia выделяли в 18,5 % случаев.

Рис. 2. Распределение по видам условно-патогенных микроорганизмов, выделенных у пациентов с ПИО

Проведен анализ этиологической значимости различных видов УПМ в развитии послеоперационных инфекционных осложнений. КОС обнаружены у 30% пациентов, P. aeruginosa обнаружена у 16% пациентов, бактерии p. Enterococcus и S. aureus - у 13%, бактерии кишечной группы - у 10%, кандида - у 4% (рис.3).

35 30 25 20 15

10 5 0

30,2

16,1 13,7 1 13,1 9,8 4,3

Рис. 3. Частота выделения УПМ у пациентов кардиохирургического профиля при ПИО

Одним из общепризнанных показателей эффективности пробиотических препаратов является антагонистическая активность (АА) в опытах in vitro. В опубликованных ранее работах (Никитенко, 1992; Осипова, 2001, 2003) показана выраженная антагонистическая активность споробактерина сухого в отношении различных УПМ, в т.ч. тех, которые являются этиологически значимым фактором развития нозокоми-альных инфекций. При изучении АА споробактерина в отношении УПМ, выделенных у пациентов кардиохирургического профиля выявлено, что препарат проявлял стабильную АА (средние и высокие показатели). Отмечено, что на уровень АА споробактерина влияет источник выделения микроорганизмов (табл. 1). Так, 88% гр+ иггаммов, выделенных из трахеального катетера, были чувствительны к споробакте-рину (АА средняя или высокая), а 100% гр- штаммов, выделенных из внутрисосуди-стых катетеров, были устойчивы.

□ Enttro-bacle-

30,9

Q Прочие 18,5

В Pseudomonas spp. 7,4

Таблица 1. Антагонистическая активность споробактерина в отношении штаммов УПМ, выделенных из различных субстратов

№ п/п Всего Гр+ АА, ср (им) п Гр+ штаммов, чувствительных к споробактернну (ВЧ - СЧ - НЧ*), шт (%) Гр- АА, ср (мм) 11 Гр- штаммов, чувствительных к споробактернну (ВЧ - СЧ -НЧ), шт (%)

кровь 60 47 15,33±3,8 8(17,0%) - 22(46,8%) -17(35,2%) 13 1,2 0(0%) - 1(7,7%) - 12(92,3%)

рапа 41 33 15,27±3,2 5(15,1%) - 17(51,2%) -11(33,3%) 8 0 0(0%) - 0(0%) - 8(100%)

моча 37 20 12,51±3,3 2(10,0%) - 13(65%) - 5(27,8%) 17 3,2 0(0%) - 6(35,3%) - 11(64,7%)

трахеальный катетер 25 б 17,17±2,4 3(50%) - 2(33,3%) - 1(16,7%) 19 1,9 0(0%) - 3(15,8%) - 16(84,2%)

подкл. катетер 28 22 11,88±1,6 2(9,1%) - 14(63,6%) - 6(27,3%) 6 0 0(0%) - 0(0%) - 6(100%)

плевр, жидкость 9 8 15,72±3,2 3(37,5%) - 4(50%) - 1(12,5%) 1 0 0(0%) - 0(0%) - 1(100%)

ж-ть бр. полости б 4 19,44±1,4 2(50%) - 1(25%) - 1(25%) 2 0 0(0%) - 0(0%) - 2(100%)

опер, материал 25 18 14,15±5,1 6(33,3%) - 9(50%) - 3(16,7%) 7 9,1 ±2,1 0(0%) - 4(40%) - 3(60%)

в/с катетер б 4 9,17±1,9 0(0%) - 3(75%) -1(25%) 2 0 0(0%) - 0(0%) - 2(100%)

дренаж 3 1 21,67±3,3 1(100%) - 0(0%) - (0%) 2 2,9 0(0%) - 1(50%) - 1(50%)

перфузаты 4 2 11,67±1,1 0(0%) - 2(100%) - 0(0%) 2 13,1±1,1 0(0%) - 2(100%) -0(0%)

фурункул 2 2 25,4±7,0 1(50%) - 1(50%) - 0(0%) - - -

электрод 2 2 0 0(0%) -0(0%) - 2(100%) - - -

кнстя 2 2 8,67±1,5 0(0%)-1(50%)-1(50%) - - -

бронхоскоп 1 - - - 1 0 0(0%) - 0(0%) - 1(100%)

зев 4 3 0 0(0%) -0(0%) - 3(100%) 1 0 0(0%) - 0(0%) - 1(100%)

всего 255 174 - 33-89-52 (18,9% - 51,2% - 29,9%) 81 - 0 - 15 - 66 (0% - 18,5% - 81,5%)

* ВЧ - высокая чувствительность, СЧ - средняя чувствительность, НЧ - низкая чувствительность

Таким образом, показано, что споробактерин проявляет АА в отношении 70,1% гр+ и 19,5% гр- микроорганизмов. При этом выявлены различия уровня АА споро-бактерина, зависящие от вида и штамма микроорганизмов. Величина зон задержки роста 5. Иаето1уИсш и Е. /аесаШ существенно превышает этот показатель для 5. ху-1ояш и Е. faecium. Процент штаммов стафилококков, рост которых подавлялся спо-робактерином, колеблется от 44% (& ху^ш) до 100% (£. яаргор.ЬуИсиз и X \varneri); процент чувствительных штаммов энтерококков варьировал от 50% (Е. /аесаПз) до 75% (Е. /аеаит) (табл. 2)

Таблица 2. Показатели антагонистической активности споробактерина в отношении различных видов стафилококков и энтерококков___

Тест-штаммы Кол-во штаммов Зоны задержки роста тест-штаммов споро-бактерином (мм) % штаммов, чувствительных к споро-бактерину

S. aureus 32 15,42±5,7 63,5

S. epidermidis 24 15,4±1,9 68,2

S. haemolyticus 17 17,4±2,1 76,4

S. xylosus 9 9,9±1,1 44,4

S. saprophytics 5 13,5±1,7 100

S. warneri 5 11,3±1,6 100

Всего КОС 77 14;33±3,0 77,9

E.faecium 16 11,8±2,5 75

E.faecalis 16 15,8±2,9 50

При исследовании чувствительности выделенных клинических штаммов к АБ выявлены высокая устойчивость УПМ к антибактериальным препаратам различных групп (рис. 4). Так, установлено, что процент метициллин-резистентных (МЙ+) золотистых стафилококков от общего количества исследованных штаммов в исследованной выборке достигает 81,5%, М1М- КОС - более 65%. Чувствительность энтерококков к АБ, за исключением ванкомицина, составила лишь 29,1%. р-лактамазная активность установлена для 73% энтеробактерий.

Y/////S,

ШЖ

¡«ш

шт

ш Ш

MR+резистентность S. MR+ резистентность JJ - л&ктямяэцйа aureus КОС активность

резистентность Enterococcus spp

энтеробактерий

Рис. 4. Устойчивость к антибиотикам УПМ, выделенных от пациентов стационара ФНЦ ТиИО в период 2006-2008 гг. от пациентов кардиохирургического профиля

Одновременное определение антибиотикочувствительности штаммов нозоко-миальных бактерий и чувствительности их к споробактерину явилось следующим этапом исследований.

□ АА Споробактерина И Чувствительность к антибиотикам

Рис. 5. Сравнительная активность споробактерина и антибиотиков в отношении УПМ

В клиниках кардиохирургического профиля в структуре микроорганизмов, этиологически значимых в возникновении послеоперационных осложнений, преобладают стафилококки разных видов. У штаммов S.aureus, выделенных из различных субстратов, средний показатель эффективности споробактерина был высоким при задержке роста 64,5% штаммов золотистого стафилококка. В тоже время в результате преобладания метициллин-резистентных штаммов чувствительность стафилококков к антибиотикам составила 36,1%. 75,7% штаммов КОС, выделенных из различных субстратов (кровь, моча, отделяемое ран и трахеи), обладали высокой чувствительностью к споробактерину, тогда как чувствительность к антибиотикам была низкой и находилась на уровне 28,4%.

В отношении энтерококков также отмечен высокий уровень задержки роста штаммов споробактерином (73,1%), при этом чувствительность к антибиотикам составила 29,1%. Исключение составил ванкомицин, чувствительность к которому выявлена у всех исследованных штаммов. Споробактерин также проявил высокую активность в отношении других гр+ микроорганизмов — микрококков, аэрококков (62,5% штаммов). При этом антибиотикочувствительность микрококков, аэрококков и других гр+ бактерий составила 40,8%. Необходимо также отметить проявление высокой АА споробактерина в отношении грибов p. Candida (рис. 5).

При сравнительном изучении воздействия антибиотиков и споробактерина на гр- микроорганизмы для штаммов энтеробактерий - Enterobacter spp., Е. coli, Serratia spp., Klebsiella spp. и др., установлено, что споробактерин был эффективен в отношении 36,8% штаммов. При этом чувствительность указанных штаммов бактерий к антибиотикам составила лишь 19,1%.

Для штаммов Pseudomonas spp., в том числе Р. aeruginosa характерна множественная резистентность к антибиотикам (85,9%) при отсутствии или низких показателях АА споробактерина.

Прочие изученные штаммы гр- бактерий - ВигШоШепа яерааа, АспШоЬас/ег ярр., 51епо1горкотопа$ такорИуНа были устойчивы как к антибиотикам, так и к спо-робактерину.

Таким образом, в отношении основных возбудителей нозокомиальных инфекций в стационаре ФГУ ФНЦ ТиИО большую, чем у споробактерина, эффективность, удалось установить только для 2 антибиотических препаратов - линезолида и ван-комицина. Эти препараты входят в группу резерва (т.н. проблемные антибиотики) и применяются только по жизненным показаниям.

