Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ЭНДОЛИМФАТИЧЕСКОГО ВВЕДЕНИЯ МЕЧЕНЫХ ЛИПОСОМ И МИКРОСФЕР

ВАК РФ 03.00.01, Радиобиология

Автореферат диссертации по теме "ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ЭНДОЛИМФАТИЧЕСКОГО ВВЕДЕНИЯ МЕЧЕНЫХ ЛИПОСОМ И МИКРОСФЕР"

всесоюошя ¡{«гшю-иссвдоватедьсжий институт сешмгоэяйсшшов радиологии

На правах рукописи

ИС ПЕШКОВА Лшмкда Ивановна

УДК 616,423-07;616.153.952.3-073,916

жсперииенталыюе обоснование шодаиатического вещш ибчишх лкгюсои к ыикросфер

/03,00.01 ~ Раляовжолотя/

Автореферат дкссертают на совсканве ученой степени кандидата биологических наук

ООнкнск - 1906

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте медицинской радиологии АШ СССР / директор - доктор медицинских наук, профессор А,ф; ЦЫБ/,'

Научные руководители: доктор медицинских наук, лауреат премии Ленинского Комсомола* А;Н; ЛБДЕККОВ; кандидат медицинских наук Б.ЯГ ДРОЕШЗСКИЙ

Доктор ветеринарных наук, профессор H.H.' ИСАМОВ Доктор биологических наук, профессор, заслуженный деятель науки РСФСР А ,'Аi АЛИЕВ

Ведущее учреждение - Научно-исследовательский ветеринарный

на заседания спешиалиаиросаыного Совета К 120.81:01 во Всесосзнои научно-исследовательском институте сельскохозяйственной радиология /249020, г: ОСнинсж, Калужское ойл., ВДИИСХР/.

Официальные оппоненты:

институт /г; Казань/ Защита состоится 1986 г.* в ' /3

час.

Автореферат разослан

Ученый секретарь слешгалиэированяого Совета, хандндат биологических иаук Н.И.Санжароаа

О ОНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. В становлении к ра1в«т»и лимфологхи важное место занимают радюнуклждиые катоды исследований, особенно Ер» патологических процессах в дим^аткческЕХ уела* животных в человека, 9 том числе я опухолевых поражениях, оопровождапцнхся нарушениями барьерной, сократительной я других функций узлов. Исследование функционального ж ыорфологяческого состояния лимфатических узлов с помощью радионуклидных препаратов /РНД/ у различных видов животных, в равной степени ж крупных сельскохозяйственных, а также человека, представляет боль-вой практический интерес оря локальном или общем внешнем облучении организма, для изучения возможности транспорта фармакологических средств при кх »ндолинфатическом введении с целью повыше— нжя эффективности лечебжых мероприятий я уменьшения общетовсяческого действия.

Имещхйся опыт применения радиогдгклидных методов в лгафоло-гии, преимущественно радиоактивно го коллоидного 193 ли , свидетельствует об уменьшении жахоплежжя РШ в лям^атических узлах о патологией. Способ введения 'радиоактивного коллоидного "али вхтерстяцналышй /С.В.Серый, 1967; С. М. Щеглов, 1969; С.А.Биков о соаат., 1963; ММевин с соавт., Х9В4 я др.-/. При таком способ» введения частьИШ остается в месте квьеяцин, до 50£ накапливается в печени, распределение в лимфатической системе неравио-мерно. Дефект накопления РШ в пораженных лимфатическях узлах требует увеличения количества вводимого препарата для создалия в пораженном лпфатячесхом узле таких концентраций РКП, которые позволяют формировать терапевтические поглощенные дозы,

В литературе имеются лишь единичные экспериментальные дан-хне о яаяоолеаяж в регионарных лимфатических узлах меченых я зе-мечвиых лисосох прх итерстнцнвльном введении мелким лабораторным животным. Распределеахе лнпосом при таком способе введения характеризуется, в основном, теми хе закономерностям, что и распределение радиокоддо ИДО В / СМарр» еЬ а!,, 1947* Сагаб'е, 1968» Ейяагва *г 1Л6 /.

Поиск новых к совершенствование существующих РКП для эндо-лхмфаткчесхого введения с целью оценки барьерной функции лимфатических узлов, ""»рп^е^ркг чг)врт»ттдпгг г№*ттт""п ж фххсашш в пораженных исих узлах, формирова-

Мосн. сельскохо.1. акад***4* им. К. А. Уиидр^зввж

И«в. №.-

ния элективных поглощенных доз при незначительных уровнях облу-чеиия друге оргмов х ткажей, цел«кадрааленная коррекция Около» гичесхого поведения РЕП в организме при зндолиыфаткческом введении для варьирования величин поглощении* доз в лимфатических узлах - одна из актуальнейших радиобиологических проблем современной лимнологии сельскохозяйственных животных и человека;

В настоящей работа использовали микросферы альбумина сыворотки крови /МСА/ х лмцетиновые лилосомы, печенные радионуклидами Вода. РШ могут быть получены различных размеров, в качестве метки может бить использован широкий перечень радионуклидов. Лицо сомы могут Оыть использованы для транспорта различных фармакологических средств. Удельная я суммарная активность обоих РНП, формируемые ими поглощенные дозы могут быть изменены в широких пределах в зависимости от конкретное задачи.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования било экспериментальное обоснование эндолимфатического введения меченых липосом и ЫСА для изучения барьерной Функции лимфатических узлов животных как интактных, так к с патологией, фориированн в поглощенных доз, оказывала юс терапевтический эффект.

Для достижения этой цели в работе решали следующие задачи:

1. Изучить общие закономерности биологического поведения меченых липосом.я UCA в организме животных, в том числе и сельскохозяйственных, о лимфатическими узлами интактными и с патологией; оценить поглощенные дозы в лимфатических узлах к критических органа* при зндолюфатжческом введении РНП.

2. Изучить возможности целенаправленной коррекции поведения меченых липосом и МСА в организме животных интактных ж с патологией регионарных лимфатических узлов.

3. Оценить возможности использования эндолимфатнческого вве— дания меченых липосом и МСА для распознавания патологического процесса и эффективности лучевого воздействия.

