Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Особенности структуры и физико-химических свойств сывороточного альбумина гибридных кур

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Бородина, Наталия Ивановна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Физиолого-биохимические аспекты гетерозиса

1.2. Структурно-функциональные свойства альбумина сыворотки крови

1.2.1. Структура и физико-химические свойства альбумина.

1.2.2. Функциональная изменчивость структуры и свойств альбумина сыворотки крови

1.2.3. Эволюционно-генетические предпосылки изменчивости сывороточного альбумина

Глава 2 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ Раздел I. Материалы и методы

1.1. Материалы исследований.

1.2. Методы анализа физико-химических свойств альбумина.

1.2.1. Определение молекулярной массы фильтрацией в тонком слое сефадекса

1.2.2. Гель-фильтрация в сефадексе

1.2.3. Ионообменная хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе

1.2.4. Переосаждение альбумина в системе трихлоруксусная кислота - этанол

1.2.5. Изоэлектрическое фокусирование

1.2.6. Обезжиривание и температурная обработка белка

1.3. Методы анализа структуры альбумина

1.3.1. Определение аминокислотного состава метод хроматографии на бумаге)

1.3.2. Исследование пептидного состава триптических гидролизатов (метод пептидных карт).

1.3.3. Инфракрасная спектроскопия.

1.3.4. Дисперсия оптического вращения.

Раздел 2. Результаты собственных исследований и их обсулодение

2.1. Характеристика гомогенности препаратов альбумина сыворотки крови

2.1.1. Ионообменная хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе.

2.1.2. Гель-фильтрация

2.1.3. Дереосаищение в системе трихлоруксусная кислота - этанол

2.2. Физико-химические свойства сывороточного альбумина

2.2.1. Молекулярная масса

2.2.2. Изоэлектрические свойства нативного сывороточного альбумина

2.2.3. Изоэлектрическая характеристика сывороточного альбумина, обработанного теплом

2.2.4. Влияние тепловой обработки на обезжиренный альбумин.

2.3. Структура альбумина сыворотки крови кур.

2.3.1. Аминокислотный состав сывороточного альбумина.

2.3.2. Пептидный состав сывороточного альбумина

2.3.3. Структура альбумина по данным инфракрасной спектроскопии и дисперсии оптического вращения

ЗАШЙЕНИЕ.

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Особенности структуры и физико-химических свойств сывороточного альбумина гибридных кур"

Актуальность темы. Одной из важнейших общебиологических проблем, имеющих теоретическое и практическое значение, является проблема гетерозиса. С успешным ее решением тесно связано повышение продуктивности сельскохозяйственных животных и растений, так как в современном сельском хозяйстве все шире используются гетерозис-ные гибриды, превосходящие исходные родительские формы по продуктивности, плодовитости, менее подверженные заболеваниям и требующие меньших затрат на их производство /69,79,80,83/.

Несмотря на широкое применение эффекта гетерозиса в народном хозяйстве, до настоящего времени нет единого мнения относительно природы этого явления, что существенно затрудняет его практическое применение. Успешное решение проблемы гетерозиса, как одного из методов прогрессивной селекции, невозможно без использования новейших достижений генетики, биохимии, иммунологии и других биологических наук, что и было подчеркнуто в принятом в 1981 г. постановлении ЦК КПСС и Совета министров СССР "О дальнейшем развитии физико-химической биологии и биотехнологии и использования их достижений в медицине, сельском хозяйстве и промышленности" /I /.

В настоящее время широкое распространение получает физиолого-биохимический подход к изучению явления гетерозиса, в особенности в птицеводстве, где применение гетерозисных гибридов имеет высокую экономическую эффективность /78,80,83,84/.

Эффект гетерозиса наблюдается уже на ранних стадиях эмбрионального развития /37,82/ и затем в постнатальном периоде проявляется в виде повышенной активности гормонов /37,69/, тканевых ферментов /45,111/, пищеварительных ферментов /111,30/, в интенсификации биосинтеза белков /19,76,13/. В соответствии с этим особую роль играет кровь и отдельные ее компоненты, определяющие гомеостаз. В частности, рядом исследователей показаны специфические изменения в белковом составе сыворотки крови и структурно-функциональных свойствах некоторых белков крови гетерозисных гибридов /97,63,103,23/. Установлена также корреляция между генетическим типом некоторых сывороточных белков и продуктивными качествами гибридов /112,32/. Однако структура и функциональная активность отдельных белков сыворотки крови в условиях гетерозиса изучена недостаточно. В связи с этим представляет интерес изучение сывороточного альбумина,как одного из белков крови, структура и физико-химические свойства которого взаимосвязаны с выполняемой им функцией транспорта метаболитов различной природы. Эта функция в условиях гетерозисного организма приобретает особое значение, так как в случае положительного гетерозиса все обменные процессы протекают более интенсивно. Ранее было показана возможность изменения структуры сывороточного альбумина у домашней птицы /171/, а также повышенная способность альбумина гетерозисных гибридов связывать липидные лиганды /23/. Поэтому изучение структуры и физико-химических свойств сывороточного альбумина у гетерозисных гибридов кур может быть использовано при раскрытии механизмов эффекта гетерозиса, а также может способствовать выявлению и использованию специфических свойств активно функционирующего белка крови в качестве биохимических маркеров при прогнозировании положительного соматического гетерозиса у кур мясного направления.

Цель и задачи исследований. Цель настоящей работы заключается в установлении специфических особенностей структуры и физико-химических свойств альбумина сыворотки крови у гибридных цыплят с явными признаками гетерозиса. В конкретную задачу входило сравнительное изучение у гетерозисных гибридов и исходных родительских пород таких биохимических характеристик сывороточного альбумина, как молекулярная масса, изоэлектрические свойства нативного и модифицированного альбумина, определение содержания отдельных аминокислот в кислотных гидролизатах белка и пептидов в ферментативных гидролизатах, а также исследование пространственной структуры альбумина. Работа в указанном направлении представляется це- 1 лесообразной в соответствии с необходимостью дальнейшего раскрьн тия механизмов реализации генетической информации в гибридных организмах на основе проявления специфичности некоторых феноти-пических признаков.

Новизна полученных результатов. Установлен индивидуальный характер микрогетерогенности сывороточного альбумина у цыплят и взрослых кур отцовской и материнской пород и у их гетерозисных гибридных цыплят. С помощью изоэлектрического фокусирования у гибридов,по сравнению с исходными формами,выявлено достоверно большее смещение в менее кислую область изоэлектрической точки препарата альбумина (главный компонент изоэлектрического спектра) после обезжиривания белка, что может отражать повышенную способность альбумина гибридов связывать жирные кислоты и другие ли-пидные метаболиты в условиях активизации обменных процессов в гетерозисном организме.

Впервые обнаружена повышенная устойчивость сывороточного альбумина у гибридных гетерозисных цыплят к денатурирующему действию температуры, что может быть объяснено как особенностями структуры молекулы альбумина гибридов, так и повышенной способностью этого белка связывать метаболиты липидной природы.

Определена молекулярная масса альбумина кур. Найдены различия в количественном содержании отдельных аминокислот альбумина, а также пептидного состава триптических гидролизатов этого белка у гетерозисных гибридов и у кур родительских пород, что может отражать фенотипическую принадлежность гомологичного белка сравниваемых групп птиц.

С помощью методов инфракрасной спектроскопии и дисперсии оптического вращения впервые показаны особенности пространственной структуры сывороточного альбумина у гибридных цыплят с явными признаками гетерозиса.

Теоретическое и практическое значение. Полученные данные содержат дополнительную информацию о проявлении эффекта гетерозиса на молекулярном уровне. Выявленные у гетерозисных гибридов кур индивидуальные особенности структуры и физико-химических свойств альбумина сыворотки крови могут быть использованы как биохимические показатели при раскрытии механизмов эффекта гетерозиса.

Практическое значение работы заключается в том, что установленная методом изоэлектрического фокусирования термоустойчивость альбумина сыворотки крови гибридов может быть использована в качестве биохимической характеристики при оценке продуктивности мясных гибридных цыплят. Обнаруженные различия в значениях изо-электрических точек и термоустойчивости сывороточного альбумина отцовской и материнской пород кур могут быть применены в качестве биохимических маркеров при подборе родительских пар с целью прогнозирования высокопродуктивных гибридных форм в мясном птицеводстве.

Апробация работы. Материалы исследований доложены на ежегодных итоговых конференциях профессорско-преподавательского состава Симферопольского государственного университета им. М.В.Фрунзе (1975-1978 г.г.), на Ш и 1У Всесоюзных биохимических съездах (Рига, 1974г.; Ленинград,1979г.), на Ш Украинском биохимическом съезде (Донецк, 1977), на заседании научно-технического Совета Крымского отделения Украинского НИИ птицеводства (Симферополь,1979г.), на Республиканском симпозиуме "Молекулярно-генетические основы гетерозиса" (Симферополь, 1980 г.), на заседании Крымского отделения Всесоюзного биохимического общества (Симферополь, 1982 г.).

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Бородина, Наталия Ивановна

выводы

1. Методом изоэлектрического фокусирования показана большая степень микрогетерогенности сывороточного альбумина гетерозисных гибридных цыплят К-2сГ х П-б£ по сравнению с одновозрастными цыплятами и взрослыми особями отцовской породы кур белый кор-ниш линии К-2 и материнской - белый плимутрок линии П-6. Установлено, что у гибридов по сравнению с родительскими формами изоэлектрическая точка сывороточного альбумина смещена в сторону более кислых значений рН.

2. Обезжиривание препаратов сывороточного альбумина гибридных цыплят, в отличие от родительских форм, не вызывает изменений в специфике распределения компонентов ИЭ-спектра, характерного для необезжиренного белка. Значение р1 главного изоэлектрического спектра альбумина у гибридов, по сравнению с родительскими формами, при обезжиривании больше смещается в область менее кислых значений рН, что может указывать на более интенсивное лигандирование исходного необезжиренного белка липидными метаболитами анионного характера.

3. Впервые показана повышенная устойчивость сывороточного альбумина гетерозисных гибридных цыплят к действию температур, превышающих физиологические. Методом изоэлектрического фокусирования показана стабильность микрогетерогенности обработанного теплом сывороточного альбумина гибридов в более кислой области изоэлектрического спектра, а также меньшее, по сравнению с родительскими формами, смещение р1 главного изоэлектрического компонента в область менее кислых значений рН.

4. Методом фильтрации в тонком слое сефадекса Г-200 определена молекулярная масса альбумина сыворотки крови кур, составляющая в среднем для исследуемых групп птиц 66 637 единиц дальтон.

5. В альбумине гетерозисных гибридных цыплят и одновозрастных с ним цыплят и взрослых кур родительских пород выявлены различия в содержании отдельных аминокислот, заключающиеся в уменьшении у гибридов суммарного содержания лизина и аргинина и увеличении суммарного содержания аспарагиновой и глутаминовой кислот, что может отражать фенотипическую принадлежность исследуемых групп кур.

6. Методом пептидных карт у гибридов и кур родительских пород установлены достоверные различия в количестве и характере распределения пептидных фрагментов триптических гидролизатов сывороточного альбумина, выражающегося в уменьшении у гибридов общего числа пептидов, за счет положительно заряженных пептидов, и изменении топографии одного кислого пептида. Изменения в характере пептидных карт альбумина гибридов коррелирует с уменьшением содержания лизина и аргинина в этом белке и интенсивностью его лигандирования липидными метаболитами.

7. Впервые методами инфракрасной спектроскопии и дисперсии оптического вращения дана оценка пространственной структуры сывороточного альбумина кур. Установлено, что альбумин гетерозисных гибридных цыплят,по сравнению с одновозрастными цыплятами и взрослыми особями родительских пород кур, содержит относительно больше свободных -групп, не участвующих в образовании водородных связей. В конформации альбумина гибридов относительно снижена доля Л -спиралей. Высказывается представление о большей конформационной гибкости сывороточного альбумина гибридов, способствующей повышению функциональной активности белка в связи с интенсификацией метаболизма в гетеро-зисном организме.

3. Выявленные в сывороточном альбумине гибридных цыплят особенности аминокислотного и пептидного состава, пространственной структуры белка, а также индивидуальные особенности изоэлек-трического спектра необезжиренного и обезжиренного альбумина и свойство термоустойчивости белка могут быть использованы для биохимического обоснования развития эффекта положительного гетерозиса. д. Показано, что по всем изученным биохимическим показателям сывороточный альбумин гетерозисных гибридов проявляет сходство с альбумином кур материнской породы, что может отражать характер фенотипической близости этих белков и наследования материнских свойств сывороточного альбумина.

ПРЕДЛОЖЕНИЕ:

При подборе родительских пар для получения гибридов с эффектом положительного соматического гетерозиса у кур мясного направления могут быть рекомендованы породы с различной фенотипической принадлежностью сывороточного альбумина, биохимическими маркерами которой могут служить сравнительные значения аминокислотного состава, изоэлектрических точек этого белка и его термоустойчивость.

1 - 139

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Исследования были направлены на сравнительное изучение структуры и физико-химических свойств сывороточного альбумина кур пород белый корниш линии К-2 ( сГ ), белый плимутрок линии Л-6 ( £ ) двух возрастных групп (60 дней и 18 месяцев) и их 60-дневных гибридов, проявляющих признаки соматического гетерозиса.

Цель настоящей работы заключалась в установлении возможных особенностей структуры и свойств сывороточного альбумина у гете-розисных гибридов. Такое направление было выбрано в связи с тем, что структура белка может отражать особенности организации и функциональной активности генома в гетерозисном организме, что представляется важным в развитии общей теории гетерозиса /41/. Кроме приведенных теоретических аспектов, изучение структуры белков гетерозисных организмов в сочетании с выявлением специфики их функционирования дает возможность использовать сывороточные белки в качестве биохимических маркеров, определяющих отдельные соматические признаки, что способствует решению важнейшей практической задачи - поиска оптимальных комбинационных сочетаний родительских форм /141/.

В сравнительных исследованиях гомологичных белков непременным условием является равная степень чистоты и однородности сравниваемых препаратов. Поэтому альбумин, выделенный нами с помощью препаративного электрофореза в полиакриламидном геле из сыворотки крови гетерозисных гибридов и кур родительских пород, был исследован методами ионообменной хроматографии, гель-фильтрации и аналитического электрофореза в полиакриламидном геле, показавшими отсутствие примесей других белков. Однородность белковых молекул в изучаемых препаратах альбумина сыворотки крови всех исследуемых групп кур установлена также и при анализе частичной и -концевой последовательности /95/. Во всех случаях в процессе дегра- ( дации белка фенилизотиоцианатным методом Эдмана обнаруживали единственную N -концевую аминокислоту - аспарагиновую. Натив- | ность альбумина в полученных препаратах установлена переосаждением в системе ТХУ-этанол /120,113,210/. Равная степень чистоты, однородности и нативности полученного альбумина гетерозисных гибридов и альбумина птиц родительских пород позволили с большей убедительностью провести сравнение их структуры и свойств.

Наиболее общим свойством белковых молекул является их молекулярная масса. Установленная нами молекулярная масса альбумина у всех исследуемых групп кур имеет близкие значения и в среднем составляет 66 637, что соответствует имеющимся в литературе данным /171,219/.

С целью обнаружения специфических особенностей физико-химических свойств альбумина сыворотки крови родительских пород кур и их гетерозисных гибридов белок был изучен методом изоэлектричес-кого фокусирования, с помощью которого был установлен индивидуальный характер микрогетерогенности сывороточного альбумина у всех исследуемых групп кур. При этом установлено, что у гетерозисных гибридов микрогетерогенность сывороточного альбумина была более выраженной, чем у цыплят и взрослых птиц исходных родительских пород. У гибридов, по сравнению с альбумином кур родительских пород, крайние значения рН, в пределах которых происходит фокусирование белка (зона фокусирования /14/ ), а также значения р1 главного изоэлектрического компонента альбумина смещены в более кислую область на 0,1-0,12 единицы рН. Учитывая функциональную роль альбумина, заключающуюся в транспорте метаболитов различной природы, можно было предположить, что функционирование сывороточного альбумина протекает более напряженно в условиях гетерозисного организма, характеризующегося повышенной интенсивностью метаболизма. В частности, это может выражаться в интенсивном транспорте жирных кислот и других липидных метаболитов /5/, которые оказывают существенное влияние на суммарный поверхностный заряд сывороточного альбумина, переносящего их в русле крови.

Все это послужило основанием к сравнительному анализу изоэлектрических свойств необезжиренного и обезжиренного альбумина исследуемых групп птицы. Полученные результаты показали, что ИЭ-спектры обезжиренного альбумина всех исследуемых групп птиц характеризуются смещением значений р1 главного изоэлектрического компонента в сторону менее кислых значений рН, по сравнению с необезжиренным белком. При этом величина смещения р1 главного компонента альбумина гибридных цыплят составляет 0,2 единицы рН, тогда как у цыплят и взрослых птиц родительских пород это изменение менее выражено и находится в пределах от 0,04 до 0,14 единиц рН. Это свойство может свидетельствовать о том, что функционирующий в русле крови альбумин гетерозисных гибридов способен транспортировать большое количество жирных кислот, по сравнению с родительскими формами. Наши данные находятся в соответствии с результатами Гемберг О.П. /23/, установившей, что молекула сывороточного альбумина у гетерозисных гибридов мясного направления содержит большее число молекул жирных кислот, чем у родительских пород.

При изоэлектрическом фракционировании обезжиренного сывороточного альбумина гетерозисных гибридов,наряду со смещением величины р1 главного компонента.выявлены дополнительные особенности ИЭ-спектров этого белка. Так, в наших экспериментах по изоэлектрическому фокусированию показано, что обезжиривание препарата сывороточного альбумина родительских пород, по сравнению с необезжиренным белком, приводит к полной утрате микрогетерогенности более кислой области ИЭ-спектра (отцовская порода) или к незначительному проявлению микрогетерогенности (материнская порода). У гетерозисных гибридов, в отличие от родительских пород, обезжиривание сывороточного альбумина не приводит к изменению микрогетерогенности ИЭ-спектра, характерного для необезжиренного препарата этого белка. Таким образом, различия в микрогетерогенности кислой области ИЭ-спектра необезжиренного и обезжиренного альбумина гибридных цыплят нельзя объяснить только с точки зрения его повышенной функциональной активности и комплексированием с анионными метаболитами. Очевидно, это свойство белка гибрида может быть связано также и с особенностями структуры белковых молекул альбумина гетерозисных гибридов.

Одной из важных характеристик структуры белка является его устойчивость к действию денатурирующих факторов, в частности, к денатурирующему действию температур, превышающих физиологические /4 /. На этом основании для выявления структурных особенностей белковой молекулы было проведено сравнительное исследование ИЭ-спектров сывороточного альбумина после тепловой его денатурации. С этой целью альбумин гетерозисных гибридных цыплят и одновоз-растных с ним цыплят и взрослых птиц родительских пород кур прогревали при 65°С и 73°С с последующим изучением поведения этих белков при изоэлектрическом фокусировании. Анализ ИЭ-спектров обработанного теплом альбумина всех исследуемых групп кур показал, что альбумин гибридных цыплят является наиболее устойчивым к денатурирующему действию температуры. Это свойство белка у гетерозисного гибрида при изоэлектрическом фокусировании обработанного теплом альбумина проявляется в сохранении зоны фокусирования и микрогетерогенности ИЭ-спектра, характерных для нативного белка, а также в меньшем, по сравнению с родительскими породами, смещении р1 главного изоэлектрического компонента в сторону менее кислых значений р1. При этом следует отметить, что, если обработанный теплом альбумин гетерозисных гибридов по значениям р1 главного изоэлектрического компонента близок к соответствующему белку взрослых особей материнской породы, то микрогетерогенность в кислой области ИЭ-спектра является свойством, обнаруженным только для прогретого альбумина гибрида.

Известно, что устойчивость сывороточного альбумина к тепловой денатурации во многом определяется связанными с белком жирными кислотами /201,144/. Как указывалось выше, альбумин гетерозисных цыплят связывает несколько больше жирных кислот, чем альбумин цыплят и взрослых кур исходных родительских пород. На этом основании можно считать, что повышенная устойчивость альбумина к действию высоких температур связана с присоединением к белку большего числа молекул жирных кислот, чем к белку родительских пород. В связи с этим, для выяснения механизма устойчивости альбумина гибридных цыплят необходимо было свести к минимуму стабилизирующее влияние жирных кислот на молекулу белка. С этой целью были изучены изоэле-ктрические свойства обработанного теплом обезжиренного альбумина гибридных цыплят и одновозрастных с ним цыплят и взрослых птиц родительских пород кур.

Сравнительный анализ ИЭ-спектров обработанного теплом обезжиренного альбумина гетерозисных гибридов показал, что этот белок также обладает большей устойчивостью к прогреванию. Так, значение pl главного изоэлектрического компонента обезжиренного альбумина практически не изменяется после обработки теплом и сохраняется микрогетерогенность в кислой области ИЭ-спектра. Этим свойством не обладают ИЭ-спектры обработанного теплом обезжиренного альбумина цыплят и кур родительских пород. Таким образом, выше приведенные данные могут служить свидетельством того, что устойчивость альбумина гибридов к денатурирующему действию температуры связана не только со специфическим лигандированием жирных кислот, а может являться индивидуальным свойством этого белка в гетерозис-ном организме /102/.

В литературе встречаются сведения о том, что в некоторых случаях организм гетерозисных гибридов в целом /133/ или отдельные его белки /48/ более устойчивы к действию высоких температур, чем исходные родительские формы. В наших исследованиях сывороточный альбумин цыплят, обладающих признаками гетерозиса, по физико-химическим свойствам проявляет значительное сходство с белком взрослых кур материнской породы, но является более устойчивым к денатурирующему действию высокой температуры, чем все группы исследуемых родительских пород кур, и материнской в том числе.

На основании выявленных нами таких характерных свойств альбумина гибридных цыплят, как микрогетерогенность в более кислой зоне ИЭ-спектра и устойчивость к тепловой денатурации, было сделано предположение о том, что в структуре молекул альбумина гетерозисных гибридов и родительских пород кур имеются различия. На этом основании с помощью различных аналитических методов нами было проведено сравнительное изучение структуры сывороточного альбумина исследуемых групп кур.

Анализ содержания отдельных аминокислот в альбумине позволил выявить сходство аминокислотного состава в белке цыплят и взрослых птиц родительских форм, относящихся к одной и той же породе. Однако при этом были обнаружены межпородные различия аминокислотного состава сывороточного альбумина. Установлено также, что альбумин гетерозисных гибридов по количественному содержанию отдельных аминокислот отличается от белка обеих родительских пород. Различие было более существенным по сравнению с отцовской породой, чем с материнской. Анализ различий аминокислотного состава альбумина гетерозисных гибридов и исходных родительских пород кур показал, что гибриды характеризуются увеличением суммарного содержания отрицательно заряженных аминокислот - глутаминовой и аспараги-новой, и уменьшением суммарного количества положительно заряженных - лизина и аргинина (см. табл. 14 стр. 106). Обнаруженные различия в содержании заряженных аминокислот находятся в соответствии с результатами изоэлектрического фокусирования, показавшим, что изоэлектрическая точка (главный компонент ИЭ-спектра) сывороточного альбумина гетерозисного гибрида проявляет тенденцию к смещению в более кислую область рН по сравнению с родительскими породами. В то же время известно, что карбоксильные группы глутаминовой и аспарагиновой кислот являются наиболее многочисленными функциональными группами у большинства белков и играют рещающую роль в создании поверхностного заряда. При формировании пространственной структуры эти группы, кроме солевых взаимодействий, могут выступать донорами или акцепторами при образовании водородной связи с различными партнерами, иногда прямо участвуя в стабилизации пространственной структуры белка /105/. В связи с этим можно предположить, что увеличение общего содержания отрицательно заряженных аминокислот в альбумине гетерозисных гибридов, по сравнению с родительскими породами, может приводить к повышению гидрофильности молекулы и этим способствовать формированию более стабильной пространственной структуры белка к различным повреждающим молекулу воздействиям и, в частности, к денатурирующему действию высоких температур.

Одним из методических приемов, характеризующим строго индивидуальные особенности первичной структуры белка, является метод пептидных карт. В наших исследованиях с помощью этого метода были установлены различия в пептидных наборах триптических гидроли-затов альбумина исследуемых групп кур. В гидролизатах альбумина гибридов выявлено наименьшее общее количество пептидных фрагментов (75 пептидов), несколько больше в альбумине материнской породы кур (77 пептидов) и наибольшее число было обнаружено в ферментативном гидролизате альбумина птиц отцовской породы (79 пептидов) (см. табл. 15, стр. 109). Уменьшение числа фрагментов в гидролизатах альбумина гибридов и птиц материнской породы обнаружено только в зоне основных пептидов. Эти результаты коррелируют с данными аминокислотного анализа, согласно которым уменьшение суммарного содержания аргинина и лизина в альбумине исследуемых кур происходит в том же порядке. Так как трипсин расщепляет полипептидную цепь белка только в местах включения лизина и аргинина, можно предположить, что уменьшение общего числа пептидных фрагментов в гидролизатах альбумина кур материнской породы и, в особенности, альбумина гибридов связано со сравнительно меньшим содержанием этих аминокислот в исследуемом белке. В то же время, в литературе имеются сведения о том, что некоторые ассоциированные с альбумином метаболиты, например, жирные кислоты, ограничивают доступ к специфическим участкам протеолиза /43,44,227/.Принимая во внимание тот факт, что альбумин гетерозисного гибрида комплексирует с большим числом молекул жирных кислот, чем альбумин кур родительских пород, наблюдающееся уменьшение количества пептидов триптического гидролизата альбумина гибридов может быть связано как со специфичностью аминокислотного состава, так и с особенностями лигандирования метаболитами, например, жирными кислотами.

Аминокислотный состав и пептидный набор являются характеристикой первичной структуры белка, тогда как сведения о конформации белковых молекул отражают не только структурные особенности, но опосредственно могут свидетельствовать о функциональной активности исследуемого белка. В соответствии с этим нами было проведено изучение пространственной структуры альбумина всех исследуемых групп кур методами инфракрасной спектроскопии и дисперсии оптического вращения (ДОВ). Эти исследования показали, что по характеру пространственной структуры, главным образом „С-спиральной укладки полипептидной цепи, альбумин всех исследуемых групп кур имеет близкие характеристики. Однако в альбумине гетерозисных гибридов, по сравнению с родительскими породами, проявляется тенденция к снижению относительного процента об-спирали. Так, по данным ДОВ, в альбумине гибрида до 47,7% полипептидной цепи имеет -спиральную форму укладки, тогда как в альбумине кур родительских пород на долю «¿-спирали приходится 48,4-48,9% полипептидной цепи (см. табл. 18, стр.121).

По данным ИК-спектроскопии уменьшение доли ¿¿-спирали в конформации альбумина гибрида выражается в снижении интенсивности поглощения в области полос Амид I и Амид П, а также в более сильном поглощении в высокочастотной области полос Амид А и Амид В (см. табл. 16, стр.114). В то же время, указанное смещение максимума поглощения полос Амид А и Амид В свидетельствует об увеличении количества свободных ин -групп, не участвующих в образовании водородных связей /15,16/. Приведенные результаты позволяют считать, что альбумин гетерозисных гибридов обладает более гибкой конформацией, чем альбумин исходных родительских форм. Выше показанная устойчивость альбумина гетерозисных гибридов к действию высоких температур является подтверждением этого вывода, так как теплоустойчивость белка может служить косвенным показателем конформационной подвижности белковых цепей /4 /. В то же время, сравнительно большая конформационная гибкость альбумина гибридов может облегчать доступность полипептидной цепи белка при лигандировании метаболитами различной природы. Такое заключение / находится в соответствии с представлением о доменной структуре сывороточного альбумина /155/ и функционально обусловленных кон-формационных изменениях этого белка в процессе функционирования /88,55,269/.

Все выше изложенные данные могут свидетельствовать о возможной связи наблюдаемых изменений структуры и физико-химических свойств альбумина гибридов с особенностями генетической базы организма при развитии эффекта гетерозиса.

Известно, что у кур существуют несколько фенотипов сывороточного альбумина /32,217/, отличающихся не только по электрофорети-ческой подвижности, но и по количественному содержанию отдельных аминокислот /171/. В задачу наших исследований не входило тестирование исследуемых групп кур по фенотипу альбумина. Однако обнаруженные различия зоны фокусирования исследуемых белков, а также различия значений р1 главных изоэлектрических компонентов, на долю которых приходится около 50% фракционируемого белка, говорят в пользу различной фенотипической принадлежности альбумина сравниваемых групп кур. Обнаруженные различия содержания отдельных аминокислот, количества пептидных фрагментов триптических гидролиза-тов, а также различная термоустойчивость белков сравниваемых групп птиц является подтверждением высказанного предположения /92,97,100/.

Таким образом, совокупность всех полученных данных свидетельствует о том, что сывороточный альбумин изучаемых исходных родительских пород относится к различным фенотипам. Эти предположения получили в последнее время подтверждение в работах других авторов, показавших два фенотипа альбумина у кур породы белый корниш (в наших исследованиях отцовская форма) и один фенотип у кур породы белый плимутрок (в нашей работе - материнская форма) /61/.

На основании выявленных нами особенностей структуры и свойств сывороточного альбумина гетерозисный гибрид, полученный от скрещивания родительских пород белый корниш К-2 сГи белый плимутрок П-6 наследует преимущественно материнский тип белка (сходство по аминокислотному составу, характеру изоэлектрических свойств и термоустойчивости). Кроме того, известно, что сывороточный альбумин в процессе функционирования подвергается многочисленным постсинтетическим модификациям /227,144/. Поэтому можно допустить, что эти процессы протекают более интенсивно в условиях активизации метаболизма в организме гетерозисного гибрида. Учитывая характер таких распространенных модификаций как метилирование свободных нн -групп и дезамидирование аспарагина и глутамина /106/, а также лигандирование белка, можно заключить, что гомологичные белки, в разной степени подверженные химическим модификациям и лигандированию, будут отличаться друг от друга по ряду физико-химических свойств.

Полученные в настоящей работе результаты показывают, что альбумин сыворотки крови гетерозисного гибрида кур по структуре и физико-химическим свойствам отличается от альбумина крови кур родительских пород. Обнаруженные различия могут быть объяснены уникальностью структуры белка, формирующегося в гибридном организме и функционирующего в условиях усиления обменных процессов при развитии эффекта гетерозиса.

Выявленные специфические черты структуры и физико-химических свойств альбумина гибридов могут представлять определенный информативный интерес при раскрытии физиолого-биохимических основ гетерозиса и могут быть использованы для оценки развития эффекта гетерозиса у мясных гибридов (бройлеров).

Обнаруженные различия в структуре и физико-химических свойствах сывороточного альбумина кур родительских пород могут быть использованы в качестве тестов при подборе родительских пар с целью получения положительного эффекта соматического гетерозиса в мясном птицеводстве.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Бородина, Наталия Ивановна, Симферополь

1. "О дальнейшем развитии физико-химической биологии и биотехнологии и использовании их достижений в медицине, сельском хозяйстве и промышленности" Постановление ЦК КПСС и Совета Министров СССР, Правда, 1981 г., 31 июля.

2. Абатуров Л.В., Шмакова Ф.В., Варшавский Г.В. Исследование структурных характеристик нативного и химически модифицированного яичного альбумина методами изотопного обмена водорода и ИК-спектроскопии. -Мол. биол., 1970, т. 40, с. 831-836.

3. Ажицкий Г.Ю., Багдасарьян С.Н. 0 возможности выделения мономерного, иммунохимически чистого сывороточного альбумина. Лаб. дело, 1975, № 12, с. 712-715.

4. Александров В.Я. Клетки, макромолекулы и температура, "Наука", Л., 1975, 330 с.

5. Архипов A.B. Изменения обмена липидов у кур в онтогенезе. -С.-х. биология, 1980, т. 15, № 5, с. 756-761.

6. Ахрем A.A., Кузнецова А.И. Тонкослойная хроматография, Наука, М., 1964, 86 с.

7. Багдасарьян С.Н. Гетерогенность сывороточного альбумина, характерная для патологии и процессов комплексообразования. Автореферат дисс. канд.биол.наук, Симферополь, 1972, 16 с.

8. Багдасарьян С.Н., Троицкий Г.В. Дисперсия оптического вращения и пептидные карты альбумина крови. Укр. биохим. ж., 1973,т. 45, № 2, с. 132-140.

9. Багдасарьян С.Н., Троицкий Г.В., Вершинин А.Я. Количественный метод оценки конформационных изменений альбумина сыворотки крови. Укр. биохим. журн., 1979, т. 51, № 4, с. 439-442.

10. Бейли-Д. Методы химии белков. Мир., М., 1965, 240 с.

11. Бейли Н. Статистические методы в биологии. "Иностранная литература", М., 1962, 260 с.

12. Бердышев Г.Д. Гетерозис как результат депресии генетического аппарата клеток. Биохим. животных и человека, сб. науч. трудов, Киев, "Наукова думка", 1984, вып. 8, с. 12-21.

13. Божков А.И., Шерешевская Ц.М., Мартынюк Н.М., Шахбазов В.Г. Некоторые особенности реализации генетической информации у инбредных и гетерозисных крыс в норме и после частичной ге-патэктомии. Биохимия, 1980, т. 45, вып. 9, с. 1696-1703.

14. Бородина Н.И., Ивлев В.Н. Оценка микрогетерогенности альбумина сыворотки крови кур. Ш-й Украинский биохим. съезд, тезисы стенд, докладов, Донецк, 1977, с. 32.

15. Бородина Н.И., Задорожный Б.А. Сравнительная оценка инфракрасных спектров сывороточного альбумина родительских форм кур и их гибридов. Тез. докладов на республиканском симпоз. "Молекулярно-генетические основы гетерозиса", Симферополь, 1980, с. 10.

16. Бородина Н.И., Соркина Д.А., Задорожный Б.А. Характеристика структуры сывороточного альбумина гетерозисных гибридов кур и использование ее в качестве теста при гибридизации. Сель-скохоз. биология, 1981, т. 16, №5, с. 689-692.

17. Брандтс Д.Ф. Конформационные переходы белков в воде и смешанных водных растворителях. В кн.: Структура и стабильность биологических макромолекул, Мир, М., 1973, с. 175-254.

18. Бреслер С.Е. Эволюция и транспозоны. Генетика 1983, т. 19, № 2, с. 181-189.

19. Владимиров В.Л. Онтогенетическое изучение белков в тканях и органах цыплят при гетерозисе. Тр. Всесоюзн. НИИПП, 1970, т. 15, с. 22-26.

20. Волкопялов Б.П. Генетические основы селекции свиней. В кн.: Генетические основы селекции животных. - М., Наука, 1969, 326 с.

21. Волынов A.B., Надальяк Е.А. Газообмен и показатели красной крови у цыплят мясных пород при гетерозисе. Тр. ВНИИ фи-зиол. и биохим. животн., 1970, т. 9, с. 29/33.

22. Гаевская В.А., Покрасен Н.М. Транспорт липидов сывороточным альбумином в норме и при заболеваниях гепатопанкреатодуаде-нальной зоны. Укр.биохим.ж., 1980, т. 52, № 6, с. 689-695.

23. Гемберг О.П. Особенности белкового состава сыворотки крови и функциональных свойств сывороточного альбумина у разных линий кур и их гибридов. Автореферат дисс. канд. биол. наук., Харьков, 1981, 26 с.

24. Гордеев Ю.Н. Аппарат для наклонного препаративного электрофореза в гелях, выделяющий фракции исследуемого вещества с высокой концентрацией в растворе. Лаб. дело, 1970, № 4,с. 248-250.

25. Делургян Э.Н. Биохимические показатели крови помесных цыплят, выращиваемых на мясо. В сб. науч.тр. Донского с.-х. института, 1965, т. 3, с. 1-7.

26. Демченко А.П., Орловская H.H. Изменение структуры и функции белков при старении и их возможные механизма. Успехи совр. <J биол., 1981, т. 92, вып. 2, с. 180-197.

27. Детерман Г. Гель-хроматография. Мир, М., 1970, 258 с.

28. Дехант И., Данц Р., Киммер В., Шмальке Р. Инфракрасная спектроскопия полимеров. Химия, М., 1976, 397 с.

29. Дубинин Н.П. Эволюция популяции и радиация. Атомиздат, М., 1966, 743 с.

30. Жирнов И.Е. Гетерозис и воспроизводство свиней. М., Колос, 1974, 152 с.

31. Жоли М. Физическая химия денатурации белков. Мир, М., 1968, 364 с.

32. Зубарева Л.Н., Кузнецов Н.И., Лазберг Л.К. Наследственные типы альбуминов у кур. Докл. ВАСХНИЛ, 1972, № I, с. 37-39.

33. Иванов И.М., Кирпичников B.C., Ролле Н.М. Изменчивость лак-татдегидрогеназы (ЛДГ) у карпа и сазана. В кн.: Биохимическая генетика раб., ин-т Цитологии АН СССР, Л., 1973, 280 с.

34. Иохансон Б.Г. Гель-фильтрация в тонком слое и её модификация.- В кн.: Новые методы анализа аминокислот, пептидов и белков.- Мир, М., 1974, 256 с.

35. Йиргенсонс Б. Альбумины и глобулины животных и растений. -В кн.: Природные органические макромолекулы. Мир, М., 1965, с. 252-265.

36. Каверзнева Е.Д., Шмакова Ф.В. Исследование гидролизата яичного альбумина трипсином. Биохимия, 1966, т. 31, с. 380-386.

37. Канарик У.К., Мянд Т.А. Гормональная активность щитовидной железы и продуктивность мясных линий и межлинейных кроссов кур. Вестник, с.-х. науки, 1981, № 7, с. 104-107.

38. Катруха Г.С., Трифонов Ж.П., Силаев А.Б. Аминокислотный анализ белков и пептидов методом тонкослойного электрофореза в сочетании с хроматографией. Химия природн. соед., 1966, № 5, с. 348-354.

39. Кирпичников B.C. Общая теория гетерозиса. Генетика, 1967, № 10, с. 167-172.

40. Кирпичников B.C. Генетические механизмы и эволюция гетерозиса Генетика, 1974, № 10, с. 165-170.

41. Конарев В.Г., Гилязетдинов Ш.Я., Ахметов Р.Р. Гетерозис и его проявления по данным биохимии и молекулярной генетики. С.-х. биология, 1981, т. 16, № 3, с. 380-386.

42. Коношенко C.B., Бородина Н.И., Ивлев В.Н. Аминокислотный состав альбумина сыворотки крови кур. Мол.биол. и мед. генетика, 1975, т. 66, вып. I, с. 64-65.

43. Корниенко В.М. Количественное содержание альбумина в сыворотке животных разного возраста и его свойства. Тр. НИИ биологии и биол. ф-та ХГУ, i960, т. 29, с. 29-40.

44. Корниенко В.М., Лобанов A.B., Денисов В.М. Ферментативная расщепляемость сывороточного альбумина животных разного возраста. Тр. НИИ биологии и биол. ф-та, ХГУ, i960, т. 29,с. 41-44.

45. Корниенко Н.Е. Активность протеолитических ферментов печени межлинейных гибридов кур в процессе развития. Автореферат дисс. канд.биол.наук, Киев, 1983

46. Косик О.Г. Дисперсия оптического вращения белков сыворотки крови при сахарном диабете, экспериментальном гипотиреозе, и после общего облучения рентгеновскими лучами. Автореферат дисс. канд. мед.наук, Симферополь, 1970.

47. Коструба М.В. Влияние рентгеновского облучения на физико-химические свойства и химическую характеристику альбумина сыворотки крови кролика. Львов, Автореферат дисс. канд. биол. наук, 1970, 20 с.

48. Кусакина A.A., Глушакова М.А., Васянин С.И. Термоустойчивость некоторых белков у представителей внутривидовых групп байкальских омулей и хариусов. Цитология, 1971, т. 13, с. 994-998.

49. Кушнер.Х.Ф., Зубарева Л.Н., Гинтовт В.Е. Генетика белковогополиморфизма у животных и птиц. В кн.: Работы по генетике и иммуногенетике животных. - Наука, М., 1967, 215 с.

50. Кушнер Х.Ф. Генетические и физиологические предпосылки гетерозиса. Успехи совр. биол., 1973, т. 75, вып. 2, с. 236247.

51. Кушнер В.П. Конформационная изменчивость и денатурация биополимеров. Наука, Л., 1977, 275 с.

52. Лагодюк П.З., Клос Ю.С., Чаркин В.А., Кисиль И.О. Аминокислотный состав и пептидные карты альбуминов молочной железы и сыворотки крови лактирующих и нелактирующих коров. Укр. биохим.ж., 1983, т. 55, if» I, с. 18-22.

53. Лагодюк П.З., Ратыч И.Б., Кирилов Я.И., Стражнык З.Я. Влия- i ние качества протеина рациона на некоторые показатели белкового обмена и продуктивность кур-несушек. С.-х.биология, 1983, т. 18, № 6, с. 33-35.

54. Левонтин Р. Генетические основы эволюции. Мир. М., 1978, 351 с.

55. Луйк А.И., Бравер-Чернобульская Б.С., Лукьянчук В.Д. Механизмы конформационной адаптации альбумина к лигандам различного химического строения. Биохимия, 1983, т. 48, вып. 4, с. 645-651.

56. Любецкий М.Д., Герасимов В.И. Возрастные изменения щитовидной железы и поместных свиней крупной белой породы. С.-х. биология, 1969, т. 4, с. 2-6.

57. Малеев В.Я. Конформационные превращения биополимеров.

58. В кн.: "Исследования физические и химические биологических процессов". Киев, "Наука", 1978, с. 51-61.

59. Малый К.Д. Изоэлектрические фракции альбумина человека.

60. Автореферат дисс. канд. мед.наук, Симферополь, 1982, 26 с.

61. Матиец М.И. Связь обмена веществ у свиней различных пород и их помесей с развитием эндокринной системы. В кн.: Породы свиней в СССР, М., Колос, 1970, 250 с.

62. Методы биологии развития. Под ред. Детлаф Т.А., Наука, М.,1974, 327 с.

63. Моисеева И.Г., Волохович В.А., Толоконникова Е.В., Алтухов Ю.П. Дифференциация пород кур по биохимическим маркеров 1генов. Генетика, 1984, т. 20, № 4, с. 672-681.

64. Мухамедгалиев Ф.М., Ташмухамедов У.Т., Мурза-Мадиев A.M. Гетерозис в животноводстве. Алма-Ата, Казах. ССР, Наука,1975, 250 с.

65. Некрашевич A.C. Содержание свободных аминокислот, общего белка и его фракций в сыворотке крови бройлеров. В сб. работ молодых ученых ВНИИПП, 1970, т. 12, с. 197-206.

66. Ни Г.В., Риш М.А., Фищенко О.П. Наследственный полиморфизм альбумина сыворотки крови каракульских овец. Генетика, 1972, т. 8, № 3, с. 42-46.

67. Орловская H.H., Белицер В.А. Исследование N -концевой последовательности аминокислот в сывороточных альбуминах различных животных. Биохимия, 1964, т. 29, вып. 4, с. 741-748.

68. Остерман Л.А. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами. Наука, М., 1983, с. 4-80.

69. Пасхина Т.С. Количественное определение аминокислот при помощи хроматографии на бумаге. В кн.: Современные методы в биохимии, под ред. В.Н.Ореновича, Медицина, М., 1964, с. 162-180.

70. Полегешко И.С. Двух- и трехпородные скрещивания крупных белыхматок с хряками мясных пород. Свиноводство, 1969, № 3,с. 15.

71. Поляничкин A.A.»Сравнительное изучение желез внутренней секреции гибридов и чистопородных кур. Изв. Тимирязевск. с.-х. академии, 1973, вып. 4, с. I6I-I65.

72. Покусай Г.Г. Содержание фосфатных соединений и гликогена в печени и мышцах кур в зависимости от породы и при гетерозисе.- Сб. работ молодых ученых ВНИГИП, 1970, вып. II, с. 335-338.

73. Породы, линии и гибриды птицы, кн. под ред. Дмитриева JI.A., Россельхозиздат, М., 1975, 198 с.

74. Романов JI.M. Эффективность подбора с учетом различий родительских пар по антигенам гистосовместимости. Генетика, 1983, т. 19, № 8, с. I322-1326.

75. Савронь О.С., Кириченко М.В. Белок крови и его функции у телят в связи с возрастом и интенсивностью роста. В сб.: Физиология и биохимия сельскохозяйственных животных. - Киев, 1964, с. 98-103.

76. Сарсенов A.C. Некоторые биохимические показатели крови помесных и чистопородных алатаусских телят. Автореф. дисс. канд. с.-х. наук, Алма-Ата, 1967, 26 с.

77. Селиванова К.Ф., Каминская Г.А., Троицкий Г.В.,Изменение структуры альбумина крови при дисфункции щитовидной железы.- Укр. биохим. ж., 1971, т. 43, № 4, с. 4II-4I8.

78. Селянский В.М., Махортов Ф.Ф., Ермакова В.И. Некоторые показатели обмена веществ и их возрастная динамика у мясных цыплят, обладающих различной степенью роста. Тр. ВНИИПП, 1973, т. 37, с. 155-158.

79. Сергеев В.А., Слюсар П.М., Сергеева В.Д. Выращивание и содержание племенной птицы. Колос, М., 1971, 156 с.

80. Сергеев В.А., Сергеева В.Д. Оценка комбинационной способности мясных линий кур. Птицеводство, 1972, № 8, с. 24-25.

81. Сергеев В.А., Слюсар П.М., Лысый Н.П. Производство мяса бройлеров в условиях межхозяйственной кооперации. Колос, М., 1977, 112 с.

82. Сергеева В.Д., Бойко Э.Н. Селекционная работа с линиями мясных кур в направлении повышения комбинационной способности. Пути развития промышленного птицеводства, ВАСХНИЛ, Южное отделение, Киев, 1977, с. 21-25.

83. Сильвинская Э.В. Эффективность скрещивания крупных белых и уржумских свиней. В кн.: Наука сельскому хозяйству. - Киров, 1964, с. 46-51.

84. Сметнев С.И. Гетерозис в птицеводстве и его использование при выведении гибридных кур. В кн.: Гетерозис в животноводстве, Л., Колос, 1968, 263 с.

85. Сметнев С.И., Завгородняя М.Н., Раецкий A.B. Опыт использования эффекта гетерозиса в интенсивном птицеводстве. Животноводство, 1968, № 7, с. 24.

86. Сметнев С.И., Фисин В.И., Шумков Е.Г. Увеличение производства мяса птицы. Вестник с.-х. науки, 1981, № 4, с. 93-102.

87. Смирнов O.K. Активность некоторых ферментов крови, их наследуемость и связь с продуктивностью свиней. В кн.: Породы свиней в СССР. - М., Колос, 1970, 250 с.

88. Соловьев В.В., Колчанов H.A. Аминокислотные замены могут приводить к полному разрушению нормальной пространственной структуры глобулярных белков. Генетика, 1982, т. 18, № 10,с. I573-1580.

89. Соркина Д.А. Конформационные изменения белков сыворотки крови. Автореферат дисс. докт. мед. наук, Минск, 1965, 26 с.

90. Соркина Д.А. Конформационные изменения белков сыворотки крови в процессе выполнения ими транспортной функции. Вопр. мед. хим., 1967, т. 13, вып. 3, с. 263-270.

91. Соркина Д.А., Троицкий Г.В., Каминская Г.А. Изменение структуры сывороточного альбумина при взаимодействии с метаболитами. Биохимия, 1968, т. 33, вып. 2, с. 220-227.

92. Соркина Д.А., Григоренко В.К. Метод препаративного выделения белков слюны человека электрофорезом в геле агара. Лаб. дело, 1971, № 9, с. 516-518.

93. Соркина Д.А., Юхновец P.A. Простое устройство для высоковольтного электрофореза. Лаб. дело, 1972, № 2, с. II9-I2I.

94. Соркина Д.А., Бородина Н.И., Гемберг О.П., Коношенко C.B.

95. Сравнительное исследование особенностей состава, структуры сывороточных белков крови гетерозисных гибридов кур. Ш-й Всесоюзн. биохим. съезд, тез. научн. сообщ., Рига, 1974, т. I, с. 15.

96. Соркина Д.А., Бородина Н.И., Корженевский В.В. Метод электро-форетического вццеления и тонкослойного хромато-электрофоре-за белков. Укр. биохим. журн., 1975, т. 47, № 2, с. 242-246.

97. Соркина Д.А., Коношенко C.B. 0 применении метода гель-фильтрации в тонком слое сефадекса для поерделения молекулярного веса альбуминов сыворотки крови. Приклодн. биохим. и микро-биол., 1975, т. 9, № 5, с. 792-797.

98. Соркина Д.А., Бородина Н.И., Коношенко C.B. Исследование физико-химических свойств и частичной и -концевой аминокислотной последовательности сывороточного альбумина кур. Ä. эво-люц.биохим. и физиол., 1976, т. 12, № 5, с. 422-425.

99. Соркина Д.А., Бородина Н.И., Ажицкий Г.Ю. Характеристика гетерогенности альбумина сыворотки крови гетерозисных гибридов кур. Укр. биохим.ж., 1976, т. 48, № I, с. 51-57.

100. Соркина Д.А., Коношенко C.B., Бородина Н.И. Особенности структуры и физико-химических свойств альбумина сыворотки крови гибридных кур. Ш-й Укр. биохим. съезд, тез. симпоз. докладов, Донецк,1977, с. 198-199.

101. Соркина Д.А., Бородина Н.И. Структура альбумина сыворотки крови кур и их гетерозисного гибрида. Вестн. с.-х. науки,1977, № 10, с. 48-53.

102. Соркина Д.А., Остоловский Е.М., Ивлев В.Н. Изоэлектрические спектры альбумина ткани печени и сыворотки крови кроликов разного возраста. Укр. биохим. ж., 1978, т. 50, № 6, с.730-734.

103. Соркина Д.А., Гемберг О.П., Бородина Н.И. и др. Структурно-функциональные особенности альбумина сыворотки крови и печени при искусственной гибридизации кур. 1У-й Всесоюзн. биохим. съезд, тез. научн.сообщений, Москва, 1979, т. 2, с. 170.

104. Соркина Д.А. Структурно-функциональные свойства альбумина сыворотки крови гетерозисных гибридов кур. Молекулярно-гене-тические основы гетерозиса. Тез. докл. респ. симпоз., Симферополь, 1980, с. 58-59.

105. Соркина Д.А., Бородина Н.И. Особенности структуры сывороточного альбумина гетерозисных гибридов кур по данным изоэлек-трофокусирования. Журн. эволюц. биохимии и физиологии, 1980, т. 16, № 4, с. 346-351.

106. Соркина Д.А., Руднева И.И. Сравнительная характеристика белкового состава печени эмбрионов гетерозисных гибридов кур.

107. Ж.эволюц. биохим. и физиол., 1980, т. 16, № 2, с. 120-124.

108. Соркина Д.А. Структурно-функциональные свойства сывороточного альбумина гибридных животных. Биохимия животных и человека, сб. науч. тр., Киев, "Наукова думка", 1984, вып.8, с. 40-50.

109. Степанов В.М. Роль карбоксильных групп в структуре и функции белков. Успехи совр. биол., 1973, т. 75, с. 163-170.

110. Степанов В.М. 0 микрогетерогенности белков. Успехи совр. биол., 1982, т. 93, вып. I, с. 35-45.

111. Степуро Н.И., Солодунов A.A., Нефедов Л.И. Фотосенсибили-зированные видимым светом связывание пиридоксаль-5-фосфата с бычьим сывороточным альбумином. Мол. биол., 1982, т.16, вып. 6, с. 1284-1293.

112. Струнников В.А. Возникновение компенсаторного комплекса генов одна из причин гетерозиса. - Ж. общ. биол., 1974,т. 35, с. 666-676.

113. Сузи Г. Инфракрасные спектры биологических макромолекул и модельных соединений. В кн.: Структура и стабильность биологических макромолекул. - Мир, М., 1973, 481 с.

114. Суходолец В.В. Природа и механизм биологического эволюционного прогресса. Генетика, 1982, т. 18, № 4, с. 517-528.

115. Таранов М.Т., Самохин В.Т., Владимиров B.JI. Состояние белкового обмена и нуклеиновых кислот у цыплят при гетерозисе.- В кн.: Гетерозис в животноводстве. JI., Колос, 1968, 263с.

116. Титок Т.Г. Коррелятивные связи некоторых типов трансферрина с воспроизводительными признаками кур. Цитол. и генет., 1971, т. 5, № 2, с. 104-108.

117. ИЗ. Толкачева Н.В. Иммунологические и физико-химические исследования модифицированного альбумина сыворотки крови. Автореферат дисс. канд. мед. наук, Симферополь, ¿974, 16 с.

118. Троицкий Г.В. Применение расширенного уравнения Моффита для оценки конформации белков. Биофизика, 1965, т. 10, № 5, с. 895-903.

119. Троицкий Г.В. Новая система расчетов конформации белка по спектрополяриметрическим данным. В кг.: "Вопросы биофизики, биохимии и патологии эритроцитов", "Наука", М., 1967, с. 19-25.

120. Троицкий Г.В., Ажицкий Г.Ю. Конформационные переходы сывороточного альбумина. Биохимия, 1971, т. 36, № 5, с. 915919.

121. Троицкий Г.В. Конформация белка и ее устойчивость в организме. Мол.биол., Респ. межвеж.сб., Киев, 1972, вып. 8, с. 3/п.

122. Троицкий Г.В., Кирюхин И.Ф., Толкачева Н.В., Ажицкий Г.Ю. Дальнейшее изучение гетерогенности электрофоретической фракции альбумина при патологии. Вопр. мед. хим., 1974, т. 20, вып. I, с. 24-31.

123. Троицкий Г.В., Багдасарьян С.Н. Гетерогенность альбумина плазмы крови, наблюдаемая при некоторых видах патологии. -Вопр. мед. хим., 1974, № 2, с. 121-126.

124. Троицкий Г.В., Борисенко С.Н., Касымова Г.А., Тэтин С.Ю.

125. Анализ процессов денатурации и комплексообразования альбумина крови при помощи кругового дихроизма, дифференциальной спектрофотометрии и фракционирования в кислом этаноле. -Докл. АН УССР, серия Б, 1982, № 8, с. 79-81.

126. Троицкий Г.В., Ажицкий Г.Ю. Изоэлектрическое фокусирование белков в самоорганизующихся и искусственных рН-градиентах.- Киев, "Наукова думка", 1984, 220 с.

127. Турбин Н.В. Генетические основы гетерозиса. В кн.: Гетерозис. Теория и практика. JI., Колос, 1968, с. 120-125.

128. Тютиников В.Н., Литко Г.М. Организация племенной работы с материнскими и отцовскими линиями бройлеров в совхозе "Красный". В кн.: Опытное хозяйство УНИИП совхоз "Красный1.'- Крым, Симферополь, 1968, 96 с.

129. Фрезер Р. Инфракрасная спектроскопия. В кн: Аналитические методы белковой химии. - Ин.лит., М., 1963, 329 с.

130. Хатт А. Генетика животных. Колос, М., 1969, 327 с.

131. Ходорова Н.В., Шерешевская JI.M. Изменение содержания белков и нуклеиновых кислот в ядрах клеток печени при гетерозисе.- Вест. ХГУ, Проблемы онтогенеза, гетерозиса и биоэкологии животных, Харьков, 1976, 135 с.

132. Хохлов A.M. Мясные качества помесей крупной белой породы свиней и ландрас при разном уровне протеинового питания. -В сб.: Свиноводство, Киев, Урожай, 1966, 162 с.

133. Хьертен С. Хроматография белков на молекулярных ситах.

134. В кн.: Новые методы анализа аминокислот, пептидов и белков. Мир, М., 1974, 236 с.

135. Чернова Г.В., Якина Н.Х. Белки сыворотки крови в онтогенезе уток пекинской породы разных генетико-селекционных групп.

136. С.-х. биология, 1983, т. 18, № 9, с. 92-96.

137. Чихаев A.C., Цветненко Ю.Б. Гемоглобин межродовых гибридов осетровых рыб. Генетика, 1980, т. 16, №8, с. 1482-1486.

138. Чиргадзе Ю.Н. Инфракрасные спектры и структура полимеров и белков. Наука, М., 1965, 256 с.

139. Шахбазов В.Г., Попель А.Г. Действие высокой сублетальной температуры на инбредные линии и межлинейные гибриды тутового и дубового шелкопрядов. Тр. ХГУ, 1973, т. 36, с. 2528.

140. Шахбазов В.Г. 0 физико-химических механизмах инбредной депрессии и гетерозиса. Генетика, 1974, № 10, с. 153-160.

141. Шахбазов В.Г., Чешко В.Ф. Развитие представлений о биохимических и биофизических механизмах эффекта гетерозиса. -Биохим. животн. и человека, сб. науч. тр., Киев, "Наукова думка", 1984, вып. 8, с. 21-30.

142. Шевцов И.А. Генетические основы гетерозиса и инбридинга. -Биохим. животн. и человека, сб.науч.тр., Киев, "Наукова думка", 1984, вып. 8, с. 3-12.

143. Шерешевская JI.M., Микульский Ю.Э. Скорость синтеза различных типов РНК в органоидах клеток печени животных при инбредной депрессии и гетерозисе. В кн.: Вопросы генетики, селекции и гетерозиса животных. - Киев, 1971, с. 127-128.

144. Шерешевская Ц.М., Божков А.И. Молекулярно-генетические особенности гетерозиса. Биохим. животн. и человека, сб. науч. тр. Киев, "Наукова думка", 1984, вып. 8, с. 30-40.

145. Эрнст Л.К. Достижения и перспективы в селекции и генетике сельскохозяйственных животных. Вестник с.-х. науки, 1980, № 3, с. 39-43.

146. Allerton S.E., Elwyn D., Edsall J.Т., Spahr P. Isolation and aminoacid comparison of dog plasma albumin. J. biol. chenu, 1962, v» 237, p. 85-88.

147. Andersson L. The heterogeneity of bovine serum albumin. -Biochem. biophys. acta, 1966, v. 117, p. 115-120.

148. Aoki K.t Hayakava П., K. Noda, Terada H., Hiramatsu K. Behavior of fattyacid during the incubation of bovine serum albumin. Entity of the serum albumin resistent to heat. -Colloid and polymer science, 1983, v. 261, Hi 4, p. 359-364,

149. Ashton G.C., Lampkin G.H. Serum albumin and transferrin polymorphism in east Africa cattle. Hature, 1965, v. 205, p. 209-210.

150. Behrens P.O., Spiekerman A.M., Brown J.R. Structure of human serum albumin. Fed. proc., 1975, v. 34» p. 591.

151. Blauer G., Levie E., Silfen J. Relative affinites of bilirubin for serum albumins from different species. Biochim. et biophys. acta, 1977, v. 492, p. 64-69.

152. Bloomfield V. The structure of bovine serum albumin at low pH. Biochemistry, 1966, v. 5, p. 684-689.

153. Bomon H.G., Westlund L.E. Protein chromatography on an ani-onexchange resin. Arch, biochem, biophys., 1956, v. 64,p. 217-222.

154. Bonazzi L, On a raze genetic varistion of plasma albumin? bisalbuminemia. Clin. chim. acta',, 1968, v. 20, p. 362-368.

155. Bonnier G., Jonsson U.B., Ramel 0. Experiments on the effects of homozygosity and heterozygosity on the rate of development in Drosofila melanogaster. Genetics, 1959, v. 44, p» 679682.

156. Braend M.f Efremov G. Polymorphism of albumin in farm animals. 5 Congr. Intern, riprod. anim. e facondaz. artifik., Trento, v. 7» Casciad, 1964, 401 p.

157. Charlwood P.A. Ultracentrifugal studies of a rat, rabbit and quinea pig serum albumins. Biochem. J#, 1961, v. 78,p. 163-169.

158. Chen R.T. Removal of fattiacids from albumin charcoal treatment. J. biochim., 1967, v. 242, W 2, p. 173-180.

159. Colvin J.R., Smith D.B., Cook W.H. The microheterogeneity of proteins. Chem. rev., 1954, v. 54, p. 687-691.

160. Crow J.F. Dominance and oberdominance "Heterosis". Ames, Jowa Stat. coll. press., Ed. J. Cowen, 1952, 282 p.

161. Day Iff.E., Kraay G.J., Stevens R.W.C. Polymorphism of canine serum albumin. Anim. blood groups and boichem. genet., 1971, vV 2, p. 195-200.156 . .

162. Everett W.W. The effect of metall ions on the isomerisation and dimerisation of bovine plasma albumin. J, biol. chem., 1963, v* 238, p; 2676-2688.

163. Federighi G., Bianchi R., Ambrosino C., Penchisi P., Scassel-lati G., Hosa H. Selection of albumin batches for the preparation of radioiodinated HSA for tracer studies. J, nucl. biol, med,, 1966, v. 10, p, 58-63.

164. Elorey E. An introduction to genetical and copparative physiology. Philadelphia, Sanders., 1966, 258 p.

165. Franglen G., Swaniker G.R.E. Preparation and analysis ofpeptid fragments produced by pepsin hydrolisis of human plasma albumin and their relationship to its structure. Biochem. ~J., 1968, v. 109, Uo 1, p. 107-120.

166. Freid M.f Chun P.W. Polymorphism in flov serum albumin. 1. Characterisation of two genetice variants of folw serum albumin and definition of peptide differences. Comp. Bio-chem. physiol., 1971, v. 39B, p. 523-544.

167. Puller Hunter M.F. Bovine mercaptalbumin and non-mer-captalbumin monomers. Interconversions and structural differences. J. biol. chem., 1972, v. 247, H2 22, p*. 73917406.

168. Grun JT'.M. The apparent hingh reactivity of some amino groups of bovine serum albumin. Biohim. biophis. acta, 1963, 74, p'. 522-531.

169. Haldane J.B.S. The combinations for coadaptacion in polymorphism for heterosis. J. genet., 1957, v. 55, p. 218-221.177» Haley L.E. Serum albumin polymorphysm in quail and chiken-quail hibrids. Genetics, 1965, v. 51, p". 983-986.

170. Hanson L.A. Plasma Protein. Ed. by Birger BlombSck., Stocholm, GSthenburg, 1981, p. 43-72.

171. Hartley R.W., Jr., Peterson E.A., Sober H.A. The relation of free sulfhydryl groups to chromatograpfie heterogeneity and polimerisation of bovine plasma albumin.* Biochemistry, 1962, v. 1, p. 60-68.

172. Hatleigh A.S., Williams C.A. Antigenic correspondence andserum albumin among the primates. Science, 1966, v. 151, p. 1530-1537.

173. Heshberger W.K. Some physicochemical properties of transferrins in brook traunt. Trans. Amer. tish. вое», 1970, v. 99, p. 207-212.

174. Hirosi N., Takashi S., Ryoiti S. Purification and properties of serum albumin from Rana catesbeiana. Biochim. et bio-phys. acta, 1972, v. 278, p. 101-108.

175. Hoch H., Morris 0. Heterogeneity of human serum albumin. -Nature, 1945, v. 156, p. 234-236.

176. Hoglund H. Methods of biochemical analysis. Ed. by D. Glick, Interscience publishes, Inc., New-York, 1971, p. 190.

177. Ingram V.M'. Abnormal human haemoglobins. 1. The comparison of normal human and Sikleicell haemoglobins by "fingerprinting". Biochem. Biophys. acta, 1958, v. 28, p, 539-544*

178. Irwin M.R. Specifiti of gene effects, "Heterosis". Ed. J". Gowen, Ames. Jowa, Stat. coll. press"», 1952, 236 p.

179. Jacobs S., Koj A. Aminoacid comparison of rabbit plasma albumin and fibrin. Anal, biochem., 1969, v. 27, p. 178180.

180. Kamiyama T. Immunological cross-reactions and speciesspeci-ficities of bovine» goad and sheep serum albumins. Immunochem., 1977, 14. p* 85-94.

181. Karush R. Heterogeneity of the binding sites of bovine serum albumin. J. Amer. chem., 1950, v. 72, p. 2705-2716.

182. Kekwik R.A. Observation on the crystalizable albumin fraction of horse serum. S. African, med'. J., 1966, v. 40, p. 11091116.

183. Keller S., Block R.I. Amino acid composition of the serum proteins. 3. The chromatographie isolation of human and bovine serum albumins, and the amino acid composition of the fractions. Arch, biochem. biophys., 1959, v. 65, p. 366370.

184. Klotz I.M., Urquhart J.M. The binding of organic ions by proteins. Effect of temperature. J. Amer. chenu soc., 1949, v. 71, p. 847-852.

185. Knedel M. Die Doppel-Albuminaemic, eine neue erbliche proteinanomalie. Blut, 1957, v. 3, p. 129-135.

186. Koehn R.K. Esterase heterogeneity: dynamics of a polymorphism, Seience, 1969, 163, « 3870, p. 943-944.204» Koehn R.K, Functional and evolutionary dynamics of polymorphism esterases in Catostomid fishes. Trans. Amer. fish soc., 1970, v. 99, P. 219-226.

187. Koehn R.K., Peters J.E., Merrit R.B. Esterase ensyme function and genetical structure of populations of the freshwater fish, Nortropis straminens. Amer, Nat., 1971, v. 105, p. 51-55.

188. Masat H.J,, Dessauer H.C, Plasma albumin of reptilies, -Comp. biochem, physiol,, 1968, v. 25, p, 119-125.

189. Mc Indoe W.M. Occurence of two plasma albumins in the domestic folw. Nature, 1962, v. 195, p. 353-354.218, Mc Menamy H.H., Watson F, Albumins binding of indol analogs.- Oomp, Biochem, Physiol,, 1968, v, 26, p. 329-332.

190. Meloun B., Moravek L., Kostka V. Complete amino acid sequence of human serum albumin, Febs. letter,, 1975, v. 58,p. 134-137.

191. Morrisett J.D., Pownall H.J., Gotto A,M, Jr. Bovine serum albumin. Study of the fatty acid and steroid binding sites using spinlabeled lipids. J. biol. chem., 1975, v. 250, P. 4391-4396.

192. Nennstiel H.J., Becht. Über das erbliche Auftreten einer Albumin-Spaltung im Elektrophoresediagramm« Klin. Woch., 1957, v. 35, p. 685-687.

193. Peters T. Serum albumin. Adv. clin. chemV, 1970, v. 13» p. 37-111.

194. Peters Th., Davidson L.K. The biosynthes of rat serum albumin. J. Biol. ChemV, 1982, v. 257, » 15, p. 8847-8853.

195. Prager E.M., Wilson A.C. The dependence of immunological cross-reactivity upon sequence resemblacf among lisozymes. J. biol. ehem., 1971, v. 246, p. 7010-7017.

196. Ries H.S., Wetter 0., Hake Th. Zur polypeptid-ketten-struc-tur von Immunoglobulinen. Klin. Woch., 1970, v. 48,p. 862*866.

197. Re^nek J., Bednarik Т., Kici J. Microheterogeneity of albumin. Clin. chim. acta, 1963, v. 8, p. 116-121.

198. Reynolds J.A., Herbert S., Polet H., Steinhardt J. The binding of diversdetergent anione to bovine serum albumin.- Biochemistry, 1967, v. 6, p. 937-241.

199. Rosen A.M., Geller D.M. Chicken microsomal albumin: amino terminal sequence of chiecken proalbumin. Biochem. bio-phys. res. communs., 1977, v. 76, p. 1060-1066.

200. Rotschild M.a., Bauman A., Yalow R.S., Berson S.A. Tissue distribution of J^1 label human serum albumin following intravenous administration. J. clin. invest,, 1955, v'.34, p. 1354-1360.

201. Rotschild M.A., OraTz m., Schreiber S.S. Serum albumin. -Am.J. digest, diseases., 1969, v. 14, p. 711-735.246'. Saifer A'., Goldman L," The free fatti acide bound to human serum albumin. J. lipid, res., 1961, v. 2, p. 268-270.

202. Soifer A., Robun M., Ventrice M. Starch gel electrophoresis of "purific" albumins. Arch, biochem". biophys., 1961, v. 92, p; 409-412.

203. Sarich V.M., Wilson A.C. Pates of albumin in primates. -Proc, nat. acad. sol«» 1967, v. 58, p". 142-148.

204. Scheider W., Dentzis H.M., Oncley J*L. Chengee In the electric dipol vector of human serum albumin due to completing with fatty acids* Biophys. J., 1976, v# 16, p". 417-422.

205. Sogami M., Peterson H.A., Poster J.T« The microheterogeneity of plasma albumin. Ti, Permutations in disulfide pairngs asa probabli sousse of microheterogeneity in bovine albumin. Biochemistry, 1969, v. 8, № 1, p". 49-53»

206. Spector A.A., John K., Fletcher J.E. Binding of long-chain fatty acids to bovin serum albumin. J. lipid", res., 1969, v. 10, p. 5667-5674.

207. Spencer E.M., King T.P. Ieoelectryc heterogeneity of bovine plasma albumin. J. biol. Chem., 1971, v. 240, HB 1, p. 201208.

208. Stormont C., Suzuki I. Genetic control of albumin phenoty-pes in horses. Proc. soc. explt. biol. med., 1963t v. 114, p. 673-675.

209. Strauss A.W., Bennett C.D., Donohue A.A., Rodkey J.A., Alberts A.W. Rat liver pre-proalbumin: complete amino acid sequence of the pre-piace. J. Biol., 1977, v. 252, Ho 19, p. 6846-6847.

210. Swaney J.B., Klotz I.M. Amino acid sequence ad^oinig the lone tryptophan of human serum albumin. A binding site of the protein. Biochemistry, 1970, v. 9, No 13» p. 25702573.

211. Szymanowska Z., Poszwinski P., Mnrawski K., Zakraewski K. Human serum albumin in starch gel electrophoresis. Acta biochim. Polon., 1962, v. 9» p. 183-190.

212. Taceda Y.f Ruve E.B. Studies of the metabolism and distri1but ion of albumin with autologus J albumin in healty men. J. lab* clin.med., 1963» 61, p. 183-187.

213. TritBch G.I"., Tritsch H.E. Tiroxine binding. 3# Chicken serum albumin the principial tiroxine binding protein in the chicken. J. biol. chem., 1965, v. 240, № 10, p*. 3789-3792.

214. Tucker E.M. Serum albumin polymorphism in sheep. Vox. sang. 1968, v. 15» p. 306-309".

215. Urban J., Chellandurai M., Millershid A., Schreiber G. The kinetics in vivo of syntesis of albuminlike protein and albumin in rates. Eur. J. biochem., 1976, v. 67, p. 477481.

216. Van Bennhold H. Überblick über die Transportfunction der SerumeiweisskSrper. In Protides of the biological fluids. Peeters H. Ed. Amsterdam, 1962, p. 58-71.

217. Wallace S. Altered plasma albumin in the newborn infant« -Brit« J. clin. pharnu, 1977, v. 4, p. 82-88.

218. Wright J.E., Atherton L.M. Polymorphisms for LDG and transferrin loci in brook trout populations. Trans. Amer. fish soc., 1970, v. 99, p. 179-184.-rY