□ S. aureus ■ Коагулаздотрицательцые стафилококки В Enterococcus spp

Рис. 6. Чувствительность нозокомиальных У11М к споробактерину и антибиотикам различных групп

Перед назначением иммуномодулирующих препаратов пациентам в послеоперационном периоде в стационаре ФНЦ ТиИО им. акад. В.И.Шумакова методом лю-минолзависимой хемилюминесценцин проводят скриннинговые лабораторные исследования по определению модулирующего действия препаратов на функциональную активность фагоцитов крови in vitro. Исследовали иммуномодулирующее дей-

ствие споробактерина в сравнении и в сочетании с иммуномодуляторами, применяемыми при профилактике послеоперационных инфекционных осложнений в кардиохирургии. Показано, что споробактерин повышал фагоцитирующую активность ней-трофилов крови человека в 2,3 раза по сравнению с контролем и в среднем б 1,6 раза — по сравнению с другими иммуномодуляторами (рис. 7). При совместном применении споробактерина и других иммуномодуляторов синергетического эффекта не выявлено, за исключением совместного введения споробактерина и габриглобина, при котором отмечалось повышение индекса стимуляции функциональной активности нейтрофилов на 25% по сравнению с показателями совместного применения споробактерина и других иммуномодуляторов. Полученные результаты обосновывают возможность применения споробактерина при профилактике ПИО в кардиохирургии в качестве иммуномодулятора.

контроль споробактерин спленопид СБ+соленопид тнмоген СБ-Нимоген тдерогенад СБ+пирогенад пашоксидоний СБ+полиоксидоний габригдобин СБ+габриглобин

¡Ш'ШЙШЙШгЗр 1

I I

■ШШМШяШШШШ-I I

..................................у

11Ш11ШШШ11!Ш11!Ш!|||1!Ш1Ш!1Ш1111Ш!11Ш11

^шшфшш^азйё-!-' м

0,5

+1,5

ШННИ -I 1 г

ШШТП 1 ^

2,3

га

2,5

3,5

Рис. 7. Индекс стимуляции функциональной активности клеток мононуклеарной фагоцитирующей системы различными иммуномодуляторами в опытах in vitro

В исследование клинической эффективности применения споробактерина при профилактике послеоперационных инфекционных осложнений были включены 276 пациентов. Распределение пациентов по типам хирургического вмешательства представлено на рис. 8.

протезирование аорто-коронарное сочетавные операции

клапанов сердца шунтирование

Рис. 8. Характеристика хирургических вмешательств у пациентов опытной и контрольной групп

Сравнение пациентов опытной и контрольной групп по наличию факторов риска развития ПИО до начала исследования показало, что в 1 группе пациенты с наличием бактериального эндокардита составили 10,1%, а во 2 группе - 8,7%. Повторных операций у пациентов 1 группы было несколько больше - 7,2% против 5,8% Пациентов с реторакотомией и кровопотерей более 500 мл в 1 группе по сравнению со 2-ой было соответственно в 3 и 2,2 раза больше (рис. 9.). Таким образом, опытная группа пациентов оказалась более тяжелой по клиническим показателям, чем группа сравнения.

10 8

6 4 2 0

бактериальный повторные реторакотомия кровопогеря >500

эндокардит операции мл

□ Группа 1 (споробактерин) Ш Группа 2 (антибиотики)

Рис. 9. Характеристика пациентов опытной и контрольной групп по наличию факторов риска развития ПИО до начала исследования

Применение споробактерина, как показали результаты клинических и лабораторных исследований, не приводило к неблагоприятным отклонениям в динамике послеоперационного восстановительного периода у большинства наблюдаемых пациентов. Повышение температуры до 37,5 °С более двух сут наблюдалось у 13 пациентов опытной группы (9,4%) и у 24 пациентов контрольной группы (17,4%) (рис. 10). Длительность температурного периода у больных на фоне приема споробактерина не превышала 3-5 сут. Повышение температуры у пациентов контрольной группы было более длительным и требовало смены антибиотиков. 20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0

повышение температуры бактериемия количество койко-дией

до 37,5 С более 2 сут

□ Группа 1 (споробакгеряа) ■ Группа 2 (автабиотики)

Рис.10. Основные клинические показатели послеоперационного периода у пациентов опытной и контрольной групп

1% от общего количества пациентов в группе

-шр-

¡■П

У всех больных с лихорадкой проводили бактериологическое исследование крови. Установлено, что у пациентов основной группы посевы крови оказались во всех случаях стерильными. В контрольной группе у 15 пациентов (10,9%) обнаружена бактериемия. Основную часть выделенных микроорганизмов (7 штаммов) представляли MR+ КОС, устойчивые к используемым АБ. У 4 пациентов выделены S. aureus; у 3 из них штаммы оказались метициллин-резистентными. Выделены также 4 высокорезистентных штамма Enterococcus faecalis, по 1 штамму Micrococcus luteus, Aerococcus viridans, Corynebacterium spp.

В группе больных, получавших споробактерин, послеоперационный период протекал без осложнений и не требовал замены препарата и применения дополнительных лекарственных средств, в т.ч. антибиотиков. В группе, получавшей антибиотики, 47% пациентов по тем или иным показаниям проведена смена назначенных ранее препаратов. При этом 26% пациентов назначены антибиотики резерва (проблемные АБ) - тиенам, меронем, ванкомицин, линезолид из-за длительного повышения температуры и выявления бактериемии.

Среднее количество койко-дней для 1 группы составило 14,1 сут, для 2 группы -16,1 сут.

Приведенные данные показали целесообразность и эффективность применения спорового пробиотика в раннем послеоперационном периоде после операций с ИК у тяжелого контингента кардиохирургических пациентов, получивших короткий курс АБ (1 - 1,5 сут). Подсчет стоимости антибиотикотерапии показал, что соотношение стоимости назначаемых препаратов в обследуемых группах пациентов составило в относительных единицах I: 9.

Микробиологический мониторинг спектра бактериемии в стационаре ФНЦ ТиИО им. акад. В.И.Шумакова в период 2006-2009 гг. показывает, что из 206 исследованных штаммов преобладающими возбудителями инфекций кровотока являются КОС — 45,1%, S.aureus - 11,7%, Enterococcus spp. - 10,2%, обладающие множественной лекарственной устойчивостью. В проведенных исследованиях показана выраженная АА споробактерина против гр+ микроорганизмов, в. т.ч. выделенных из крови, и грибов рода Candida. Полученные клинические данные по эффективности альтернативного антибиотикам применения споробактерина в послеоперационном периоде у кардиохирургических больных позволяют полагать, что данные in vitro и клинические данные совпадают.

Помимо прямого антагонистического действия, активность споробактерина в отношении возбудителей ПИО может быть связана с восстановлением нормального микробиоценоза кишечника - резервуара условно-патогенной микрофлоры при дис-бактериозах, как правило, регистрируемых у кардиохирургических пациентов. Немаловажное значение в оценке преимуществ использования споробактерина имеет факт минимизации длительности применения АБ, что способствует уменьшению дисбиотических изменений в кишечнике и повышению неспецифической резистентности. Пробиотик лишен побочных действий.

Таким образом, экспериментальное изучение споробактерина жидкого выявило его безопасность, высокую специфическую активность, переносимость и клиническую эффективность при профилактике гнойно-септических послеоперационных осложнений у пациентов кардиохирургического профиля, что явилось обоснованием внедрения препарата в практику кардиохирургии.

выводы

1. Пробиотический препарат споробактерин жидкий соответствует всем требованиям безопасности, предъявляемым медицинским иммунобиологическим препаратам, предназначенным для клинического применения, по показателям общей, острой и хронической токсичности, токсигенности, вирулентности.

2. У пациентов кардиохирургического профиля с тойно-воспалительными послеоперационными осложнениями выделяются, преимущественно, грамположи-тельные микроорганизмы (68% от общего числа), в т.ч. коагулазоотрицательные стафилококки - 44,2%; бактерии p. Enterococcus - 20,1%; S. aureus — 19,1%. Среди грамотрицателшой микрофлоры преобладают бактерии р. Pseudomonas - 50,6% и бактерии сем. Enterobacteriaceae - 30,9%.

3. При исследовании чувствительности выделенных клинических штаммов условно-патогенных микроорганизмов к антибиотикам установлено, что метициллин-резистентность обнаружена у 81,5% штаммов S. aureus и 65,5% коагулазоотри-цательных стафилококков, ß-лактамазная активность выявлена у 73% бактерий кишечной группы. Резистентность энтерококков к антибиотикам (за исключением ванкомицина) составила 70,9%

4. Споробактерин жидкий проявляет высокую антагонистическую активность в отношении штаммов микроорганизмов, являющихся основными возбудителями нозокомиалышх инфекционных осложнений в послеоперационном периоде, в том числе обладающих множественной резистентностью к антибиотикам. При этом частота выявления чувствительности нозокомиальных условно-патогенных микроорганизмов к споробактерину выше данного показателя для антибиотиков, применяемых для профилактики послеоперационных инфекционных осложнений.

5. Установлено, что споробактерин жидкий в опытах in vitro интенсифицирует фагоцитирующую активность нейтрофилов крови человека.

6. Доказано микробиологическое и клиническое преимущество применения препарата споробактерин жидкий (по показателям длительности периода повышенной температуры, отсутствия бактериемии, длительности пребывания пациентов в стационаре и экономическим затратам) при профилактике гнойно-септических послеоперационных осложнений у пациентов кардиохирургического профиля.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Мефёд К. М., Осипова И. Г., Давыдов Д. С. Результаты комплексного исследования безопасности шгаммов-пробиотиков рода Bacillus // Материалы научной конференции «Новые технологии в профилактике, диагностике, эпиднадзоре и лечении инфекционных заболеваний». - Н. Новгород. - 2006. - с. 236.

2. Мефёд К. М., Давыдов Д. С., Осипова И. Г., Шарая В. С., Васильева Е. А. Применение споровых пробиотиков в мировой практике // Тезисы Всероссийской научно-практической конференции «Вакцинология 2006. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней» - Москва. - 2006. - с. 66.

3. Стяжкин К. К., Васильев Н, Т., Поберий И. А., Забокрицкий А. Н., Рогожин А. 3., Сирик М. С., Чебыкин А. М., Давыдов Д. С., Мефёд К. М. 10-летний опыт серийного производства и применения пробиотика «Биоспорин» и новые задачи // Тезисы Всероссийской научно-практической конференции «Вакцинология 2006. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней». - Москва. - 2006. - с. 89-90.