Научная новизна. В настоящей работе впервые проведено комплексное радиокуклздное изучение биологического поведения меченых липосом и МСА в организме животных при эндолим$атическом введении. В опытах использованы животные интактные, с асептическим воспалением и перевивными опухолями в регионарных лимфатических узлах. Установлены закономерности влияния на распределение в организме животных размера частиц РНП, оодоиа и массы вводимой взвеси и

предварительного ввидения рентгеноконтрастного масла /сверхжидкого лршиС'Долз/ Twote впервые предложены способы иеленалравлан-иоЙ корремшк Апологического поведения препаратов в организм* животных о патологией регионарных лимфатических узлов, позволявшие повысить накопление и увеличить продолжительность фиксации РНЛ, т.е. увеличить поглощенные дозы в пораженных лимфатических узлах, добиться ревпомерного распределения ГНП между лимЗатичосинни узлами 1-го К 11-го порядка 1фй низких уровнях накоплочш! препарата в других органах и тканях. Впервые показана возможность применения экдолим£аткческоро введения меченых липосоч л МСА для диагностики к терапии опухолевых поражений регионарных лш£ати-ческих узлов, транспорта и пролонгирования действия лекарственных препаратов* Определены поглощенные дозы в лимфатических узлах, печени, селезенке, легких и во все» теле животных.

Полученные впервые в настоящей работе денные могут рассматриваться кок новое перспективное направление в теоретической и прикладной лимнологии человека и сельскохозяйственных животных?

Научно-практическая значимость работ». Диссертационна.-! работа в'"поднялась в ра;.жах оо-ьединенких научных тем "Клюшко-эксяе-ржментальная раэрайотка и совершенствование методов радиоизотопной диагностики, лечения, синтеза ж испытания новых меченых соединения" /Jí гос. регистрации Я1026620/ и "разработка новых и усовершенствование известных ттодов лечения с применением открытых радионуклидов" /# гос. регистрации 01.84.0033241/.

Выполненная работа позволяла описать состояние барьерной функции интактиих к пораженных лимфатических узлов, их способность ф я* евро ват ь к удерживать меченые лпюсомы ж МСА 'в зависимости от различиих фиэяко-химическжх свойств вводимых эндалиыфатически ГНП. Зыдолкм^атическое введение меченых лнпосоы и UCA может быть использовано для целей диагностики к лечения опухолевых поражений лдафатетескнх узлов. Показано яреимущество эндолллфатического введения РНП перед интерсткциалышм - обеспечивается повшеняое накопление в пораженных лим^тичесдих узлах, содержание РНП- в печени, селезенке, легкях - минимально; липосомы могут быть использованы в качестве носителей не только индикаторных, но и терапевтических количеств РНП, в состав липосом возможно вклпчить другие фармакологзгче ские средства, в том я«еле и противоопухолевые;' Предложены и" я Спитака способы деленалрарленно! коррекции фармакокюш-

тики мечоних лмпосом я МСА в организма с цольо повышения к* иакоц-локия ч иораженкых лимфатических узлах, а также увелачошу; продолжит ельност к фиксации.4 Поглощен«не дозы в лимфатических узлах, таким образом, ко гут варьировать в широких пределах от минимальных до терапевтических. Общие закономерности биологического поведения изученных ГШ даит основание считать пелос.ообраэным использование их как в ветеринарии,' ток и в клинике.

Получении© в работе дщшце используются при разработке новш и совершенствовании существуйте способов ондолим^тическоЯ терапии » эксперименте на подопытных жииотных в Ростовском НИИ онко-логик ЫЗ РСФСР, в Киргизском НИИ онкологии и радиологии Киргизской ССР /г. Фрунзе/, в отделе радиоактиьиых препаратов Научно-исследовательского института медицинской радиологии АМН СОСР /г.Обишюк/.

А1троДаг;ия рцботи. Основные материалы диссертации доложен и; па Всесоюзной Школе ШШХ СССР Повив методики радио) гу!ишд ной диагностики" /1304 г., г, Москва/; на научной конференции экспериментального сектора /1983 г»/, отдела радиоактивных препаратов /1984 г^* отдела радиоиэотопкой диагностики /1533 г./ Научно-исследовательского института медицинской радиологии АМН СССР /г. Обнинск/; на 1-й Всесоюзной конференции "Клиническая лимнология" /1Э85 г., г. Подольск/.

Структура диссертации. Диссертация изложена на 131 странице машинописного текста я состоит из введения, обзора литературы, раздела "Материалы и методы исследования", результатов собственных исследований, обсуждения результатов и выводов. Диссертация иллюстрирована 24 рисунками и 29 таблицами. Список цитируемой литературы включает 2?9 наименований работ на шех 98 отечественных и 181 зарубежных авторов.

На защиту выносятся следующие основные погожени^.

1, При эыдолим^атическом введения накопление меченых делосом и КСД в лимфатических узлах различных гидов домашних животных прямо зависит от размера частиц; при патологии такая зависимость отсутствует.

2. Используя разработанные я испытанные способы коррекции биологического поведения изученных РШ1 в организме животных, возможно целенаправленно регулировать уровни накопления И погло-«*ш«;а дозы в люэтических умах; облучение других органов и тканей, в том числе и критических, незначительно.

Э. 3i loo лимфатическое впадение меченых липосом и UCA цел ее: о-ойраэно исподъэопать для оценки барьерной функции лимфатических узлов животных в норме х при патологии! в том числе и при лучевых повреждения!, диагностики и терапии опухолевых пораженкЙ л галчат и-чеаких узлов.

МАТЕРИАЛА I! МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Обоснование применения эндолимфатического вввдв(шл меченых липосом и МСА, исследование их биологического поведения & организме а норме я при эксперимент ал ьны х моделях пат слогу, и ре гаоиарных лимфатических узлов проводилось на кроликах "Шитшиа", обоего пола, массой 2,5-3,0 кг. Исследования выполнен» ка 7 сериях животных. Всего в опытах гспользовано 755 кроликов к 7 овен.

