Изучение структурно-функциональных свойств сывороточного альбумина и биохимических критериев эндогенной интоксикации крови телят и их матерей

Борченко, Руслан Владимирович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изучение структурно-функциональных свойств сывороточного альбумина и биохимических критериев эндогенной интоксикации крови телят и их матерей
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Изучение структурно-функциональных свойств сывороточного альбумина и биохимических критериев эндогенной интоксикации крови телят и их матерей"

На правах рукописи

БОРЧЕНКО РУСЛАН ВЛАДИМИРОВИЧ

ИЗУЧЕНИЕ СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ свойств СЫВОРОТОЧНОГО АЛЬБУМИНА И БИОХИМИЧЕСКИХ КРИТЕРИЕВ ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ КРОВИ ТЕЛЯТ И ИХ МАТЕРЕЙ

03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Боровск - 2006

Работа выполнена на кафедре биохимии биологического факультета Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева».

Научный руководитель:

доктор биологических наук профессор

Киселева Руфина Евгеньевна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук профессор

Галочкин Владимир Анатольевич

доктор биологических наук профессор

Микулец Юрий Иванович

Ведущая организация:

Российский университет дружбы народов

Защита диссертации состоится «£5» .Л-и-'во.^у^Я-ДООб года в/Ю часов на заседании диссертационного совета Д 006.030.01 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных.

Адрес института: 249013, Калужская область, г. Боровск, п. Институт, ВНИИФБиП.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНу ВНИИ физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных (249013, Калужская область, г. Боровск, п. Институт, ВНИИФБиП).

Автореферат разослан % » —2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

В.П. Лазаренко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. В современной биологии параллельно с геномными исследованиями принципиальное значение приобретает изучение прогеома, как системы белков, прежде всего индивидуальных протеинов.

Альбумины - одна из основных белковых фракций крови. Концентрация альбумина в плазме и сыворотке выше, чем концентрация других белков. Альбумин вносит основной вклад во внутрисосудистое коллоидно-осмотическое давление. Кроме того, он является молекулой-переносчиком биологически важных веществ (Сорокина Д.А., 1990; Доржийн Н„ 1993; Грызунов Ю.А., Добрецов Г.Е., 1994, 1998; Титов В.Н., 1999) В связи с этим альбумин, выступая детоксикантом, является регулятором гомеостаза на стадии транспорта биологически активных низко- и среднемолекулярных субстанций (лигандов) кровью. Он транспортирует эндогенные физиологически активные вещества (гормоны, витамины, жирные кислоты, билирубин, лекарственные препараты и др), а также эндогенные соединения патогенного характера (эндотоксины) (Бравер-Чернобыльская Б.С., 1993; Грызунов Ю.А., Добрецов Г.Е., 1994,1998; Родоман Г.В. и др., 1999; Лопухин Ю.М. и др., 2000, Киселева Р.Е. и др., 1998-2004). К последним можно отнести циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК), молекулы средней массы (МСМ), продукты перекисного окисления, яды.

Связывающая функция сывороточного альбумина обусловлена особенностями строения этого белка, включающими элементы распознавания, структурной адаптации и обратимой фиксации соединений (Доржийн Н., 1993; Грызунов Ю.А., Добрецов Г Е., 1994,1998).

Нарушение конформации молекулы альбумина вызванное необратимым связыванием ее с мембранотропными эндотоксинами, перекисное повреждение белка или его гликозилирование, приводят к снижению или полному выпадению его функций.

Накопление в кровяном русле «загруженного» эндогенного альбумина препятствует выходу токсинов и усугубляет эндогенную интоксикацию.

Для исследования связывающей способности альбумина используются специальные молекулы - флуоресцентные зонды (Добрецов Г.Е., Грызунов Ю.А., 1994). Они занимают в альбумине те места, которые предназначены для связывания метаболитов, их флуоресценция в результате возрастает в сотни раз. Зонды позволяют легко обнаружить нарушение сорбционной емкости альбумина. Однако, до последнего времени подобные анализы не стали достоянием ветеринарной клиники. По той же причине исследовательские работы в области патологии транспортной функции альбумина были лишь эпизодическими.

Расстройства пищеварения у новорожденных животных с симптомокомплексом диарея выделены в самостоятельное заболевание - неспецифическая диарея (dyspepsia neonatorum). Часто в результате технологического стресса болезнь охватывает до 90 % поголовья молодняка неонатального возраста (Жирков И.Н., 2001). Изучение этиологии и течения данного заболевания переходит на новый - молекулярный уровень (Жирков И.Н., 1998-2001; Фазуллин Х.В., Чуличкова Т.В., 2003; Батманов М.А., Теренть-ева Н.Ю., 2003). Сравнительно недавно появились работы, посвященные изучению свобод! юрадикальных процессов и активности антиоксидантов в патогенезе незаразных и инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных (Томчук В.А., Мельничук Д А, 2003; Шахов А.Г., 2004; Жаркой Б_П„ Рецкий М.И., 2004; Степанова И П., 2004, 2005), их коррекции путем применения антиоксидантов (Томчук В.А., Мельничук Д.А, 2003; Каверин Н.Н., Дегтяре! 1едования час-

то разобщены и не дают полной картины Не заслуженно малое внимание уделяется сывороточному альбумину и его роли в реализации детоксикации организма животного.

Таким образом, изучение связывающей способности СА при диарее, а также динамики изменения уровня мембранотропных эндотоксинов, характер их влияния на детоксикационную функцию СА представляет значительный интерес, как для фундаментальной науки, так и для практической ветеринарии

Цель исследования - изучить изменение структурно-функциональных свойств сывороточного альбумина под влиянием эндогенной интоксикации, вызванной нарушением обмена веществ при неспецифической диарее у телят. Задачи исследования:

1 Изучить связывающую способность сывороточного альбумина, уровень его окислительно модифицированных и гликозилированных форм в сыворотке крови телят в норме и при диарее;

2 Исследовать уровень мембранотропных эндотоксинов в сыворотке крови телят и их коров-матерей;

3 Определить взаимосвязь между связывающей, транспортной способностью сывороточного альбумина и содержанием мембранотропных эндотоксинов в сыворотке крови телят и их коров-матерей;

4 Исследовать эффективность применения экзогенного сывороточного альбумина в лечении и профилактике неспецифической диареи новорожденных телят Научная новизна. Впервые исследована связывающая способность альбумина молока, молозива и сыворотки крови коров. Определена связывающая способность альбумина сыворотки крови здоровых телят и телят, больных диареей Выявлены корреляционные зависимости между накоплением эндотоксинов (продукты свободноради-кального окисления, молекулы средней массы, циркулирующие иммунные комплексы) и альбуминовыми показателями в сыворотке крови телят при диарее, в зависимости от длительности и тяжести заболевания. Использование такой комплексной оценки состояния системы интоксикации/детоксикации на молекулярном уровне позволяет использовать данные показатели как в диагностике заболевания (при оценке степени нарушения биохимических процессов в организме), так и при построении прогнозов исхода болезни.

Научно-практическая ценность. Выявлено, что исследуемые интегральные показатели эндотоксикоза являются критериями объективной оценки состояния телят, больных диареей, в острую фазу заболевания и способны отражать тяжесть патологического процесса.

Снижение под влиянием эндотоксинов связывающей способности альбумина и увеличение индекса токсичности по альбумину зависит от концентрации эндотоксинов в сыворотке крови больных диареей телят связанной с тяжестью заболевания Показана связь между отдельными эндотоксинами и резервом связывающей способности альбумина.

Предложена краткая схема получения сывороточного альбумина с повышенными детоксикационными возможностями из крови убойных животных крупного рогатого скота Использование экзогенного альбумина в смеси с солями позволяет рекомендовать его для лечения и профилактики диареи у телят

ние сывороточного альбумина в качестве детоксицирующего препарата позволяет значительно усовершенствовать терапию этого заболевания

Полученные в данной работе результаты позволили использовать сывороточный альбумин с повышенными детоксикационными свойствами в терапии диареи телят в ОПХ «Ялга» (г Саранск, Республика Мордовия) Полученные данные внедрены в учебный процесс на кафедре незаразных болезней и кафедре биохимии Мордовского государственного университета имени Н П. Огарева (г. Саранск).

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Оценка показателей бычьего сывороточного альбумина (ОКА, ЭКА, РСА и ИТ) с помощью флуоресцентного метода с зондом К-35, уровня мембранотропных эндотоксинов (СРО, МСМ, ЦИК), продуктов окислительной модификации и гликози-лированных форм альбумина в сыворотке крови телят с симптомокомплексом диареи, а также в сыворотке крови, молозиве и молоке коров-матерей носит диагностический и прогностический характер.

2 Степень влияния эндотоксинов на связывающую способность сывороточного альбумина (по показателям ЭКА и РСА) определяется их концентрацией в сыворотке крови, а также зависит от выраженности (глубины) процесса эндогенной интоксикации у телят при диарее Модификация структурно-функциональных свойств альбумина является одной из причин развития эндогенной интоксикации.

3. Использование экзогенного сывороточного альбумина в качестве неспецифического детоксиканта позволяет компенсировать биохимические расстройства в системе детоксикационной защиты организма, тем самым, способствуя снижению в кровяном русле эндогенных токсинов (продукты пероксидации, молекулы средней массы, циркулирующие иммунные комплексы).

Апробация работы. Результаты работы и основные положения диссертации доложены и обсуждены на VII, VIII Пущинской школе конференции Молодых ученых «Биология - наука XXI века» (г. Пущино, 2003-2004), в материалах Международной научно-технической конференции «Современные технологии переработки животноводческого сырья в обеспечении здорового питания' наука, образование и производство» (г. Воронеж, 2003), в материалах Международной конференции «Инновации 2004» (г Саранск, 2004) В федеральный институт промышленной собственности поданы заявки № 2005107397/15 «Способ получения ветеринарного альбумина» приоритет от 16.03.2005, № 2005104319/13(005621) «Способ лечения и профилактики токсической формы диспепсии новорожденных телят» приоритет от 17.02.2005.

Публикации по теме диссертации. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ, приняты 2 заявки на изобретение.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 159 страницах машинописного текста, документирована 20 таблицами и иллюстрирована 21 рисунком Работа состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания материалов и методов' исследования (глава 2), изложения собственных результатов (главы 3-5), заключения, выводов и библиографического списка, включающего 275 источников, в том числе 228 отечественных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объект, материал и методы исследования

Объектом исследования служили: 1) телята черно-пестрой породы, разделенные на группы: клинически здоровые телята (и = 40), телята, больные неспецифической диареей 1, 3, 5 и 10 дней (и = 70), а также телята, больные токсической (и = 36) и про-

стой (п = 34) формами диареи (всего 180 голов); 2) коровы-матери черно-пестрой породы 2-3 отела (п =102) с аналогичными показателями живой массы и молочной продуктивности, которых содержали в условиях поточно-цеховой системы

К данному симптомокоКишексу относили диарею органического происхождения и рефлекторно-стрессового (функционального) характера По клиническому проявлению различали простую (легкую) диарею и токсическую (тяжелую) Простая и токсическая диареи не являлись нозологическими единицами разных заболеваний, а лишь отражают тяжесть патологического процесса.

Диарею и ее формы устанавливали на основании комплекса данных, клинических признаков, данных патологоанатомического вскрытия, лабораторного, бактериологического исследований материалов и анализа условий кормления и содержания молочных коров, нетелей, новорожденных телят.

При дифференциальной диагностике диареи (диспепсии) от сходных заболеваний исключали паратиф, колибактериоз, инфекционное воспаление пуповины

Во время опыта следили за приростом массы тела животных, проявлением клинических признаков, за сохранностью телят.

Материалом исследования служили кровь, молоко и молозива крупного рогатого >

скота и кровь телят. Забор материала осуществлялся в осенне-весенний период Материал забирали утром, примерно в одно и то же время Кровь брали из яремной вены у телят и коров в пластиковую посуду. Сыворотку получали путем отстаивания крови при комнатной температуре с последующим центрифугированием при 1500 об/мин в течение 15 минут.

Методы исследования. Общий белок сыворотки крови опытных животных определяли биуретовым методом (Колб В.Г., Камышников B.C., 1982). Белковый состав сыворотки крови определяли электрофоретически в полиакриламидном геле и (или) на ацетат-целлюлозных пленках (Laemli И.К., 1970 г.).

Концентрацию альбумина - общую (ОКА) и эффективную (ЭКА) - определяли флуоресцентным методом (Добрецов Г.Е., Грызунов Ю.А., 1994) со стандартными наборами реактивов «Зонд-Альбумин» (НИМВЦ «ЗОНД», Москва, Россия) на флуори-метре АКЛ-01. Средние величины ОКА сыворотки крови телят и коров, измеренные флуоресцентным методом, оказались такими же (около 45 г/л), как по известным биохимическим данным (Коплик Е В и др., 2002). Резерв связывания альбумина рассчитывается по формуле: РСА = ОКА/ЭКАЮО%. Индекс токсичности (ИТ) определяемый как ОКА/ЭКА-1, характеризует степень интоксикации организма по альбумину.

Для определения интенсивности свободнорадикального окисления (СРО) и общей антиоксидантной активности (АОА) сыворотки крови применяли хемилюминес-центный экспресс-метод (Афонина Г.Б., Бордонос В.Г., 1990). Интенсивность СРО определяют по значению светосуммы за 60 секунд на хемилюминомере Emilite -1105 (Рига, Латвия), совмещённом с персональным компьютером. За единицу антиоксидантной активности сыворотки принимают такую активность, которая приводит к 50 %-ному снижению интенсивности СЬ'-индуцированного свечения.

Оценку окислительной модификации сывороточного альбумина проводили по методу Levine R.L. et al. (1990), в модификации Дубининой Е.Е. с соавт. (1995).

Уровень гликозилированной формы альбумина (гАпб, фруктозамина) определяли по реакции с триптофаном (Колб В.Г., Камышников B.C., 1982).

Молекулы средней массы (МСМ) (Гибриэлян Н.И., Липатова В.И, 1985) определяли спектрофотометрически, в ультрафиолетовой области света при длине волны 254 нм и 280 нм, предназначенных для определения ароматических аминокислот и других

фракций средних молекул Количество молекул средней массы выражали в единицах, равных показателям экстинции (уел ед) Количество среднемолекулярных циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) оценивали спектрофотометрически по методике Вельбри С К., Лиллеорг A.JL, Линдстрем С.Л, 1988г.

Статистическая обработка результатов проведенных исследований осуществлялась на основе параметрического метода Стьюдента (Лакин Г.Ф., 1980). При расчетах ошибки выборочной разницы учитывали величину коэффициента линейной корреляции (г) (при условии г#0, гтм-l, тф-1) между сравниваемыми показателями (Плохин-ский Н А , 1961) Оценка достоверности различий между средними значениями опытных групп и контроля осуществлялась при достоверной вероятности 95%.

Все расчеты согласно вышеуказанным формулам произведены с помощью ПК на базе процессора Celeron 450, профессионального пакета для обработки и анализа статистической информации "Statistica 6.0".

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Изменение свойств сывороточного альбумина в коррекции биохимических механизмов эндогенной интоксикации

Одним из основных белков сыворотки крови является альбумин. Кроме поддержания осмотического давления крови и белкового резерва организма, альбумин обладает способностью связывать и транспортировать различные виды соединений, органической и неорганической природы Находящийся в сыворотке альбумин способен переносить и депонировать слаборастворимые в крови вещества эндогенного и экзогенного происхождения (Джафаров Э С., 1990; Коткина Т И и др., 1991; Доржийн Н, 1993, Колышев В А , 1993, Иванов А И. и др., 1996)

Вещества, связывающиеся с альбумином, в основном гидрофобны или амфи-фильны (Шимановский Н Л 1984; Сорокина Д А , 1990, Пентюк А А и др , 1995; Увер-ский В Н, Нарижнева Н В, 1998; Титов В Н, 1999).

При различных видах патологии нарушается связывающая способность альбумина (Луйк А И. и др, 1983, Луйк А.И., Лукьянчук В.Д., 1984; Миллер Ю.И., 1993; Лопухин Ю.М и др, 2000), что может бьггь причиной интоксикации и отравлений, так как альбумин связывает вещества, которые в свободном виде и в больших количествах токсичны для организма С другой стороны, загруженность альбумина ксенобиотиками или метаболитами дает информацию об эффективности функционирования печени и почек — основных детоксицирующих органов. Следовательно, определение степени нарушения связывающей способности альбумина важно для оценки уровня интоксикации

В задачу данной работы входило определение альбуминовых показателей (ОКА, ЭКА, РСА, ИТ по альбумину), характеризующих систему детоксикации организма. Среднее значение ОКА по группе обследованных здоровых животных (телят) составило 45,93±1,50 г/л, ЭКА - 42,7311,38 г/л, РСА=93,05±0,64 %, а ИТ=0,07±0, 008 Близость значений медианы и среднего арифметического для ЭКА, ОКА и РСА свидетельствуют о нормальности распределений этих показателей. Данные значения были приняты нами за норму.

С помощью горизонтального электрофореза в полиакриламидном геле и на ацетат-целлюлозных пленках, нам удалось идентифицировать и определить количество пяти основных фракций белков сыворотки крови: альбумины, ai-, 0.2-, ß- и у-глобулины

Таблица 1. - Белковый состав (г/л) сыворотки крови телят, больных диареей по данным электрофоретического разделения (М±т)

Общий белок, г/л Белковые фракции, г/л Альб/

Группа животных альбумины глобул ины (а2+у)

ai- а2- ß- Y"

Здоровые животные, п=40 68,3±1,10 37,9±0,57 3,7±0,25 8,9+0,16 9,1 ±0,75 6,6±0,23 2,4 ос

1 сут., п=35 60,7±0,98* 37,6±0,62 3,6±0,31 8,7±0,21 9,4±0,86 1,2±0,13* 3,8

Длительность 3 сут., п=35 67,6±0,96 36,3+0,71* 3,8±0,27 • 9,2±0,20 9,3±0,81 8,8±0,35* 2,3

заболевания 5 сут., п=35 66,5±1,02* 33,8±0,59* 4,1±0,26* 9,7±0,18* 9,410,84* 9,4±0,36* 1,77

10 сут., п=35 66,3+0,98* 33,0±0,61* 4,4±0,25* 9,9±0,23* 9,1±0,73 9,7±0,35* 1,68

Тяжесть токсич., п=18 66,7±1,03* 30,8±0,52** 4,4±0,30* 10,6±0,17* 9,8±0,69* 10,6+0,41* 1,45

заболевания прост., п=17 67,4±0,97 36,2±0,65* 4,0+0,32 9Д±0,15* 9^±0,80* 8,5±0,33* 2,08

Достоверность по отношению к уровню здоровых животных: * - р<0,05; ** - р<0,01

(табл.1).

Белковый состав сыворотки крови больных телят характеризовался умеренным снижением фракций альбумина и значительным увеличением уровня 0.2- и у-глобулинов.

Сыворотка крови телят, больных 1 сутки, характеризовалась снижением общего количества белка (на 11 %), а также незначительным снижением уровня «1- и 0С2-глобулинов (2-3 % относительно контроля). Более значительным было снижение уровня у-глобулинов В ряде образцов количество у-глобулинов носило следовой характер.

У телят, болеющих от 3 до 10 суток отмечалась общая тенденция к снижению альбуминовой фракции (от 4 до 13 % в группах больных животных), увеличению количества а-глобулинов (на 3-19 %). Отмечался значительный рост уровня у-глобулинов Наибольшее количество данной фракции белков выявлено на 10-е сутки, которое превышало контрольный уровень на 47 %. Характерным признаком служило уменьшение показателя альбумин/ («г-гл +у-гл) ниже 2,2. Все это может свидетельствовать о напряжении компенсаторно-адаптационных механизмов и переходе заболевания в стадию хронического воспаления.

Токсическая форма заболевания характеризовалась более значительными нарушениями в белковом составе сыворотки крови Отмечались падение количества альбуминовой фракции (на 19 %), рост альфа- (на 19 %) и бета-глобулинов (на 8 %). При токсической форме заболевания выявлен максимальный рост фракции у-глобулинов, уровень которых превышал контрольные значения в 1,6 раза

Как видно на рисунке, в течение всего периода болезни общая концентрация альбумина (ОКА) оставалась в пределах нормы или изменялась незначительно, отмечалось снижение ЭКА, отражающее падение связывающей способности. Так если в первые сутки ЭКА сыворотки крови телят изменяется не значительно, то к 3-им суткам ее показатель снижается на 19 %, а к 5-ым - на 40 % (рис 1)

% 125у-

ОКА ЭКА РСА

Примечание: достоверность по отношению к уровню здоровых жив-х: р^0,05; ** - р^0,01 Рисунок 1. Показатели ОКА, ЭКА, РСА в сыворотке крови телят с симптомокомплексом диареи в зависимости от длительности и тяжести заболевания

Все это свидетельствует о снижении полноценности альбумина, способности его выполнять функцию сорбции лигандов и степени блокирования альбуминовых центров.

На 10-е сутки, наряду с незначительным повышением ОКА (по сравнению с 5-ми сутками), возрастает на 25% его эффективная концентрация и резерв связывания (сорбционная емкость молекулы альбумина)

Рост индекса токсичности по альбумину свидетельствует об увеличении токсикоза (Добрецов Г.Е., Грызунов Ю.А., 1994). Чем выше значение ИТ, тем выше загруженность активных центров альбумина. В таком состоянии наблюдается снижение компенсаторных возможностей детоксикационных свойств молекулы альбумина за счет снижения его связывающей способности.

Наибольшее увеличение ИТ отмечалось на 5-е и 10-е сутки заболевания (в 9,8 и 6,1 раза соответственно).

Чем тяжелее протекало заболевание, тем ниже были значения регистрируемых показателей ЭКА и ОКА сыворотки крови.

Наиболее низкие величины ЭКА и РСА, а как результат и более выраженное нарушение транспортной функции сывороточного альбумина, зафиксированы при токсической форме диареи, которые составили 50,6 и 56,2% соответственно (рис. 1).

Корреляционный анализ полученных данных показал устойчивую (силь- ^

ную) прямую взаимосвязь показателей эффективной и общей концентрации сы- ;

вороточного альбумина крови больных телят. Наибольший коэффициент корреляции в ряду ЭКА-ОКА отмечен для 1-3 суток заболевания животных (г- 0,98 и г= 0,97 соответственно (р<0,01). Низкими значениями коэффициента линейной корреляции ЭКА-ОКА характеризовались 10 сутки заболевания и простая форма заболевания (р<0,01), что может свидетельствовать о нарушении регуляторных механизмов, поддерживающих данную корреляцию (Грызунов Ю А, Добрецов Г.Е., 1998).

Основной причиной возникновения патологии у новорожденных животных является нарушение процесса становления и последующего согласованного взаимодействия физиологических систем, обеспечивающих поддержание метаболического статуса в организме. При этом важная роль принадлежит системе антиок-сидантной защиты Функциональная недостаточность ее в ранние периоды адаптации новорожденного к новым условиям существования может привести к возникновению дисбаланса в течении процессов образования окисленных продуктов, вызывая серьезное нарушение метаболизма. Такие отклонения сопровождаются сдвигом про- и антиоксидантного равновесия, являющегося основным механизмом окислительного гомеостаза, в сторону окислительного стресса. При всех патологических процессах в крови увеличивается содержание перекисей липидов, оснований Шиффа, количество которых зависит от глубины воспалительного процесса и детоксикационных возможностей антиоксидантной системы (Зенков Н.К., 2001).

Значение уровня СРО сыворотки крови клинически здорового молодняка составил в среднем 2,28±0,09 имп/с, уровня АОА сыворотки - 13,14±0,44 ед/мл. Данные значения были приняты нами за контрольный уровень.

Наиболее высокая концентрация продуктов СТО наблюдалась у новорожденных животных на 3-5 и 10-е сутки заболевания, которая превышала контрольный уровень на 40 и 55 % соответственно. Уровень АОА сыворотки крови телят в 1-3 сутки болезни отличался незначительно от такового у здоровых животных.

Высокий уровень свободнорадикальных процессов, развивающееся кишечное расстройство приводят к истощению антиоксидантной защиты сыворотки, снижению ее уровня на 25 % к 5 дню и на 32% к 10 дню соответственно относи-

тельно контроля (рис. 2).

1 3 5 ю Длительность заболевания

Примечание: достоверность по отношению к уровню здоровых жив-х: *- р<0,05; ** - р<0,01 Рисунок 2. Показатели эндогенной интоксикации в сыворотке крови телят с симптомокомплексом диареи в зависимости от длительности заболевания

При легкой форме течения заболевания уровень продуктов СРО составлял 3,50+0,04 имп/с (р<0,01), и было выше контрольного в 1,5 раза. При этом активность антиоксидантной системы ниже контрольного значения на 10 %. Наиболее серьезные нарушения в системе СРО/АОА наблюдались в плазме крови животных, больных токсическими формами диспепсии Так, в этой группе интенсивность СРО возрастает в 1,7 раза, антиокисдантная защита снижается на 35 % по отношению к уровню здоровых телят (рис.3).

простая токсическая

Примечание- достоверность по отношению к уровню здоровых жив-х: *- р50,05; ** - р<0,01 Рисунок 3. Показатели эндогенной интоксикации в сыворотке крови телят с симптомокомплексом диареи в зависимости от формы заболевания

Низкий уровень АОА, лимитирующий образование АФК, не справляющийся с возросшей пероксидацией, создает условия для формирования хронического -

воспалительного процесса, ведущего к профессии кишечного расстройства

Высокий уровень процессов перекисного окисления является быстрым способом модификации белковых молекул, а усиление окислительной деструкции белков, как и пероксидации липидов, играет важную роль в структурно-функциональных изменениях мембран различных тканей и органов, что всегда влечет за собой нарушение клеточного гомеостаза (Дубинина Е Е, 1992)

Окислительная модификация белков - один из ранних индикаторов поражения тканей при патологии (Дубинина Е Е., Шугалей И.В., 1993).

В альбуминовой фракции сыворотки крови здоровых животных были выявлены продукты окисления, которые прореагировали с 2,4-динитрофенилгидра-зином.

Основное количество динитрофенилгидразонов, образующихся в результате окисления, относятся к альдегидо- (Е274) и кетонопроизводным (Е%4) нейтрального характера. Количество алифатических альдегидо- и кетонопроизводных динитрофенилгидразонов основного характера носило следовой характер или совсем не определялось В связи с чем данные величины не принимались нами во внимание, как показатели не характерные для перекисного повреждения альбумина Уровень гликозилированного альбумина сыворотки крови здорового молодняка составил в среднем 1,31+ 0,04 г/л, что было принято за норму для организма здорового теленка.

Наиболее высокая степень окислительной модификации альбумина отмечается в первые дни жизни и заболевания животного Так, в первые сутки болезни уровень альдегид-динитрофенилгидразонов, конечных продуктов перекисного окисления белков, определяемых при 274 нм, превышал контрольный уровень (здоровые животные) на 37 %, уровень кетон-динитрофенилгидразонов (Езм) - на 38 %.

При этом количество гликозилированного альбумина практически не отличалось от контрольного уровня (рис. 4).

Е274 Е364 гАлб, г/л

Примечание: достоверность по отношению к уровню здоровых жив-х: *- р<0,05; ** - р<0,01 Рисунок 4. Уровень окислительной модификации альбумина, гликозилированного альбумина в сыворотке крови телят при диарее в зависимости от длительности и формы заболевания

На 3-е и 5-е сутки заболевания уровень динитрофенилгидрозонов продолжал увеличиваться и превышал контрольные значения на 45 и 56 % соответственно для альдетод-динитрофенилгидразонов, и на 43 и 53 % - для кетон-динитрофенилгидразонов. Рост количества продуктов окислительного повреждения альбумина замедлялся к 10 суткам заболевания животных К 10 дню уровень динитрофенилгидразонов Е274 составлял в среднем 40,62±0,71 опт ед (р<0,05), Е%4 - 24,55+0,40 опт ед (р<0,05), что превышало контрольное значение на 68 и 57% соответственно (рис.4).

Если на 3-5 сутки заболевания количество гликозилированного альбумина менялось не значительно (на 1,5-3 % по отношению к контролю), то уже к 10-м суткам уровень гликозилированной формы альбумина превышал контрольное значение на 12 %.

Изменение уровня продуктов окислительного повреждения белков, в частности альбумина, в сыворотке отражает баланс между скоростью окисления и скоростью деградации окисленных белков и сопровождается денатурацией белка, развертыванием полипептидной цепи (рефолдинг) и потерей биологической активности альбумина. Измененные белки становятся более чувствительными к процессам протеолиза (Дубинина Е.Е., Шугалей И.В, 1993).

В процессе окислительной модификации белка и его гликозилирования образуется неустойчивое промежуточное основание Шиффа, превращающееся в более стабильный фруктозамин Гликозилирование необратимый процесс, «выбивающий» молекулу альбумина из его «функциональной ячейки»

При изучении степени окислительной модификации альбумина в сыворотке крови телят обнаружено, что, чем тяжелее протекала болезнь, тем выше накапливалось количество продуктов окислительного повреждения альбумина Так, при токсической форме, уровень альдегид-динитрофенилгидразонов превышал контрольное значение в 1,9 раза, кетон-динитрофенилгидразонов - в 1,7 раза Количество гАлб было выше контрольного на 15 % (рис.4).

Изменение уровня продуктов окислительного повреждения белка при простой форме диареи носило компенсаторно-приспособительный характер Количество альдегид-динитрофенилгидразонов составляло в среднем 39,41+ 0,67 опт ед (р<0,05), кетон-динитрофенилгидразонов - 23,9210,31 опт.ед. (р<0,05), что превышало контрольный уровень на 68 и 53 % соответственно для Е274 и Езы- Количество гликозилированного альбумина сыворотки крови телят этой группы, незначительно отличалось от уровня такового у здоровых животных (рис.4)

Сорбция гидрофобных токсинов альбумином и липопротеинами рассматривается как важный механизм детоксикации крови, обеспечивающий многократное снижение уровня токсинов и их доставку в печень с возможностью дальнейшего выведения из организма (Гаврилов В.Е. и др., 1999). Особое значение этот механизм приобретает для низко- и среднемолекулярных токсинов.

Усиление протеолиза белков - еще один из путей пополнения пула молекул средней массы, который наблюдается при воспалении.

Наши исследования показали, что в среднем уровень МСМ в сыворотке крови здоровых телят составляет МСМгю = 0,30+0,003 уел ед. и МСМ254 = 0,33+0,003 уел ед, что, по-видимому, соответствует физиологической норме здорового животного Аналогичные данные найдены в работах Каверина Н Н., Дектярева Д.В. (2004).

Из отраженных на рисунках данных видно, что показатель МСМ динамично увеличивается в зависимости от длительности и тяжести заболевания телят диа-

реей (рис. 2, 3).

Так на 1-е сутки заболевания уровень МСМ, содержащих ароматические аминокислоты, превышал таковой у здоровых животных на 10 % и составлял в среднем 0,33±0,005 уел ед. (р<0,05). Содержание МСМ254 составляло в среднем 0,35+0,002 усл.ед (р<0,01), что превышает контрольный уровень на 6 %. На 3-5 сутки болезни уровень МСМгво в плазме крови телят повышался на 13 % При этом количество МСМ не содержащих ароматических аминокислот на 3-е сутки превышало контроль на 15%, а уже на 5 сутки - на 30 %. На 10-е сутки заболевания уровень средних молекул, содержащих ароматические аминокислоты превышал контроль на 27%, а уровень МСМ254 - на 33 % соответственно (рис. 2)

При легкой (простой) форме диареи содержание МСМгао в крови увеличивалось на 20 %, а МСМ254 - на 27% по сравнению с контролем При токсической форме течения заболевания содержание МСМ при 254 нм составляло 0,45±0,005 уел ед (р<0,01) и 0,39+0,009 усл.ед. (р<0,05) при 280 нм, то есть данные показатели были ниже контрольного на 36 и 30 % соответственно (рис.3).

Накопление водорастворимых токсических продуктов, с одной стороны, и способность альбумина к детоксикации (связыванию) гидрофобных токсинов, с другой - два абсолютно независимых процесса. Учитывая независимый характер изменения содержания МСМ и ЭКА, можно привести эти два параметра к общему - критерию интоксикации.

Критерий интоксикации, предложенный Гавриловым В.Б. и соавт (1999) и принятый как отношение КИ=МСМ1000/ЭКА и характеризующий взаимосвязь уровня эндотоксинов и системы детоксикации, носил колебательный характер.

В первые сутки критерий интоксикации превышал контрольное значение на 16%, на 3-е - на 40 %, а уже на 5-е сутки - в 1,9 раза. К 10-му дню болезни отмечалось снижение данного параметра до значения, превышающего норму в 1,67 раза Такой выраженный дисбаланс между накоплением и де гоксикацией (связыванием) токсинов в сыворотке крови служит серьезным обоснованием к проведению детоксикационной терапии у больных животных.

Выявленные изменения коррелировали с тяжестью состояния больных животных, а потому могут бьггь использованы в качестве дополнительного диагностического и прогностического критерия при установлении формы диспепсического расстройства у новорожденных телят.

Показателями нарушения иммунного гомеосгаза, а именно его гуморального звена, являются ЦИК, содержание которых обусловлено тяжестью патологического процесса (Габриэлян Н.И и др., 1985; Шилов Е М, Лесков В.П, 1983; Киселева Р.Е. и др., 2002; 2004).

Нами была проведена сравнительная оценка уровня ЦИК и клинического проявления желудочно-кишечных расстройств у новорожденных телят

В 1-е сутки болезни уровень ЦИК превышал контрольный незначительно и составлял в среднем 81,40±1,12 усл.ед. (р<0,05). Однако уже на 3-е сутки уровень ЦИК вырос в 1,8 раза по отношению к таковому у здоровых телят. На 5-е сутки содержание ЦИК снижается, но превышает контроль на 41 %. К 10-у дню течения болезни уровень ЦИК вновь увеличивался и превышал контрольный уровень почти в 2 раза (рис. 2).

Как показали наши исследования при простой форме диареи содержание ЦИК в сыворотке крови увеличивалось на 47 %, при токсической форме - почти в 2 раза по отношению к контрольной группе (рис.3).

Влияние содержания продуктов эндотоксикоза в сыворотке крови, молозиве, молоке коров на жизнеспособность и продолжительность болезни их телят

Чтобы установить зависимость жизнеспособности и продолжительности болезни новорожденных телят от биохимического состава молозива, молока и крови их матерей, опытные коровы были разделены на восемь групп (всего 145 голов)' стельные коровы (35 голов); коровы, от которых народились физиологически (клинически) здоровые телята (I) (40 голов); коровы, телята которых больны диареей 1-е, 3-е, 5-е и 10-е сутки (II-V группы) (35 голов); коровы, телята которых больны токсической формой диареи (VI) (17 голов); коровы, телята которых больны простой формой диареи (VII) (18 голов).

Нами изучено содержание продуктов эндогенной интоксикации в сыворотке крови стельных животных в последние 1-2 недели беременности Уровень продуктов свободнорадикального окисления составил в среднем 3,0510,02 имп/с, активность антиоксидантной системы - 9,4210,30 ед/мл, уровень МСМ254 - 0,3310,004 уел ед, МСМгио - 0,2910,005 усл.ед., ЦИК -109,2013,98 усл.ед.. По данным значениям всех животных этой категории можно приравнять к I группе. Лишь в 17 % случаев значения показателей эндотоксикоза значительно превышали среднеарифметические величины, значительно отклоняясь от медианы Вероятно, такие животные характеризовались глубокими нарушениями обменных процессов, а также именно от таких животных возможно рождение телят-гипотрофиков и телят, болеющих диареей.

В сыворотке крови коров-матерей, от которых народились физиологически здоровые телята (контрольная группа - I), уровень продуктов СТО составил в среднем 3,02Ю,01 имп/с, активность антиоксидантной системы - 9,4010,23 ед/мл, уровень МСМ254 - 0,3310,005 усл.ед., МСМ28о - 0,ЗМЮ,004 усл.ед., ЦИК - 110,0514,01 усл.ед. Данные значения условно были приняты за норму.

Несбалансированное и неполноценное кормление в разные периоды года, а также нарушение технологии содержания животных, отрицательно влияют на биохимический статус, процессы метаболизма, общую иммунную резистентность и продуктивность коров Исследования показали, что у коров, от которых народились телята с признаками желудочно-кишечных расстройств, наблюдается устойчивое повышение в сыворотке крови всех показателей эндогенной интоксикации.

Так, у коров II и III группы уровень процессов СРО превышал таковой у контрольной на 20 и 30 %, антиоксидантная активность сыворотки снижена на 24,5 и 29 % соответственно Наибольшие нарушения в системе СГО/АОА отмечались в III и IV группах животных. Так, у животных III группы СРО превышает контрольный уровень в 1,9 раза, уровень АОА снижен на 38 %, у животных IV группы -СРО выше в 2 раза, АОА снижена на 42 %, относительно уровня у здоровых животных.

Уровень МСМ также повышался в группах в зависимости от длительности заболевания телят Количество молекул средней массы, не содержащих ароматические аминокислоты, изменялось в I-III группах не значительно и превышало контрольный уровень в среднем на 3-18 %. В группе животных, телята которых больны 10-е сутки, уровень МСМ254 превышал контроль на 40 %. Уровень МСМ, содержащих ароматические остатки аминокислот (МСМгво) во II и III группах был выше контрольного на 7 и 10 %, соответственно. В III и IV группах отмечалось

значительное повышение этого показателя, на 67 и 77 % соответственно.

Изменения уровня ЦИК носили сглаженный характер во всех группах животных. Отмечены незначительные колебания этого показателя (на 5-7 %) между группами и повышение относительно контроля на 12-23 % в зависимости от группы животных.

У коров, телята которых больны токсической формой диареи, отмечалось увеличение уровня СРО более, чем в 2 раза, снижение АОА на 47 %. На фоне усиления процессов пероксидации отмечался высокий уровень среднемолекулярных пептидов. Уровень средних молекул, содержащих ароматические аминокислоты составил 0,56±0,01 усл.ед. (р<0,05), не содержащих ароматические остатки -0,57±0,004 усл.ед. (р<0,05), что выше контрольного уровня на 87 и 73 % соответственно.

При простой форме диареи у телят, в крови их матерей отмечается повышение уровня СРО в 1,7 раза, снижение уровня антиоксида!ггной защиты на 33 % по отношению к уровню животных 1 группы (родившие клинически здоровых телят). Уровень среднемолекулярных пептидов превышал контрольный уровень на 37 % соответственно для МСМмо и на 42 % - для МСМ254.

Количество ЦИК сыворотки крови коров, телята которых больны токсической формой диареи, составило в среднем 150,71±8,20 усл.ед (р<0,05), больных простой формой диареи - 131,25±4,60 усл.ед. (р<0,05). Данные величины превысили контрольный уровень на 38 и 20 % соответственно.

Нами изучены альбуминовые показатели молозива и молока стельных коров, у телят которых диагностировались признаки симптомокомплекса диареи Анализировались молозиво и молоко стельных коров черно-пестрой породы 2-3 отела (и = 35) с аналогичными показателями живой массы и молочной продуктивности, которых содержали в условиях поточно-цеховой системы. Средне годовой удой коровы 5300 л. Анализ проводили в осенне-зимний и весенний стойловый периоды.

Содержание альбумина (ОКА) не меняется или изменяется незначительно в группах животных. ЭКА снижается в группах стельных коров в зависимости от длительности заболевания их телят. Так, во II и III группах животных значение ЭКА ниже контрольного (I группа) на 8 и 19 %, в IV и V группах - на 40 %.

РСА, как показатель эффективности альбумина, снижается в группах в зависимости от длительности заболевания телят диареей Это может свидетельствовать о том, что альбумин, получаемый теленком с молоком матери, не является полноценным транспортным белком, способным выполнять свои функции Ли-гандная загруженность центров связывания в молекуле альбумина снижает его функциональные характеристики.

«Загруженный» альбумин, поступая в организм теленка, не способен связывать токсины и транспортировать их к месту элиминации, а потому будет способствовать нарастающей эндогенной интоксикации, усугубляя плохое общее состояние организма новорожденного животного, в острых случаях приводя его к гибели.

ИТ, отражающий организменный уровень «эффективности» сывороточного альбумина, резко увеличивается в группах обследуемых животных. Так, во II группе он превышает контрольный уровень (0,07+0,01 усл.ед.) в 3 раза, в IV - в 5,5 раза. Однако уже в V и VI группе животных он превышает уровень животных, родивших клинически здоровый молодняк, в 12 раз (0,82±0,07 усл.ед., р<0,05 и 0,86±0,05

0,86±0,05 усл.ед., р<0,05, соответственно).

Эффективность применения сывороточного альбумина в лечении и профилактике неспецифической диареи новорожденных телят

Развитие эндогенной интоксикации сопутствует широкому кругу заболеваний и часто предопределяет их исход (Уманский М.А., Пинчук В.Г, 1979). Одним из перспективных направлений детоксикации является введение дополнительных транспортных средств, связывающих токсины и доставляющих их к месту экскреции, деградации или сорбции.

Решение этой проблемы можно достичь использованием в качестве универсального естественного средства детоксикации - экзогенного сывороточного альбумина.

Недостаток альбумина, избыток конкурирующих лигандов приводят к накоплению в кровяном русле «загруженного» эндогенного альбумина, что в свою очередь, препятствует выходу токсинов из тканей в сосудистое русло и усугубляет эндогенную интоксикацию организма. Вопрос об использовании альбумина как дезинтоксикационного средства остается открытым из-за загруженности центров связывания различными лигандами и его низкой транспортной емкости.

Сорбционная емкость препаратов альбумина по отношению к лигандам белковой и небелковой природы может быть значительно увеличена за счет обработки растворов на углеродных сорбентах медицинского назначения.

В данной работе предложена схема коррекции метаболических нарушений, профилактики и улучшения состояния организма молодняка сельскохозяйственных животных при различных формах диареи. Она достигается путем выпаивания больным животным молока, или молозива матери с добавлением в них фракции сывороточного альбумина, ацетата натрия, гидрокарбоната натрия и хлорида натрия. Альбумин, являясь неспецифическим детоксикантом, снижает степень накопления в кровяном русле ослабленного организма эндогенных токсинов. Кроме того, альбумин может выступать в качестве стимулирующего средства, служить резервом белка и аминокислот. Ацетат натрия индуцирует инкрецию глюкагоноподобного пептида, обусловливающего гипогликемию. Снижение уровня глюкозы в крови вызывает активацию экзосекреторного аппарата париетальных клеток желудка, являясь главным фактором в устранении острого расстройства пищеварения у новорожденного молодняка сельскохозяйственных животных (Жирков И.Н., 2001). Гидрокарбонат натрия и раствор хлорида натрия служат для восстановления в организме водно-солевого баланса.

Альбумин, используемый для выпаивания больным животным, получали путем поэтапного фракционирования сыворотки крови убойных животных крупного рогатого скота спиртовым методом по Кону (Фром А.А., 1974). Для повышения сорбционной емкости выделенную альбуминовую фракцию обрабатывали на углеродных сорбентах медицинского назначения. Для удаления средне- и высокомолекулярных соединений, адсорбированных на молекуле альбумина, производили очистку последнего на ДЭАЭ-целлюлозе. Использование грубого или среднего сефадекса (С-25, С-50) позволяет произвести удаление низкомолекулярных соединений (лигандов), обессоливание и концентрирование белка.

Конечный продукт, осадок альбумина с повышенной сорбционной емкостью, разводили в минимальном количестве апирогенной воды при рН 4-10 (оп-тим. рН 6,5-7,0).

Для приготовления выпаиваемого раствора в неоцинкованную емкость вносили цельное молоко или молозиво в количестве, необходимом для разового выпаивания больным животным. Молоко подогревали до физиологической температуры и добавляли на каждый литр: 100 мл раствора сывороточного альбумина (до конечной концентрации 60 г/л), 2-5 г ацетата натрия, 5-10 г гидрокарбоната натрия, 0,9 г хлорида натрия. В качестве дополнительного лечения при тяжелых формах диареи в отдельных случаях использовали антибиотикотерапию (при сопутствующем колибактериозе молодняка).

В опытную серию вошли животные с выраженными начальными признаками развивающейся неспецифической диареи Смесь выпаивали больным телятам в течение 4-10 дней в количестве, соответствующем норме выпойки для здоровых животных того же возраста. Телятам контрольной группы (клинически здоровые животные (п = 40)) выпаивали обычное молозиво и молоко.

Проведенные исследования эффективности предлагаемых мероприятий показали, что уже на 3-5 сутки после начала выпаивания молозива и молока, содержащего альбумин, ацетат, гидрокарбонат и хлорид натрия, у 74 % телят стабилизировалось пищеварение, появлялся аппетит, восстанавливался водно-солевой обмен, отмечался прирост в весе Это позволило сделать вывод о том, что способ может использоваться в качестве эффективного средства профилактики и лечения молодняка сельскохозяйственных животных при острых (токсических) формах диареи.

После выпаивания телятам раствора альбумина была отмечена положительная динамика изменения общего состояния животного, а также изменение биохимических характеристик крови.

Как видно на рисунке, в течение первых 3 суток выпаивания смеси общая концентрация альбумина (ОКА) изменялась незначительно относительно уровня подопытных животных.

На 5-е и 10-е сутки выпаивания альбумина увеличивается его концентрация в кровяном русле Наряду с увеличением общей концентрации альбумина увеличивалась и его эффективная концентрация (рис. 5).

ОКА ЭКА РСА КИ

Примечание: достоверность по отношению к уровню подопытных жив-х: р<0,05; ** - Р<0,01

Рисунок 5. Показатели ОКА, ЭКА, РСА и расчетный критерий интоксикации в сыворотке крови телят с симптомокомплексом диареи на фоне выпаивания альбумина

Резерв связывания альбумина, отражающий функциональную нагружен-ность молекулы альбумина, увеличивался до 90 % (10 сутки) по отношению к группе подопытных животных

На фоне выпаивания больным телятам сывороточного альбумина отмечалось снижение показателей эндогенной интоксикации (рис. 6 ).

% 125 -

Контрольный уровень

□ 1 сутки

□ 3 сутки В5 сутки ■ 10 сутки

СРО

АОА

МСМ,

МСМ„

ЦИК

'254 "—'"280

Примечание: достоверность по отношению к уровню подопытных жив-х: *- р50,05; ** - р<0,01

Рисунок 6. Показатели эндогенной интоксикации в сыворотке крови

телят с симптомокомплексом диареи на фоне выпаивания альбумина

Отмечено динамичное снижение уровня процессов свободнорадикального окисления, молекул средней массы. Наибольшее снижение зафиксировано для ЦИК, уровень которых был ниже контрольного значения на 40 % (5-10 сутки). Снижение уровня продуктов пероксидации и протеолиза обратно коррелировало с повышением активности антиоксидантной системы.

Анализируя полученные результаты, мы пришли к выводу, что показатель ЭКА чутко реагирует на воспалительный процесс и мероприятия по его ликвидации, что подтверждается изменением других биохимических показателей крови, характеризующих максимальную загруженность центров связывания на молекуле альбумина патологическими метаболитами.

Возможно уровень метаболизма, поставляющий токсические продукты в организм, адекватен работе органов естественной детоксикации (печень, почки). Затем равновесие нарушается, нарастает недостаточность функции почек, печени и все прочие круги патогенеза. Если предположить, что работа протеаз, разрушающих «плохой» альбумин, тормозится их собственными продуктами - молекулами средней массы - то, понятно, что появление в крови модифицированных форм альбумина является прогностически неблагоприятным признаком.

ВЫВОДЫ

сической форме диареи. Отмечены значительные нарушения в белковом составе сыворотки крови телят, больных токсической формой диареи. Снижение индекса Альб/ (аг-гл.+у-гл.) ниже 2,2 свидетельствует о напряжении компенсаторно-адаптационных механизмов и переходе заболевания в стадию хронического воспаления.

2. По сравнению со здоровыми животными у больных при токсической форме диареи достоверно увеличивается уровень свободнорадикального окисления, молекул средней массы и циркулирующих иммунных комплексов Снижается активность антиоксидантной системы. Нарушения в системе интоксикация/детоксикация служат прогностически неблагоприятными признаками

3. Высокий уровень свободнорадикального окисления приводит к увеличению в сыворотке крови телят с симптомокомплексом диареи продуктов окислительной модификации альбумина. Изменение уровня динитрофенилгидразонов (продуктов окислительного повреждения белков) отражает баланс между скоростью окисления и скоростью деградации окисленной формы Накопление окислительно модифицированной и гликозилированной форм сывороточного альбумина ведет к снижению его эффективной концентрации.

4. Для определения взаимосвязи организма матери и теленка определена динамика изменения содержания мембранотропных эндотоксинов и функциональной нагруженное™ сывороточного альбумина в молозиве, молоке и сыворотке крови коров. Показано, что неполноценное кормление и нарушение условий содержания стельных животных приводит к снижению связывающей способности альбумина, увеличению индекса токсичности по альбумину, накоплению эндотоксинов.

5. Применение экзогенного сывороточного альбумина в детоксикационной терапии позволяет за короткий промежуток времени снизить концентрацию токсичных лигандов в крови, «разгрузить» детоксицирующие системы организма и значительно ослабить действие токсинов на органы и системы

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Полученные данные рекомендуем для использования в ветеринарной клинике в качестве дополнительного диагностического и прогностического критерия при установлении формы и стадии развития диареи у новорожденных телят Альбумин с повышенной емкостью может использоваться в ветеринарной практике как детоксикационный препарат. Кроме того, альбумин может выступать в качестве резерва белка.

Данные о динамике изменения величины связывающей способности сывороточного альбумина и уровня мембранотропных эндотоксинов при диарее в сыворотке крови телят рекомендуется использовать в учебном процессе на кафедрах биохимии, незаразных болезней, физиологии и питания сельскохозяйственных животных ГОуВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева».

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Борченко Р.В. Биохимическая характеристика альбумина крови убойных животных / РЕ Киселева и др // Новые подходы в естественных исследованиях: экология, биология, сельскохозяйственные науки (Межвузовский сборник научных трудов) - Вып. II. - Саранск, 2002 - С. 37-41. Борченко Р В Оценка тяжести заболевания крупного рогатого скота на основе эффективной концентрации альбумина сыворотки крови/ Борченко Р В , Киселева Р Е, Кузъмичева Л В / / Материалы 7-ой Пущинской школы-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 14-18 апреля 2003 г.). - Пущино, 2003 - С. 11.

Борченко Р В Получение альбумина с повышенными детоксикационными свойствами из крови крупного рогатого скота / Киселева P.E. и др // Материалы Международной научно-технической конференции «Современные технологии переработки животноводческого сырья в обеспечении здорового питания' наука, образование и производство» - Воронеж: Изд-во Воронежск. гос технолог, академии, 2003. - С. 356-362.

Борченко Р В Применение альбумина с повышенными детоксикациоными свойствами для лечения диспепсии телят / Козабаранова E.H. и др. / / Материалы Международной научно-технической конференции «Современные технологии переработки животноводческого сырья в обеспечении здорового питания- наука, образование и производство». - Воронеж. Изд-во Воронежск гос. технолог академии, 2003 - С. 376-377.

Борченко Р В Исследование интенсивности перекисного окисления липи-дов и антиоксидантной активности в крови крупного рогатого скота / Борченко PB, Киселева Р.Е, Кузьмичева Л В. // Материалы 8-ой Международной Пущинской школы-конференции молодых ученых «Биология -наука XXI века» (Пущино, 17-21 мая 2004г.). - С. 103

Борченко Р В Сывороточный альбумин в лечении токсической формы диспепсии / Киселева РЕ, Кузьмичева Л В., Борченко Р.В. // Материалы IV республиканской научно-практической конференции «Наука и инновации в республике Мордовия» Саранск: Изд-во Мордов. ун-та-2005. — С. 589-590.

Борченко Р В Технология получения альбумина с повышенными детоксикационными свойствами из крови крупного рогатого скота отчет о НИР в рамках Республиканского конкурса научно-исследовательских, опытно-конструкторских и внедренческих работ Республики Мордовия/ Мордов гос ун-т им Н.П Огарева, рук. Киселева P.E.; исполн : Кузьмичева Л.В. [и др ] - Саранск, 2004 -126 с. - г/б НИР № 53/38-04.

Борченко Р В Заявка на изобретение № 2005104319/13(005621) «Способ лечения и профилактики токсической формы диспепсии новорожденных телят» /Киселева Р Е, Кузьмичева Л В, Борченко Р В, приоритет от 17.02.2005 (Россия).

Борченко PB Заявка на изобретение N° 2005107397/15 «Способ получения ветеринарного альбумина» / Киселева Р.Е, Кузьмичева Л.В., Борченко Р.В., приоритет от 16.03 2005 (Россия).

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АОА - антиоксидантная активность АФК - активные формы кислорода ДЭАЭ-целлюлоза - диэтиламиноэтилцеллюлоза ИТ - индекс токсичности КИ - критерий интоксикации

МСМ280 - молекулы средней массы белковой природы (при 280 нм)

МСМ254 - молекулы средней массы нуклеопротеидной природы (при 254 нм)

ОКА - общая концентрация альбумина

РСА - резерв связывания альбумина

СА - сывороточный альбумин

СРО - свободнорадикальное окисление

ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы

ЭКА - эффективная концентрация альбумина

Подписано в печать 05.12.05. Объем 1,25 п. л. Тираж 110 экз. Заказ № 2408. Типография Издательства Мордовского университета 430000, г. Саранск, ул. Советская, 24

jLoaé4

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Борченко, Руслан Владимирович

УСЛОВНЫЕ СОКРАЩЕНИЯ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Современные представления о структурно-функциональных свойствах сывороточного альбумина.

1.1.1 Структура и физико-химические свойства молекулы альбумина.

1.1.2 Центры связывания лигандов в молекуле альбумина.

1.2 Изменение структуры центров и связывающая функция альбумина при действии продуктов метаболизма.

1.2.1 Влияние лигандов на конформацию сывороточного альбумина. Транспорт жирных кислот.

1.2.2 Антиокислительные свойства сывороточного альбумина.

1.2.3 Сывороточный альбумин как показатель эндогенной интоксикации.

1.3 Мембранотропные эндотоксины как показатели эндогенной 31 интоксикации.

1.4 Циркулирующие иммунные комплексы как показатель состояния иммунной системы.

1.5. Характеристика, меры профилактики и лечения неспецифической диареи новорожденных телят.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объект исследования.

2.2. Материал исследования.

2.3. Методы исследования.

2.4. Методы статистической обработки результатов.

СОБСТВЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Глава 3 Изменение свойств сывороточного альбумина в коррекции биохимических механизмов эндогенной интоксикации.

3.1 Особенности системы сывороточного альбумина крови телят.

3.2 Уровень свободнорадикального окисления и антиоксидант-® ной активности, их взаимосвязь со связывающей способностью альбумина сыворотки крови телят при диарее.

3.3 Взаимосвязь уровня молекул средней массы и связывающей способности сывороточного альбумина. •

3.4 Изменение уровня циркулирующих иммунных комплексов и связывающей способностью альбумина у телят при диарее.

Глава 4. Влияние содержания продуктов эндотоксикоза в сыворотке крови, молозиве, молоке коров на жизнеспособность и про-,ф должительность болезни их телят.

4.1. Уровень продуктов эндотоксикоза в сыворотке крови и связывающая способность альбумина молока коров.

4.2. Взаимосвязь структурно-функциональных свойств альбумина крови телят и их коров матерей.

Глава 5. Эффективность применения сывороточного альбумина в лечении и профилактике неспецифической диареи ново

Т рожденных телят.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изучение структурно-функциональных свойств сывороточного альбумина и биохимических критериев эндогенной интоксикации крови телят и их матерей"

Актуальность исследования. Б современной биологии параллельно с геномными исследованиями принципиальное значение приобретает изучение протеома, как системы белков, прежде всего индивидуальных протеинов.

Альбумины - одна из основных белковых фракций крови. Концентрация альбумина в плазме и сыворотке выше, чем концентрация других белков. Альбумин вносит основной вклад во внутрисосудистое коллоидно-осмотическое давление. Кроме того, он является молекулой-переносчиком биологически важных веществ (Сорокина Д.А., 1990; Доржийн Н., 1993; Грызунов Ю.А., Добрецов Г.Е., 1994, 1998; Титов Б.Н., 1999). Б связи с этим альбумин, выступая детоксикантом, является регулятором гомеостаза на стадии транспорта биологически активных низко- и среднемолекулярных субстанций (лигандов) кровью. Он транспортирует эндогенные физиологически активные вещества (гормоны, витамины, жирные кислоты, билирубин, лекарственные препараты и др.), а также эндогенные соединения патогенного характера (эндотоксины) (Бравер-Чернобыльская Б.С., 1993; Грызунов Ю.А., Добрецов Г.Е., 1994, 1998; Лопухин Ю.М. и др., 2000; Родо-ман Г.Б. и др., 1999). К последним можно отнести циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК), молекулы средней массы (МСМ), продукты пе-рекисного окисления, яды.

Нарушение конформации молекулы альбумина, вызванное необратимым связыванием ее с мембранотропными эндотоксинами, перекисное повреждение белка или его гликилирование, приводят к снижению или полному выпадению его функций.

Накопление в русле «загруженного» эндогенного альбумина препятствует выходу токсинов и усугубляет эндогенную интоксикацию.

Для исследования связывающей способности альбумина используются специальные молекулы - флуоресцентные зонды (Добрецов Т.Е., Грызунов Ю.А., 1994). Они занимают в альбумине те места, которые предназначены для связывания метаболитов, и их флуоресценция в результате связывания возрастает в сотни раз. Зонды позволяют легко обнаружить нарушение связывающей способности альбумина. Однако, до последнего времени подобные анализы не стали достоянием ветеринарной клиники. По той же причине исследовательские работы в области патологии транспортной функции альбумина были лишь эпизодическими.

Расстройства пищеварения у новорожденных животных с симптомо-комплексом диареи выделены в самостоятельное заболевание - неспецифическая диарея (dyspepsia neonatorum). Часто в результате технологического стресса болезнь охватывает до 90 % поголовья молодняка неонаталь-ного возраста (Жирков И.Н., 2001). Изучение этиологии и течения данного заболевания переходит на новый - молекулярный уровень (Жирков И.Н., 1998-2001; Фазуллин Х.В., Чуличкова Т.В., 2003; Багманов М.А., Терентьева Н.Ю., 2003). Сравнительно недавно появились работы, посвященные изучению свободнорадикальных процессов и активности антиоксидантов в патогенезе незаразных и инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных (Томчук В.А., Мельничук Д.А., 2003; Шахов А.Г., 2004; Жаркой Б.Л., Рецкий М.И., 2004; Степанова И.П., 2004, 2005), их коррекции путем применения антиоксидантов (Томчук В.А., Мельничук Д.А., 2003; Каверин Н.Н., Дегтярев Д.В., 2004). Подобные исследования часто разобщены и не дают полной картины. Не заслуженно малое внимание уделяется сывороточному альбумину и его роли в реализации детоксикации организма животного.

Таким образом, изучение связывающей способности СА при диарее, а также динамики изменения уровня мембранотропных эндотоксинов, характер их влияния на детоксицирующую функцию СА представляет значительный интерес, как для фундаментальной науки, так и для практической ветеринарии.

Цель и задачи исследования. Цель исследования - изучить изменение структурно-функциональных свойств сывороточного альбумина под влиянием эндогенной интоксикации, вызванной нарушением обмена веществ при неспецифической диарее у телят. Задачи исследования:

1. Изучить связывающую способность сывороточного альбумина, уровень его окислительно модифицированных и гликозилированных форм в сыворотке крови телят в норме и при диарее;

2. Исследовать уровень мембранотропных эндотоксинов в сыворотке крови телят и их коров-матерей;

3. Определить взаимосвязь между связывающей, транспортной способностью сывороточного альбумина и содержанием мембранотропных эндотоксинов в сыворотке крови телят и их коров-матерей;

4. Исследовать эффективность применения экзогенного сывороточного альбумина в лечении и профилактике неспецифической диареи новорожденных телят.

Научная новизна. Впервые исследована связывающая способность альбумина молока, молозива и сыворотки крови коров. Определена связывающая способность альбумина сыворотки крови здоровых телят и телят, больных диареей. Выявлены корреляционные зависимости между накоплением эндотоксинов (продукты свободнорадикального окисления, молекулы средней массы, циркулирующие иммунные комплексы) и альбуминовыми показателями в сыворотке крови телят при диарее, в зависимости от длительности и тяжести заболевания. Использование такой комплексной оценки состояния системы интоксикации/детоксикации на молекулярном уровне позволяет использовать данные показатели как в диагностике заболевания (при оценке степени нарушения биохимических процессов в организме), так и при построении прогнозов исхода болезни.

Снижение под влиянием эндотоксинов связывающей способности альбумина и увеличение индекса токсичности по альбумину зависит от концентрации эндотоксинов в сыворотке крови больных диареей телят связанной с тяжестью заболевания. Показана связь между отдельными эндотоксинами и резервом связывающей способности альбумина.

Предложена краткая схема получения сывороточного альбумина с повышенными детоксицирующими возможностями из крови убойных животных крупного рогатого скота. Использование экзогенного альбумина в смеси с солями позволяет рекомендовать его для лечения и профилактики диареи у телят.

Результаты настоящего исследования позволяют обосновать некоторые аспекты действия сывороточного альбумина, а также расширяют и углубляют представления о механизме действия данного препарата при диарее телят. Таким образом, использование сывороточного альбумина в качестве детоксицирующего препарата позволяет значительно усовершенствовать терапию этого заболевания.

Полученные в данной работе результаты позволили использовать сывороточный альбумин с повышенными детоксицирующими свойствами в терапии диареи телят в ОПХ «Ялга» (г. Саранск, Республика Мордовия). Полученные данные внедрены в учебный процесс на кафедре незаразных болезней и радиологии, на кафедре биохимии Мордовского государственного университета имени Н.П. Огарева (г. Саранск).

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Оценка показателей бычьего сывороточного альбумина (ОКА, ЭКА, РСА и ИТ) с помощью флуоресцентного метода с зондом К-35, уровня мембранотропных эндотоксинов (СРО, МСМ, ЦИК), продуктов окислительной модификации и гликозилированных форм альбумина в сыворотке крови телят с симптомокомплексом диареи, а также в сыворотке крови, молозиве и молоке коров-матерей носит диагностический и прогностический характер.

2. Степень влияния эндотоксинов на связывающую способность сывороточного альбумина (по показателям ЭКА и РСА) определяется их концентрацией в сыворотке крови, а также зависит от выраженности (глубины) процесса эндогенной интоксикации у телят при диарее. Модификация структурно-функциональных свойств альбумина является одной из причин развития эндогенной интоксикации.

3. Использование экзогенного сывороточного альбумина в качестве неспецифического детоксиканта позволяет компенсировать биохимические расстройства в системе детоксикационной защиты организма, тем самым, способствуя снижению в кровяном русле эндогенных токсинов (продукты пероксидации, циркулирующие иммунные комплексы, молекулы средней массы).

Апробация работы. Результаты работы и основные положения диссертации доложены и обсуждены на VII, VIII Пущинской школе конференции Молодых ученых «Биология - наука XXI века» (г. Пущино, 2003-2004), в материалах Международной научно-технической конференции «Современные технологии переработки животноводческого сырья в обеспечении здорового питания: наука, образование и производство» (г. Воронеж, 2003), в материалах Международной конференции «Инновации 2004» (г. Саранск, 2004). В федеральный институт промышленной собственности поданы заявки № 2005107397/15 «Способ получения ветеринарного альбумина» приоритет от 16.03.2005, № 2005104319/13(005621) «Способ лечения и профилактики токсической формы диспепсии новорожденных телят» приоритет от 17.02.2005.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 159 страницах машинописного текста, документирована 20 таблицами и иллюстрирована 21 рисунком. Работа состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания материалов и методов исследования (глава 2), изложения собственных результатов (главы 3-5), заключения, выводов и библиографического списка, включающего 275 источников, в том числе 228 отечественных.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Борченко, Руслан Владимирович

выводы

1. Определена связывающая способность альбумина сыворотки крови здоровых телят, а также у телят-молочников с нарушением обмена, отягощенного эндогенной интоксикацией при диарее. Наиболее низкие величины эффективной концентрации, резерва связывания альбумина и как результат более выраженное нарушение транспортной функции альбумина зафиксированы при токсической форме диареи. Отмечены значительные нарушения в белковом составе сыворотки крови телят, больных токсической формой диареи. Снижение индекса Альб/ (аг-гл.+у-гл.) ниже 2,2 свидетельствует о напряжении компенсаторно-адаптационных механизмов и переходе заболевания в стадию хронического воспаления.

2. По сравнению со здоровыми животными у больных при токсической форме диареи достоверно увеличивается уровень свободнорадикаль-ного окисления, молекул средней массы и циркулирующих иммунных комплексов. Снижается активность антиоксидантной системы. Нарушение в системе интоксикация/детоксикация служит прогностически неблагоприятным признаком.

3. Высокий уровень свободнорадикального окисления приводит к увеличению в сыворотке крови телят с симптомокомплексом диареи продуктов окислительной модификации альбумина. Изменение уровня динитрофенилгидразонов (продуктов окислительного повреждения белков) отражает баланс между скоростью окисления и скоростью деградации окисленной формы. Накопление окислительно модифицированной и гликозилированной формы сывороточного альбумина ведет к снижению его эффективной концентрации.

4. Для определения взаимосвязи организма матери и теленка определена динамика изменения содержания мембранотропных эндотоксинов и функциональной нагруженности сывороточного альбумина в молозиве, молоке и сыворотке крови коров. Показано, что неполноценное кормление и нарушение условий содержания стельных животных приводит к снижению связывающей способности альбумина, увеличению индекса токсичности по альбумину, накоплению эндотоксинов.

5. Применение экзогенного сывороточного альбумина в детоксикаци-онной терапии позволяет за короткий промежуток времени снизить концентрацию токсичных лигандов в крови, «разгрузить» детокси-цирующие системы организма и значительно ослабить действие токсинов на органы и системы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Полученные данные рекомендуем для использования в ветеринарной клинике в качестве дополнительного дифференциально-диагностического критерия при установлении формы и стадии развития диареи у новорожденных телят. Альбумин с повышенной емкостью может использоваться в ветеринарной практике как детоксицирующий препарат. Кроме того, альбумин может выступать в качестве резерва белка.

Данные о динамике изменения величины связывающей способности сывороточного альбумина и уровня мембранотропных эндотоксинов при диарее в сыворотке крови телят рекомендуется использовать в учебном процессе на кафедрах биохимии, незаразных болезней, физиологии и питания сельскохозяйственных животных ГОУВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева».

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Под защитой организма от токсических соединений подразумевается активная иммунная система. Однако чаще она срабатывает на высокомолекулярные чужеродные вещества с молекулярной массой более 5 кДа. Элиминацию низкомолекулярных токсинов обеспечивает система транспортных белков крови. Сывороточный альбумин, относясь к последним, играет центральную роль в этом процессе, т.к. обладает уникальной способностью к связыванию лигандов (Грызунов Ю.А., Добрецов Г.Е., 1994, 1998; Титов В.Н., 1999).

В последние годы появляются единичные данные о транспорте альбумином низкомолекулярных лигандов, обладающих токсическими свойствами (главным образом продукты деградации белков) (Толкачева Н.В., 1991; Гаврилов В.Б. и др., 1999).

Сывороточный альбумин с большим сродством связывает и транспортирует целый ряд физиологически активных экзо- и эндогенных лигандов разнородных по своей физико-химической природе. К ним относятся билирубин, длиноцепочные жирные кислоты, гемин, триптофан, гормоны, катионы металлов Zn2+, Cu2+, Со2+ и др., а также ксенобиотики - лекарственные средства и яды (Чегер С.И., 1975; Шимановский Н.Л., 1984; Доржийн Н., 1993; Сорокина Д.А., 1990; Титов В.Н., 1999).

Взаимодействие токсина с альбумином по своей форме и биологическому смыслу схоже с механизмом образования комплекса антиген/антитело. Этот процесс, по-видимому, видоспецифичен для каждого токсина и в норме носит обратимый характер, обеспечивая направленный транспорт токсичного агента в печень или почки, где происходит его инактивация или элиминация. Таким образом, эффективность защиты организма от токсических агентов низкомолекулярного характера будет зависеть от способности альбумина связывать и транспортировать лиганды

Бравер-Чернобыльская Б.С., 1993; Бабусайли А.А. , 1995; Уверский В.Н., Нарижнева Н.В., 1998).

Методический подход к определению связывающей способности сывороточного альбумина по измерению сорбции флуоресцентного зонда (К-35, или карбоксифенилимид диметиламинонафтилиндикарбоновой кислоты) был разработан группой исследователей под руководством Г.Е. Доб-рецова и Ю.А. Грызунова [6,134, 209]. Метод, основанный на изучении связывания зонда при заполнении связывающих центров ЧСА другими ли-гандами, позволил регистрировать снижение ССА в патологии различнных терминальных состояний организма. Связывающая способности оценивается по уменьшению РСА, который характеризует долю свободных центров альбумина (в %), не заблокированных метаболитами или токсинами. Реальную функциональную активность альбумина характеризует его эффективная концентрация, определяемая тем же методом. С помощью зонда К-35 показано значительное снижение ЭКА при различных заболеваниях человека, сопровождающихся развитием синдрома ЭИ (Грызунов Ю.А., Добрецов Г.Е., 1994,1998).

Многие заболевания, в настоящее время, стали рассматриваться исследователями на клеточном и молекулярном уровнях. Б последние годы получила признание эндотоксиновая теория воспаления. Эндотоксикоз признается как основополагающий фактор развития полиорганной и полисистемной недостаточности, определяющих разгар и исход заболевания (Вла-дыко А.С. и др., 1990; Ерохин Н.А. и др., 1993, Киселева Р.Е. и др., 19982004).

Развитие эндотоксикоза обусловлено накоплением в жидких средах организма токсичных продуктов и способностью детоксицирующих систем и органов справляться с их элиминацией.

Впервые нами предпринята попытка оценки степени эндогенной интоксикации организма телят при диарее. Нами подобраны и изучены пять основных показателей эндотоксикоза, характеризующих нарушение обмена веществ при данном заболевании. Мембраннотропные эндотоксины, к которым относят уровень СРО и АОА, МСМ и ЦИК, выбраны не случайно, поскольку именно эти показатели характеризуют состояние патологических процессов на молекулярном и клеточном (мембранном) уровнях. Мембраннотропные эндотоксины выступают в роли интегральных показателей нарушения обмена веществ: СРО (а также АОА) - нарушения липид-ного и белкового обмена; МСМ - белкового и нуклеопротеидного метаболизма; ЦИК - состояния гуморального звена иммунитета.

Впервые для оценки состояния иммунного гомеостаза телят при диарее нами изучена динамика изменения уровня ЦИК. Отмечен колебательный характер изменения содержания ЦИК, установлена зависимость между подъемом и спадом уровня ЦИК и тяжестью воспалительного процесса. Показано, что высокий уровень ЦИК является показателем развития имму-нодепрессии у новорожденного теленка, характеризующим дефицит иммунной системы.

При эндотоксикозе, приобретающем часто самостоятельное значение, деструктивные процессы формируют замкнутые патофизиологические циклы, взаимоусиливающие друг друга. Так, продукты липопероксидации оказывают повреждающее действие на белки, тиоловые соединения, ДНК, нуклеотидфосфаты, активируют высвобождение биологически активных веществ, лизосомальных ферментов и аутофагию. Экзо- и эндотоксины, к числу которых можно отнести продукты жизнедеятельности бактерий и вирусов, а также молекулы средней массы, фрагменты клеточных рецепторов и продукты распада мембранных белков, стимулируют аутоиммунные реакции с увеличением содержания средне- и низкомолекулярных токсических циркулирующих иммунных комплексов (Киселева Р. Е. с соавт., 2002).

Взаимодействие иммунных комплексов с липидным бислоем клеточных мембран в свою очередь способствует активации перекисного окисления липидов с образованием свободных радикалов, стимулирующих синтез аутоантигенов. Таким образом, цикл замыкается.

Гиперреактивность, протеолиз, активируя прооксидантную ферментную систему, обусловливают каскадное усиление ПОЛ биомембран. Показано, что уровень неадекватного протеолиза, избыточной интенсивности ПОЛ и содержание МСМ в крови связанны прямой пропорциональной зависимостью и определяют степень тяжести клинического течения заболевания (Киселева Р. Е., Кузьмичева Л.В., 1992 - 2002).

Синдром эндогенной интоксикации, возникающий под влиянием различных альтерирующих факторов, относится к числу наиболее распространенных и наблюдается при самых разнообразных патологических состояниях. Его проявления, несмотря на различную этиологию, имеют общие патогенетические механизмы.

Анализируя собственные результаты, можно отметить, что проблема возникновения и развития эндогенной интоксикации занимает одну из ведущих позиций в структуре исследований критических состояний. Однако, такие исследования крайне малочисленны и лишь в последнее время термин «эндогенная интоксикация» начинает проникать из лабораторий в ветеринарную клинику. Неясными остаются вопросы запуска механизма эндотоксикоза и его роли в развитии стресс-реакции. Практически малоизученным остается влияние ЭИ на уровень ЦИК, а также на способность организма к компенсаторной детоксикации с помощью эндогенного альбумина в критической фазе заболевания.

Наиболее серьезные нарушения ЭИ наблюдаются в показателях белкового обмена, что связано с угнетением белково-образовательной функции печени, усиленным катаболизмом белков в тканях, нарушением функций пищеварительного тракта (Васильева Е.В. и др., 2004; Гаврилов Ю.А. и др., 2004). Важным звеном в патогенезе синдрома ЭИ является альбумин - белок, выполняющий пластические и транспортные функции. Снижение содержания этого белка служит прогностическим признаком интоксикации и выживаемости (Киселева Р.Е. и др., 1998-2004). При тяжелом эндотоксикозе в организме создаются условия для образования форм альбумина с измененными физико-химическими характеристиками, «перегруженного» ли-гандами, что препятствует обмену между тканями и сосудистым руслом транспорту токсинов к органам детоксикации - биотрансформации.

Впервые мы попытались создать схему нарушения связывающей способности транспортного белка - сывороточного альбумина - под влиянием продуктов эндогенной интоксикации организма телят, отягощенной неспецифической диареей (схема 1).

Усиление образования липоперекисей приводит к сложным окислительным модификация в структуре сывороточных белков (альбумина), их агрегации, фрагментации с распадом на более низкомолекулярные компоненты. Высокий уровень глюкозы, характерный для фазы тревоги приводит к повышению в кровеносном русле гликилированных форм альбумина (фруктозамина). Окислительное повреждение и гликозилирование С А приводят к снижению его функциональной нагруженности и как следствие к отягощению синдрома эндогенной интоксикации.

В настоящее время считается общепринятым, что уровень кормления и обмена веществ, а также состояние здоровья организма коровы-матери оказывают большое влияние на развитие плода, антенатальную и постнаталь-ную заболеваемость и смертность телят (Фазуллин Х.В., Чуличкова Т.В., 2003).

Дня нормальных взаимоотношений между матерью и плодом первостепенное значение имеет функциональное состояние гематоплацентарно-го барьера, обеспечивающего внутриутробное дыхание, обмен, гормональный статус и иммунную защиту плода (Колчина А.Ф., 1996,2000).

Интенсивность метаболизма в плаценте напрямую влияет на пластический и энергетический обмен плода, обуславливая его развитие. Активация СРО и накопление гидроперекисей в клеточной мембране изменяют физические свойства её фосфолипидных компонентов, результатом чего является образование гидрофильных пор и увеличение её проницаемости. Благодаря этому процессу происходит увеличение проницаемости

Схема 1 — Патологические механизмы действия эндотоксинов на молекулу сывороточного альбумина гистогематических барьеров организма и деление клеток. При длительной активации СРО этот же механизм приводит к снижению активности мем-браносвязанных ферментов из-за повышения вязкости липидной фазы, уменьшению эластичности и механической прочности мембранного мат-рикса, а в дальнейшем и к его деградации. Наиболее опасны конечные продукты СРО липидов (альдегиды, кетоны), так как они инициируют процесс необратимой радикальной полимеризации клеточных биосубстратов (Владимиров Ю.А., Арчаков А.И., 1972).

Установлено, что проницаемость гистогематических барьеров организма меняется в зависимости от интенсивности перекисного окисления липидов (ПОЛ), что играет немаловажную роль в процессах ауторегуляции (Цыганский Р.А., 2004).

В настоящее время для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний телят применяют достаточно эффективные лечебные схемы с использованием широкого спектра лекарственных средств. Поиск методов постоянно продолжается, предлагаются новые способы сочетания лечебных мероприятий.

Предложенная нами схема выпаивания больным телятам экзогенного альбумина, как неспецифического детоксиканта и резерва белка, в сочетании с выпойкой минеральных солей приводила к сокращению сроков заболевания телят диареей и значительному улучшению организма молодняка. Снижение уровня глюкозы, вызванное ацетат-ионом, предохраняет альбумин от гликозилирования.

Альбумин, выпаеваемый больным животным в первые сутки жизни, безпрепятственно проникает в кровяносное русло. Это общеподтвержден-ный факт. Проникновение альбумина через стенки желудочно-кишечного тракта в последующие дни обеспечивается двумя механизмами. Во-первых, повреждение стенок кишечника, наблюдаемое при кишечных заболеваниях, «оголяет» ворсинки, тем самым, обеспечивая «прямой контакт» биомолекулы с энтероцитом. Во-вторых, немаловажная роль отводится процессу пиноцитоза крупных молекул клетками кишечника. Захват молекулы, ее транспорт через цитоплазму и далее через плазматичесую мембрану в просвет кровеносного сосуда, еще один из путей поступления альбумина в кровяное русло.

Альбумин не всосавшийся в энтероцитами проявляет свой детоксици-рующий эффект в самом кишечнике. Во-первых, он способен образовывать коллоидную среду, благоприятную для пищеварительных ферментов. Связывая токсины, он способен уменьшать их токсический эффект непосредственно в просвете кишечника. В результате расщепления альбумина возможно, по-видимому, образование короткоцепочных пептидов и отдельных аминокислот, обладающих аналогичными альбумину свойствами.

Нельзя не отметить, что массовые заболевания телят диареей приходятся на первые 10 дней постнатального развития. При этом ряд исследователей указывают на непосредственную взаимосвязь между возникновением и степенью тяжести заболевания и снижением потенциала системы антиок-сидантной защиты, системы детоксикации печени и почек, что негативно сказывается на жизнеспособности и продуктивности молодняка (Фукс П.П. и др., 1997; Колчина А.Ф., 1999; Каверин Н.Н., Дегтярев Д.В., 2004).

Поддержание детоксикационных возможностей организма новорожденных телят в наиболее критические периоды жизни (первые две недели постнатального развития) путем применения альбумина с повышенной сорбционной емкостью и солей, в частности ацетат-ионов, может благоприятным образом отразиться на устойчивости к возникновению и развитию заболевания.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Борченко, Руслан Владимирович, Боровск

1. Абрамов С.С. Профилактика незаразных болезней молодняка /С.С. Абрамов, И.Г. Аристов. М.: Агропромиздат, 1990. - С. 175.

2. Абрамова Ж.И. Человек и противоокислительные вещества /Ж.И. Абрамова, Г.И. Оксенгендлер. Л.: Наука, 1985. - 232 с.

3. Авакян З.А. Определение среднемолекулярных пептидов в крови и околоплодных водах при нефропатиях беременных /З.А. Авакян, Р.Г. Каграма-нян// Лабораторное дело. -1988. № 11. - С. 46-48.

4. Алексин М.М. Профилактика диспепсии новорожденных телят этеро-фибрином и лактобактерином // Матер, междунар. коорд. совещ. «Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных». Воронеж, 1997. - С. 320-321.

5. Альбумин сыворотки крови в клинической медицине / под ред. Ю.А. Грызунова и Г.Е. Добрецова // М.: Ириус, 1994. Кн.1. - 226 с.

6. Альбумин сыворотки крови в клинической медицине / под ред. Ю.А. Грызунова и Г.Е. Добрецова // М.: Геотар, 1998. Кн.2. - 440 с.

7. Альбумин сыворотки крови при загрязнении окружающей среды и инфекционных заболеваниях / Р.Е. Киселева, Н.В. Альба, Л.В. Кузьмичева, Д.Л. Альба / Альбумин сыворотки крови в клинической медицине. М.: ГЕОТАР, 1998. Кн. 2. - С. 382-385.

8. Альбуминовый флюоресцентный тест при операционном стрессе / Г.В. Родоман, Г.Е. Добрецов, Т.И. Шалаева, Е.К. Наумов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2001. - Т.131, № 3. - С. 357-359.

9. Аматуни В.Г. Роль перекисного окисления мембран и антирадикальной защиты в патогенезе желудочно-кишечных заболеваний / В.Г. Амату-ни, К.Г. Карагезян // Терапевтический архив. 1988. - № 3. - С. 96-100.

10. Н.Андреева O.JI. Нарушение свойств связывающих центров сывороточного альбумина при заболеваниях человека: Автореф. дис. на соиск. учен, степ. канд. биол. наук: (03.00.04) / НИИ физ.-хим. медицины. Екатеринбург, 1996. - 21 с.

11. Архипенко Ю.В. Роль про- и антиоксидантных факторов при адаптации к различным видам гипоксии /З.А. Авакян, Р.Г. Каграманян // Мат. Междунар. симп. «Кислород и свободные радикалы». Гродно, 1996. С. 7-8.

12. Аршавский И.А. Механизмы и особенности физиологического и патологического стресса в различные возрастные периоды. В сб.: Актуальные проблемы стресса. Кишинев, 1976. С. 5-23.

13. Афонина Г.Б. Роль свободнорадикального окисления мембранных липидов лимфоцитов в развитии иммунологической недостаточности и ее коррекция а-токоферолом /Г.В. Афонина, В.Г. Бордонос// Иммунология. -1990. № 5. - С. 33-37.

14. Бабусайли А.А. Роль сывороточного альбумина в транспорте лигандов липидной и углеводной природы при раке легких разной степени тяжести: Автореф. дис. на соиск. учен. степ. канд. биол. наук: (03.00.04) / Симфероп. гос. ун-т. Симферополь, 1995. - 23 с.

15. Багдасарьян С.Н. Количественный метод оценки конформационных изменений альбумина сыворотки крови / С.Н. Багдасарьян, Г.В. Троицкий, А.Я. Веришнин / / Украинский биохимический журнал. 1979. - № 4. - С. 439-442.

16. Багманов М. А. Групповая профилактическая терапия болезней телят в раннем постнатальном возрасте / М.А. Багманов, Н.Ю. Терентьева // Вестник РАСХН. 2003. - № 4. - С. 70-71.

17. Барабой В. А. Механизмы стресса и перекисное окисление липидов / / Успехи современной биологии. -1991. Т. III, вып. 6. - С. 923 - 931.

18. Барашкин М.И. Сравнительная оценка уровня циркулирующих иммунных комплексов при поражении дистального отдела конечностей телят / М.И. Барашкин, Е.А. Забродин, А.Б. Елесин // Био. 2004. - №1.-С. 1415.

19. Бат-Эрдэнэ О. Влияние среды на функциональные и структурные свойства сывороточного альбумина человека. Дис. . канд. биол. наук. Пу-щино, 1984 167 с.

20. Биохимические аспекты эндотоксикоза / Р.Е. Киселева, Н.В. Альба, П.В. Кузьмичева, Д.Л. Альба, Саранск: Изд-во Рузаевск. печатник, 2002. 182 с.

21. Бляхман Г.И. Синтез и распад макромолекул в условиях стресса /Г.И. Бляхман, Н.А. Шеламова // Успехи современной биологии. 1992. - Т. 112, № 2. - С. 281-297.

22. Борисенко С.Н. Молекулярные повреждения альбумина крови: Авто-реф. дис. на соиск. учен. степ, д-ра биол. наук: (03.00.04). Киев, 1990. - 35 с.

23. Боряев Г.И. Биохимический и иммунологический статус молодняка сельскохозяйственных животных и птицы и его коррекция препаратами селена. Дис. . д-ра биол. наук. М., 2000. - 315 с.

24. Бравер-Чернобыльская Б.С. Механизмы конформационной адаптации альбумина к лигандам различного строения // Биохимия. 1993. - № 4. - С. 645-651.

25. Бурлакова Е.Б. Перекисное окисление липидов мембран и природные антиоксиданты / Е.Б. Бурлакова, Н.Г. Храпова / / Успехи химии. 1985. - Т. 54, вып. 9. - С. 1540-1558.

26. Бучко О.М. Система антиоксидантной защиты в тканях свиней в ранний постнатальный период. Автореф. канд. дис. Киев, 1999. 21 с.

27. Вельбри С.К. Одновременная оценка уровня иммунных комплексов ииммуноглобулинов для характеристики патологического процесса / С.К. Вельбри, А.Л. Лиллеорг, СЛ. Линдстрем / / Лабораторное дело. 1988. - № 5. - С. 7-11.

28. Беротченко М.А. Влияние различных условий вскармливания телок на физико-химические свойства белков сыворотки крови. Дис. . канд. биол. наук. Дубровицы. ВАСХНИЛ. ВИЖ, 1975. - 135 с.

29. Виноградова Т.Л. Взаимосвязь между уровнем циркулирующих иммунных комплексов и функциональным состоянием фагоцитирующей системы / Т.Л. Виноградова, М.А. Капелько, Ю.Е Бельтищев / / Иммунология. -1986. No 5. - С. 63-65.

30. Владимиров Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах / Ю.А. Владимиров, А.И. Арчаков. М.: Наука, 1972. - 252 с.

31. Владимиров Ю.А. Свободнорадикальное окисление липидов физические свойства липидного слоя биологических мембран // Биофизика. -1987. Т. 32, вып. 5. - С. 830-845.

32. Владимиров Ю.А. Свободнорадикальные процессы в живых системах / Ю.А. Владимиров, М.П. Шерстнев// Итоги науки и техники. Серия «Биофизика». М., 1991. 29 с.

33. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты / / Вестник РАМН. 1998. - № 7. - С. 43-51.

34. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах / / Соросовский образовательный журнал. 2000. - Т.6, № 12. - С. 13-19.

35. Владыко А.С. Диагностическое значение уровня молекул средней массы в крови при оценке тяжести эндотоксикоза / А.С. Владыко, Н.А. Беляков, А.И. Шугаев // Вестник хирургии. -1990. № 8. - С. 126-129.

36. Воскресенский О.Н. Биоантиоксиданты облигатные факторы питания / О.Н. Воскресенский, В.Н. Бобырев/ / Вопросы медицинской химии. -1992. - № 4. - С. 21-26.

37. Воскресенский О.Н. Перекиси липидов в живом организме / О.Н. Воскресенский, А.П. Левицкий / / Вопросы медицинской химии. 1970. - № 6. - С. 563-581.

38. Гасан А.И., Термические перестройки и гидратация сывороточного альбумина / А.И. Гасан, В.А. Кашпур, В.Я. Малеев / / Биофизика. 1994. -Т. 39, вып. 4. - С. 588-593.

39. Герасимов A.M. Пространственный фактор в регуляции свободнора-дикальных процессов / A.M. Герасимов, Н.В. Деленян// Мат. Междунар. симп. «Кислород и свободные радикалы». Гродно, 1996. С. 40-41.

40. Германович Н.Ю. Состояние перекисного окисления липидов и содержание восстановленного глутатиона в крови телят с расстройствами пищеварения. // Ученые записки ВГАВМ. Мат. III междунар. науч.-практ. конф. Витебск, 1999. Т. 35, вып. 2. - С. 35-37.

41. Германович Н.Ю. Функциональное состояние антиоксидантной системы и перекисное окисление липидов в крови у здоровых телят и при диарее. Автореф. канд. дис. Витебск, 2000. -18 с.

42. Глинина Е.Г. Гелеобразующие свойства бычьего сывороточного альбумина. Материалы III Всерос. Науч. Конф. «Эколого-биологические проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия». Астрахань: Изд-во Астр. гос. пед. ун-та, 2000. 75-77.

43. Горбунов Н.Н. Выращивание телят в индивидуальных домиках на открытой площадке // Молочное и мясное скотоводство. 1997. - № 1. - С. 4

44. Грызунов Ю.А. Правильность и воспроизводимость флюоресцентного метода определения массовой концентрации альбумина сыворотки крови человека / Ю.А. Грызунов, Т.И. Лукичева//Клиническая лабораторная диагностика. 1994. - № 5. - С. 25-27.

45. Гуляева Н.В. Ингибирование свободнорадикального окисления ли-пидов в механизмах срочной и долговременной адаптации к стрессу // Биологические науки. 1989. - № 4. - С. 5-14.

46. Давтян Т.К. О взаимоотношении иммунного и адаптивного ответов / Т.К. Давтян, Л.А. Аванесян // Успехи современной биологии. 2001. - Т. 121, № 3. - С. 275 - 286.

47. Двинская Л.М. Использование антиоксидантов в животноводстве / Л.М. Двинская, А.А. Шубин. Л., 1986. -160 с.

48. Джафаров Э.С. Структурные переходы в сывороточном альбумине человека. Дис. . канд. хим. наук. М., 1986 125 с.

49. Джафаров Э.С. Структура и конформационные особенности сывороточного альбумина: Ин-т ботаники им. В.Л. Комарова. Баку, Элли, 1990. -250 с.

50. Долгих Д.А. Промежуточные состояния белковых молекул и получение искусственных белков. Дис. в виде науч. доклада на соиск. уч. ст. д-ра биол. наук. М., 1996. 53 с.

51. Доржийн Н. Регуляция структурно-физических и функциональных свойств сывороточного альбумина физико-химическими факторами среды. Дис. . д-ра биол. наук. Пущино, 1993. 320 с.

52. Дубинина Е.Е. Антиоксидантная система плазмы крови // Украинский биохимический журнал. -1992. Т. 64, № 2. - С. 3-15.

53. Дубинина Е.Е. Окислительная модификация белков / Е.Е. Дубинина, И.В. Шугалей // Успехи современной биологии. 1993. - Т. 113, вып. 1. - С. 71-81.

54. Евстигнеева Р.П. Витамин Е как универсальный антиоксидант и стабшшзатор биологических мембран / Р.П. Евстигнеева, И.М. Волков, В.В. Чудинова // Биологические мембраны. -1998. Т. 15, № 2. - С. 119-133.

55. Ерохин Н.А. Эндотоксикоз как проблема клинической хирургии / Н.А. Ерохин, О.С. Насонкин, Л.С. Лебедев // Вестник хирургии. 1993. - № 3. - С. 1-7.

56. Ерохина И.А. Возрастные особенности структурно-функциональных свойств сывороточного альбумина гибридов кур: Автореф. дис. на соиск. учен. степ. канд. биол. наук: (03.00.04) / В надзагл.: Киев, ун-т им. Т.Г. Шевченко, Киев, 1986. 24 с.

57. Жирков И.Н. Изменение сычужного пищеварения телят под влиянием аминокислот // Ветеринария. -1998. № 3. - С. 43-46.

58. Жирков И.Н. Нитроксергическая регуляция пищеварения / / Сельскохозяйственная биология. 1999. - № 2. - 25-37.

59. Жирков И.Н. Применение антибиотикоустойчивого пробиотика «РАС» для коррекции дисбактериозов у новорожденных телят / И.Н. Жирков, И.Н. Братухин / / Ветеринария. 1999. - № 4. - С. 40-42.

60. Жирков И.Н. Устранение массовых диспепсий новорожденных телят ацетатом натрия / / Сельскохозяйственная биология. 2001. - № 6. - 94-96.

61. Жукова Л.И. Связывающая способность альбумина сыворотки крови у больных дифтерией / Л.И. Жукова, В.В. Козырева, Л.С. Тарасова // Клиническая лабораторная диагностика. 1999. - № 5. - С. 16-19.

62. Зенков Н.К. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах / Н.К. Зенков, Е.Б. Меньщикова// Успехи современной биологии. -1993. Т. 113, вып. 3. - С. 286-296.

63. Зенков Н.К. Окислительный стресс: Биохимические и патофизиологические аспекты / Н.К. Зенков, Б.З. Панкин, Е.Б. Меньщикова. М.: МАИК «Наука/Периодика», 2001. - 343 с.

64. Изменения связывающих центров в молекуле альбумина при остром инфаркте миокарда /O.JI. Андреева, Т.Е. Добрецов, JI.T. Шмелева и др. / / Кардиология. -1997. № 9. - С. 68-69.

65. Илюха Б.А. Ферменты антиоксидантной системы в постнатальном онтогенезе норок // Онтогенез. 1995. - Т. 26, вып. 2. - С. 115-118.

66. Искусных О.Ю. Перекисное окисление липидов и антиоксидантная защита у животных при парентеральном применении озонированного физиологического раствора. Дис. . канд. биол. наук. Воронеж, 2001. 145 с.

67. Калитка В.В. Антиоксидантова система I перекисове окисления лшпщов у курчат за постнатального онтогенезу / В.В. Калитка, Г.В. Дон-ченко // Украинский биохимический журнал. 1995. - Т. 67, № 2. - С. 80-85.

68. Кармолиев Р.Х. Участие белков крови в биохимической адаптации организма крупного рогатого скота к условиям среды (обзор) / / Сельскохозяйственная биология. 1990. - № 2. -141-151.

69. Кармолиев Р.Х. Кпинико-биохимическая оценка патологических процессов в организме животных. Учеб. пособ. М.: МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, 1997. - 49 с.

70. Кармолиев Р.Х. Биохимия патологических процессов животных: Учеб. пособ. 4.2. - М.: МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, 2000. - 168 с.

71. Кармолиев Р.Х. Биохимические процессы при свободнорадикальном окислении и антиоксидантной защите. Профилактика окислительного стресса у животных (обзор) / / Сельскохозяйственная биология. 2002. - № 2. -12-28.

72. Карпуть И.М. Незаразные болезни молодняка. Минск: Урожай, 1989. -С. 240.

73. Кения М.Е. Роль низкомолекулярных антиоксидантов при окислительном стрессе / М.Е. Кения, А.И. Лукаш, Е.П. Гуськов // Успехи современной биологии. -1993. Т. 113, №> 4. - С. 456-469.

74. Ким Р.Е. Зависимость заболеваний новорожденных телят от состояния здоровья коров-матерей: Автореф. дис. . докт. вет. наук. СПб, 1992. -37 с.

75. Киселева Р.Е. Влияние эндотоксинов на иммунный статус больных бронхиальной астмой / Р.Е. Киселева, Л.В. Кузьмичева, В.И. Штырова // Астма. 2001. - Т. 2, № 1. - С. 65.

76. Киселева Р.Е. Оценка качества молока на основе определения эффективной концентрации альбумина / Р.Е. Киселева, Л.В. Кузьмичева// Биотехнология на рубеже двух тысячелетий: Материалы междунар. науч. конф.

77. Саранск, 2001. С. 101-103.

78. Киселева Р.Е. Адаптационные возможности иммунокомпетентных клеток / Р.Е. Киселева, JIB. Кузьмичева. Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2004. -280 с.

79. Клебанов Г.И. Оценка антиокислительной активности плазмы крови с применением желточных липопротеинов / / Лабораторное дело. 1988. -№ 5. - С. 59-62.

80. Климов A.M. О способности липопротеидов высокой плотности удалять продукты перекисного окисления липидов из эритроцитарных мембран / A.M. Климов, А.А. Кузьмин// Биохимия. 2001. - Т. 106, вып. 3. - С. 371-373.

81. Когтева Г. С. Ненасыщенные жирные кислоты как эндогенные биорегуляторы / Г.С. Когтева, В.В. Безуглов// Биохимия. 1998. - Т. 103, вып. 1. -С. 5-15.

82. Кожевников Ю.Н. О перекисном окислении в норме и патологии // Вопросы медицинской химии. 1985. - Т. 31, № 5. - С. 2-7.

83. Колб В.Г. Справочник по клинической химии / В.Г. Колб, B.C. Камышников. 2-е изд., перераб. и доп. - Минск: Изд-во «Беларусь», 1982. -366 с.

84. Колесова О.Е. Перекисное окисление липидов и методы определения продуктов липопероксидации в биологических средах / О.Е. Колесова, А.А. Маркин, Т.Н. Федорова // Лабораторное дело. 1984. - № 9. - С. 540-546.

85. Колчина А.Ф. Патогенетические особенности токсикозов беременных и при фетоплацентарной недостаточности у коров / / Материалы научной конференции, посвященной 70-летию факультета ветеринарной медицины ВГАу им. К.Д. Глинки. Воронеж, 1996. - С. 43.

86. Колчина А.Ф. Болезни беременных и перинатальная патология у животных. Екатеринбург: Изд-во УрГСХА, 1999. -114 с.

87. Колчина А.Ф. Фетоплацентарная недостаточность и токсикозы беременных коров в техногенно зарязненных районах Урала и методы их профилактики: Дис. докт. вет. наук. Воронеж, 2000. - 231 с.

88. Колышев В.А. Связывание и транспорт веществ альбумином сыворотки крови // Вопросы медицинской химии. -1993. № 1. - С. 339-350.

89. Кондрахин И.П. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии: Справочное издание / И.П. Кондрахин, Н.В. Курилов, А.Г. Малахов. -М.: Агропромиздат, 1985. 287 с.

90. Кондрахин И.П. Диспепсия новорожденных телят успехи, проблемы // Ветеринария. - 2003. - №1. - С. 39-43.

91. Константинова Н.А. Иммунные комплексы и повреждение тканей. М.: Медицина, 1996. 256 с.

92. Концентрация и свойства альбумина в крови и экссудате при остром панкреатите / Г.В. Родоман, Т.И. Шалаева, Г.Е. Добрецов, A.JI. Корота-ев / / Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1999. - Т. 128, No 12. - С. 660-662.

93. Коплик Е.В. Альбумин крови в механизмах индивидуальной устойчивости крыс к эмоциональному стрессу / Е.В. Коплик, Ю.А. Грызунов, Г.Е. Добрецов / / Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. -2002. Т. 88, № 6. - С. 707-714.

94. Корниенко И.Е. Влияние про- и антиоксидантов на амплификацию ДНК: Автореф. . дис. канд. биол. наук. Ростов-на Дону, 2002. - 23 с.

95. Коткина Т.И. Диагностическое значение исследования альбумина сыворотки крови / Т.И. Коткина, Е.И. Волкова, В.Н. Титов // Лабораторное дело. -1991. 7. С. 6-12.

96. Коткина Т.И. Методические приемы исследования альбумина сыворотки крови / Т.И. Коткина, Е.И. Волкова, В.Н. Титов / / Клиническая лабораторная диагностика. 1992. - № 3-4. - С. 55-61.

97. Кривошия П.Ю. Циркулюючи iMyimi комплекси за прихованого nepe6iry шфекцшшл анемп коней // Лабораторная ветеринарна медицина: фвико-х1мически методи дослщованя. -PiBHe. -1998. С. 124-127.

98. Круглякова К.Е. Общие представления о механизме действия антиоксидантов / К.Е. Крутикова, Л.Н. Шишкина// Исследование синтетических и природных антиоксидантов in vitro. М.: Наука, 1992. С. 5-8.

99. Кулагина Т.Г. Термодинамические функции лизоцима, миоглобина, Р-лактоглобулина, альбумина и поли-Ь-триптофана в диапазоне температуры 0-330 К / Т.Г. Кулагина, Т.А. Быкова, Б.Б. Лебедев // Биофизика. -2001. Т. 46, вып. 2. - С. 210-215.

100. Куликов Б.Ю. Системные механизмы регуляции реакций перекис-ного окисления липидов в условиях адаптации и патологии / / Биоантиок-сидант: Тез. Докл. III Всесоюзной конференции. М., 1989. - Т. 2. - С. 26.

101. Кулинский Б.И. Активные формы кислорода и оксидативная модификация макромолекул / / Соросовский образовательный журнал. -1999. № 1. - С. 3-9.

102. Лазаренко Б.Н. Выращивание теленка / В.Н. Лазаренко, Н.А. Эпштейн. 2-е изд., перераб. И доп. - М.: Россельхозиздат, 1985. - 47 с.

103. Лакин Г.Ф. Биометрия: Учеб. пособие для биологич. спец. вузов. 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Высш. школа, 1980. - 293.

104. Лебедев П.Т. Гигиена выращивания молодняка. 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Колос, 1978. - 240 с.

105. Логинов С.И. Возрастная динамика циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови крупного рогатого скота / / Научное обеспечение ветеринарных проблем в животноводстве. Новосибирск, 2000. - С. 275281.

106. Логинов С.И. Диагностическая значимость циркулирующих иммунных комплексов у крупного рогатого скота при инфекционно-воспалительных процессах. Автореф. дис. канд. вет. наук. Алт. гос. аграр. ун-т. Барнаул, 1998. - 24 с.

107. Лопухин Ю.М. Конформационные изменения молекулы альбумина: новый тип реакции на патологический процесс / Ю.М. Лопухин, Г.Е. Добрецов, Ю.А. Грызунов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2000. - Т. 130, № 7. - С. 4-9.

108. Луйк А.И. Динамическая структура сывороточного альбумина при взаимодействии с низкомолекулярными токсическими агентами / А.И. Луйк, Б.С. Бравер-Чернобыльская, В.Д. Лукьянчук / / Вестник АМН СССР. -1983. № 4. - С. 62-67.

109. Луйк А.И. Сывороточный альбумин и биотранспорт ядов / А.И. Луйк, В.Д. Лукьянчук. М.: Медицина, 1984. - 224 с.

110. Лукьянова Л.Д. Кислородзависимые процессы в клетках и ее функциональное состояние / Л.Д. Лукьянова, Б.С. Балмуханов, А.Т. Уголев. М.: Наука, 1982. - 301 с.

111. Лысенко Н.И. Регуляция перекисного окисления липидов при стрессе // Ветеринарная медицина. 2000. - Т.78, № 2. - С. 125-127.

112. Магин Д.В. Применение хемилюминесценции и фотохемилюми-несценции для оценки антиоксидантной активности в биологических жидкостях: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 2001. -19 с.

113. Малахова М.Я. Метод регистрации эндогенной интоксикации. СПб, 1995. 224 с.

114. Манасян А.В. Активность ферментов пищеварительной системы у телят при диспепсии / А.В. Манасян, Г.Р. Петоян, A.M. Шахбазян / / Ветеринария. 2003. - №7. - С. 39-40.

115. Маркович М.Н. О молекулярном механизме связывания пеницил-линов с сывороточным альбумином / М.Н. Маркович, М.А. Ландау// Антибиотики. 1991. - № 10. - С. 901-908.

116. Матюшин Б.Н. Активные формы кислорода: цитотоксическое действие и методические подходы к лабораторному контролю при поражении печени (обзор литературы) / Б.Н. Матюшин, А.С. Логинова// Клиническая лабораторная диагностика. -1996. № 4. - С. 51-53.

117. Мельничук Д. О. Кислотно-основний гомеостаз оргашзму новона-рождених телят / Д.О. Мельничук, Б.А. Грищенко, M.I. Цвилховський // Украинский биохимический журнал. 2001. - Т. 73, № 6. - С. 123-126.

118. Меньщикова Е.Б. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов / Е.Б. Меньщикова, Н.К. Зенков// Успехи современной биологии. 1993. - Т. 113, № 4. - С. 442-455.

119. Метелица Д.И. Активация кислорода ферментными системами. -М.: Наука, 1992. 256 с.

120. Методическое пособие по изучению процессов перекисного окисления липидов и систем антиоксидантной защиты организма у животных / Бузлама Б.С. и др. Воронеж: ВГу, 1997. - 36 с.

121. Механизм антиоксидантного действия полипептидов: экспериментальное и теоретическое изучение /И.В. Корниенко, М.Е. Клецкий, Л.П. Олехнович и др. // Биотехнология. 2001. - № 2. - С. 83-88.

122. Механизм ускорения кислотного гемолиза Е-формой сывороточного альбумина / Л.В. Галебская, А.Д. Денисенко, Н.Б. Симкина и др. // Биофизика. 2000. - Т. 45, вып. 5. - С. 878-881.

123. Миллер Ю.И. Молекулярные основы флюоресцентного метода определения связывающей емкости альбумина сыворотки крови / Ю.И. Миллер, Г.Е. Добрецов// Клиническая лабораторная диагностика. 1994. - № 5. - С. 20-23.

124. Миллер Ю.И. Связывание ксенобиотиков альбумином сыворотки крови / / Клиническая лабораторная диагностика. 1993. - Ne 1. - С. 34-40.

125. Митюшкин В.В. Диспепсия новорожденных телят. 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Росагропромиздат, 1988. -126 с.

126. Мичулис Е.Д. Влияние стресс-факторов на аминокислотный состав крови коров в период адаптации // Вопросы ветеринарной фармации и фармакотерапии: тез. докл. Всесоюзной научно-практической конференции. Сигулда, 1990. - С. 268.

127. Мовсун-Заде К.К. Комплексное лечение телят, больных диспепсией с применением гемолизированной крови // Тез. докл. науч. конф. «Профилактика и лечение болезней молодняка сельскохозяйственных животных». Одесса,1988. - С. 13-15.

128. Модификация лигандной нагрузки на структуры сывороточного альбумина человека при различных методах выделения / А.И. Иванов, В.В. Саркацкая, А.А. Короленко и др. // Биохимия. 1996. - Т. 61, вып. 5. - С. 903-911.

129. Молекулы средней массы показатель эндогенной интоксикации крупного рогатого скота / Ю.А. Гаврилов, Н.Ю. Диких, Т.Б. Кручинкина, А.А. Никитина / / Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2004. - № 3. - С. 90-92

130. Молина Л.П. Роль эндогенной интоксикации в нарушении иммунного статуса при неспецифическом хроническом воспалении. Автореф. . дис. канд. биол. наук. Саранск, 1998. -18 с.

131. Муравская Е.В. Модификация транспортной функции сывороточного альбумина при атеросклерозе и сахарном диабете / Е.В. Муравская, А.Г. Лапко, В.А. Муравский // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2003. - Т. 135, № 5. - С. 512-514.

132. Неверодський П.Е. Конформацшш змши шуноглобулплв i альбумину сироватки KpoBi пзд впливом р1зних агеьтв: автореф. дис. на соиск. учен. степ. канд. мед. наук.: (03.00.04) / Харк. мед. ю-т. Харюв, 1993. - 23 с.

133. Некоторые характеристики метода и реактивов для флюоресцентного определении эффективной и общей концентрации сывороточного альбумина / В.М. Моин, Э.Ю. Мисионжник, З.И. Кузнецова и др. / / Клиническая лабораторная диагностика. -1994. № 5. - С. 33-35.

134. Оболенский В.А. Уровень средних молекул в определении степени интоксикации у больных с гнойными ранами / / Вестник хирургии. 1993.- № 3. С. 34-38.

135. Оболенский С.В. Лабораторная диагностика интоксикаций в практике интенсивной терапии / С.В. Оболенский, М.Я. Малахова. СПб, 1991.- 213 с.

136. Обухова Л.К. Токсические продукты метаболизма кислорода и возрастная утрата функциональной активности / / Надежность и элементарные события процессов старения биологических объектов. Киев, 1986. - С. 89-96.

137. Окислительная модификация белков плазмы человека. Метод выделения / Е.Е. Дубинина, С.О. Бурмистров, Д.А. Ходов, И.Е. Повотов // Вопросы медицинской химии. 1995. - Т. 41, № 1. - С. 24-26.

138. Окислительная модификация белков: окисление триптофана и образование битирозина в очищенных белках с использованием системы Фентона / Е.Е. Дубинина, С.В. Гавровская, Е.В. Кузьмич и др. // Биохимия.- 2002. Т. 67, вып. 3. - С. 413-421.

139. Определение тяжести эндогенной интоксикации по уровню сред-немолекулярных пептидов / Е.В. Васильева, О.Н. Лопаткин, Ю.Е. Морозов, В.В. Зарубин // Судебно-медицинская экспертиза. 2004. - Т. 47, № 4. - С. 18-21.

140. Осипов А.Н. Активные формы килорода и их роль в организме / А.Н. Осипов, О.А. Азизова, Ю.А. Владимиров // Успехи биологической химии, 1990. Т. 31. - С. 180-208.

141. Остоловский Е.М. Сравнительная характеристика структурных и функциональных особенностей альбумина сыворотки крови в ряду позвоночных. Дис. . д-ра биол. наук. Симферополь, 1992 239 с.

142. Оценка интоксикации организма по нарушению баланса между накоплением и связыванием токсинов в плазме крови / В.Б. Гаврилов, М.М. Бидула, Д.А. Фурманчук и др. // Клиническая лабораторная диагностика. 1999. - № 2. - С. 13-17.

143. Пантявин А. А. Модификация физико-химических свойств молекул сывороточного альбумина, индуцированная вакуумным ультрафиолетовым излучением / А.А. Пантявин, В.Г. Арюков, Г.А. Вашанов / / Вестник ВГу. Сер. химия, биология. 2000. - С. 122-125.

144. Паршин П. А. Клинико-морфологические изменения при гастроэнтеритах у молодняка / / Ветеринария. 2004. - №2. - С. 42-45.

145. Паршин П.А. Показатели обмена липидов, характеризующие резистентность коров в послеотельный период // Тез. докл. научной конференции по воспроизводству. Воронеж, 1988. - С. 83-84.

146. Пентюк А.А. Изучение новых функциональных свойств альбумина / А.А. Пентюк, Р.А. Мусин, Г.П. Марченко // Вопросы медицинской химии. -1995. № 3. - С. 11-13.

147. Первушин Ю.В. Комплекс лабораторных показателей для оценки эндогенной интоксикации / Ю.В. Первушин, Т.П. Бондарь, JI.A. Марченко // Клиническая лабораторная диагностика. 1992. - № 2. - С. 13-16.

148. Перекисное окисление и стресс / В.А. Барабой, И.И. Брехман, В.Г. Голотин и др. СПб.: Наука, 1992. 160 с.

149. Пероксидное окисление липидов и система антиоксидантной защиты в период ранней постнатальной адаптации телят / М.И. Рецкий, B.C. Бузлама, Н.Н. Каверин и др. / / Сельскохозяйственная биология. 2004. - № 2. - 56-60.

150. Пескин А.В. Взаимодействие активного кислорода с ДНК // Биохимия. -1997. Т. 62, N° 12. - С. 1571-1578.

151. Плохинский Н.А. Биометрия. Новосибирск: Сибир. отделение АН СССР, 1961. - 363 с.

152. Повреждение препаратов лиофилизированных белков / Г.Р. Кос-тантино, С.Р. Швендеман, Р. Лангер, A.M. Клибанов / / Биохимия. 1998. -Т. 63, вып. 3. - С. 422-429.

153. Погорелова Т.Н. Использование хемилюминесцентного анализа крови для прогнозирования течения адаптационного периода у новорожденных / Т.Н. Погорелова, Т.С. Длужевская, И.И. Крукнер / / Клиническая лабораторная диагностика. -1996. - № 5. - С. 27-29.

154. Поппс Г.С. 1нтешвность перекисного окисления лшщов як показник активносп зонального процессу при хротчному обструктивному бронхт / Г.С. Потк, О.Б. Волошина, I.M. Старостенко // Одесский медицинский журнал. -2000.-№6,-С. 35-37.

155. Применение гамма-глобулина при диспепсии телят /Е.И. Туманов, С.С.Абрамов, И.Г. Аристов и др. /В кн.: Патология органов дыхания и пищеварения сельскохозяйственных животных. М.: Колос, 1989. - С. 30.

156. Радченков В.П. Т-лимфоциты крупного рогатого скота. Функции и маркерные молекулы / В.П. Радченков, B.C. Хлопонин// Сельскохозяйственная биология. 2005. - № 2. - С. 23-31.

157. Радченков В.П. Участие макрофагов в прямом антибактериальном иммунитете Т-лимфоцитов крупного рогатого скота к условно-патогенным бактериям / В.П. Радченков, B.C. Хлопонин, А.Ф. Мороз // Вестник РАСХН. 2004. - № 4. - С. 80-82.

158. Размер молекулы сывороточного альбумина человека в растворе / М.А. Киселев, Ю.А. Грызунов, Г.Е. Добрецов, М.Н. Комарова / / Биофизика. 2001. - Т. 46, вып. 3. - С. 423-427.

159. Рецкий М.И. Система антиоксидантной защиты у животных при стрессе и его фармакологической регуляции: Автореф. дис. . д-ра биол.наук. Воронеж, 1997. - 51 с.

160. Роль активации перекисного окисления липидов в патогенезе экспериментального перитонита / С.Г. Конюхова, А.Ю. Дубикайтис, Л.В. Ша-тукевич и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1989. № 5. - С. 557-559.

161. Роль перекисного окисления липидов в патогенезе синдрома диареи у телят в раннем возрасте / П.П. Фукс, Ю.В. Никитченко, В.Д. Петряник и др. // Ветеринарная медицина. -1997. Т. 73. - С. 27-32.

162. Роль процессов свободнорадикального окисления в патогенезе инфекционных заболеваний / А.П. Шепелев, И.В. Корниенко, А.В. Шестопа-лов, А.Ю. Антипов / / Вопросы медицинской химии. 2000. - Т. 46, № 2. - С. 110-116.

163. Роль сычуга в этиологии расстройства пищеварения у телят / И.Н. Жирков, И.И. Братухин, Е.В. Овчинникова, Н.И. Телитченко / / Ветеринария. 2000. - № 9. - С. 39-41.

164. Садовская Т.А. Взаимовлияние белков и липидов молока коров и их динамика в период лактации. Автореф. дис. на соиск. уч. ст. канд. биол. наук. М., 2001. - 23 с.

165. Свистунова О.И. Гликозилированные белки сыворотки крови: тест фруктозамин (обзор литературы) / О.И. Свистунова, В.Н. Титов / / Клиническая лабораторная диагностика. -1992. № 11-12. - С. 22-30.

166. Свободные радикалы в живых системах / Ю.А. Владимиров, О.А. Азизова, А.И. Деев и др. // Итоги науки и техники. Серия «Биофизика». -1992. Т.29. - С. 3-250.

167. Связывающая способность альбумина и липиды сыворотки крови при развитии острого инфаркта миокарда / Ю.А. Грызунов, А.Б. Пестова, Е.Н. Коцаймани и др. / / Клиническая лабораторная диагностика. 1994. -№ 5. - С. 23-25.

168. Сидоров И.В. Активные формы кислорода в окислительных процессах у животных и защитная регуляторная роль биоантиоксидантов / И.В.

169. Сидоров, Н.А. Костромитинов/ / Сельскохозяйственная биология. 2003. -№ 6. - 3-14.

170. Симбирцев С.А. Патофизиологические аспекты эндогенных интоксикаций / С.А. Симбирцев, Н.А. Беляков// Тез. докл. междунар. симп. «Эндогенные интоксикации». СПб, 1994. С. 5-9.

171. Скрининговый метод определения средних молекул в биологических жидкостях / Н.И. Габриэлян, Б.И. Липатова и др. / Методические рекомендации. М.: Наука, 1985. - 25 с.

172. Скулачев В.П. Нефосфорилирующее дыхание как механизм, предотвращающий образование активных форм кислорода // Молекулярная биология, 1995. Т. 29, № 6. - С. 1199-1209.

173. Соколовский В.В. Тиоловые антиоксиданты в молекулярных механизмах неспецифической реакции организма на экстремальное воздействие // Вопросы медицинской химии. 1988. - № 6. - С. 2-11.

174. Сорокина Д.А. Структурно-функциональные свойства белков. Киев: Высшая школа, 1990. - 216 с.

175. Степанова И.П. Диагностическая ценность определения БНСММ в плазме крови и эритроцитах коров / / Зоотехния. 2001. - № 12. - С. 14-15.

176. Степанова И.П. Интегральная оценка метаболического статуса крупного рогатого скота. В сб.: Достижения ветеринарной медицины XXI веку. Мат. междунар. науч. конф., посвященной 40-летию Института ветеринарной медицины АГАу. Барнаул, 2002. - С. 179-180.

177. Степанова И.П. Сравнительный анализ методов оценки метаболического статуса коров в разные физиологические периоды. Тез. докл. 4-го съезда физиологов Сибири. Новосибирск, 2002. С. 269.

178. Степанова И.П. Интегральный метод диагностики метаболических нарушений у коров / И.П. Степанова, И.В. Власова, Л.М. Дмитриева // Сельскохозяйственная биология. 2003. - № 4. -109-113.

179. Степанова И.П. Метод для выявления окислительного стресса у крупного рогатого скота // Ветеринария. 2005. - № 8. - С. 47-49.

180. Стимуляция клеточных и гуморальных факторов неспецифической резистентности новыми производными глицирризиновой кислоты у телят, больных диспепсией / Г.В. Базекин, З.Ф. Исмагилова, А.Ф. Исмагилова и др. / / Вестник РАСХН. 2003. - № 6. - С. 63-64.

181. Тарасов ИИ. Роль молозива и формирование иммунного статуса и развитии у телят диспепсии аутоиммунного происхождения: Автореф. дис. канд. вет. Наук. Витебск, 1987. -18 с.

182. Титов В.Н. Альбумин, транспорт насыщенных жирных кислот и метаболический стресс-синдром (обзор литературы) / / Клиническая лабораторная диагностика. 1999. - № 4. - С. 3-8.

183. Тиунов Л. А. Механизмы естественной детоксикации и антиоксидантной защиты // Вестник РАМН. 1995. - № 3. - С. 9-13.

184. Ткаченко Т.Е. Показатели крови и мочи при нарушениях обмена веществ у коров // Ветеринария. 2003. - № 2. - С. 43-47.

185. Толкачева Н.В. Альбумин-зависимый транспорт липидов при различных состояниях. Дис. . д-ра биол. наук. Симферополь, 1991 269 с.

186. Томчук В.А. Перекисное окисление липидов крови телят, больных диспепсией / В.А. Томчук, Д.А. Мельничук// Ветеринария. 2003. - №8. -С. 35-37.

187. Топурия Г.М. Иммунный статус телят в условиях экологического неблагополучия / Г.М. Топурия, Л.Ю. Топурия// Вестник РАСХН. 2004. -№ 4. - С. 33-35.

188. Туров В.В. Влияние сывороточного альбумина на температуру образования эвтектик в бинарных растворах органических соединений / В.В. Туров, В.А. Покровский, А.А. Чуйко // Биофизика. 1994. - Т. 39, вып. 6. -С. 988-992.

189. Уверский Б.Н. Влияние природных лигандов на структурные свойства и конформационную стабильность белков / В.Н. Уверский, Н.В. На-рижнева/ / Биохимия. -1998. Т. 63, вып. 4. - С. 500-515.

190. Уманский М.А. Синдром эндогенной интоксикации / М.А. Уман-ский, В.Г. Пинчук. Киев: Наукова думка, 1979. - 201 с.

191. Урбан В.П. Болезни молодняка в промышленном животноводстве / В.П. Урбан, ИЛ. Найманов. М.: Колос, 1984 - 207 с.

192. Фазуллин Х.В. Неполноценное кормление стельных коров как причина диспепсии у телят / Х.В. Фазуллин, Т.В. Чуличкова// Био. 2003. - Nb 11. - С. 35-37.

193. Флюоресцентный метод определения массовой концентрации альбумина сыворотки крови человека / Ю.А. Грызунов, Ю.И. Миллер, Г.Е. До-брецов, А.Б. Пестова // Клиническая лабораторная диагностика. 1994. -№ 5. - С. 27-31.

194. Фонталин Л.Н. Происхождение антиген-распознающей иммуннойсистемы позвоночных: молекулярно-биологические и иммунологические аспекты // Иммунология. 1998. - № 6. - С. 33-42.

195. Фрейдлин И.С. Иммунная система и ее дефекты. СПб.: Полисан, 1998. -112 с.

196. Фром А.А. Белки плазмы крови и их фракционирование в производстве препаратов крови. М.: Наука, 1974. 251 с.

197. Хан Р.Х. Влияние Сахаров на стабильность и вторичную структуру альбумина сыворотки кролика // Биохимия. 2001. - Т. 66, вып. 9. - С. 12801285.

198. Ханбабаева З.М. Минеральный, белковый статус и продуктивность коров равнинного прикаспия. Автореф. дис. на соиск. уч. ст. канд. биол. наук. Воронеж, 2001. - 20 с.

199. Храпова Н.Г. Перекисное окисление липидов и системы регулирующие его активность / / Биохимия липидов и их роль в обмене веществ.- М., 1981. С. 147-155.

200. Циркулирующие иммунные комплексы интегральный тест оценки ксенобиотической нагрузки на организм животных / С.И. Логинов, Т.А. Агаркова, А.И. Павлова, В. А. Апалькин Электронный ресурс.: http://vetfac.nsau.edu.ru/new/text/confer/t97/ t94.htm (62 кб).

201. Чаленко В.В. Эндогенная интоксикация в хирургии / В.Б. Чаленко, Ф.Х. Кутушев / / Вестник хирургии. -1989. № 4. - С. 3-8.

202. Чегер С.И. Транспортная функция сывороточного альбумина. Бухарест: Академия Республики Румыния, 1975. - 183 с.

203. Чернышев А.И. Диспепсия и сохранность телят. Казань, 1989. - С. 35.

204. Чернышев А.И. Как сохранить телят. Казань, 1986. - С. 112.

205. Шарова Л.А. Биохимические механизмы оксидативного стресса в патогенезе экстремальных ситуаций. Дис. . д-ра биол. наук. СПб, 2001 -332 с.

206. Шахов А.Г. Роль процессов свободнорадикального окисления в патогенезе инфекционных заболеваний // Свободные радикалы, антиокси-данты и здоровье животных. Материалы Международной научно-практической конференции. Воронеж: ВГУ, 2004. - С. 3-9.

207. Шилов Е.М. Патогенетическая роль и клиническое значение обнаружения циркулирующих иммунных комплексов при гломерулонефрите / Е.М. Шилов, В.П. Лесков// Терапевтический архив. 1983. - № 6. - С. 127133.

208. Шимановский Н.Л. Сывороточный альбумин транспортная ре-цепторная система для физиологически активных веществ //Фармакология и токсикология. - 1984. - № 2. - С. 93-100.

209. Шишков В.П. Болезни новорожденных телят / В кн.: Патологическая диагностика болезней крупного рогатого скота. М.: Агропромиздат, 1989. - С. 118-119.

210. Эколого-адаптационная стратегия защиты здоровья и продуктивности животных в современных условиях / А.Г. Шахов, B.C. Бузлама, В.Т. Са-мохин и др. Воронеж: Изд-во ВГТУ, 2001. - 207 с.

211. Юдин М.Ф. Физиологическое состояние организма коров в разные сезоны года / / Ветеринария. 2001. - №2. - С. 38-42.

212. Anderson S. Fluorescence polarization of the complexes of 1-amino-naphthalenesulfonate with bovine serum albumin. Evidence for preberential orientation of the ligand / S. Anderson, G. Weber/ / Biochemistry. 1969. - V. 8. -P. 371-377.

213. Andersson L.O. Transport proteins. Serum albumin. Gothenburg: Sto-cholm, 1981. - 172 p.

214. Atroshi F. Role of plasma fatty acids, prostsglandin4s and antioxidant balance in bovine mastitis / F. Atroshi, A. Rizzo, R. Kangasniemi //J. Veter.

215. Med., Ser A. -1989. V. 36, № 9. - P. 702-711.

216. Berlett B.S. Protein oxidation in aging disease and oxidative stress / B.S. Berlett, E.R. Stadtman// J. Biol. Chem. 1997. - V. 272 (33). - P. 20313-20316.

217. Bock H.D. Protein metabolism in farm animals. Evaluation, digestion and metabolism. Oxford Univ. press, 1989. - P. 165-440.

218. Brown I.R. Lipid-protein interaction // Ed. D. Jost. New York: Wiley, 1982. - V. 1. - P. 25-28.

219. Brown I.R. Serum albumin: amino acid sefuerice. Albumin structure, function and uses. New York: Academic Press, 1985. - P. 161-245.

220. Brown I.R. Structure of bovine serum albumin // Fed. Proc. 1975. - V. 34. - P. 591-596.

221. Chance B. Hydroperoxide metabolism in mammalian organ / B. Chance, A. Boveris// Physiol. Ev. -1979. V. 59, № 3. - P. 527-605.

222. Concentrations of tocopherols and carotenoids in maternal and corn blood plasma / M. Kiely, P.F. Cogan, D.J. Kearney, P.A. Morrissey // Eur. J. Clin. Nutr. -1999. V. 53, № 9. - P. 711-715.

223. Davies K.J.A. Protein damage and degradation by oxygen radicals. II. Modification of aminoacid / K.J.A. Davies, M.E. Delsignore, S.W. Zin // J. Biol. Chem. -1987. C. 262, № 20. - P. 9902-9907.

224. Detrmination of carbonyl content in oxidatively modified proteins / R.L. Levine, D. Garland, C.N. Oliver et al. // Meth. Enzimol. 1990. - V. 186. - P. 464-478.

225. Dirks R.C. The role of lipid, free radical initiator, and oxygen on the kinetics of lipid peroxidation / R.C. Dirks, M.D. Faiman, E.S. Huyser // Toxicol. Appl. Pharmacol. -1982. V. 63, № 1. - P. 21-28.

226. Effect of diarrhea on the level of C-reactive protein (CRP), albumins and alphal-globulins in the blood serum of piglets / A. Rychlik, M. Bigoszewski, A. Depta et al. / / Bull. Veter. Inst, in Pulawy. 2001. - V. 45, № 2. - P. 219-226.

227. Enantioselective binding sites on bovine serum albumin to dansyl amino acid / A. Yoshihiro, F. Shikie, K. Yuki et al. / / Biochim. et biophys. acta. Protein

228. Struct, and Mol. Enzymol. -1999. -1433, №1-2. P. 188-197.

229. Foster J.F. Albumin: Structure, Function and Use // Biochem. Biophys. Acta. 1993. - V.665. - P. 454-462.

230. Gutteridge J.C. Lipid peroxidation and antioxidants as biomarkers of tissue damage // Clinical. Chemistry. -1995. V. 41, №12. - P. 1819-1928.

231. Handbook on Metalloproteins. Bertini, I., Sigel, A., Sigel, H., eds. Marcel Dekker. N.-Y.: Basel, 2001. - 11182 p. (Глава 18 - Albumin).

232. Harris D. Regulation of antioxidant enzymes // FASEB J. 1992. - V. 6, № 9. - P. 2675-2683.

233. Havea P. Formation of new protein structures in heated mixtures of BSA and alpha-lactalbumin / P. Havea, H. Singh, L.K. Creamer //J. agr. food chem. 2000. - V.48, № 5. - P. 1548-1556.

234. Iron-induced lipid peroxidation and protein modification in endoplasmic reticulum membranes. Protection by stobadine / P. Kaplan, M. Doval, Z. Ma-jerova et al. / / Int. J. Biochemystry Cell Biology. 1996. - V. 32, № 5. - P. 539547.

235. Koch-Wester S. Binding of drugs to serum albumin / S. Koch-Wester, E.M. Sellers/ / New Engl. Meol. -1986. № 6. - P. 311-316/

236. Krinsky N.I. The antioxidant and biological properties of the carotinoids // Ann. NY Academy Science. 1998. - № 854. - P. 443-447.

237. Levieux D. Bovine immunoglobulin G, beta-lactoglobulin, alpha-lactalbumin and serum albumin in colostrum and milk during the early post par-turn period / D. Levieux, A. Oilier// J. Dairy Res. 1999. - V.66, № 3. - P. 421430.

238. Lindmark-Mansson H. Antioxidative factors in milk / H. Lindmark-Mansson, B. Akesson/ / Br. J. Nutr. 2000. - V. 84, suppl. 1. - P. 103-110.

239. Lindup W.C. Drugs albumin binding / / Biochem. Soc. Trans. 1985. - № 5. - P. 635-640.

240. Millan F. Cambios observados en la albumina de suero bo vino al inter-accionar con hidroperoxidos del acido linolenico / F. Millan, E. Vioque/ / Gras уaceites. -1995. V. 46, № 2. - P. 109-114.

241. Nielsen H.K. Reactions of proteins with oxidizing lipids. 1. Analytical measurements of lipid oxidation and of amino acid losses in a whey protein methyl linolentace model system // Brit. J. Nutr. 1985. - V. 53, № 1. - P. 61-73.

242. Oxygen supply of the myocardium / K.I. Frank, M. Kessler, K. Appel-baum et al. // Adv. Exp. Med. Biol. -1989. V. 248. - P. 561-566:

243. Refsgaard H.F. Modifications of proteins by polyunsaturated fatty acid peroxidation products / H.F. Refsgaard, L. Tsai, E.R. Stadtman / / PNAS. 2000. - V. 97, No 2. - P. 611-616.

244. Robles R. Oxidative stress in the neonate / R. Robles, N. Palomino, A. Robles// Early Hum. Dev. 2001. - V. 65. - P. 75-81.

245. Ruol R.G. Fragments of bovine serum albumin produced limited proteo-lisis / / Biochemistry. -1985. V. 14. - P. 4578-4587.

246. Sedlak I. Estimation of total, protein-bound and nonprotein sulfhydryl groupes in tissue with Ellman's reagent / J. Sedlak, R.H. Lindsay// Anal. Biochemistry. -1968. V. 25. - № 1-3. - P. 192-205.

247. Shape of the haemoglobin-oxygen equilibrium curve and oxygen transport efficiency / M. Kobayashi, K. Ishigaki, M. Kobayashi et al. // Respit. Physiol. -1994. V. 955, № 3. - P. 321-328.

248. Spector A.A. Binding of long-chain fatty acids to bovine serum albumin / A.A. Spector, K.M. John, J.E. Fletscher / /J. Lipid. Res. 1990. - V. 10, № 1. - P. 56-67.

249. Spector A.A. Structure and lipid binding properties of serum albumin // Methoda Enzymol. -1986. V. 128. - P. 320-329.

250. Spector A.A. Effect of free fatty acid on the fluorescence of bovine serum albumin / A.A. Spector, K.M. John// Arch. Biochem. 1986. - V. 127. - P. 65-71.

251. Stadtman R.E. Protein oxidation / R.E. Stadtman, R.L. Levine// Ann. NY Acad. Scien. 2000. - V. 899, № 1. - P. 191-208.

252. Steinhardt M. Reaktionen von Saugkalbern der Mutterkuhhaltung auf Nahrungsaufnahme. Plasma- und Speichelcortisol, biochemische, metabolische Variablen und Mineralstoffe. Berlin: Acad. Press, 2000 - 49 s.

253. Storey K.B. Oxidative stress: animal adaptations in nature //Brazilian J. of Medical and Biological Research. -1996. V. 29, № 12. - P. 1715-1733.

254. Total antioxidant capacity and lipid peroxidation during liver transplantation / H.F. Galley, N. Richardson, P.D. Howdle et al. / / Clinical Sci. Colch. -1995. V. 89, № 3. - P. 329-332.

255. Trigatti B.L. A direct role for serum albumin in the cellular up-take of long-chain fatty acid / B.L. Trigatti, G.E. Gerber// Biochemical Society London -1995. - P. 375-376.

256. Trumser A.E. The binding of natural and fluorescent lysophospholipids to wild-type and mutant rat liver fatty acid-binding protein and albumin / A.E. Trumser, D.C. Wilton// Biochemical Society London - 1995. - P. 326-330.

257. Wellevik K. Spontaneous in vivo isomerization of bovine serum albumin as a determinant of its normal catabolism / / Biochem. and biophys. acta. 1976. - V. 420. - P. 42-56.

258. Wong H.R. The stress response and the lung / H.R. Wong, J.R. Wispe// Am. J. Physiol. -1997. V. 27,3 (1). - P. 21-29.

Информация о работе

Борченко, Руслан Владимирович
кандидата биологических наук
Боровск, 2006
ВАК 03.00.04

Диссертация

Изучение структурно-функциональных свойств сывороточного альбумина и биохимических критериев эндогенной интоксикации крови телят и их матерей - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы