Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Фармакокинетические свойства и дозиметрические характеристики радиофармпрепаратов на основе сывороточного альбумина человека
ВАК РФ 03.01.01, Радиобиология
Автореферат диссертации по теме "Фармакокинетические свойства и дозиметрические характеристики радиофармпрепаратов на основе сывороточного альбумина человека"
ПЕТРИЕВ Василий Михайлович
ФАРМАКОКИНЕТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И ДОЗИМЕТРИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ РАДИОФАРМПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ СЫВОРОТОЧНОГО АЛЬБУМИНА ЧЕЛОВЕКА
03.01.01 - Радиобиология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук
1 4 ИЮЛ 2011
Обнинск-2011
4851496
Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Медицинский радиологический научный центр» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН ЦЫБ Анатолий Федорович
Официальные оппоненты:
Ведущая организация: Учреждение Российской академии наук «Институт мозга человека им. Н.П.Бехтеревой» РАН-
Защита состоится « октября 2011 года в 11.00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.132.01 при Федеральном государственном бюджетном учреждении «Медицинский радиологический научный центр» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по адресу: 249036, г. Обнинск Калужской области, ул. Королева, 4.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «Медицинский радиологический научный центр» Минздравсоцразвития России.
доктор биологических наук, профессор УЛЬЯН ЕНКО Лилия Николаевна,
доктор биологических наук, профессор ПЕТИН Владислав Георгиевич,
доктор биологических наук КОМАРОВА Людмила Николаевна.
Автореферат разослан «
0*6 2011 г.
Ученый секретарь диссертационного совета
Палыга Г.Ф.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы.
Настоящее исследование направлено на решение актуальной радиобиологической проблемы ядерной медицины - поиску новых радиофармпрепаратов (РФП) для радионуклидной диагностики и терапии социально значимых, в том числе онкологических, заболеваний, радиобиологическому и дозиметрическому сопровождению создания новых РФП.
Актуальность проблемы обусловлена неуклонным ежегодным ростом числа онкологических заболеваний, которые продолжают оставаться в списке лидеров в структуре причин смертности населения промышленно развитых стран. Своевременная и полноценная диагностика этих заболеваний и эффективность их лечения в значительной степени обусловлены применением современных ядерно-медицинских технологий, которые, к сожалению, являются "слабым местом" отечественного здравоохранения. Решение указанных проблем во многом связано с созданием и применением в клинической практике РФП, обладающих как высокой функциональной пригодностью, так и безопасностью в широком смысле этого термина.
Как известно, разработка и создание высокоэффективных РФП носит междисциплинарный характер, но основой всего является выбор радионуклидов с оптимальными ядерно-физическими характеристиками и их носителей, среди которых важное место занимает сывороточный альбумин человека.
РФП на основе сывороточного альбумина человека характеризуются лучшей физиологичностью и технологичностью их получения, возможностью получать наночастицы и микрочастицы с заданными размерами и программируемой скоростью протеолиза их в организме, возможностью инкорпорировать практически любые радионуклиды, прочно удерживать их в составе частиц и высвобождать по мере протеолиза денатурированного белка.
В мировой литературе отсутствуют сведения о системных и комплексных сравнительных исследованиях по разработке и биологическому изучению препаратов на основе сывороточного альбумина человека, меченных радионуклидами диагностического и терапевтического назначения, имеются лишь отдельные сведения [Mayron L.G., Kaplann Е., 1975; Szymendera J., et al., 1977; Hna-towich D.G., Schlegel P., 1981; О' Donnell Р.В., McGinity J.W., 1997; Wang S.J., et al., 1998; Wang Y. F. et al., 2007]. Отсутствие комплексных радиохимических, фармакокинетических и дозиметрических исследований затрудняет выбор оптимальных по составу и функциональным признакам РФП для радионуклидной диагностики и терапии онкологических и неонкологических заболеваний.
Актуальность изучения фармакокинетических свойств и дозиметрических характеристик новых РФП состоит еще и в том, что проведение этих исследований обеспечивает выбор наиболее оптимальных и безопасных препаратов, характеризующихся высокой функциональностью в радионуклидной диагностике и терапии онкологических заболеваний.
В настоящей работе изложены материалы комплексных радиохимических, фармакокинетических и дозиметрических исследований РФП на основе натив-ного альбумина, наноальбумина и микросфер альбумина (МСА), меченных радионуклидами 1311, ш1п, 99mTc, l77Lu, 188Re, 103Pd, в зависимости от условий их получения и физико-химических характеристик.
Цель исследования.
Изучение фармакокинетических и дозиметрических характеристик РФП на основе сывороточного альбумина человека и гамма-, бета-излучающих радионуклидов в зависимости от физико-химических свойств меченых препаратов; выбор оптимальных по функциональным признакам РФП для радионуклидной диагностики и терапии онкологических заболеваний.
Задачи исследования:
1. Изучить закономерности образования комплексных соединений "тТс с нативным альбумином и наноальбумином в зависимости от условий проведения реакции.
2. Провести сравнительные исследования фармакокинетических свойств РФП «99тТс-альбумин» и «99тТс-наноальбумин», оценить их функциональную пригодность для исследования гемодинамических характеристик и сцинтиграфии лимфатических узлов и печени.
3. Изучить особенности фармакокинетики меченых МСА в организме лабораторных животных в зависимости от химической природы радионуклида, дисперсного состава частиц, степени денатурации белка, пространственного распределения радионуклида в частицах и способа их введения в организм.
4. Изучить фармакокинетические свойства препарата «177Lu-MCA», полученного нейтрон-активационным способом.
5. Изучить закономерности инкорпорирования l01Pd в состав МСА и исследовать влияние теплового воздействия и гамма-облучения белка на показатели, характеризующие поведение препарата «103Pd-MCA» в организме лабораторных животных.
6. Изучить особенности фармакокинетики меченых МСА в организме лабораторных животных с экспериментальными моделями легочной патологии (облучение ионизирующим излучением, эмболия легочной артерии, асептическое воспаление и рак легких) после внутривенного введения препаратов.
7. Провести сравнительный анализ фармакокинетики РФП «l03Pd-MCA» в организме интактных мышей и мышей-опухоленосителей после внутримышечного и внутриопухолевого введения, а также оценить уровни накопления этого препарата в опухоли и удержания его опухолевой тканью.
8. Оценить распределение поглощенных доз внутреннего облучения органов и тканей лабораторных животных разными радионуклидами, инкорпорированными в состав МСА.
Научная новизна:
В результате проведенных исследований обоснована проблема необходимости проведения комплексного исследования закономерностей инкорпорирования радионуклидов в молекулы-носители, изучения фармакокинетических свойств и дозиметрических характеристик для создания новых эффективных по функциональным признакам РФП для радионуклидной диагностики и терапии онкологических и неонкологических заболеваний.
1. Разработана технология оригинальных препаратов: 99шТс-наноальбумин, 177Lu-, 166Но-, 103Pd-MCA.
2. Впервые показана возможность получения меченых МСА путем активации стабильных изотопов в составе белковых частиц тепловыми нейтронами. Ней-трон-активационным методом были получены и изучены физико-химические свойства МСА, меченных l52mEu, 177Lu, 186Re, ,66Но.
3. В результате исследования закономерностей введения 103Pd в белковую матрицу микросфер путем ионной сорбции впервые показана способность инкорпорировать палладий и другие ионы металлов в состав альбуминовых частиц и изучено влияние различных факторов (дисперсный состав частиц, степень денатурации белка в результате теплового воздействия и гамма-облучения МСА) на их поведение в организме лабораторных животных.
4. Впервые показано влияние предварительного гамма-облучения легких лабораторных животных на фармакокинетику меченых МСА.
5. Получены приоритетные результаты сравнительных исследований влияния степени денатурации белка, пространственного распределения метки в частицах, химической природы радионуклидов и способов введения меченых препаратов на характер поведения МСА в организме лабораторных животных.
6. В опытах на животных с индуцированными заболеваниями легких и перевивными солидными опухолями дана оценка функциональной пригодности препаратов.
7. Впервые проведена сравнительная оценка поглощенных доз внутреннего облучения органов и тканей лабораторных животных в зависимости от вида радионуклида, инкорпорированного в состав МСА.
Практическая значимость.
В ходе выполнения данного исследования созданы новые РФП, обладающие функциональной пригодностью для радионуклидной диагностики и терапии онкологических и неонкологических заболеваний. По результатам научных исследований наработаны экспериментальные и опытные образцы лиофилизатов (наборов реагентов) к генератору 99W/"mTc и на их основе РФП «99тТс-альбумин», «99шТс-наноальбумин», «99шТс-микросферы альбумина», «177Ьи-микросферы альбумина» и «103Рс1-микросферы альбумина».
Разработаны технологические регламенты на производство двух препаратов: «99тТс-альбумин», «99шТс-микросферы альбумина».
РФП «99тТс-альбумин» прошел доклинические испытания, РФП «99тТс-микросферы альбумина» прошел доклинические и клинические испытания, зарегистрирован в реестре лекарственных средств для медицинского применения и получено разрешение на его .промышленный выпуск (регистрационное удостоверение Минздрава России № 000329/01-2001 от 20.03.2001).
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Фармакокинетические свойства 99тТс-альбумина зависят от технологических условий его синтеза.
2. Результаты фармакокинетики 99тТс-альбумина 99тТс-наноальбумина доказали функциональную пригодность РФП для исследования гемодинамических характеристик, диагностики лимфатических узлов и печени.
3. На фармакокинетику меченых MC А оказывает влияние дисперсный состав частиц, пространственное распределения радионуклида в частицах, степень денатурации белка в результате теплового воздействия, нейтронного и гамма-облучения, химическая природа радионуклида, способ введения в организм.
4. Результаты фармакокинетики меченых МСА в организме лабораторных животных с патологическими состояниями легких: гамма-облучение легких; эмболия легочной артерии и рак легких, доказали эффективность РФП в оценке состояния капиллярного кровотока легких.
5. Поглощенные дозы внутреннего облучения органов и тканей лабораторных животных после внутривенного и внутриопухолевого введения меченых МСА определяются фармакокинетическими и ядерно-физическими характеристиками РФП.
Апробация работы.
Материалы диссертации доложены и обсуждены на 15 всероссийских и международных конференциях, симпозиумах, в том числе - на 9 конференциях в России и на 6 конференциях за рубежом:
1. Первый съезд онкологов стран СНГ (Москва, 1996).
2. 2ICI Second International Conference on Isotopes (Sydney, Australia, 1997).
3. Международный конгресс «ЭНЕРГЕТИКА-3000» (Обнинск, 1998).
4. Всероссийская конференция «50 лет производства и применения изотопов в России» (Обнинск, 1998).
5. The Second Japanese-Russian Seminar on Technetium (Shizuoka, Japan, 1999).
6. International Youth Nuclear Congress 2000 (Slovakia, Bratislava, 2000).
7. Modern problems of radiobiology, radioecology and evolution, International conference dedicated to centenary of N.W.TimofefF-Ressovsky (Dubna, 2000).
8. International Conference on Current Status Medicine and Radiopharmaceuticals Congress of Russian Society of Nuclear Medicine (Obninsk, 2000).
9. Международный Конгресс «Энергетика-3000» (Обнинск, 2002).
10. Всероссийская научно-практическая конференция «Актуальные вопросы ядерной медицины». Школа «Избранные вопросы ядерной медицины» (Дубна, 2004).
11. International Symposium on Technetium (Oarai, Japan, 2005).
12. 15th Radiochemical Conference (Marianske Lazne, Czech Republic, 2006).
13. Annual Congress of the EANM (Athens, Greece, 2006).
14. Шестая Российская конференция по радиохимии «Радиохимия-2009» (Москва, 2009).
15.111 Евразийский Конгресс по медицинской физике и инженерии «Медицинская физика - 2010» (Москва, 2010).
Апробация диссертации состоялась 20 апреля 2011 г. на научной конференции экспериментального радиологического сектора Федерального государственного бюджетного учреждения «Медицинский радиологический научный центр» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, протокол № 259.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 29 научных статей, в том числе 18 опубликовано в отечественных научных журналах, рекомендованных ВАК МОиН РФ для докторских диссертаций, и 9 - в зарубежных журналах. Получен патент Российской Федерации на изобретение RU2359702 «Способ получения меченых радионуклидом микросфер», дата публикации 27.06.2009 г.
Реализация результатов работы. По результатам проведенных исследований подготовлены:
• лабораторные регламенты на производство двух препаратов: «Микросферы альбумина, 99гаТс», «Альбумин, 99тТс»;
• опытно-промышленные регламенты на производство двух субстанций «Микросферы альбумина, 5-10 микрон» и «Микросферы альбумина, 20-40 микрон» - субстанции для получения радиофармпрепаратов «103Рс1-микросферы альбумина, 5-10 микрон» и «103Р(1-микросферы альбумина, 20-40 микрон»;
• стандарты предприятия для контроля качества препаратов «Микросферы альбумина (МСА), 20—40 мкм» и «Микросферы альбумина (МСА), 5-10 мкм» -субстанции для производства РФП «103Pd-MCA, 20-40 мкм» и «103Pd-MCA, 5-10 мкм»;
• проведены доклинические испытания препарата «99щТс-альбумин»;
• проведены доклинические и клинические испытания препарата «99тТс-микросферы альбумина», препарат зарегистрирован в реестре лекарственных средств, а также получено разрешение на его промышленное производство.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 266 страницах компьютерного текста, содержит 55 таблиц и 36 рисунков. Она состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, четырех глав собственных исследований, заключения, выводов. Список цитированной литературы содержит 311 источников.
Личный вклад автора. Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследования, планировании и проведении большинства экспериментов, обработке, анализе и обобщении полученных результатов. В работах, выполненных в соавторстве, вклад автора является определяющим и состоит в непосредственном участии на всех этапах исследования: от генерации идеи, формулировании задач, их экспериментально-теоретической реализации до обсуждения результатов исследований и подготовки научных публикаций и докладов.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Синтез меченых препаратов. Для синтеза препаратов использовали 10% раствор сывороточного альбумин человека для инфузий. Вспомогательные реактивы были приобретены у фирмы «Сигма-Алдрич», Москва. Радионуклиды 99тТс и 188Re получали элюированием с колонок генераторов 99Мо/"тТс и l88W/l88Re производства ФГУП «ГНЦ РФ - Физико-энергетический институт им. А.И.Лейпунского» (г. Обнинск). Радионуклид l03Pd приобретали у ЗАО «Циклотрон», 1311 получали из ФГУП «Филиал научно-исследовательского физико-химического института им. Л.Я.Карпова» (г. Обнинск).
Синтез наноальбумина проводили путем сшивки альбумина глутаровым альдегидом с последующим фильтрованием через мембранный фильтр с размером пор 22 мкм.
Синтез МСА осуществляли эмульсионным методом [Zolle I., et al., 1970; Петриев В.М. и соавт., 1976; Петриев В.М. и соавт., 1977]. Методика была существенно модифицирована. Для этой цели был разработан специальный аппарат, в комплект которого входит блок управления температурой и скоростью вращения мешалки. Метод получения МСА основан на тепловой денатурации белка в оливковом масле. Раствор альбумина вводят по каплям в оливковое масло при постоянном перемешивании. При этом образуется эмульсия раствора альбумина в масле. Эту смесь, не прекращая перемешивания, нагревают. При этом происходит процесс тепловой денатурации альбумина с образованием твердых частиц сферической формы. Размер МСА зависит от скорости перемешивания смеси, концентрации раствора альбумина и температуры предварительного нагрева масла. Для получения МСА с заданными размерами их фракционируют с помощью ультразвуковых микросит. Разработанный метод получения МСА с помощью специального аппарата позволяет получать частицы с любыми заданными диапазонами размеров от 0,5 мкм до 850 мкм и программируемой тепловой денатурацией белка в интервале температуры от 110°С до 300°С. Кроме этого, методика позволяет получать МСА, содержащие любые металлы в виде их солей или оксидов, а также любые химические соединения, в том числе лекарственные препараты, существующие в твердом состоянии [Петриев В.М. и соавт., 1980; Петриев В.М. и соавт., 1981; Петриев В.М. и соавт., 2000; Петриев В.М. и соавт., 2005].
Лиофилизаты (наборы реагентов) на основе альбумина, наноальбумина и микросфер альбумина к генераторному радионуклиду 99тТс получали путем лиофильной сушки раствора смеси реагентов, предварительно замороженного в жидком азоте, в сублиматоре 15-SRC-X производства фирмы "VirTis" (США) [Петрова Г.А., Петриев В.М., и соавт., 2003]. Лиофилизаты являются субстанциями для приготовления РФП «99тТс-альбумин», «99тТс-наноальбумин» и «99тТс-микросферы альбумина». Меченые препараты готовят непосредственно перед проведением исследований, путем введения элюата "Тс во флакон, содержащий ингредиенты, способствующие связыванию технеция с молекулой-носителем.
|03Рскчикросферы альбумина получали методом ионной сорбции хлорида палладии-103 в состав белковых частиц с последующим восстановлением его до оксида палладия [Петриев В.М. и соавт., патент RU2359702,2009; Петриев В.М. и соавт., 2010; Petriev V.M., et al., 2010].
177Lu- и 1б6Но-микросферы альбумина получали методом активации тепловыми нейтронами стабильных изотопов 1?6Lu- и 1б5Но в составе МСА. Облучение проводили в реакторе ВВРц в ФГУП «Филиал научно-исследовательского физико-химического института им. Л.Я.Карпова» [Петриев В.М. и соавт., 1981; Петриев В.М. и соавт., 2005].
Методика проведения биологических исследований.
Изучение фармакокинетики меченых препаратов альбумина было проведено на 883 лабораторных животных, в том числе на 122 кроликах-самцах породы Шиншилла массой 1,5-3,0 кг, 373 белых беспородных крысах-самцах массой 130-250 г и 388 белых беспородных мышах-самцах массой 22-35 г. Экспериментальные животные содержались в условиях лабораторного вивария и получали стандартный рацион и воду без ограничений.
Фармакокинетические свойства меченых препаратов изучали в организме интактных животных и животных с разными патологическими состояниями легких кроликов: асептическим воспалением легких, эмболией легочной артерии, рак легких и после гамма-облучения легкого, а также с перевитой в мышцу бедра мышей карциномой Эрлиха. Эксперименты на животных проводили при разных способах инъекции меченых препаратов: внутривенном, внутриартери-альном, внутримышечном и внутриопухолевом. Экспериментальные заболевания легких моделировали по методикам, изложенным в работах [Хачиров Дж.Г., Петриев В.М, 1978; Петриев В.М. и соавт., 1979].
Радиометрию образцов органов и тканей проводили по фотопику гамма-излучения соответствующего радионуклида в колодезном детекторе NZ-138, с помощью пересчетной установки NC-308 и высоковольтного блока NK-350/A производства фирмы «Гамма» (Венгрия), а также с помощью автоматического гамма-счетчика «Wizard» версии 2480 фирмы PerkinElmer/Wallac (Финляндия). По данным радиометрии рассчитывали содержание меченого препарата в 1 г массы ткани и во всем органе в процентах от введенного количества. Результаты
радиометрии обрабатывали методом оценки средне-квадратичной ошибки средней величины (М ± ш). Достоверность различий результатов оценивали с использованием критерия Стьюдента. Статистически значимыми признавались отличия с р < 0,05.
ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Разработка радиофармпрепаратов «99п1Тс-альбумин», 9тТс-наноальбумин», изучение их радиохимических и фармакокинетических свойств
Полученные результаты в ходе выполнения работы показали, что с целью создания радиофармпрепаратов на основе сывороточного альбумина человека (нативный альбумин, наноальбумин и микросферы) с оптимальными характеристиками по функциональным признакам для радионуклидной диагностики и терапии необходимо проведение комплексных исследований закономерностей связывания радионуклида с молекулой-носителем, изучение фармакокинетических свойств и дозиметрических характеристик.
Для изучения закономерностей образования комплексного соединения 99тТс с нативным альбумином в зависимости от условий проведения реакции были получены экспериментальные образцы лиофилизатов (наборы реагентов), содержащие 10 мг альбумина и разное количество двухвалентного олова (Sn2+) в пределах 15-80 мкг. Метку альбумина радионуклидом проводили путем введения элюата 99шТс, получаемого с колонки генератора 99Мо/99шТс, во флакон, содержащий ингредиенты (альбумин, Sn2+ в виде SnCl2), способствующие связыванию 99тТс с альбумином.
В результате исследований показано, что проведение реакции при pH среды, равной 2,5, уровень связывания 99тТс с альбумином практически не зависит от концентрации Sn2+ в реакционной смеси в пределах 3,75-10 мкг/мл (рис. 1). Причем образование комплексного соединения «99шТс-альбумин» при этих условиях происходит практически мгновенно. Радиохимический выход 99шТс-альбумина составляет около 96% через три минуты после начала проведения реакции и сохраняется на этом уровне в течение 24 ч, что свидетельствует о высокой стабильности РФП в растворе. Увеличение концентрации Sn2+ в реакционной смеси до 15 мкг/мл снижает скорость реакции образования комплекса «99тТс-альбумин» и эффективность связывания 99тТс с альбумином.