1-я серия» Изучали распределение п организме интактних животных 1-нативноге альбумина /0,004 ккм/, 1251-дипосом /ОД1 Кк*/, *251-МСА /0,5-2,0 ж 5-10 мкм/. Сроки исследований - 5 мин, I час, 3 часа, I, 3, 5, 10, 15 я 20 суток; Распределение РКЛ в организме животных с патологией регионарных лзофгскческих узлов -1251-липосом и 125Г-МСА /5-10 мкм/. Использовано 265 кроликов?

Н-я_серия; Изучали зивадение Р!Ш из регионарных лямфаткчее-ких узлов интактных животиих и животных—опуходвносителеЛ после введения меченых липосом я НСА размером 0,5-2,0; 5-10 и 10-25 мкм. Динамические исследования проводили в течение 20 оуток. Использовано 60 кроликов и 7 овец/.

. ТП-я серия.' Изучали вцведенив радионуклидной метки из организма кнтакгкых животных и животных С патологией регионарных лимфатических узлов после введения меченых липосом л I.ICA. Динамические исследования проводили в течение 20 суток» /70 кроликов/.

17-я серия. Изучали выведение меченого отечественного противоопухолевого антибиотика 57Со-йлеомицетю1а водного раствора и. включенного в состав липосом из регионарных лимфатических узлов кнтактных и с перевивной опухолью. Срок исследования 10 суток для водного раствора антибиотика и 20 суток - для липосомальной формы ГНИ /40 кроликов/.

У-я.серия. Изучали влияние массы /3, G и 12 мг в 2 мл/ ИШ я объема /2» 4 и 7 мл при массе 3 мг/ на распределение меченых

Меченые липосомы получены к.б.н. Г.А.Поповым

Меченые МСА и ^Со-блеомицетин подучены к;б,к. В.М.Иетриевым

jwhocom и ЫСА а организме животных интакгних ж с патологией регио-наркнх лимфатических узлов. Сроки исследовании 3 часа к 5 суток /180 кролика г./.

VI-я серия; Оценивали влияние предварительного вйеденжя р^нтгеножонт рас тного масла - сверхжмдкого липиолола - на накопление 12Ъ1-люшсом и 1251-МСА с лимфатических узлах интакгних и о патологией. Срок* исследований 3 часа * 5 суток /120 кроликов/.

VII-» серия; Изучали влияние вндолим£атяческого введения /активностью 10,5 МБк/ на рост иеровивной опухоли.' Срок

наблюдений 95 суток /20 кроликов/.

В качестве экспериментальной модели патологии регионарного хга^атического узла использовали перевивную опухоль Ерауна-Пнрс к асептическое воспаление;

Для перевивки опухоли получаля суспензия опухолевых клеток, чаре» 10-15 суток после интратестикулярног© введения клеток опухолевого штамма животным-донорам, их забивали воздушной эмболией* Выделенную опухолевую ткань измельчали, несколько раз про швали стерильным физиологическим раствором, пропускали через металлическую решетку с диаметром пор 0,1 мм. Полученную взвесь отдельна* клеток в физиологическом растворе в объеме 0,1 мл с помощь» * инъекционной иглы К 0840 вводили непосредственно в лимфатический узел задней конечности кролика па глубину 2 мм /Фацкокалиэаторсхое-преддожекие * 1000 от 2S.0I.I9S2 г./. Спустя.10-12 суток после перевивки, подколенный люфагичесхий узел имел размеры 20 х 25 мм, массу 2,5-3,0 г /интакткыН лимфатический узел - 0,5 х 0,7 мм ж 0,2-0,3 г/. Перевиваемое«. - 100?, Асептическое воспаление получали введением в лимфатический узел 0,05 ил скипидара.

После предварительного введения синего Эванса, делали разрез кожи на уровне средней трети голени. В окрашенный лимфатический сосуд задней конечности кролика вводили РНП под давлением 25-30 мм водя. столба под лупой с IO-кратным увеличением в течение 1-2 минут. Объем вводимого ИВГ 1,5-2,0 мл, суммарная активность- I,В5-2,22 МЕк, Рану задавали и обрабатывали настойкой Йода. Эндо люэтическое введеаие РНЕ кроликам осуществляли под общим хлоралгидратбвдо наркозом, а овцам - под местной анестезией 2Í новокаином; На каждый срок забивали не менее 5 животных. Выделяли; печень, легкие, головной.мозг, селезенку, тонкий ж толсты! кжшечнкх, поджелудочную железу, щитовидную железу, сочки, желудок, подколенные /1-го порядка/ к оояезичнна /II-го порядка/

лимфатические узлы. Лимфатические узлы задней конечности, и которую вводили РНП, условно названы "активными". Биопробы взвешивали на аналитических весах я радиометрсровали. Из-за весьма «узкого уровня накопления РНП в других органах и тканях, в последу ццжх сериях опытов использовали данные только о накоплении в лимфатических узлах и критических органах - печени,' селезенке, легкий и крови". Накопление радионуклида в не блокированной щитовидной железе использовали для косвенного контроля за отаепла-кием радионуилидной метки от носителя. Определяла количество РИЛ па I г массы органов и тканей /удельная активность/ и па весь орган в %% от введенного количества препарата" Статистическая обработка подученных дающх выполнена по Стышенту*

Наружную радиометрии над лимфатическими узлами 1-го порядка кроликов и овец проводили, начиная с 15-20 минут после введения ОТ! и в течение 20 суток; Скорость счета первого измерения принимали за 100%* Визуализацию регионарных лимфатических узлов обоих видов сельскохозяйственных животных проведши в течение 10-12 суток с помощью сканера и искровой гаыма-кемерн /С.А^Дубро-вия е соа»т.:, 1974/. Радиометрические измерения выполнены на приборах комплекта лаборатории радиоизотопной диагностики "Гамма* /ВНР/. Выведение радионукдюшой метки из организма кроликов изучали в течение 18-ЙО суток на.япзкофоповой камере счета всего тела животных "(п1втрт1и*в

Были определены поглощенные дозы для лимфатических узлов, печени, легких, селезенки и всего тела животных. Для оценки.влияния задолимфатичеежого введения меченых МСА на рост опухоли, .аси-тотным-ооухолекосятелян вводили 18,5 1Шк 1311-МСЛ /5-10 «ш/; контрольной группе хивоткых-опухолавосктелвй препарат' те вводили. Определяли размеры опухоли, массу тела животных в динамике в •тносителышх величинах, средни» продолжительность жизни. В оценке влияния зкдолимфаткческого введения РНП на опухоль использовала морфологическая методика.'