4. Мефёд К. М., Осипова И. Г., Васильева Е. А., Давыдов Д. С. Результаты сравнительного исследования новых ветеринарных пробиотиков Ирилис и Пацифлор // Вестник РУДН. Серия «Медицина». Юбилейный выпуск № 2 (34) - 2006. - с. 27-31.

5. Габриэлян Н. И., Давыдов Д. С., Осипова И. Г., Горская Е. М., Арефьева Л. И. Сравнительное изучение активности споробактерина и антибиотиков к нозоко-миальным штаммам условно патогенных бактерий // Клиническое питание. - № l-2.-2007.-c.31.

6. Давыдов Д. С., Мефёд К. М., Осипова И. Г., Васильева И. А. Мировое применение споровых пробиотиков в практике здравоохранения // Клиническое питание. 1-2.-2007.-с. 36.

7. Давыдов Д. С., Мефёд К. М., Габриэлян Н. И., Горская Е. М., Осипова И. Г. Антагонистическая активность споровых пробиотиков в отношении клинических штаммов грибов р. Candida, выделенных от пациентов кардиохирургического профиля. // Современная микология в России. Том 2. Материалы 2-го Съезда микологов России. - 2008. - с. 288-289.

8. Осипова И. Г., Мефёд К. М., Давыдов Д. С. Коррекция экспериментального дисбактериоза пробиотиками. // Биопрепараты. - №1. - 2008. - с. 9-15.

9. Габриэлян Н. И., Давыдов Д. С., Горская Е. М., Спирина Т. С., Осипова И. Г. Антагонизм in vitro споробактерина в отношении нозокомиальных штаммов микробов. П Вестник трансплантологии и искусственных органов. - №6. -2008.-е. 12-18.

10. Габриэлян Н. И., Казаков Э. Н, Арефьев Л. И., Мякишев В. Б, Сенченко О. Р., Спирина Т. С., Давыдов Д. С., Осипова И. Г., Горская Е. М., Илюхина Н. Н., Вавилов П. Н., Сускова В. С. Использование споробактерина в послеоперационном периоде у пациентов кардиохирургического профиля. // Грудная и сердечно-сосудистая хирургия. -№6. - 2008. - с. 62-66.

11. Давыдов Д. С., Мефёд К. М., Осипова И. Г., Габриэлян Н. И., Горская Е. М., Илюхина Н. Н., Вавилов П. Н., Сускова В. С., Кривое И. А. Применение споробактерина в послеоперационном периоде. // Тезисы Всероссийской научно-практической конференции «Вакцинология 2008. Совершенствование иммуно-

биологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней». - Москва. - 2008. - с. 45.

12. Габриэлян Н. И., Арефьева JI. И., Давыдов Д. С., Осипова И. Г., Мсфсд К. М. и др. Применение пробиотика споробактерина для профилактики инфекционных осложнений в кардиохирургии. Методические указания. - М., 2009. - 24 с.

13. Давыдов Д. С., Мефёд К. М., Осипова И. Г. Использование споробактерина в кардиохирургии при послеоперационных инфекционных осложнениях // Научно-практическая конференция молодых ученых и специалистов Роспотребпад-зора. Биологическая безопасность в современном мире. - Оболенск, 2009. - с. 229-232.

14. Мефёд К. М., Давыдов Д. С., Осипова И. Г. Актуальные вопросы безопасности споровых пробиотихов // Научно-практическая конференция молодых ученых и специалистов Роспотребнадзора. Биологическая безопасность в современном мире. - Оболенск, 2009. - с. 240-242.

15. Давыдов Д. С., Мефёд К. М., Осипова И. Г., Габриэлян Н. И., Горская Е. М. Обоснование профилактики нозокомиальных послеоперационных инфекций пробиотическими препаратами на основе спорообразующих бактерий р. Bacillus. И Материалы бй Объединённой научной сессии и 2го Международного конгресса по пробиотикам. - Гастроэнтерология Санкт-Петербурга. - №4. -2009.-е. 39.

16. Государственный патент РФ № 2350329 «Способ профилактики послеоперационных гнойно-септических осложнений в кардиохирургии». Заявка № 2007130634. Приоритет изобретения 10 августа 2007 г. Срок действия 10 августа 2027 г. // Шумаков В.И., Габриэлян Н. И., Горская Е.М., Осипова И.Г., Васильева Е. А., Давыдов Д.С., Мефед K.M. и др.

СОКРАЩЕННЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В РАБОТЕ

АД - антагонистическая активность АБ - антибиотики АБТ - антибиотикотерапия АКШ-аорто-коронарное шунтирование Гр+ - грамположительный Гр- - грамотрицательный ИВ Л - искусственная вентиляция легких ИК - искусственное кровообращение КОЕ - колониеобразующая единица ОЕ - оптические единицы ОКИ - острые кишечные инфекции ПИО - послеоперационные инфекционные осложнения УПМ/УПБ—условно-патогенные микроорганизмы/бактерии ФНЦ ТиИО - Федеральный научный центр трансплантологии и искусственных органов им. акад. В.И.Шумакова Минздравсоцразвития РФ ФСП-фармакопейная статья предприятия

ДАВЫДОВ Дмитрий Сергеевич (Россия). Экспериментальное обоснование клинического применения споробактерина в кардиохирургии.

Диссертация посвящена комплексному исследованию пробиотического препарата на основе аэробных спорообразующих бактерий рода Bacillus - Споробактерин жидкий (пр-во ООО «Бакорен», г. Оренбург», РФ). Было проведено исследование безопасности препарата in vivo, которое включало изучение вирулентности, общей токсичности, токсигенности, острой и хронической токсичности. Всестороннее изучение споробактерина показало отсутствие патологических изменений в организме животных и полное соответствие требованиям к безопасности иммунобиологических препаратов.

В ходе исследований было установлено, что споробактерин жидкий проявляет выраженную антагонистическую активность в отношении широкого спектра анти-биотикоустойчивых клинических штаммов условно-патогенных микроорганизмов (в т.ч. MR+ Staphylococcus spp., грибы p. Candida), вызывающих послеоперационные гнойно-септические осложнения и выделенных от пациентов кардиохирургического профиля. В опытах in vitro показано иммуномодулирующее действие споробактерина, который способствовал повышению фагоцитарной активности нейтрофилов крови человека.

В работе обоснована возможность внедрения препарата споробактерин в систему лечебно-профилактических мероприятий в кардиохирургии для предотвращения послеоперационных инфекций, вызываемых высокорезистентными микроорганизмами. Показана высокая клиническая эффективность, отсутствие побочных эффектов и хорошая переносимость препарата пациентами.

Ключевые слова: пробиотик, споробактерин, нозокомиальные инфекции, кардиохирургия.

DAVYDOV D.S, (Russia). The experimental basis of clinical application of Sporobacterin® in cardiac surgery.

The dissertation is devoted to the complex research of the probiotic based on aerobic spore-forming bacteria of Bacillus genus - Sporobacterin («Bacoren LLC», Russia). During the study the safety of the preparation which included studying of virulence, the general toxicity, toxigenicity, "acute" and chronic toxicity in vivo have been defined. Thorough investigation of Sporobacterin has shown the absence of any pathological conditions of animals, Sporobacterin meets all standard international requirements for safety of immunobi-ological drugs.

At the time of studying it has been established that Sporobacterin possesses a vigorous antagonistic activity concerning the wide spectrum of clinical strains of the multidrug resistant opportunistic microorganisms (incl. MR+ Staphylococci, fungi Candida genus), which may cause post-operative pyoinflammatory complications and which are isolated from cardiosurgical patients. During the experiments in vivo the immunomodulatory action of Sporobacterin was shown, this probiotic is able to increase the phagocytic activity of the human neutrophils.

It is substantiated in this paper, that the clinical application of Sporobacterin in a cardiac surgery is possible and relevant for the prophylaxis of the post-operative infections caused by the multidrug resistant microorganisms. During this work high clinical efficiency and absence of any side effects was proved.

Key words: probiotic, Sporobacterin, nosocomial infection, cardiac surgery.

Формат 60x84 1/16 Печать трафаретная

Подписано в печать 13.05.2010 Усл.печл 1,2 Тираж 100 экз.

Уч.-изд.л 0,88 Заказ №3724

Отпечатано в типографии «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499)788-78-56 www. avtoreferatru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Давыдов, Дмитрий Сергеевич

ВВЕДЕНИЕ

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. ПОСЛЕОПЕРАЦИОННЫЕ ИНФЕКЦИОННЫЕ ОСЛОЖНЕНИЯ И ИХ ВОЗБУДИТЕЛИ

1.1. Гнойно-септические инфекции

1.2. Антибиотикотерапия

ГЛАВА 2. ПРИМЕНЕНИЕ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ТЕРАПИИ ПОСЛЕОПЕРАЦИОННЫХ 19 ИНФЕКЦИОННЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ

2.1. Микрофлора кишечника и ее роль в обеспечении состояния здоровья организма хозяина

2.3. Пробиотики на основе бактерий рода Bacillus

2.4. Механизмы пробиотического действия бактерий рода Bacillus 27 ЧАСТЬ II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

1.1. Материалы

1.2. Методы

1.2.1. Изучение культурально-морфологических и физиологобиохимических свойств В. subtil is

1.2.2. Методы изучения безопасности

1.2.2.1. Изучение вирулентности

1.2.2.2. Изучение токсичности

1.2.2.3. Изучение токсигенности

1.2.2.4. Изучение острой и хронической токсичности

1.2.3. Определение чувствительности штаммов УПМ к антибиотикам

1.2.4. Изучение антагонистической активности Споробактерина в отношении клинических штаммов УПМ, обладающих множественной анти- 47 биотикорезистентностью

1.2.5. Изучение действия препаратов-иммуномодуляторов

1.2.6. Изучение клинической эффективности споробактерина

1.2.7. Методы статистической обработки результатов исследований

ГЛАВА 2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ IN VITRO И IN VIVO

2.1. Безопасность штамма споробактерина

2.2. Характеристика клинических штаммов УПМ

2.3. Антимикробная эффективность споробактерина в отношении клинических полирезистентных штаммов УПМ

2.4. Исследование модулирующего действия споробактерина на функциональную активность нейтрофилов

ГЛАВА 3. КЛИНИЧЕСКАЯ АПРОБАЦИЯ

3.1. Изучение клинической эффективности препарата на взрослых пациентах при профилактике послеоперационных инфекционных осложнениях 66 в кардиохирургии

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Экспериментальное обоснование клинического применения споробактерина в кардиохирургии"

Особенностью кардиохирургических вмешательств с использованием искусственного кровообращения является повышение риска микробной контаминации и эндогенного инфицирования внутренних органов и крови (105; 112; 214). Для профилактики инфекционных осложнений при операциях с использованием искусственного кровообращения, в зависимости от доминирующих видов возбудителей внутрибольничных инфекций, применяются антибиотики различных групп - цефалоспорины, карбопенемы, гликопептиды, в т. ч. препараты группы резерва, а таюке сочетания антибиотиков. Тем не менее, несмотря на использование новейших антибактериальных препаратов, процент гнойно-септических осложнений в кардиохирургии остается высоким. Летальность у больных с генерализованными инфекционными осложнениями достигает 4060% (115).

