Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Экспериментальная химиотерапия вирусных инфекций нестероидными противовоспалительными средствами и их комбинацией с противовирусными лекарственными препаратами

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Экспериментальная химиотерапия вирусных инфекций нестероидными противовоспалительными средствами и их комбинацией с противовирусными лекарственными препаратами"

г? 1 1

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК НИИ ВИРУСОЛОГИИ им. Д.И. ИВАНОВСКОГО

На правах рукописи

Евстропов Александр Николаевич

УДК 615.281.8—0001.8

Экспериментальная химиотерапия вирусных

инфекций нестероидными противовоспалительными средствами и их комбинацией с противовирусными лекарственными препаратами

03.00.06—вирусология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва 1992

Работа выложена в ноЕосибирско:,! Ордена Трудоеого Красного Знамени ыедиццнском институте 1,13 К

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор В.Е.Яворовская доктор биологических наук, профессор Г.А.Галегов

Официальные оппоненты:

член-корр. РАЖ, акапемик РА^Н, доктор мелипччских наук, профессор Ф.И. КР1ГОВ

член-корр. РА^, локтоп меттттиских наук, профессор С. С. ВАРЕННИКОВА доктор мелтичских наук я.н. НОЖ

Ведущее учревдение: чаучно-'тстеноватедьскч« итстмтут эпидемиологии и юттеро^иопопга им. ч.б.Га™алей РА"Н

Защита диссертации состоится 7^^ИЯкеЗм? в часов на заседании специализированного Совета

Д 001.20.02 при Институте вирусологии ш.;. Д.И.Квановского РАШ (1.1осква, 123098, ул. Гамалеи, 16). Автореферат разослан 9 С\ /О /¿} ^Р С Диссертацией ыошо ознакомиться в библиотеке Института.

Учеши секретарь специализированного Совета, кандидат медицинских наук, ст.н.с. А..'.1.Жуковскин

I 1тлёл

РОССИЙСКАЯ

ГОСУДАРСТВА*

БИЫШОТБ'АА

4 оещя характеристика работы

Актуальность теш. Химиотерапия и химиопрофилактика вирусных инфекци.. - одна из ведущих проблем современной медицины, что обусловлено широким распространением заболевании вирусное этиологии и весыла ограниченным количеством эадоектганых лекарственных средств (В.И.Вотяков, Г.А.Галегов, 1983; Ф.И.Ершов, 1983; Ф.И.Ершов д соавт., 1986; 0а1аззо, 1984).

Особенности жизнедеятельности вирусов, как внутриклеточных паразитов на молекулярно-генетическом уровне, диктуют необходимость дальнейшего поиска веществ, обладающих антивирусной активностью. Основными направлениям! такого поиска являются скрининг антивирусной активности среда большого количества веществ в отношении определенного спектра вирусов, давили такие эффективные противогриппозные средства, как производные адамантана (Вау1ез съ а1., 1934), а также - создание химио-препаратов, направленно действующих на определенный этап вирусной репродукции (видарабин, ацикловир и др.).

Одним из актуальных направлении экспериментальной химиотерапии вирусных инфекций является пршленение комбинации хи-миоирепаратов, имеющих различную химическую структуру и различный механизм антивирусного действия. в этом направлении существенные результаты были получены на моделях экспериментальной гршшозной и герпетической инфекций (Г.А.Галегов и соавт., 1980; О.Т.Андреева и соавт., 1982; Ф.И.Ершов и соавт., 1984).

Вместе с тем, проблемы антивирусной химиотерапии еще далеки от разрешения. Ограничен перечень препаратов, используемых в медицинской практике, а против ряда возбудителей (Коксаки-, ЕСНО-Еирусы и др.) их вообще нет. Серьезным пре-

пятствпии является достаточно бистрос иор1.п:рование вариантов вируса, резистентных: i: де.'.ствпю селективных хкппопрспаргтог, что ставит под угрозу пх использование в буд/це;.!.

Суцсох'есшю расшряет еоз;.юшостп поиска шгекеик'ошх средств аТяриулкрованкая В• ..i.iL^aiюв;л.i (1904) концепт "пе-гргщццпопни^'путс.1 терагпп; вирусных пиГ.екцп.., основным поло-китам которой является воздействие не только па вирус, по и на клетку, пораженную вирусом. При это;.] нельзя но учитывать воздействие псследуешх вецеств на нымукпую систему, в топ числе - систему интерферона, являющуюся уншз ер сальна;.; нммупо-ыодулятором и медиатором многих ы.шунных реакцл.» в организме (Л-Г.Ьукркнская, 1984; Ф.Ги^риов, В.Л.Кданов, 1985; Ф.П.йр-шов и согшт., 1990).

Настоящая работа выполнена в рамках пройдомы ГИ1Т СССР "Здоровье населения СпОпрп" (р 14,6-3.4 к G.3.C) к является ¿par;.; опт о;.; догоЕора Новосибирского медицинского института с РОФСР J 30/243/7 (••; гос. регистрации 0189.C077IG0).

Цель работы - экспериментальное обоснование возможности применения нсстеровдшх противовоспалительных средстЕ п других продетавптсле.1 различных классов химических соединеши в хпмпотерашл; вирусных кнЛекцП".

В соответствии с поставленной, целью определены задачи исследования:

1. Провести массовые скрининг вновь спнтезпроЕанпнх химических соедцнени„ различных классов в культура:: клеток дли обнаружения противовирусной активности.

2. Изучить возможное антивирусное Действие нсстероидннх противовоспалительных средств п культуре клеток.

3. Оценить сочетанное действие нест ерокдкых противовес-

пата тельных средств и веществ, обладающих антивирусно.i активностью, в культуре клеток.

4. Исследовать ишуноподулиругацую и интерферошшдуцирую-сус активность нестеропдшх противовоспалительных средств.

5. Выяснить возмозшость лечебного и профилактического до.;ствпя псотероидных противовоспалительных средств, отобрал-ir.::: в результате скрининга, на динамику экспериментального

екцпошюго процесса, обусловленного Епрусаш гриппа Л, герпеса npocioro I типа, Коксаки ВЗ.

о. Изучить ингпбпрумцее действие нестероидных противовоспалительных средств в комбинации с известным хнмиопрепаратои,-ре.мантадшюи, на развитие и исход экспериментальной гриппозной инфекции.

7. Изучить ингпбируюцее действие нестероидных противовоспалительно:;. средств в комбинация:;: с избсси-шми химподрепарата-;.;п, - ацнклоЕироп и поли : поли ц, на развитие и исход экспериментального герпетического окцекалита.

Научная новизна. Впервые установлена способность подавлять репродукцию РЕХ-содернащи:: (Коксаки Л13 п В4, ECHO II, везикулярного стоматита) и ДЬ~-содеркащих (простого герпеса i типа) вирусов у еновь синтезированных представителей следующих классов хшлпчеекпх соедакешгл: производные шенилсерина, ^орена, пиразола, триазина, ншздазола, ашноаммониевых солен И др. '

Впервые показана способность 4-йодантшярина подавлять в культуре клеток репродукцию энтеровирусоЕ (Коксаки А и В, ECHO), рабдовирусов (везикулярного стоматита), герпесвирусов (вирус простого герпеса I типа).

Впервые установлено пшуностимулирующее действие 4-йод-

антипирина, а также - его интерферонстиглулирующь: эффект.

Впервые на экспериментальных моделях гриппозно::, герпетической и Коксаки ВЗ-вирусноп инфекции получены данные о зарином действии 4-йодантипирина и доказана высокая эффективность его применения в комбинации с известными противовирусными препаратами, - ремантадином и ацикловиром.

Практическая значимость работы. По результатам проведенных исследований'получено 18 авторских свидетельств на изобретения, где показана противовирусная активность у ряда вновь синтезированных химических соединений. Сведения о противовирусных, иммуномодулирующях и интерферониццуцирующих свойствах 4-йодантипирина включены в материалы, представленные в Фармакологический Комитет 1.13 РФ для разрешения клинических испытании 4-йодантипирина в качестве средства профилактики и лечения гриппа, миокардитов энтеровирусноп этиологии, клещевого энцефалита на клинических базах томского медицинского института и Института фармакологии Томского научного центра РАМН.

Результаты проведенных исследовании вюгочены в лекционный курс и практические занятия по вирусологии на кафедре микробиологии Новосибирского медицинского института, а тагсхе в лекционный курс по нестероидным противовоспалительным средствам на кафедре фармакологии томского медицинского института.

Основные положения, выносимые на защиту:

I. Вновь синтезированные химические соединения - представители различных классов (производные фенилсерина, флуоре-на, пиразола, триазина, имвдазола, аминоаммониеЕые соли и др.) способны подавлять в культуре клеток репродукцию вирусов Коксаки AI3 и В4, ECHO II, везикулярного стоматита, простого герпеса I типа.

2. Нестероидше противовоспалительные средства (производные пиразолона и салицилаты) при предварительной обработке шли культур клеток способны проявлять антивирусную активность с наибольшей эффективностью у 4-йодантипирина.

3. 4-йодантипирин и ацетилсалициловая кислота оказывают защитное действие при экспериментальной гриппозной инфекции, которое усиливается при комбинации этих препаратов с реманта-

__даном с достижением синергидного эффекта.

4. 4-йодантипирин способен предотвращать развитие герпетического энцефалита мышей. Комбинация 4-йодантипирина с ацик-ловиром при данной экспериментальной инфекции усиливает защитный эффект с аддитивным характером взаимодействия.

5. При Коксаки ВЗ-вярусной инфекции новорожденных мышей профилактическое введение 4-йодантипирина оказывает достоверный защитный эффект.

6. 4-йодантипирин обладает иммуностимулирующим и интерфероне тимулирующим действием, что может лежать в основе его антивирусной активности.

7. По итогам проведенных исследований 4-йодантипирин может быть рекомендован для клинических испытаний в качестве антивирусного средства.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы были представлены на:

- пленарных заседаниях Всесоюзной проблемной комиссии "Химиотерапия и химиопрофилактика вирусных инфекций; особоопас-ные и медленные вирусные инфекции" и объединенной научной -сессии Белорусского НИИ эпидемиологии и микробиологии и Белорусского научного медицинского общества ми1фобиологов, эпидемиологов и паразитологов в г. Минске в 1983 и 1985 гг.;

- конференциях молодых ученых Института микробиологии им. А. Кирхенштейна АН Латвии в 1984 и 1987 гг.;

- УП Мечниковской конференции "Современные проблемы вирусологии, микробиологии и иммунологии" в г. Одессе в 1984 г.;

- УП и IX конференциях "Факторы гуморального и клеточного иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях" в г. Челябинске в 1984 и 1988 гг.;

- итоговой научной сессии, посвященной 50-летию Новосибирского медицинского института в 1985 г.;

- пленарных заседаниях Новосибирского отделения Всероссийского общества микробиологов, эпидемиологов и паразитологов,

г. Новосибирск, 1986 и 1988 гг.;

- симпозиуме "Новые подходы к химиотерапии вирусных инфекций" в г. Риге в 1989 г.;

- всесоюзной конференции "Энтеровирусы. Общетеоретические и медицинские аспекты" в г. Киеве, 1991 г.;

- всесоюной конференции по химиотерапии инфекционных заболеваний в г. Москве, 1991 г.

По теме диссертации опубликовано 23 научные статьи.

Объем и структура работы. Диссертация написана в монографическом стиле и состоит из введения, четырех глав, заключения, выводов и приложений. Материал изложен на 294 страницах машинописного текста, включающего 55 таблиц и 23 рисунка. Библиографический указатель включает 357 наименований отечественных и зарубежных авторов.

Экспериментальные исследования по программе данной работы выполнены в вирусологической лаборатории кафедры микробиологии с вирусологией и иммунологией Новосибирского медицинского института (зав.кафедрой - профессор В.Е.Яворовская) и в ла-

боратории химиотерапии вирусных инфекций Института вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН (зав. лабораторией - профессор Г.А.Галегов). Большую помощь и поддержку при выполнении данной работы оказали заслуженный деятель науки Р05СР, профессор А.С.Саратяков и профессор Т.Л.Притцеп (Томский медицинский институт). Ряд экспериментов и обсуждение полученных результатов проводились совместно со старшим научным сотрудником Института вирусологии им. Д.И.Ивановского РАЖ, кандидатом биологических наук н.Ф.Правдиной, старшим научным сотрудником Института клинической иммунологии 00 РАМН, кандидатом медицинских наук И.А.Орловской, старшим научным сотрудником Института органической химии АН Республики Армения, кандидатом химических наук А.Х.Гюльназаряном, ассистентами кафедры микробиологии Новосибирского медицинского института, кандидатами медицинских наук Е.С.Воробьевым и Л.Н.Гриценко, за что автор выра-нает всем им искреннюю признательность и благодарность.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

I. Исследования антивирусной активности химических соединении в культурах клеток и куриных эмбрионах

1.1. Скрининг антивирусной активности среди представителей различных классов химических соединений

Поиск веществ, обладающих антивирусной активностью, был проведен среди 289 химических соединений (ХС) различных клао-сов, суммарная характеристика которых представлена в табл. I. Вещества были получены нами в соответствии с договорами о научном сотрудничестве с Институтом органической химии АН Республики Армения, Институтом биохимии АН ЛитвУ, Львовским ме-

дицинским институтом, Харьковским фармацевтическим институтом, Черниговским филиалом Киевского политехнического института, Институтом фармакологии Томского научного центра РАМН.

Антивирусную активность хс определяли в культурах клеток ФЭЧ, Нер-2, L-4I И Vero по методу De Clcrcq et al. (1980), а также в условиях одноцикловой репродукции ( Tonew et al., 1982) с использованием в качестве тест-вирусов: Коксаки AI3 (штамм Plores); Коксаки В4 (штамм Po-.v«rc); ECHO II (штамм Upaaia), везикулярного стоматита (штамм indiana ) (ВВС); простого герпеса I типа, штамм Л-2 (ЕПГ-1), а такие вируса гриппа А/Виктория 35/72 (Н3'2), репродуцирующегося в развивающихся куриных эмбрионах.

В итоге проведенного скрининга выявлено 30 представителей различных классов веществ с антивирусной активностью в отношении вышеперечисленных тест-вирусов, имеющих величину химиогерапевтического индекса (ХТИ), равную 4 и более, а также - 12 хс, способных подавлять-репродукцию в куриных эмбрионах вируса гриппа А.

В табл. 2 представлены данные, характеризующие хс, обладающие наиболее выраженной антивирусной активностью (ХТИ = 8 и более). Так, четыре соединения из класса производных флуоре-на подавляли репродукцию достаточно широкого спектра вирусов (ECHO II, Коксаки В4, ВВС, БПГ-l), причем одно из них (MI-I) было активным одновременно в отношении вирусов Коксаки В4 и ВВС.

Также 4 хс, проявлявшие достаточно высокую антивирусную активность, относились к классу аммониевых и аминоаммониевых солей. Для этой группы соединений удалось уловить взаимосвязь структуры и действия, обусловленную наличием в молекуле ал-лильных атомов брома, обладающих большой подвижностью и спо-

Таблица I

Вновь синтезированные химические соединения, исследуемые на антивирусную активность

К ! пл ! Классы | Количество хс

I. Аммониевые и аминоаммониевые соли 108

2. Производные фенилсерина 26

3. Производные флуорена 53

4. Производные аланина 3

5. Производные пирролидина 5

6. Производные пирроло (1,2-л)имидазола 14

7. Производные тиазолина 10

8. Производные изатина 3

9. Производные 3,5-диокситриазинила-6 5

10. Производные 1,2,4-гриазина 4

II. Производные пиперазиндионов 3

12. Производные хромонов 3

13. Производные гетероциклических соединений 5

14. Алкалоиды берберина 2

15. Бензнлиденгидразиды нитробензойной кислоты 3

16. Производные антипирина 33

17. Отдельные соединения различных классов 9

собносгью легко замещаться.

Высокая активность в отнопеняп ШГ-1 (ХТ11 = 64) установлена у производного пиразола И-Г7; она приближалась к таковой у использованного в качестве эталона противогерпетического

Таблица 2

Химические соединения, обладающие наиболее выраженным антивирусным действием,

выявленные в скрининге

№№ [Ш | ' Шифр j ! Производное ! класса ! 1 химическая формула ] | ! Спекгр анти-! вирусной ак-! тивности ! ХТИ

I. И-21 метоксикума-рина 3-(5-этоксикарбонил-2-фурил)-4-окси-6--пропил-7-метоксикумарин Коксаки AI3 8

2. Д-34 фенилеерина этиловый эфир эритро-«-форшл-о-9-флуо-ренилацетил-трео-д/ -фенилсерина Коксаки AI3 10

3. со фенилеерина этиловый эфир N -2-флуоренонсульфонил--трео-Я<С -фениле ерина ВПГ-1 8

4. Л1-2 флуорена N -(флуоренил-Э)-^'-(о-оксибензоил)--гидразин ECHO II 8

5. ж-i флуорена динатриевая соль (флуоренилиден-9)--гидразоно-(/У-карбамино) -¿-метил тио-гликолевой кислоты Коксаки В4 ВВС 8 е

6. МЛ1-П флуорена 2,7-Диоксифлуоренон-9 ВПГ-1 8

7. МЛ1-15 флуорена 2,7-Диацетоксифлуоренон-9 ВПГ-1 8

8. И-17 пиразола 3-(2,4-диоксифенил)-4-(2-метил-4-тиа-золил)-5-трифторметялпиразол ВПГ-1 64

9. И-20 хромонов 3-(5-этоксикарбонил-2-фурил)-6-пропил- БПГ-1 8

-7-ацетоксихромон

Таблица 2 (окончание)

№ ! Шифр ; Производное пп I шифр I класса

I I

Химическая формула

! Спектр анти-! ХТИ ! вирусной ак-! ! тивности !

10. Л-16

12. Щ-105

13. ТАТ-452

14. ТАТ-389

15. КАН-757

16. КАН-782

ароматических

карбоновых

кислот

II. ,ТАТ-316п аммониевая соль

аминоаммоние-вая соль

аминоаммоние-вая соль

аминоаммоние-вая соль

триазина

имидазола

бензотиазолил-амид-4-нитро-//-(4-этокси- ВВС 16

фенил) антраниловой кислоты

триметил (1,4-Дибром-2-метил-2-бутенил) ВВС 8

аммоний бромид

гидробромид /V, /V -диметил-Л/-фенацил-А/- ВПГ-1 8

- [4- (//-дипропллашшо) -2-бутенил] аммоний

бромид

М,л/-диметил-А/-фенацил-^- [4-(Л'-шгасриди- Коксаки В4 8 но)-2-бутенил] аммоний бромид

1-триметиламмоний-4-пиридиний-1,3-бута- Коксаки В4 8 диендибромид

3,3-ди-трет-бутил-6-метил-5-оксо- ВВС 8

-2,3,4,5-тетрагидро-1,2|4,3,/|4 -триаза-фосфоний хлорид

гидрохлорид т-(пара-хлор-бензил)-3-(па- Коксаки В4 8 ра-хлорфенил)-6,7-Дигидро-5Н-пирроло (1,2-о6) имилазола

препарата Ara-T (CalMochem, USA).

Производное антраниловой кислоты (хс л-16) активно инги-бировало репродукцию ВВС, шлея ХТИ = 16.

Таким образом, выявленные в ходе скрининга вновь синтезированные активные хс могут быть использованы для экспериментальной химиотерапии соответствующих вирусных инфекций, а так-ке служить основой для направленного синтеза эффективных противовирусных средств.

Отдельного анализа заслуживают результаты исследования группы производных антипирина.

1.2. Скрининг антивирусной активности среди производных антипирина

Основываясь на показанной ранее способности некоторых ацилпроизводных антипирина соединении, синтезированных на основе пятичленного гетероцикла пиразола и относящихся по своей фармакологической активности к группе нестероидных противовоспалительных средств, ингибировать репродукцию ряда ДНК- и РНК-содернащих вирусов (А.С.Саратиков и соавт., 1972; В.Е.Яворовская и соавт., 1974), мы провели изучение антивирусной активности 33 производных антширина (антипириламиды замещенных аминокислот жирного ряда; производные 4-нитрозо-и 4-формилантипирина; антипирил- и изопропилантшшриламиды йодсодержащих ароматических карбоновых кислот; 4-йод- и 4-бромантипирин), синтезированных Е.В.Шмидт и соавт. (Томский политехнический институт).

Антивирусную активность перечисленных выше хс в отношении вирусов Коксаки AI3, гриппа А/Виктория и аденовируса 23 типа оценивали: а) по действию хс на внеклеточные вирионы;

tí) при одновременном Енесешш хс и вируса в культуру клеток или куриные эмбрионы; в) при предварительном контакте культуры клеток или куриных эмбрионов с исследуемыми соединениями на протяжении 24 часов до заражения.

Установлено, что все 33 исследованных хс не действовали на внеклеточные вирионы и не влияли на репродукцию тест-вирусов при одновременном внесении в клеточные культуры и куриные эмбрионы, вместе с тем, предварительная обработка культуры клеток позволила добиться подавления репродукции вируса Кок-саки AI3 9-ю хс. В эту группу входили: соединение из группы антипириламидов замещенных аминокислот жирного ряда, 2 производных 4-формилантипирина и 6 представителен йодсодержащих производных антипирина, включая 4-йод- и 4-бромантилирян.

Эти хс по схеме предобработки были изучены в отношении расширенного спектра энтеровирусов, включавшего наряду с вирусом Коксаки AI3, вирусы Коксаки AI8, A2I, BI, В2, В4, В5, В6, а также ECHO II. Установлено, что наибольшим спектром противоэнтеровирусноп активности обладал 4-йодантипирин, полностью подавлявший репродукцию вирусов Коксаки AI3, AI8, A2I, BI, 34, В6, ECHO II и частично - вируса Коксаки В5. При определении минимальных ингибируюцих доз ИД^д и величин ХТИ для йодсодержащих производных антипирина в отношении вируса Коксаки AI3 в культуре ФЭЧ, высокие значения этих показателей установлены у 4-йодантшшрина. Ингибируя репродукцию вируса Коксаки AI3 в вд50 = 5,0 мкг/мл и шея ХТИ = 200, данное соединение превосходило все прочие производные антипирина по эффективности.

1.3. Влияние нестероидных противовоспалительных средств на репродукцию вирусов в культурах клеток

Итоги изучения антивирусной активности производных антипирина .позволили обратить более пристальное внимание на возможности использования нестероидшх противовоспалительных средств (НПВС) в химиотерапии вирусных инфекций. Мы оценивали в культуре клеток антивирусную активность 4-йодантипирина и ряда НПВС, разрешенных к клиническому применению (стампири-на, антпирина, бутадиона, ацетилсалициловой кислоты, салици-лата натрия) в отношении вирусов Коксаки AI3, ECHO II, ВВС, ЕПГ-1 (инфицирующая доза составляла 100 ТЦДзд/од мл)-

Оценка антивирусной активности включала выявление виру-лицидного действия на внеклеточные вирионы, обработку культур клеток НПВС спустя I час после их заражения ( De ciercq et al., 1980), а также - предварительную обработку клеток НПВС на протяжении 24 часов с последующим внесением соответствующего тест-вируса.

Данными цигоморфологяческого исследования и изучения влияния препаратов на интенсивность синтеза ДИК в культуре клеток Vero (De Ciercq et al., 1977) показана ИХ низкая токсичность (все выявленные вд^ препаратов были нетоксичными для культур клеток). Исследованные НПВС не обладали виру-лицидным действием на внеклеточные вирионы Коксаки AI3, ECHO II, ВВС, ВПГ-1, но способны подавлять в различной степени их репродукцию в культурах клеток L-41 и Vero.

Как видно из табл. 3, где представлены значения ИД^ и ХГИ, максимальной антивирусной активностью обладал 4-йодан-типирин, влиявший на репродукцию всех четырех тест-вирусов. Наиболее эффективной оказалась предварительная обработка

клеток на протяжении 24 часов до внесения тест-вирусов, что нашло отражение в значительном снижения ИД^ и возрастании величин ХТИ у 4-йодантипиряна (особенно для вирусов Коксаки и везикулярного стоматита), расширении спектра антивирусной активности у салицилатов по сравнению с внесением их спустя I час после инфицирования культур клеток.

Будучи внесенным непосредственно после адсорбции вируса, 4-йодантипирин в дозе 500 мкг/мл снижал уровень репродукции вируса Коксаки AI3 на 4,5 lg. Аналогичный эффект 4-йодантипирина при предварительной обработке клеток L-41 достигался более чем вдвое меньшей дозой, а в концентрации 10 мкг/мл препарат продолжал сникать титр вируса Коксаки AI3 на 1.5^.

Сходная картина наблвдалась при изучении влияния ЕПВС на репродукцию ВВС. Предобработка клеток как производными пиразолона (антипирин, 4-йодантипирин, стампярки), так и са-лицялатами обеспечивала более выраженное снижение инфекционного титра ВВС меньшими концентрациями по сравнению с внесением препаратов спустя I час после заражения клеток. Наиболее активным был 4-йодантипирин,

Репродукция вируса ECHO II в меньшей степени зависела от воздействия НПВС. Только антипирин и 4-йодантпирин по схеме предобработки снижали титр вируса (на 1,5 и 2,5 соответственно) при использовании больших концентраций препаратов.

Антипирин, 4-йодантипирин, бутадион и ацетилсалициловая кислота в дозах, близких к максимальным (750-1000 мкг/мл) подавляли репродукцию ЕПГ-1 в клетках Vero на 1,25-1,75 lg. будучи внесенными спустя I час после адсорбции вируса. В опытах с предобработкой все исследуемые НПВС также снижали титр ВПГ-1, однако ИДэд продолжали оставаться достаточно высокими.

Оценка динамики ингибярующего действия 4-йодантипиряна

Таблица 3

Спектр противовирусного действия НПВС в культуре клеток

Препараты Щ 5Д, мкг/мл

Коксаки А13 есно ii | ввс впг-1

А б 1 А ! б ; А ! б а | Б

Антипирин 62,5 ХТИ=16 31,0 хти=32 500,0 ХТИ=2 500,0 ХТИ=2 125,0 ХГИ=8 62,5 ХТИ=16 1000,0 ХТИ=1 750,0 ХТИ=1 .3

4-йодантипирин 62,5 ХГИ=8 5,0 ХТИ=Ю0 500,0 ХТИ=1 250,0 ХТИ=2 125,0 ХТИ=4 3,5 ХТИ=142 1000,0 ХТК=1 750,0 ХТИ=1 ,3

Сгампирян 250,0 ХГИ=4 125,0 хти=в на на 250,0 ХТИ=4 250,0 ХТИ=4 на 750,0 хт:и=1 ,3

Бутадион на на на на на на 750,0 ХТИ=1 750,0 ХТИ=1

Ацетилсалициловая кислота на 31,0 ХТИ=16 на на 62,5 ХТИ=8 31,0 ХТИ=16 750,0 ХТИ=1 500,0 хти=1 ,5

Салицилат натрия на 7,5 ХТИ=33 на на на 15,0 ХГН=17 на 250,0 лТИ=2

Примечания: на - препарат не активен. А - внесение препарата через I час после заражения клеток тест-вирусом. Б - предварительная обработка клеток препаратом на протяжений 24 часов с последующим внесением тест-вируса.

в отношении вирусов Коксаки А13 и ВВС в условиях одноцикло-го опыта выявила общую закономерность - снижение концентрации вирусов происходило в период 0-16 часов цикла репродукции.

1.4. Изучение комбинированного действия несгероидних противовоспалительных и антивирусных средств

Одним из путей повышения эффективности противовирусных химиопрепаратов является комбинированное применение, позволяющее усилить их совместное антивирусное действие, снизить потенциальную токсичность веществ, предотвратить формирование лекарственнорезистентных вариантов вируса (Г.А.Галегов, 1982). В связи с этим представлялось целесообразным изучить возможность комбинированного воздействия на вирусную инфекцию в культуре клеток НПВС и антивирусных веществ, как имеющихся на сегодняшний день в арсенале медицины, гак и выявленных нами в результате проведенного скрининга вновь синтезированных хс.

Для оцени; характера взаимодействия веществ в комбинации использовали фракционный индекс ингибирующей концентрации (ФИК), выражаемый формулой:

¡■Щ-п в-ва А в комбинации ИДсп в-ва Б в комбинации

§КК ^ -+ —2У-»

в-ва А отДельно ВД50 в-ва Б отдельно

со следующей интерпретацией индексов: фик <0,5 - значительны!: синергизм; фик = 0,5 - 0,9 - эффект, приближающийся к синергизму; фик ~ i - аддитивный эффект; фик = 1,1 - 1,9 -индифферентность или частичный антагонизм; фик > 2 - антагонизм (.Л.1еп а1., 1982).

Нами было изучено комбинированное воздействие различных доз НПВС и противогернетического препарата ацикловира на репродукцию ВШ7-1 в культуре клеток Vero при различных схемах внесения препаратов.

При одновременном внесении препаратов в культуру клеток спустя I час после инфицирования практически все исследованные НПВС (за исключением салицилата натрия) в сочетании с ацикло-виром, в дозах раздельно не активных, подавляли репродукцию ЕПГ-1. Наибольшая эффективность установлена для комбинаций ацикловира с ацетилсалициловой кислотой, антипирином и 4-йод-антипирином - дозы веществ в комбинации снижались по сравнению с раздельными ВД^ в 2,5 - 4 раза, эффект взаимодействия . носил характер близкого к синергизму (ШК = 0,5 - 0,62).

Еще более эффективной была схема комбинирования, при которой клетки предобрабатывались НПВС на протяжении 24 часов с последующим заражением и внесением ацикловира. Комбинация последнего с 4-йодантипирином позволила в 6 - 7,5 раз снизить величину ВДзд препаратов по сравнению с раздельным применением (с 750,0 до 125,0 мкг/мл - для 4-йодантипирина и с 0,3 до 0,04 мкг/мл - для ацикловира), а характер эффекта комбинации можно оценить как выраженный синергизм (ФИК = 0,3),

Комбинации ацикловира и 4-йодантипирина, вносимых по схеме предобработки, действовали одинаково эффективно как на полноценный ЕПГ-rI, гак и на его вариант с дефектной тимидин-киназной активностью, что имеет особое значение, так как дефектный вирус герпеса является малочувствительным к действию ацикловира.

В связи с отсутствием официнальных препаратов, способных ингибировать репродукцию энтеро- и рабдовирусов, для комбиш-

рования с НПВС мы воспользовались отобранным в результате скрининга и защищенными авторскими свидетельствами на изобретение двумя хс: Д1-2 ( 1:-(флуоренил-9)-н'-(о-оксибензоил) гидразином, подавлявшим репродукцию вируса Коксаки А13 и КАН-757 (3,3-ди-трет-бутил-6-метил-5-оксо-2,3,4,5-тетрагид-ро-1,2,4,3 ^ -триазафосфония бромидом), являющегося ингибитором репродукции ВВС.

Итоги проведенных исследовании подтвердили вышеописанную закономерность: предобработка клеток НПВС делает характер взаимодействия веществ синергичныгл или близким к синергизму, а комбинации с производными антипирина эффективней комбинаций с салицилатами.

Таким образом, нами впервые установлена возможность комбинированного воздействия НПВС и противовирусных средств на вирусную инфекцию в культуре клеток, что позволяет (на примере воздействия комбинации 4-йодантипирина и ацикловира на репродукцию ВПГ-1) существенно снижать дозы веществ и преодолевать возможную резистентность ВПГ-1 к ацикловиру.

2. Имыуномодулирующие и интерферониндуцирующае свойства нестероццных противовоспалительных средств

2.1. Влияние НПВС на иммунный ответ

Опыты, проведенные на неинбредных и линейных ( ваъв/с) шшах-самцах, по изучению влияния НПВС на первичный иммунный ответ к гетерологичному антигену (эритроциты барана) по методике Сипп1пдЬат (1965) показали наличие у них иммуномоду-лирующих свойств (за исключением антипирина и стампирина, бывших в использованных дозах индифферентными).

Как видно из данных, представленных в табл. 4, 4-йод- и 4-бромантипирин обладали имглуностимулируюцшл действием, наиболее выраженным у линейных животных, достоверно увеличивая число антителообразующих клеток (АОК) селезенки по сравнению с контролем. В то же время бутадион оказывал выраженный шл-муносупрессивный эффект.

Установлено, что иммуностимулирующии эффект 4-лод- и 4-бромантипкрина обусловлен их влиянием на т-супрессоры, являющиеся естественными регулятора:.® иммунопоэза, подавляющими антителообразование (В.¡Л.Писарев, л.А.Певницкий, 1977; .l'hisicr, 3tobo , 107G) 4-подантипирин и, особенно, 4-брогл-антипирин отменяли ингибирующее действие Т-супрессоров, стимулируя тем самим иммунный ответ.

Иммуностимуляция является, вероятно, общим свойством, присущим галогенсодержащим производит.! антипирина. Taie, сравнительное изучение 4-йодантипирина и четырех представителей группы галогенсодержащих антипирил- и изопропилантипирилами-дов показало наличие у них способности стимулировать иммунный ответ к вирусу Коксакя AI3, не отличающемуся высокой им-муногенностью, у мышей различных линий (неинбредные, BALB/c, С57В1), повышая уровень вируснейтрализующих антител на 2,13,010 с? по сравнению с контролем.

С использованием в качестве антигена вируса Коксаки AI3 проведено сравнение иммуностимулирующей активности 4-йоданти-пирина и препаратов группы НПВС (производных пиразолона и са-ллцилатов). Удалось установить (рис. I), что четыре НПВС -антипирин, 4-йодантипярин, стампирин и салидилат натрия стимулировали гуморальный иммунный ответ на вирусный антиген, причем для производных антипирина различие по сравнению с

Таблица 4

Влияние НПВС на иммунный ответ мышей к гетерологическоыу антигену

Наименование НПВС

Относительное число АОК/Ю® спленоцитов

неинбредные глыши

линии ВАЬВ/с

Опыт

Контроль

Опыт

Контроль

Бутадион

62,5 271,3*70,5й

Ацетилсалициловая 125,0 517,0*127,9. кислота

Салиодлат натрия 250,0 658,4*161,4й

4-кодангипирян 5,0 254,7*26,7*

4-брокентшшрян 250,0 1079,1*143,4

846,4*147,Iй 1112,1*129,6К 2193,2*331

846,4*147,1 1102,5*253,0й 2193,2*331,1г£

1154,0*2.13,4К 666,5*100,9 457,8*82,6

144,3*22,2К 1595,4*136,5К 802,9*56,Iя

880,9*189,7 722,7*80,3й 484,0*41,6й

м м

Примечание: звездочкой (л) отмечены достоверные различия по сравненью с соответствующей

.псйтргяьной группой

Титр антител

7- ----

6 - — •1-11

5 -

4 " ПИ——

3 -

2 -

1 -

1 2 3 4 5 6 7

Рис. I. Влияние НПВС на иммунный отьет мышей к вирусу Коксаки А13 Обозначения: I - контроль иммунизации; 2- бутадион; 3 - ацетилсалициловая кислота; 4 - салицилат натрия; 5 - 4-йод-антипирин; 6 - антипирин; 7 - стампирин

контрольной группой было статистически достоверным.

Бутадион и ацетилсалициловая кислота несколько снижали высоту иммунного ответа, однако это снижение не было столь значительным, как у мышей, иммунизированных эритроцитами барана.

Проведенные эксперименты показывают, что вне зависимости от вида используемого антигена и генотипа животных наибо-

лее стабильным и выраженным иммуностимулирующим действием обладал 4-::одантипирин, что, с учетом его противовирусных свойств, позволяет предположить перспективность испытаний на экспериментальных моделях вирусных инфекций.

2.2. НПВС и интерфероногенез

Влияние исследуемых 1ШВС на интерфероногенез оценивали в организме нелинейных мише.;-самцов массой 18-20 г, культурах спленоцитов и лейкоцитов, получению: от этих животных. Пндук^й лнгер£ерона осуществляли путем однократного внутря-бршишого пведеийя НПВС в дозе ICO мкг в 0,2 мл 1%-то крахмального х?дя. Забор крови для исследования осуществляли через 24, 4U 72 часа с последующим титрованием интерферона в культуре клссск 1-929 с использованием в качестве тест-вируса вкрус энцефаломиокардита, отаьзл U.ÍC. Интерферон в силено-цитах интактных мышей индуцировали аналогичной дозой НПВС с определением его в те же сроки. Для изменил влияния НПВС на продукцию лейкоцитарного интерферона у ¡кивоткых после однократного введения НПЗС получали взвесь лейкоцитов через 4, 16, 24 и 48 часов и оценивали их интерфероновую реакцию (ИРЛ) по ¡методике В.Д.Соловьева ;; Т.А.Бекгимирова (1979).

В результате установлено (табл. 5) содержание интерферона в сыворотке крови мышей под влиянием 4-йодантипирина через 24 часа после его введения мышам в титре 160 ИЕ/мл. Указанные срок явился пиком продукции интерферона, поскольку через 48 часов после введения титр его упал до 20 ИЕ/мл, а -спустя 72 часа его обнаружить не удавалось. Слабую активность проявил антипирин (продукция 20 ИЕ/мл через 24 часа после введения). Остальные НПВС в использованных концентрациях и при

Таблица 6

Интерферошндуцирующая активность НПВС в культурах спленоцитов и лейкоцитов периферической крови мышей в сравнении с содержанием интерферона в сыворотке 1фови

Индукторы

Содержание интерферона в ИЕ/мл, часы после введения индукторов

Сывороточный

Лейкоцитарный

Спленоцитарный

! п. ! 24 ! 48 ! 72 п 4 ! 16 ! 24 48 а ! 24 ! 48 ! 72

Антипирин 15 20 <10 <10 20 4 8 32 64 12 10 <10 <10

4-йодантпирин 15 160 20 <10 20 4 64 512 1024 12 80 10 <10

Стампирин 15 <10 <10 <10 20 4 16 512 128 12 <10 <10 <10

Бутадион 15 <10 <10 <10 20 4 16 16 4 12 <10 <10 <10

Ацетилсалициловая кислота 15 <10 <10 <10 20 8 В 64 128 12 <10 <10 <10

Салицилат натрия 15 <10 <10 <10 20 8 4 32 32 II <10 <10 <10

Контроль 40 <10 <10 <10 30 4 - 8 10 <10

го

И - количество мышей в группе

данной методике постановки эксперимента интерферонкндуцирув-щей активности не проявляли.

Однако, при использовании методики ИР! (табл. 5) интер-феронстимулирующую активность удалось установить у всех исследуемых НПВС. Наиболее она была выражена у 4-йодантипирина, ста'лпирина и ацетилсалициловой кислоты. Характерная особенность - наибольшая интерферонпродуцирующая активность лейкоцитов отмечена в "поздний" срок - через 48 часов после введения НПВС мышам. Бутадион и салицилат натрия показ0™" ^ебя иалокатпвными индукторами интерферона.

Слленоциты интактных мышей в условиях наших экспериментов продуцировали интерферон через 24 часа под влиянием 4-::одачт:п:;:рина в титре 80 ИЕ/мл, под влиянием антипирина -з титре Ю ИЕ/мл. 3 последующий срок (48 часов) удаюсь определить наличие интерферона в титре 10 ИЗ/мл только под влиянием 4-йодактипирина.

Приведенные результаты определили следующий этап исследований: оценить возможное влияние НПВС на индукцию интерферона з организме мышея при использовании известного индуктора незпруской природы - высокомолекулярного двуспирального комплекса полирибогуачиловой и полирибоцитидиловой кислот (поли Г :

поли ц).

Эксперимент проводили по двум схемам: I) одномоментное однократное внутрибршинное введение индуктора и НПВС; 2) предварительное введение НПВС по одному разу на протяжении трех суток, после чего - внутрибршинное введение индуктора. Титрование интерферона в сыворотках крови проводили спустя 6, 24, 48 и 72 часа после инъекции.

Наилучшие результаты получены при предварительном введе-

нии НПВС (схема 2) на протяжении 3-х суток, предшествующих инъекции поли Г : поля Ц (табл. 6). Практически все НПВС стимулировали интерферонпродуцирующий эффект поли Г : поли Ц, что выражалось в нарастании титров интерферона спустя 6 и 24 часа после введения индуктора. Удлинялось время эффективной продукции интерферона. Так, предварительное введение 4-йод-антидирина в 8-16 раз увеличивало продукцию интерферона в "поздние" сроки (48 и 72 часа) по сравнении с контрольной группой. Бутадион ;; салицилат натрия, не оказывавшие в ранее проведенных экспериментах влияния на действие ВЕН, как индуктора интерферона, в данном случае проявили стедулирукэд;: эффект, однако спустя 72 часа после индушда: в этих двух группах уровень содержания сывороточного интерферона был таким как в контрольной группе.

Таблица 6

Влияние НПВС на продукцию сывороточного интерферона у мышей при предварительном их введении на протяжении 3-х суток с последующей инъекцией полк Г : поли Ц

! Сочетания ! Дозы

пп ! исследуемых ! мг/кг

! соединений !

Интерферон в ИЕ/мл, часы

6 ! 24

48

72

Поли Г : поли Ц (контроль) 10,0 640 1280 40 20

Поли Г : поли Ц ц- 10,0 2560х 2560 320* 160й

Антидирин 100,0

Поли Г : поли Ц ^-йодантипирин 10,0 100,0 2560х 2560 640й 160*

Поли Г : поли Ц + Стампирин 10,0 1280 1280 320* 40

Таблица 6 (окончание)

! Сочетания пн ! исследуемых ! соединении

Дозы мг/кг

Интерферон в ИЕ/мл, часы

6 ! 24 ! 48 ! 72

5. Поли Г : поли Ц 10,0 Бугадион 100,0

6. Поли Г : поли Ц 10,0 +

Ацетилсалициловая 100,0 кислота

2560х 640 320х 20

2560х 2560 640х 80х

7. Поли Г : поли Д 10,0 +

Салицилат натрия 100,0

2560х 640 160х 20

(к) - различие с контрольной группой достоверно при Рц<0,05

Полученные результаты, как и описанные выше антивирусный и иммуностимулирующий эффекты НПВС, обуславливают целесообразность исследований их лечебного и профилактического действия на моделях экспериментальных вирусных инфекций.

3. Изучение лечебной и профилактической активности несгероидных противовоспалительных средств на экспериментальных моделях вирусных инфекций

3.1. Определение острой .токсичности НПВС для лабораторных животных

Острую токсичность исследуемых НПВС определяли согласно рекомендациям Г.А.Галегова и соавг. (1976). Также как и в культуре клеток, исследования на животных продемонстрировали низкие токсические свойства препаратов (табл. 7).

Таблица 7

Определение острой токсичности НПВС при вдутрибрюшинном введении беспородным белым мышам

Исследуемые препараты

Антипирин 4-йодантшщрин Стампирин Бутадион

Ацетилсалициловая кислота

Салицклат натрия

Дозы, мг/кг

^50 | ЩД"

>1000,0 1000,0

>1000,0 1000,0

>1000,0 1000,0

500 250,0

1000 500,0

1000,V 500,0

наименьшей токсичностью обладали антипирин и его производные, - 4-йодантипирин и стампирин. Достаточно высокие значения ЩД (500 мг/кг) имели салицилагы, - ацетилсалициловая кислота и салицилат натрм. Наиболее выраженная токсичность, из числа исследованных НПВС, установлена у бутадиона (ШД = = 250 мг/кг).

3.2. Антивирусная активность НПВС на модели гриппозной инфекции

Экспериментальная гриппозная инфекция воспроизводилась путем интраназального заражения нелинейных мышей вирусом гриппа А/Аичи/2/68 (Н31'2), что вызывало у них смертельную пневмонию.

Лечебно-профилактическая схема исследования препаратов включала 5-кратное их введение - за 24 и I час до заражения

и через 24, 48 и 72 часа после заражения. Изучали также раздельно - лечебное и профилактическое действие препаратов. Критериями эффективности проводимого лечения служили: I) снижение процента летальности мышей по сравнению с контрольной группой; 2) средняя продолжительность жизни (СНЕ) животных в эксперименте; 3) содержание вируса гриппа в легких мышей; 4) содержание антигемагглютинлнов в сыворотке крови; 5) динамика продукции сывороточного интерферона (В.И.Ильенко, 1977).

При лечебно-профилактической схеме введения два из шести исследованных НПВС, - 4-йодантипирин (в дозе 250 мг/кг) и ацетилсалициловая кислота (в дозе 100 мг/кг) в равной степени обеспечивали достоверны;; процент выживаемости животных по сравнению с контрольно:; группой (33,3 * 8,6 и 6,7 * 2,5 % соответственно) при удлинении срока средней продолжительности жизни (соответственно 7,8 * 0,8 и 7,2 * 0,8 суток против 5,3 * 0,9 суток в контрольно:; группе). Другие исследованные НПВС обеспечивали процент выживаемости в 2-3 раза превышающий контрольны.:, но это отличие не являлось статистически достоверным.

Для усиления защитного эффекта нами проведено изучение возможности применения 4-йодантипирина и ацетилсалициловой зелоты в комбинации с противогриппозным препаратом ремантадином. Предварительно было установлено, что ремантадин в дозах 100 и 50 мг/кг обеспечивал выживание соответственно 93,3* * 4,6 и 86,7 ± 6,2 р животных. При уменьшении дозы до 25 мг/кг показатель выживаемости резко снижался, а еще более низкие дозы ремантадина были полностью неэффективными.

Для оценки эффекта комбинированного применения ремантадина и НПВС использовались дозы, которые при раздельном вве-

дении не оказывали существенного защитного действия.

В табл. 8 приведены результаты, характеризующие сочет^н-ное применение ремантадина и 4-йодантишрина. Совместное введение по лечебно-профилактической схеме ремантадина (25,0 мг/кг) и 4-йодантяпирина (100,0 мг/кг) обеспечивало выживание 75,0 ± 7,95а животных, что достоверно отличалось от показателя в контрольной группе и в 4 раза превышало процент защиты для каждого препарата в названных дозах по отдельности. Обоюдное двухкратное снижение доз компонентов комбинации давало тот же защитный эффект. Минимальные эффективные концентрации ремантадина и 4-йодангипирина, обеспечивающие совместно 50$-ную защиту, были соответственно 3,0 и 12,5 мг/кг.

Таким образом, при комбинированном введении дозы препаратов снижались в 10-16 раз по сравнению с раздельным применением, а характер взаимодействия комбинации можно оценить как синергидный. Средняя продолжительность жизни живсгных в эксперименте при использовании комбинаций ремантадина и 4-йодан-типирина также достоверно отличалась от контрольного показателя.

Комбинированное применение ремантадина и ацетилсалициловой кислоты также почти в 3 раза повышало выживаемость животных по сравнению с лечением их только ацетилсалициловой кислотой в той же дозе. Следует отметить, однако, что синергидный эффект в данном случае был менее выраженным по сравнению д -использованием 4-йодантипирина.

Защитное действие комбинации ремантадина и БПВС при экспериментальной гриппозной инфекции характеризовалось резким снижением уровня содержания вируса гриппа в легких (на 2,5 -4,0 ЭВДздД)(2 т) в период лика его репродукции, возрас-

Таблица 8

Эффективность действия комбинаций ремантадина и 4-йодантипирина в сравнении с раздельным применением на экспериментальную гриппозную инфекцию .' при лечебно-профилактической схеме введения

пп!-

Раздельное введение

I

Комбинация

!реман-! Вшкивае- ! СПЖ !4-йод- ! Выкивае- ! СПЖ ¡ремантадин* ! Выживае-

1 гадин,! мость, ! сутки ¡штили-! мость, ! сутки !+4-йодантипи4-мость,

! мг/кг! % % ! рин, ! % !! ! рин, мг/кг !

I II ! мг/кг ! ! ! !

с<

л>

ОШ сутки

I. 25,0 17,4*6,9 6,7*0,9 100,0 18,2*7,0 6,1*0,9 25,0+100,0 75,0*7,9* 8,6*0,6х

2. 12,5 8,3*5,0 7,1*0,8 50,0 8,3*5,0 6,8*0,8 12,5+50,0 75,0*7,9х 8,8*0,6х

3. 6,25 0 6,9*0,8 25,0 0 6,5*0,9 6,25+25,0 41,7*9,0х 7,84) ,8

4. 3,0 0 6,8*0,8 12,5 0 6,8*0,8 3,0+12,5 50,0*9,Iх 7,8*0,8

5. 1,5 ни ни 6,0 ни ' ни 1,5+6,0 ■26,7*8,1 6,4*0,9

6. 0,75 ни ни 3,0 ни ни 0,75+3,0 13,3*6,2 5,5±0,9

7. Контроль 0 вируса 6,6*0,8 Контроль вируса 0 6,6±0,8 Контроль вируса 7,4*2,7 6,3*0,9

Примечания: ■ х - различия с контрольной группой достоверны при Р < 0,05 ии - не исследовали

танием титра антигеыагглютининов (на 1,0-3,0 и более

стабильной динамикой продукции интерферона (80-160 ИЕ/мл на

3-5 сутки инфекции) по сравнению с контрольной группой и группами с раздельным введением препаратов в тех же дозах.

Таким образом, нами впервые экспериментально обоснована возможность эффективного применения комбинаций НПВС и ремантадина при гриппозной инфекции, что может иметь значение для практической медицины.

3.3. Антивирусная активность НГШС на моделях инфекции, вызванной вирусом простого герпеса I типа

Выбранная нами для оценки возможной противогерпетпческой активности НПВС модель герпетического энцефалита мышеи, вызванного интраназальныы введением 100 лД^д ВПГ-1, является достаточно "жесткой", заболевание протекает в тяжелой ^орме с еысокой летальностью, достигающей 95-100^ (С.С.Варенникова и соавт., 1986).

Тем не менее, было установлено, что при лечебной схеме введения (внутрибрюшинно, I раз в сутки на протяжении 6 дней с момента заражения) один из исследованных препаратов, -

4-йодантшшрин, - в дозе 125,0 мг/кг обеспечивал выживание 50,0 9,1$ животных при аналогичном показателе в контрольно;! группе - 3,3 * 1,6% (табл. 9). Защитное действие 4-йодантипи-рина в данном случае приближалось по эффективности к таковому у ацикловира, который в дозе 100,0 мг/кг защищал 55,0 ± 9,1^ животных. Другие производные пиразолона (антипирин, стампирин, бутадион) и салицилаты не обеспечивали существенного защитного эффекта по сравнению с контрольной группой. Следует отметить, однако, что при лечении мышеи антипирином, бугадлоном,

Таблица 9

Защитное действие 4-йодантипирина и его комбинаций с поли И : поли Ц и ацикловиром при экспериментальной герпетической инфекции

Препараты, лечебная схема введения Доза, обеспечивающая защитный эффект, мг/кг Выживаемость, > ! ОШ, j j сутки

4-йодантипирин 125,0 50,0 ± 9,1й 10,8 * 1,1

62,5 35,0 ± 8,7х 10,7 ± 1,1

Ацикловир 100,0 55,0 ± 9,1х 11,0 * 1,0

50,0 25,0 ± 7,9х 8,9 ± 1,2

Поли И : поли Ц 12,5 25,0 ± 7,9х 9,0 ± 1,2

4-йодантипирин в комбинации с поли И : поли Ц, 12,5 мг/кг 62,5 63,2 ± 8,8х 11,5 ± 0,9х

4-йодантипирин в комбинации с ацикловиром, 50,0 да/кг 62,5 70,0 ± 8,4х 11,9 ± 0,9х

Контроль вируса - 3,3 ± 1,6 7,4 ± 1.3

х - различия с контрольной группой достоверны при Р < 0,05

ацетилсалициловой кислотой и салицилатом натрия, СПЖ животных в этих группах увеличивалась по сравнению с контрольной на 1,6-1,9 суток.

Таким образом, была установлена способность 4-йодантипирина оказывать защитное действие при герпетическом энцефалите мышей и отработана оптимальная схема лечебного введения препарата. Вместе с тем, была очевидна необходимость поиска путей усиления защитного эффекта, одним из них могло быть со-четанное применение 4-йодантипирина с синтетическим полирибо-нуклеотидом поли И : поли Ц, способным оказывать защитное действие при экспериментальной герпесвирусной инфекции (И.Ф. Баринский и соавт., 1986).

Как показали нащи исследования, сочетание поли И : поли Ц в дозе 12,5 мг/кг с 4-йодантипирином 125,0 мг/кг обеспечивало выживание 60,0 ± 8,9$ животных. Полученный эффект превышал аналогичный показатель для лечебного применений каждого из препаратов раздельно и приближался по своим характеристикам к аддитивному.

Описанная тенденция еще более наглядно проявилась при комбинировании поли И : поли Ц и 4-йодантипирина в дозах соответственно - 12,5 и 62,5 мг/кг (табл. 9). Полученный результат (процент выживаемости 63,2 * 8,8) четко демонстрировал аддитивный эффект комбинации.

В отличие от поли И : поли Ц, являющегося во многом "экспериментальным" препаратом, ацикловир имеет широкое применение в практической медицине. В пользу перспективности возможного комбинирования 4-йодантипирина с ацикловиром говорят и данные, полученные нами в культуре клеток (см. раздел 1.4).

Как видно из данных, представленных в табл. 9, комбинация ацикловира (50,0 мг/кг) и 4-йодантипирина (€2,5 мг/кг) обеспечивала вышшание 70,0 ± 8,4% яшботянх при доотоверием удлинения срока СШ по сравнению с контрольной группой. Характер взаимодействия в данном случае мешо оценить как аддитивный.

Также, как и при гриппозной инфекции, комбинированное применение 4-йодантипирина и ацикловира сопровождалось значительным снижением содержания ЕПГ-1 (на 2,75 - 3,25ig ТЦДзд/д j ш) в органе-"мишени" (головной мозг) по сравнению с контрольной группой и группами с раздельным введением препаратов в тех же дозах. Более выраженной и стабильной была динамика продукции вируснейтрализуюидос антител и интерферона.

3.4. Лечебное и профилактическое применение 4-йодантипирина при экспериментальной Коксакя ВЗ - вирусной инфекции

Вирус Коксаки ВЗ, использованный нами, известен своей кардиотропностью и панкреатотропностью (Т.Б.Журба, 1986, Grun et al., 1988), а также - способностью вызывать инфекционный процесс с генерализованными параличами и гибелью новорожденных мышей (М.К.Ворошилова'и соавт., 1964).

Данная модель была использована нами для оценки активности 4-йодантипирина, как наиболее эффективного представителя выбранной нами группы НПВС. Изучали: а) лечебное действие 4-йодантипирина при его внутршшнечном введении в дозе 100 мг/кг в течение 14 суток новорожденным ишнам, инфицированным Ю ДДсц вируса Коксаки ВЗ штамм ( Капсу); б) профилактическое действие препарата при введении его в той же до-

зе за 24 и I час до заражения. Наблюдение за животными вели на протяжении 60 суток, оценивая процент выживаемости, среднюю продолжительность жизни и прирост массы тела.

Таблица 10

Защитное действие 4-йодантипирина при экспериментальной Коксаки ВЗ-вирусной инфекции новорожденных мышей

Группы мышей

¡Коли-! Доза I

!чест-! 4-йод-! !во мы-!- антипи-!-

! шей ! рина,

! в ! мг/кг !груп-! ! пах !

Выживаемость,

%

СПК сутки

Ыасса тела на Ю-е сутки опыта

Лечебное введение 64 4-йодантипирина

Профилакти- 41 ческое введение 4-йодантипирина

Контроль 40 (инфицированные мыши)

100,0 35,3*5,8 22,2*3,2 4,6*0,3

100,0 66,0*7,4й 39,1*3,9* 5,4*0,3*

23,9*6,6 16,2*3,3 3,9*0,1

- различия с контролем достоверны при Р $ 0,05

Как видно из приведенных данных (табл. 10), процент выживаемости новорожденных мышей, инфицированных в 1-2 сутки жизни Ю ЛДэд вируса Коксаки ВЗ (контрольная группа), составил 23,9 * 6,6/2 при средней продолжительности жизни животных •16,2 * 3,3 суток. Введение 4-йодантипирина по лечебной схеме обеспечивало выживание 35,3 * 5,8% мышей. На 6 суток увеличивалась их (ЗШ. У леченных мышей наблюдался больший прирост массы тела в течение первых 10 суток эксперимента, чем у ин-

фицированшх мышей, не получавших препарат. Однако, все эти различия не были статистически достоверными.

У леченных мышей снижалось содержание вируса Коксаки ВЗ в тканях сердца и поджелудочной железы.

Более выраженный защитный эффект 4-йодантипирина наблюдался при введении его по профилактической схеме (табл. 10). Так, почти в 3 раза повысилась выживаемость шшей в опытной группе по сравнению с контролем. На 23 суток возросла (Ж животных, получавших препарат. Период максимальной гибели животных в опытной группе был сдвинут к концу первой недели, тогда как в контрольной группе он приходился на 3-4 сутки с момента инфицирования, масса тела мышей в опыте увеличилась с 2,9 * 0,1 г (на 3 сутки наблюдения) до 5,4 * 0,3 г, тогда как в контроле - с 2,5 * 0,09 До 3,9 ± 0,1 г. (р ^ 0,05).

Также как и в предыдущих опытах, под воздействием 4-йод-антипирина выявлено снижение содержания вируса Коксаки БЗ в органах-"мишенях" (на 1,1 - 1,9 12 Т1%о/о х мл ~ се1®че; на 2,0 - 3,3 1з ТЦ%о/0,1 мл " в п°даелУД0,!Н0Й нелезе).

Таким образом, 4-йодачтипир;ш на модели Коксаки ВЗ -вирусной инфекции новорожденных мышей обладает профилактической и, в меньшей степени, - лечебной активностью в острый период инфекции, что при полном отсутствии каких-либо действенных химиотерапевтических средств для борьбы с энтеровирус-ными инфекциями делает его перспективным для применения в клинической практике.

Основным итогом проведенных исследований нам представляются результаты, позволяющие экспериментально обосновать возможность применения НПВС для лечения и профилактики вирусных, инфекций, как одно из новых направлений "нетрадиционной" хи-

миотерапии. Установленные наш противовирусные, иммуностимулирующие и инт ерферониндуцирующие свойства 4-йодантипирина позволяют рекомендовать его для клинических испытаний в качестве лечебного и профилактического средства при вирусных инфекциях.

ВЫВОДЫ

1. Вновь синтезированные химические соединения, - производные фенилсерина, флуорена, пиразола, триазина, имидазола, аминоаммониевые соли и др., - способны в культуре клеток подавлять репродукцию с наибольшей эффективностью в отношении вирусов:

- Коксаки AI3 - у этилового эфира эритро-^-формил-0-9-флу-оренилацетил-трео-Я^-фенилсерина (ХТИ = 10);

- Коксаки В4 - у гидрохлорид 1-(пара-хлор-бензил)-3-(пара-хлорфенил)-6,7-ДИГИДро-5Н-ш1рроло-(1,2-<<) имидазола (ПИ = =6);

- ECHO II - у N -(флуоренил-9)-^-(о-оксибензоил) гидразина (ХТИ = 8);

- везикулярного стоматита - у бензотиазолиламида-4-нитро--//-(4-этоксифенил) антран иловой кислоты (ХТИ = 16);

- простого герпеса I типа - у 3-(2,4-диоксифенил)-4-(2--метил-4-тиазолил) -5-трифторметилпиразола (ХТИ = 64).

Соединения могут быть использованы для экспериментальной терапии названных инфекций, а также служить основой для направленного синтеза эффективных противовирусных средств.

2. Нестероидные противовоспалительные средства (НПВС), -производные пиразолона и салицилаты, - способны подавлять в культуре клеток репродукцию вирусов Коксаки AI3, ECHO II,

везикулярного стоматита и простого герпеса I типа. Наибольшая эффективность установлена у 4-йодангипирина при предварительной обработке им культур клеток за 24 часа до инфицирования вирусами Коксаки А13 (ХТИ = 100) и везикулярного стоматита (ХТИ = 142).

3. Исследованная нами комбинация НПВС с противогерпети-ческим препаратом ацикловиром оказала эффективность совместного воздействия в культуре клеток ацикловира и 4-йодантипи-рина на репродукцию вируса простого герпеса I типа (ВД^ в комбинации снижались соответственно в 7,5 и 6 раз) с синер-гядным характером действия. Аналогичный эффект установлен при комбинированном воздействии НПВС с соединениями, выявленными в результате скрининга (производные триазина и флуо-рена) на репродукцию в культуре клеток вирусов Коксаки А13 и везикулярного стоматита.

4. 4-йодантипирин достоверно стимулирует гуморальный т-мунный ответ к неинфекционному (эритроциты барана) и инфекционному (вирус Коксаки А13) антигенам у неинбредных мышей,

а также мышей линий зльв/с, С5731.

5. 4-йодантипирин индуцирует продукцию интерферона в организме мышей и культуре мышиных слленоцитов с пиком продукции через 24 часа после введения (160 и 80 ИЕ/мл соответственно). 4-йодантипирин и другие исследованные НПВС повышают способность лейкоцитов мышей продуцировать интерферон, а также усиливают интерферониндуцирующую активность синтетического полинуклеотидного комплекса поли Г : поли Ц.

6. Лечебно-профилактическое применение 4-йодантипирина и ацетилсалициловой кислоты при экспериментальной гриппозной инфекции мышей оказывает защитное действие, выражающееся в

достоверном возрастании процента выживаемости животных и удлинении срока средней продолжительности жизни. Защитный эффект значительно усиливается при комбинации вышеназванных НПВС и ремантадина (выживает 75-91$ животных). При этом существенно снижалось содержание вируса гриппа в легких мышей, усиливалась продукция интерферона и антигемагглютининов.

7. 4-йодантипирин проявляет лечебный,эффект при герпетическом энцефалите мышей, вызванном интралазалъным введением вируса простого герпеса I типа. Впервые показано, что комбинация 4-йодантипирина с поли И :, поли Ц и ацикловиром позволяет усиливать защитный эффект с аддитивным характером взаимодействия (выживает до 70$ животных), снижением содержания вируса в головном мозге мышей, повышением титров сывороточного интерферона и вируснейгрализующих антител.

8. В острый период Коксаки ВЗ-вирусной инфекции новорожденных мышей 4-йодантипирин обладает-профилактической и, в меньшей степени, лечебной активностью, достоверно увеличивая выживаемость мышей (до 66$), удлиняя срок продолжительности их жизни, подавляя репродукцию вируса Коксаки ВЗ в тканях сердца и поджелудочной железы.

9. Защитное действие НПВС при экспериментальных вирусных инфекциях обусловлено совокупностью их противовирусных, иммуностимулирующих и интерферонстимулирующих свойств и может быть охарактеризовано как одно из направлений "нетрадиционной" химиотерапии вирусных инфекций.

10. 4-йодантипирин, как наиболее активный из исследованных НПВС по результатам проведенных исследований, может быть рекомендован для проведения клинических испытаний в качестве антивирусного средства.

Основные положения диссертационной работы отражены в следующих научных работах:

1. Евстропов А.Н. Индукция антивирусной резистентности некоторыми йодсодержащимя производными лиразолона // факторы естественного иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях. - Челябинск. - 1982. - Вып. 8. -

С. 38-39.

2. Евстропов А.Н., Гайдукевич А.Н., Леонова С.Г., Киселева В.Н., Гончаренко Ю.Л. Изучение противовирусной активности производных акридина // Антивирусные вещества. - Минск. -

1983. - С. 90-91.

3. Евстропов А.Н. Противовирусная активность некоторых производных пиразолона // Вирусы человека и животных. - Рига. -

1984. - С. 82.

4. Дирвянските Н.В., Страу/кас Ю.Ю., Яворовская В.Е., Киселева В.Н., Евстропов А.Н., Косарева Т.М. О-ацилыше производные трео-Э^-фенилсерина, обладающие противовирусной активностью в отношении вируса гриппа А. Авторское свидетельство я 1135150 от 15 сентября 1984 г.

5. Дирвянските Н.В., Страукас Ю.Ю., Яворовская В.Е., Евстропов А.Н., Киселева В.Н., Дыдычкина Т.П. N -ацильные производные трео-Я£-фенилсерина, обладающие противовирусной активностью в отношении вируса гриппа А. Авторское свидетельство ^ 1140423 от 15 октября 1984 г.

6. Маслова Л.И., Зименковский Б.С., Белякова З.П., Яворовская В.Е.« Евстропов А.Н. 1,1-бис [2-(2,7-Диацетоксифлуо-ренилиден-9-гидразоно) гиазождон-4-ил-5]-1-({.-фенилглегана, • обладающий противовирусным действием в отношении РНК-содер-жащих и ДНК-содержащих вирусов. Авторское свидетельство

й 1210412 от 4 сентября 1984 г.

7. Евстропов А.Н., Воробьев Е.С., Благерман С.К., Киселева В.Н., Редько А.Ф., Яворовская В.Е. Противоэнтеровирус-ный и иммуностимулирующий эффект некоторых производных пира-золона // факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях. -Челябинск. - 1984. - Вып. 9. - С. 40.

8. Евстропов А.Н., Яворовская В.Е., Саратиков A.C., Прищеп Т.П. Антивирусное и иммуностимулирующее действие йодсо-держащих производных пиразолона // Антивирусные вещества. -Минск. - 1984. - С. 43-44.

9. Евстропов А.Н., Яворовская В.Е.» Киселева В.Н., Бабаян А.Т., Саакян Т.А., Гюльназарян А.Х., Гайдукевич А.Н., Гончаренко ю.Л., Моисеев И.К. Некоторые итоги скрининга противогриппозных химиоцрепаратов // Вопросы вирусол. - 1984. -5 с. - Библиогр. 7 назв. (Рукопись деп. в ВИНИТИ 2 ноября 1984 г. Jfe 7083-84 Деп.).

10. Яворовская В.Е., Евстропов А.Н. Нестероидные противовоспалительные средства - индукторы антивирусной резистентности // Химиотерапия и химиопрофилактика вирусных инфекций. Особо опасные и медленные инфекции. - Минск. - 1985. - С. 67.

11. Гайдукевич А.Н., Микитенко Е.Е., Левитин Е.Я., Яворовская В.Е., Евстропов А.Н. Бензотиазолиламид 4-нитро-N --(4-этоксифенил) антраниловой кислоты, проявляющий противовирусную активность. Авторское свидетельство ß 1340076 от 22 мая 1987 г.

\2. Ыаслова Л.И., Зименковский Б.С., Чуб В.П., Яворовская В.Е., Евстропов А.Н. флуоренилиденгидразиды ароматических карбоновых кислот, обладающие антивирусным действием. Авторское свидетельство JS 1365664 от 8 сентября 1987 г.

13. Страукас Ю.Ю., Еулько Р.Э., Яворовская В.Е., Евстро-пов А.Н. Этиловый эфир Ы -2-флуоренилсульфонил-0-пропяонил-трео-гэ/-фенилсерина, обладающий противовирусной активностью

-в отношении вируса ECHO II. Авторское свидетельство № 1363764 от I сентября 1987 г.

14. Гаидукевич А.Н., Микитенко Е.Е., Левитин Е.Я., Яворовская В.Е., Евстропов А.Н. Бензилиденгидразиды 2-хлор-4-нитробензойной кислоты, проявляющие активность в отношении вируса везикулярного стоматита. Авторское свидетельство

iè 1367393 от 15 сентября 1987 г.

15. МасловаЛ.И., Зименковский B.C., Любачивский В.И., Яворовская В.Е., Евстропов А.Н. флуоренилиденгидразид капроновой кислоты, проявляющий активность в отношении вируса простого герпеса I типа. Авторское свидетельство & 1385542 от I декабря 1987 г.

16. Евстропов А.Н. Комбинированное применение ремантадина и 4-йодантипиряна при экспериментальной гриппозной инфекции // Современные проблемы мед. вирусологии. - Рига. -1987. - С. 62.

17. Евстропов А.Н., Петличная Л.И., Воробьев Е.С., Киселева В.Н. Исследование противовирусной активности производных берберина и изатина // Вирусные и бактерийные препараты. -Томск. - 1987. - С. 319-322.

18. Евстропов А.Н., Гриценко Л.Н., Прищеп Т.П., Сарати-ков А.С., Яворовская В.Е. Действие йодпроизводных пиразолона на иммунный ответ на вирусный антиген // Нурн. мюфобиол., эпидемиол., иммунобиол. - 1988. - is 3. - С. I2I-I22.

19. Гюльназарян А.Х., Саакян Т.А., Евстропов А.Н., Яворовская В.Е., Бабаян А.Т. Синтез и антивирусные свойства некоторых непредельных четвертичных аммониевых солей // Армян-

ский хим. журнал. - 1988. - Т. 41. - й 12. - С. 752-756.

20. Страукас Ю.Ю., Булько Р.Э., Яворовская В.Е., Евптропов А.Н., Галегов Г.А., Правдана Н.Ф. л/ -2-флуоренонсульфо-нильные производные трео-Я^-фенилсерина, проявляющие противовирусную активность в отношении вируса простого герпеса I типа. Авторское свидетельство й 1405269 от 22 февраля 1988 г.

21. Ковалев В.Н., Хиля В.П., Евстропов А.Н., Яворовская В.Е. Производные 3-(2-метил-4-тиазолил)- или 3-(5-этокси-кар<Зонил-2-фурил) хромонов, обладающие противовирусной активностью. Авторское свидетельство ii I4I57I6 от 8 апреля 1988 г.

22. Бабаян А.Т., Гюльназарян А.Х., Саакян Т.А., Яворовская В.Е., Евстропов А.Н. Бромид N, N -димегил- N-бензил-Л/ --(1,4-дибромбут-2-енил) аммония, проявляющий активность в отношении вируса везикулярного стоматита. Авторское свидетельство J« 1422594 от 8 мая 1988 г.

23. Кулиш В.П., Койдан Г.Н., Гинчук A.M., Евстропов А.Н., Яворовская В.Е., Красовский А.Н. 3,3-ди-трет-бутил--6-метил-5-оксо-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,3, ¡f -триазафо сфоний хлорид, обладающий противовирусной активностью в отношении вируса везикулярного стоматита. Авторское свидетельство

J6 1433004 от 22 июня 1988 г.

24. Яворовская В.Е., Евстропов А.Н., Саратиков A.C., Прищеп Т.П., Воробьев Е.С. ффининг прогивоэнтеровирусных химических соединений // Вирусные и бактерийные препараты. -Твйск. - 1989. - Т. 35. - С. 204-208.

25. Евстропов А.Н., Яворовская В.Е., Правдина Н.Ф., Галегов Г.А. Изучение антивирусной активности нестероидных противовоспалительных средств в культуре клеток // Вопросы ви-

русол. - 1989. - » 5. - С. 609-612.

26. Евстропов А.Н., Яворовская В.Е., Галегов Г.А. Комбинация ремантадина и 4-йодантипирина для лечения и профилактики экспериментальной гриппозной инфекции // Вопросы вирусол. -1989. - й 6. - С. 734-738.

27. Евстропов А.Н., Саратинов A.C., Прищеп Т.П., Воробьев -Е.С., Худоногова З.П., Гриценко Л.Н., Яворовская В.Е. Антивя— " русная активность производных пиразолона // Бюллетень 00 АШ СССР. - 1989. - 6. - С. 96-99.

28. Демченко A.M., Евстропов А.Н., Яворовская В.Е., Воробьев Е.С., Красовский А.Н. 1-(п-хлорбензил)-3-(п-хлорфенил)--6,7-дигидро-5Н-пирроло-[1,2-9С.] имидазолия хлорид, обладающий антивирусно;! активностью в отношении вируса Коксаки В4. Авторское свидетельство Je 1483896 от I февраля 1989 г.

29. Бабаян А.Т., Гюльназарян АЛ., Саакян Т.А., Яворовская В.Е., Евотропов А.Н., Воробьев Е.С. N-диметил-/V-фе-нацил-W -(4-пиперидин-1-ил-бутен-2-ил)-аммоний бромид, обладающий антивирусной активностью в отношении вируса Коксаки 34. Авторское свидетельство :Ъ 1499887 от 8 апреля 1989 г.

30. .Маслова Л.И., Зименковский Б.С., Яворовская В.Е., Евстропов А.Н. Производные 2-(флуоренилиден-9-гидразоно)-тиазоллдона-4, обладающие противовирусным действием в отношении вируса Коксаки В4 и вируса везикулярного' стоматита. Авторское свидетельство Уг I5I73I3 от 22 июня 1989 г.

31. Уаслова Л.И., Зименковский B.C., Яворовская В.Е., Евстропов А.Н. Производные S -[(флуоренилиден-9-гидразоно) аминометил] -тиогликолевой кислоты, обладающие противовирусным действием. Авторское свидетельство J« I54I998 от 8 октября 1989 г.

32. Хиля В.П., Ковалев В.Н., Евстропов А.Н., Галегов

Г.А., Николаева С.Н. 3-(2,4-Диоксифенил)-4-(2-метил-4-тиазо-лил)-5-трифторметилпиразол, обладающий противовирусной активностью. Авторское свидетельство й 1545545 от 22 октября

1989 г.

33. Евстропов А.Н., Гриценко Л.Н., Худоногова З.П., Яво-ровская В.Е. Влияние нестероидных противовоспалительных средств на индукцию интерферона // Антибиотики и химиотерапия. - 1990. - й 7. - С. 27-28.

34. Бабаян А.Т., Гюльназарян А.л., Саакян Т.А., Яворов-ская В.Е., Евстропов А.Н. Гидробромиды N,N,/i -триалкил-(ди-алкилфенил)-/У-(4-дипропиламино-2-алкенил) аммоний бромидов, обладающие противовирусной активностью в отношении вируса Коксаки AI3, Авторское свидетельство .к I6I967I от 8 сентября

1990 г.

35. Евстропов А.Н., Гриценко JI.H., Яворовская В.Е. Про-тивоэнтеровирусное действие нестероидных противовоспалительных средств // Энтеровирусы. общетеоретические и медицинские аспекты. - Киев. - 1991. - С. 41.

36. Яворовская В.Е., Гриценко JI.H., Евстропов А.Н. Действие 4-йодантидирина на экспериментальную Коксаки-вирусную инфекцию // там же. - С. 107.

37. Евстропов А.Н., Гриценко Л.Н., Орловская И.А., Са-ратиков A.C., Прищеп Т.П., Яворовская В.Е. Иммуномодулирую-щие свойства нестероидных противовоспалительных средств // Бодяетень эксперим. биол. и мед. - 1991. -MI.- С. 55-57.

38. Саакян Т.А., Гюльназарян А.Х., Маркарян Н.О., По-носян Г.А., Бабаян А.Т., Евстропов А.Н., Яворовская В.Е. Исследования в области аминов и аммониевых соединений. ССХ.

Бронирование аммониевых солей, содержащих пропен-2-ильную или ленг-4-ен-2-инильную группу в присутствии третичных аминов. Синтез и определение антивирусной активности аммониевых солей, содержащих 2,3,4,5-тетрабромпентен-2-ильную или 4,5-дибромлентен-2-ильную группу // Армянский хим. журнал. -1991. - Т. 44. - И 2. - С. 84-92.

39. Евстролов А.Н., Яворовская В.Е. Комбинированная-терапия экспериментальной герпетической инфекции ацикловиром и 4-:юдантилиршюм // Р1" -огическая патология и ее фармокоррек-ция. Тезисы докл. Ш Меадународн. конф. - Чита. - 1991. -

С. 139.

40. Гкльназарян А.Х., Саакян Т.А., Маркарян Н.О., Евст-ропов А.Н., Гриценко Л.Н., Шалаурова О.В., Яворовская В.Е., Бабаян А.Т. Исследования в области аминов и аммониевых соединений. ССХШ. Влияние стерических факторов на региохимию дегидробромирования аммониевых солей, содержащих 2,3-дибром-бутенильную группу. Синтез и антивирусная активность солей

с 2,2,3-дибромпролильной группой // Армянский хим. журнал. -1991. - Т. 44. - ^ 4. - С. 223-229.

41. Евстролов А.Н., Яворовская В,Е. Применение комбинации ацикловира и 4-йодантипирина при экспериментальной инфекции, вызванной вирусом простого герпеса I типа // Тезисы докл. Всесоюзн. конф. "Актуальные проблемы химиотерапии бактериальных инфекций". - М. - 1991. - Ч. I. - С. 199-200.