Результаты наружной радиометрии к выведение РНП хз организма обработаны в лаборатории математического моделироваяжя ж вычислительной техники Научно-исследовательского института меди-шш ежой радиологии АМН СССР с помощью программы ЕХР для оценки параметров нелинейного уравнения регрессии, входящей в состав под-, системы "Радиобиологические эксперимент", автоматизированной спсте- • мы радиобиологических исследований в НИИМР АШ СССР?

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ И ШЕ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследования показали, что при зндалмифатичееком внеденин кнтюпным хивотиым меченых препаратов: натввного идьйуизна, липо-ссм и MCA размером 0,5-2,0 it 5-10 мкм, удольнов содержание РНП в регионарных димфатичесхих узлах увеличивается с увеличением размера частиц. Так, через 3 часа после введения меченого альбумина удельная активность составила I,9±0,SÍ от введенного количества препарата, для липосом.и МСА двух размеров этот показатель был соответственно: 34,3*3,4?, 128,9*17,IÍ и 260,0231,Oí. Спустя 72 часа в регионарных лимфатических уздах оставалось при введение ли-посом I2,3*I,9Í на 1.г массы, МСА /0,5-2,0 мкм/ - 30,2±7,3£ » МСА /5-10 шч/ - 181,9^35, От 24 ДО 72 часов после введения содержание ^^I-MCA /5-10 мкы/ в лимфатических узлах оставалось практически на одном уровне? Спустя 10 суток удельная активность МСА в янтактном подколенном лимфатическом узле была достаточно высокой - 76,3*21,3!?. Максимальное накопление препарата в регионарных лимфатических узлах отмечено при введении меченых МСА размером 5-10 ukmí Элиминация МСА указанного размера и лкпооом замедлена по сравнении с другими PtUTí В лимфатических узлах 11-ге порядка ннтактных животных наибольшее удельное содержание препарата отмечено черев 3 я 24 часа после введения ПСА размером 0JS — 2,0 мкы и составило 1/4 часть введенного количества НШ? Через 72 часа максимальнее количество /8,5*3,1%/. отмечено при введении меченых ЫСА размером 5-10 мкы и лнпосом /I,6£0,6JC/Í Спустя ДО суток удельное содержание указанных препаратов в лимфатических узлах 11-го порядка составило меньше IJC. Удельное содержание РКП в печени, легких и селезенке во все сроки иабдвденхй пе превышало долей процента, а в крови - сотых я тысячных долей процента от введенного количества.' 8 то же время, при жвгерстициалъном введении радиоактивных коллоидных растворов а печени накапливается до 50Í препарата /Й.«;Тарасов, 1964; В.В;Седов с соавт., 1978 а дрг/,' а при использовании меченых ревтгеноконтрастных масел в легкие поступает 25-30£ /.Klnaoath, 11721 KUreh*r, Ю76 /* Эт* данные свидетельствуют косвенно о недостаточно высоком накопления РНП в лимфатических узлах it о риске переоблучения печени и легких.

Из полученных данных видно, что из 4-х испытанных на иитакт— кых животных РНП, по уровни накопления, продолжительности фиксации в регионарных лимфатических узлах, а также с учетом физик о-

химических характеристик, важных для транспорта фармакологических средств, в том числе и радионукдиышх, оптимальными являются ли-посомы и Y.CA /5-10 мкм/.

Как виано из таблицы I, накопление 1251-лнпосом в лимфатическом узле, пораженном опухолевым процессом, иревншает аналогичный показатель для интактного лимфатического узла 1-го порядка в ранние срокк после введения препарата, в последующие сроки этот показатель больше для еттоктных подколенных лимфатических узлов. В лимфатических узлах И-го порядка живо тних-^ну холено сит елей максимальное удельное содержание РИТ отмечено в течение первых 3 суток и этот показатель выше, чем у интактных животных /Р С 0,01/. В лимфатических узлах 1-го порядка с асептическим воспалением удельное содержание -липосом через 5 минут после введения составило I3,5i7,I£ л 54,0i9,9!i - у интактных животных /Р< 0,01/; через 24 часа - 3,8±0,6i и 21,9^3,5^ /Р < 0,01/. Максимальноо удельное содержание 12 I-ляпосом в лимфатических узлах 11-го порядка у животных с асептическим воспалением регионарного лимфатического узла било.отмечеьо через 24 и 72 часа соответственно: 11,6±1,0£ и 7,3^1,6^; Из лимфатических узлов 1-го порядка, пораженных опухолевым процессом,выведение РНП происходит быстрое, чем при асептическом воспалении.'

Установлено, что удельное содержание ^Со-блеомяцетина в опухолевом лимфатическом узле 1-го порядка спустя 10 суток.после введения водного раствора.меченого антибиотика составило 0,'3020,09i, в иитактном - 1,2^0,4?; через 20 суток после введения липосокаль-ноЯ формы зтого РНП в опухолевом лимфатическом узле - 14,0^3,6^, а в ннтактном - 34,4il2,36 / Р < 0,01 к Р < 0,02/.' Содержание ГНП в лимфатических узлах 11-го порядка при введении лидасомалыгой формы меченого антибиотика составило 0,'II±0,03f у животных-овухо-леносителей и 1,?±0,3£ - у интактных животных; в печена -0,09i0#01i, в селезенке — 0,04^0,01^.7 жпвотнцх-опухолешектолеЯ.

При введения меченых МСА /6-10 тм/ ливотным-олухолевосате-дям, удельная активность в опухолевых лимфатических узлах во вое сроки наблодекий достоверно меньше, чем в контроле я составила через 3 часа после введения 9,3±I,2Ä, что В 8 раз меньше, чем прж введении лнпосом, спустя 72 часа содержание ^^I-WCx было в 2 раза больше, чем вря введении липосом. Меченые МСА накапливаются в опухолевых лимфатических узлах в меньлях количествах, однако фиксируются более продолжительно© время, чек меченые лкпосомьг; в лим- ■

Тайши X.