Резистентность возбудителей нозокомиальным инфекций к антибактериальным препаратам различных групп, в том числе и препаратам группы резерва (ванкомицин, линезолид, тиенам), неуклонно повышается (7; 172). Известно, что антибиотики обладают рядом существенных неблагоприятных эффектов -вызывают развитие дисбиозов (в т.ч. кандидозов), снижение иммунитета, нередко дают токсические, аллергические и другие клинически значимые осложнения. Затраты на применение антибиотиков составляют ощутимую долю бюджета клинического учреждения (19). Проблема предупреждения инфекций в кардиохирургии, как и в хирургии в целом, поиски альтернативных препаратов для профилактики и лечения инфекционных осложнений с каждым годом не теряет актуальности. Особый интерес при этом представляют пробиотики — препараты из живых бактерий. Назначение хирургическим больным пробиоти-ков позволяет уменьшить отрицательное воздействие антибиотиков (84; 101).

В последние годы в Российской Федерации применяются зарубежные и отечественные биопрепараты на основе бактерий p. Bacillus. Бактерии рода Bacillus - факультативные анаэробы; хемоорганотрофы; подвижны, образуют эндоспоры. Бактерии p. Bacillus широко распространены в окружающей среде и являются одним из основных компонентов микрофлоры почв, воды, воздуха, и человек в процессе жизнедеятельности постоянно контактирует с ними, при этом бациллы - один из важных компонентов экзогенной микрофлоры, они являются транзиторными микроорганизмами микробиоценоза человека и не способны персистировать в организме. Бактерии p. Bacillus характеризуются рядом свойств, определяющих их преимущество перед другими микроорганизмами, используемыми в качестве основы пробиотиков. Многосторонними механизмами действия бацилл являются антагонистическая активность в отношении широкого спектра грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, высокая энзимная активность, продукция лизоцима, антибиотиков и анти-биотикоподобных веществ, ферментов (52; 66; 173; 155; 210; 211).

Осиповой И.Г. (1997) доказана безопасность штамма Bacillus subtilis 534 и препарата споробактерин сухой. Однако в этих исследованиях использовались лиофилизат и суточная культура штамма 534, содержащие в основном вегетативные клетки и лишь незначительное количество спор. В препарате же споробактерин жидкий содержатся споры штамма Bacillus subtilis 534 в 7% р-ре натрия хлорида, а, по мнению ряда исследователей, в препарате на конце срока годности могут накапливаться метаболиты, обладающие токсигенными свойствами. Вышеизложенное обуславливает актуальность проведения экспериментального изучения споробактерина жидкого в опытах in vivo и in vitro, в частности безопасности, антагонистической активности в отношении клинических штаммов, выделенных от пациентов кардиохирургического профиля, антибио-тикоустойчивости и т.д., для дальнейшего применения препарата в кардиохирургии и трансплантологии.

Цель настоящего исследования — экспериментальное изучение эффективности пробиотического препарата споробактерин жидкий (штамм В. subtilis 534) для обоснования его практического применения в целях профилактики гнойно-септических послеоперационных осложнений у пациентов кардиохирургического профиля и внедрения в систему лечебных мероприятий.

Задачи исследования

1. Изучить безопасность пробиотика споробактерин жидкий.

4. Провести сравнительное изучение иммуномодулирующего действия коммерческих иммуномодуляторов и споробактерина in vitro на модели ней-трофилов, выделенных из крови пациентов стационара ФНЦ ТиИО им. акад. В.И.Шумакова.

5. Оценить сравнительную эффективность споробактерина и традиционной антибиотикотерапии, применяемой для профилактики послеоперационных инфекционных осложнений у пациентов кардиохирургического профиля.

Научная новизна

Впервые проведено комплексное изучение безопасности препарата споробактерин жидкий in vivo.

Выявлена стабильно высокая антагонистическая активность препарата споробактерин жидкий в отношении клинических штаммов условно патогенных микроорганизмов, обладающих множественной лекарственной устойчивостью, в т. ч. метициллинрезистентностью и (3-лактамазной активностью.

Впервые в опытах in vitro проведено сравнительная оценка модулирующего действия споробактерина жидкого и коммерческих иммуномодуляторов на функциональную активность нейтрофилов человека.

Впервые продемонстрирована равная эффективность бациллярного про-биотического препарата при профилактике послеоперационных гнойно-септических осложнений в сравнении с антибиотиками при оценке средней продолжительности периода реабилитации.

Впервые выявлены преимущества использования споробактерина в сравнении с введением антибиотиков при оценке клинической эффективности.

Практическая значимость

Получен патент РФ № 2350329 «Способ профилактики послеоперационных гнойно-септических осложнений в кардиохирургии».

Положения, выносимые на защиту

Результаты доклинического исследования свидетельствуют, что споробактерин жидкий соответствует требованиям безопасности, предъявляемым медицинским иммунобиологическим препаратам, применяемым в качестве лекарственных средств.

Доминирующими группами возбудителей гнойно-воспалительных осложнений в послеоперационном периоде в кардиохирургии являются Staphylococcus spp., Enterococcus spp., Pseudomonas spp., представители сем. Enter ob acteriaceae

Споробактерин жидкий проявляет высокий антагонизмом по отношению основных возбудителей послеоперационных нозокомиальных инфекций и модулирующую активность в отношении фагоцитов крови человека в опытах in vitro.

Споробактерин жидкий обладает высокой профилактической и терапевтической эффективностью при послеоперационных инфекционных осложнениях у пациентов кардиохирургического профиля.

Личный вклад соискателя

Автору принадлежат участие в разработке концепции и направления исследований, непосредственное осуществление экспериментальных исследований, анализ и теоретическое обобщение полученных данных, формулирование выводов. В работе использованы материалы, полученные автором в соавторстве с сотрудниками ФГУН ГИСК им. Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора и ФГУ ФНЦ ТиИО им. В.И.Шумакова Минздравсоцразвития. Автор выражает глубокую благодарность руководителям и всем сотрудникам лаборатории диагностических бактерийных препаратов с коллекцией микроорганизмов и лаборатории гнойно-септических осложнений и эндотоксикозов, а также клиники лабораторных животных ФГУН ГИСК им. Л.А.Тарасевича за неоценимую помощь в выполнении данной работы. Особая благодарность к.б.н. Мефёду К.М. и д.м.н. Горской Е.М за действенную помощь и поддержку.

Апробация работы и публикации

Основные результаты проведенных исследований были опубликованы и доложены на Всероссийской научно-практической конференции «Вакциноло-гия. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней» (Москва, 2006, 2008); XIV Российском научном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007); I Международном конгрессе «Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Фундаментальные и клинические аспекты» (Санкт-Петербург, 2007); Международной конференции, посвященной 110-летию Пермского НПО «Биомед» (Пермь, 2008); II Всероссийском съезде микологов (Москва, 2008); Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Биологическая безопасность в современном мире» (Оболенск, 2009); XXXII Международном конгрессе Общества «Микробная экология и болезни» (SOMED) (Санкт-Петербург, 2009).

Диссертация апробирована и рекомендована к защите на заседании Ученого совета ФГУН ГИСК им.Л.А.Тарасевича.

По теме диссертации опубликованы 16 печатных работ, из них 1 методические рекомендации, 4 статьи в научных журналах, в т.ч. в рецензируемых изданиях, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки Российской Федерации, 10 тезисов в сборниках материалов международных и всероссийских научных конференций, 1 патент на изобретение.

Объем и структура работы

Диссертация построена по традиционному плану и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов, заключения, выводов, списка литературы и приложения. Работа изложена на 105 страницах текста компьютерной верстки и иллюстрирована 17 таблицами и 14 рисунками. Список литературы представлен 218 источниками (85 отечественных и 133 зарубежных)

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Давыдов, Дмитрий Сергеевич

выводы

2. У пациентов кардиохирургического профиля с гнойно-воспалительными послеоперационными осложнениями выделяются, преимущественно, грамположительные микроорганизмы (68% от общего числа), в т.ч. коагу-лазоотрицательные стафилококки - 44,2%; бактерии p. Enterococcus -20,1%; S. aureus — 19,1%. Среди грамотрицательной микрофлоры преобладают бактерии p. Pseudomonas - 50,6% и бактерии сем. Enterobacteriaceae - 30,9%.