Максимальный радиохимический выход меченого препарата составляет около 88% через 30 мин после начала проведения реакции. Дальнейшее повышение концентрации Sn2+ в реакционной смеси до 20 мкг/мл способствует еще большему снижению скорости реакции, эффективности связывания WmTc с альбумином и стабильности комплекса. Снижение скорости реакции и эффективности связывания 99тТс с альбумином при высоких концентрациях Sn2+ в реакционной смеси происходит за счет протекания конкурентной реакции, в
а $11(11) 3,75 мкг/мл ШвлЩ) 7,5 мкг/мл вещ») 3,75 «кг/мл «5п<|1) 7,5 мкг/мл
□ вп<||) 10 мкг/мл ■ 5п(И) 15 мкг/мл ш 5п(11) н> мкг/мл Ш5п(11) 15 мкгЛи
□ впЩ) 20 мкг/мл ■ шмЛи
Рис. 1. Кинетика связывания 99тТс с альбуми- Рис. 2. Кинетика образования " '"'ТсОг в зави-
ном от зависимости концентрации 8п2+ в реак- симости от концентрации Бп2" в реакционной ционной смеси. Концентрация альбумина 2,5 смеси. Концентрация альбумина 2,5 мг/мл; мг/мл; 99тТс - 0,85 10"6 мг/мл. 99тТс - 0,85 10*6 мг/мл, рН 2,5.
результате которой образуется гидролизованный технеций (99тТс02), являющийся радиохимической примесью в препарате «99тТс-альбумин». Радиохимические примеси в препарате «99шТс-альбумин», полученном в реакции с концентрацией 8гГ+ в реакционной смеси в пределах 3,75-10 мкг/мл, не превышают 4-5%, тогда как концентрация Бп2" 15-20 мкг/мл способствует образованию "тТс02 на уровне 10-20% (рис. 2).
Аналогичные закономерности образования комплексных соединений 99тТс происходят с наноальбумином и микросферами альбумина.
Учитывая, что введение 99гаТс в молекулу альбумина, а также воздействие Бп2 на белок может приводить к изменению его физиологических свойств, необходимо проведение фармакокинетических исследований РФП с разными модификациями препарата в организме лабораторных животных.
Поскольку 99шТс-альбумина предназначен для радионуклидного исследования гемодинамических характеристик, поведение его в крови является важнейшей фармакокинетической характеристикой.
В экспериментах на кроликах показано, что ЧЧтТс-альбумин, полученный из лиофилизата, содержащего 15 мкг (соответственно 3,75 мкг/мл в реакционной смеси), имеет наиболее оптимальные фармакокинетические свойства (табл. 1). Он циркулирует в крови в течение 3 ч на уровне около 50% от введенного количества. У 99тТс-альбумина, полученного из лиофилизатов, содержащих 30 и 40 мкг (соответственно 7,5 и 10 мкг/мл в реакционной смеси), накопление активности в крови также было высоким (выше 50%) через 5 мин после внутривенного введения. Однако в последующие сроки меченый препарат интенсивно выводился из кровяного русла и в течение 3 ч содержание его в крови резко снижалось (табл. 1). Получение 99шТс-альбумина из лиофилизата, содержащего 80 мкг (концентрация 20 мкг/мл в реакционной смеси) Бп2+ при-
водит к значительному снижению уровня накопления активности в крови во все сроки наблюдений.
Таблица 1 - Содержание 99мТс-альбумина в крови кроликов после внутривенного введения препарата (в % от введенного количества на всю массу крови).
Время после введения препарата Концентрация Sn2+, при которой получали 99мТс-альбумина, мкг/мл
3,75 7,5 10 20
5 мин 53,0 ± 12,6 62,9 ±2,38 58,2 ±2,25 9,9811,49
1 ч 45,3 ±11,5 38,5 ±3,89 9,92 ± 0,48 8,81 ±2,43
3 ч 51,1 ±0,76 25,5 ± 1,23 4,27 ± 0,03 3,43 ± 0,27
Полученные результаты свидетельствуют о том, что повышение количества олова в составе лиофилизата с 15 до 40 мкг оказывает существенное влияние на фармакокинетические свойства РФП - ускоряет выведение его из кровяного русла. При этом радиохимические свойства 99тТс-альбумина не изменяются с повышением олова в составе лиофилизата в пределах 15-40 мкг (радиохимический выход составляет выше 95%, радиохимические примеси не превышают 5%) и стабильность препарата in vitro сохраняется на высоком уровне в течение 24 ч с момента его приготовления. Ускоренное выведение 99тТс-альбумина, полученного при повышенных концентрациях олова, объясняется изменением физиологических свойств белка.
С учетом полученных результатов комплексных радиохимических и биологических исследований, был выбран лиофилизат с оптимальным составом: флакон емкостью 10 см3 содержал лиофильно высушенную в стерильных условиях смесь альбумина - 10 мг и двухлористого олова - 0,0238 мг (Sn2+- 15 мкг). Разработанный состав лиофилизата позволяет получать РФП «99тТс-альбумин» в течение 10 мин с радиохимическим выходом не менее 95%.
Как было показано, незначительное изменение физиологических свойств альбумина приводит к существенному изменению поведения его в организме. Это явление было подтверждено экспериментальными исследованиями на крысах при изучении фармакокинетических свойств наноальбумина, меченного 99тТс. Разработанный наноальбумин представляет собой сшитый белок со средним размером частиц 26,1 нм.
Сравнительные данные биологического распределения 99шТс-альбумина и 99тТс-наноальбумина в организме крыс после внутривенного введения характеризуются существенными различиями. Содержание активности в крови крыс через 5 мин после инъекции 99тТс-альбумина и 99тТс-наноальбумина отмечается на достаточно высоком уровне (соответственно 12,8 и 28,8% во всем объеме циркулирующей крови от введенного количества). Однако 99тТс-наноальбумин интенсивно выводится из крови и через 24 ч количество его снижается в 64 раза по сравнению с 5 минутным сроком. Напротив, содержание 99тТс-альбумина в
крови существенно не изменяется в течение 6 ч (р > 0,05) и только через 24 ч этот показатель статистически достоверно снижается до 9,4% по сравнению с 6 часовым сроком (р < 0,05).
Интенсивное выведения 99тТс-наноальбумина из крови сопровождается высоким уровнем накопления его в печени (табл. 2). Динамика накопления 99тТс-наноальбумина в 1 г печени характеризуется постепенным ростом активности с 4,17 до 9,51% в течение 1 ч после внутривенной инъекции препарата и остается практически без изменения в интервале наблюдения 1 - 24 ч, а к 48 ч снижается до уровня 4,3%. Напротив, величины накопления 99тТс-альбумина в печени наблюдаются на уровне следовых количеств во все сроки проведения исследования.
Избирательное накопление 99тТс-наноальбумина в печени является результатом захвата наночастиц купферовскими клетками. Полученный результат является положительной характеристикой РФП в плане возможности использования его для получения сцинтиграфического изображения печени.
Таблица 2 - Фармакокинетика и,"Тс-наиоальбумина в организме крыс после внутривенного и подкожного введения препарата (в % от введенного количества на 1 г массы органов, тканей).
№ пп. Наименование органа, ткани Метод введения Время после введения препарата
5 мин 1 ч Зч 24 ч 48 ч
1 Кровь в/венное подкожное Р 2,94±0,67 0,015±0,003 <0,01 0,40±0,03 0,021±0,004 <0,001 0,13±0,02 0,046±0,006 <0,01 0,046±0,004 0,065±0,005 <0,05 0,087±0,014 0,17±0,02 <0,02
2 Щитовидная железа в/венное подкожное Р 0,50±0,09 0,063±0,017 <0,01 0,51 ±0,04 0,076±0,016 < 0,001 0,60±0,04 0,24±0,04 < 0,001 2,46±0,31 0,18±0,02 <0,001 5,97±0,99 1,22±0,21 <0,01
3 Печень в/венное подкожное Р 4,17±0,66 0,032±0,007 <0,001 9,51 ±0,34 0,22±0,04 <0,001 8,39±0,53 1,77±0,30 <0,001 7,68±0,91 1,29±0,17 <0,001 4,30±0,30 0,83±0,18 <0,001
4 Лимфатический узел паховый в/венное подкожное Р 0,66±0,14 5,62±0,89 < 0,002 1,27±0,40 12,3±2,90 <0,01 0,64±0,12 37,4±4,66 < 0,001 0,45±0,07 60,7±13,7 <0,01 0,33±0,10 38,4±7,58 <0,01
В опытах на крысах было показано, что после подкожного введения 99шТс-наноальбумина РФП имеет фармакокинетические особенности в организме, отличающиеся от таковых после внутривенного введения этого же препарата (табл. 2). Результаты биологического распределения РФП показали, что в ранние сроки после подкожного введения 99шТс-наноальбумина из всех исследуемых органов и тканей наибольшее количество активности аккумулируется в паховом лимфатическом узле. Через 5 мин после инъекции 99тТс-наноальбумина накопление активности в лимфатическом узле составляет 5,62% от введенного количества (в пересчете на 1 г массы органа), далее процент накопления активности увеличивается и достигает максимального значения (60,7%) через 24 ч, затем происходит снижение этого показателя до 38,4% через 48 ч. Такая дина-
мика накопления активности в лимфатическом узле объясняется медленной элиминацией "тТс-наноальбумина, депонированного под кожу после инъекции.
Особенностью фармакокинетики 99шТс-наноальбумина в организме крыс при разных способах введения является накопление его в паховом лимфатическом узле, превышающем в 8,5-9,7 раз (в период 5-60 мин) и в 58,8-135 раз (в период 3-48 ч) при подкожном введении по сравнению с внутривенной инъекцией.
Ткань щитовидной железы в течение всего периода наблюдения практически не аккумулировала активность, при исследовании 99тТс-наноальбумина после подкожного введения содержание активности в целом органе составляло на уровне тысячных или сотых долей процента. Это является показателем высокой стабильности меченого препарата in vivo, так как известно, что свободный технеций обладает тропностью к ткани щитовидной железы.
Для оценки функциональной пригодности 99тТс-наноальбумина были рассчитаны коэффициенты дифференциального уровня накопления активности в печени и лимфатическом узле по отношению к другим органам и тканям после внутривенного и подкожного введения меченого препарата (табл. 3).
Таблица 3 - Отношение удельного содержания 99тТс-наноаиьбумина в печени и лимфатическом узле к удельному содержанию активности в других органах и тканях крыс после внутривенного и подкожного введения препарата.
№ пп. Наименование органа, ткани Время после введения препарата
5 мин 1 ч Зч 24 ч 48 ч
1 Печень/кровь Лимфоузел/кровь 1,74±0,58" 403,6±67,4" < 0,001 24,0±0,98 577,8±93,4 <0,001 65,8±6,77 855,3±135,9 < 0,001 182,6±41,7 1008±317 <0,02 55,1±13,3 233,5±42,4 < 0,002
2 Печень/ЩЖ Лимфоузел/ЩЖ 9,15±2,29 108,3±24,6 <0,01 19,3±2,20 223,3±11,9 <0,001 14,1±0,48 157,9±11,6 <0,001 3,34±0,69 357,4±92,1 <0,01 0,80±0,16 32,9±6,05 < 0,002
3 Печень/легкие Лимфоузел/легкие 5,75±1,05 1045±355 <0,02 39,8±2,60 1125±342 <0,05 73,6±5,59 1266±221 < 0,002 138,4±45,2 2029±148 <0,001 54,0±6,32 1508±371 < 0,002
4 Печень/почки Лимфоузел/почки 13,4±3,24 279,2±63,8 <0,02 11,9±0,41 69,2±6,56 <0,001 4,74±0,37 42,8±5,95 < 0,001 1,97±0,43 19,8±6,13 <0,05 1,00±0,05 22,1 ±3,85 < 0,002
5 Печень/селезенка Лимфоузел/ селезенка 2,23±0,03 348,3±81,4 <0,02 2,13±0,40 198,4±62,0 <0,05 1,97±0,16 71,8±13,4 < 0,002 2,43±0,24 177,9±28,0 <0,001 2,21±0,30 144,0±32,3 <0,01
внутривенное введение подкожное введение
Коэффициенты дифференциального уровня накопления 99тТс-наноальбумина в печени по отношению к большинству органов и тканей постепенно увеличиваются и достигают максимального значения в период 3-24 ч после внутривенной инъекции препарата.
Сравнительные данные уровней дифференциального накопления активности в печени и лимфатическом узле по отношению к другим органам и тканям после внутривенного и подкожного введения 99тТс-наноальбумина характеризуют особенности поведения препарата в организме крыс в зависимости от способа его введения. Показано, что дифференциальный уровень накопления 99тТс-наноальбумина в лимфатическом узле в ранние сроки после инъекции препарата на 2-3 порядка выше, чем аналогичный показатель для печени. В последующие сроки эти величины повышаются в течение 24 ч по отношению к большинству органов и тканей. Эти данные свидетельствуют о том, что выведение активности из печени и лимфатического узла осуществляется существенно с меньшей скоростью, чем из других органов и тканей.
Коэффициенты дифференциального уровня характеризуют функциональную ценность РФП «99тТс-наноальбумин» для получения диагностической информации методом сцинтиграфии лимфатических узлов при подкожном введении и печени при внутривенном введении.
Особенности фармакокинетики меченых микросфер альбумина в организме лабораторных животных в зависимости от их физико-химических свойств
Для изучения влияния пространственного распределения радионуклида в микросферы альбумина, дисперсного состава частиц, химической природы радионуклида, денатурации белка в результате теплового воздействия или гамма-облучения, способа инъекции меченого препарата, патологического состояния легких на фармакокинетику в организме интактных животных и живот-ных-опухоленосителей были разработаны и получены следующие препараты МСА:
• |311-МСА диаметром 0,5-2, 0,5-5, 5-10 и 10-20 мкм, с температурой денатурации белка, равной 110, 130, 150°С и выдержкой в течение 1 ч, с поверхностным и объемным распределением радионуклида в частицах;
• 99тТс- и Ш1п-МСА диаметром 0,5-2 и 10-20 мкм с температурой денатурации белка, равной 150°С и выдержкой в течение 1 ч;
• 177Lu-MCA диаметром 10-20 мкм, полученные путем облучения стабильного изотопа 176Lu в составе МСА тепловыми нейтронами с потоком 2'Ю13 н/см'-с в течение 1 ч;
• 103Pd-MCA диаметром 5-10 и 20—40 мкм с объемным распределением радионуклида в частицах, с температурой денатурации белка, равной 136°С, 200°С и выдержкой в течение 2 и 8 ч, а также воздействием гамма-облучения в дозе 0,1 и 1,0 МГр.
Сравнение данных биораспределений |311-МСА, полученных при разных температурах, в организме интактных крыс после внутривенного введения показало, что не выявлено существенного влияния температуры денатурации белка в пределах 110—150°С на фармакокинетические свойства препарата (рис. За).
Максимальный уровень накопления активности в легких меченых МСА, полученных при температуре 110, 130 и 150°С, отмечается через 5 мин после внутривенного введения и статистически достоверных различий при этом не выявлено (р > 0,1-0,25). В последующие сроки количество меченого препарата в легких снижается приблизительно с одинаковой скоростью (р > 0,05-0,1). Выведение активности из легких в течение 1 —48 ч сопровождается закономерным накоплением ее в неблокированной щитовидной железе (ЩЖ). Активность ЩЖ закономерно увеличивается, что свидетельствует о постепенном гидролизе МСА и выведении свободного радиоактивного йода с поверхности частиц (рис. 36).
110 3500
г? чоо
£ 90 u 80 S 70 ] —— "'i-MCAJlO J — "'I-MCAJ30 ^3000 * Эаоо —— га1-МСА_110 | , —— ,3II-MCA 130 р
5 60 й 50 -- 40 s 30 1 —*— "'I-MCAJ50 S2000 =1500 S "1000 —»—''[-МСЛ15П //К
b 20 г ю 3 Z |500
0 10 20 30 40 50 Время после инъекцин препарата, ч а "
0.1 1 10 100 Время после шгьекщш препарата, ч 6
Рис. 3. Динамика накопления и выведения активности из легких (а) и щитовидной железы (б) после внутривенного введения т1-МСА, полученных при 110(1), 130 (2) и 150°С (3).
Анализ сравнительных данных распределения активности в организме крыс после внутривенного введения 1311-МСА с поверхностным и объемным распределением радионуклида в частицах показал, что в течение первого часа исследования заметных различий в уровне накопления активности в легких не выявляется (р < 0,25-0,5), тогда как содержание в легких МСА с объемным распределением радионуклида в частицах в период наблюдений 3 - 24 ч статистически достоверно выше по сравнению с поверхностным распределением активности в частицах (р < 0.02-0,001) (рис. 4а). Выведение активности из легких происходит с периодом биологического полу выведения, равным 1,6 ч, после инъекции Ш1-МСА с поверхностным распределением радионуклида, и 21,1 ч - с объемным распределением радионуклида в частицах. Ускоренное выведение активности из легких, когда радионуклид распределяется на поверхности частиц, сопровождается более интенсивным накоплением активности в неблокированной щитовидной железе, по сравнению с объемным распределением радионуклида в частицах, что позволяет косвенно судить о времени внутрисосудистого рассасывания микросфер альбумина (рис. 46).
Рис. 4. Динамика накопления и выведения активности из легких (а) и щитовидной железы (б) после внутривенного введения 1311-МСА, полученных при 110°С, с поверхностным (1) и объемным (2) распределением радионуклида в частицах.
Детальное изучение влияния степени сшивки белковой матрицы МСА после теплового воздействия и предварительного гамма-облучения на фармакокине-тические свойства после внутримышечного введения препарата мышам было проведено с помощью l03Pd-MCA диаметром 20-40 мкм с объемным распределением радионуклида в частицах.
103Pd-MCA получали методом ионной сорбции l03Pd в белковую матрицу МСА. Для инкорпорирования максимального количества l03Pd в МСА к радиоактивному палладию добавляли стабильный палладий (PdCl2). Для фиксации в пористой структуре МСА палладий восстанавливали до оксида.
В результате исследований показано, что скорость выведения 103Pd из мышечной ткани после внутримышечной инъекции 103Pd-MCA, полученных при 136°С, выше, чем в случае 103Pd-MCA, полученных при 200°С (рис. 5). Длительность теплового воздействия на белок также оказывает влияние на скорость выведения активности из мышцы после внутримышечного введения 103Pd-MCA (рис. 6). Увеличение длительности теплового воздействия на МСА снижает интенсивность выведения активности из мышечной ткани. Это объясняется тем, что МСА, полученные при более низкой температуре и более короткого теплового воздействия, имеют пониженную степень сшивки белка, что увеличивает скорость его протеолиза и тем самым повышает скорость высвобождения 103Pd из состава микросфер.
Наиболее существенное влияние на степень денатурации белка и тем самым снижение скорости выведения активности из мышцы оказывает предварительное гамма-облучение МСА (рис. 7). Из анализа параметров выведения активности из мышечной ткани после инъекции 103Pd-MCA необлученных и предварительно облученных в дозе 0,1 и 1,0 МГр следует, что периоды полу выведения различаются в значительной степени и составляют 1,02 сут, 8,57 сут и 23,6 сут, соответственно. При этом количества 103Pd-MCA в мышце в течение 40 суток
снижаются в 12,6,4,1 и 1,9 раз, соответственно, для необлученных микросфер и облученных в дозе 0,1 и 1,0 МГр.
Рис. 5. Динамика выведения активности из Рис 6. Динамика выведения активности из мышцы бедра после внутримышечного мышцы бедра после внутримышечного введения 1 Рс1-МСА, полученных при введения Рё-МСА, полученных при температурах 136°С и 200°С. температуре 200°С в течение 2 и 8 ч.
100-,
40
- МСА, не облученные (""Рй-МСАЗ)
- МСА, облученные дозой 0,1 МГр ( Pd-MCA_6)
- МСА, облученные дозой 1,0 МГр (iraPd-MCA_7)
10 20 30 Время, сут
40
Рис. 7. Динамика выведения активности из мышцы бедра после внутримышечного введения "l3Pd-MCA, предварительно гамма-облученных в дозах 0,1 и 1,0 МГр.
Воздействие тепловых нейтронов на степень денатурации белка оказывается еще более существенным, чем гамма-облучение. Для изучения этого феномена были разработаны и получены l77Lu-MCA путем активации стабильного l76Lu в составе МСА тепловыми нейтронами с потоком 2 10|3н/см2-с в течение 1 ч. На
рис. 8 представлены кривые выведения активности из легких после внутривенной инъекции |3|1-МСА, полученных тепловой сшивкой белка при 150°С и 177Ьи-МСА, полученных нейтрон-активационным способом. Сравнение параметров выведения активности из легких после инъекции препаратов показало, что 177Ьи-МСА выводятся значительно медленнее по сравнению с |3|1-МСА: биологические периоды полувыведения - 121,5 и 0,84 сут, соответственно.
1Е-3 0,01 0,1 1 ю Время после шгьекшш препарата, сут
Рис. 8. Динамика накопления и выведения активности из легких после внутривенного введения '''[-МСА и l77Lu-MCA с объемным распределением радионуклидов в частицах.
Дисперсный состав является важнейшей характеристикой частиц, оказывающий существенное влияние на фармакокинетические свойства меченых МСА. В связи с этим было проведено изучение фармакокинетики "'i-MCA диаметром 0,5-2, 0,5-5, I0-20 мкм и ЧЧп1Тс-МСА диаметром 0,5-2 и 10-20 мкм в организме интактных крыс после внутривенного введения препаратов.
Результаты исследования показали, что через 5 мин после инъекции "'i-MCA диаметром 0,5-5 и 10-20 мкм величины накопления их в легких существенных различий не имеют и составляют, соответственно, 51,6 и 63,9% в 1 г легочной ткани (р > 0.1), тогда как у Ы1-МСА диаметром 0,5-2 мкм этот показатель составляет 12,4% (р < 0,001). Это свидетельствует о том, что частицы меньше 5 мкм проходят капиллярную сеть легких. Скорость выведения активности из легких закономерно увеличивается с уменьшением размера 13|1-МСА (рис. 9а). Так, например, удельная активность легких в течение 48 ч уменьшается после инъекции Ы1-МСА диаметром 0,5-2 мкм в 103,3 раза, 05-5 мкм - в 95,6 раза и 10-20 - в 12,6 раз. С уменьшением размера частиц растет накопление активности в печени (рис. 96). Аналогичные закономерности распределения активности в легких и печени наблюдаются и после внутривенного введения ВДтТс-МСА диаметром 0,5-2, и 10-20 мкм
Результаты изучения фармакокинетики 13|1-МСА диаметром 0,5-2 и 5-10 мкм после инъекции в бедренную артерию кроликов показали, что все частицы депонируются в мышечной ткани. Накопление 13|1-МСА диаметром 0,5-2 и 5-10 мкм в мышце бедра, в пересчете на 1 г мышечной ткани, через 5 мин после
Рис. 9а. Динамика выведения активности из Рис. 96. Динамика выведения активности из
легких крыс после внутривенного введения печени крыс после внутривенного введения Ш1-МСА с разными размерами, полученных Ш1-МСА с разными размерами, при 150°С. полученных при 150°С.
внутриартериального введения на 2-3 порядка выше, чем в большинстве других органов и тканей. В последующие сроки активность в мышце бедра быстро снижается (рис. 10). Выведение активности из мышцы бедра в течение первых 60 ч происходит более быстрыми темпами после инъекции |3|1-МСА диаметром 0,5-2 мкм по сравнению 13|1-МСА диаметром 5-10 мкм.
I-MCA 0,5-2 мкм) I-MCA 5-10 мкм)
Рис. 10. Динамика выведения активности из мышцы бедра кроликов после инъекции 1311-МСА диаметром 0,5-2 и 5-10 мкм в бедренную артерию.
Для оценки влияния химической природы радионуклида на динамику накопления и выведения активности из легких была изучена фармакокинетика МСА
диаметром 10-20 мкм, меченных 1311, 1П1п и 99тТс, после внутривенного введения препаратов. Результаты исследований показали, что химическая природа радионуклида оказывает влияние на поведение меченых МСА в организме. Выведение активности из легких происходит наиболее интенсивно при инъекции ш1п- и "тТс-МСА (рис. 11). Более интенсивное выведение активности из легких после инъекции 1111п- и 99тТс-МСА связано, по-видимому, с тем, что связь 1П1п и 99тТс с белком менее прочная, по сравнению с 1311. Подтверждением более интенсивной элиминации активности из легких 1П1п- и "тТс-МСА, по сравнению 1311-МСА, является сравнительно быстрое нарастание уровня активности в печени (до 3,55% от введенного количества через 24 ч после инъекции Ш1п-МСА) и в почках (до 9,98% в этот же срок после инъекции 99тТс-МСА), тогда как после инъекции 1311-МСА накопление активности в печени и почках через 24 ч составляло всего 0,23% и 0,27%, соответственно.
Рис. 11. Динамика выведения активности из легких интактных крыс после внутривенного введения 131I-, '"in- и 99мТс-микросфер альбумина, полученных при 150°С.
Для изучения возможности использования меченых МСА в оценке капиллярного кровотока легких в норме и с патологией были изучены фармакокине-тические свойства препарата в организме кроликов с экспериментальными моделями легочной патологии: гамма-облучение легкого, эмболия легочной артерии и рак легкого.
В опытах на кроликах с облученным правым легким гамма-квантами в общей дозе 52,5 Гр показано, что через 24 ч после внутривенного введения 1311-МСА диаметром 10-20 мкм минимальный уровень накопления активности в облученном легком отмечается через 5 сут после облучения и составляет 3,29% от введенного количества меченого препарата (рис. 12). Эта величина в 12,7 раз меньше по сравнению с аналогичным показателем в левом необлученном легком (р< 0,001). Через 30 и 60 сут после облучения величины накопления меченых МСА в облученном легком увеличиваются, соответственно, в 2,52 и 6,23 раз
1 oi-,-,—.—,—.—,—.—,—.—,
а О 5 10 15 20 25
Время после мнъекшш препарата, ч
(р < 0,02), по сравнению с 5-ю сут после облучения, однако в 4,24 (р < 0,002) и 1,88 раз (р < 0,02) ниже по сравнению с аналогичной величиной контрольного легкого. Эти данные свидетельствуют о постепенном восстановлении капиллярного кровотока в левом облученном легком в более поздние сроки после облучения. Через 120 сут и в последующие сроки вплоть до 240 сут после облучения уровень накопления активности в облученном легком изменяется незначительно, и статистически достоверные различия по сравнению с необлу-ченным легким не выявляются (р > 0,25-0,5). Полученные результаты являются свидетельством того, что через 120 сут после облучения капиллярный кровоток в левом облученном легком практически полностью восстанавливается (рис. 12).
1. 60 —■—легкое после гамма-облучения, 52,5 Гр
65 —■—легкое необлученное(контрольное)
50
45 i
•< 40 . ___ / i
и s 35 .—
¡2 30 !
= 25 /
3" 7 20 у
й 15 /
10 У
Г X 5
3 0
0 30 60 90 120 150 180 210 240 270
Время после облучения, сут
Рис. 12. Накопление 1-МСА в легком после гамма-облучения дозой 52,5 Гр.
Изучение распределения 1311-МСА диаметром 10-20 мкм в организме кроликов с эмболией легочной артерии показало, что уровень накопления активности в непораженных участках легких через 1, 3 и 5 сут после получения модели патологического состояния изменяется незначительно и составляет 11,0-18,3% в 1 г ткани от введенного количества препарата (р > 0,05) (табл. 4). Накопление активности в пораженных участках легких регистрируется на уровне следовых количеств и не зависит от срока получения эмболии легочной артерии. Удельная активность пораженных участков легких в 524-704 раза ниже, чем непораженной ткани легкого (Р< 0,001).
Таблица 4 - Результаты распределения Ш1-МСА в легких кроликов с экспериментальной эмболией легочной артерии через 3 ч после внутривенного введения препарата (в % от введенного количества на 1 г массы органов и тканей).
№ пп. Орган, ткань Контроль Время после воспроизведения модели, сут.
1 3 5
1 Легкие: здоровый участок 4,38±0,64 11,01±2,03 11,16±2,03 18,32±2,73
2 Легкие: пораженный участок - 0,021 ±0,003 0,017±0,004 0,026±0,005
Результаты изучения распределения |3,1-МСА диаметром 10-20 мкм в организме кроликов с экспериментальным раком показали, что удельная активность непораженных опухолевым процессом участков легочной ткани кроликов с раком легких практически не изменяется в течение 24 ч после внутривенной инъекции препарата (р > 0,1), в то время как удельная активность легких контрольных кроликов существенно снижается в течение 24 часов с 6,58 % до 1,89 % (р < 0,05) (табл. 5). Неизменный уровень активности в непораженных участках свидетельствует о нарушении протеолитической функции легких, пораженных опухолевым процессом. Напротив, в здоровых легких контрольной группы кроликов происходит активный протеолиз МСА с элиминацией активности из этого органа.
Таблица 5 - Динамика распределения активности в легких кроликов с экспериментальным раком легкого после внутривенного введении меченых МСА диаметром 10-20 мкм (в % от введенного количества на 1 г массы ткани).
№ пп. Орган и ткань Время после введения препарата
1 ч Зч 24 ч
1 Легкие, здоровый участок 4,02±0,71* 6,58±0,65** р > 0,05 5,66±1,49 4,38±0,64 р > 0,5 6,42±0,88 1,89±0,10 р < 0,01
2 Легкое, участок с опухолью 1,63±0,40 0,92±0,18 1,07±0,26
* Величины удельной активности органов и тканей кроликов с раком легких. ** Величины удельной активности органов и тканей контрольных кроликов.
При сопоставлении величин удельной активности пораженной легочной ткани было установлено, что в опухолевом очаге этот показатель через 3 ч после инъекции |3|1-МСА составляет 0,92±0,18% от введенного количества, тогда как при экспериментальной эмболии легочной артерии аналогичная величина составляет 0,017±0,004%. Полученные результаты свидетельствуют о том, что нарушение капиллярного кровотока участков легких, пораженных опухолевым процессом, происходит в меньшей степени, чем при эмболии легочной артерии.
В результате экспериментальных исследований установлено, что меченые микросферы альбумина диаметром 10-20 мкм являются эффективным радиофармпрепаратом для определения с высокой точностью степени нарушения капиллярного кровотока в пораженных участках легких с различными патологическими состояниями этого органа.
Для изучения влияния патологического состояния ткани на закономерности протеолиза и снижения относительной активности в месте ее локализации были проведены сравнительные исследования фармакокинетики 103Рс1-МСА диаметром 5-10 мкм и 20-40 мкм в организме интактных мышей и мышей с опухолью (карцинома Эрлиха), соответственно, при внутримышечном и внутриопухоле-вом введении меченых препаратов.
Сравнительный анализ данных активности в мышце показал, что уровни содержания 103Рс1 в течение первых 3 ч после внутримышечного введения |0,Рс1-МСА диаметром 5-10 и 20-40 мкм статистически достоверно не различаются (р > 0,25-0,05) (рис 13а). В последующие сроки наблюдений отмечается статистически достоверное снижение активности в мышце бедра, причем, наиболее заметное снижение наблюдается для |0,Рс1-МСА диаметром 5-10 мкм (р < 0,02).
б
Рис. 13. Сравнительные данные уровней накопления l<bPd в мышце (а) и почках (б) после внутримышечного введения ",3Pd-MCA диаметром 5-10 и 20^10 мкм.
Эта тенденция сохраняется до конца срока наблюдений. Через 10 сут содержание l03Pd в мышце составляет 24,9% при инъекции l0'Pd-MCA диаметром 5-10 мкм и 61,6% при инъекции l03Pd-MCA диаметром 5-10 мкм (р < 0,001), через 20 сут - соответственно, 10,5% и 16,3% (р < 0,021). Полученные данные свидетельствуют о том, что элиминация l03Pd из МСА 5-10 мкм протекает интенсивнее, чем из МСА диаметром 20-40 мкм. Это связано, по-видимому, с наиболее высокой скоростью протеолиза денатурированного белка МСА меньших размеров за счет наибольшей удельной поверхности частиц.
Снижение уровня l03Pd в мышце сопровождается повышенным накоплением активности в почках. В течение первых 3 часов относительное содержание активности в почках отмечается на уровне следовых количеств, так как в этот период практически весь l03Pd локализован в мышечной ткани (рис. 13а и 136). В более поздние сроки наблюдений активность в почках постепенно увеличивается, что связано с постепенных рассасыванием МСА в мышце и выделением не связанного 103Pd. Причем, при введении ,03Pd-MCA диаметром 5-10 мкм накопление активности в почках происходит более быстрыми темпами, чем при введении l03Pd-MCA диаметром 20-40 мкм.
В результате исследований показано, что в течение первых 24 ч W3Pd-MCA диаметром 5-10 мкм и 20-40 мкм удерживаются в мышце и опухоли практически на одном уровне и составляют около 90% от введенного количества (р>0,25) (рис. 14а и 146). В последующие сроки уровень активности продолжает сни-
жаться в мышце и опухоли как в случае с ln,Pd-MCA диаметром 5-10 мкм, так и 20^-0 мкм, при этом наиболее заметное снижение относительной активности отмечается из мышечной ткани для микросфер меньших размеров. Выведение 1<HPd-MCA из мышечной ткани происходит более быстрыми темпами, чем из опухолевой ткани. l01Pd-MCA диаметром 5-10 мкм выводятся интенсивнее из мышечной ткани, чем lwPd-MCA диаметром 20-40 мкм. Это приводит к достоверным различиям в величинах содержания в мышце меченых МСА диаметром 5-10 мкм через 3 сут (р < 0,001), тогда как для 10,Pd-MCA диаметром 20-40 мкм статистически достоверные различия в этих величинах выявляются только через 10 сут после инъекции препарата. Такая же тенденция сохраняется до 20 сут. Более интенсивная элиминация активности из мышечной ткани в случае 101Pd-lVlCA диаметром 5-10 мкм по сравнению с '01Pd-MCA 20-40 мкм объясняется тем, что более мелкие МСА имеют большую удельную поверхность, а значит и биодеградация их происходит интенсивнее, чем более крупных частиц. Выведение l01Pd из мышечной и опухолевой ткани находится в полном соответствии с закономерностями накопления активности в почках. Чем интенсивнее выводится l03Pd из мышцы и опухоли, тем выше накопление его в почках, что свидетельствует о наличии четкой корреляции между выведением 101 Pd из мышечной и опухолевой ткани и накоплением его в почках.
Рис. 14. Накопление активности в опухоли после внутриопухолевого введения Рс)-МСА диаметром 5-10 мкм (а) и 20—40 мкм (б).
Установлено, что размер |0^-МСА не оказывает существенного влияния на скорость выведения активности из опухолевой ткани (рис. 15), тогда как в мышечной ткани размеры частиц влияют на этот процесс. Это явление, очевидно, объясняется более слабым кровотоком и, соответственно, низкой интенсивностью метаболических процессов в центре опухоли по сравнению с мышечной тканью.
Результаты сравнительных исследований фармакокинетики в организме мы-шей-опухоленосителей 1П^-МСА, с инкорпорированным радионуклидом по всему объему частиц, и 188Яе-МСА с распределением радионуклида на поверх-
ности частиц показали, что l88Re выводится из опухоли интенсивнее, по сравнению с W3Pd (рис. 16). Эти данные свидетельствуют о том, что радиоактивная метка, связанная с поверхностью частиц, элиминируется из опухоли сравнительно быстро в результате гидролиза связи радионуклида с белком, а также в результате протеолиза поверхностного слоя МСА.
j.120
g 100 е
1 80
1 40 I 20
-
0,08 0,45 1 1 5 10 20
Время, С)т.
■ 103Р(1-МСА 5-10 мкм ■ ЮЗРй-МСА 20-40 мкм
Рис. 15. Сравнительные данные уровня накопления 103Рс1 в опухоли после внутриопухолевого введения |(ъРс1-МСА диаметром 5-10 и 20-40 мкм (в % от введенного количества).
100-, 90-=- 80
| 70-) « 60
1 50 I 40 « 30
I 20
? 10
о
* о
Pd-MCA 5-10 мкм "3Pd-MCA 20-40 мкм "*Re-MCA 10-20 мкм
1 2 3
Время после инъекции препарата, сут
Рис.16. Сравнительные данные уровня накопления Р(1-МСА и Яе-МСА в опухоли после внутриопухолевого введения.
Дозиметрические характеристики меченых микросфер альбумина
В процессе разработки и биологических испытаний новых диагностических и терапевтических радиофармпрепаратов в первую очередь необходимы сведения о создаваемых ими поглощенных дозах в опухоли, в органах, тканях и во всем организме. Это важно с точки зрения безопасности РФП.
Средние поглощенные дозы внутреннего облучения всего тела и некоторых органов, создаваемые препаратами, меченными диагностическими радионуклидами, такими, как 99тТс (Т1/2= 6 ч),п3т1п (Т,/2= 1,73 ч) и 1231 (Т1/2= 13 ч), |3|1 (Т1/2= 8,04 сут), представлены в табл. 6.
Из данных таблицы видно, что поглощенные дозы во всем организме и органах, создаваемые 1311, на порядок выше по сравнению с 99mTc, "3mIn и 1231. Из перечисленных в табл. 6 органов, в легких формируется наиболее высокая поглощенная доза, в остальных органах дозы сравнительно невелики. Это связано, с тем, что в легких накапливается до 70-90% меченых МСА. Из радионуклидов 99тТс, "3m(n и 1231, наименьшая поглощенная доза в легких создается 99шТс.
Таблица 6 - Средние поглощенные дозы в организме и некоторых органов крыс после однократного внутривенного ведения меченых МСА.
№ пп. Наименование препарата Средние поглощенные дозы вш /трспнего облучения, мГр/МБк
Все тело Легкие Щитовидная железа Печень Селезенка Тонкая кишка
1 WmTc-MCA 0,54 20,0 2,00 4,05 2,97 3,51
2 "imIn-MCA 1,11 83,7 1,35 0,49 0,38 0,81
3 '"I-MCA 2,78 162,0 9,45 2,78 2,24 2,75
4 IJ1I-MCA 55,8 2214,0 220,3 25,4 22,1 27,0
Погрешность в величинах средних поглощенных доз не превышала 25%
Патологическое состояние легких не оказывает существенного влияния на формирование поглощенной дозы внутреннего облучения. Так, например, при однократном введении |2Э1-МСА крысам с асептическим воспалением легких средняя поглощенная доза в этом органе составляет 2,83 мГр/МБк, против 2,78 мГр/МБк в легких здоровых животных.
Формирование поглощенной дозы в опухоли практически заканчивается через 15-20 суток после внутриопухолевого введения '03Рс1-МСА и составляет 120 Гр/ГБк (рис. 17). В прилегающей к опухоли мышце бедра экспериментальных животных через 15 дней после введения шзРс1-МСА накопленная поглощенная доза оказалась в 15 раз меньше, чем доза облучения опухоли, а в критическом органе (почки) накопленная доза облучения в 20 раз меньше поглощенной дозы в опухоли.
При однократном введении 103Р£)-МСА в центр опухоли распределения доз внутреннего облучения имеют большую степень неравномерности по объему опухоли. Для получения более равномерного распределения дозы внутри опухоли необходимо вводить препарат в несколько точек опухоли. Расчеты показали, что введение 103Рс1-МСА в 10 точек создает однородное распределение поглощенной дозы по всему объему опухоли.
Таким образом, в результате выполненных исследований показано, что при разработке эффективных радиофармпрепаратов, предназначенных для радионуклидной диагностики и терапии онкологических и неонкологических
заболеваний, необходимо использовать комплексный подход, включающий изучение фармакокинетических свойств и дозиметрических характеристик. Следуя этому принципу, решена проблема создания ряда эффективных радиофармпрепаратов на основе сывороточного альбумина человека.
Время, суг
Рис. 17. Поглощенные дозы в организме мышей с карциномой Эрлиха после внутриопухолевого введения l03Pd-MCA диаметром 20-40 мкм.
В результате экспериментальных исследований разработаны лиофилизаты с оптимальными составами для получения радиофармпрепаратов на основе генераторного радионуклида Тс в условиях клиники непосредственно перед инъекцией пациенту. 99шТс-альбумина прошел доклинические испытания, 99тТс-микросферы альбумина прошел доклинические и клинические испытания, и зарегистрирован в реестре лекарственных средств.
ВЫВОДЫ
1. Разработана и оптимизирована технология получения РФП «99шТс-альбу-мин» и «99шТс-наноальбумин». Показано, что синтезированные РФП обладают высоким радиохимическим выходом (не менее 95%) и стабильностью in vivo, что подтверждено результатами изучения фармакокинетики РФП в организме лабораторных животных.
2. Экспериментально доказана функциональная пригодность РФП. Показано, что до
50% 99тТс-альбумина от введенного количества в течение трех часов после внутривенной инъекции циркулирует в крови, что позволяет использовать РФП для изучения гемодинамических характеристик; 99шТс-наноальбумин при подкожном введении избирательно накапливается в лимфатичеких узлах, при внутривенном введении - в печени, что позволяет использовать его для сцин-тиграфии этих органов.
3. В экспериментальных исследованиях показано, что такие факторы: как дисперсный состав частиц, степень денатурации белка, пространственное распределения радионуклида в частицах, способ введения РФП, химическая природа радионуклида оказывают заметное влияние на фармакокинетику меченых МСА в организме лабораторных животных.
4. 177Lu-MCA, полученные нейтрон-активационным способом, удерживаются в легких крыс на уровне 50% от введенного количества в течение 20 суток после внутривенного введения.
5. Изучение закономерностей инкорпорирования l03Pd в белковую матрицу МСА, исследования влияния температуры денатурации белка и воздействия гамма-облучения на характер поведения 103Pd-MCA в организме лабораторных животных, явилось результатом создания оптимизированной технологии получения нового РФП «lc3Pd-MCA» с оптимальными характеристиками для лечения опухолей.
6. Фармакокинетика меченых МСА в организме кроликов после гамма-облучения легких, индуцированной эмболией легочной артерии и раком легких, показала функциональную пригодность препарата в оценке состояния капиллярного кровотока легких с различными патологическими состояниями.
7. После внутриопухолевого введения мышам-опухоленосителям w3Pd-MCA установлен факт длительного удержания меченого препарата опухолевой тканью.
8. В результате оценки поглощенных доз внутреннего облучения показано, что при внутриопухолевом введении нового терапевтического радиофармпрепарата l03Pd-MCA позволяет осуществлять избирательное облучение опухоли (в 15 раз больше) по сравнению с прилегающими тканями и критическими органами. После внутривенного введения диагностических РФП ("3mIn-, |231- и 99тТс-МСА) наиболее низкие поглощенные дозы внутреннего облучения легких формируются от "тТс-МСА.
СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ
ДИССЕРТАЦИИ
1. Хачиров Дж.Г., Петриев В.М. Радиоизотопная диагностика пневмонии с помощью меченых микросфер альбумина сыворотки человеческой крови (экспериментальное исследование) // Медицинская радиология. - 1978. - Т. 23.- №8. С. 28-34.
2. Петриев В.М., Степченков В.И., Хачиров Дж.Г. Физические и некоторые радиохимические свойства микросфер альбумина, используемых в радиоизотопной диагностике // 1зо1орепргах15. - 1979. - V. 15. - N0. 5. - Р. 22-25.
29
3. Петриев В.М., Хачиров Дж.Г. Диагностика экспериментального рака легких с помощью меченых микросфер альбумина // Медицинская радиология. -
1979. - Т. 24. - № 4. - С. 29-34.
4. Петриев В.М., Хачиров Дж.Г., Кирьяков М.А. Радиоизотопная диагностика эмболии легочной артерии с помощью меченых микросфер альбумина в эксперименте//Медицинская радиология.- 1979.- Т. 24.-№ 8.-С. 31-35.
5. Dz.G.Chacirov, V.M.Petriev Die vergleichende Beurteilung der markierten Hu-manserumalbumin-Praparate binsichtlich ihrer Dekorporirung (Experimenta-luntersuchung) // Radiobiol. Radiother. - 1980. - V.21. -№ 4. -C. 537-543.
6. Петриев B.M., Степченков В.И. Нейтрон-активационный способ получения меченых микросфер альбумина // Isotopenpraxis. - 1980. - V. 16. -№ 6. - Р. 202-203.
7. Петриев В.М., Степченков В.И., Хачиров Дж.Г. Физико-химические свойства меченых микросфер альбумина, получаемых активацией нейтронами // Isotopenpraxis. - 1981. - V. 17. -№ 8/9. - Р. 315-317.
8. Петриев В.М., Степаненко В.Ф. Поглощенные дозы в организме и некоторых органах животных при введении меченых микросфер альбумина // Медицинская радиология. - 1981. - Т. 26. -№ 9.- С. 60-61.
9. Цыб А.Ф., Хачиров Дж.Г., Стригунов В.И., Испенкова Л.И., Петриев В.М. Кинетика |311-микросфер альбумина сыворотки крови человека при их введении в лимфатические сосуды // Медицинская радиология. - 1983.-Т. 28,-№2.-С. 18-24.
10. Chacirov Dz.G., Ispenkova L.I., Petriev V.M. Tierexperimentelle Radiopharma-kokinetik endolymphatisch applizierter markieter Albumin-Mikrospharen zur Diagnostik regionärer Lymphknotentumoren. 3. Mitteilung // Radiology Diagnostic. - 1984. - V. 25. - No. 5. - P. 623-628.
11. Хачиров Дж.Г., Файзиев И., Испенкова Л.И., Петриев В.М. Изучение распределения ударного объема сердца в организме собак со спонтанным пародонтозом с помощью |251-микросфер альбумина // Стоматология. - 1986. -Т. 65. -№ 4. - С. 11-13.
12. Таиров У.Т., Деденков А.Н., Петриев В.М. Исследование местного капиллярного кровотока с помощью меченых микросфер альбумина при остеотомии верхней челюсти (экспериментальное исследование) П Медицинская радиология. - 1989. - Т. 34. - № 3. - С. 65-69.
13. Дроздовский Б.Я., Разиев P.A., Гончарова А.Я., Деденков А.Н., Бродский P.A., Петриев В.М. Поведение 1251-микросфер сывороточного альбумина в организме кроликов при селективном введении препаратов в печеночную артерию//Медицинская радиология. - 1990.-Т. 35.-№ 11.-С. 26-29.
14. Дроздовский Б.Я., Петриев В.М, Разиев P.A., Гончарова А.Я. Внутриарте-риальная селективная терапия цитостатиками и радиофармпрепаратами при злокачественных новообразованиях (обзор) // Вопросы онкологии. - 1992. -Т. 38.-№ 7-С. 771-777.
15. Петрова Г.П., Петриев В.М., Скворцов В.Г. Короткоживущие радионуклиды в экспериментальной ядерной медицине и биологических исследованиях // Ядерная энергетика. - 2000. - № 4. - С. 70-75.
16. Петриев В.М., Ганжа Е.Г., Рыжикова Т.П. Получение микросфер альбумина, содержащих стабильный рений, для моделирования радиоактивных и нерадиоактивных аэрозолей // Ядерная энергетика. - 2000. -№ 4. - С. 76-79.
17. Петрова Г.А., Петриев В.М., Скворцов В.Г. Изучение фармакокинетики 99мТс-альбумина крови человека в организме лабораторных животных И Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. -2003. -№3.-С. 30-34.
18. Петриев В.М., Скворцов В.Г., Смахтин J1.A., Рыжикова Т.П. Ней-трон-активационный способ получения 1б6Но-микросфер альбумина - потенциального радиофармпрепарата для лечения онкологических заболеваний // Радиохимия. - 2005. - Т. 47. - № 3, - С. 274-277
19. Петриев В.М., Скворцов В.Г., Смахтин Л.А., Шутова И.Н. Контроль радио-нуклидных примесей в |6бНо-микросферах альбумина, получаемых активацией тепловыми нейтронами // Радиохимия. - 2005. - Т. 47, № 3. - С. 278-280
20. Petriev V.M., Skvortsov V.G., Smakhtin L.A., Ryzhikova T.P. Neutron Activation Preparation of l66Ho-Albumin Microspheres as a Promising Radiopharmaceutical for Tumor Therapy // Radiochemistiy. - 2005. - V. 47. - No. 3. - P. 301-304.
21. Petriev V.M., Skvortsov V.G., Smakhtin L.A., Shutova I. N. Monitoring of Radionuclide Impurities in 166Ho-Albumin Microspheres Prepared by Neutron Activation with Thermal Neutrons // Radiochemistry. - 2005. - V. 47. - No. 3. -P. 305-307.
22. Петриев B.M., Орлов М.Ю. Радионуклидные примеси в |66Но-микросферах альбумина, образующиеся при облучении тепловыми нейтронами // Ядерная энергетика. - 2006. - № 3. - С. 97-104.
23. Петриев В.М., Подгородниченко В.К., Рыжикова Т.П., Демидова Н.А., Тарасова Т.А., Сморызанова О.А. Комплексообразующая способность 188-рения с микросферами альбумина крови человека // Труды регионального конкурса научных проектов в области естественных наук, КНЦ АКО, РФФИ, Калуга. - 2007. - Вып. 12. - С. 195-204.
24. Петриев В.М., Закономерности образования комплексного соединения 188Re с микросферами альбумина крови человека // Радиохимия. - 2009. - Т. 51. -№5.-С. 446-451.
25. Petriev V. М., Regular trends in complexation of l88Re with human blood albumin microspheres // Radiochemistry. - 2009. - V. 51. -No. 5 - P. 510-516.
26. Петриев B.M., Ширяев В.К., Смахтин Л.А., Скворцов В.Г. Разработка метода получения 10^-микросфер альбумина крови человека - потенциального радиофармпрепарата для лечения злокачественных опухолей. Радиохимия. -2010.-Т. 52.-№2.-С. 177-180.
27. Petriev V.M., Shiryaev V.K., Smakhtin L.A., Skvortsov V.G. Development of a Procedure for Preparing 103Pd-Microspheres of Human Blood Albumin, a Potential Radiopharmaceutical for Treatment of Malignant Tumors // Radiochemistry. -2010. - V. 52. - No. 2. - P. 207-211.
28. Скворцов В.Г., Степаненко В.Ф., Петриев В.М., Орлов М.Ю, Крюкова И.Г., Соколов В.А., Борышева Н.Б., Ширяева В.К., Орленко С.П., Хайлов A.M., Цыб А.Ф. Фармакокинетические и дозиметрические характеристики нового радиофармпрепарата '"^-микросферы альбумина//Радиационная биология Радиоэкология. - 2010. - Т. 50. -№ 6. - С. 703-711.
29. Степаненко В.Ф., Петриев В.М., Орлов М.Ю., Крюкова И.Г., Соколов В.А., Цыб А.Ф., Скворцов В.Г., Дозы внутреннего облучения организма в экспериментальных исследованиях нового препарата на основе l03Pd и микросфер альбумина для радионуклидной терапии // Труды регионального конкурса научных проектов в области естественных наук, КНЦ АКО, РФФИ, Калуга. -2010.-Вып. 15.-С. 171-180.
Заказ № 1443. Тираж 100. Объём 2 п.л. Формат 60x84 '/|6. Печать офсетная.
Отпечатано в МП «Обнинская типография» 249035 Калужская обл., г. Обнинск, ул. Комарова, 6.
Содержание диссертации, доктора биологических наук, Петриев, Василий Михайлович
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1. МЕТОДЫ ПОЛУЧЕНИЯ, ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ И МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ РАДИОФАРМПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ МИКРОЧАСТИЦ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
1.1 Радиофармпрепараты на основе микросфер из стекла, полимеров и ион-обменных смол для лечения опухолевых заболеваний.
1.2 Радиофармпрепараты на основе альбумина крови человека для радионуклидной диагностики различных заболеваний.
1.3 Характеристики меченых микросфер для внутритканевой радионуклидной терапии злокачественных опухолей.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1 Методика получения лиофилизатов на основе нативного альбумина, наноальбумина и радиофармпрепаратов «99тТс-альбумин» и «99тТс-наноальбумин».
2.2 Методика изучения фармакокинетики 99шТс-альбумина и 99тТс-наноальбумина в организме лабораторных животных.
2.3 Методы получения и метки микросфер альбумина радионуклидами 1311,99тТси1И1п.
2.4 Моделирование экспериментальных опухолей и патологических состояний легких подопытных животных.
2.5 Методика изучения фармакокинетики микросфер альбумина, меченных разными радионуклидами в организме лабораторных животных
ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА РАДИФАРМПРЕПАРАТОВ «99шТс-АЛЬБУМИН», «99тТс-НАНОАЛЬБУМИН», ИЗУЧЕНИЕ ИХ РАДИОХИМИЧЕСКИХ И ФАРМАКОКИНЕТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ
3.1 Разработка технологии получения набора реагентов и радиофармпрепарата «99тТс-альбумин», изучение его радиохимических свойств.
3.2 Результаты изучения фармакокинетики 99тТс-альбумина в организме лабораторных животных и оценка функциональной пригодности его для изучения гемодинамических характеристик.
3.3 Разработка способа получения набора реагентов и радиофармпрепарата «99тТс-наноальбумин», изучение биологического поведения его в организме крыс.
ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА РАДИОФАРМПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ МИКРОСФЕР АЛЬБУМИНА КРОВИ ЧЕЛОВЕКА, ИЗУЧЕНИЕ ИХ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ И РАДИОХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ.
4.1 Способ получения немеченых микросфер альбумина с разным дисперсным составом частиц.
4.2 Нейтрон-активационный способ получения микросфер альбумина, меченных 5бМп, 152шЕи, 177Ьи, 198 Аи, 18б11е51б6Но, и их физико-химические свойства.
4.3 Результаты изучения закономерностей связывания ,88Ке с микросферами альбумина диаметром 10-20 мкм.
4.4 Разработка способа получения 103Рс1-микросфер альбумина.
ГЛАВА 5. РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗУЧЕНИЯ ФАРАМАКОКИНЕТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МЕЧЕНЫХ МИКРОСФЕР АЛЬБУМИНА В ОРГАНИЗМЕ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ.
5.1. Результаты изучения влияния физико-химических и радиохими- • ческих характеристик меченых микросфер альбумина на фарамакокинетические свойства их в организме крыс.
5.1.1 Результаты изучения влияния температуры денатурации белка на поведение меченых микросфер альбумина в организме лабораторных животных.
5.1.2 Результаты изучения влияния пространственного распределения, метки.в частицах на фармакокинетические свойства меченых микросфер альбумина.!.;.!.:.
5.1.3 Результаты сравнительных исследований фармакокинетики меченых микросфер альбумина диаметром 0,5-2, 0,5-5 и 10-20 мкм в '.организме, крыс .;.
5.1.4 Результаты сравнительных исследований фармакокинетикиМСА, : меченных радионуклидами131!', 99тТс и ш1п в организме кр»ыс .:
5:2' Результаты?изучения:распределения-меченых микросфергальбу- , , мина диаметром 0^5—2 и 5—10 мкм: в организме кроликов после ' внутриартериального введения препаратов.
5.3 Результаты изучения фармакокинетики меченых микросфер аль- . бумина в организме кроликовое экспериментальными моделями; . некоторых патологических состояний легких
5.3.1 Результаты изучения фармакокинетических характеристик мече-• ных микросфер альбумина в организме крыс с асептическим воспалением легких.:.„.
5.3:2: Результаты изучения фармакокинетических характеристик, мече-; ных микросфер альбумина в организме кроликов с эмболией-ле- \ точной; артерии^".'.'.170'
5:3.3: Результаты.изучения распределения-меченых микросфер альбумина в организме кроликов с экспериментальным раком: легких . 1:
5.4 Особенности кинетики распределения меченых микросфер альбу-: . мина в организме:кроликов после гамма-облучения легких
5.5 Особенности кинетики распределения Ьи-микросфер альбумина, полученных в реакторе активацией нейтронами, в организме интактных крыс:.••••••.
5.6 Результаты изучения фармакокинетики: Ые-микросфер альбумина в организме мышей-опухоленосителей после внутриопухолевого введения препарата.
5.7 Результаты изучения фармакокинетики 103Рс1-микросфер альбумина в организме интактных мышей и мышей с карциномой Эрлиха
ГЛАВА 6. ДОЗИМЕТРИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ РАДИОФАРМПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ МИКРОСФЕР АЛЬБУМИНА.
Введение Диссертация по биологии, на тему "Фармакокинетические свойства и дозиметрические характеристики радиофармпрепаратов на основе сывороточного альбумина человека"
Актуальность исследования
В связи с тем, что онкологические заболевания продолжают лидировать в структуре причин смертности населения промышленно-развитых стран и, таким образом, могут быть по праву отнесены к категории наиболее значимых заболеваний с медицинской, экономической и социальной точек зрения, разработка методов диагностики и лечения онкологических заболеваний является актуальной задачей ядерной медицины.
В отличие от других известных и хорошо развитых в настоящее время методов диагностики различных заболеваний (например, рентгеновская, рентгеновская компьютерная томография, ЯМР-томография, ультразвуковая) радионуклидная диагностика позволяет обеспечивать функциональные исследования большинства органов, тканей и систем человека с высокой точностью и достоверностью получаемой информации. В сочетании с другими методами радионуклидная диагностика дает полноценную информацию о заболеваниях пациентов. Получение информации обеспечивается путем инъекций специальных препаратов, имеющих в своем составе гамма-или позитрон-излучающие радионуклиды. Такие препараты называются радиофармпрепаратами (РФП), которые, как правило, избирательно накапливаются в очагах поражения ткани с последующей регистрацией гамма-излучения с помощью специальной аппаратуры (сканнеры, гамма-камеры, гамма-томографы, позитронно-эмиссионные томографы).
Уровень своевременной и полноценной диагностики указанных заболеваний и, вопросы их эффективного лечения, в значительной степени обусловлены отставанием ядерно-медицинских технологий, остаются "слабым местом" отечественного здравоохранения. Решение указанных проблем во многом связано с разработкой новых высокоэффективных РФП.
Успешное развитие радионуклидной диагностики и терапии онкологических и неонкологических заболеваний тесно связано с поиском, разработкой, и созданием новых производств РФП. Развитие производства радиофармпрепаратов является одной из сложных задач ядерной медицины, так как это связано со спецификой производственных процессов с радиоактивными изотопами (безопасность персонала, экологические проблемы, утилизация радиоактивных отходов).
Основой эффективного и широкого использования радионуклидных методов в диагностике и терапии опухолевых и неопухолевых заболеваний является создание новых РФП, характеризующихся высокой функциональной ценностью и безопасностью. При решении этой задачи главным принципом является выбор радионуклидов с оптимальными ядерно-физическими характеристиками для формирования минимальной поглощенной дозы в случае диагностических РФП и создания' лечебной поглощенной дозы в случае терапевтических РФП, а также разработка носителей для селективной доставки радионуклидов к очагу опухолевого или неопухолевого поражения.
Важной характеристикой РФП является избирательное накопление их в исследуемых патологических органах или тканях. Перспективной группой носителей для селективной доставки радионуклидов в очаг поражения являются микросферы, для получения которых используют стекло, керамику, синтетические полимеры, неорганические соли, липиды, полисахариды, казеин, желатин, альбумин. Из перечисленных материалов наиболее оптимальным для создания РФП для радионуклидной диагностики и терапии является сывороточный альбумин человека. Преимущества микросфер альбумина (МСА) определяются рядом физико-химических характеристик: они имеют правильную сферическую форму, что придает высокую прочность белковой матрицы; возможность получения их с любым дисперсным составом в узком диапазоне размеров; характеризуются лучшей физиологично-стью, технологичностью и простотой метода их получения; возможностью получать частицы с заданными размерами и программируемой скоростью протеолиза их в организме; белковая матрица имеет наноразмерные поры, в которые можно инкорпорировать практически любые радионуклиды, лекарственные средства и прочно удерживать их в составе МСА и высвобождать по мере протеолиза денатурированного белка; скорость протеолиза МСА может регулироваться путем степени сшивки белка и дисперсного состава частиц.
В отечественной литературе практически отсутствуют сведения по разработке РФП на основе альбумина крови человека и радионуклидов 99шТс, 188Re, ,03Pd и др. В зарубежной литературе цитируются разрозненные сведения по разработке и исследованию РФП на основе нативного альбумина и микросфер альбумина [13, 53, 57, 60, 61, 62, 87, 104, 130, 182, 229, 263, 303]. В мировой литературе отсутствуют сведения о системных и сравнительных исследованиях по разработке и биологическому изучению на основе препаратов сывороточного альбумина человека, меченных радионуклидами диагностического и терапевтического назначения. Отсутствие комплексных радиохимических, фармакокинетических и дозиметрических исследований затрудняет оценивать функциональную ценность РФП для ра-дионуклидной терапии онкологических и неонкологических заболеваний.
Актуальность изучения фармакокинетических свойств и дозиметрических характеристик новых РФП состоит в том, что проведение этих исследований обеспечивает выбор наиболее оптимальных и безопасных препаратов, характеризующихся высокой функциональностью в радионуклидной диагностике и терапии онкологических заболеваний.
В настоящей работе изложены материалы комплексных радиохимических, фармакокинетических и дозиметрических исследований различных модификаций препаратов на основе сывороточного альбумина человека. Для этого использовали нативный, наноальбуми'н и денатурированный альбумина в виде микросфер, а также радионуклиды 188Re, l03Pd.
Цель исследования
Изучение фармакокинетических и дозиметрических характеристик РФП на основе сывороточного альбумина человека и гамма-, бета-излучающих радионуклидов в зависимости от физико-химических свойств меченых препаратов; выбор оптимальных по функциональным признакам РФП для радионуклидной диагностики и терапии онкологических заболеваний.
Задачи исследования
1. Изучить закономерности образования комплексных соединений 99,пТс с нативным альбумином и наноальбумином в зависимости от условий проведения реакции.
2. Провести сравнительные исследования фармакокинетических свойств РФП «99шТс-альбумин» и «99шТс-наноальбумин», оценить их функциональную пригодность для исследования гемодинамических характеристик и сцинтиграфии лимфатических узлов и печени.
3. Изучить особенности фармакокинетики меченых МСА в организме лабораторных животных в зависимости от химической природы радионуклида, дисперсного состава частиц, степени денатурации белка, пространственного распределения радионуклида в частицах и способа их введения в организм.
4. Изучить фармакокинетические свойства препарата «t77Lu-MCA», полученного нейтрон-активационным способом. 1
5. Изучить закономерности инкорпорирования Pd в состав МСА и исследовать влияние теплового воздействия и гамма-облучения белка на показатели, характеризующие поведение препарата «,03Pd-MCA» в организме лабораторных животных.
6. Изучить особенности фармакокинетики меченых МСА в организме лабораторных животных с экспериментальными моделями легочной патологии (облучение ионизирующим излучением, эмболия легочной артерии, асептическое воспаление и рак легких) после внутривенного введения препаратов.
7. Провести сравнительный анализ фармакокинетики РФП «103Pd-МСА» в организме интактных мышей и мышей-опухоленосителей после внутримышечного и внутриопухолевого введения, а также оценить уровни накопления этого препарата в опухоли и удержания его опухолевой тканью.
8. Оценить распределение поглощенных доз внутреннего облучения органов и тканей лабораторных животных разными радионуклидами, инкорпорированными в состав МСА.
Научная новизна
В результате проведенных исследований обоснована проблема необходимости проведения комплексного исследования закономерностей инкорпорирования радионуклидов в молекулы-носители, изучения фармакокинети-ческих свойств и дозиметрических характеристик для создания новых эффективных по функциональным признакам РФП для радионуклидной диагностики и терапии онкологических и неонкологических заболеваний.
1. Разработана технология оригинальных препаратов: 99тТс-наноальбумин, 177Lu-; 1б6Но-, 103Pd-MCA.
2. Впервые показана возможность получения меченых МСА путем активации стабильных изотопов в составе белковых частиц тепловыми нейтронами. Нейтрон-активационным методом были получены и изучены физико-химические свойства МСА, меченных 152mEu, 177Lu, ls6Re, 16бНо.
1 ГП
3. В результате исследования закономерностей введения Pd в белковую матрицу микросфер путем ионной сорбции впервые показана способность инкорпорировать палладий и другие ионы металлов в состав альбуминовых частиц и изучено влияние различных факторов (дисперсный состав частиц, степень денатурации белка в результате теплового воздействия и гамма-облучения МСА) на их поведение в организме лабораторных животных.
4. Впервые показано влияние предварительного гамма-облучения легких лабораторных животных на фармакокинетику меченых МСА.
5. Получены приоритетные результаты сравнительных исследований влияния степени денатурации белка, пространственного распределения метки в частицах, химической природы радионуклидов и способов введения меченых препаратов на характер поведения МСА в организме лабораторных животных.
6. В опытах на животных с индуцированными заболеваниями легких и перевивными солидными опухолями дана оценка функциональной пригодности препаратов.
7. Впервые проведена сравнительная оценка поглощенных доз внутреннего облучения органов и тканей лабораторных животных в зависимости от вида радионуклида, инкорпорированного в состав МСА.
Практическая значимость
В ходе выполнения данного исследования созданы новые РФП, обладающие функциональной пригодностью для радионуклидной диагностики и терапии онкологических и неонкологических заболеваний. По результатам научных исследований наработаны экспериментальные и опытные образцы лиофилизатов (наборов реагентов) к генератору 99W/99mTc и на их основе РФП «99шТс-альбумин», «99шТс-наноальбумин», «99шТс-микросферы альбу
177 103 мина», « Lu-микросферы альбумина» и « Pd-микросферы альбумина».
Разработаны технологические регламенты на производство двух препаратов: «99тТс-альбумин», «99тТс-микросферы альбумина».
РФП «99шТс-альбумин» прошел доклинические испытания, РФП «99тТс-микросферы альбумина» прошел доклинические и клинические испытания, зарегистрирован в реестре лекарственных средств для медицинского применения и получено разрешение на его промышленный выпуск (регистрационное удостоверение Минздрава России № 000329/01-2001 от 20.03.2001).
Основные положения, выносимые на защиту
1. Фармакокинетические свойства 99тТс-альбумина зависят от технологических условий его синтеза.
2. Результаты фармакокинетики 99тТс-альбумина 99тТс-наноальбумина доказали функциональную пригодность РФП для исследования гемодина-мических характеристик, диагностики лимфатических узлов и печени.
3. На фармакокинетику меченых МСА оказывает влияние дисперсный состав частиц, пространственное распределения радионуклида в частицах, степень денатурации белка в результате теплового воздействия, нейтронного и гамма-облучения, химическая природа радионуклида, способ введения в организм.
4. Результаты фармакокинетики меченых МСА в организме лабораторных животных с патологическими состояниями легких: гамма-облучение легких; эмболия легочной артерии и рак легких, доказали эффективность РФП в оценке состояния капиллярного кровотока легких.
5. Поглощенные дозы внутреннего облучения органов и тканей лабораторных животных после внутривенного и внутриопухолевого введения меченых МСА определяются фармакокинетическими и ядерно-физическими характеристиками РФП.
Связь с основными научными направлениями работы
ФГБУ МРНЦ Минздравсоцразвития России
Исследования проводились в рамках плановых тем ФГБУ МРНЦ Минздравсоцразвития России, государственных контрактов, грантов РФФИ и МНТЦ, в которых автор являлся ответственным исполнителем и руководителем большинства заданий.
НИР «Разработка радиофармпрепаратов для диагностики и терапии», (1994 - 1995 гг.), № гос. регистрации 01.9.40002470.
НИР «Разработка радиофармпрепаратов на основе соединений альбуминового ряда, борсодержащих соединений и металлотионеина для диагностики и терапии», (1996 - 1999 гг.), № гос. регистрации 01.9.60 000672.
НИР в рамках Международного проекта «Нуклидфарм» по программе совместных исследований Объединенной Российско-Французской лаборатории радиофармпрепаратов по теме: «Разработка новых подходов к созданию средств радиодиагностики и радиотерапии на основе микросфер сывороточного альбумина и моноклональных антител», (1996-2000 гг.).
НИР «Разработка и биологические испытания радиофармпрепаратов на основе альбумина, комплексонов и борсодержащих соединений для диагностики и терапии», (2000 - 2003 гг.), № гос. регистрации 01.20.00 03061.
НИР по проект МНТЦ № 2371 совместно с Институтом ядерных исследований РАН по теме: «Совместное производство 103-палладия, 82-стронция и 68-германия для коммерческого распространения и медицинских целей», задание ФГБУ МРНЦ Минздравсоцразвития России по теме: «Разработка и биологические испытания источников 103-палладия на основе микросфер альбумина крови человека для определения функциональной пригодности препарата для лечения опухолей» (2005 г.).
НИР «Разработка и биологические испытания наборов реагентов к генераторам 99мТс и 188Б1е на основе ксидифона и микросфер альбумина для радионуклидной диагностики и терапии», (2004 - 2007 гг.), № гос. регистрации 0120.0407146.
НИР по государственному контракту между Федеральным агентством по науке и инновациям и ГУ МРНЦ РАМН по теме: «Создание технологии получения наборов реагентов к генератору 188Г1е на основе гидроксиэтили-дендифосфоната и микросфер альбумина для радионуклидной терапии опухолевых и неопухолевых заболеваний», в рамках федеральной целевой иа-учно-технической программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники» на 2002-2006 годы по приоритетному направлению «Развитие инфраструктуры» (2005-2006 гг.).
НИР по гранту РФФИ № 06-03-96344 «Комплексообразующая способность 188-рения с микросферами альбумина крови человека», (2007 г.).
НИОКР по договору № 01/07-РФП/1431-КЭ от 31 мая 2007 г между ФГУП «НИФХИ» им. Л.Я.Карпова и ГУ МРНЦ РАМН по теме: «Контроль качества элюата технеция-99т и разработка стандартной технологии получения микросфер альбумина - исходной субстанции для получения радиофармпрепаратов на основе палладия-103», в рамках Государственного Контракта № 02.522.12.2002 от 31 мая 2007 г. «Разработка новых технологий получения радиоизотопов, радиофармпрепаратов и генератора технеция-99т для диагностики и терапии сердечно-сосудистых и онкологических заболеваний» (2007 - 2009 гг.).
НИР по гранту РФФИ № 09-04-99067 «Биологические и физико-дозиметрические исследования нового класса радиофармпрепаратов на основе генераторных радионуклидов палладия-103, рения-188 и технеция-99т». (2009 - 2010 гг.), № гос. регистрации 01200954340.
Апробация работы
Материалы диссертации доложены и обсуждены на 15 всероссийских и международных конференциях, симпозиумах, в том числе — на 9 конференциях в России и на 6 конференциях за рубежом:
1. Первый съезд онкологов стран СНГ (Москва,1996).
2. 2ICI Second International Conference on Isotopes (Sydney, Australia, 1997).
3. Международный конгресс «ЭНЕРГЕТИКА-3000» (Обнинск, 1998).
4. Всероссийская конференция «50 лет производства и применения изотопов в России» (Обнинск, 1998).
5. The Second Japanese-Russian Seminar on Technetium (Shizuoka, Japan,
1999).
6. International Youth Nuclear Congress 2000 (Slovakia, Bratislava, 2000).
7. Modern problems of radiobiology, radioecology and evolution, International conference dedicated to centenary of N.W.Timofeff-Ressovsky (Dubna,
2000).
8. International Conference on Current Status Medicine and Radiopharmaceuticals Congress of Russian Society of Nuclear Medicine (Obninsk, 2000).
9. Международный Конгресс «Энергетика-3000» (Обнинск, 2002).
10. Всероссийская научно-практическая конференция «Актуальные вопросы ядерной медицины». Школа «Избранные вопросы ядерной медицины» (Дубна, 2004).
11. International Symposium on Technetium (Oarai, Japan, 2005).
12. 15th Radiochemical Conference (Marianske Lazne, Czech Republic, 2006).
13. Annual Congress of the EANM (Athens, Greece, 2006).
14. Шестая Российская конференция по радиохимии «Радиохимия-2009» (Москва, 2009).
15. III Евразийский Конгресс по медицинской физике и инженерии «Медицинская физика - 2010» (Москва, 2010).
Апробация диссертации состоялась 20 апреля 2011 г. на научной конференции экспериментального радиологического сектора Федерального государственного бюджетного учреждения «Медицинский радиологический научный центр» Министерства здравоохранения и социального развитая Российской Федерации, протокол № 259.
Публикации результатов исследования
По материалам диссертации опубликовано 29 научных статей, в том числе 18 опубликовано в отечественных научных журналах, рекомендованных ВАК МОиН РФ для докторских диссертаций, и 9 - в зарубежных журналах. Получен патент Российской Федерации на изобретение RU23 59702 «Способ получения меченых радионуклидом микросфер», дата публикации 27.06.2009 г.
Реализация результатов работы
По результатам проведенных исследований подготовлены:
• лабораторные регламенты на производство двух препаратов: «Микросферы альбумина, 99тТс», «Альбумин, 99тТс»;
• опытно-промышленные регламенты на производство двух субстанций «Микросферы альбумина, 5-10 микрон» и «Микросферы альбумина, 2040 микрон» - субстанции для получения радиофармпрепаратов «I03Pd-микросферы альбумина, 5-10 микрон» и «i03Pd-микpocфepы альбумина, 20-40 микрон»;
• стандарты предприятия для контроля качества препаратов «микросферы альбумина (МСА), 20-40 мкм» и «Микросферы альбумина (МСА), 5-10
IПЗ мкм» - субстанции для производства РФП « Pd-MCA, 20-40 мкм» и «103Pd-MCA, 5-10 мкм»;
• проведены доклинические испытания препарата «99шТс-альбумин»;
99шт
• проведены доклинические и клинические испытания препарата « Тс-микросферы альбумина», препарат зарегистрирован в реестре лекарственных средств, а также получено разрешение на промышленное производство.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 266 страницах компьютерного текста, содержит 55 таблиц и 36 рисунков. Она состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, четырех глав собст
Заключение Диссертация по теме "Радиобиология", Петриев, Василий Михайлович
ВЫВОДЫ
1. Разработана и оптимизирована технология получения РФП «99тТс-альбумин» и «99тТс-наноальбумин». Показано, что синтезированные РФП обладают высоким радиохимическим выходом (не менее 95%) и стабильностью in vivo, что подтверждено результатами изучения фармакокинетики РФП в организме лабораторных животных.
2. Экспериментально доказана функциональная пригодность РФП. Показано, что до 50% 99тТс-альбумина от введенного количества в течение трех часов после внутривенной инъекции циркулирует в крови, что позволяет использовать РФП для изучения гемодинамических характеристик; 99тТс-наноальбумин при подкожном введении избирательно накапливается в лимфатичеких узлах, при внутривенном введении - в печени, что позволяет использовать его для сцинтиграфии этих органов.
3. В экспериментальных исследованиях показано, что такие факторы: как дисперсный состав частиц, степень денатурации белка, пространственное распределения радионуклида в частицах, способ введения РФП, химическая природа радионуклида оказывают заметное влияние на фармакоки-нетику меченых МСА в организме лабораторных животных.
4. 177Lu-MCA, полученные нейтрон-активационным способом, удерживаются в легких крыс на уровне 50% от введенного количества в течение 20 суток после внутривенного введения.
5. Изучение закономерностей инкорпорирования "Pd в белковую матрицу МСА, исследования влияния температуры денатурации белка и воздействия гамма-облучения на характер поведения 103Pd-MCA в организме лабораторных животных, явилось результатом создания оптимизированной i m технологии получения нового РФП « Pd-MCA» с оптимальными характеристиками для лечения опухолей.
6. Фармакокинетика меченых МСА в организме кроликов после гамма-облучения легких, индуцированной эмболией легочной артерии и раком легких, показала функциональную пригодность препарата в оценке состояния капиллярного кровотока легких с различными патологическими состояниями.
7. После внутриопухолевого введения мышам-опухоленосителям 103Рс1-МСА установлен факт длительного удержания меченого препарата опухолевой тканью.
8. В результате оценки поглощенных доз внутреннего облучения показано, что при внутриопухолевом введении нового терапевтического радио
103 фармпрепарата Рё-МСА позволяет осуществлять избирательное облучение опухоли (в 15 раз больше) по сравнению с прилегающими тканями и критическими органами. После внутривенного введения диагностических РФП (113ш1п-, 1231- и 99тТс-МСА) наиболее низкие поглощенные дозы внутреннего облучения легких формируются от 99тТс-МСА.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Полученные результаты в ходе выполнения работы показали, что для создания радиофармпрепаратов на основе сывороточного альбумина человека (нативный альбумин, наноальбумин и микросферы) с оптимальными характеристиками по функциональным признакам для радионуклидной диагностики и терапии необходимо проведение комплексных исследований закономерностей связывания радионуклида с молекулой-носителем, изучение фармакокинетических свойств и дозиметрических характеристик.
В результате исследований показано, проведение реакции при рН среды, равной 2,5, уровень связывания 99шТс с альбумином практически не зависит от концентрации Бп в реакционной смеси в пределах 3,75-10 мкг/мл. Причем, образование комплексного соединения «99шТс-альбумин» при этих условиях происходит практически мгновенно. Радиохимический выход 99тТс-альбумина составляет около 96% через три минуты после начала проведения реакции и сохраняется на этом уровне в течение 24 ч, что свидетельствует о высокой стабильности РФП в растворе. Увеличение концентрации Эп" в реакционной смеси до 15 мкг/мл снижает скорость реакции образования комплекса «99шТс-альбумин» и эффективность связывания 99шТс с альбумином. Максимальный радиохимический выход меченого препарата составляет около 88% через 30 мин после начала проведения реакции. Дальнейшее повышение концентрации Бп2+ в реакционной смеси до 20 мкг/мл способствует еще большему снижению скорости реакции, эффективности связывания 99тТс с альбумином и стабильности комплекса. Снижение скорости реакции и эффективности связывания 99тТс с альбумином при высоких концентрациях Бп2+ в реакционной смеси происходит за счет протекания конкурентной реакции, в результате которой образуется гидро-лизованный технеций (99тТс02), являющийся радиохимической примесью препарата «99тТс-альбумин». Радиохимические примеси в препарате «99тТс-альбумин», полученном в реакции с концентрацией 8п2+ в реакционной смеси в пределах 3,75-10 мкг/мл, не превышают 4-5%, тогда как концентрация Бп2+ 15-20 мкг/мл способствует образованию "шТс02 на уровне 10-20%.
Аналогичные закономерности образования комплексных соединений 99шТс происходят с наноальбумином и микросферами альбумина.
Учитывая, что введение 99тТс в молекулу альбумина, а также воздействие Бп на белок может приводить к изменению его физиологических свойств, необходимо проведение фармакокинетических исследований РФП с разными модификациями препарата в организме лабораторных животных.
Поскольку 99шТс-альбумин предназначен для радионуклидного исследования гемодинамических характеристик, поведение его в крови является важнейшей фармакокинетической характеристикой.
В экспериментах на кроликах показано, что 99тТс-альбумин, получен ный из лиофилизата, содержащего 15 мкг 8п (соответственно 3,75 мкг/мл в реакционной смеси), имеет наиболее оптимальные фармакокинетические свойства. Он циркулирует в крови в течение 3 ч на уровне около 50% от введенного количества. 99тТс-альбумин, полученный из лиофилизатов, содержащих 30 и 40 мкг Бп (соответственно 7,5 и 10 мкг/мл в реакционной смеси), накапливается в крови также на уровне около 50% через 5 мин после внутривенного введения. Однако в последующие сроки меченый препарат интенсивно выводился из кровяного русла и в течение 3 ч содержание его в крови снижалось более чем в 2 раза и в 10 раз для РФП, полученных в реакциях с концентрациями 8п , равными, соответственно, 7,5 и 10 мкг/мл. Получение 99тТс-альбумина из лиофилизата, содержащего 80 мкг 8п2+ приводит к значительному снижению уровня накопления активности в крови в ранние сроки после инъекции.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что повышение количества олова в составе лиофилизата с 15 до 40 мкг оказывает существенное влияние на фармакокинетические свойства РФП — ускоряет выведение его из кровяного русла. При этом радиохимические свойства 99шТс-альбумина не изменяются с повышением олова в составе лиофилизата в пределах 15— 40 мкг (радиохимический выход составляет выше 95%, радиохимические примеси не превышают 5%) и стабильность препарата in vivo сохраняется на высоком уровне в течение 24 ч с момента его приготовления. Ускоренное выведение 99шТс-альбумина, полученного при повышенных концентрациях олова, объясняется изменением физиологических свойств белка.
С учетом результатов комплексных радиохимических и биологических исследований выбран лиофилизат с оптимальным составом: флакон емкол стью 10 см содержит, лиофильно высушенную в стерильных условиях смесь альбумина - 10 мг и олова двухлористого - 0,015 мг (Sn2+ - 15 мкг). Разработанный состав лиофилизата позволяет получать РФП «99тТс-альбумин» в течение 10 мин с радиохимическим выходом не менее 95%.
Как было показано, незначительное изменение физиологических свойств альбумина приводит к существенному изменению его поведения в организме. Это явление было подтверждено экспериментальными исследованиями на крысах при изучении фармакокинетических свойств наноаль-бумина, меченного 99тТс. Разработанный нами наноальбумин представляет собой сшитый белок со средним размером частиц 26,1 нм.
Сравнительные данные биологического распределения 99тТс-альбумина и 99тТс-наноальбумина в организме крыс после внутривенного введения характеризуются существенными различиями фармакокинетических свойств двух РФП. Содержание активности в крови крыс через 5 мин после инъекции 99тТс-альбумина и 99тТс-наноальбумина отмечается на достаточно высоком уровне (соответственно, 12,8 и 28,8% от введенного количества). Однако, 99тТс-наноальбумин интенсивно выводился из крови и через 24 ч количество его снижалось в 64 раза, по сравнению с 5 минутным сроком. Напротив, содержание* 99шТс-альбумина в крови существенно не изменяется в течение 6 ч (р > 0,05) и только через 24 ч этот показатель статистически достоверно снижается до 9,4% по сравнению с 6 ч сроком (р < 0,05).
Интенсивное выведения 99шТс-наноальбумина. из крови сопровождается высоким уровнем накопления его в печени (табл. 2). Динамика накопления 99тТс-наноальбумина в 1 г печени характеризуется постепенным ростом активности с 4^17 до 9,51% в течение 1 ч после внутривенной инъекции препарата и остается практически без изменения в интервале наблюдения 1 - 24 ч, а к 48 ч снижается до уровня 4,3%. Напротив величины накопления 99тТс-альбумина в печени наблюдаются на уровне следовых количеств во все сроки исследования.
Избирательное накопление 99шТс-наноальбумина в печени является результатом захвата наночастиц купферовскими клетками. Полученный, результат является положительной характеристикой РФП в плане возможности использования его для получения сцинтиграфического изображения печени.
Ткань щитовидной железы в течение всего периода наблюдения практически не аккумулировала активность, при исследовании фармакокинети-ки как 99тТс-альбумина, так и 99тТс-наноальбумина, и содержание ее в целом органе составляло на уровне тысячных или, сотых долей процента. Это является показателем высокой стабильности меченых препаратов in vivo, так как известно, что свободный технеций обладает высокрй тропностью к ткани щитовидной железы.
В опытах на крысах было показано, что после подкожного введения 99тТс-наноальбумина РФП имеет фармакокинетические особенности его в организме, отличающиеся от таковых после внутривенного введения этого же препарата. Результаты биологического распределения РФП показали, что в ранние сроки после подкожного введения 99тТс-наноальбумина из всех исследуемых органов и тканей наибольшее количество активности аккумулируется в паховом лимфатическом узле. Через 5 мин после инъекции
99тТс-наноальбумина накопление активности в лимфатическом узле составляет 5,62% от введенного количества (в пересчете на 1 г массы органа), далее процент накопления активности увеличивается и достигает максимального значения (60,7%) через 24 ч, затем происходит снижение этого показателя до 38,4% через 48 ч. Такая динамика накопления активности в лимфатическом узле объясняется медленной элиминацией 99тТс-наноальбумина, депонированного под кожу после инъекции.
Особенностью фармакокинетики 99шТс-наноальбумина в организме крыс при разных способах введения является накопление его в паховом лимфатическом узле, превышающем в 8,5-9,7 раз (в период 5-60 мин) и в 58,8-135 раз (в период 3-48 ч) при подкожном введении, по сравнению с внутривенной инъекцией.
Для оценки диагностической ценности 99тТс-наноальбумина были рассчитаны коэффициенты дифференциального уровня накопления активности в печени и лимфатическом узле по отношению к другим органам и тканям после внутривенного и подкожного введения меченого препарата.
Коэффициенты дифференциального уровня накопления 99тТс-наноальбумина в печени по отношению к большинству органов и тканей постепенно увеличиваются и достигают максимального значения в перид 3— 24 ч после внутривенной инъекции препарата.
Сравнительные данные уровней дифференциального накопления активности в паховом лимфатическом узле по отношению к другим органам и тканям после внутривенного и подкожного введения 99тТс-наноальбумина характеризуют особенности поведения препарата в организме крыс в зависимости от способа его введения. Показано, что дифференциальный уровень накопления 99шТс-наноальбумина в лимфатическом узле в ранние сроки после подкожного введения препарата на 3—4 порядка выше, чем после внутривенной инъекции. В последующие сроки эти величины повышаются в течение 24 ч по отношению к большинству органов и тканей.
Эти данные свидетельствуют о том, что выведение активности из печени и лимфатического узла осуществляется существенно с меньшей скоростью, чем из других органов и тканей.
Для объективной оценки величин накопления радиоактивной метки в органе в составе препарата «99тТс-наноальбумин» или в виде несвязанного 99шТс, в качестве контроля былрх рассчитаны коэффициенты дифференциального уровня накопления свободного технеция (в виде Ка99шТс04) в печени по отношению к щитовидной железе, которая избирательно в повышенных количествах накапливает неорганический технеций. Результаты показали, что коэффициенты для 99тТс-наноальбумина на 2-3 порядка выше, чем для №99тТсО.[.
Эти данные характеризуют функциональную ценность РФП «99тТс-наноальбумин» для получения диагностической информации методом сцинтиграфии лимфатических узлов при подкожном введении и печени при внутривенном введении.
Для изучения влияния пространственного распределения радионуклида в микросферы альбумина, дисперсного состава частиц, химической природы радионуклида, денатурации белка в результате теплового воздействия или гамма-облучения, способа инъекции меченого препарата, патологического состояния легких на фармакокинетику в организме интактных животных и животных-опухоленосителей были разработаны и получены следующие препараты микросфер альбумина:
• Ь11-МСА диаметром 0,5-2, 0,5-5, 5-10 и 10-20 мкм, с температурой денатурации белка, равной 110, 130, 150°С и выдержкой в течение 1 ч, с поверхностным и объемным распределением радионуклида в частицах;
• 99тТс- и Ш1п-МСА диаметром 0,5-2 и 10-20 мкм с температурой денатурации белка, равной 150°С и выдержкой в течение 1 ч;
• 177Lu-MCA диаметром 10-20 мкм, полученные путем облучения тепловыми нейтронами с потоком 2'10 н/см -с в течение 1 ч;
103
• Pd-MCA диаметром-5-10 и 20-40 мкм с объемным распределением радионуклида в частицах, с температурой денатурации белка, равной 136°С и 200°С в течение 2 и 8 ч, а также гамма-облученные в дозе 0,1 и 1,0 МГр.
Сравнение данных биораспределений 1311-МСА, полученных при разных температурах, в организме интактных крыс после внутривенного введения показало, что существенного влияния температуры денатурации белка в пределах 110-150°С на фармакокинетические свойства препарата не выявлено. Уровень накопления активности в легких меченых МСА, полученных при температуре 110, 130 и 150°С составляет от 51 до 54% от введенного количества, но статистически достоверных различий при этом не наблюдается (р > 0,05-0,1) в другие сроки наблюдения также не отмечено. Накопление активности в неблокированной щитовидной железе закономерно увеличивается с параллельным снижением таковой в легких в течение 1-48 ч, что свидетельствует о постепенном гидролизе МСА и выделении свободного радиоактивного йода с поверхности частиц.
Анализ сравнительных данных распределения активности в организме крыс после внутривенного введения 1311-МСА с поверхностным и объемным распределением радионуклида в частицах показал, что в течение первого часа исследования заметных различий в уровне накопления активности в легких не выявляется (р < 0,25-0,5), тогда как содержание МСА в легких с объемным распределением радионуклида в частицах в период наблюдений 3-24 ч статистически достоверно выше, по сравнению с поверхностным распределением активности в частицах (р < 0.02-0,001). Выведение активности из легких происходит с периодом биологического полувыведения, равным 1,6 ч с поверхностным распределением и 21,1 ч - с объемным распределением радионуклида в МСА. Ускоренное выведение активности из легких после инъекции, когда радионуклид распределяется на поверхности частиц, сопровождается более интенсивным накоплением активности в неблокированной щитовидной железе, по сравнению с объемным распределением радионуклида в частицах, что позволяет косвенно судить о времени внутрисосудистого рассасывания микросфер альбумина.
Детальное изучение влияния степени сшивки белковой матрицы МСА после теплового воздействия и предварительного гамма-облучения на фар-макокинетические свойства после внутримышечного введения препарата
1 П^ мышам было проведено с помощью Pd-MCA диаметром 20-40 мкм с объемным распределением радионуклида в частицах.
103Pd-MCA получали методом ионной сорбции 103Pd в белковую матрицу МСА. Для инкорпорирования максимального количества i03Pd в МСА к радиоактивному палладию добавляли стабильный палладий (PdC^). Для фиксации в пористой структуре МСА палладий восстанавливали до оксида.
1 П"3
В результате исследований показано, что скорость выведения Pd из мышечной ткани после внутримышечной инъекции Pd-MCA, полученных при 136°С, выше, чем в случае 103Pd-MCA, полученных при 200°С. Длительность теплового воздействия на белок также оказывает влияние на скорость выведения активности из мышцы после внутримышечного введения t ло
Pd-MCA. Это объясняется тем, что МСА, полученные при более низкой температуре и более короткого теплового воздействия, имеют пониженную степень сшивки белка, что увеличивает скорость его протеолиза и тем са
1 лл мым повышает скорость высвобождения Pd из состава микросфер.
Наиболее существенное влияние на степень денатурации белка и тем самым снижение скорости выведения активности из мышцы оказывает предварительное гамма-облучение МСА. Из анализа параметров выведения
1ПЧ активности из мышечной ткани после инъекции Pd-MCA, необлученных и предварительно облученных в дозе 0,1 и 1,0 МГр, следует, что периоды полувыведения различаются в значительной степени и составляют 1,02 сут,
8,57 сут и 23,6 сут, соответственно. При этом количества 103Pd-MCA в мышце в течение 40 суток снижаются в 12,6; 4,1 и 1,9 раз, соответственно, для необлученных микросфер и облученных в дозе 0,1 и 1,0 МГр.
Воздействие тепловых нейтронов на степень денатурации белка оказывается еще более существенным, чем гамма-облучение. Для изучения этого
177 феномена были разработаны и получены Lu-MCA путем активации стабильного 176Lu в составе МСА тепловыми нейтронами с потоком 2 1013
2 131 н/см -с в течение 1 ч. Сравнение параметров выведения из легких I-MCA,
1 »7 7 полученных тепловой сшивкой белка, и Lu-MCA, полученных путем ней-трон-активационным способом, после внутривенного введения препаратов
177 меченых микросфер показало, что Lu-MCA выводятся значительно мед
111 леннее по сравнению с I-MCA: биологические периоды полувыведения — 121,5 и 0,84 сут, соответственно.
Дисперсный состав является важнейшей характеристикой частиц, оказывающий существенное влияние на фармакокинетические свойства меченых МСА. В связи с этим было проведено изучение фармакокинетики I-МСА диаметром 0,5-2, 0,5-5, 10-20 мкм и "тТс-МСА диаметром 0,5-2 и 10-20 мкм в организме интактных крыс после внутривенного введения препаратов.
Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Петриев, Василий Михайлович, Обнинск
1. Бесядовский Р. А., Иванов К. В., Козюра А. К. // Справочное руководство для радиобиологов М. Атомиздат.1978. - С. 90.
2. Бусленко Н. П., Голенко Д. И., Соболь И. М. и др. // Метод статистических испытаний (метод Монте-Карло). М.: Гос. изд. физ.-мат. лит. -1962.-332 С.
3. Буюклян А.Н., Боголюбов В. М. Радиокардиография и скеннирование1 Л 1легких с МАА- I в оценке легочно-сердечной недостаточности // Кровообращение 1973. - № 5. - С. 47-51.
4. Воскресенский П.И. // Техника лабораторных работ Химия. М. -1967.
5. Габуния Р. И., Иконников А. И. Использование микроагрегатов аль131бумина- I для оценки протеолитической и фагоцитарной функции печени // Мед. радиол. 1977. - Т. 22. - № 5. - С. 3-7.
6. Гаурова Ф. // Химия и функция белков Изд. «Мир». - М. 1965. - С. 220.
7. Гинзбург С. И., Езерская Н. А., Прокофьева И. В. и др.// Аналитическая химия платиновых металлов Изд. «Наука». - М. 1972. - С. 66-67.
8. Ермаков С. М. // Метод Монте-Карло и смежные вопросы. М. Наука.- 1971.- 327 С.
9. Зайдель А. Н. // Элементарные оценки ошибок измерений. Ленинград. "Наука". - 1968. - С. 48-50.
10. Зубовский Г.А. К вопросу о механизме накопления коллоидного Аи в селезенке // Радиобиология Радиотерапия 1968. - Т. 9. — № 5.- С. 493-505.
11. Иванов В. Д., Кириченко В. Н. Самопроизвольная униполярная зарядка бета-активных «горячих» аэрозольных частиц // ДАН СССР1969.-T. 188.-С. 65.
12. Кузнецов H. С., Астапов Б. М., Боголюбов В. М. и др. Радиоизотопное скеннирование полостей сердца // Мед. радиол. 1968. - Т. 13. -№9.-С. 55-58.
13. Малов Г. А. Ускоренный способ определения объема циркулирующей крови с помощью I-альбумина // Мед. радиол. 1970. - Т. 15. -№ 11.-С. 31-34.
14. Можайский А. М., Славин M. Н., Коршунов В. Б. и др. Получение радиоактивных препаратов. IX.Электрохимически йодированный альбумин сыворотки крови человека // Isotopenpraxis — 1975. Т. 11. — № 9.-С. 305-310.
15. Налимов В. В. // Применение математической статистики при анализе вещества, — М. Физматгиз, 1960.з
16. Обухов Н. В., Аметов А. С., Абедраббо X. Радионуклидные комплексные in vitro исследования в диагностике рака легкого // Мед. радиол. 1983. - Т. 28. - № 8. - С. 19-24.
17. Обухов Н. В., Хайдер А., Абедраббо X. Клиническая ценность радиоизотопных исследований в диагностике рака легкого // Мед. радиол. — 1982.-Т. 27.-№ 10.-С. 53-61.
18. Петриев В. М., Степаненко В. Ф. Поглощенные дозы в организме и некоторых органах животных при введении меченых микросфер альбумина // Мед. Радиол. 1981. - № 9. - С. 60-61.
19. Рабан П., Грегора В., Шиндлерж И. Новые методы мечения микросфер технецием-99т и индием-113т для сцинтиграфии легких //
20. Сборник докладов симпозиума по радиоактивным медицинским препаратам, применяемым в диагностике и терапии Сегед (ВНР), Будапешт 1974. - С. 381-389.
21. Рубин М. П., Кузнецова JI. А., Гасс М. В. Сцинтиграфические методы исследования перфузионных и вентиляциионных дисфункций;у больных раком легкого // Медицинская радиология и радиационная безопасности 2007.-Т. 52. - № 1. - С. 56-63.
22. Рубин М. П., Кулешова О. Д. Сцинтиграфические методы исследования перфузионных.и вентиляционных дисфункций у больных острым абсцессом легкого // Медицинская радиология и радиационная безопасность. 2005. - Т. 50. - № 5. - С. 53-62.
23. Ставицкий Pi В., Виктурина В. П. Основы ,радиационной защиты в рентгенологической практике // Медицина. М. 1968. - 107 С.
24. Станко В. И., Кулаков В: Н., Можайский А. М. Получение радиоактивных препаратов. УЮсобенности электрохимического йодирования белков // Isotopenpraxis 1973. - Т. 9. - № 7. - С. 260-264.
25. Степаненко В. Ф., Колыженков Т. В., Дубов Д. В., Цыб А. Ф. Экспериментальная оценка дозы облучения персонала при брахитерапии злокачественных новообразований микроисточниками 32Р//Атомная Энергия 2008. - Т. 105. - Вып. 3. - С. 233-235. ; .".;•';
26. Степаненко В. Ф. Колыженков Т. В., Панарина Н. Т., Цыб А. Ф. Дозы облучения персонала при брахитерапии рака предстательной же10 ^лезы микроисточниками I //Атомная энергия. — 2007. Т. 103. —1. Вып. 2.-С. 125-128. . .
27. Степаненко В. Ф., Норец Т. А. // Радиобиология. 1978. Т. 18. Вып. 3. С. 412-417.
28. Степченков В. И., Иванов В. Д., Кириченко В. Н. // Изотопы в СССР.- 1975.-Т. 42.-С. 28.
29. Тарасов Н. Ф., Дехтяренко В. В., Ильина Т. Ф. и др. Упрощенный способ определения объема циркулирующей крови, плазмы и эритро131цитов с помощью 1-альбумина // Мед. радиол. 1977. - Т. 22. - № 2. - С. 84-86.
30. Чазов Е. И., Крамер А. А., Малышев Ю. М. и др. // Скеннирование сердца с микроагрегатами альбумина, меченными 99м-Тс // Кардиология 1973. - Т. 13. -№ 1.-С. 5-16.
31. Abdel-Wahab М. F., El-Kinawy S. A. Preparation of radioiodinated serum albumin and radioiodinated egg albumin by gel filtration // Int. J. Appl. Radiat. Isotopes 1965. - V. 16. - No. 4. - P. 267-271.
32. AckermanN. В., Lien W. M., Kondi E. S. Silverman N. A. The blood supply of experimental liver metastases. The distribution of hepatic artery and portal vein blood to "small" and "large" tumors // Surgery — 1969. V. 66.-P. 1067-1072.
33. Aldrich J. E., Jonson J. R., Use of the spinning disk technique to produse monodisperse microspheres of human serum albumin for labelling with radioisotopes // Int. J. Appl. Rad. Isotop. 1974. - V. 25. - P. 15-18.
34. Allison C. Yttrium-90 microspheres (TheraSphere and SIR-Spheres) for the treatment of unresectable hepatocellular carcinoma // Issues Emerg. Health Technol. 2007. -V. 102. - P. 1-6.
35. Anderson J. H., Goldberg J. A., Bessent R. G. et al. Glass yttrium-90 microspheres for patients with colorectal liver metastases // Radiotherapy and Oncology 1992.-V. 25.-P. 137-139.
36. Anderson J. M., Shive M. S. Biodégradation and biocompatibility of PLA and PLGA microspheres // Adv. Drag Del. Rev. 1997. - V. 28. - P. 524.
37. Andrews J. C., Walker S. C., Ackermann R. J. et al. Hepatic radioemboli-zation with yttrium-90 containing glass microspheres. Preliminary results and clinical follow-up // Eur. J. Nucl. Med. 1994. - V. 35. - P. 16371644.
38. Ariel 1. Quoted in "Highlights" of the Society of Nuclear Medicine Meeting//JAMA- 1963.-V. 183.-P. 32-33.
39. Ariel I. M., Padula G. Irradiation of the spleen by the intra-arterial administration of 90yttrium microspheres in patients with malignant lymphoma // Cancer 1972. - V. 31. - P. 90-96.
40. Balink H., Nabers J. Periumbilical uptake of Tc-99m MAA on lung perfusion scanning in a patient with superior vena cava obstruction // Clin. Nucl. Med. -2006. -V. 31. No. 4. - P. 215-217.
41. Ben Slimene M. F., Makhlouf R., Mtaallah M. H., Letaief В., Mhiri A., Chikov P., Boussen H., Rahal K. Pulmonary scintigraphy with MAA-Tc 99m perfusion in the diagnosis of pulmonary embolism // Tuni.s Med. -2001.-V. 79. No. 3. - P. 172-178.
42. Benacerraf В., Biozzi G., Halpern B. et al. Phagocytosis of heat-denaturated human serum albumin labelled with 131I and its use as a means of investigating liver blood flow // Br. J. Exp. Pathol. — 1957. V. 38. -No. 1.-P. 35-48.
43. Benjamin P. P. A rapid and efficient method of preparing 99mTc-human serum albumin: its clinical applications // Int. J. Appl. Radiat. Isotop. — 1969. -V. 20.-No. 3.-P. 187-194.
44. Benjamin P. P. Electrolitic complexation of 99mTc at constant currents: its applications in nuclear medicine // J. Nucl. Med. 1970. - V. 11.- No. 4. -P. 147-154.
45. Berger R. Способ маркирования белка изотопом 99mTc в присутствииионов олова Ii Радиобиология Радиотерапия 1972. - Т. 8. - № 3. -С. 298-305.
46. Berger R., Johannsen В. Einfache Methode zur Markierung kugelförmiger Humanserumalbuminpartikel mit 99mTc // Isotopenpraxis 1971. - V. 7. -No. 5.-P. 188-189.
47. Blottner A., Deckart H., Michel H., Feige P. Verteilungskinetische Untersuchungen an I-Mikrospharen (VKT) underschiedlicher Partikelgroße // IX Nuklear Medizinische Symposium Reinhardsbrunn, 1972.-P. 161— 168.
48. Blottner A., Feige P., Deckart H. Исследования с мечеными шаровидными частицами, участвующими в обмене // Радиобиология Радиотерапия- 1972.-Т. 13.-№ 1.-С. 121-123.
49. Bolles Т. F., Kubiatowitcs D. О:, Evans R. L. et al. 99mTc-labelled human albumin microspheres (15-30 pm). Their preparation, properties and uses // Radiopharmaceuticals and Labelled Compounds — Vienna, 1973. V. 1. -P. 151-167.
50. Brown R. F., Lindesmith L. С., Day D. E. 166-Holmium-containing glass for internal radiotherapy of tumors // Int. J. Rad. Appl. Instrum. В 1991. -V. 18.-P. 783-790.
51. Buchanan J. W., Rhodes B. A., Wagner H. N. Labeling albumin iron-free microspheres with 113mIn // J. Nucl. Med. 1971. - V. 12. - No. 9. - P. 616-619.
52. Buchanan J. W., Rhodes B. A., Wagner H. N. Labeling albumin microspheres with I13mIn // J. Nucl. Med. 1969. - V. 10. -No. 7. - P. 487-490.
53. Burdine J. A., Ryder L. A., Sonnemaker R. E. et al. 99mTc-human albuminmicrospheres (HAM) for lung imaging I I J. Nucl. Med. 1971. - V. 12. -No. 3.-P. 127-130.
54. Burdine J. A., Sonnemaker R. E., Ryder L. A., Spjut H. J. Perfusion studies with technetium-99m human albumin microspheres (HAM) // Radiology- 1970.-V. 95.-No. l.-P. 101-107.
55. Burger J. J., Tomlinson E., Mulder E. M. A., McVie J. G. Albumin microspheres for intra-arterial tumour targeting. 1. Pharmaceutical aspects // Int. J. Phann. 1985. -V. 23. - P. 333-344.
56. Burton M. A., Gray B. N., Klemp P. F. et al. Selective internal radiation therapy: distribution of radiation in the liver // Eur. J. Cancer Clin. Oncol.- 1989.-V. 25.-P. 1487-1491.
57. Callahan R. J., McKusick K. A., Lamson M. et al. Technetium-99m-human serum albumin: evaluation of a commercically produced kit // J. Nucl. Med. 1976.-V. 17.-No. l.-P. 47-49.
58. Campbell A. M, Bailey I. H., Burton M. A. Analysis of the distribution of intra-arterial microspheres in human liver following hepatic yttrium-90 microsphere therapy // Phys. Med. Biol. 2000. - V. 45. - P. 1023-1033.
59. Caster W. O., Poncelet J., Sims A. B., et al. Tissue weights of the rat // Prroc. Soc. Exp. Biol. Med. 1956. - V. 91. - P. 123.
60. Chen C. Q., Lin W., Coombes A. G. et al. Preparation of human serum albumin microspheres by a novel acetone-heat denaturation method. // J. Microencapsul. 1994.-V. 11.-No. 4.-P. 395-407.
61. Chu C. C., Campbell N. D. Scanning electron microscopic study of the hy-drolytic degradation of poly(glycolic acid) suture // J. Biomed. Mater. Res.- 1982.-V. 16.-P. 417-430.
62. Ciscato V. A., Nicolini J. O., Palcos M. C. Albumin macroaggregates labeled with indium-113m for lung scintiscanning // Int.J.Appl.Radiat.Isotopes 1969.-V. 20.-No. 2.-P. 115-119.
63. Collet J. H. Lim L. Y., Gould P. L. Gamma-irradiation of biodegradablepolyesters in controlled physical environments // Polymer reprints 1989. -V. 30.-P. 468-469.
64. Conzone S. D., Hafeli U. O., Day D. E., Ehrhardt G. J. // Preparation and properties of radioactive rhenium glass microspheres intended for in vivo radioembolization therapy // J. Biomed. Mater. Res. 1998. - V. 42. -P.617-625.
65. Cooper J. F., Stem H. S., Deland F. H. A "kit" for preparation of high specific-activity 99mTc-albumin for cisternography and blood-pool imaging // Radiology 1970,- V. 95.-No. 3.-P. 533-537.
66. Currie L. A. 11 Anal. Chem. 1968. - V. 40. - P. 586.
67. Deutsch M. E., Redmond M. L., Mead L. W. Freeze-dried kits for preparing radiopharmaceuticals from 99mTc // Radiopharmaceuticals and Labelled Compounds Vienna, 1973.-V. l.-P. 189-194.
68. Dillman L. Т., Von der Lage F. C. Radionuclide decay schemes and .nuclear parameters for use: in radiation-dose estimation // MIRD Pamphlet No. 10. Society of Nuclear-Medicine. 1975. New York. - 119 P.,
69. Divgi C. R., Lisann N. M., Yeh S. D. J., Benua R. S. Technetium-99m al-. bumin scintigraphy iri)the diagnosis.-ofprotein-losingenteropathy. // Jv : Nucl. Med. 1986: - V. 27. - P. 1710-1712.
70. Djoki D., Jankovi D., Maksin T. Radiochemical purity and particles number determinations of modified 99rnTc-macroaggregated albumin // J: Serb. Ghem. Soc. 2002. - V. 67. No. 8-9. - P. 573-579.
71. Doby T. Arteriovenous shunt measurements. Letter to the editor // J. Nucl. Med. 1973. — V. 1.4. - P. 247. ' ■ ■■
72. Doby T. Method for, the quantitative estimation of arteriovenous anastomoses in organs // Acta Med. Acad. Set. Hung. 1952. - V. 3 . - P. 201' 205. .
73. Dzuik E. New markers in lung scanning: iodine-131 albumin microspheres, indium- 113m albumin microspheres, indium- 113m iron hydroxide '// Gruzlica Choroby Pluc. 1975. -V. 43.- No. L - P. 13-20.
74. Eckelman W. C., Richards P. Instant 99mTc-DTPA // J. Nucl. Med. -1970.-V. IT. P. 761.
75. Eckelman W. C^ Technical considerations in labeling of blood elements // Semin. Nucl. Med — 1975. — V.'5. No. 1.-P. 3-10:
76. Eckelman W. C., Meinken G., Richards P. 99mTc-human serum albumin // J. Nucl. Med. 1971. V. 12.-No. 11.-P. 707-710.
77. Ehrhardt G. J. Day D. E. Therapeutic use of 90Y Microspheres // Nucl. Med. Biol. 1987. -V. 14. - P. 233-242.
78. Emmenegger N. Wurlimann A., Bucher K. A simple method of producing radioactive spheres for f the investigation of circulatory problems // Helv. Physiol. Pharmacol. Acta 1951. - V. 9. - P. 254-258.
79. Endo M., Yamazaki T., Kono S., Hiratsuka H., Akimoto T., Tanaka T., Sakakibara S. The direct diagnosis of human miocardial ischemia 131I-MAA via the selective coronary catheter // Am. Heart. J. 1970. - V. 80. -No. 4.-P. 498-506.
80. Esselbrugge H., Grootoonk J., Feijen J. y-Irradiation of poly(L-lactide) hollow fibers. // Thesis, University of Twente, The Netherlands: Biodegradable hollow fibres for controlled drug delivery, Appendix A — 1992. — P. 245-258.
81. Evans R. L., Lake S. Biodegradable radioactive particles // Pat. USA -No. 3663685.- 1972.
82. Fornusek L., Vetvika V. Polymeric microspheres as diagnostic tool for cell surface marcer tracing // CRC Crit. Rev. Therap. Drug Carrier Syst. -1986.-V. 2.-P. 137- 174.
83. Fox R. A., Klemp P. F. B., Egan G. et al. Dose distribution following selective internal radiation therapy // Int. J. Radiation Oncology Biol. Phys. -1991.-V. 21.-P. 463-467.
84. Francis G. E., Mulligan W., Wormall A. Labelling of proteins with iodine-131, sulfur-35 and phosphorus-32 // Nature 1951. - V. 167. - No. 4254. -P. 748-751.
85. Friedman W. F., Braunwald E., Morrow A. G. Alterations in regional pulmonary blood flow in patients with congenital heart disease studied by radioisotope scanning // Circulation 1968. - V. 37. - No. 5. - P. 747-758.
86. Gallahan R. J., McKusick K. A., Lamson M. et al. Technetiuin-99m-human serum albumin: Evaluation of a commercically produced kit // J. Nucl. Med. 1976.-V. 17. - No. 1. - P. 47-^9.
87. Gates V. L., Esmail A. A., Marshall K., Spies S., Salem R. Internal pair production of 90Y permits hepatic localization of microspheres using routine PET: proof of concept // J. Nucl. Med. 2011. - V. 52. - No. 1. - P. 72-76.
88. Goldberg E. P., Iwata H., Terry R. N. et al. // In T.C.J.Gribnau, J.Visser and R.J.F.Nivard (Eds.), Affinity Chromatography and Related Techniques, Elsevier Scientific, Amsterdam. 1982. - P. 375-385.
89. Goshen E., Oksman Ya., Rotenberg G., Zwas S. T. Absent Pulmonary Uptake on 99mTc MAA Perfusion Lung Scan Due to Severe Right-to-Left Shunt//Semin. Nucl. Med.-2004.-V. 34.-No. 2.-P. 157-158.
90. Grady E. D., Sale W., Nicolson W. P., Rollins C. R. Intra-arterial radioisotopes to treat cancer // Am. Surg. 1960. - V. 26. - P. 678-684.
91. Grames G. M., Jansen C., Gander M. P. et al. Safety of the direct coronary injection of radiolabeled particles // J. Nucl. Med. 1974. - V. 15. - No. 1. -P. 2-6.
92. Gray B. N., Burton M. A., Kelleher D. et al. Tolerance of the liver to the effects of yttrium-90 radiation // Int. J. Radiation Oncology Biol. Phys-1990. V. 18.-P. 619-623.
93. Gray B. N., Anderson J. E., Burton MA, et al. Regression of liver metastases following treatment with yttrium-90 microspheres // Aust. NZ J. Surg. 1992. - V. 62.-P. 105-110.
94. Grotenhuis J. M., Blatne, KubiatovitczD. O. Biodegradable radioactive particles//Pats. USA-No. 3663686. 1972.
95. Gutkowski R., Dworkin H. J. Electrolytic rapid closed system production of 99mTc-albumin // J. Nucl. Med. 1971. - V. 12.-No. 6.-P.360.
96. Hafeli U. O., Pauer G. J., Unnithan J., Prayson R. A. Fibrin glue system for adjuvant brachytherapy of brain tumors with 188Re and I86Re-labeled microspheres // Eur. J. Pharm. Biophann. 2007. - V. 65. - No. 3. - P. 282-288.
97. Hafeli U. O., Xia J., Li S., Dong M., Yin D., Wang Y. Radiolabelling of poly(histidine) derivatized biodegradable microspheres with the 188Re tri-carbonyl complex 188Re(C0)3(H20)3.+ // Nucl. Med. Commun. 2005. -V. 26. No. 5.-P. 453-458.
98. Hafeli U. O., Casillas S, Dietz D. W. et al. Hepatic tumor radioemboliza1 fiA 1 COtion in a rat model using radioactive rhenium ( Re/ Re) glass microspheres // Int. J. Radiation Oncology Biol. Phys. 1999. - V. 44. - P. 189
99. Hafeli U. O., Roberts W. K., Pauer G. J. et al. Stability of biodegradable radioactive rhenium (Re-186 and Re-188) microspheres after neutron acti-vation//AppL R^adiat. Isot.-200;l.- V. 54V-Pi 869-879. •
100. Г19: HäfeliTJ. O:, Sweeney S. M., Beresford B. A. et al. Magnetically directed poly(lactic acid) 90Y-microspheres: Novel agents for targeted intracavitary/ : radiotherapy // J. Biomed. Res. 1994,- V. 28. -P. 901-908.
101. Halaby IT. Bakheet S. M., Shabib S., Powe J. E., Al Mehaidib A., Nazer H. 99raTc-human serum albumin scans in children with protein-losing enteropathy // J. Nucl. Med. 2000. - V. 41. - No. 2. - P. 215-219.131 1 • " . .
102. HallabaE., Drouer J. ^Labelling of human serum albumin by, the iodi-nemonochloride and chloramine-T methods //Int. J; Appl. Radiat. Isotopes 1971.-V. 22.- P. 46-49. . .
103. Hamami M. E., Poeppel T. D., Müller S.,Heusner T.,BockischA., Hil-gard P., Antoch G. SPECT/CT with 99mTc-MAA in radioembolization with 90Y,microspheres in patients with hepatocellular cancer // J. Nucli Med. 2009. - V. 50. - No. 5. - P. 688-692. '
104. HaneyT. A., Bruno G. A., Bartlet J. M. Tc-99m albumin aggregates with stannous tin and: denaturated albumin // Pats; USA No: 3872226. - 1975.
105. Henn G. G., Birkinshaw C., Buggy M., Jones E. A. Comparison of the effects of y-irradiation and ethylene oxide sterilization on the properties of compression moulded poly-d, 1-lactide // J. Mater. Sci. Mat. Med. 1996. -V. 7.-P. 591-595.
106. Herba M. J., Illescas F. F., Thirlwell M. P. et al. Hepatic malignancies: improved treatment with intraarterial Y-90 // Radiology 1988. - V. 169. -P. 311-314.
107. Herzmann H., Herzmann A. Zur Markierung von Humanserumalbumin mit technetium-99m//Isotopenpraxis — 1965. -V. 1. No. 3. - P. 130.
108. Hildebrand P., Henze E., Lietzenmayer R., Schoetensack M. Localiution of enteral protein loss by 99m-technetium-albumin-scintigraphy. Eur. J Nucl. Med. 1989. - V. 15. - P. 217-218.
109. Hnatowich D. G., Schlegel P. Albumin microspheres labeled with Ga-67 by chelation: concise communication // J. Nucl. Med. 1981. - V. 22. -No. 7. -'P. 623-626.
110. Ho S., Lau W. Y., Leung T. W. T. et al. Clinical evaluation of the partition model for estimating radiation doses from yttrium-90 microspheres in the treatment of hepatic cancer // Eur. J. Nucl. Med. 1997. - V. 24. - P. 293298.
111. Ho S., Lau W. Y., Leung T. W. T. et al. Partition model for estimating radiation doses from yttrium-90 microspheres in treating hepatic tumours // Eur. J. Nucl. Med. 1996. - V. 23. - P. 947-952.
112. Ho S., Lau W. Y., Leung T. W. T. et al. Tumour-to-normal ratio of 90Y microspheres in hepatic cancer assessed with 99mTc macroaggregated albumin // Brit. J. Rad. 1997. - V. 70. P. 823-828.
113. Ho S., Lau W. Y., Leung T. W. T., Johnson P. J. Internal radiation therapy for patients with primary or metastatic hepatic cancer // Cancer — 1998. — V. 83.-P. 1894-1907.
114. Honda T., Kazem J., Croll M. N., Brady L. Instant labelling of macroand microaggregated albumin with 99mTc // J. Nucl. Med. 1970. - V. 11. -No. 10.-P. 580-585.
115. Houle S. H., Yip T. K., Shepherd F.A. et al. Hepatocellular carcinoma: Pilot trial of treatment with Y-90 microspheres // Radiology 1989.- V.172.-P. 857-860.
116. Huberty J: P. Long shelf-life 99iilTc-MAA lung particle kits // J: Nucl. Med 1974.-V.: 15.-No; 6:-p;464. • ; ; /
117. Hugli H. The labelling of proteins with I // Radioisotope Techniques in the Study of Protein metabolism IAEA, Vienna, 1965. - P. 7-28.
118. Hunt A. P.,FrierM., Johnson R. A., Berezenko S., Perkins A.C., Preparation of Tc-99m-macroaggregated albumin from recombinant hu-, man albumin for lung perfusion imaging // Eur. J. Pharrri. Biopharni. -2006. V. 62. — No. 1. — P. 26-31.
119. Hussain R., Maseeh-uz-Zaman, Khan S. A., Ahmad M. N. Extra corrected. pulmonary uptake of Tc-99m-MAA perfusion lung scan as a result of right to left intra cardiac shunt // J. Pak. Med. Assoc. 2006. - V. 56. -No. 5 . - P. 241-422. .
120. Ilium L., Davis S. S. Effect of the nonionic surfactant poloxamer 338 on the fate and deposition of polystyrene microspheres following intravenous administration // J. Pharm. Sci. 1983.-V. 72. - P. 1086-1089.
121. Ilium L., Jones P. D. E. Attachment of monoclonal antibodies to micro. spheres In Drug and Enzime Targeting, PTA // Methods in Enzymology,
122. Orlando. 1985. - V. 112. - P. 67-84.
123. Ingold J.; Reed G., Kaplan H., Bagshaw M. Radiation hepatitis // Am. J. Roentgenol. Radium Ther. Nucl. Med. 1965. - V. 93. - P. 200-208.
124. Jalil R., Nixon J.R. Microencapsulation using poly(L-lactic acid) IV: Release properties of microcapsules containing phenobarbitone II J. Microen-capsul. 1990: - V. 7. - P. 53-66.
125. Jay M., Khare S. S., Mumper R. S., Ryo U. Y. Microencapsulation of activable radiotherapeutic agents // Biological and Synthetic Membranes 1989. - V. 292. - P. 293-300.1 S8
126. Jeong J. M., Chung J. K. Therapy with Re-labeled radiopharmaceuticals: an overview of promising results from initial clinical trials. // Cancer. Biother. Radiopharm. 2003. -V. 18. - No. 5. - P. 707-717.
127. Jones A.G., Davison A. The chemistry of technetium I, II, III and IV // Ini. J. Appl. Radiat. Hot. 1982. - V. 33. - P. 867.
128. Kaibori M., Ha-Kawa S. K., Kamiyama Y. Usefulness of TC-99M GSA liver scintigraphy for the assessment of recurrent hepatitis C after living-donor liver transplantation: a case report // Transplant. Proc. 2008. - V. 40.-No. 8.-P. 2837-2839.
129. Kanke M., Simmons G. H., Weiss D. L. et al. Clearance of 144Ce labeled microspheres from blood and distribution in specific organs foloowing intravenous polymer microspheres // J. Pharm. Sci. 1980. - V. 69. - P. 755-762.
130. Kawashita M., Miyaji F., Kokubo T. et al. Surface structure and chemical durability of P+-implanted Y203-Al203-Si02 glass for radiotherapy of cancer // J. Non-Cryst. Solids 1999. - P. 255. - P. 140-148.
131. Kennedy A. S., Dezarn W. A., McNeillie P., Coldwell D., Nutting C.,
132. King E. G., Wood D. E., Morley T. P. The use of macroaggregates of ra-dioiodinated human serum albumin in brain scanning // Canad. Med. Ass. J. 1966. -V. 95. - No. 9. - P. 381-389.
133. Kitani K., Taplin G. V. Biliary excretion 99mTc-albumin microaggregate degradation products (A method for measuring Kupffer Cell digestivefunction) // J. Nucl. Med. 1972. - V. 13. - No. 4. - P. 260-265.• j ? j
134. Kitani K., Taplin G. V. Catabolic pathway differences between " I- and 99mTc-labeled albumin colloids and microaggregates // J. Nucl. Med.- 1972.-V. 13.-No. 5.-P. 313-317.
135. Kitani K., Taplin G. V., Morinari H. Rapid liver accumulation of human serum albumin in sensitized dogs // J. Nucl. Med. 1972. - V. 13. - No. 6. -P. 442-443.
136. Knesaurek K., Machac J., Muzinic M., DaCosta M., Zhang Z., Heiba S.
137. Quantitative comparison of yttrium-90 (90Y)-microspheres and techne-tium-99m (99mTc)-macroaggregated albumin SPECT images for planning 90Y therapy of liver cancer // Technol. Cancer Res. Treat. 2010. - V. 9. -No. 3.-P. 253-262.
138. Krejcarck G. E., Bradford K. L., Bolles T. F. Instant labeling human serum albumin microspheres // J. Nucl. Med. 1974. - V. 15. - No. 6. - P. 509.
139. Kurohara S. S., Casarett G. V. Effects of single thoratic X-ray exposure in rats // Radiat. Res. 1972. - V. 52. - No. 2. - P. 263-290.
140. Lambert B., Bacher K., Defreyne L. Rhenium-188 based radiopharmaceuticals for treatment of liver tumours // J. Nucl. Med. Mol. Imaging. 2009. -Y. 53.-No. 3-P. 305-310.
141. Lau W. Y., Ho S., Leung T. W. T. et al. Selective internal radiation therapy for nonresectable hepatocellular carcinoma with intraarterial infusion of 90yttrium microspheres // Int. J. Radiation Oncology Biol. Phys. -1998.-V. 40.-P. 583-592.
142. Lau W. Y., Leung W. T., Ho S. et al. Treatment of inoperable hepatocellular carcinoma with intrahepatic arterial yttrium-90 microspheres: a phase I and II study // Br. J. Cancer 1994. - V. 70. - P. 994-999.
143. Lee H. B., Blaufox M. D. Blood Volume in the Rat. // J. Nucl. Med. -1985.-V. 26.-No. 1.- P. 75.
144. Leung W., Lau W., Ho S. K. W. et al. Measuring lung shunting in hepatocellular carcinoma with intrahepaticarterial technetium-99m macroaggre-gated albumin // J. Nucl. Med. 1994. - V. 35. - P. 70-73.
145. Licinska I., Lucka B., Pszona B. et al. Biological and chrmical investiga' tions of I-albumin macroaggregates used for lung scintigraphy // J. Nucl. Med. 1972.-V. 11.-No. 1.-P. 51-58.
146. Liepe K., Brogsitter C., Leonhard J., Wunderlich G., Hliscs R., Pinkert J., et al. Feasibility of high activity rhenium-188 microspheres in hepatic embolization // Jap. J. Clin. Oncol. 2007. - V. 37. - P. 942-950.
147. Lin M. Radiation pneumonitis caused by yttrium-90 microspheres: radiologic findings // Am. J. Rad. 1994. - V. 162. - P. 1300-1302.
148. Lin M. S., Winchell H. S., Shipley B. A. Use of Fe(II) alone for technetium labeling of albumin J. Nucl. Med. - 1971. - V. 12. - No. 5. - P. 204-211.
149. Link K. H., Kornman M., Formentini A. et al. Regional chemotherapy of non-resectable liver metastases from colorectal cancer — literature and institutional review // Langenbeck's Arch. Surg. 1999. - V. 384. - P. 344353.
150. Lutsker L. G., Peres L. A. Radioactive embolization from upper-extremity thrombophlebitis // J. Nucl. Med. -1975. V. 16. - No. 3. - P. 241-242.
151. Lyster D. M., Scott J. R., Mincey E. K,, Morrison R. T. Preparation of "mTc-Sn-MAA kit for use in nuclear medicine // J. Nucl. Med. 1974. -V. 15.-No. 3.-P. 198-199.
152. Mani R. S., Balakrishnan S. A. Studies on the purity of 5ICr labeled human serum albumin // Isotopenpraxis 1969. - V. 5. - No. 7. - P. 241-247.
153. Mantravedi R. V. P., Spigos D. G., Tan W. S., Felix E. L. Intraarterial yt-trium-90 in the treatment of hepatic malignancy // Radiology 1982. - V. 142.-P. 783-786.
154. Mayron L. G., Kaplann E. Comparison of four techniques labeling albumin microspheres with technetium-99m // Int. J. Nucl. Med. Biol. 1975. -V. 2.-No. 2. P. 74-80.'
155. McFarlane A. S. Labelling of plasma proteins with radioactive iodine // Biochem. J.- 1956.-V. 62.-No. l.-P. 135-143.
156. McFarlane A. S. Efficient trace-labeling of proteins with iodine // Nature 1958.-V. 181.-No. 4627.-P. 53.
157. MCNP a general Monte-Carlo N-particles transport code. LA-12625-M. 1997.
158. Michel H., Münze R. Herstellung markierte sphärischer Teilchen aus Humanserumalbumin im Grosenbereichm von 0;3-3 Jim fur die Untersuchung des reticuloendothelialen systems // Isotopenpraxis 1973. — V. 9. - No. 3. - P. 94-97.
159. Millar A. M., McMillan L., Hannan W. J., Emmett P. C., Aitken R. J. The preparation of dry, monodisperse microspheres of \"mTc. albumin for lungventilation imaging Int. J. Appl. Rad.Isotop. 1982. - V. 33. - No. 12. -P. 1423-1426.
160. Mishkin F. S., Brashear R. E. Pulmonary and systemic blood pressure responses to large doses of albumin microspheres //J. Nucí. Med. — 1971.— V. 12.-No. 5.-P. 251-252.
161. Miyajima M., Koshika A., Okada J. et al. Effect of polymer crystallinity on papaverine release from poly(L-lactide acid) matrix // J. Control. Release -1997.-V. 49.-P. 207-215.
162. Miyajima M., Koshika A., Okada J., Ikeda M. Mechanism of drug release from poly(L-lactic acid) matrix containing acidic or neutral drugs // J. Control. Release 1999. - V. 60. - P. 199-209.
163. Mohr D., Wolff M., Kissel T. Gamma irradiation for terminal sterilization of 17|3-estradiol loaded poly(DL-lactide-co-glycolide) microparticles // J. Control. Release 1999. - V. 61. - P. 203-217.
164. Montanari L., Costantini M., Signoretti E. C. et al. Gamma irradiation effects on poly(DL-lactictide-co-glycolide) microspheres // J. Control. Release 1998. - V. 56. - P. 219-229.
165. Morandi F., Daniel G. B., Gompf R. E., Bahr A. Diagnosis of congenital cardiac right-to-left shunts with 99mTc-macroaggregated albumin // Vet. Radiol. Ultrasound. 2004. - V. 45. - No. 2. - P. 97-102.
166. Müller J. H., Rossier P. H. A new method for treatment of cancer of the lungs by means of artificial radioactivity (Zn-63 and Au-198) // Acta Radiol. 1951. - V. 35.-P. 449.
167. Müller T., Andersen K. W. Quality control problems with particle suspensions for lung scintigraphy // Radiopharmaceuticals and Labelled Compounds. Proc. of a symp. Vienna, 1973. - V. 2. - P. 77—78.
168. Mumper R. J., Jay M. Poly(L-lactic acid) microspheres containing neu-tron-activatable holmium-165: A study of the physical characteristics of microspheres before and after irradiation in a nuclear reactor // Pharm. Res. 1992.-V. 9.-P. 149-154.
169. Mumper R. J., Ryo U. Y., Jay M. Neutron activated holmium-166-Poly(L-lactic acid) microspheres: A potential agent for the internal radiation therapy of hepatic tumours // J. Nucl. Med. 1991. - V. 32. - No. 21. - P. 2139-2143.
170. Münze R., Guthert A., Johannsen B. Investigation of the oxidation of serum albumin iodide // Isotopenpraxis 1968. — V. 4. - No. 9. - P. 376377.
171. Neves M., Kling A., Oliveiral A. Radionuclides used for therapy and suggestion for new candidates // J. Radioanalytical Nucl. Chem. 2005. - V. 266. - No. 3.-P. 377-384.
172. Novak D., Wiebe V. Reduction of radietion exposure in lang scanning using 99mTc-human albumin microspheres (99mTc-HAM) // "Proc.of the Ilnd Internat.Symp. 310onNucl.Med.", Karlovy Vary, Czechoslovakia. -1971.-P. 317-321.
173. O' Donnell P. B., McGinity J. W. Preparation of microspheres by solvent evaporation technique // Adv. Drug Del. Rev. 1997. - V. 28. - P. 25-42.
174. Oehme L, Kotzerke J. Radiobiological considerations for radioemboliza-tion with 188Re-microspheres // Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging. 2009. -V. 36.-No. 2.-P. 322-325.
175. Oommen R., Kurien G., Balakrishnan N., Narasimhan S. Tc-99m albumin scintigraphy in the localization of protein loss in the gut. Clin. Nucl. Med. 1992.-V. 17.-P. 787-788.
176. Orlov M., Stepanenlco V., Takada J., Hoshi M. // Proc. of 7-th Hiroshima International Symposium "Consequences of the Semipalatinsk nuclear tests". Hiroshima. Japan. 2002. Hiroshima Univ. 2002. - P. 27-31.
177. Osada H., Machida K., Honda N. Quantification of regional pulmonary flow with 99mTc-MAA SPECT and cine phase contrast MR imaging // Annals Nucl. Med. 2002. - V. 16., No. 6.,- P. 423-429.
178. Parry L. 99m-Technetium labeled macroaggregated human serum albumin pharmaceutical // Pats. USA No. 1389809. - 1975.
179. Pasqualini R., Plassio G., Sosi S. The preparation of albumin microspheres. J. Biol. Nucl. Med. 1969. - V. 13. - No. 1-2. - P. 80-84.
180. Persson R. B. R., Liden K. 99mTc-labelled human serum albumin: a study of a labeling procedure // Int. J. Appl. Radiat. Isotopes 1969. - V. 20. -No. 4.-P. 241-248.
181. Peters T. Jr . Serum albumin // Adv. Protein Chem. 37, P 846-853.
182. Poe N. D. Cardiodinamic effects of intracoronary artery injection of albumin macroaggregates // J. Nucl. Med. 1970. - V. 11.- No. 6.1. P. 350-351.
183. PoeN. D. The effects of coronaiy arterial injection of radioalbumin macro-aggregates on coronary hemodynamics and myocardial function J. Nucl. Med. - 1971.-V. 12.-No. 11.-P. 724-731.
184. Poe N. D., Dore E. K., Wilson A. S., Taplin G. V. Inhalation-perfusion lung scanning in diagno sing pulmonary embolism J. Nucl. Med. - 1969. -V. 10.-No. 6.-P. 427-428.
185. Ponto J. A. Effect of temperature on the radiolabeling of Macroaggregated albumin with technetium Tc-99m // J. Am. Pharm. Assoc. (Wash). 2000. -V. 40.-No. l.-P. 87-89.
186. Porter W. C., Dworkin H. J., Gutkowski R. F. The effect of earner technetium in the preparation of 99mTc-human serum albumin // J. Nucl. Med. — 1976.-V. 17.-No. 8.-P. 704-706.
187. Prinzmetal M. Simkin B. Bergman H. L. et al. Studies of the coronary circulation // Am. Heart J. 1947. - V. 33. - P. 420-422.
188. Przyborowski M., Lachnik E., Wisa L, Licinska I. Praparation of HSA microspheres in a one step thermal denaturation of protein aerosol carried in gas-medium // Eur. J. Nucl. Med. 1982. - V. 7. - P. 71-72.
189. Quinn J. L., Whitley J. E., Hudspeth A. S., Prichard R. W. Early clinicalapplications of lung scintiscanning // Radiology 1964. - V. 82. - No. 2. -P. 315-317.
190. Raban P., Gregora V., Sindelar J., Alvares-Cervera J. Two alternate techniques of labeling iron-free albumin microspheres with 99mTc and 113mIn // J.Nucl. Med. 1973.-V. 14.-No. 6.-P. 344-345.
191. Raban P., Sindelar J., Santora J., Gregora V. Preparation, labeling and testing of albumin microspheres not containing iron. // 1973 Proc. Of the IInd Inter. Symp. on Nucl. Med. Karlovy Vary, Czechoslovakia 1971.-P. 361-367.
192. Ramachandran L. K. Protein-iodine interaction // Chem. Rev. 1956. -V. 56.-No. 2.-P. 199-218.
193. Rhodes B. A., Considerations in the radiolabeling of albumin // Semin. Nucl. Med. 1974. - V. 4. - No. 3. - P. 281-293.
194. Rhodes B. A., Stern H. S. A rapid "kit" method for labeling albumin microspheres with 99mTc // J. Nucl. Med. 1969. - V. 10. - No. 6. - P. 368.
195. Rhodes B. A., Stern H. S., Buchanan J. A. et al. Lung scanning with 99mTc-microspheres // Radiology 1971. - V. 99. - No. 3. - P. 613-621.
196. Rhodes B. A., Zolle I., Buchanan J. W., Wagner H. N. Radioactive albumin microspheres for studies of the pulmonary circulation // Radiology — 1969. V. 92. - P. 1453-1460.
197. Rhodes B. A., Zolle I., Wagner H. N. Properties and uses of albumin microspheres // Clin. Res. 1968. - V. 16. - P. 245.
198. Riaz A., Lewandowski R. J., Kulik L., Salem R. Yttrium-90 radioembolization using TheraSphere in the management of primary and secondaryliver tumors // Q. J. Nucl. Med. Mol. Imaging. 2009. - V. 53. - No. 3. -P. 311-316.
199. Richards P. A survey of the production at Brookhaven National Laboratory of radioisotopes for Medical research // Trans. 5th Nuclear Congress, 7th Int. Electronic Nuclear Symposium. Rome. 1960. - V. 2. - P. 223-244.
200. Richmand D. R., Yipintsoi T., Coulam C.M., Titus J. L., Bassingthwaighte J.B. // Macroaggregated albumin studies of the coronary circulation in the dog J.NucLMed.- 1973.-V. 14.-No. 3.-P. 129-134.
201. Rodrigues J., MacDonald N. S., Taplin G. V. Preparation of U3nTn-albumin aggregates for lung and liver scanning // J. Nucl. Med. — 1969. V. 10. -No. 6.-P. 368-369.
202. Rosa U., Pennisi E., Bianchi R. et al. Chemical and biological effects of iodination of human albumin // Biochim. Biophis. Acta. 1967. - V. 133. -No. 3.-P. 486-498.
203. Rosenthall L., Aquayo A., Stratford J. A clinical assessment of carotid and vertebral artery injection of macroaggregates radioiodinated albumin (MARIA) for brain scanning // Radiology 1966. - V. 86. - No. 3.-P. 499-505.
204. Rosenthall L., Greyson N. D. Observations on the use 99mTc albumin macroaggregates for detection of thrombophlebitis // Radiology 1970. -V. 94.-P. 413-416.
205. Rubin P., Casarett G. A direction for clinical radiation pathology // Front. Radiation Ther.Onc. 1972. - No. 6. - P. 1-16.
206. Salem R., Hunter R. D. Yttrium-90 microspheres for the treatment ofhepatocellular carcinoma: a review // Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. -2006.-V. 66.-P. S83-S88.
207. Sangro B., Bilbao J. I., Inarrairaegui M., Rodriguez M., Garrastachu P., Martinez-Cuesta A. Treatment of hepatocellular carcinoma by radioembolization using 90Y microspheres // Dig Dis. 2009. - V. 27. - No. 2. -P. 164-169.
208. Sasaki N., Shiomi S., Iwata Y., Nishiguchi S., Kuroki T., Kawabe J., Ochi H.Clinical usefulness of scintigraphy with 99mTc-galactosyl-human serum albumin for prognosis of cirrhosis of the liver // J. Nucl. Med. 1999. - V. 40.-No. 10.-P. 1652-1656.
209. Schakenraad J. M., Oosterbaan J. A., Nieuwenhuis P. et al. Biodegradable hollow fibres for the controlled release of drugs // Biomaterials 1988. -9.-P. 116-120.
210. Scheele J., Altendorf-Hofmann A. Resection of colorectal liver metastases // Langenbeck's Arch. Surg. 1999. - P. - V. 384. - P. 313-327.
211. Scheffel U., Rhodes B. A., Natarajan T. K., Wagner H. N. Albumin microspheres for study of the reticuloendothelial system // J. Nucl. Med. -1972. -V. 13.-No. 7.-P. 498-503.
212. Schubiger P. A., Beer H. F, Geiger L. et al. 90Y-resin particles-animal experiments on pigs with regard to the introduction of superselective embolization therapy // Nucl. Med. Biol. 1991.- V. 18. - P. 305-311.
213. Senyei A., Widder K., Czerlinski G. Magnetic guidance of drug-carrying microspheres // J. Appl. Phys. 1978. - V. 49. - P. 3578-3583.
214. Shepherd F. A., Rotstein L. E., Houle S. et al. A phase I dose escalation trial of yttrium-90 microspheres in the treatment of primary hepatocellular carcinoma // Cancer 1992. - V. 70. - P. 2250-2254.
215. Shields E., Thcker T., Meyers W., Chung C. J. Visualization of protein-losing enteropathy in infantile systemic hyalinosis with Tc-99m HSA after albumin challenge // Clin. Nucl. Med. -1996. -V. 21. P. 415-416.
216. Shukla J., Bandopadhyaya G. P., Varma I. K. 188Rhenium(V)-dimercaptosuccinic acid loaded poly(lactic-co-glycolic)acid microspheresfor targeted radiotherapy: production and effectivity // Pharmazie. 2005.t- V. 60. No. 8. - P. 583-587.
217. Sintzel M. B., Merkli A., Tabatabay C., Gurny R. // Influence of irradiation sterilization on polymers used as drug carriers-A review // Drug Develop. Ind. Pharm. 1997. -V. 23. - P. 857-878.
218. Smakhtin L. A. // J.Rad.Anal.Nucl.Chem. 1986. - V. - 99. - № 1. - P. 171-180.
219. Spencer R. P. Applied principles of radiopharmaceutical use in therapy // Nucl. Med. Biol. 1986. - V. 13. - P. 461-463.
220. Suga K., Kawakami Y., Zaki M., Yamashita T., Matsumoto T., Matsunaga N. Pulmonary perfusion assessment with respiratory gated 99mTc macro-aggregated albumin SPECT: preliminary results // Nucl. Med. Commun. -2004.-V. 25.-No. 2.-P. 183-193.
221. Suga K., Kume N., Hirabayashi A., Kishimoto K., Hara A., Matsunaga N.
222. Crossed cerebellar diaschisis demonstrated by brain SPECT with Tc-99m MAA in a child with an intracardiac right-to-left shunt // Clin. Nucl. Med. 1999. - V. 24. - No. 4. - P. 282-283.
223. Suzuki C., Higaki S, Nishiaki M., at al. HSA-Dscintigraphy in the diagnosis of protein-losing gastroenteropathy due to secondary amyloidosis // J. Gastroenterol. 1997. - V. 32. - P. 78-82.
224. Swan H., Nelson A. W. Blood volume measurement concepts and technology//;. Cardiovas. Surg. 1971. - V. 12.-No. 5.-P. 389-401.
225. Szymendera J., Mioduszewska O., Licinska I. et al. Pathologic changes in the lungs of mice following injection of human serum albumin microspheres//J. Nucl. Med. 1977.-V. 18.-No. 5.-P. 478-482.
226. Takeda H., Takahashi T., Ajitsu S. at al. Protein-losing gastroenteropathy detected by technetium-99m-labeled human serum albumin // Am. J. Gastroenterol. 1991. - V. 86. - P. 450-453.
227. Taplin G. V., Johnson D. E., Dore E. K., Kaplan H. S. Organ visualization by photoscanning using micro- and macroaggregates of radioalbumin // Medical Radioisotope scanning IAEA, Vienna 1964. - V. 2. - P. 3-31.
228. Taplin G. V., Johnson D. E., Dore E. K., Kaplan H. S. Suspensions of radioalbumin aggregates for photoscanning the liver, spleen, lung and other organs // J. Nucl. Med. 1964. - V. 5. - No. 4. - P. 259-275.
229. Taplin G. V., Johnson D. E., Kennady J. C. et al. Aggregated albumin labeled with various radioisotopes // Radioactive Pharmaceuticals USAEC, 1966.-P. 525-552.
230. Tian J. H., Xu B. X., Zhang J. M. et al. Ultrasoundguided internal radiotherapy using yttrium-90-glass microspheres for liver malignancies // J. Nucl. Med. 1996. - V. 37. - P. 958-963.
231. Tibblin G., Bergentz S. E., Bjure J., Wilhelmsen L. Hematocrit plasma, protein, plasma volume and viscosity in early hypertensive disease // Am. Heart J. 1966.-V. 72.-No. l.-P. 165-176.
232. Tomlinson E. Microsphere delivery systems for drug targeting and controlled release // Int. J. Pharm. Technol. Prod. Manuf. 1983. - V. 4. - P. 49-57.
233. Tomlinson E., Burger J. J., McVie J. G., Hoefnage K. // In: J.M.Anderson, S.W.Kim (Eds.), Resent Advances in Drug Delivery Systems, Plenum, New York. 1984. - P. 199-208.
234. Tomura N., Kato K., Hirano H. et al. Chemoembolization of maxillary tumors via the superficial temporal artery using a coaxial catheter system // Radiation Med. 1998. - V. 16. - P. 157.
235. Torquato S. Random heterogeneous materials microstructure and macroscopic properties. Springer. New York. 2002. - 202 p.
236. Tucker D, et al. // American Nuclear Society Annual Meeting. Los Angeles, CA. Trans Am Nucl Soc. 1958. - P. 160.
237. Turner J. H., Claringbold P. G., Klemp P.F.B. et al. 166Ho-microsphere liver radiotherapy: a preclinical SPECT dosimetry study in the pig // Nucl. Med. Comm. 1994.-V. 15.-P. 545-553.
238. Turton D. R., Brady F., Pike V.W. et al. Preparation of human serum methyl-1 lC.methylalbumin microspheres and human serum [methyl1 lC.methylalbumin for clinical use. // Int. J. Appl. Radiat. Isot. 1984. -V. 35.-No. 5.-P. 337-44.
239. Vergote I., Larsen R. H., de Vos L. et al. Therapeutic efficacy of the aemitter 21 lAt bound on microspheres compared with 90Y and ~P colloids in a murine intraperitoneal tumor model // Gynecol. Oncol. 1992. — 47. — P. 366-372.
240. Vetter H, Falkner R, Heumayr A. The disappearance rate of colloidal radiogold from the circulation and its application to the estimation of liver blood flow in normal and cirrotic subjets // J. Clin. Invest. 1954. - V. 33. -No. 11.-P. 1594-1602.
241. Vicent W. R., Goldberg S. J., Desilets D. Fatality immadiatly following rapid infusion of macroaggregates of 99mTc-albumin (MAA) for lung scan //Radiology 1968.-V. 91.-No. 6.-P. 1181.
242. Visscher G. E., Robison R. L., Maulding J. W. et al. Note: Biodégradation of and tissue reaction to poly(DL-lactide) microcapsules // J. Biomed. Mater. Res. 1986. - V. 20. - P. 667-676.
243. Wagner H. N., Lio M., Hornick R. B. et al. Studies of the reticuloendothelial system (RES). II. Changes in the phagocytic capacity of the RES in the patient with certain infections // J. Clin. Invest. — 1963. V. 42. - No. 3. -P. 427-434.
244. Wagner H. N., Lio M., Scheffel U., Jabbour B. Studies of the reticuloendothelial system (RES). I. Measurement of the phagocytic capacity of the RES // J. Clin. Invest. 1963. - V. 42. - No. 3. - P. 417-426.
245. Wagner H. N., Sabiston D. C., McAfee J. G. et al. Diagnosis of massive pulmonary embolism in man by radioisotope scanning // N. Eng. Med. Assoc.-1964.-V. 271.-No. 8.-P. 377-384.
246. Wagner H. N., Stem H. S., Rhodes B.A . et al. Design and development of new radiopharmaceuticals // Medical Radioisotope Scintigraphy, IAEA- Vienna, 1969. V. 2. - P. 3-24.
247. Wang H. Y., Wang H. J., Jia J. D., Li C. L., Yang J. G., Li S. M. Hepatopulmonary syndrome: a study using 99mTc-MAA lung perfusion scan // Zhonghua Gan. Zang. Bing. Za. Zhi. 2006. - V. 14. - No. 2. - P.149.150.
248. Wang S. J., Lin W. Y., Chen M. N. et al. Intratumoral injection of rhe-nium-188-microspheres into an animal model of hepatoma // J. Nucl. Med. 1998.-V. 39.-P. 1752-1757.
249. Wang S. J., Lin W. Y., Chen M. N. et al. Rhenium-188 microspheres: a new radiation synovectomy agent // Nucl. Med. Commun. — 1998. — V. 19.-No. 5.-P. 427—433.
250. Wang Y. F., Chuang M. H., Chiu J. S., Cham T. M., Chung M. I. On-site preparation of technetium-99m labeled human serum albumin for clinical application // Tohoku. J. Exp. Med. 2007. - V. 211. - No. 4. - P. 379385.
251. Watanabe N., Oriuchi N., Endo K. et al. Yttrium-90-labeled human macro-aggregated albumin for internal radiotherapy: combined use with DTPA // Nucl. Med. Biol. 1999. - V. 26. - P. 847-851.
252. Wattendorf U., Merkle H. P. PEGylation as a tool for the biomedical engineering of surface modified microparticles // J. Pharm. Sei. 2008. - V. 97.-P. 4655-4669.
253. Widder K. J., Senyei A. E., Scarpelli D. G. Magnetic microspheres: a model system for site specific drug delivery in vivo // Proc. Soc. Exp. Biol. 1978. - V. 158. - P. 141-146.
254. Wieland H. C., Grames G. M., Jansen C., Davidson T. An efficient method for fractional labeling of microspheres // J. Nucl. Med. 1974. -V. 15.-No. 9.-P. 808-809.
255. Wollner I., Knutsen C., Smith P. et al. Effects of hepatic arterial yttrium-90 glass microspheres in dogs // Cancer 1988. -V. 61. - P. 1336-1344.
256. Wunderlich G., Drews A., Kotzerke J. A kit for labeling of 188Re. human serum albumin microspheres for therapeutic use in nuclear medicine // Appl. Radiat. Isot. -2005. V. 62.-No. 6.-P. 915-918.
257. Wunderlich G., Pinkert J., Andreeff M. et al. Preparation and biodistribution of rhenium-188 labeled albumin microspheres В 20: a promising new agent for radiotherapy // Appl. Radiat. Isotopes -2000. V. 52. - P. 63-68.
258. Wunderlich G., Pinkert J., Stintz M., Kotzerke J. Labeling and biodistribution of different particle materials for radioembolization therapy with 188Re // Appl. Radiat. Isot. 2005. - V. 62. - No. 5. - P. 745-750.
259. Yamada H., Johnson D. E., Griswold M. L., Taplin G. V. Radioalbumin macroaggregates for reticuloendothelial organ scanning and function assessment//! Clin. Med. 1957.-V. 10.-No. 6.-P. 453^154.
260. Yamaguchi Y. Dose Conversion Coefcients for External Photons Based on ICRP 1990 Recommendations // J. Nucl. Sci. Technol. 1994. - V. 31. -No. 7.-P. 716-725.
261. Yan Z. P., Lin G., Zhao H. Y., Dong Y. H. An experimental study and clinical pilot trials on yttrium-90 glass microspheres through the hepatic artery for treatment of primary liver cancer // Cancer 1993. — V. 72. - P. 3210-3215.
262. Yeates D. B., Warbick A., Aspin N. Production of 99mTc labelled albumin microspheres for lung clearance studies and inhalation scanning // Int. J. Appl. Radiat. Isotopes 1974. -V. 25. - No. 5. - P. 578-580.
263. Yorke E. D., Jackson A., Fox R. A. et al. Can current models explain the lack of liver complications in Y-90 microsphere therapy? // Clin. Cancer Res. 1999. - V. 5. - P. 3024s-3030s.
264. Yoshida 1., Yoshihiko, Sakamoto H., at al. Technetium-99m serum albumin measurement of gastrointestinal protein loss in a subtotal gastrectomy patient with giant hypertrophic gastritis // Clin. Nucl. Med. — 1987. V.12.-P. 773-776.
265. Zeon S. K., Ryu J. G., Park C. K., Yoo Y. S., Jung D. S., Lee J. K. 99mTc-MAA Pulmonary Perfusion Scan in the Canine Single Lung Transplant // Korean J. Nucl. Med. 1997. - V. 31.-No. 3. - P. 365-371.
266. Zimmerman A., Schubiger P. A., Mettler D. et al. Renal pathology after arterial yttrium-90 microsphere administration in pigs. A model for superselective radioembolization therapy // Invest. Rad. 1995. - V. 30. — P. 716-723.
267. Zolle I., Hosain F., Rhodes B. A., Wagner H. N. Human serum albumin millimicrospheres for studies of the reticuloendothelial system // J. Nucl. Med. 1970.-V. 11.-No. 6.-P. 379.
268. Zolle I., Rhodes B. A., Wagner H. N. Preparation of metabolizable radioactive human serum albumin microsferes for studies of circulation // Int. J. Appl. Radiat. Isotop. 1970. -V. 21. - P. 155-167.
269. Zophel K., Bacher-Stier C., Pinkert J., Kropp J. Ventilation/perfusion lung scintigraphy: what is still needed? A review considering technetium-99m-labeled macro-aggregates of albumin // Ann. Nucl. Med. 2009. - V. 23. — No. l.-P. 1-16.
-
Петриев, Василий Михайлович
-
доктора биологических наук
-
Обнинск, 2011
-
ВАК 03.01.01
- Фармакокинетические свойства и дозиметрические характеристики радиофармпрепаратов на основе бифосфоновой и пентафосфоновой кислот с генераторными радионуклидами 99mTc и 188Re
- Структурно-функциональные изменения некоторых транспортных белков в пленке, индуцированные ВУФИ
- Методы идентификации активностей и определение поглощённых доз при проведении радионуклидной терапии костных метастазов с РФП на основе 153Sm
- Особенности структуры и физико-химических свойств сывороточного альбумина гибридных кур
- Изменения свойств связывающих центров сывороточного альбумина в оценке состояния организма при патологии