. Расвредёлевже ^^-дююсои в оргааяаяе хквотасс ннтаятныг /I/ я олухолеЕОситедэв /П/ после эадодя^атесвого введендя

Ыатаановадие сргалов. I тканей '

Вре^з после ьведеша препарата

3 часа

3 суток

_] *

I

20 суток

1на орган !на I г кассы 1 ва орган 1 на I г массы 1 на орган I на I г кассы

Псдаюленнае I 11,9*2,3 31,313,4 8,1*6,6" 13,1*1,9 0,9*0,3 1,3*0,3

линеалы П 23,7*2,1- 74,5*8,0 4,8*0,3 3,1*0,8 • 0,5*0,3 , , 0,10*0,04

"активные* Р <0,02 <0,001 <0,001 <0,001 >0,5 <0,05

Поясничные I . 1,оЮд 6,2*1,3 0,36*0,02 1,б4о,б 0,15*0,04 0,7*0,2

дтф, узды И 2,0*0,1 8,1*0,3 5,5*0,5 0,13*0,05 0,6*0,2

Р <0,001 >0,05 <0,01 <0,01 >0,5 >0,5

I 3,5*0,8 0,04*0,01 1,2*0,2 0,010*0,002 0,03*0,03 0,0010*0,0003

Печень и 2,6*0,5 0,02*0,01 0,9*0,2 0,0030*0,0005 0,26*0,05 0,0030*0,0005

р >0,5 >0,2 >0,2 >0,2 .<0,02 >0,5

• I 0,20*0,05 0,16*0,05 0«020*0,005 0,014*0,002 0,0010*0,0003 0,001*0,0005

Седэаенка п 0,02*0,01 0,01*0,01 0,012*0,003 0,007*0,003 0,005*0,001 0,004*0,001

р <0,01 <0,05 >0,2 >0,1 <0,01 <0,01

I 7,4о,7 0,05и0,01 2,5^0,7 0,012^0,002 0,э2Ьд 0,002^0,001

Кровь II 2,6*1,0 0,013*0,005 2,3*0,4 0,012*0,001 1.4*1,2 0,008*0,003

р <0,001 <0,01 >0,5 >0,5 >0,5 >0,05

фатнческих узлах II-го порядка животных с перевивной опухолью максимальное количество WCA отмечалось через О часа к составило 1/4 часть рсзго введенного РНП, спустя 72 час* - 3,220,6?; В течение первых 72 часов в опухолевом.лии^тическом узле 1-го порядка содержание Ш1 уменьшилось в 1,'5 раза, в лимфатических узлах 11-го порядка у этих же животных - в 7,6 раза.

Удельное содержание меченых МСЛ в лимфатических узлах 1-го ' яорядка. с асептическим воспаленней через 3 и 72 часа вило соответственно: 24,6±8,2i к 22,1,6?, т.е. практически,оставалось на том же уровне. Накопление МСА в лимфатических узлах 1-го порядка с асептическим воспалением достоверно меньше, чем в интакгних лимфатических уалах и больше, чем при опухолевом поращенин; В лимфатических узлах II-го порядка у животных о асептическим воспалением максимальное содержание обнаружилось через 3 часа после введения препарата и составило 6,8±0,4J( на I г массы, что больше^ чем у контрольных животких и меньше, чем у жнвотних-опу-холеносителей.

Период полувыведення для К51-липосом из жнтактсшх лимфатических узлов .составил 12,5 часа; для 57Со~блеомицетина-%аипосои -3,05 /2,53-3,55/ суток, у живо тных-ощгхоле носителей - 2,36 /1,852*7/ суток. Выведение меченых ляпосом из опухолевого лимфатического узла более интенсивно по сравнению с контрольными животными; Элиминация из лимфатических узлов с опухолью 12SI-UCA размером 5-10 мпн характеризуется также большей скоростью по сравнению с контрольными животными: период полувыведешиг из опухолевого лимфатического узла - 4,8 /4,42-5,37/ суток, из интактного - 7,65 /7,273,48/ суток?,Для сравнения: выведение из опухолевого лимфатическо» re узла I25I-WCi размером 10-25 мкм происходило медленнее - период ПФлувыведеняя 6,7 /6,13-7.27/ суток; Увеличение размера частиц от 0,11 до 25 мкм не сопровождается существенна ростом продолжительности фиксации их в регионарных лимфатических узлах, пораженных опухолью; Общие закономерности накопления и фиксации меченых UCA в штактных и пораженных лимфатических узлах кроликов подтверждаются данными; полученными на овиах. Так/ при ли^олхщат >гч еском введении мечевдх UCA, по данным наружной радиометрии над решоидр— ними лимфатическ:2Ш узлами жлвотких,остаточная актягшость через 24 часа в опытах на кроликах состаилла 92,5*2,И,' а для овец -ЭО,Й /единичные наблюдения/; спустя 4, 7, 12 и 20 с,?ок эти величины были соответственно: 85,0*3,2* и 72,0^; ж

2b,8^3,4i и 28,7?{ 8,19*1; 6? и 3,0j£? от исходного количества1?

Показано, что о помощью меченых.МСА возможно дифференцировать лимфатические уэли интаятные и с опухолевым поражением, используя метод наружной радиометрии и сканирования ва I, 4 и 1 сутки после введения ЮТ.'