3. При исследовании чувствительности выделенных клинических штаммов условно-патогенных микроорганизмов к антибиотикам установлено, что метициллин-резистентность обнаружена у 81,5% штаммов S. aureus и 65,5% коагулазоотрицательных стафилококков. (3-лактамазная активность выявлена у 73% бактерий кишечной группы. Резистентность энтерококков к антибиотикам (за исключением ванкомицина) составила 70,9%

4. Споробактерин жидкий проявляет высокую антагонистическую активность в отношении штаммов микроорганизмов, являющихся основными возбудителями нозокомиальных инфекционных осложнений в послеоперационном периоде, в том числе обладающих множественной резистентностью к антибиотикам. При этом частота выявления чувствительности нозокомиальных условно-патогенных микроорганизмов к споробактерину выше данного показателя для антибиотиков, применяемых для профилактики послеоперационных инфекционных осложнений.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Давыдов, Дмитрий Сергеевич, Москва

1. Алмагамбетов К. X., Горская Е. М., Бондаренко В. М. Транслокация кишечной микрофлоры и ее механизмы. // Журн. микробиол. 1991. - № 10. - С. 74-79.

2. Алмагамбетов К. X. с соавт. Профилактика транслокации кишечной микрофлоры после выведения организма из терминального состояния. ЖМЭИ, 1992, № 5-6 С.11-14.

3. Аманов Н. Н. Нарушения микробиоценоза пищеварительного тракта при иммуносупрессии и их коррекция: дисс. на соискание ученой степени канд. мед. наук. Ташкент, 1990.

4. Белобородова Н.В., Богданов М.Б., Черненькая Т.В. Алгоритмы антибио-тикотерапии. Руководство для врачей. М., 1999.

5. Биргер М.О. Микробиологические и вирусологические методы исследования. М.: Медицина, 1992.

6. Бокерия Л.А., Белобородова Н.В. Инфекция в кардиохирургии. М., 2007. 572 с.

7. Бондаренко В.М., Воробьев А.А. Дисбиозы и препараты с пробиотиче-ской функцией. Журн. микробиол. 2004. № 1.С. 84-92.

8. Бондаренко В.М., Грачева Н.М. Препараты пробиотики, пребиотики и синбиотики в терапии и профилактике кишечных дисбактериозов. Фарматека. 2003. № 7. С.56-63.

9. Бондаренко В.М., Грачева Н.М., Мацулевич Т.В. Дисбактериозы кишечника у взрослых. КМК Scientific Press. Москва. 2003.

10. Бондаренко В.М., Чупринина Р.П., Воробьева М.А. Механизм действия пробиотических препаратов. БИОпрепараты. 2003. № 3. С. 2-5.

11. Бондаренко В.М., Грачева Н.М., Мацулевич Т.В., Воробьев А.А. Микроэкологические изменения кишечника и их коррекция с помощью лечебно-профилактических препаратов. Журн. гастроэтерол. гепатол. колопрок-тол. 2003. № 4 (приложение № 20).С. 66-76.

12. Бородин А. В., Захаров В. В., Никитенко В. И. Роль транслокации бактерий в патогенезе хирургической инфекции. //Хирургия. 2001. - № 2. - С. 63-66.

13. Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П. Итоги науки и техники // Биофизика. 1989; 24: 172.

14. Венцель Р. П. Внутрибольничные инфекции. М., 2004.

15. Веселов А .Я., Осокина О.В. Сравнительная характеристика чувствительности региональных штаммов различных микроорганизмов к цефурокси-му и другим антибиотикам.//Антибиотики и химиотерапия.- 1996. N 10.-Т.41. - С.32-34.

16. Виленская И.Ф., Шепринский П.Е., Осипова А.Н. и др. Особенности послеоперационных осложнений в хирургическом стационаре // Тез. докл. II российск. научно-практ. конф. с межд. участием. М:, 1999; 51-2.

17. Габриэлян Н. И., Горская Е. М., Снегова Н. Д. Функции микрофлоры желудочно-кишечного тракта и последствия ее нарушений после хирургических вмешательств. // Антибиотики и химиотерапия. 2000. - Т. 45. № 9.1. С. 24-29.

18. Галкин Р.А., Павлов В.В., Быков А.А. и др. Микробиологический мониторинг в эпидемиологическом надзоре за внутрибольничными инфекциями // Тез. докл. II российск. научно-практ. конф. с межд. участием. М., 1999.

19. Гостищев В.К. Антибактериальная профилактика инфекционных осложнений в хирургии. М., 1998.

20. Гукасян Г.Т., Саркисян А.С., Кузикян A.M., Алексанян Ю.Т. Характер микрофлоры при внутрибольничных инфекциях в условиях многопрофильного стационара // Тез. докл. II российск. научно-практ. конф. с межд. участием. М., 1999; 79-80.

21. Дмитриева Н.В., Петухова И.Н., Смолянский А.З. Этиологическая структура и чувствительность к антибиотикам основных возбудителей инфекционных осложнений в онкологической клинике // М., 1999.

22. Долгушин И.И., Эберт Л.Я., Лившиц Р.И. Иммунология травмы. Свердловск, 1989.

23. Ермолов А.С., Филатов Н.Н. Профилактика гнойно-септических осложнений в стационарах хирургического профиля. М., 1995.

24. Есипов В. К. Патогенетические аспекты острого распространенного перитонита и обоснование рационального метода его лечения. Дис. д-ра мед. наук Оренбург, 1999.

25. Есипов Д. В. Коррекция синдрома энтеральной недостаточности при острой кишечной непроходимости: автореф. дисс. . канд. мед. наук. Оренбург, 2004.

26. Жебровский В.В., Тоскин К.Д. Проблема послеоперационных осложнений в абдоминальной хирургии // Послеоперационные осложнения и. опасности в абдоминальной хирургии. М., 1990.

27. Жигайлов А.В. Транслокация бактерий как фактор инфицирования ран при металлоостеосинтезе закрытых переломов костей конечностей и обоснование нового принципа антибактериальной терапии. Автореф. дис. канд. мед. наук,

28. Жинкин JI. Н. Радиоактивные индикаторы в гистологии,-М., 1959.-С. 533.

29. Затула Д. Г., Резник С. Р. Влияние метаболитов споровых сапрофитных бактерий на организм человека и животных. Киев, 1973.

30. Земсков В.М., Барсуков A.M., Безносенко А.А. и др. Изучение функционального состояния фагоцитов человека. Методические рекомендации. М., 1988.

31. Зинкин В.Ю., Годков М.А. Способ количественной оценки кислородзави-симого метаболизма нейтрофильных гранулоцитов человека. Клинич.лаб. диагностика. 2004. № 8. С. 26-29.

32. Иванов Г.А., Лебедев В.Ф., Сидельникова О.П., Суборова Т.Н. Частота выделения возбудителей инфекционных осложнений из ран различного происхождения // Актуальные вопросы инфекции в хирургии. М., 1999; 155-157.

33. Исаев С. Ж. Профилактика хирургической инфекции у больных с открытыми переломами конечностей: дисс. канд. мед. наук. Оренбург, 2005.

34. Каплан А.В., Махсон Н.Е., Мельникова В.М. Гнойная травматология костей и суставов. М., 1985.

35. Каплем А. В., Маркова О. Н. Открытые переломы длинных трубчатых костей неосложненные и осложненные инфекцией.- М., 1975.

36. Кудашев С. Г., Слепых Н. И. Способ профилактики хирургической инфекции огнестрельных ран /Сб. Актуальные вопросы военной и практической медицины. Оренбург, 2000.

37. Кузин М. И., Костюченок Б. М. Раны и раневая инфекция.- М., 1981.

38. Лазарева Е. Б. Бактериофаги и пектины в коррекции нарушений микробиоценозов при гнойно-воспалительных процессах: автореф. дисс. док. мед. наук. Москва, 2007.

39. Лыкова Е.А., Мурашова А.О., Бондаренко В.М. и др. Нарушения микрофлоры кишечника и иммунитета у детей с аллергическими дерматитами и их коррекция. Росс, педиатр, журн. 2000. № 2. С. 20-24.

40. Методы общей бактериологии / Под ред. Ф. Герхарда: В 3-х т. М: 1984.

41. Митрохин С.Д. Инфекционные осложнения в хирургии: антибактериальная профилактика и терапия. // Инфекции и антимикробная терапия. Consilium medicum. Т. 4. № 2. 2002.

42. Мороз В.Ю., Терехова Р.П., Галкин В.В. и др. Госпитальная инфекция в хирургической клинике // Внутрибольн. инфекция проблемы эпидем. -Тез. докл. II российск. научно-практ. конф. с межд. участием. М., 1999; 161-162.

43. Никитенко В.И, Бухарин О.В., Никитенко И.К. Явление естественного защитного бактериального механизма при повреждениях. Заявка на открытие № ОТ 11353, ВНИИГПЭ, 1986.

44. Никитенко В. И. Взаимоотношения макроорганизма и бактерий в ране и тканях человека и животных. // Хирургия. 1990. - № 9. - С. 18-23.

45. Никитенко В. И. Медицинский институт Оренбурга представляет препарат споробактерин. // JAMA. 1991. - Vol. 64, № 1. - С. 31.

46. Никитенко В. И., Захаров В.В. Роль транслокации бактерий в патогенезе хирургической инфекции. Хирургия, 2001, №2

47. Никитенко В. И., Копылов В. А. Транслокация бактерий из желудочно-кишечного тракта естественный защитный механизм. Гастроэнтерология Санкт-Петербурга, 2004, №2-3.

48. Общая и санитарная микробиология с техникой микробиологических исследований / Под ред. А.С.Лабинской, Л.П.Блинковой, А.С.Ещиной. М.: 2004.

49. Осипова И. Г., Михайлова Н. А., Сорокулова И. Б., Васильева Е. А., Гай-деров А. А. Споровые пробиотики. //Журн. микробиол. 2003. - № 3. - С. 113-119.

50. Осипова И.Г., Сорокулова И.Б., Васильева Е.А., Буданова Е.В. Доклинические испытания новых споровых пробиотиков // Вестник РАМН 2005. -№ 12. С. 36-39.

51. Парахонский А. П. Роль бактериальной транслокации в развитии хирургического сепсиса // Успехи современного естествознания. 2007. - № 7. -С. 18-22.

52. Пушкарев А. М. Эффективность пробиотика бактиспорина в терапии внутригоспитальных инфекций. //Урология. 2005. - № 4. - С. 48-53.

53. Пушкарев А. М., Туйгинова В. Ж., Зайнуллин Р. Р., Кузнецова Т. Н. и др. Использование антагонистических Bacillus subtilis бактерий для лечения нозокомиальных инфекций мочевого тракта. //Журн. микробиол., эпидем. и иммунобиол. 2007. - № 2. - С. 90-93.

54. Пхакадзе Т.Я. Бактериологический мониторинг в кардиохирургии: дисс. док. мед. наук. Москва, 1999.

55. Рокицкий М.Р. Современные принципы лечения сепсиса и гнойно-септических заболеваний. Казань, 1996.

56. Савельев В. С, Гельфанд Б. Р., Клейменов О. Н. и др. Госпитальная инфекция в сердечно-сосудистой хирургии. // Грудная и сердечно-сосуд. хирургия. 1992. - № 5-6. С. 5-8.

57. Семина Н.А., Ковалева Е.Т., Генчиков Л.А. Эпидемиология и профилактика внутрибольничных инфекций // Новое в профилактике госпитальной инфекции. Информ. бюлл. М., 1997.

58. Сидоренко С.В., Яковлев С.В. Инфекции в интенсивной терапии. М.,2000.

59. Слепых Н. И., Стадников А. А., Третьяков А. А. Профилактика и лечение послеоперационных раневых инфекций пробиотиком споробактерином. Пособие для врачей. Оренбург, 2001.

60. Слепых Н. И., Третьяков А. А., Стадников А. А., Петров С. В. Эффективность споробактерина в профилактике и лечении постоперационных раневых инфекций. // Вестник хирургии им. И. И. Грекова. 2003. - Т. 162. № 1. - С. 65-69.

61. Смирнов В.В. Резник С.Р. Василевская И.А. Спорообразующие анаэробные бактерии продуценты биологически активных веществ. Киев, 1982.

62. Смирнов В.В. с соавт. О некоторых механизмах возникновения бессимптомной бактериемии. Микробиолог, журн., 1988, т. 50, № 5.

63. Сорокулова И. Б. Перспективы применения бактерий рода Bacillus для конструирования новых биопрепаратов. //Антибиотики и химиотерапия. -1996.-Т. 41, № 10.-С. 13-15.

64. Сорокулова И. Б. Влияние пробиотиков из бацилл на функциональную активность макрофагов. // Антибиотики и химиотерапия. 1998. - Т. 43, №2. - С. 20-23.

65. Сорокулова И. Б. Теоретическое обоснование и практика применения бактерий рода Bacillus для конструирования новых пробиотиков: автореф.дисс. докт. биологич. наук. Киев, 1999.

66. Страчунекий JI.C., Белоусов Ю.Б. Антибактериальная терапия. Практическое руководство. М., 2000.

67. Стручков В. И., Гостищев В. К., Стручков Ю. В. Руководство по гнойной хирургии. М., 1984.

68. Тарасенко В. С. Острый деструктивный панкреатит. Некоторые аспекты патогенеза и лечения: дисс. докт. мед. наук. Оренбург, 2000.

69. Ткаченко Е.И. Основы современной терапии язвенной болезни. Терра Медика Нова, 1999, №2.

70. Третьяков А.А. Клинико-экспериментальное обоснование комплексного лечения холангита при механической желтухе. Автореф. дис. д-ра мед. наук. Оренбург, 1998.

71. Уголев A.M. Трофология — новая междисциплинарная наука // Природа. -1987.-№2. -С. 3-14.

72. Филатов Н.Н., Храпунова И.А., Матвеев С.И. Проблема гнойно-септических инфекций в стационарах хирургического профиля // Тез. докл. II российск. научно-практ. конф. с межд. участием. М., 1999; 254256

73. Халед Субхи Одталла Аль-Хашаш. Лечение с катетерассоциированной инфекции у больных хирургического и урологического профилей: автореф. дисс. канд. мед. наук. Уфа, 2003.

74. Хасанова Т. В. Использование бактиспорина и СПСА-вакцины для профилактики и лечения гнойно-септических осложнений в хирургии: автореф. дисс. канд. мед. наук. Уфа, 2003.

75. Хафизов А. Р. Профилактика гнойно-септических осложнений в реконструктивной хирургии аортобедренного сегмента: автореф. дисс. . канд. мед. наук. Нижний Новгород, 2007.

76. Хачатрян Н.Н. Формирование защитно-адаптивных механизмов и их коррекция при перитоните. Автореф. . дисс. докт. мед. наук. М., 1995.

77. Шевола Д., Дмитриева Н.В. Антибиотикопрофилактика в медицинской практике. М., 1998

78. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание.-М., 2001. Т. 3.

79. Adawi D., Molin G., Jeppsson В. Inhibition of nitric oxide production and the effects of arginine and Lactobacillus administration in an acute liver injury model. Ann. Surg., 1998, Dec., 228(6), 748-755.

80. Adawi D., Ahrne S., Molin G. Effects of different probiotic strains of Lactobacillus and Bifidobacterium on bacterial translocation and liver injury in an acute liver injury model. /Ant. J. Food. Microbiol. 2001. - Vol. 70, № 3. - P. 213-220.

81. Alexander J.W. et al. Plasmid labeling confirms bacterial translocation in pancreatitis. Ann. Surg. 1990, 212, 496-512.

82. Anderson A. D., McNaught С E., Jain P. K., MacFie J. Randomised clinical trial of symbiotic therapy in elective surgical patients. // Gut. 2004. - Vol. 53, №2. - P. 241-245.

83. Arden W.A. et al. Scintigraphic evaluation of bacterial translocation during hemorrhagic shock. J. Surg. Res. 1993, Feb., 54(2), 102-106.

84. Balloul, J.-M., Grzych, J.-M., Pierce, RJ. and Capron, A. A purified 28,000 dalton protein from Schistosoma mansoni adult worms protects rats and mice against experimental schistosomiasis. J. Immunol. 1987 - 138, 3448-3453.

85. Bengmark S. Pre-, pro- and synbiotics. //Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab. Care. -2001. Vol. 4, № 6. -P. 571-579.

86. Bengmark S., Garcia de Lorenzo A., Culebras J. M. Use of pro-, pre- and synbiotics in the ICU-future options. // Nutr. Hosp. 2001. - Vol. 16, № 6. - P. 239-256.

87. Bengmark S. Use of pro-, pre- and synbiotics in critically ill patients. //Best. Pract. Res. Clin.Gastroenterol. 2003. - Vol. 17, № 5 - P. 833-848.

88. Bengmark S. Bio-ecological control of perioperative and ITU morbidity. //Langenbecks Arch. Surg. 2004. - Vol. 389, № 2. - P. 145-154.

89. Berg R.D., Garlington A.W. Translocation of certain indigenous bacteria from the gastrointestinal tract to the mesenteric lymph nodes and other organs in a gnotobiotic mouse model. Infect. Immun. 1979, Feb., 23(2), 403-11.

90. Berg R.D. Bacterial translocation from the intestines. Jikken Dobutsu, 1985, Jan, 34(1), 1-16.

91. Bergey's manual of determinative bacteriology. 9th ed. Ed. by John G. Holt et al. 1994.

92. Besselink M. Probiotic prophylaxis in predicted severe acute pancreatitis: a randomised, double-blind, placebo-controlled trial. Lancet 2008; 371: 651-59

93. Bibbo C. et al. Bacterial translocation after mesenteric ligation in dogs. J. Invest. Surg. 1996, 9(4): 293-303.

94. Bonn D. Probiotics reduce risk of gut infections. // Lane et Infect. Dis. 2002. 2 :716-719.

95. Boulard G. Les infections nosocomiales en reanimation. //Agressiology. -1985. 26(10): 793-795.

96. Boyum A. Isolation of lymphocytes, granulocytes and macrophages. // Scand. J. Immunol 1976. 5:9-15.

97. Ciprandi G., Scordamaglia A., Venuti D., Caria M. and Canonica G.W. In vitro effects of Bacillus subtilis on the immune response. Chemioterapia 1986, 5, 404-407.

98. Coleman C.I, Lucek D.M., Hammond J., White C.M. Preoperative statins and infectious complications following cardiac surgery. Curr.Med.Res.Opin. 2007. -V.23 (8). -P, 1783 -1790.

99. Collins M.D., Gibson G.R. Probiotics, prebiotics, and synbiotics: approaches for modulating the microbial ecology of the gut. Am.J.Clin.Nutr.l999. Vol.69. № 5. P.1052-1057.

100. Cruse P.I.E., Foord R. The epidemiology of wound infection: a ten-year prospective study of 62939 wounds // Surg clin North Am. 1980; 60: 27-40.

101. Cruz N. et al. Bacterial translocation across enterocytes: results of a study of bacterial-enterocyte interactions utilizing Caco-2 cells. Shock, 1994, Jan., 1(1). 67-72.

102. Deitch E.A., Bridges R.M. Effect of stress and trauma on bacterial translocation from the gut. J. Surg. Res. 1987, May, 42(5), 536-542.

103. Deitch E.A., Specian R.D. Endotoxin-induced bacterial translocation: a study of mechanisms. Surgery, 1989, Aug., 106(2), 292-300.

104. Deitch E.A. Bacterial translocation: the influence of dietary variables. Gut,1994 Jan., 35(1 Suppl), 23-27.

105. Deitch E.A. (ed.) Sepsis and multiple organ disfunction. W.B.Saunders, Elsevier, 2002. 497 p.

106. Diekema D. J., Beekmann S. E., Chapin К. C. Epidemiology and Outcome of Nosocomial and Community-Onset Bloodstream Infection. J Clin Microbiol. 2003 August; 41(8): 3655-3660.

107. Dion Henry W et. al. Butirosin, a new aminoglycosidic antibiotic complex: isolation and characterization. Antimicrob Agents Chemother. 1972 August; 2(2): 84-88.

108. Domkowski PW, Smith ML, Gonyon DL, Drye C, Wooten MK, Levin LS, Wolfe WG. Evaluation of vacuum-assisted closure in the treatment of postster-notomy mediastinitis. J Thorac Cardiovasc Surg 2003; 126:386-390

109. Due L.H., Hong H.A., Fairweather N., Ricca E. and Cutting S. Bacterial spores as vaccine vehicles. Infect. Immunol. 2003, 71, 2810-2818

110. Due L.H., Hong H.A., Cutting, S.M. Germination of the spore in the gastrointestinal tract provides a novel route for heterologous antigen presentation. Vaccine, 2003, 21, 4215-4224.

111. Due, L.H., Hong, H.A., Barbosa, T.M., Henriques, A.O. and Cutting, S.M.

112. Characterization of Bacillus probiotics available for human use. Appl. Environ. Microbiol. 2004, 70, 2161-2171.

113. Due L.H., Hong H.A., Uyen N.Q. and Cutting S.M. Intracellular fate and im-munogenicity of B. subtilis spores. Vaccine, 2004, 22, 1873-1885.

114. Earnshaw J.J., Slack R.C., Hopkinson B.R. Risk factors in vascular surgical sepsis. Ann R Coll Surg Engl. 1988 May; 70(3): 139-143.

115. Edmiston C.E. Jr., Condon R.E. Bacterial translocation. Surg., Gynecol., Ob-stet. 1991, Jul.,173(1), 73-83.

116. Eleftheriadis E. et al. Gut ischemia, oxidative stress, and bacterial translocation in elevated abdominal pressure in rats. World J. Surg. 1996, Jan., 20(1), 11-16.

117. Erbil Y. et al. The effect of intestinal transit time on bacterial translocation. Acta Chir. Belg. 1998, Dec., 98(6), 245-249.

118. Etienne J. Characterization of clinically significant isolates of Staphylococcus epidermidis from patients with endocarditis. J Clin Microbiol. 1988 April; 26(4): 613-617.

119. Evasovich M.R. et al. Does pneumoperitoneum during laparoscopy increase bacterial translocation? Surg. Endosc. 1996, Dec., 10(12), 1176-1179.

120. FAO/WHO Expert Consultation Group. Health and nutritional properties of probiotics in food included milk with live lactic acid bacteria. Geneva: WHO, 2007.

121. Fiorini G., Cimminiello C., Chianese R., Visconti G.P., Cova D., Uberti T. and Gibelli, A. Bacillus subtilis selectively stimulates the synthesis of membrane bound and secreted IgA. Chemioterapia, 1985, 4, 310-312.

122. Foitzik T. et al. Does glutamine reduce bacterial translocation? A study in two animal models with impaired gut barrier. Int. J. Colorectal Dis. 1999,1. Aug.,14(3),143-149.

123. Freeman R. Acquisition, spread, and control of Pseudomonas aeruginosa in a cardiothoracic intensive care unit.Thorax. 1982 October; 37(10): 732-736.

124. Fu X.B. et al. Multiple organ injuries and failures caused by shock and reperfii-sion after gunshot wounds. J. Trauma, 1996, Mar., 40(3 Suppl), 135-139.

125. Fukushima R., Gianotti L., Alexander J.W. The primary site of bacterial translocation. Arch. Surg. 1994, Jan., 129(1), 53-58.

126. Fuller R. Probiotics in human medicine. Gut. 1991, 32, 439-442.

127. Gautreaux M.D., Deitch E.A., Berg R.D. Bacterial translocation from the gastrointestinal tract to various segments of the mesenteric lymph node complex. Infect. Immun. 1994, May, 62(5), 2132-2134.

128. Gautreaux M.D. et al. Adoptive transfer of T lymphocytes to T-cell-depleted mice inhibits Escherichia coli translocation from the gastrointestinal tract. Infect. Immun. 1995, Oct., 63(10), 3827-3834.

129. Gerbitz A., Schultz M., Wilke, Linde H. J. et al. Probiotic effects on experimental graft-versus-host disease: let them eat yogurt. //Blood. 2004. - Vol. 103, №11. -P. 4365-4367.

130. Greene J.D., Klaenhammer T.R. Factors involved in adherence of lactobacilli to human Caco-2 cells. Appl.Envir.Microbiol. 1994. Vol. 60. P.4487-4494.

131. Grill J.P., Crociani J., Ballongue J. Effect of bifidobacteria on nitrites and nitrosamines. Letts.Appl.Microbiol. 1995.Vol. 20. P.328-330.

132. Grotz M.R. et al. Intestinal cytokine response after gut ischemia: role of gut barrier failure. Ann. Surg. 1999, Apr., 229(4), 478-486.

133. Guarner, F. and Malagelada, J.-R. Gut flora in health and disease. The Lancet 2003,360,512-519

134. Holzapfel W.H., Haberer P.,Geisen R. et al. Taxonomy and important features of probiotic microorganisms in food and nutrition.Am.J.Clin.Nutr.2001.Vol. 73(suppl). P.365-373.

135. Hunter J.O., Madden J. A. A review of the role of the gut microflora in irritable bowel syndrome and the effects of probiotics. BrJ.Nutr.2002. Vol. 88(suppl.l). P.67-72.

136. Hyronimus, В., Le Marrec, C., Urdaci, M.C. Coagulin, a bacteriocin-like inhibitory substance produced by Bacillus coagulans 14 // J. Appl. Microbiol. -1998.-Vol. 85.-P. 42-50.

137. Isaka M. et al. Mucosal immunization against hepatitis В virus by intranasal co-administration of recombinant hepatitis В surface antigen and recombinant cholera toxin В subunit as an adjuvant. Vaccine 2001, 19, 1460-1466.

138. Jenkins В., Holsten S., Bengmark S., Martindale R, Probiotics: a practical review of their role n specific clinical scenarios. // Nutr. Clin. Pract. 2005. -Vol. 20, №2,-P. 262-270.

139. Kakkos S.K. et al. Nonabsorbable antibiotics reduce bacterial and endotoxintranslocation in hepatectomised rats. HPB Surg. 1997, 10(5), 283-289; discussion 289-291.

140. Kane T.D. et al. Bacterial translocation in organ donors: clinical observations and potential risk factors. Clin. Transplant. 1997, Aug., 11(4), 271-274.

141. Kane T.D., Alexander J.W., Johannigman J.A. The detection of microbial DNA in the blood: a sensitive method for diagnosing bacteremia and/or bacterial translocation in surgical patients. Ann. Surg. 1998, Jan., 227(1), 1-9.

142. Katz E. The peptide antibiotics of Bacillus. Bacteriol. Rev., 1977, 1(2), 449474.

143. Kloos W. E. Update on clinical significance of coagulase-negative staphylococci. Clin Microbiol Rev. 1994 January; 7(1): 117-140.

144. Kobayashi E., Fujimura A. Surgical treatment itself induces bacterial translocation. Transplantation 1996, Jun., 15, 61(11), 1664.

145. Kosak Т., Maeda Т., Nakada Y., Yukawa M. and Tanaka S. Effect of Bacillus subtilis spore administration on activation of macrophages and natural killer cells in mice. Vet. Microbiol. 1998, 60, 215-225.

146. Lawrence, C. and Nauciel, C. Production of interleukin-12 by murine macrophages in response to bacterial peptidoglycan. Infect. Immunol. 1998, 66,4947-4949.

147. Lee, K.H., Jun, K.D., Kim, W.S., Paik, H.D. Partial characterization of poly-fermenticin SCD, a newly identified bacteriocin of Bacillus polyfermenticus II1.tt. Appl. Microbiol.- 2001. Vol. 32. - P. 146-151.

148. Liu W Hansen J N The antimicrobial effect of a structural variant of subtilin against outgrowing Bacillus cereus T spores and vegetative cells occurs by different mechanisms. Appl Environ Microbiol. 1993 February; 59(2): 648-651.

149. Lemaire L.C. et al. Bacterial translocation in multiple organ failure: cause or epiphenomenon still unproven. Br. J. Surg. 1997, Oct., 84(10), 1340-1350.

150. Lemaire L.C. et al. Thoracic duct in patients with multiple organ failure: no major route of bacterial translocation. Ann. Surg. 1999, Jan., 229(1), 128-136.

151. Lievin V., Peiffer I., Hudault S. et al. Bifidobacterium strains from resident infant human gastrointestinal microflora exert antimicrobial activity.Gut.2000. Vol.47. P.646-652

152. Maejima K., Deitch E.A., Berg R.D. Bacterial translocation from the gastrointestinal tracts of rats receiving thermal injury. Infect. Immun. 1984, Jan., 43(1), 6-10.

153. Mainous M.R. et al. Studies of the route, magnitude, and time course of bacterial translocation in a model of systemic inflammation. Arch. Surg. 1991, Jan., 126(1), 33-37.

154. Marin H. Kollef. Epidemiology and risk factors for nosocomial pneumonia. Clinics in Chest Medicine V.120, N.3, Sep., 1999, 653-670.

155. Marroni M., Fiorio M., Cao P., Parlani G. et al. Nosocomial infections in vascular surgery: 1 year surveillance //Recenti. Prog. Med. 2003. - Vol. 94, № 10 -P. 430-433.

156. McNally J. A., Bell A. L. Myeloperoxidase-based chemiluminescence of polymorphonuclear leukocytes and monocytes. J. Bio. Chemilum. 1996. 11: 99106.

157. McNaught С E., Woodcock N. P., MacFie J, Mitchell C. J. A prospective randomized study of the probiotic Lactobacillus plantarum 299 V on indices of gut barrier function in elective surgical patients. // Gut 2002 - Vol. 51, № 6. - P. 827-831.

158. McNaught С E., Woodcock N. P., Anderson A. D., MacFie J. A prospective randomized trial of probiotics in critically ill patients. //Clin. Nutr. 2005. -Vol. 24, №2,-P. 211-219.

159. Meier R., Steuerwald M. Place of probiotics. // Curr. Opin. Git. Care. 2005. -Vol. 11, №4.-P. 318-325.

160. Morrison A J. Associated mortality and clinical characteristics of nosocomial Pseudomonas maltophilia in a university hospital. J Clin Microbiol. 1986 July; 24(1): 52-55.

161. Murphy G.J., Pararajasingam R. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus infection in vascular surgical patients. Ann R Coll Surg Engl. 2001 May; 83(3): 158-163.

162. Muscettola M., Grasso G., Migliaccio P. and Gallo V.C. Plasma interferon-like activity in rabbits after oral administration of Bacillus subtilis spores. J. Chemother. 1991, 3, 130-132.

163. Muscettola M., Grasso G., Blach-Olszewska Z., Migliaccio P., Borghesi-Nicoletti C., Giarratan M. and Gallo V.C. Effects of Bacillus subtilis spores on interferon production. Pharmacol. Res. 1992, 26, 176-177.

164. Nagal S., Okimura K., Kaizawa N., Ohki K. and Kanatomo S. Study on surfac-tin, a cyclic depsipeptide. II. Synthesis of surfactin B2 produced by Bacillus natto KMD 2311. Chem. Phar. Bull. Tokyo 1996, 44, 5-10.

165. Nakayama M., Itoh K., Takahashi E. Cyclophosphamide-induced bacterialtranslocation in Escherichia coli C25-monoassociated specific pathogen-free mice. Microbiol. Immunol. 1997, 41(8), 587-593.

166. Nieuwenhuijs Y.B. et al. The role of interdigestive small bowel motility in the regulation of gut microflora, bacterial overgrowth, and bacterial translocation in rats. Ann. Surg. 1998, Aug., 228(2), 188-193.

167. O'Boyle C.J. et al. Microbiology of bacterial translocation in humans. Gut 1998, Jan., 42(1), 29-35.

168. O'Sullivan D.J. Screening of intestinal microflora for effective probiotic bacteria. J. Ag. Food Chem. 2001.Vol. 49. P.1751-1760.

169. Osman N.E., Westrom В., Karlsson B. Serosal but not mucosal endotoxin exposure increases intestinal permeability in vitro in the rat. Scand. J. Gastroenterol. 1998, Nov., 33(11), 1170-1174.

170. Owens W.E., Berg R.D. Derivation of a breeding colony of germ-free athymic mice by cesarean section and foster nursing. J. Immunol. Methods. 1981, 42(1), 115-119.

171. Petrosillo N. Surgical site infections in Italian Hospitals: a prospective multicenter study. BMC Infect Dis. 2008; 8: 34. Published online 2008 March 7

172. Pinchuk I.V., Bressollier P., Verneuil В., Fenet В., Sorokulova I.B., Megraud F. and Urdaci M.C. In vitro anti-Helicobacter pylori activity of the probiotic strain Bacillus subtilis 3 is due to secretion of antibiotics. Antimicrob. Agents

173. Chemother. 2001, 45, 3156-3161

174. Prokesova, L., Novakova, M., Julak, J. and Mara, M. Effect of Bacillus firmus and other sporulating aerobic microorganisms on in vitro stimulation of human lymphocytes. A comparative study. Folia Microbiol. 1994, 39, 501-504.

175. Ranganathan N., Patei B. G., Ranganathan Marczely J. et al. In vitro and in vivo assessment intraintestinal bacteriotherapy in chronic kidney disease. //ASAIO J. 2006. -Vol. 52, №1 - P. 70-79.

176. Rayes N., Seehofer D., Theruvath Т., Schiller R. A. et al. Supply of pre- and probiotics reduces bacterial infection rates after liver transplantation a randomized, double-blind trial. // Am. J. Transplant. - 2005. - Vol. 5, № 1. - P. 125-130.

177. Reddy B.S., Rivenson A. Inhibitory effect of Bifidobacterium longum on colon, mammary, and liver carcinogenesis induced by 2-amino-3-methylimidazo-4,5 quinoline, a food mutagen. Cancer Res. 1993. Vol. 53. P.3914-3918.

178. Redelmeier D. A. Adhesive Tape and Intravascular-Catheter-Associated Infections. J Gen Intern Med. 1999 June; 14(6): 373-375.

179. Reid G. Food and agricultural organization of the United Nation and the WHO. //Curr. Pharm. 2005. - Vol. 11, № 1. - P. 11-16.

180. Rhee, K.J., Sethupathi, P., Driks, A., banning, D.K. and Knight, K.L. Role of commensal bacteria in development of gut-associated lymphoid tissues and preimmune antibody repertoire. J. Immunol. 2004, 172, 1118-1124.

181. Roberts, M., Li, J., Bacon, A. and Chatfield, S. Oral vaccination against tetanus: comparison of the immunogenicities of Salmonella strains expressing fragment С from the nirA and htrA promoters. Infect. Immunol. 1998, 66, 3080-3087.

182. Robinson, K., Chamberlain, L.M., Schofield, K.M., Wells, J.M. and Le Page, R.W.F. Oral vaccination of mice against tetanus with recombinant Lactococcus lactis. Nat. Biotechnol. 1997, 15, 653-657.

183. Sakamoto H. et al. Isolation of bacteria from cervical lymph nodes in patients with oral cancer. Arch. Oral. Biol. 1999, Oct., 44(10), 789-793.

184. Sartor, R.B. Cytokine regulation of experimental intestinal inflammation in genetically engineered and T-lymphocyte reconstituted rodents. Aliment. Pharmacol. Therap. 1996, 10, 36-42.

185. Schell M.A., Karmirantzou M., Snel B. et al. The genome sequence of Bifidobacterium longum reflect its adaptation to the human gastrointestinal tract. Proc.Natl.Sci.USA. 2002. Vol. 99. № 22. P.14422-14427

186. Seehofer D., Rayes N, Schiller R., Stockmann R et al. Probiotics partly reverse increased bacterial translocation after simultaneous liver resection and colonic anastomosis in rats. // J. Surg. Res. 2004. Vol. 117, № 3, - P. 262-271.

187. Singh J.A., Rivenson M., Tomita M. et al. Bifidobacterium longum, a lactic acid-producing intestinal bacterium inhibits colon cancer and modulates the intermediate biomarkers of colon carcinogenesis. Carcinogenesis. 1997.Vol. 18. P.833-841

188. Spaeth G. et al. Bulk prevents bacterial translocation induced by the oral administration of total parenteral nutrition solution. J. Parenter. Enteral. Nutr. 1990, Sep.-Oct.,14(5), 442-447.

189. Sreekumar О., Hosono A. The antimutagenic of properties of a polysaccharide produced by Bifidobacterium longum and its cultured milk against some heterocyclic amines. Can. J. Microbiol. 1998. Vol. 44. P. 1029-1036.

190. Steffen E.K., Berg R.D. Relationship between cecal population levels of indigenous bacteria and translocation to the mesenteric lymph nodes. Infect. Immun. 1983, Mar., 39(3), 1252-1259.

191. Steffen E.K., Berg R.D., Deitch E.A. Comparison of translocation rates of various indigenous bacteria from the gastrointestinal tract to the mesenteric lymph node. J. Infect. Dis. 1988, May, 157(5), 1032-1038.

192. Suzuki T. et al. Inhibition of bacterial translocation from the gastrointestinal tract of mice by oral administration of a culture condensate of Bifidobacterium longum. J. Vet. Med. Sci. 1997, Aug., 59(8), 665-669.

193. Tancrede C.H., Andremont A.O. Bacterial translocation and gram-negative bacteremia in patients with hematological malignancies. J. Infect. Dis. 1985, Jul., 152(1), 99-103.

194. Tannock G.W. Molecular assessment of intestinal- microflora. Am.J.Clin.Nutr.2001. Vol. 73 (suppl). P.410-414.

195. Tokyay R. Mesenteric lymphadenectomy prevents postburn systemic spread of translocated bacteria. Arch. Surg. 1992, Apr., 127(4), 384-388.

196. Tsunoda A., ShibusawaM. et al. Effect of Lactobacillus casei on a novel murine model of abdominal sepsis. // J. Surg. Res. 2002. - Vol. 107, № 1. - P. 3743.

197. Urdaci M.C., Bressollier P. and Pinchuk I. Bacillus clausii probiotic strains: antimicrobial and immunomodulatory activities. J. Clin. Gastroenterol. 2004, 38, S86-S90.

198. Urdaci M.C. and Pinchuk I. Antimicrobial activity of Bacillus probiotics //: Bacterial spore formers: probiotics and emerging applications (Ricca, E., Hen-riques, A.O. and Cutting, S.M., Eds.). London. 2000. C. 171-182.

199. VanCott J.L. et al. Regulation of mucosal and systemic antibody responses by T helper cell subsets, macrophages, and derived cytokines following or al immunization with live recombinant Salmonella. J. Immunol. 1996; 156, 1504— 1514.

200. Van der Waaij D. et al. Colonization resistance of the digestive tract and the spread bacteria to the lymphatic organs in mice. J. Hyg.( London) 1972, 70/2, 335-342.

201. Velasco E. Risk factors for infectious complications after abdominal surgery for malignant disease. Am. J. Infect. Control 1996; 24(1), 1-6.

202. Wellinger R.C., Mc Langhlin S. Unique epidemiology of nosocomial infections in a children's hospital // Amer J Dis Child. 1984; 138: 131-5.

203. Wells C.L., Maddaus M.A., Simmons R.L. Proposed mechanisms for the translocation of intestinal bacteria. Rev. Infect. Dis. 1988, Sep.-Oct., 10(5), 958979.

204. Wells C.L. Relationship between intestinal microecology and the translocation of intestinal bacteria. Antonie Van Leeuwenhoek. 1990, Aug., 58(2), 87-93.

205. Williams E. W. Serious nosocomial infection caused by Morganella morganii and Proteus mirabilis in a cardiac surgery unit. J Clin Microbiol. 1983 July; 18(1): 5-9.

206. Woodcock N. P., McNaught С. E. et al. An investigation into the effect of the probiotics on gut immune function in surgical patients // Clin. Nutr. 2004. -Vol. 23. №5. - P. 1069-1073.

Информация о работе

Давыдов, Дмитрий Сергеевич
кандидата биологических наук
Москва, 2010
ВАК 03.02.03

Диссертация

Экспериментальное обоснование клинического применения споробактерина в кардиохирургии - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы