Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Сравнительная физико-химическая характеристика белков крови крупного рогатого скота в различные периоды онтогенеза, стельности и лактации

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Сравнительная физико-химическая характеристика белков крови крупного рогатого скота в различные периоды онтогенеза, стельности и лактации"

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРОПРОМЫШЛЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ¿¿^

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ВЕТЕРИНАРНАЯ АКАДЕМИЯ имени К. И. СКРЯБИНА

На правах рукописи

КАРМОЛИЕВ Рафик Хакимович

УДК 612:11:612.117:612.12 636.2

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БЕЛКОВ КРОВИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДУ ОНТОГЕНЕЗА, СТЕЛЬНОСТИ И ЛАКТАЦИИ

03.00.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва - 1989

Гаоота шпоявена в :«ооковокой ордена Трудового Красного Зна-

л.эи!-: гзотор^нарнол академии им. К.И.Скрябина

0л1 циааьше оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Кальницкий Е.Д.

доктор биологических наук, профессор Простяков А.П.

доктор биологических наук, профессор Холод В.М.

Ьспущая организация: Всесоюзный научно-исследователь-

ский институт незаразных болезней животных

^а'дита состоится "_" _ 1989 г. в _ ч на

заседай--:;', специализированного совета Д-120.36.05 по защите дис-се^тац^Л на соискание ученой степени доктора наук при Московской ордена Трудового Красного Знамени ветеринарной академии имени л.Скрябина (109472 Москва, ул. Академика'Скрябина, 23; тел. 37':'—93—-:).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИВА.

Автореферат разослан "_" _ 1989 г.

Ученый секретарь специализированного совета

Сазонов Н.А.

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

I.I. Актуальность темы. Oó участии белков в защитных и транспортных процессах биохимической адаптации свидетельствуют установленные рядом ученых факты изменения состава и содержания, гетерогенности и структуры, активности в реакциях модификации белков крови в онтогенезе и при патологиях организма животного (С.И.Афонский, 1966; А.А.Углов и др., 1969; Б.Д.Кальницкий и др., 1979; Г.Ф.Коромыслов, 1979; Г.В.Троицкий, 1979; Н.Т.Радионов и др.,1979; П.З.Лагодюк и др., 1983; В.М.Холод, 1983; Р.У.Бейсембаева, 1984; А.П. Простяков, 1985; Ю.Н.Федоров, 1987). В процессах биохимической адаптации участвуют белки крови ферментативно и неферментативно претерпевшие котранслявдонные ( н-гликозилирование фетуина) и посттрансляционные (частичный протеолиз предшественников альбумина и церулоплазмина) физиологические реакции модификации (Hortin, Boime, 1983; Moore, Free, 1985 ). Часто эти реакции лежат в основе какого-либо процесса биохимической адаптации.

Каталитическая реакция с участием липопротеидлипазы (ЛПЛ; КФ 3.1.1.34), триглицеридлипазы (ТТЛ; КФ 3.1.1.3) и лецитин:холесте-рол ацилтрансферазы (ЛХАТ; КФ 2.3.1.43), а также насцентных липо-протеидов высокой плотности (нЛВП), аполипопротеина C-II (ano C-II) и сывороточного альбумина (а1Ъ ) лежит в основе трансформации транспортирующих триглицериды из кишечника хиломикронов (Chm ) и липопротеидов очень низкой плотности (ЛОНП) в липопротеиды высокой (ЛВП) и низкой плотности (ЛНП) и акцептирования образовавшихся при этом неэстерифицированных жирных кислот (II3EK) з форме Aib-Lp (I) в вше ни, печени и дировой ткани животных (Puppione, 1978; Small, 1981; Kimunen е.а., 1983; Решезу е.а.,1984 ): Chm i ЛПЛ+ЛХАТ+ТГЛ

Л0НП 1 адо C-IM+Al?- jlHn + Ш + НЭЖ (А1Ь'1р } (1) '

К неферментативным физиологически реакциям модификации белков крови относят: карбоксилирование, гликозилирование, ацетилиро-вание, дезамидирование, фосфоржлирование, сульфирование и др. Физиологические реакции модификации сопровождаются изменениями структуры и гетерогенности, физико-химических и биохимических функций белков крови (Д.А.Мёлышчук, 1985; Д.А.Мельничук и др., 1986; Н.Ф.Стародуб и др., 1987; Н.В.Пушкина и др., 1987).

Для создания условий, способствующих сохранности молодняка, воспроизводству стада и продуктивности коров, теоретически и

практически ваяны результаты исследований участия белков крови в защитных и иммуносуцрессорных, стимулирующих синтезы и транспортных процессах биохимической адаптации организма при росте и развитии в пре- и ранний постнатальннй периоды онтогенеза, стельности и лактации. Очевидно, для решения таких сложных задач необходимы исследования состава и содержания, гетерогенности и структуры,интенсивности реакций модификации белков крови, которые позволили бы количественно выразить характер и величину - "цену" биохимической адаптации организма в важнейшие периоды онтогенеза крупного рогатого скота. Однако в литературе малочисленны и неполны сообщения о подобных исследованиях.

Данная работа выполнена в соответствии с плановой темой (проблема XI, тема 22, задание 3, раздел 14, госрегистрационный № 77005356) кафедры органической и биологической химии Московской ветеринарной академии им. К.И.Скрябина.

1.2. Цель и задачи исследований. Цель исследований - изучение участия защитных и иммуносуцресс орных, транспортных и стимулирующих синтезы белков крови в биохимической адаптации в зависимости от морфо-функционального состояния таких важнейших систем организма, как генная, нейроэндокринная и иммунная в процессе роста и развития в~цре- и ранний постнатальный периоды онтогенеза, стельности и лактации крупного рогатого скота. Ставились следующие задачи: - направить и повысить эффективность применения электрофореза, полярографии и хроматографии для идентификации и дифференциации белков крови, при исследовании их структуры и гетерогенности, физико-химических свойств и активности в реакциях модификации;

- выделить и очистить из крови коров и их плодов защитные (иммуноглобулины igOj. и lgS2 , фибриногены), иммуносупрессорные (серому-коиды, (TCj-кислый гликопротеид), стимулирующий синтезы (эмбриоспе-цифический белок - фетуин) и транспортные (гемоглобины, альбумины, трансферрины) белки; - изучить сравнительно структуру (гетерогенность, аминокислотный и пептидный состав), физико-химические свойства (молекулярная масса, молярный коэффициент погашения, максимум абсорбции, электрохимическая активность, межмолекулярное взаимодействие, кинетика физической и химической денатурации) и интенсивность участия в реакция модификации (по утлеводноцу и лшщдно-му составу надмолекулярных комплексов) вышеназванных белков;

- определить уровень защитных и иммуносуцрессорных, транспортных и стимулирующих синтезы биохимических процессов при изменениях морфо-функционального состояния генной, нейроэндокринной и иммун-

ной систем организма по динамике содержания и характеру изменения электрохимических свойств и интенсивности реакций модификации белков крови и лим|)Ы крупного рогатого скота; - предложить критерии течения взаимосвязанных генетически обусловленных, нейроэндокрин-ных и иммунобиологических факторов биохимической адаптации организма в пре- и раннем постнатальном периодах онтогенеза, стельности и лактации; - разработать схемы молекулярного механизма участия белков плазмы крови в нейроэндокринном и иммунобиологическом факторах биохимической адаптации организма крупного рогатого скота.

1.3. Научная новизна работы. Впервые экспериментально обосновано применение фронтального (свободного) электрофореза и полярографии для идентификации и дифференциации, "исследования гетерогенности, структуры и физико-химических свойств белков крови крупного рогатого скота. Показана эффективность сочеташш электрофореза и полярографии (электрофореполярография), электрофореза и гель-фильтрации, двумерного электрофореза, полярографического анализа кинетики физической и химической денатурации, а также протеолиза пепсином и трипсином белков крови.

В диссертации сформулированы и обоснованы новые научные положения по характеру и основным направлениям биохимической адаптации организма крупного рогатого скота с участием белков крови: с изменением среды функционирования в антенатальный и ранний постнаталъ-ный периоды онтогенеза проявляется генетически обусловленный фактор, сопровождаемый сменой биосинтеза Легальных белков на гомологичные по функции белки, характерные для взрослых животных, биосинтезом иммуноглобулинов, понижением уровня синтеза иммуносупрес-сорных и повышением уровня транспортных белков крови; при смене характера взаимосвязанных кейроэндокринного и иммунобиологического факторов в процессе роста и развития, стельности и лактации наблюдаются изменения в интенсивности биосинтеза альбумина, иммуноглобулинов и иммуносупрессорних белков, а также физиологических реакций модификации белков крови (неферментативного глихозилирования и взаимодействия с липидами). Експериментально и теоретически обоснованы схемы молекулярного механизма метаболизма липопротеидов к реакции неферментативного гликозилирования белков сыворотки крови, участия белков крови в иммунном ответе и нейроэндокринном факторе биохимической адаптации организма крупного рогатого скота.

1.4. Практическая ценность работы. Разработаны и усовершенствованы способы идентификации и дифференциации белков крови крупного рогатого скота, выделения и очистки серомукоидов и фетуина, количественного анализа липопротеидов и протеинового индекса, ис-

следования кинетики химической и физической денатурации, протеоли-за пепсином и трипсином, а также полярографического анализа элек-трофореграмм (электрофореполярография). Эти способы признаны рационализаторскими Московской ветеринарной академией им. К.И.Скрябина (12 удостоверений, й 21-116 от 1985 и 1987 гг.) и внедрены в учебный процесс и практику научных исследовании (имеются акты об использовании п справка о внедрении) лаборатории хшии растительных белков Института химии растительных веществ АН УзССР, на кафедрах патологической физиологии и вирусологии МВА, внутренних и незаразных болезней сельскохозяйственных животных Казанского ветеринарного института им. Н.Э.Баумана, органической и биологической химии Алма-Атинского зооветеринарного института и Белоцер-ковского СХИ, физиологии и биохимии Свердловского и Западно-Казахстанского СХИ, анатомии животных Горьковского СХИ. Основная часть вышеназванных способов представлена в:

- Применение современных биохимических методов исследования в ветеринарии/Под ред. проф.А.Г.Малахова. Ответств. за вып. доц. Р.Х.Кармолиев: Методич.указ. М.: MBA, 1980.-Вып.1-3.-24,37 и 38с. -1986.-Вып.7. - 60 с. Методические указания рекомендованы в каче- • стве научно-методического руководства даш НИИ и вузов секцией 314-20 "Патология, профилактика и терапия незаразных болезней сельскохозяйственных животных" Отделения ветеринарии ВАСХНШ1 (протокол № 3 от 13.II.1980), а также одобрены павильоном "Ветеринария" (свидетельство № 183 участника ВДНХ СССР 1987 г.).

- Кармолиев Р.Х. Современные биохимические метода исследования в ветеринарии и зоотехнии. - М.: Колос, 1971. - 288 с.

Критерии нормы "цены" биохимической адаптации с участием белков крови, составляемой из содержания, физико-химических свойств и их активности в реакциях модификации, представлены в:

- Нормативы биохимических показателей обмена веществ в организме крупного рогатого скота/А.Г.Малахов, Р.Х.Кармолиев,А.Г.Савойский и др.: Под ред. А.Г.Малахова. Ответств. за вып. Р.Х.Кармолиев: Методич.указ. М.: MBA, 1986. - 28 с. Методические указания рекомендованы как справочный материал для ветеринарных специалистов НИИ, НИВС и преподавателей вузов секцией "Биология, иммунология и биотехнология в ветеринарии" Отделения ветеринарии ВАСХНИЛ (протокол № 2 от 14.05.1986).

1.5. Апробация работы. Материалы диссертации доложены на: Бсес.конф. по биохимии с.-х.животных. - М., 1961. Второй Всес. конф.биохимиков с.-х.вузов. - Ереван, 1966. Всес.научно-практич.

конф. терапевтов и диагностов, посвященной ЮО-лстии проф. Н.П.Рух-лядева. - Казань, 1969. Всес.науч.конф., посвященной 100-летию Казанского ордена Ленина вет.института. - Казань, 1973. Секции Всес. биохимкч.общества при АН СССР "Биохимия с.-х.животных". - М., 11.04.1974; 22.01.1981; 26.05.1988. 1У Всес.биохимич.съезде. - Л., 1979. Кон$., посвященной памяти проф. С.И.Афонского. - М., 1981. Сеиц1к 314-20 "Патология, профилактика и терапия незаразных болезней с.-х.животных" Отделения ветеринарии кАСХНИЛ (протокол № 3 от 13.II.1980). У Всес.биохимич.съезде. - Киев, 1985. Секции "Биология, иммунология и биотехнология в ветеринарии" Отделения ветеринарии ВАСХНИЛ (протокол № 2 от 14.05.1986).

1.6. Публикации. По материалам диссертации опубликованы:

- Кармолиев Р.Х. Современные биохимические методы исследования в ветеринарии и зоотехник. - М.: Колос, I97J.. - 288 с.

- 55 научных статей, в том числе 46 опубликованы самостоятельно.

1.7. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 424 машинописных страницах и состоит из сокращений, введения, обзора литературы, собственных исследований, результатов исследований, обсуждения результатов, выводов и практических предложоний, литературы и приложения; иллюстрирована 85 таблицами и 108 рисунками. Список литературы включает 737 источников, в том числе-382 иностранных. В приложении имеется удостоверенный перечень документов, подтверждающих внедрение научных результатов, выводов и рекомендаций диссертации, а также 3 рисунка и 22 таблицы.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Характеристика групп опытных животных. Экспериментальные исследования проведены с 1959 по 1987 гг. в лабораторных и производственных условиях на кафедре органической и биологической химии МВА, подмосковных совхозов "Клеменовский", "Фаустово" и "Рахманов-ский"; колхозов "Борец" и "Горького"; учхозов "Александрово", "Лесновское", а также на Московском мясокомбинате и клинике кафедры оперативной хирургии МВА.

Дня решения поставленных задач - установления показателей и степени участия белков крови в биохимической адаптации в зав:юило-сти от морфо-фуккционального состояния таких валнеишх систем организма, как генная, нейроэнцокринная и иммунная, - были обследованы животные в процессе роста и развития в пре- и ранний пост-натальный периоды онтогенеза, стельности и лактации крупного рогатого скота.

При интенсивном функционировании одной из вышеназванных систем роль и участие белков крови и лил^к в механизме биохимической адаптации к условиям жизн»; изучена на следующих группах животных (аналоги по породности, количеству лактаций, периоду стельности и лактации, условиям содержания и кормления, типу нервной деятельности (подвижному) преимущественно холмогорской порода при: I) активных процессах репрессии и дерепрессии ген, протекающих в динамике роста и развития, - на 175 плодах 1-й и 11-й половины внутриутробного развития и 9 группах (95) телят О-Ю-мес возраста с учетом характера питания; 2) развитии колострального иммунитета у (38) телят и патологии иммунной системы и печени - на 30 контрольных, 30 лим-фолейкозных и 8 гепатозных коровах; 3) воздействии болевым и химическими (хлоралгидрат, пилокарпин, атропин, тиамин и его фосфо-рилированные эфиры) стрессорами на нейроэндокринную систему телят (23), а также в динамике смоны физиологических состояний - стельности (68) на лактацию (86) и морфо-функционального изменения яичников (23) (нарушения обратной связи в гипоталамо-гипофизарно-яич-никовой системе). Сравнительная характеристика белков крови и лимфы изучена путем сопоставления со свойствами гомологичных белков коров-матерей и контрольных животных. Всего обследовано 639 животных и 1806 проб крови и лимфы. Все отобранные животные систематически подвергались клинико-физиологическим и зоотехническим, обследованиям. Опыты, сопряженные со сбором лимфы из грудного протока телят и коров, проведены Б.З.Иткиным, а с введением в организм телят тиамина и его фосфорилированных эфиров - А.Ф.Руш.

2.2. Материалы и методы исследований,-Материалами исследований служили кровь, лимфа и моча крупного рогатого скота. Кровь у телчт и коров бралась из яремной ьены, а у плодов - из пупочной. Лимфа у телят и коров собиралась из грудного протока после катетеризации (Б.З.Иткин). Кровь и лимфа брались у животных утром до кормления, а также в другое время в зависимости от цели эксперимента.

Для установления сравнительной физико-химической характеристики из крови коров и их плодов препаративными биохимическими методами с применением ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-сефадексе А-50, гель-фильтрации на сефадексе g-200 и электрофореза в поли-акрилаыидном геле (ПААГ) выделены и очищены: транспортные белки -альбумины по Kendell (1941), кристаллические гемоглобины (П.Д. Дворникова и др., 1966), трансферрины (lelhrnnn, Aisen, 1967); защитные белки - иммуноглобулины lgOr и igß2 (Butler, 1969) и

фибриногены (BlombSck е.а., 1958); иммуносупрессорный белок -о6|-кислый гликспротеид (Bourrillon е.а., 1961). Раатичия в первичной структуре вышеназванных гомологичных белков крови коров и их плодов выявляли изучением их аминокислотного состава на автоматических анализаторах фирм "Бекглан" и "Хитачи" модель kla-ЗВ , а также полярографией и электрофорезом на бумаге пептидов в процессе цротеолиза этих белков (Р.Х.Кармолиев, 1973,1977,1986). Аналитические варианты электрофореза в ПААГ (Г.Маурер, 1971) и крахмальном геле (КГ) (smities, 1955) применены при установлении микрогетерогенности белков крови.

Критериями чистоты выделенных препаратов белков крови послужили такие установленные физико-химические константы, как э£0 w -константа седаментации по результатам аналитического ультрацентри-фугироваяия (В.О.Шпикитер, 1964); электрофоретическая подвинность (и ; ЭФП), определенная методом фронтального электрофореза; моляр-' ный коэффициент погашения (£л ) и максимум абсорбции (Лкакс), измеренные спэкгрофотометрией; форма полярографической волны и электрохимическая активность (Ра) (Р.Х.Кармолиев, 1971,1980); н-кон-цевые аминокислоты, выявленные методом распределительной двумерной хроматографии даношшгоридпроизводных аминокислот на пластинах с твердым покрытием из гипса.и сшшкагеля (Р.Х.Кармолиев и др.,1972).

Об интенсивности протекания физиологических реакций модификации белков в биохимической адаптации при проявлении генетически обусловленного, нейроэндокринного или иммунобиологического факторов судили по содержанию гексоз ( d-глюкоза, d-манноза и d-галактоза) (Р.Х.Кармолиев, 1971,1980) и сиаловых кислот (А.А.Покровский, 1969) гетеросахаридного фрагмента надмолекулярных комплексов белков крови, а также путем определения лихшдного состава их лиганд-ной части методом тонкослойной хроматографии на силикагеле или си-луфоле,. цветными реакциями с сульфофосфованилиновым реактивом, Ли-бермана-Бурхарда и др. (А.В.Архипов, А.А.Антонов, 1979; Р.Х.Кармолиев, 1980). Определенна числа эритроцитов и количества-гемоглобина в крови проводили на фотоэлектрическом эритрогемометре (модель 040, Ленинград).

Результаты биохимических исследований обработаны методом вариационной статистики, основанным на t-распределении Стьюдента. (Р.Х.Кармолиев, 1971).

2.3. Модифицированные и предложенные автором методы исследований. Для качественных и количественных анализов была проведена детальная идентификация и дифференциация белков крови крупного

рогатого скота определением и расчетом абсолютной электрофорети-ческой'подашюстп свободным электрофорезом с оптической регистрацией образовавшихся границ, способами двумерного электрофореза, иараллельього элоктрофореза белков крови с белками-"свидетелями" к последовательным проведением гель-фильтрации по молекулярной массе на колонке с сефадексом й-200 и электрофореза на пластине ПААГ.

Усовершенствованы и модифицированы методы количественного определения серомукокдов крови и лимфы, электрофореза на пластине ПЛАТ белков, липопротеидов и гликопротеидов.

Лля исследований надмолекулярной структуры, физико-химических и биологических свойств иммуносудрессорных и стимулирующих синтезы белков крови предложены и модифицированы методы выделения и очистки серомукоидов и фетуина.

И основу физико-химических способов исследования структуры и электрохимических свойств макромолекул белков крови крупного рогатого скота внесла полярографический анализ. Так были разработаны способы анализов пептидов в процессе протеолиза белков крови пепсином л трипсином, определения электрохимической активности нативных белков крови, выделенных препаративным электрофорезом (электрофореполярографяя), а также полярографического ис-. следования кинетики физической и химической денатурации белков (Р.X.Кармолиев, 1968,1971,1973,1974,1976,1977,1980,1986; Р.Х.Кармолиев и др., 1975).

3. РЕЗУЛЬТАТУ МССЛВДОВАНИЙ

Методические разработки собственных исследований: составленная "цена" биохимической адаптации с участием белков из установленных состава и содержания, первичной структуры (аминокислотного и пептидного состава), активности в реакциях модификации по надмолекулярной структуре (по углеводному и лшидному составу ли-гандного фрагмента) и физико-химических свойств (молярного коэффициента погашения, ЭШ, Ра, межмслекулярного взаимодействия,кинетики физической и химической денатурации) белков, рН и щелочного резерва крови крупного рогатого скота; организация исследований на опытных группах животных при-активных процессах репрессии и дерепрессии ген,протекающих в динамике роста и развития,функциональном становлении колострального иммунитета телят и патологии ишунной системы и печени, воздействии болевым и химическими стрессорами на нейроэнцокринную систему телят, .динамике смены

физиологических состояний (стельности на лактацию) и морфо-функ-цпональном изменении яичников; а также анализ работ А.Н.Голикова (1985), Ф.З.Меерсон (1986) и Н.Ф.Стародуб и В.И.Назаренко (1987) позволили сформулировать определение и построить схемы основных механизмов биохимической адаптации с участием нуклеиновых кислот и белков крови.

Биохимическая адаптация с участием нуклеиновых кислот и бел-коз крови - система биохимических реакций, лежащих в основе процессов приспособления организма или его отдельных органов к определенным в ходе жизни условиям. Она протекает по трем взаимосвязанным основным механизмам: I) генетически обусловленному, 2) нейроэндокринному и 3) иммунобиологическому.

3.1. Белки крови - показатели генетически обусловленного фактора биохимической адаптации в процессе роста и развития организма 1фупного рогатого скота

Со сменой антенатального на постнатальный период онтогенеза крупного рогатого скота изменяются активная реакция (рН 6,501+ +0,014 до 7,239+0,024) и резервная щелочность (26,8+0,98 до 49,6+ +0,82 об$ С02) крови - среда функционирования эритроцитов и белков. При этом сохраняется содержание гемоглобинов - нър(фетального) и ньл (взрослого) в эритроцитах крови (19,27 пг НЪР /эритроцит плода и 19,85 пг нъа /эритроцит коровы). Однако нъа и ньр эритроцитов щюеи коров и их плодов имеют разное сродство к 02, а также различаются тетрамерной структурой макромолекул: оС2р>2 ' и (¿2^2 (1ГЫ? ) • Полипептидные р- и У^цепи ньа и нър крови различаются аминокислотным и пептидным составом, т.е. первичной структурой: в Т-цепи повышены уровни ь-аспарагиновой кислоты и ь-цистина/2, а уровни ароматических аминокислот ( ь-тирозина и ь-фенилалагаша) и ь-лизина понижены. Полипептидные цепи дС, р и^ , составляющие тетрамеры этих типов нъ , детерминируютсяо6А, и генетическими локусами. Следовательно, перед рождением теленка отключается лишь генетический локус У*1 и включается ген р^ , что приводит к постепенной замене тетрамеров Ы. 2 на 2р2г

Не только нъ эритроцитов, а и фибриногены (РвГ, РзА ), альбумины (а1ър, а1ъа ) и трансферрины (тет, тел ) плазш крови плодов, новорожденных телят (р ) и коров-матерей (А) различаются генетическими локусами. Полипептидные цепи об , ^ и составляющие гексамеры (сС^Р'и ?еА (^/'"г^2^ Детерминируются (с6-/з'-V"')5' и генетическими локусами. Мономерыа1ьр

та 1

и а1ьа, т£р и тзса детерминируются ръ и р1; генетическими локуса-ми этих белков (14;). Это подтверждается следующими данными.

Генетически обусловленные фетальные формы альбумина ( А1Ъ$, фибриногена (Pgf), НЪР и трансферринов (т*р) характеризуются иной структурой,физико-химическими свойствами и активностью в реакциях модификации, а следовательно, и функциональной активностью, чем гомологичные по функции белки (а1ъа, р§а, ньа, т£а) крови коров-матерей.

Гомологичные по функции белки крови коров и их плодов как надмолекулярные комплексы различаются между собой первичной структурой полипептидной части и составом лигандного фрагмента. Полипептидные части белков крови шгоцов отличаются низким содержанием ароматических аминокислот (ь -тирозина и ь-фенилаланина), повышенным уровнем Ь-аспартата и ь-глутамата, равным или большим количеством Ъ-цисти-наф-цистеина, чем белки крови коров-матерей. Примером могут слу-

молей/ыоль

70

60

50

40 .

30

го

ю

а1ър

А1Ь.

#

1

'и '/а

%

Асп Глу 2Цис Тир Фен

Рис.I.Аминокислотный состав сывороточного альбумина коров

( а1ъа) и их плодов ( а1ы? )

жить сывороточные а1ъа и а1ър (рис.1). Гомологичные по функции ньа и нър, реа, , а1ъа, агьр, НА, НУ крови коров и их плодов различаются между собой по пептидам, образующимся во времени в процессе протеолиза пепсином и трипсином. Фетальные белки плазш крови,например р^ иа1ър{ отличаются от гомологичных белков (реа и а1ъа) взрослых животных меньшей молекулярной массой. Низкому уровню ароматических аминокислот в макромолекулах фе-туина (р),нър, ре*, а1ър соответствует малая величина молярного коэффициента погашения растворов этих белков. Сравнительно высокому уровню ь-аспар-тата и ь-глутамата в полипептидном фрагменте соответствует большая величина электро-форетической . подвижности частицу, нър, и а1ър

(рис. 2). Гомологичные НО функции ШзА ИНЪР, РвА, А1ЪА, А1ЪР, Т£А, тгр крови коров и их плодов различаются между собой по-способности и форме вовлечения в концентрационные эффекты в растворах,кинетикой химической и физической денатурации.

-5 -4 -3 -2

Электрофоретическая подвижность

Рис. 2. Электрофоретическая подвижность альбуминов ( ахъаи

А1ЬР), ОС-, - 3 ^-глобулинов снэоротке 1'фови коров (А) и 1« плодов ( р)

Дифференциальное проявление активности генов наблвдается не только в антенатальный, но и ранний постаатольный период онтогенеза крупного рогатого скота. Физико-химическими методами исследования установлено, что в 1-й половине антенатального периода онтогенеза в крови плодов, основными белками являются постальбумины ( рА1Ь), включающие эмбриоспецнфическло болки: Р , об- и бр-фетопротеиш. Так яе как и в случае с плодами, в крови новорожденных телят не вшвлепы фракции белков, содергзпцнз иммуноглобулины:

, (включающие гаптоглобилы) и ^ 2""ГЛ0<5УЛИШ-явление в крови телят иммуноглобулинов после выпойки молозива матери сопровождается в первый мес постнатального периода онтогенеза исчезновением из нее эмбриоспешфических белков. С повышением интенсивности роста и развития во П-й половине антенатального периода онтогенеза в организме плодов возрастает роль транспортных белков крови (А1ЪР итгр ). Белки сыворотки крови плодов, ново-

рожденных и колостралышх телят имеют почти одинаковую электрохимическую активность. Полярографическая активность об- и ¿¡-глобулинов сыворотки крови плодов и новорожденных телят выше, чем у коров-матерей. Белки сыворотки крови телят молочного периода питания достоверно отличаются по электрофоретической мпкрогетерогенностк и полярографической активности от гомологичных белков животных колостраль-ного периода жизни. Появление или исчезновение, а также изменение содержания и свойств тех или иных белков крови свидетельствует о репрессии генов гмбриоспецифических белков крови ( Р, и ЭР-фетопротеинов), а также фетальных форм А1ЪР, нър, тгр в первый мес постнатального периода онтогенеза телят; экспрессии генов транспортных ^А1ЬА, КЪА, церулоплазминов (Ср), гаптоглоби-

нов (нрА), липопротеидов], защитных [.^йА , иммуноглобулинов ( и иммуносупрессорных (^2~шкРоглос5Улина ~ •"¿2м) •

Установлена взаимосвязь между первичной структурой и активностью белков 1фови в реакции гликозгаирования. Так, фетальные белки крови, например р&с, а1ър и ньр , активнее гликозилируются, чем гомологичные белки (РйА, А1ЪА, НЬА ) крови коров-матерей. Сывороточные белки плодов в два с лишним раза более обогащены гексоза-ми (33,4+1,7), чем у коров-матерей (13,4+0,3 мг/г белка). Анализ электрофореграмм, полученных окраской гликопротевдов реактивом Шиффа, позволил установить, что относительное содержание этих надмолекулярных комплексов сыворотки крови телят молочного периода питания и коров наибольшая в зоне рА1Ь, А1Ъ и ( ^-глобулинов). Для молочного и молочно-растительного периодов питания телят характерно понижение обогащенности зоны А1Ъ и защитных белков ( Ух-,

и ^-глобулинов) гликопротеидами, т.е. после перехода с моногастричного питания и с понижением уровня с-глюкози в крови телят уменьшается интенсивность неферментативного гликозшшрования названных белков. Эта реакция заключается в присоединении л-глюкозы к £-аминогруппе, например А1Ъ-?й2 с образованием альдимина; последний, отщепляя Н20, превращается в соответствующее основание (2) Шиффа ( випп, 1981,1984). в лгъ-ш^ + но-сн2-[;сн-онЗ_^ но-сн2-(сн-он]4-с^1Ш"А1Ь_^

но-сн2-0зн-он]4-сн - н-а1ъ (2).

Полагаем, что эта реакция имеет значение в регуляции осмотического давления крови животных.

Наблюдается прямая корреляция между гликозилированноотью

белков крови и их электрохимической активностью. На фоне общего снижения уровня электрохимической активности гомологичных белков сыворотки крови в первый год постнатальной жизни телят методом электрофореполярографии наблюдается закономерность - аглобулизация (понижение значения Ьи: Ь2) кокформации надколекулярных частиц альбумина, об-, р- и ^-глобулинов.

3.2. Физико-химическая характеристика белков плазмы крови при функциональном становлении и патологии иммунной системы и печени телят и коров

В иммунобиологический фактор биохимической адаптации вовлекаются иммунная система, вырабатываемая иммуноглобулины крови, и печень организма, животных. Печень крупного рогатого скота с антенатального периода онтогенеза синтезирует иммуносупрессорные белки плазмы крови: вначале эмбриоспецифические (р , ,?б-фетопротеины), а затем серомуковды - Эт (^-¡--кислый гликопротеид) и об^- Шого-числешшэ факторы, вызывающие ослабление функции иммунной системы (рис. 3), как правило, воздействуют на процессы, связанные с делением иммуно-компетентных клеток (В.С.Шалот и др., 1986; Р.Х.Карло-лиев, 1988).

Стволовые клетки г

костного мозга | В-супрессоры-> Тимус ^^ > Т-лимфоциты

Т-активин

-^ В-лимЕюциты (Вд)

Лимфоузлы и С Плазматические

селезенка 1 Антиген + Тл + Вл Т-супрессорк ^ клетки >1£Е

иммунопептиды

Печень-> Эмбриоспецифические ; 062м» Эт ^т-кислый

белки (р , ©¿-фето- гликопротеид) протеины)

Тл + ®л гУ.т-кислый гликопвотеилГ5 клетки

_____ Плазматические

пбт—кислый гликопротеид;

и «¿-фетопротеины ин-гибируют трансформацию

®л + --^ Надмолекулярный комплекс (Вл • оС 2м)

Рис. 3. Схема участия в иммунном ответе белков крови, синтезируемых в печени

Между организмами стельных коров и их плодов складываются определенные иммунологическк адаптационные отношения (В.П.Радчен-ков л др.. 1986). Установлена обратная корреляцлонная зависимость ь-е;кду содержанием эмбриоспецифических иммуносупрессорных белков и 12 в сыворотке крови телят в антенатальный к ранний постнатальный периоды онтогенеза. В 1-й половике антенатального периода онтогенеза в крови плодов коров основными белками являются рА1Ь , включающие эмбриоспецифкческие белки ( Р, оС~ 11 ^-фетопротеины). С повышением интенсивности роста и развития во И-й половине антенатального периода содержание сывороточных рА1Ъ , включающих иммуно-сулрессоры, уменьшается. Однако и в этот период онтогенеза содержание эмбриоспецифйческого иммуносупрессора Р еще значительно и составляет 23-32 % от общего количества белков сыворотки крови.

в крови Хе после выпойки телятам молозива матери сопровождается в первый мес постнатального онтогенеза исчезновением из нее эмбрио-специфических белков (Р и ^-фетопротеинов). Эндогенный биосинтез антител, или , в частности , 1дС2 и начинается в В-лнмфоцктах и плазматических клетках лимфоидной"ткани (лимфоузлы, селезенка и др.) организма телят через 8-16 сут после рождения, а 1бА- через 64 сут (НиаЪапа. е.а., 1972). В постнатальном периоде онтогенеза повышается уровень защитных белков сыворотки крови ( и ^-глобулинов) и синтезируемого в печени еЬ^У

В период скармливания молозива в- крови телят повышается содержанке 0621,1 • Переход на выпаивание молока сопровождается понижением в крови уровня рА1Ь и ^-глобулинов, повышением содержания глобулинов (). В это время прослеживается обратная зависимость между содержанием иммуносупрессоров Эт и в крови. С переходом на молочно-растительный рацион и далее только на растительный в крови телят повышаются уровни у^-глобулинов и и одновремен-

но понижается содержание ра1ъ и ^-глобулинов ().

Об изменении резистентности организма к концу стельности и с увеличением удоев свидетельствует повышение уровня защитных белков ('1е ) и имлуносупрессоров ап в сыворотке крови нетелей, а также повышение уровня защитных белков ( ^-глобулинов), Р43-15 и понижение уров1и ат в сыворотке крови лактирующих коров.

У коров, больных гепатозом (зернистая дистрофия в сочетании , с пери- и центролобулярной мелкокапельной жировой дистрофией) с

определенным уровнем воспалительной реакции, отмечено повышение (на 25 %) содержания в крови белков острой фазы.воспаления Эт. В сыворотке их крови пониженный уровень Й2~глобУлинов ( "СаМ) сочетается с повышенным содержанием рА1Ь и Эт .

При инфекционной болезни иммунной системы - лимфолейкозе крзгп-ного рогатого скота морфо-функционалышм изменениям подвергаются селезенка, лимфатические узлы и печень. Пс сравнению с контрольными животными.при заболевании иммунной системы повышается не только уровень Й2-глобулинов, содержащих , но и иммуносупрессорных белков ( Бт). При этом в кроветворных с морфо-функцпональными нарушениями органах больных лимфолейкозом коров образуются иммуно-супрессорные ( ^-кислый гликопротевд), а1ъ и защитные ( ^-глобулины, ) белки крови с модифицированными макромолекулами * характеризующимися измененными электрохимическими свойствами (рис.4), структурой и активностью в реакциях гликозилирования и взаимодействия с липидами. По-видимому, в лимфоидной ткани коров, больных лимфолейкозом, синтезируются с иной первичной структурой; кроме того, наблодается перегрузка надмолекулярных комплексов ¿¿-ц-кислого гликопротеида. сыворотки крови этих животных.гексозами, фосфолипидами и свободным холестеролом.

Рис. 4. Электрохимическая активность ахьа п У^-глобулинов ( (Я) сыворотки крови коров контрольной группы (К) и больных лейкозом с сублейнемическим (СЛ) и лей-кемическим течением (1)

3.3. Зависимость физико-химических свойств белков сыворотки крови и лимфы от характера нейроэндокринного фактора биохимической адаптации организма телят и коров

Значимость нейроэндокринного фактора при протекании биохимической адаптации с участием белков крови проявляется с антенатального периода онтогенеза животных. При гипертиреоидизме и инъекции инсулина ингибируется экскреция и уменьшается внутриклеточный синтез (¿-фетопротеина (Haval е.а,, 1986; Tsukada е.а., 1985). Перестройка нейроэндокринного фактора в период молочно-раститольното питания телят с симпато-адренэргического механизма на гипоталамо-гипофизарно-соматомединовый и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковый механизмы (И.А.Аршавский и др., 1977; С.И.Афон-ский, 1957;.П.А.Волосков, 1957) сопровождается активированием экскреции и увеличением синтеза транспортных ( нъ, Alb, Tf, Ср, Нр и липопрэтеиды), защитных ( Xg - у^-, /j- и ^-глобулины) и им-муносупрессорных (оС^ белк0Б крови. В этот период онтогенеза в связи с переходом с моногастричного типа питания наблюдается уменьшение вариабилъной части гексоз, связанных с белками крови в результате нефермектативного гликозилирования. Уменьшение гексоз в надмолекулярных комплексах белков крови (понижение обогащен-ности зоны А1Ъ, Vj- и ^-глобулинов углеводами) сопровождается снижением электрохимической активности (Ра) и аглобулизацией их частиц.

О роли нейроэндокринного фактора в биохимической адаптации с участием белков крови свидетельствуют результаты опытов с воздействием на организм телят болевым и химическими стрессорами (хлоралгидрат, пилокарпин, атропин, тиамин и его фосфорилирован-ные эфиры). При смене состояний возбуждения и торможения центральной (ЦНС) и вегетативной нервной системы (ЕНС) телят наблюдаются противоположные изменения в содержании и электрофоретической подвижности альбуминов и иммуноглобулинов ( ^-глобулины) крови.

При возбуждении ЦНС телят, клиническими критериями которого являются включенные в действие мозгом соматомоторные (изменения тонуса; движения, обеспечивающие уклонение и защиту от болевого стрессора) и висцеромоторные рефлексы (активизация вегетативных центров с изменением тонуса гладкой мускулатуры стенок сосудов, сокращения сердца ускоряются), происходит уменьшение количества цъ и увеличение содержания иммуноглобулинов крови. Наркотическое торможение ЦНС телят, вызванное внутривенным введением хлоралгидрата (не вызывает возбуждение, а стадия угнетения ЦКС устанав-

Г6

ливается клинически: дыхание животных становится реже и глубже; ослабление рефлекторной деятельности, понижение болевой чувствительности, расслабление мускулатуры и сон - до 60 мин) сопровождается повышением концентрации Alb и понижением уровня lg .

функциональное состояние нейроэндокринной системы телят оказывает влияние на активность белков сыворотки крови в реакциях модификации, а поэтому сказывается на их электрокинетических свойствах. Это подтверждается тем, что при возбуждении ЦНС в крови телят появляются Alb с повышенной ЭШ, а торможение характеризуется сывороточными Alb с пониженной Э®.

Возбуждение парасимпатической нервной системы (ПНС) телят, вызванное подкожным введением пилокарпина, проявляется клинически активизацией руминации и секреции бронхиальных желез. Внутримышечным введением атропина вызывали торможение ШС телят. Возбуждение ПНС телят приводит к повышению уровня как Alb , так и lg крови, а торможение - к понижению уровня этих белков. Смена возбуждения и торможения ПНС телят сопровождается, соответственно, повышением и понижением ЭЯ1 почти всех белков сыворотки крови, кроме ^-глобулинов.

2ункциональное состояние нейроэндокринной системы сказывается на содержании и физико-химических свойствах белков сыворотки лимфы телят: при торможении ЦНС и возбуждении ПНС происходит понижение уровня Alb и повышение - ig .

При воздействии тиамином £ингибирующш активность ацетилхо-линэстеразы и связывающимся белком синаптосом мозга (С.А.Петров и др., 1987)] и его фосформированными эфирами на функциональное состояние ВНС (симпатической) телят происходит повышение уровня Tf , иммуносупрессоров Sm природы и pAlb , а также понижение содержания lg ( )^2-г'Л0бУЛ11Н0В) крови.

3.3.1. При смене физиологического состояния -стельности на лактацию

С изменением функциональной активности нейроэндокринной системы при смене физиологических состояний (стельности на лактацию) наблюдаются изменения содержания, структуры и функции защитных, иммуносупрессорннх и транспортных белков крови.

При относительно стабильном содержании общего количества белков (74,7±.0,9 г/л - в середине и 75,Qt.0,7 г/л - в конце стельности) в сыворотке крови нетелей, нейроэндокринный фактор которых характеризуется повышенной концентрацией в крови АКТГ и nporecte-

рона (В.П.Радченков и др., 1985), наблюдалась общая тенденция к понижению уровня Alb к концу стельности (Мд = -15,2+1,4 с Р = 0,001 на 6-ми, Мд. = -6,9±2,3 г/л с Р = 0,015 на 8-м мес стельности), достоверное повышение уровня (Мд = +3,7+1,3 с Р = 0,024) и ^"-глобулинов (Мд = +4,3+1,8 с Р = 0,034) на 6-м, а ^-глобулинов (Мд = +1,9+0,6 г/л с Р = 0,015) - на 9-м мес стельности. В сыворотке крови сухостойных коров уровень общего белка выше (82,2+0,3 г/л), чем у нетелей того же периода стельности (76,2+0,1 г/л с Р = 0,0001) за счет Alb и c¿2M. 0 возрастании защитных функций организма к конпу стельности свидетельствует повышение уровня lg (V-глобулинов) в сыворотке крови нетелей. В этот же период в организме нетелей возрастает роль иммуносупрес-соров - Sm с ЭФП ¿¿.-глобулинов крови.

В период стельности, нетелей изменяется и активность белков в реакциях гликозилирования и взаимодействия с липидами. Поэтому к концу стельности нетелей повышается уровень гликопротеидов сыворотки крови с гетеросахаридом, обогащенным гексозами ( D-галактоза, D-манноза и D-глюкоза). Например, на 7-м мес стельности приходится Мд = +3,27+0,79 мг гексоз/г белка с Р = 0,002. В конце стельности в сыворотке крови нетелей и сухостойных коров содержится почти одинаковое количество гексоз гетеросахарида гликопротеидов (3,90f0,01 ммоль/л). Анализ элекгрофореграмм, полученных окраской гликопротеидов на ПААГ реактивом Шиффа, также показывает, что относительное содержание этих надмолекулярных комплексов в сыворотке крови негелей и сухостойных коров почта одинаковое и наи-' большее в зоне РА1Ъ (38,11+0,01 % у нетелей), Alb (I7,I6±.0,0I %), •st (9,05±.0,0I %) и -¡¡^-глобулинов (9,66+0,03 %). Активность же белков сыворотки крови негелей при взаимодействии с липидами падает к концу стельности, и она в 1,8 раза меньше по общим липидам, чем у сухостойных коров (5,455+0,372 г/л). Нетели и сухостойные коровы из групп средней и высокой продуктивности к концу стельности имеют самый низкий и почти одинаковый уровень липопротеидных комплексов в сыворотке крови за счет ^-липопротеидов (Lp ). Сухостойный период стельности отличается от физиологического состояния лактации пониженным уровнем в сыворотке крови и повышенным содержанием pre-jß-Lp. Что свидетельствует о понижении интенсивности реакции трансформации триглицерид-богатых Lp (I) в этот период у животных.

Активность в реакциях гликозилирования и взаимодействия с

липицами сказывается на структуре надмолекулярных частиц белков сыворотки крови и их электрохимической активности. На фоне понижения абсолютного содержания сывороточного Alb и повышения его активности в реакции гликозилирования происходит увеличение Ра Alb на 6-м (Мд ( bj.) = +7,0+1,58 (мкА:мм2)/мг с Р = 0,002; МдС!^) =+1,34+0,37 с Р = 0,006) и 8-м (Мд ( hj ) =+7,1+2,25 (мкА:мм2)/мг с.Р = 0,013; ( hg ) = +1,09+0,44 с Р = 0,034) мес стельности нетелей. Конфорлация надмолекулярных частиц Alb и иммуноглобулинов ( чГ-глобулинов) изменяется в сторону увеличения доступности на них полярографически активных центров у8-структур и неупорядоченных участков. Смена состава лигандного фрагмента является основным механизмом изменения конформации и электрохимических свойств надмолекулярных частиц белков сыворотки крови стельных животных.

Смена физиологических состояний (стельности на лактацию) сопровождается изменением характера нейроэндокринного фактора адаптации. С переходом на лактацию у первотелок устанавливается корреляция между количеством соматотропина, пролактина, инсулина и молочной продуктивностью, а также между содержанием трийодтирони-на, инсулина и жирностью (В.П.Радченков и др., 1987). ЦНС, главным образом факторы гипоталамуса играют важную роль в регуляции этих и других гормонов (АКТГ, ФСГ, СТГ, JET, ТТГ и пролактин) ( Norman, 1986).

В период смены характера нейроэндокринного фактора адаптации у коров-первотелок наблюдается взаимосвязь его с иммунобиологическим. Об этом свидетельствует увеличение общего количества белков сыворотки крови у первотелок (74,7+1,00 г/л против 64,9+ +1,37 г/л с Р = 0,018 у них же до родов, т.е. у нетелей) за счет защитных и "^-глобулинов ( igM и igG-j. ) и иммуносу-

прессорных белков (pAib и с^) • С повышением удоев наблюдается дальнейшее возрастание роли защитных белков ( ^-глобулины) крови и понижение значения иммуносупрессоров ( Sm) в организме высокопродуктивных коров.

Для первой половины периода лактации высокопродуктивных коров характерно понижение уровней сывороточного Alb, Cp,ß -Lp а также igGj, lgG2 ( Y^- и Уд-глобулины) и иммуносупрессоров -pAib . Во второй половине периода лактации высокопродуктивных кореш по сравнению с периодом максимальной молочной продуктивности происходит также понижение уровня сывороточного Alb , повышение

ряда транспортных белков (и, Ср,£-Ьр ) иммуноглобулинов 1еМ ( /32-глобулины), ХеС1 ( ^-глобулины) и иммуносупрессоров -рА1Ъ и 2 сыворотке крови лактирующих коров айрширской по-

роды с повышенной жирностью молока понижен уровень защитных белков ( р>2~ и У>2~ГЛ0^УЛИНЫ^ > по сравнению с коровами черно-пестрой породы. В сыворотке крови коров:айрширской породы с повышением удоев увеличивается содержание сывороточного А1Ъ .

Под регулирующим влиянием нейроэндокринной системы нахо.дится активность ключевого фермента метаболизма липопротеидов плазмы крови (I): липопротешушпазы (ЛПЛ). Кортикостерон ведет к снижению активности ЛЕД в жировой ткани животных, а АКТГ оказывает непосредственное стимулирующее влияние на активность ЛПЛ (Вевкеп е.а. ,1987). О ферментативной трансформации Ьр в молочной железе свидетельствует высокая активность ЛИЛ,' выделенной из вымени (И.А.Сивогракова, 1986), молозива и молока (В.С.Баранова, А.Г.Малахов, 1986) коров.

С началом лактации в сыворотке крови первотелок повышение уровня липопротеидов в сыворотке крови обеспечивается СЬт и р-Ьр. Кроме того, у корсв-первотелок повышен уровень ряда липидов во фракции ЛШ + ЛОШ сыворотки крови: фосфолипидов, холестерола, холестерилэстеров, НЭЖ и триглицеридов. У коров средней и высокой продуктивности с наступлением лактации также повышается в сыворотке крови уровень Ьр . При этом у них понижается в сыворотке крови уровень рге-£ -Ьр . В максимуме лактации методом электрофореза в ПААГ эти Ьр не выявляются в сыворотке крови коров. Сравнительно стабильно содержание в сыворотке крови лактирующих коров Ьр зоны А1Ъ (А1Ъ-Ьр) , транспортирующих НЭЗЕК. По-видимому, в период лактацаи повышена интенсивность катаболического превращения рге-£-Ьр , чем СЬт , в р-1р (I). Подтверждением этого предположения служат липопротеадограммы, динамика роста содержания и сЬш и увеличение общего количества холестерола в сыворотке крови коров средней и высокой продуктивности.

Видимо, в период лактации коров интенсивен обмен стероидов, об этом свидетельствует рост уровня общего холестерола и - в сыворотке крови этих животных. Несмотря на сравнительно продолжительный полупериод биологической жизни в плазме крови, ¿¿-Ьр (4,6 сут) и /&х~Ър (3,3 сут) не накапливаются в крови благодаря интенсивному их'катаболизму при участии фермента ЛХАТ, т.е. участию в метаболизме эстерифицярованного холестерола и фосфолипидов.

Для коров айрширской порода с повышенной жирностью молока (4,19+0,039 %) характерным является сравнительно низкий уровень рге-^-Ьр высокий уровень |3-ьр , чем у коров черно-пестрой породы (жирность молока - 3,73±0,045 %) с той же молочной продуктивностью. По-видимому, в организме коров айрширской породы интенсивнее протекает процесс катаболического превращения pro-ß - в р-Ър (I), чем у коров черно-пестрой породы.

Исходя из того, что 44 % молочного жира имеет непосредственное диетическое происхождение (Palmquiat е.а., 1978; Reneey е.а., 1984), а также из схеш молекулярного механизма ферментативной деградации (I), можно заключить, что по росту накопления ЛНП в сыворотке крови можно судить об интенсивности метаболизма chm и ЯОНП и активности JULI и ЛХА.Т в мелочной железе ¿актирующих коров. Печень задерживает от 13 до 21 % СЬд и ЛОНП из притекающей к ней крови (А.А.Алиев, 1980; Remesy е.а., 1984). Метаболизм сывороточных Lp протекает также в кишечнике, зировой ткани, надпочечниках и яичниках (Л.И.Зубехина, 198ф (рис. 5).

Морфо-функциональные изменения к яичниках (наличие у животных персистентного желтого тела, объем яичников уменьшен, на ощупь они плотные) при алиментарном бесплодии коров сопровождается изменением обратной связи в гшоталамо-гипофизарно-якчниковой системе, характеризующимся пониженным уровнем зстрадиола и прогестерона в крови (О.Н.Шанова, 1983).

У коров при алиментарном бесплодии по сравнений с животными , находящимися в сухостойном периоде, того же возраста понижен уровень сывороточного Alb и иымуносупрессоров - Sm и Кровь коров при алиментарном бесплодии в 1,5 раза беднее (Р = 0,004) Sm (0,77+0,14 г/л), чем у нетелей (I.24+0.J3 г/л). У коров с алиментарным бесплодием методом электрофореполярографии в сыворотке крови обнаруживается модифицированный Alb с пониженной электрохимической активностью макромолекул. Своими конформациошшми превращениями надмолекулярные частицы Alb обязаны реакциям неферментативного гликозшшрованйя и взаимодействия с лшидами. Поэтому зона Alb гликспротеидограмм и липопротеидограмл сыворотки крови бесплодных коров с низким содержанием белка обогащена гексозами и липидзми ( Alb-Xp). При этом гиперлипемия у бесплодных коров (7,81+0,20 г/л общих липидов против 5,15+0,77 г/л у стольных коров (Р = 0,005) и 4,09+0,42 у нетелей с ? = 0,0001) сочетается с пониженным уровнем рге-р-Ьр (35,0+1,3 % против 45,3+2,6 % у

отельных корой) и повышенным содержанием (37,7+1,9 % против 23,7±1,8 % у стельных коров с Р = 0,0001) и А1Ъ-Ьр , а гиперхо-лестеринемия (7,88+0,52 против 4,50+0,55 ммоль/л у стельных коров с Р = 0,0003 и 3,6210,23 ммоль/л у нетелей с Р = 0,0001) - большим количеством в их крови ^-ьр (4,00+0,03 г/л против 3,80+0,05 г/л у стельных коров).

|ЛНП| + НЭЖК( А1Ь - Lp) + лвп

ВЫМЯ

Chrn I ЛПЛ+ЛХАТЧ-ТГЛ ЛОНП I апо + нЛВП + Alb'

Источники лппогенеза (С,. Н 0{) :

сн2-сн-сн2 ь 12 6

I | I + Биосинтез НЭЖК -TG молока

ОН ОН ОН !

Рис. 5. Молекулярные механизмы метаоолизма липопротеидов сыворотки крови в организме ¿актирующих коров

4. ВЫВОДЫ

1. Красные кровяные клетки фетальных телят (19,27 пг ньр / эритроцит плода) и их коров-матерей (19,85 пг нъа /эритроцит коровы) имеют почти одинаковое содержание гемоглобина. Однако кровь у них различается по рН (у плодов - 6,501+0.014; у коров -7,239+0,024) и резервной щелочности (26,8+0.98; 49,6±0,82 об$ С02). В 1-й половине антенатального периода онтогенеза в сыворотке крови плодов коров основными белками являются посташьбумины (16,3+0,47 г/л или 47,6 %), включающие стимулирующие синтезы с иммуносупрессорной функцией фетуич, об- и sp-фетопротеины, второстепенную роль играет альбумин '12,6+0,41 г/л или 36,6 %). Во 11-й половине этого периода онтогенеза уровень альбумина в сыворотке крови плодов повышается до 22,5+0,53 или 53,7 %, содержание постальбуминов уменьшается до 12,9+0,61 г/л или 31,0 %. В этот период онтогенеза содержание эмбриоспецифического иммуносу-прессора фетуина еще значительно и составляет 23-32 ^ от общего количества белков сыворотки крови плодов.

2. Генетически обусловлены не только эмбриоспецифические белки (фетуин и об-фетопротеин) и фетальный гемоглобин крови, но и фетальные альбумин, фибриноген и траисферрины. Аминокислотный состав полипеитидов этих белков,- например фетального альбумина, характеризуется сравнительно низким содержанием ароматических аминокислот ( l-тирозина 10,6 и ь-фенилаланина 16,2 против 12,5 и 18,1 молей/моль гомологичного.по функции белка коров) и высоким уровнем ь-аспартата (44,8 против 32,4) и L-глутамата (74,0 против 57,1 молей/моль белка коров).

3. Различия, характерные для полипептидов фетального фибриногена, трансферрина и альбумина по сравнению с гомологичными белками взрослых животных, подтверждаются электрохимической активностью пептидов, образующихся из них во времени в процессе пептического и триптического протеолиза. При 60-мин пептическом протеолизе из фетального фибриногена образуются пептиды с электрохимической активностью по первой hj = 1,91 и второй ступени полярографической волны h2 = 0,901 (mkA:m^)/3-I0 M; hjs hg = = 2,12, a из фибриногена крови коровы - пептиды с hj =3,35;

hg = 1,18; hj-. hg = 2,84. При 60-мин триптическом протеолиза из фетального фибриногена образуются пептиды с электрохимической активностью по hj = 3,63; hg = 1,27; ь^-: hg = 2,86, a из фибрино-

гена крови коровы - пептиды с =5,91 (мкА:мм2)/3*Ю"^ М;

= 2,87; ь^г Ъ^ = 2,06. Из фетальнсго трансферрина при 60-мин пептичаском протеолизе образуются пептиды ближе к эллипсоидной форме ( ь^-: 1*2= 2,23), а из трансферрина крови коровы - вытянутой формы пептиды с = 1,45.

4. Особенности структурц полипептидов фетуина, фетального гемоглобина, фибриногена, альбумина и трансферрина подтверждаются их физико-химическими свойствами: сравнительно низкому уровню ароматических аминокислот в фатальном фибриногене ь-тирозина (118,3 против 146,1) и ь-фенилаланина (84,8 против 89,0 молей/ моль) соответствует малая величина молярного коэффициента экс-тенкции их растворов -КГ3 = 164,012,2 против 215,2+2,4; высокому уровню ь-аспарагиповой кислоты;в макромолезеуле фетального фибриногена (441,8 протьв 351,1 молей/моль) - большая величина электрофоретической подвижности'этих белков в электрическом поле (-6,40-ТО-5 см^/В-с против -0,38-Ю-5 см^Е-с у гомологичного по функции белка крови коровы); уровню ь-цистина + ь-цис теина (30,6 против 73,3 молей/моль) - значение электрохимической активности ( ^ = 2,16+0,22 и = 0,80+0,05 < = 2,98+0,39 и

- 1,06+0,01 (мка:мм2)/з':.10"9 м). • " '

5. Эмбриоспецифические и фетальные белки активнее участвуют в реакции модификации - гликозилировании, а не взаимодействии с липидами. Поэтому, например, в надмолекулярном комплексе фетального альбумина содержится больше гексоз ( в-глюкоза + 1)-манно-за + п-галактоза - 3,38+0,18), чем в гомологичном по функции белке коров (2,67+0,11 молей/моль альбумина). Надмолекулярный комплекс фетального альбумина содержит меньше холестерола (12,8+ +1,06), чем у коров (27,2+0,87 мг/г альбумина).

6. Фетальные и гомологичные по функции белки коров различаются по форме и размерам надмолекулярных комплексов. В отличие от фетального альбумина макромолекулы гомологичного белка взрослых животных в растворе более активно вовлекают в концентрационные эффекты в одних случаях полярографические центры «¡-спиральных участков и микроглобул, а в других - полярографические центры в р-структурах и неупорядоченных участках. Подтверждением этому служит различный характер изменения формы кривой ^против концентраций 0,875-Ю-8 и 1,0-ПГ8 моля этих белков.

7. Появление в крови телят иммуноглобулинов 1еМ (2,9+0,26), 1ааг (3,1+0,39) и 1ей2 (6,2±Р,37 г/л) после выпойки молозива

матери сопровождается репрессией генов эмбриоспецифических белков (фетуина и (¡С-фетопротеина) в первый мес раннего постнатального онтогенеза. Поэтому в сыворотке крови телят молочного периода питания (1,162 г/л) содержится в 6,3 раза меньше серомукоидов, чем у телят молозивного периода (7,340 г/л). .

8. В молочный период питания, когда пищеварение у телят происходит, как у моногастричных животных, по сравнению с молозивным периодом параллельно с понижением уровня основного транспортного белка - альбумина (от 23,0+0,47 до 16,6+0,94 г/л) и иммуноглобулинов!:^ (от 6,2+0,37 до 4,7+0,13 г/л) идет повышение других транспортных белков сыворотки крови - трансферринов (от 4,9^0,10 до 10,1+0,48 г/л), церулоплазминов (1,3+0,10 до 3,1+0,35) и ¡3-липопротеидов (2,5±,0,03 до 3,9+0,29 г/л), а также иммуноглобулинов 1вИ (2,9+0,26 до 4,4+0,68 г/л~.

9. 3 5-8-мес возрасте, когда пищеварение телят происходит, как у полигастричных животных, наблюдается повышение уровня основного транспортного белка - альбумина до 36,7+0,40 г/л, уВ-липопротеидов до 5,36±.0,31 г/л и иммуноглобулинов до 4,7+ ¿0,10 и 1ба2 до 11,0+0,25 г/л, а также уменьшение количества чш/носупрессорных белков серомукоидной природы до 0,685+0,060 г/л.

10. Между модификацией белков путем реакции неферментативного гликозилирования и их электрохимической активностью в динамике роста и развития установлена прямая корреляционная зависимость. Наивысшая степень интенсивности'физиологической реакции гликозилирования характерна для белков сыворотки крови новорожденных (23,2+0,9 мг/г белков) и телят молозивного периода (20,7+0,7), она снижается в молочный (12,7+0,7), молочно-растительный (11,8+ +0,35) и растительный (6,4+0,45 мг/г белков) периоды. На фоне общего уменьшения интенсивности гликозилирования белков отмечается снкжениз электрохимической активности гомологичных по функции белков сыворотки крови в первый год постнатальной жизни телят. Методом электрофореполярографии наблюдается закономерность: агло-булизация конформации надмолекулярных комплексов альбумина, об-, р - и ^-глобулинов. Поэтому отношение ь^-: Ь2 ступеней полярографической волны, например ¿¿-глобулинов сыворотки крови, с возрастом телят уменьшается: у новорожденных оно составляет 3,4; молозивного периода питания - 3,1; молочного - 1,75, молочно-растительного - 1,63 и растительного - 1,75.

11. Белки крови, активно участвуя в реакции кеферментативно-го гликозилирования, выполняют буферирующую роль при увеличении концентрации В-глюкозы в крови, таким образом сохраняя осмотическое давление на одном и том жо уровне; это - защитная реакция организма. Об этом свидетельствует постепенное понижение количества мг гексоз/г белков сыворотки крови телят по мере развития рубца со сменой характера питания (см.вывод 10).

12. Печень, синтезируя иммуносупрессоры (эмбриоспецифичес-кие белки - фетуин и об-фетопротеин; серомукоиды - ^-кислый гликопротеид; <^2~макРогл°6Ул;1Н). играет определенную роль в иммунном ответе организма крупного рогатого скота. Установлена обратная зависимость между содержанием иммуносупрессорных белков и иммуноглобулинов в сыворотке крови, например при становлении ко-лострального иммунитета у телят (см.вывод 7).

13. Морфо-функциональные изменения селезенки, лимфатических узлов и печени при лимфолейкозе у коров сопровождаются повышением уровня IеМ в сыворотке крови (у контрольных - 1,5+0,3; больных с лейкемическим течением - 3,2+0,7 г/л; больных с сублейкеми-ческим течением - 2,3+0,4 г/л). Абсолютное и относительное содержание основных иммуносупрессоров - серомукоидов в сыворотке крови больных лимфолейкозом коров также изменяется в зависимости от стадии заболевания: при сублейкемическом течении происходит увеличение количества серомукоидов на 46 % (0,616 г/л); при лейке-мическом - на 153 % (1,089 г/л), чем у контрольных (0,391 г/л).

14. В плазме крови больных лимфолейкозом коров выявляются. модифицированные надмолекулярные комплексы альбуминов, иммуноглобулинов с пониженной электрохимической активностью

контрольных животных.= 4,60+0,85), чем у больных лимфолейкозом = 2,44±0,42 (мкА.:ьм^)/глг) и иммуносупрессора -с41-кислого гликопрогеида. Установлены два механизма изменения первичной (полярографией пептидов во времени при пептическом и триптическом протеолизе) и надмолекулярной структуры (электрофо-реполярографией и исследованием реакций модификации - гликозили-рования и взаимодействия с липидами) и физико-химических свойств транспортных, защитных и иммуносупрессорных белков крови и лимфы больных лимфолейкозом коров: I) биосинтез Гев с иной полипептидной структурой, 2) перегрузка надмолекулярных частиц кислого гликопротеида вследствие активизации реакций неферментативного гликозшшроЕания и взаимодействия с фосфолипидами и свободным холестеролом.

15. Противоположные изменения в содержании альбумина и иммуноглобулинов ( <Г-глобулины) в сыворстке крови при воздействии на функциональное состояние центральной и вегетативной нервной системы телят болевым и химическими стрессорами (хлоралгидрат, пилокарпин, атропин, тиамин и его Фосфоршшрованные эфи-ры) свидетельствуют о взаимосвязи нейроэндокринного и иммунобиологического факторов биохимической адаптации.

16. Смена характера нейроэндокринного фактора адаптации при сгельности и лактации, патологических состояниях (морфо-функцио-нальных изменениях печени и яичников) отражается на интенсивности метаболизма и спектре липопротеидов сыворотки крови коров. Концентрация общих липидое и холестерола в сыворотке крови животных отображает абсолютное содержание в н'ей липопротеидов. Она минимальна у нетелей в конце стельности (общие липиды - 3,01б£ +0,144 г/л) и сухостойных коров и максимальна у лактирующих коров (у коров-первотелок общие липиды составляют 3,923+0,14 г/л), а также при патологии печени (общие липиды - 5,74+0,46 против 4,52+0,39 г/л у контрольных животных) и яичников (общие липиды -7,81+0,20 г/л против 5,15+0,77 г/л у стельных коров). В период лактации у коров-первотелок повышается уровень д-липопротеидоз (59,03+3,13 % п.''огив 27,54+0.98 % у нетелей), общего холестерола (9,0+0,52 юль/л на 3-м мес лактации против 2,94+0,42 ммоль/л на 1-м мр;с лактации), а также понижается содержание ргечЗ-липо-протеих.ов сыворотки крови (8,06+1,29 % против 28,47^1,38 % у нетелей) .

17. Смена характера нейроэндокринного фактора адаптации в начале лактации первотелок взаимосвязана с иммунобиологическим, проявляемым повышением уровня иммуноглобулинов (6,3+0,30 г/л против 3,8+1,09 г/л у нетелей), (5,5+0,73 г/л против 3,7+0,20 г/л у нетелей) и иммуносупрессоров ¿¿д-макР0глобулина (6,8+0,40 г/л против 3,1+0,50 г/л у нетелей) и постальбуминов (9,0+0,91 г/л против 6,310,64 г/л у нетелей).

5. ПРАКТИЧЕСКИЙ ПРШОШМЯ

I. Нормативы биохимических показателей обмена веществ в организме крупного рогатого скота/А.Г.Малахов, Р.Х.Кармолиев, А.Г.Савойский и др.: Под ред. А.Г.Малахова. Ответств. за вып. Р.Х.Кармолиев: Методич.указ. М.: МВА, 1986. - 28 с. Методические указания рекомендованы как справочный материал для ветеринарных специалистов НИИ, НИВС и преподавателей вузов секцией "Биология,

иммунология и биотехнология в ветеринарии" Отделения ветеринарии ВАСШШ (протокол № 2 от 14.05.1986).

2. Применение современных биохимических методов исследования в ветеринарии. I. Физико-химические методы/Под ред. А.Г.Малахова. Ответсгв. за вып. Р.Х.Кармолиев: Методич.указ. М.: MBA, 1980. 24 с. Методические указания рекомендованы в качестве научно-методического руководства для НИИ и вузов секцией 314-20 "Патология, профилактика и терапия незаразных болезней с.-х.животных" Отцеле-'ния ветеринарии ВАСШШ (протокол № 3 от 13.II. 1980).

3. Применение современных биохимических методов исследования в ветеринарии. 2. Методы исследования обмена липицов/Под ред.

А.Г.Малахова. Ответств. за вып. Р.Х.Кармолиев» Методич.указ. М.: MBA, 1980. - 37 с. Методичэские. указания рекомендованы в качестве научно-методического руководства для' НИИ и вузов секцией 314-20 "Патология, профилактика 'и терапия незаразных болезней с.-х.животных" Отделения ветеринарии ВАСХНИЛ (протокол Л 3 от 13.1Г.1980).

4. Применение современных биохимических методов исследования в ветеринарии. 3. Методы исследования обмена белков/Под ред. А.Г.Малахова. Ответств. за вып. Р.Х.Кармолиев: Методич.указ. М.: MBA, 1980. - 38 с. Методические указания рекомендованы в качестве научно-методического руководства для НИИ и вузов секцией 31420 "Патология, профилактика и терапия незаразных болезней с.-х. животных" Отделения ветеринария: ВАСХНШГ (протокол № 3 от

13.II.1980).

5. Применение современных биохимических методов исследования в ветеринарии. 7. Методы физико-химической биологии/Под ред. А.Г.Малахова. Ответств. за вып. Р.Х.Кармолиев: Методич.указ.

М.: MBA, 1986. - 60 с. Методические указания предназначены для слушателей факультета повышения квалификации преподавателей вузов. Они также рассчитаны на научных работников институтов, ветеринарных и животноводческих опытных станций, а также аспирантов и студентов-дипломников. Свидетельство № 183 участника ВДНХ СССР 1987 г.

6. Рационализаторские предложения по способам идентификации и дифференциации белков крови крупного рогатого скота; выделения и очистки серомукоидов и фетуина; количественного анализа липо-протеидов, серомукоидов и протеинового индекса; исследования кинетики химической и физической денатурации, протеолиза пепсином

и трипсином; а также полярографического анализа электрофореграмм (электрофореполярография). Получены 12 удостоверений и акты об использовании на эти рационализаторские предложения.

7. Кармолиев Р.Х. Современные биохимические методы исследования в ветеринарии и зоотехнии. - М.: Колос, 197Т. - 288 с.

8. Схемы молекулярного механизма метаболизма липопротеидов сыворотки крови, неферментативного гликозилировагош альбумина.

6. СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ ПО ТЕГЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Кармолиев Р.Х. Электрофоретические исследования белков сыворотки крови плодов коров и овец//Материалы науч.конф., посвященной 40-летию ?Лоск.вег.академии/Секции физиологии и биохимии: Труды/Моск.вет.академия. - 1960.-Т.30.-С. 146-149.

2. Кармолиев Р.Х. Электрофоретические исследования белков крови и лимфы крупного рогатого скота//Материалы Всес.конф. по биохимии с.-х.животных. -М., 1961.-Вып.2.-С. 49-51.

3. Кармолиев Р.Х. Возрастные изменения белков и холестерол-белковых комплексных соединений сыворотки крови крупного рогатого скота//Физиология и патология обмена веществ у крупного рогатого скота: -Труды/Моск.вет.академия. - 1961.-Т.36.--С. 200-210.

4. Кармолиев Р.Х. Электрофоретические свойства сывороточных белков в связи о их обогащенностыо холестерол-белковыми комплексными соодиненияш//Биоксмплексы и их значение в обмене веществ: Сб.науч.тр.Д1оск.вет.академия. - 1966.-С. 116-121.

5. Кармолиев Р.Х. Углевод-белковые комплексные соединения сыворотки крови фетальных телят и коров//Биокомплекеы и их значение в обмене веществ: Сб.науч.тр./Моск.вет.академия. - 1966.--С. 121-124.

6. Кармолиев Р.Х. Полярографический анализ растворов сывороточного альбумина, подвергшихся ионизирующей радиации//Зоотех-ния: Труды/Моск.вет.академия. - 1967.-Т.52.-С. 179-183.

7. КармолиеЕ Р.Х. Протеиновый показатель сыворотки крови фетальных телят и коров//Сельскохоз.биология. - 1968.З.-С. 454456.

8. Кармолиев Р.Х. Электрофоретические исследования белков сыворотки крови и лимфы телят при различных функциональных состояниях нервной сисгеш//Материалы докл. Всес.научно-практич. конф. терапевтов и диагностов, посвященной 100-летию проф. Н.П.Рухлядева. - Казань, 1969.-Т.2.-С. 77-79.

9. Кармолиев Р.Х. Современные биохимические методы исследования в ветеринарии и зоотехнии. - 'Т.: Колос, Т971. - 288 с.

ТС- Кармолиев Р.Х. Сравнительная характеристика гликопротеидов сыворотки крови стелтлмх коров т: Детальных телят//2оотехния: Труды/* Тоск.вет.академия. - Т972.-Т.5Р.-С. 54-59.

ГТ. Кармолиев Р.X. Сравнительная характеристика липопротеядов сыворотки крови стелтнкх коров и Детальных телят//3оотехнкя: ТруцнА'оск.вет.акяцектя. - I972.-T.58.-f;. 60-64.

Тс. Кармолиев Р.7. п содержании белковых веществ в сыворотке крови коров и фатальных телят//Вопроси совершенствования племенной ракеты и технологии в животноводстве: Сб.науч;тр./Моск.вет.академия. - TS73.-~.f3.-C. 5С-55.

13. Кармолиев Р.Х. Белковые вещества крови, крупного рогатого скота как множественные молекулярные комплексные соединения//Бо-просы совершенствования племенной работы и технологии в животноводстве: Сб.науч.тр./Моск.вет.академия. - 1973.-Т.63.-С. 5664.

14. Кармолиев Р.У.. Сравнительные исследования некоторых физико-химических свойств белковых веществ крови коров и феталь них телят//Вопросы совершенствования племенной работы и технологии в животноводстве: Сб.науч.тр./Моск.вет.академия. - 1973.-Т.63.--С. 81-87.

15. Кармолиев Р.Х. Полярографические исследования действия протео-литическах ферментов па альбумины и фетуин крови коров и $е-тальных твляг//£опросы совершенствования племенной работы и технологии в животноводстве: Сб.науч.тр./Моск.вет.академия.-

- 1973.-Т. 64.-С. 45-54.

16. Кармолиев Р.Х. Полярографические исследования процесса физической и.химической денатурации альбуминов и фетуина крови коров й фегальных геляг/./Вопросы совершенствования племенной работы и технологии в животноводстве: Сб.науч.тр./Моск.вет.академия.-

- 1973.-Т. 64.-С. 54-61.

17. Кармолиев Р.Х. Электрофореполярография белков сыворотки крови коров и фатальных телят//Профилахтика болезней с.-х.животных в условиях специализации и концентрации животноводства: Сб. науч.тр./Моск.вет.академия. - 1973.-Т. 65.-С. 27-32.

18. Кармолиев Р.Х. Некоторые физико-химические свойства серогли-ковцов (серомукоидов) сыворотки крови крупного рогатого ско-та/./Ирофклакткка болезней с.-х.животных в условиях специали-

зации и концентрации животноводства: Кб.науч.тр.Д^оск.вет. академия. - 1973.-Т. 65.-3. ЗЭ-45.

19. Кармолиев Р.Х. Некоторые особенности структуры и Функции белковых веществ крови коров и феталъних ?е.гяг//Совреметше проблемы ветеринарной науки и практики: ;ауч.тр./Моск.вот. академия. - 1973.-Т. 69.-С. 132-141.

20. Кармолиев Р.Х. Особенности обмена белкозчх веществ кров:; стельных и яловых коров/Л1ро?«лактика г лечение заболевала ? молодняка сельскохозяйственных гп»р'"у; г.'ауч.тг.Ал^ЛГ.Р'.-

- М.: Колос, 1974.-С. 139-14^.

21. Кармолиев Р.Х. Особенности обмана < с .:сг<?их веществ крови в процессе роста, развития и стельности крупного рогатого ско-та//Материалы докл. Всес.науч.кок'!*., посвященной ТОС-летик Казанского ордена Ленина вет.института. - Казань, Т974. --Т.2.-С. 256-258.

22. Кармолиев Р.Х. Особенности структуры п функции белковых веществ крови крупного рогатого скота//Материалн докл. Всес. науч.конф., посвященной ТСО-летию Казанского ордена Ленина вет.института. - Казань, 1974.-Т.2.-С. 259-261.

23. Кармолиев Р.Х. Возрастная динамика серогликсидов и гексоз углевод-белковых биокомплексов сыворотки крови крупного рогатого скота//Вопросы ветеринарной науки и практики: Сб.науч. тр./Моск.вет.академия. - 1974.-Т. 73.-Ч.2.-С. Т73-Т78.

24. Кармолиев Р.Х. Фетуин - гликолипопротеидное полпмслехулярное биокомплексное соединение крови фетальных телят//Вопросн ветеринарной науки и практики: Сб.науч.тр./Моск.вет.академия.-

- 1974.-Т. 73.-Ч.2.-С. 179-184.

25. Кармолиев Р.Х. Возрастные изменения электрохимических сеойств белков крови крупного рогатого скота//Сельскохоз.биология. -

- 1975.-Т.10.-В 5.-С. 682-688.

26. Кармолиев Р.Х. Применение в ветеринарии диск-электрофоре-за//Ветеринария. - 1976.-№ 10.-С. 87-89.

27. Кармолиев Р.Х. Полярографические исследования концентрационных эффектов в растворах белков//Проблемы молекулярной биологии и патологии: Сб.науч.тр./{Лоск.вет.академия. - 1976. --Т. 87.-С. 34-40.

28. Кармолиев Р.Х. Полярографический метод исследования кинетики тепловой и химической денатурации белнов//Проблемы молекулярной биологии и патологии: Сб.науч.тр./1,'сск.вет.академия.-

- 1977.-Т. 93.-С. 31-36.

29. Кармолиев Р.Х. Полярографический анализ пептидов в процессе прогеолиза//Проблеш молекулярной биологии и патологии: Сб. науч.тр./Моск.вет.академия. - 1977.-Т. 93.-С. 36-39.

30. Кармолиев Р.Х. Особенности обмена белков крови телят в ранний постнатальннй период//Докл. ВАСХНИЛ. - 197&-.-Л 4.-С. 27-29.

31. Кармолиев Р.Х. Обмен белков крови при бесплодии//Ветерина-рия. - 1978.7.-С. 69-71.

32. Кармолиев Р.Х. Особенности обмена белков крови телят в процессе роста и раз вития//Докл. ВАСХНИЛ. - 1979. -№ З.-С. 30-33.

33. Кармолиев Р.Х. Липопротеиды сыворотки крови - показатели интенсивности промежуточного обмена липидов в организме крупного рогатого скота//Докл. ВАСХНИЛ'. - 1981.-й II.-С. 31-33.

34. Кармолиев Р.Х. Молекулярные механизмы метаболизма липопро-теидов сыворотки крови в организме лактирущих~коров//Докл. ВАСХНИЛ. - 1987.-й 7.-С. 26-29. -

35. Кармолиев Р.Х. Участие белков крови в процессе иммунобиологической адаптации организма//Ветеринария. - 1988.-й I. --С. 33-34.

I

Л-35131 Подписано к печати 21.02.89 г. формат 60x84/16 объем 2,0 п.л. т.'100 зэк. 171

Типография ГОСНКТИ