Полученные на кроликах к овцах данные свкдетельстьуют о том« что звдолгафатическов введение меченых липосом и МСА может быть эффективно использовано в ветеринарии для исследования различных аспектов функционального состояния лимфатической системы в норме, в онтогенезе различных видов сельскохозяйственных животных, л также при патологических процессах, в которые в той или иной степени, но вовлечены элементы лимфатической системы.' Особую практическую значимость приобретаю? возможности не только и не столько диагностического применения - эндолимфатического введения указанных НП, но, что не менее важно, использование их для транспорта фармакологических средств. Эвдолтфагяческое введение Р1Ш обеспечивает повшенио лечебной эффективности и уменьшает поглощенные дозы в других органах и тканях. Биологическое поведение ИШ, величины формируемых в лимфатических узлах поглощенных доз могут иметь некоторое особенности у различных видов животных с учетом вариабельности анатомических элементов лимфатической системы, однако результаты работы па двух видах кгэотних позволят сделать заключение о идентичности общих биологических закономерностей распределения в организме препаратов и формирования поглощенных доз;

Установлено, что изменяя объем вводимой взвеси меченых липосом, воэмоллю уменьшить накопление препарата в лимфатических узлах 1-го порядка» увеличить его накопление в лимфатических узлах 11-го порядка, а также добиться равномерного распределения в лимфатической системе, т.е. оптимизировать их фармакокпкетику. Такое же заключение можно составить и по результатам опытов, в которых в одном и том же объеме вводили различные массы липосом /Таблица 2/. Второй опособ коррекции фармакокинетика липосом для практических целей перспективное - позволяет решить основные проблемы оптимизации фармакоккнетяки меченых липосом в лимфатической системе животных и, в отличие от увеличения объема, не приводит к, хотя и незначительному, но росту накопления РНП в печени и селезенке'; Увеличение массы липосом, не только в изученных пределах, во и значительно больших, не связано с проблемами возможного токсического действия. Установлено, что даже существенно большие количества

Тайшета 2*

Вшшяе объема ж массы шщиого препарата sa вааошеете Е51-шюсом s швфагичбсюд y&iax чераа 3 часа поа» эвдаш^атетеского нмяешш /в аа I г шссн/.

Цагиевован»

органов - а тканей

J

Объем, гводаого препарата

1. 2н

I

4 tu 1

7 us

! 2-4 ад ! 2-7 m ! 4-7 ш

Подолешше хл>4. узлы "агпшные*. Поясшпиие хшф. /зла

X П

I

п

34,3*3,4 74,5^3,0

5,2±1,3 8,1^0,3

7,3*2,8 6,e±i»3

Ю,3£0,Э 9,2¿I,3

7,9*1,6 П»527,8

П,5±4,9

<0,01 <0,01

<0,01 <0,01

<;0,02

>0,5 >0,5

>0,5 >0,5

<0,001 >0,5

T

!

Надаевоваяже органов к тканей

líacca вводимого препарата

S иг

б иг

I 12 иг

Î 3-е «г ! 3-12 кг ! 6-12 te

Подколенные ЛШф. узлы "активные* Пйзсюпшк sail* 7sai

I

П I

п

34,3*3,4 74,5±S,0

5,2*1,3 8,1^0,3

is,7¿e,i I5,0±3,5 »

I5,2¿4,2 12,2*5,9

33,672,2 8,7*1,9

10,7*1,1 39,4*8,9

<0,02 >0,5

<0,001 <0,001

<0,01 <0,02

>0,5 <0,01

<0,02 >0,2

>0,2 <0,01

I - кятакт£не дш^атгчесгае узлы Л - .mÇâTircecxxe увди с перевпвой оауюдьи

хипосом /Э00-7СЮ мг/ на приводят к кахим-лнбо функциональным я морфологическим изменениям в организме животных /науЬе*, 1976» Klaelberg et el., I47Bi OrigorjUaie, 1978/.

Предварительное введение липиодола способствует повышению накопления иеченых липосои в регионарных лимфатических узлах с асептическим воспалением и увеличению продолжительности их фиксации за счет существенного замедления выведения препарата из узла.' Через 3 часа после введения нечепих липосом с предварительным введением липиодола,. удельная активное» составила а без липиодола - 4,2±0,3#. Спустя 5 суток активность в лимфатическом уэ- * ле с патологией была такой же - 9,3*1,0?. *

* Изменяя объем вводимой взвеси I-MCA, возможно добиться равномерного распределения препарата в лимфатической системе, уменьшить накопление его в интадткых регионарных лимфатических }злах к повысить накопление в пораженных- лимфатических узлах 1-го порядка и в лимфатических узлах 11-го порядка'.' Учитывая иммуноген-ные свойства денатурированного альбумина сыворотки крови, в работе не приведены данные о влиянии массы этого РКП ва его биологическое поведение в организме животных.*

Предварительное введение липиодола позволяет повысить накопление меченых МСА в лимфатических уздах 1-го порядка. После предварительного введения липиодола удельное содержание -^I-MCA через 3 часа составило 82,9*31,3$, а без липиодола - 44,2*2,4$. В течение 5 суток содержание РКП в лимфатических узлах с асептическим воспалением без липиодола уменьшилось в 5,5 раза, & после липиодола - всего в 1,2 раза? Показано, что предварительное введение липиедола позволяет, во-первых, существенно повысить накопление меченых UCA в пораженных регионарных лимфатических уздах, во-вторых, многократно увеличить продолжительность фиксации пови-вешшх количеств РШ, накопление МСА при »том в печени, легких, сколько-нибудь сувественно не изменяется.

Выведение радионукллдной метки из организма хжвопшх-оиухо— леаоентелей после эддолимфатическ^го введения ме чешет лило сом я UCA приведено на рисунке I.1 Период полувыведенжя из организма хи-вотных-оцухолеяоеителей для ■ *1^даюсом - 1,9 /1,7-2^1/ суток, для интактных - 7,3 /6,76-^8,02/ суток; для меченых МСА соответственно ; 3,85 /3,09-4,42/ И4,42 /4,04-4,6/ суток?

Поглощенные дозы для интактных животных и животкых-оцухоле-■ носителей приведены в таблйце 3* Максимальные поглощенные дозы

Pu о. I. Выведение рмяонуидиишоЗ матха к» организма хжвопшх-оцуходенооитвдеА по аде эндалимдои-чеокого введения ^251-липосом я ^J-UCA /&-10 шил/.

Тайлща 3.

Доглоцеааке дозы в органах г тканях

^именование! дИиОСО^Н ! II С А /5 - 10 ши/

I

органов I ' Контроль ! Опухоль ! Контроль ! Опухоль и тканей ! 123-11125-1! 131-1 ШЗ-1! 125-1! Х31-1 ! 123-1! 125-11 131-1 ! 123-1! 125-1! 131-1

Подколенные ЗИ 2250 11830 1403 1258 13590 3600 13000 120000 180 П24 10230

узлы 84 607- 3210 378 339 3670 370 3514 32430 48 303 2760

"активные"

Легкие 0,9 4,3 15 0,5 2,6 * 12,5 1,0 II 66 0,8 3,3 13,2

0,2 1,2 4 0,1 0,7 3,4 0,3 3,0 15 0,2 0,9 3,6

Печень 0,9 3,4 13,4 0,97 2,6 13,3 0,3 4,3 18 0,5 1.7 6,0

0,2 0,9 3,6 0,26 0,7 3,6 од 1,2 5 0,13 0,5 1.6

Поясничные 42 ВО 1750 150 520 5430 - * - 40 438 5135

лгм£. У11" II 51 472 40 140 Г470 - * - 7,2 56 364

Все тело 1,1 5.1 26 0,9 2,3 14 - * — 4,1 13,5 85,4

0,3 1.6 7,0 0,25 0,7 3,8 ' - - 1,1 4,9 23

Верхняя сорока - в рад/ кК^ Нлзняя строка - в хГр№Ек

ере эндолимфаткческом введении меченых лнпосом ж МСА формируются; естественно, в лимфатических узлах. При введении 1 1-лшюсом поглощу ни ад доэа в опухолевом лимфатическом узло превышает дож» для печени, легких и всего тела соответственно: в Г01Э, 1079 и 966 раз; при введении I3II-MCA - в 1725, 766 и 120 рш? Величины терапевтических поглощенных дез в сцухэлевых лимфатических узлах составляют 40-60 Гр /4000-6000 рад/. Из приведенных данных видно, что формирование поглощенных доз в пораженных лимфатических узлах животных возыохн* в широких пределах от незначительных, при введении индикаторных количеств, до терапевтических. Важную практическую значимость имеет установленные факты весьма низких уровней поглощенных доз в других органах и тканях, в том числе и критических, при использовании указанных ЛШ в лтфологии человека и животных.

Выше било отмечено, что щитовидную железу не блокировали я накопление в ней Rffl ислальэовалк как косвенный показатель отщепления метки. При введении 1аа1-липосом ицтактным животным максимальное удельное накопление в щитовидной железе отмечено через 72 часа и составило 55,3^7,'4^ /поглощенная доза 6600 ыГр/ИБк/, при введении.меченых МСА через 72 часа удельная активность была равна 15,4*3,7? /поглощенная доза 946 ыГр/МБк/, При введении меченых липосои и МСА животкым-окухоленоеотелям, поглощошше дозы были практически на одном уровне: 17960 и 15494 мГр/МБн, что заметно больше, чем в опухолевом лимфатическом узла. Однако, нами ври внутривенном введении криссм с блокированной иштовад-

яой железоЯ было показано, что поглощенная доза в щитовидной ивле-зе уменьшается в 625 раз по сравнению с неблокированной.

Поглощенные дозы иа весь организм, подученные нри андолго*!-«-ткческом введения меченых липосом и МСА, как видно иэ приведенных данных, весьма незначительны. В литературе отсутствуют аналогичные данные, с которыми можно было бы сравнить получении* результаты с учетом физико-химических свойств препаратов, вида жявотних и способа введеиуд. Поглощенная доза на все тело при эндолимфатическом введении меченых лнпосом животным с патолегиеВ лимфатических узлев в 966 раз меньше, чем поглощенная доза в пораженном лимфатическом узле, а ври введении 1311-ЦСА - в 120 раз. При внугрккеа-ном введении меченых UCA крысам доглояенкая доза на все тело все:« в 14 раз меньхе, чем доза в легких, где накапливается до 90J ИШ при этом способе введены, однако выводятся УСА из лепим значительно интенсивнее, чем из лимфатических узлов, ifрж зндслхм!атн-

- IS -

чаевом введении поглоданная доза на все тало при введения ляпооом в б раз меньше, чем яри введении I3II-MCAV

Установлено, что сод влиянием эндолямфатвческого введения 18,5 МБк *3*I-4JCA /поглощенная доза в лимфатическом узле, пораженном опухолевым продессом - 1400 мГрДШк/ достоверно замедляется рост опухоли, увеличивается прирост массы тела животных, средняя продолжительность хлзнж. Так, изменение размера опухоли на Т4 сутки после перевивки к начиная с 5-х суток.после введения РНП Силе достоверно меньше в леченой группа, а прирост массы тела, начиная с 10 суток после начала опыта и до 95 суток бил достоверно больше; Средняя продолжительность жизни леченых животных составила 91,7± 2,3, а в контрольной группе - 67,9^9,2 суток. Тормозящее действие меченых МСА на епухолевый процесс подтверждается и данными морфологических исследований; В регионарных лимфатических узлах с перевивкой опухолью к подвергнутых лечению больше лимфоидцоИ ткани ж меньше деструктивных изменения.

Таким образам, впервые на животных были выполнены исследования с целью обоснования применения зддолнмфатического введения меченых лилосом в МСА в лимнологии сельскохозяйственных животных и человека для диагностики и терапии, а также для оценки* барьерной Функции лимфатических узлов. Обоснована целесообразность использования легло сом и МСА для уазанкых целей, показана возможность использования меченых лилосом и МСА для распознавания способности пораженных лимфатических узлов кроликов и овец накапливать и фиксировать ГНП, Показана возможность целенаправленной коррекции распределения указанных НШ в организме, определены поглощенные дозы, оценено действие меченых МСА на опухолевый процесс, общее состояние животных-опухоленоеителей. Впервые, в том числе к в лиифологкн сельскохозяйственных животных, показаны преимущества новых РНП по сравнению с радиоколловдами. Теоретическая значимость полученных данных заключается в том, что впервые подучены результаты по оценке накопления в лтфатхчеекхх узлах интактных и с патологией частиц размером от 0,004 до 25 мкм в афферентной лим£е, описаны закономерности не только накопления НШ в лимфатических узлах, но и продолжительность фиксации в них, а также выведение радиокуклкдной метки из организма животных кнтакткых и одухолено-сителей. В* доступной литературе аналогичные данные отсутствуют^ Экспериментально обоснована к показана перспективность и практическая значимость нового направления в ветеринарии и клинике -

использование меченых доносом и МСА в длмфологки. Практическая значимость результатов работу в большой степени объясняется возможность» варьирования величин поглощенных доз в лимфатических уа-лри при незначительных уровнях облучения других органов и тканой различных видов домашних животных;

Считав долгом выразить искренно» благодарность доктору медицинских наук Дж.Г.Хачирову за постоянную помощь при выполнении настоящей работы?

ВЫВОДЫ:

I * Общие закономерности биологического поведения меченых ди-посом и UCA в организме интактных животных хараитеризухтся прямой зависимостью накопления в лимфатических ^элах от размера частиц; при патологии лимфатических узлов такая зависимость отсутствует.

2: Печеные лнпосомы в опухолевом регионарно* лимфатическом узле накапливается а больших количествах /74,5*6,0^/ по сравнению о МСА /9,3*1,2?/« однако выводятся быстрее; накопление обоих препаратов в лимфатических узлах с патологией значительной

3. Липосомальяая форма меченого противоопухолевого антибиотика блеомнцетина способствует повышенному вахопдеякю и продолжительности фиксация повдаекных концентраций в опухолевых лимфатических узлах;

4. При зндолимфатическом введении меченых UCA возможно диффе-рекцировать интактные и опухолевые лимфатические узлы, оптимальные сроки - I, 4 ж 7 сутки после введения ПШ.

5. Накопление и продолжительность фиксации ЛШ в рогиоиарних лимфатических узлах передних и задних конечностей овец, данные динамической визуализации идентичны результатам, полученным ва кроликах.

6. Поглощенные дош в пораженных лнмфатичесжжх узлах при ои-долимфатическом введении 1311-липосом в 1019 раз, а при »ведении I3II-MCA в 766 раз больше, чем в критических органах - печелх и, легких; ' *

7. Изменение объема и массы вводимых препаратов цоэмллет существенно повысить накопление ПШ в лимфатических узлах 1-го и It-го порядка, увеличить продолжительность фиксации в пораженных лимфатических узлах, обеспечивает равномерность распределены а лимфатической системе. Предварительное введение дкжодолл обеспечивает двухкратнее увеличение накопления РКП в поражеиадх ла^.ьти-ческах узла* и увеличивает продолжительность его rj*

иа низких уровнях накопления в других органах и тканях, в той числе и критических.'

в;' Предложены, и испытаны способы коррекции биологического поведения препаратов, позволяющие широко варьировать величины поглощенных доз от шишлшх, при введении индикаторных количеств, до терапевтических!

9. Эндолиифагическое введение меченых лшюсом и МСА — перспективное направление в ветеринарии, экспериментальной и клинической лимнологии человека п животных для изучения барьерной функции лимфатических узлов в норме к при патологии, в том числе при опухолях и лучевых повреждениях, для диагностики и транспорта различных лекарственных препаратов?

Опубликованные работы по теме диссертации:

1. Сравнительные данные по кинетике меченых микросфер альбумина при внутривенном и эндоллм$атичвскоп введении; "Радиоизотовная диагностика", Сб.научных трудов. Обнинск, 1982, СХ1~гб

/в соавторстве с Дж'Я*;Хачировым, В.'М.Петриевыч/.

2.' Поседение меченых микросфер альбумина и лшюсом после прямого лшфососудистого введения в лимфатических узлах интактных и о

. опухоль». Депонирована во ШИИМИ ЫЭ СССР, 19ЭЭ, *3, п? 241,*

3. Эндолимфатическоз введение меченых липосом - возможный диагностический тост пря опухоли и воспалении регионарных лимфатических узлов.* "Актуальные вопросы .применения радионуклилных методов исследований в онкологической практике; Сб.научн. трудов Киргизского ШИ онкологии и радиологии, фрувзе, 1983,с.114-120 /в соавторстве о А.Н.£еденковым, Дж.Г.Хачяровым, В.ЮТетриевым, Г. А ¿Поповым/.

4. Использование прямого лиьфосо судас того введения меченых липосом при оценке барьерной функции регионарных лимфатических уэ-лов у кроликов с карциномой Брауна-Пирс. Лурмал "Экспериментальная онкология", Киев,Науковл думка, 1983, 5, 45, с? 73-75* Кинетика *^1-микроофер альбумина сыворотки крови человека при введении их в лимфатические сосуды. Гурнал "Медицинская радиология? 1983, *2, с. 18-23 /в соавторстве с А.Ф.Цыбом, Дж;ГЛа-чировым, В.И.СтригуновыыД

6. Влияние предварительного введения липиодола на фармакокинетику меченых микросфер при »ндолимфатическом их введении /терапевтические и диагностические аспекты/,"Клиническая лимфология",

1-я Всесоюзная конференция 24-25 октяОря, Москва-Подольск, "985, с. 77-78 /в соавторстве С Дж,Г; 1ачировым, А,Н;Деденновым/.

7. Tl*rexperlmentelle KudlophuraHkoklnetlc vor 'I-Iiipoeoneo nach dlrecter intrulymphutischeг Applikation. J. Rudloloe. ci»«no»ticu, 2ь (X'jtH), •», p. 607-615 /в соавторстве с ДдЛ7 Хачировым, В.М.Петриевым, Г.А."Поповым/.

В, Tieretperlmentelle Budlopharmakoklnttlo von eftdolvapüatieoh

124

appliziert«o I-Llpoeoaen xur Dtagnoatlo regloo«r*r Lymphknoten tuneren. J. Hadiolog. Dlugnouttua, 25 (litu), 5, p.615-622/в соавторстве с Дж.Г.Хачировым, В.1Л. Петриевдо, ГГА'.* Поповым/.

Э. Tierexperleentell« KadlopharntikoklnetJ.o endolymphatisch ujtpll-«ierter markierter Albuuln-HlkroBph&rensatir Dlagaoatik. regionärer IijaphkaotcntUBoren. J. Hudlolo«. Diagnostic», 25 <I)Ü4}, 5, р. б25-С2а/в соавторстве с Дд.Т.Хачировым, В,Ы;Петриавым/,

Подписало К печати /Sfijsfiel 4ормат оуиагя л. Оч,листов /

.Тираж /J^o ехэ. Заика

Бесялатжо

, Фотоофсетная лаборатория И5К * Г» ОЛнкасх, пр. Ленива, 62