Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Воспроизведение в эксперименте и терапия химического гастрита у животных

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Воспроизведение в эксперименте и терапия химического гастрита у животных"

На правах рукописи

ЧЕРАНЁВА МАРИЯ ВИКТОРОВНА

ВОСПРОИЗВЕДЕНИЕ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ И ТЕРАПИЯ ХИМИЧЕСКОГО ГАСТРИТА У ЖИВОТНЫХ

06.02.01. - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 6 ДПР 2012

Москва - 2012

005019272

005019272

Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Пермская государственная сельскохозяйственная академия имени академика Д.Н. Прянишникова» (ФГБОУ ВПО ПГСХА).

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор кафедры внутренних незаразных болезней, хирургии и акушерства ФГБОУ ВПО ПГСХА

Самоделкин Евгений Иванович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, члена-корр. РАМН, профессор, зам. руководителя научно-исследовательского центра биомедицинских технологий ГНУ ВИЛАР Россельхозакадемии

Банин Виктор Васильевич

доктор ветеринарных наук, профессор, заведующий кафедрой внутренних незаразных болезней животных ФГБОУ ВПО МГАВМиБ

Денисенко Виктор Николаевич

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Российский университет дружбы народов»

Защита состоится « 2.9 » .¿¿ОЛ_2012 г. в часов

на заседании диссертационного совета Д - 220.042.02 при ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина», по адресу: 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, д. 23. Тел. 8 (495)3779383

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина.

Автореферат разослан «

» 2012 года и

размещен на сайте http://www.vak.ed.gov.ru

Ученый секретарь А

диссертационного совета, профессор уо Сотникова Л.Ф.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Неэрозивные и эрозивно-язвенные поражения являются наиболее распространенной патологией верхних отделов пищеварительного канала у животных (Телепнев В.А., 1984; Баринов Н.Д., 2006; Meddings J.B. et al., 1995). Известно, что по частоте распространения и патогенетической связи с язвенной болезнью и раком желудка хронический гастрит является одной из актуальных медицинских проблем (Осадчук М.А. и др., 2002).

Хронический гастрит - полиэтиологичен. Нередко причиной гастрита и язвенной болезни желудка является бактерия Helicobacter pylori. Вместе с тем, в большом проценте случаев он обусловлен неинфекционными факторами, среди которых лидирует прием нестероидных противовоспалительных препаратов. Нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) относятся к числу наиболее распространенных лекарственных средств, используемых в ветеринарной медицине при костно-суставной патологии, травмах, во время оперативного вмешательства и в послеоперационный период. При этом прием НПВП приводит к развитию острого гастрита через неделю после начала лечения практически в 100% случаев (Дроздов В.Н., 2005), а реактивная гастропатия, развивающаяся вследствие употребления НПВП, является вторым наиболее распространенным гистологическим диагнозом, устанавливаемым при проведении биопсии желудка (Owen D.A. et al., 2003). Тем не менее, характеристика морфологических изменений в слизистой оболочке желудка (СОЖ) при химическом гастрите до настоящего времени остается неполной (Козлова И.В. и др., 2006; Lauwers G.Y. et al., 2001; Mino-Kenudson M. et al., 2006).

Вскрытие патогенеза химического гастрита у животных является базой для его эффективной профилактики. На сегодняшний день существуют способы нивелирования нежелательных эффектов применения НПВП при их длительном назначении. Так, с 80-х годов прошлого века в целях профилактики химического гастрита у людей и животных применяют мизопростол — синтетический аналог простагландина Е, являющийся специфическим антагонистом негативного влияния

НПВП на слизистую пищеварительного канала, ингибиторы протонной помпы (ИПП) - омепразол, лансопразол, пантопразол. А так же, блокаторы Н2-рецепторов гистамина (Clark D., 1994; Taha A. et al., 1998).

На фоне определенных проблем, связанных с применением ИПП при химическом гастрите, в последнее время вновь отмечается повышение интереса к использованию гастропротекторов, в частности, коллоидного субцитрата висмута в качестве монотерапии или в комбинации с ИПП (Roth S.H., 2001). В настоящее время в ветеринарии разработаны рекомендации по предупреждению ульцерогенного действия НПВП, согласно которым, наиболее эффективным режимом лечения является двойная терапия, состоящая из любого блокатора протонной помпы и препаратов сукральфата.

Существование разнообразия предлагаемых методов профилактики химического гастрита у животных свидетельствует о том, что эта проблема до настоящего времени остается нерешенной.

В сложившихся условиях становится весьма актуальной и обоснованной разработка способов предотвращения реализации побочных эффектов при приеме НПВП в ветеринарной практике, основанная на подробном изучении патогенеза химического гастрита.

Цель работы: разработать экспериментальную модель химического гастрита, вызванного приемом нестероидных противовоспалительных препаратов, и апробировать новые способы его профилактики.

Задачи исследования:

1. Разработать экспериментальную модель химического гастрита, вызванного длительным приемом нестероидных противовоспалительных препаратов.

2. Изучить структурные и функциональные изменения в слизистой оболочке желудка при химическом гастрите у животных.

3. На разработанной экспериментальной модели оценить эффективность антисекреторных препаратов в

отношении нормализации структурно-функциональных характеристик слизистой оболочки желудка.

4. Изучить в эксперименте эффективность применения диеты с высоким содержанием метаболизированных пищевых волокон в комплексном лечении животных с химическим гастритом.

Научная новизна исследования. Разработана экспериментальная модель химического гастрита, позволяющая выявить структурно-функциональные изменения в слизистой оболочке желудка у животных при длительном применении нестероидных противовоспалительных препаратов. Впервые иммуногистохимическими исследованиями установлено, что химический гастрит у животных сопровождается активацией процессов апоптоза и аномальной пролиферацией эпителиоцитов в желудочных ямках, а также нарушением секреции муцина М1 эпителиоцитами и пролиферацией эндокриноцитов G в эпителии слизистой оболочки желудка. На основании изучения процессов апоптоза в эпителии слизистой оболочки желудка, установлена экспрессия Fas Ligand, конъюгированного с Fas рецептором, что находит подтверждение в отсутствии лимфоцитарной инфильтрации собственной пластинки слизистой оболочки желудка.

Гистохимическими исследованиями обнаружено нарушение зонального распределения нейтральных, кислых и сульфатированных гликозаминогликанов (ГАГ) и пролиферация эндокриноцитов ЕС в эпителии слизистой оболочки желудка при длительном использовании НПВП.

Установлено, что применение антисекреторных средств (ингибиторов протонной помпы и блокаторов Н2-рецепторов гистамина) для лечения животных с химическим гастритом, индуцированным нестероидными противовоспалительными препаратами, способствует восстановлению целостности слизистой оболочки желудка, нивелированию сосудистых расстройств, нормализации зонального распределения муцинов, но приводит к гипертрофии париетальных экзокриноцитов и нарушению взаимоотношений в дисперсной эндокринной системе.

Разработан и научно обоснован оптимальный способ применения комплекса метаболизированных пищевых волокон и короткоцепочечных жирных кислот «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» для профилактики гастродуоденальных осложнений при проведении противовоспалительной терапии у животных.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Результаты эксперимента позволяют расширить представление о патогенезе химического гастрита у животных, обусловленного применением нестероидных противовоспалительных препаратов, и определить оптимальные точки приложения терапии. Для восстановления структурной организации эпителия, профилактики сосудистых расстройств и дистрофических изменений, регуляции кислотно-пептического фактора, а так же нормализации процессов пролиферации, апоптоза и клеточных популяций эндокриноцитов в слизистой оболочке желудка.

Разработанная экспериментальная модель может быть использована для проведения доклинической апробации новых лекарственных средств при лечении животных с химическим гастритом.

Полученные результаты определяют целесообразность включения в схемы лечения животных с воспалительными заболеваниями, регулярно получающих нестероидные противовоспалительные препараты, помимо традиционно используемых антисекреторных средств комплекс пищевых волокон и короткоцепочечных жирных кислот «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами».

Положения, выносимые на защиту:

1. Разработанная модель позволяет воспроизвести в эксперименте изменения слизистой оболочки желудка, типичные для химического гастрита, вызванного длительным использованием нестероидных противовоспалительных препаратов.

2. Химический гастрит, обусловленный приемом нестероидных противовоспалительных препаратов, сопровождается активацией процессов апоптоза в эпителии слизистой оболочки желудка, аномальной

пролиферацией эпителиоцитов в желудочных ямках и нарушением зонального распределения

гликозаминогликанов.

3. Применение антисекреторных препаратов для терапии химического гастрита у животных способствует восстановлению целостности слизистой оболочки желудка, нивелированию сосудистых расстройств, нормализации распределения муцинов, с другой стороны - вызывает гипертрофию обкладочных клеток и нарушение взаимоотношений в дисперсной эндокринной системе.

4. Использование в эксперименте диеты с высоким содержанием метаболизированных пищевых волокон способствует эффективной регрессии структурно-функциональных изменений слизистой оболочки желудка при применении нестероидных противовоспалительных препаратов.

Внедрение в практику. Полученные в ходе экспериментальных исследований результаты используются в учебном процессе на кафедре внутренних незаразных болезней ФГБОУ ВПО «ПГСХА имени академика Д.Н. Прянишникова», кафедрах нормальной, топографической и клинической анатомии, оперативной хирургии и патологической физиологии, в отделе морфологических и патофизиологических исследований ЦНИЛ ФГБОУ ВПО «ПГМА имени академика Е.А. Вагнера» Минздравсоцразвития Российской Федерации; внедрены в работу ветеринарных клиник г. Перми и г. Ярославля.

Связь работы с научными программами. Работа выполнена в соответствие с планом ФГБОУ ВПО «Пермская государственная сельскохозяйственная академия имени академика Д.Н. Прянишникова».

Апробация результатов диссертации. Результаты исследований доложены и обсуждены на следующих конференциях: Агрономия, агрохимия, агропочвоведение, агроэкология, общая химия, лесоведение, содовопарковое и садовое строительство, ветеринария и зооинженения. ЬХХ Всероссийской научно-практической конференции молодых

ученых, аспирантов и студентов, посвященной 80-летию Пермской ГСХА, «Молодежная наука 2010: технологии, инновации», Пермь, 2010 г.; Научной сессии Пермской государственной медицинской академии, Пермь, 2010г.; Региональной конференции молодых ученых «Инновации молодых ученых агропромышленному комплексу Сибири и Урала», Тюмень, 2010 г.; III межвузовской студенческой научной конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии», Ульяновск, 2010 г.; Международной научной конференции «Наука и образование в современной России», Москва, 2010 г.; Международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию Пермской государственной сельскохозяйственной академии имени академика Д. Н. Прянишникова «Инновационному развитию АПК - научное обеспечение», Пермь, 2010 г.; Научной сессии 2011 года, посвященной 95-летию высшего медицинского образования на Урале и 80-летию Пермской государственной медицинской академии имени академика Е. А. Вагнера, Пермь, 2011 г.; Научно-практической конференции гастроэнтерологов Приволжского федерального округа (ПФО) «Современная гастроэнтерология: что нужно знать практическому врачу?», Нижний Новгород, 2011 г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 печатные работы, в том числе 3 статьи в журналах, рекомендуемых ВАК РФ и получен 1 патент РФ на изобретение.

Объем и структура диссертации. Диссертация включает следующие разделы и главы: содержание, введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, три главы собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, сведения о научном и практическом использовании полученных результатов, список литературы. Материалы диссертации изложены на 204 печатных страницах, содержит 19 таблиц и 57 рисунков. Список литературы включает 245 источников, из которых 135 - отечественных и 110 - иностранных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Биологическими моделями служили 180 беспородных белых крыс (самцов и самок) четырехмесячного возраста, с массой тела

150-200 г, содержащихся в стандартных условиях экспериментально-биологической клиники (вивария) - свободный доступ к пище и воде и 12-14 часовой световой день. Все эксперименты выполнены в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. N 755) и «Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» от 18 марта 1986 г. на базе Центральной научно-исследовательской лаборатории Федерального государственного бюджетного учреждения высшего профессионального образования «Пермская государственная медицинская академия имени академика Е.А. Вагнера Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Химический гастрит в эксперименте моделировали путем перорального введения нелинейным белым крысам в течение 21 дня за 1 ч до кормления 1 раз в сутки раствора аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата — Кетофен или Найз®. Аскорбиновую кислоту давали из расчета 50 мг/кг в сутки - 200 мкл 5% раствора. Кетофен («МЕРИАЛ», Франция; международное непатентованное название - кетопрофен, таблетки 10 мг) - нестероидный противовоспалительный препарат, предназначенный для лечения воспалительных заболеваний опорно-двигательного аппарата у животных, применяли, согласно инструкции фирмы-производителя, из расчета 1 мг/кг (или 0,2 мг на животное). Найз® («Д-р Редди'с Лабораторис Лтд.», Индия, г. Хайдерабад, международное непатентованное название -нимесулид, химическая формула: 4'-нитро-2'-фенокси-метан сульфонанилид, таблетки 100 мг) давали из расчета 1,8 мг/животное. Для проведения экспериментальной терапии НПВП-гастропатии использовали антисекреторные средства: ингибиторы протонной помпы (Омез®) и блокаторы Н2-рецепторов гистамина (Фамотидин), а также продукт «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами».

Фамотидин («HEMOFARM KONCERN A.D.», Югославия; международное непатентованное название - фамотидин, таблетки

20 мг) применяли в эксперименте 1 раз в сутки в дозировке 1,44 мг/животное. Омез® («Д-р Редди'с Лабораторис Лтд.» /Dr. REDDYJs LABORATORIES Ltd., Индия, г. Хайдерабад, международное непатентованное название - омепразол, капсулы 20 мг) использовали в дозировке 1 мг/сутки на животное в один прием с 0,5 чайной ложки яблочного пюре.

Продукт «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» выпускается ЗАО «Ягодное», г. Киров, д. Югрино. Основным компонентом «Рекицена-РД® с фруктоолигосахаридами» являются нерастворимые и растворимые пищевые волокна (ПВ) пшеничных отрубей, метаболизированные микроорганизмами Saccharomices vini, и короткоцепочечные жирные кислоты (КЦЖК). Продукт используют в качестве профилактического средства, при воздействии неблагоприятных экологических факторов, при повышенном риске формирования дисбактериоза, опухолевых заболеваниях, сахарного диабета, иммунной недостаточности. Его применяют отдельно или как компонент функционального питания при заболеваниях желудочно-кишечного тракта (стоматиты, дисбактериоз, острые кишечные инфекции, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, гастриты, холециститы, гепатиты, энтериты, колиты), при нарушениях обмена веществ (атеросклероз, ожирение, сахарный диабет, гипергликемия), при воспалительной патологии кожи микробного и аллергического происхождения, в комплексной терапии вторичной иммунной недостаточности. В рацион животных «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» добавляли после механического измельчения в ступке, смешивая с кормом, в количестве 10% суточного объема пищи (30 г/сутки пищи на животное в соответствие с утвержденными нормами, приведенными ранее), то есть 3 г/сутки или 4 таблетки «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» на животное.

Для проведения исследований были сформированы следующие экспериментальные группы (12 групп, по 15 животных в каждой): I — контрольная группа — интактные животные, выпаивали физиологический раствор; II - моделирование химического гастрита (нимесулид); III - моделирование химического гастрита (кетопрофен); IV - применение нимесулида

и терапия омепразолом; V - применение нимесулида, терапия фамотидином; VI - применение нимесулида, терапия «Рекиценом-РД® с фруктоолигосахаридами»; VII - применение нимесулида, терапия омепразолом и «Рекиценом-РД® с

фруктоолигосахаридами»; VIII - применение кетопрофена, терапия омепразолом; IX - применение кетопрофена, терапия фамотидином; X - применение кетопрофена, терапия «Рекиценом-РД® с фруктоолигосахаридами»; XI - применение кетопрофена, терапия омепразолом и «Рекиценом-РД® с фруктоолигосахаридами»; XII - применение кетопрофена, терапия омепразолом в сочетании с «Рекиценом-РД® с фруктоолигосахаридами» в течение 7 дней, а затем только «Рекиценом-РД®» 21 день.

Во время проведения эксперимента оценивали поведение животных, их внешний вид, массу тела. По окончании исследований животных выводили из эксперимента с соблюдением правил эвтаназии и осуществляли отбор органов — на 22-й день эксперимента для I - III групп и на следующий день по окончании экспериментальной терапии для IV - XII групп. Для проведения гистологического исследования отбирали образцы пищеводной, кардиальной, фундальной и пилорической частей желудка, выдерживали в изотоническом растворе NaCl до 30 минут, затем фиксировали в 10% забуференном по Лилли (рН-7,2) формалине.

Гистологические препараты готовили по стандартным методикам с заливкой в гистамикс. С парафиновых блоков получали серийные (5-10 шт.) срезы толщиной 3-5 мкм, которые депарафинировали по стандартной схеме. Методы окрашивания депарафинированных гистологических срезов для световой микроскопии, использованные в работе, представлены в табл. 1.

Таблица 1

Гистологические и гистохимические методы светооптического исследования образцов стенки желудка

Методика окрашивания Выявляемые гистологические структуры Количество препаратов

Гематоксилин и эозин Обзорная микроскопия 720

Пикрофуксин по ван Гизону Коллагенвые волокна, гладкомышечные клетки 720

ШИК-реакция с постановкой контрольных реакций Выявление нейтральных гликозаминогликанов 540

Альциановый синий (при рН=1,0) Селективная идентификация кислых гликозаминогликанов 540

Альциановый синий (при рН=2,5) Селективная идентификация сульфатированных гликозаминогликанов 540

Нитрат серебра по Массону Визуализация энтерохормаффинных клеток 540

При проведении гистохимических реакций

полуколичественную оценку результатов осуществляли, рассчитывая средний цитохимический коэффициент (СЦК) по принципу Астальди и Берга, (1967 г.), основанному на выявлении различной степени интенсивности специфической окраски клеток (Шубич М.Г., Могильная Г.М., 1982).

Дополнительно проводили иммуногистохимическое исследование гистологических образцов. Для выявления пролиферативной активности в слизистой оболочке желудка использовали моноклональные антитела к регуляторному протеину Кі-67, для обнаружения муцина Ml — моноклональные антитела к MUC 5АС, для идентификации клеток, проявляющих готовность к апоптозу — поликлональные антитела к Fas Ligand (FasL), для

визуализации G-клеток дисперсной эндокринной системы (ДЭС) -поликлональные антитела к гастрину, а также полный диагностический набор компании Diagnostic BioSystems (USA), предназначенный для проведения экспериментальных исследований. Иммуногистохимические исследования проводили по стандартным протоколам с использованием позитивных и негативных контролей, рекомендованных фирмой-производителем. Срезы докрашивали гематоксилином Майера, заключали в канадский бальзам и исследовали в проходящем свете микроскопа при увеличении х 400.

После оценки интенсивности пероксидазной метки определяли показатели - индекс апоптоза и индекс пролиферации (Ивашкин В.Т. и др., 2002). Определение индекса пролиферации (ИП) на основе экспрессии регуляторного протеина Ki-67 проводили полуколичественным методом — учитывали число позитивных на 100 учтенных ядер (при учете 500-1000 клеток) (Лининг Д.А., 2006; Корсакова H.A., 2007), а также при помощи специализированного программного обеспечения для медицины и биологии BioVision, version 4,0 (Австрия). При определении экспрессии Ki-67 ядерная реакция любой интенсивности фиксировалась как позитивная (Раскин Г.А., 2007). Уровень пролиферации расценивался как низкий, если меньше 15% клеток имели позитивную реакцию, умеренный, если 15-30% ядер были позитивны на Ki-67, и высокий при позитивной реакции более 30% клеток (Раскин Г.А., 2007). Гибель клеток в форме апоптоза определяли по индексу апоптоза (1АПТ) по формуле: 1АПТ (%) = N (число апоптозных клеток, позитивных к Fas Ligand)/Nl (общее число клеток)х100 (Осадчук A.M. и др., 2007; Амельчугова О.С. и др., 2008).

Микроморфометрию осуществляли с использованием программного пакета BioVision. Анализ включал измерение толщины слизистой оболочки желудка, подсчет количества энтерохромаффинных клеток (Аджисалиев Г.Р., Пикалюк B.C., 2008), длины желудочных желез (Сыч В.Ф. и др., 2007), а также толщины собственной пластинки, мышечной пластинки СОЖ, параметров париетальных (обкладочных) клеток - площади сечения (S) и диаметра (D) самих клеток, а также площади сечения

(Sn) и диаметра (Dn) ядер. Для обеспечения достоверности результатов определяли толщину слизистой оболочки и длину желез только в участках с продольно срезанными железами, а также толщину мышечной пластинки слизистой оболочки желудка. В каждом препарате проводили от 4 до 10 измерений, после чего вычисляли средние величины и стандартные отклонения для каждого животного и средние величины по группам.

Статистический анализ выполняли при помощи программного пакета Biostat и приложения Microsoft® Excel полнофункционального офисного пакета Microsoft Office 2007. Характеризуя выборки, вычисляли выборочное среднее, стандартную ошибку и стандартное отклонение, сравнение между собой двух выборок проводили при помощи критерия Манна-Уитни. Для оценки различий между несколькими случайными выборками использовали метод Крускала-Уоллиса. Анализируя результаты повторных измерений, использовали критерий Мак-Нимара. Для оценки существенности различий между распределением качественных признаков в изучаемых выборках

использовали критерий % (Айвазян С.А. и др., 1985, Тюрин Ю.Н. и др., 1995). Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез в экспериментальных и клинических исследованиях принимали равным р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Во время проведения эксперимента случаев летального исхода животных не отмечали. К концу исследований обнаружено снижение двигательной активности в экспериментальных группах, получавших нестероидные противовоспалительные препараты в сочетании с аскорбиновой кислотой. Аппетит у животных был сохранен. В экспериментальных группах у части животных выявлены проявления диспепсического синдрома в форме разжиженного кашицеобразного стула или запоров (твердый кал комочками).

По окончании эксперимента во время проведения аутопсии у интактных животных при вскрытии желудка по малой кривизне хорошо визуализировалась граница между безжелезистой и

железистой частями желудка; патологических изменений при визуальном осмотре не обнаружено (рис. 1). При проведении аутопсии у животных опытных групп наблюдали утолщение и отечность слизистой оболочки желудка, ее гиперемию; у большинства животных поверхность слизистой оболочки была покрыта слизистыми массами (рис. 2).

При проведении гистологического исследования стенки желудка интактных животных установлено, что ее структурная организация соответствует норме с учетом видовых особенностей. При проведении иммуногистохимических исследований экспрессия муцина М1 была выявлена в цитоплазме клеток ямочного эпителия при отсутствии окрашивания цитоплазмы эпителиоцитов желез, что соответствует типичному зональному распределению муцинов в СОЖ млекопитающих. Клеточная пролиферация была неактивна, а пролиферирующие клетки выявлялены, главным образом, в эпителии шейки желудочных желез, экспрессия Fas Ligand была низкой.

Рис. 1. Вскрытый по малой кривизне желудок интактного животного. Визуализируются безжелезистая и железистая части без видимых патологических изменений. Макропрепарат

Рис. 2. Вскрытый по малой кривизне желудок животного с химическим гастритом. Визуализируется граница между железистой и безжелезистой частями. Слизистая оболочка гиперемирована, отечна, складчатость ее выражена. В просвете желудка большое количество слизи. Макропрепарат

У экспериментальных животных, получавших в течение 21 дня перорально нестероидный противовоспалительный препарат кетопрофен в дозе 0,2 мг/сутки в сочетании с 5%-ным раствором аскорбиновой кислоты, мы наблюдали развитие гиперацидного (химического) гастрита. При этом в слизистой оболочке желудка были выявлены сосудистые расстройства, в железистой части -дистрофические изменения ямочного эпителия, увеличение количества париетальных экзокриноцитов в дне желез фундального и кардиального отделов, появление в собственной пластинке слизистой оболочки большого количества гладких миоцитов, ее отек, краевое стояние лейкоцитов в просвете сосудов, гипертрофия мышечной пластинки слизистой оболочки. При проведении гистологического исследования не обнаружено атрофии желудочных желез так же, как и их гиперплазии, что исключает наличие в изучаемой выборке особей с атрофическим и гипертрофическим вариантами хронического гастрита. Иммуногистохимические исследования показали аномальную пролиферацию эпителиоцитов в желудочных ямках и аномальную секрецию муцина М1 в эпителии желез. У животных этой экспериментальной группы имело место выраженная экспрессия Fas Ligand в эпителии желудочных ямок, особенно в участках десквамации эпителиальных клеток с поверхности слизистой оболочки желудка. Известно, что Fas Ligand (лиганд белка CD95 -Fas/APO-1) является одним из внешних факторов, запускающих в клетке апоптоз (Кардашева С.С. и др., 2006), экспрессируется преимущественно активированными Т-лимфоцитами и NK-клетками и существует в двух формах - нерастворимый или мембраносвязанный FasL и растворимый FasL (Гостюжова Е.А., 2009). Рецептор к Fas Ligand (CD95-Fas (CD95) протеин) является одним из рецепторов, инициирующих клеточную гибель, и экспрессируется на мембранах клеток различных типов, участвуя в передаче апоптотического сигнала. В наших исследованиях мы выявляли экспрессию FasL конъюгированного с Fas рецептором, поскольку при проведении рутинных гистологических исследований мы не выявили значимой лимфоцитарной инфильтрации собственной пластинки слизистой оболочки желудка.

Морфометрическими исследованиями установлено, что у животных с химическим гастритом, вызванным кетопрофеном, достоверно (р<0,05) увеличиваются средние показатели толщины слизистой оболочки желудка за счет утолщения мышечной пластинки и число обкл ад очных клеток в эпителии желез.

В экспериментальной группе, получавшей нимесулид, также отмечали развитие химического гастрита. Об этом свидетельствовало наличие гиперплазии ямочного эпителия в железистой части слизистой оболочки желудка, локальное уменьшение количества слизистых клеток, при одновременном увеличении количества обкладочных в дне желез слизистой оболочки желудка, гипертрофия мышечной пластинки слизистой оболочки, появление в собственной пластинке слизистой оболочки желудка большого количества гладких миоцитов.

Указанные изменения нашли подтверждение в результатах морфометрических исследований, однако статистически значимых различий в данной экспериментальной группе, нам обнаружить не удалось. Тем не менее, мы посчитали необходимым провести дальнейшие исследования с обеими экспериментальными группами, поскольку иммуногистохимические исследования выявили те же закономерности, что и в группе, получавшей кетопрофен: аномальную пролиферацию ямочных эпителиоцитов, нарушение зонального распределения муцина М1, активацию процессов апоптоза.

С целью снижения агрессивных свойств желудочного содержимого в настоящее время применяется несколько групп фармакологических веществ, в числе которых выделяют антациды и антисекреторные препараты, принципиально различающиеся по механизмам фармакологического действия. Учитывая, что блокаторы Н+- и К+, N3+ -АТФазы (или ингибиторы протонной помпы - ИПП) в настоящее время широко используются в клинической и ветеринарной практике в качестве средств профилактики гастродуоденальных осложнений при применении НПВП (Лапина Т.Л., 2009), мы поставили перед собой задачу изучить в условиях эксперимента их действие на слизистую оболочку желудка животных, длительное время получавших нестероидные противовоспалительные средства.

В стенке желудка животных опытной группы, получавших с целью регуляции активности кислотно-пептического фактора омепразол, в слизистой оболочке и подслизистой основе безжелезной (пищеводной) части желудка патологических изменений не выявлено. Дистрофические изменения эпителиоцитов слизистой оболочки желудка в форме гиперхромии ядер эпителиоцитов ямок и вакуолизации их цитоплазмы отмечали в 40% случаев у животных, получавших кетопрофен, и у 20% животных, получавших нимесулид. В 70% случаев отмечали, обусловленное отеком тканей, утолщение собственной пластинки слизистой оболочки, вследствие чего в этих участках нарушалось расположение желез. У этих же животных визуально была выявлена гипертрофия мышечной пластинки слизистой оболочки.

Рис. 3. Эпителий ямок и шеек желудочных желёз слизистой оболочки желудка интактных животных, зональное распределение нейтральных гликозаминогликанов. ШИК-реакция. Об. 40, ок. 15

Рис. 4. Эпителий дна желудочных желёз слизистой оболочки желудка при химическом гастрите, зональное распределение нейтральных гликозаминогликанов. ШИК-реакция. Об. 40, ок. 15

При окрашивании по методу ШИК в слизистой оболочке интактных животных интенсивную реакцию выявляли в эпителиальных клетках в области желудочных ямок и шеек желудочных желез, причем, наиболее интенсивное окрашивание имели эпителиоциты ямок. В теле желез визуализировались единичные слабоокрашенные эпителиальные клетки, ШИК-

положительный секрет которых был сосредоточен преимущественно в их апикальной части; отношение ШИК-реакции к диастазе позволяло считать, что в состав секрета входят нейтральные ГАГ (рис. 3).

При моделировании химического гастрита как при использовании нимесулида, так и при использовании кетопрофена в слизистой оболочке желудка экспериментальных животных наблюдали нарушение зонального распределения нейтральных гликозаминогликанов, выражающееся в их преимущественной локализации в дне желудочных желез (рис. 4).

Установлено, что кислые и сульфатированные гликозаминогликаны в эпителии слизистой оболочки желудка интактных животных выявлялись только в эпителиоцитах дна и частично тела желудочных желез (рис. 5).

О » ч 1 л.

■УФ

10»''

* УІШ

ц > •

■"'■ Шш

V- Ч^^Сг

■ б ж

Рис. 5. Эпителии дна и тела желудочных желез слизистой оболочки желудка интактных животных, локализация сульфатированных гликозаминогликанов. Альциановый синий, рН-2,5. 06.10, ок. 15

Рис. 6. Эпителий желудочных ямок слизистой оболочки желудка животных с химическим гастритом, зональное распределение сульфатированных гликозаминогликанов. Альциановый синий, рН-1,0. Об. 10, ок. 15

При моделировании химического гастрита наблюдали нарушение локализации сульфатированных гликозаминогликанов: позитивную реакцию отмечали преимущественно в эпителии желудочных ямок, что нашло отражение в значениях СЦК.

Выявленная закономерность была характерна для группы, получавшей нимесулид, и для группы с кетопрофеном (рис. 6)

В группах, где проводили экспериментальную терапию омепразолом, отмечали восстановление зонального распределения нейтральных гликозаминогликанов в слизистой оболочке желудка кроме 2 случаев (13,33%), в которых нейтральные ГАГ были обнаружены в покровно-ямочном эпителии, в эпителиоцитах шеек, тела и дна желудочных желез. Окраска гистологических препаратов альциановым синим с рН-2,5 выявила локализацию кислых гликозаминогликанов в слизистой оболочке желудка экспериментальных животных в 5 случаях (33,33%) в покровно-ямочном эпителии, и только у 10 животных их локализация была типичной. При окрашивании срезов альциановым синим с рН-1,0 гликозаминогликаны в слизистой оболочке желудка экспериментальных животных, получавших омепразол, у 8 животных (53,33%) также имели нетипичную локализацию - в области желудочных ямок.

При выявлении гистохимическими методами энтерохромаффинных ЕС-клеток, продуцирующих серотонин в эпителии слизистой оболочки желудка, установлено, что у животных контрольной группы (интактных) в фундальных железах желудка на тестовой площади они были единичными. При моделировании химического гастрита у животных (как при применении нимесулида, так и при использовании кетопрофена) выявлено увеличение количества энтерохромаффинных клеток на тестовую единицу площади. При этом у животных, получавших кетопрофен с целью моделирования химического гастрита, их количество увеличивалось более значимо. При применении экспериментальной терапии омепразолом сохранялось увеличенное количество ЕС-клеток ДЭС в слизистой оболочке желудка.

Иммуногистохимическими методами установлено, что количество в-клеток, вырабатывающих гастрин, в эпителии слизистой оболочки желудка животных экспериментальных групп химическим гастритом и групп, получавших терапию антисекреторными средствами (на тестовой площади 0,042 мм2) достоверно увеличивалось по сравнению с контролем.

Согласно данным отечественных и зарубежных авторов, НПВП оказывают стимулирующее влияние на процессы секреции соляной кислоты, пепсиногена (Шептулин A.A., 2006) и гистамина (Peterson W.L., 1996). Эти факты и результаты наших исследований позволяют заключить что НПВП, прежде всего, оказывают стимулирующее влияние на секрецию гастрина, так как все вышеперечисленные эффекты могут быть связаны с его действием на клетки слизистой оболочки желудка. Гипергастринемия сопровождает химический гастрит (Salih В. et al., 2007, Martin D.F. et al., 2008) и может возникнуть в ответ на снижение кислотности желудочного содержимого, обусловленное действием антисекреторных средств (к числу которых относят и ингибиторы протонной помпы и блокаторы Н2-рецепторов гистамина), и даже привести к формированию очаговой гиперплазии G-клеток и развитии из их популяции злокачественного карциноида (Ивашкин В.Т., Шептулин A.A., 2001). Нельзя исключить, что выявленные закономерности в изменении числа ЕС-клеток в фундальных железах желудка слизистой оболочки желудка экспериментальных животных, непрерывно получавших омепразол в течение 21 дня, могут быть объяснены именно с этих позиций.

Кроме того, иммуногистохимическими методами установлено, что у животных, получавших омепразол, 1АПТ в эпителии слизистой оболочки желудка составил 8,92±0,27%, ИП -22,48±1,56%. Полученные данные могут свидетельствовать о его гастропротекторном действии на слизистую оболочку желудка и способности активировать процессы пролиферации обкладочных клеток и клеток некоторых популяций ДЭС.

При проведении гистологических исследований микропрепаратов слизистой оболочки желудка, окрашенных при помощи рутинных методов (гематоксилином и эозином, пикрофуксином по ван Гизону), мы обратили внимание на то, что визуально париетальные экзокриноциты в собственных железах желудка крыс, относящихся к разным экспериментальным группам, характеризуются вариабельностью по своим размерам, что нашло подтверждение в серии морфометрических исследований.

Согласно полученным данным, средние размеры париетальных экзокриноцитов и их ядер, определяемые по двум параметрам - диаметр клетки (ядра) и площадь поперечного сечения, у животных с химическим гастритом как при использовании нимесулида, так и при использовании кетопрофена, не отличались от средних размеров париетальных экзокриноцитов и их ядер у животных контрольной группы. Соответственно, не изменялось и ядерно-цитоплазматическое отношение. Между тем, в группах с экспериментальным химическим гастритом, получавших омепразол, отмечали достоверное по сравнению с интактными животными и с соответствующей группой с химическим гастритом увеличение размеров обкладочных клеток на фоне недостоверного изменения средних размеров их ядер, что отразилось на изменении ядерно-цитоплазматического отношения в этих группах.

При подсчете количества париетальных экзокриноцитов в концевых отделах фундальных желудочных желез в группах с химическим гастритом (как получавших кетопрофен, так и получавших нимесулид) выявлено преобладание обкладочных клеток над главными (р<0,05 по сравнению с интактными животными), что является морфологическим эквивалентом гиперацидного состояния. При проведении экспериментальной терапии омепразолом как у животных, получавших кетопрофен, так и животных, получавших нимесулид, количество обкладочных клеток оставалось увеличенным, но, поскольку площадь их поперечного сечения возростала, в ячейке сетки «5x5» их среднее количество было снижено по сравнению с соответствующими экспериментальными группами, не получавшими лечения, а также по сравнению с контролем.

Известно, что ингибиторы протонной помпы при химическом гастрите не только не всегда производят ожидаемый эффект, но и оказывают негативное влияние на слизистую оболочку желудка (Graham D. et al., 2002 г.). Их выраженный антисекреторный эффект, приводящий к ахлоргидрии, является фактором, ограничивающим длительное применение препаратов. Рядом современных научных работ установлено, что более или менее продолжительное использование препаратов этой

фармакологической группы приводит к гипертрофии и гиперплазии обкладочных клеток (Kato S. et al., 1994; Driman D.K. et al., 1996). Кроме того, дополнительно показано, что при длительном применении омепразола в

энтерохромаффиноподобных ECL-клетках, продуцирующих гистамин, развиваются структурные изменения (Nishi Т. et al., 2005). Причем, эти эффекты обнаружены при применении ингибиторов протонной помпы в терапевтических дозах (Kobayashi Н. et al., 1998). Наличие обратимой гипертрофии париетальных клеток выявляется уже спустя 3 месяца после приема пациентами лансопразола (Самсонов А.А., 2010).

При проведении гистологического исследования СОЖ животных, получавших в качестве средства экспериментальной терапии блокаторы Н2-рецепторов гистамина (фамотидин) дистрофические изменения эпителиоцитов в форме гиперхромии ядер эпителиоцитов ямок и вакуолизации их цитоплазмы нами отмечены в 33,33% случаев у животных с кетопрофеном и у 26,67% животных с нимесулидом. У 46,67% животных с химическим гастритом, обусловленным введением кетопрофена и 20% животных с химическим гастритом, вызванным использованием нимесулида, отмечали утолщение собственной и мышечной пластинок слизистой оболочки (0,0184±0,0035 мм). Отек подслизистой основы и полнокровие сосудов сохранялись у 33,33% животных, у которых в качестве раздражающего агента для моделирования химического гастрита был взят нестероидный противовоспалительный препарат кетопрофен, и у 40% животных в группе, получавшей нимесулид.

Установлено, что при использовании фамотидина в качестве антисекреторного средства наблюдается увеличенное по сравнению с интактными животными количество энтерохромаффинных клеток, выявляемых при окрашивании гистологических срезов нитратом серебра по Массону. При окрашивании по методу ШИК в слизистой оболочке животных с химическим гастритом, получавших фамотидин, выявляли типичное зональное распределение нейтральных

гликозаминогликанов в эпителии слизистой оболочки желудка в 100%) случаев. Тем не менее, при постановке метахроматических

реакций с альциановым синим у достаточно большого количества животных (73,33%) были выявлены признаки нарушения зонального распределения сиалогликопротеинов (при использовании альцианового синего с рН-2,5). При окрашивании альциановым синим с рН-1,0 признаки нарушения зонального распределения сульфомуцинов были обнаружены у 6 животных (40%).

Иммуногистохимическая оценка продукции гастрина на основании подсчета О-клеток в слизистой оболочке желудка экспериментальных животных с химическим гастритом, получавших фамотидин, показала, что количество О-клеток на тестовую единицу площади в данной экспериментальной группе остается увеличенным, но в меньшей степени, чем при использовании ингибиторов протонной помпы.

При изучении процессов клеточной пролиферации и апоптоза у животных этой экспериментальной группы так же, как и в группах, получавших ингибиторы протонного насоса, выявлено некоторое повышение индекса апоптоза (1АПТ=8,22±0,18%) и индекса пролиферации (ИП=19,52±2,41%).

В группах, получавших фамотидин, так же, как и в группах с омепразолом, отмечали достоверное по сравнению с интактными животными и с соответствующей группой без экспериментальной терапии увеличение размеров париетальных экзокриноцитов на фоне незначительного изменения средних размеров ядер и достоверное увеличение ядерно-цитоплазматического отношения. При подсчете обкладочных клеток в концевых отделах фундальных желудочных желез на единицу площади установлено, что у животных, получавших фамотидин, их количество оставалось увеличенным. Возрастание площади их поперечного сечения сопровождалось снижением среднего количества париетальных клеток по сравнению с группами, не получавшими лечебных препаратов, а также по сравнению с интактными животными.

Таким образом, результаты проведенных экспериментальных исследований эффективности регуляции кислотно-пептического фактора при длительном использовании нестероидных противовоспалительных препаратов ингибиторами протонного насоса и блокаторами Н2-рецепторов гистамина позволяют сделать

вывод о том, что длительное применение фармакологических препаратов в качестве средств профилактики гиперацидных состояний, обусловленных приемом НПВГТ, не является оптимальным решением этого вопроса. В сложившейся ситуации необходим поиск дополнительных методов коррекции осложнений противовоспалительной терапии. Исходя из этого, нами проведен сравнительный анализ эффективности применения для профилактики гастродуоденальных осложнений не только традиционно используемых медикаментозных средств, но и комплекса пищевых волокон и короткоцепочечных жирных кислот - продукта «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами».

При проведении гистологических исследований слизистой оболочки желудка у животных, получавших с целью коррекции проявлений химического гастрита комплекс ферментированных пищевых волокон и короткоцепочечных жирных кислот «Рекицен-РД®», дистрофические изменения эпителиоцитов отмечали лишь в 20% случаев (п=3) у животных, получавших кетопрофен, и у 13,33% животных (п=2), получавших нимесулид. Тем не менее, в данной экспериментальной группе сохранялись сосудистые расстройства и утолщение собственной и мышечной пластинок слизистой оболочки желудка.

Количество париетальных экзокриноцитов и ЕС-клеток в фундальных железах желудка в группах с химическим гастритом, получавших в качестве патогенетического гастропротекторного средства «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами», оставалось увеличенным, но изменения по сравнению с контролем были недостоверны.

При использовании диеты, обогащенной пищевыми волокнами и короткоцепочечными жирными кислотами, мы наблюдали восстановление у животных с химическим гастритом зонального распределения муцинов, что подтверждалось гистохимическими методами. Установлено, что у животных с химическим гастритом при применении продукта «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» количество О-клеток, так же как и энтерохромаффинных ЕС-клеток, остается увеличенным, хотя некоторая тенденция к уменьшению их количества все же наблюдается (табл. 2, 3).

Таблица 2

Количество энтерохромаффинных ЕС-клеток в эпителии

СОЖ экспериментальных животных по группам _(на тестовой площади 0,042 мм2)_

Экспериментальная группа Количество энтерохромаффинных ЕС-клеток, п, М±ш

Интактные животные 0,64±0,075

Моделирование химического гастрита, нимесулид 3,31±0,126*

Моделирование химического гастрита, кетопрофен 5,68±0,542*

Моделирование химического гастрита, нимесулид, экспериментальная терапия омепразолом 2,95±0,043*

Моделирование химического гастрита, кетопрофен, экспериментальная терапия омепразолом 4,48±0,225*

Моделирование химического гастрита, нимесулид, экспериментальная терапия фамотидином 2,95±0,012

Моделирование химического гастрита, кетопрофен, экспериментальная терапия фамотидином 2,56±0,043

Моделирование химического гастрита, нимесулид, экспериментальная терапия «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» 2,675±0,846*

Моделирование химического гастрита, кетопрофен, экспериментальная терапия «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» 1,98±0,877

* р<0,05 по сравнению с интактными животными

Таблица 3

Количество в-клеток, продуцирующих гастрин, в эпителии СОЖ экспериментальных животных

(на тестовой площади 0,0^ 2 мм )

Экспериментальная группа Количество С-клеток, п, М±т

Интактные животные 8,945±1,003

Моделирование химического гастрита, нимесулид 10,6±0,733*

Моделирование химического гастрита, кетопрофен 11,10±0,767*

Моделирование химического гастрита, нимесулид, экспериментальная терапия омепразолом 10,50±0,859*

Моделирование химического гастрита, кетопрофен, экспериментальная терапия омепразолом 11,3±1,592*

Моделирование химического гастрита, нимесулид, экспериментальная терапия фамотидином 9,10±1,312

Моделирование химического гастрита, кетопрофен, экспериментальная терапия фамотидином 10,4±1,213*

Моделирование химического гастрита, нимесулид, экспериментальная терапия «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» 9,24±1,399

Моделирование химического гастрита, кетопрофен, экспериментальная терапия «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» 10,2±1,009*

* р<0,05 по сравнению с интактными животными

При иммуногистохимическом определении индекса пролиферации и индекса апоптоза установлено, что у животных, получавших экспериментальную терапию «Рекиценом-РД®», 1АПТ в эпителии СОЖ составил 5,88±0,67%, ИП=14,28±2,35%. Полученные данные коррелируют с гистологической картиной

нормальной слизистой оболочки желудка. Что касается увеличенного по сравнению с контролем количества эндокриноцитов, это может быть объяснено тем, что применение пищевых волокон и короткоцепочечных жирных кислот нормализует, прежде всего, процессы пролиферации и апоптоза в ямочном эпителии, но не устраняет других повреждающих эффектов НПВП, как это было показано ранее при применении рутинных гистологических методик.

В группах с экспериментальным химическим гастритом, получавших терапию «Рекиценом-РД®», отмечали сравнимые с показателями интактных животных и с соответствующей группой с химическим гастритом размеры париетальных экзокриноцитов и их ядер; изменения ядерно-цитоплазматического отношения в этих группах также отсутствовали. Тем не менее, в данной экспериментальной группе количество обкладочных клеток оставалось увеличенным по сравнению с контролем. По-видимому, это связано с тем, что, нормализуя процессы слизеобразования и оказывая непосредственное протективное действие в отношении эпителиоцитов слизистой оболочки желудка, пищевые волокна защищают эпителий от повреждающего действия как самих НПВП, так и от повышенной активности кислотно-пептического фактора, вызванной приемом НПВП. Тем не менее, не являясь средством регуляции желудочной секреции, комплекс ферментированных пищевых волокон и короткоцепочечных жирных кислот «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами», не способен уменьшить повышенную секрецию соляной кислоты и пищеварительных ферментов, о чем косвенно может свидетельствовать увеличенное по сравнению с группой интактных животных количество О-клеток в слизистой оболочке желудка.

При анализе эффективности сочетанного применения продукта «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами», как компонента функционального питания и омепразола в качестве средства патогенетической терапии, учитывая выявленные особенности их действия, мы решили исследовать терапевтическое эффект комбинации этих препаратов при разных схемах применения:

схема №1: по окончании моделирования химического гастрита (кетопрофен - п=7; нимесулид - п=8, 21 день) использовали сочетанное применение в терапевтических дозах омепразола и «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» в течение 28 дней;

схема №2: после моделирования химического гастрита (кетопрофен - п=7; нимесулид - п=8, 21 день) применяли одновременно в течение 7 дней, после чего продолжали давать животным только «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» в течение последующих 21 дня.

Гистологическое исследование выявило восстановление структурной организации эпителия. Сосудистых расстройств и дистрофических изменений не обнаружено. Количество обкладочных клеток в фундальных железах желудка на тестовую единицу площади в группе, получавшей схему №2, не было увеличенным по сравнению с контролем, а в группе, получавшей схему №1, их количество было уменьшено по сравнению с интактными животными.

У животных, получавших схему №1, в фундальных железах желудка выявлено статистически значимое увеличение по сравнению с контролем количества ЕС-клеток. В экспериментальной группе со схемой №2, количество ЕС-клеток не отличалось от контроля.

При использовании диеты, обогащенной пищевыми волокнами и короткоцепочечными жирными кислотами в сочетании с омепразолом, мы наблюдали восстановление у животных с химическим гастритом зонального распределения муцинов.

При применении у животных с химическим гастритом, схемы №1, количество G-клеток (рис. 7), так же как и энтерохромаффинных ЕС-клеток, оставалось увеличенным по сравнению с интактными животными (р<0,05). У животных, получавших схему №2, количество G-клеток не отличалось от количества таковых в группе контроля (рис. 8). У животных, получавших схему №1, 1АПТ - 8,15±0,33%, ИП - 21,32±1,47%; у животных, получавших схему №2, 1АПТ - 4,82±0,53%, ИП-12,33±1,42%.

Рис. 7. Эпителий желудочных желез в слизистой оболочке желудка животного, получавшего схему №1, выявление в-клеток. Об. 40, ок. 15

Рис. 8. Эпителии желудочных желез в слизистой оболочке желудка животного, получавшего схему № 2, выявление О-клеток. Об. 40, ок. 15

Таким образом, нормализацию процессов пролиферации, апоптоза и клеточных популяций эндокриноцитов в слизистой оболочке желудка экспериментальных животных мы получили, используя схему №2, тогда как процесс слизеобразования был восстановлен при применении обеих схем коррелирующей терапии.

В группе, получавшей схему №2, размеры обкладочных клеток не отличались от таковых в контроле. У животных, получавших схему №1, результаты цитоморфометрических показателей были аналогичны таковым в группе с омепразолом. В ней нами выявлено увеличение размеров париетальных экзокриноцитов и сдвиг ядерно-цитоплазматического отношения.

Итак, схема №2 является более эффективной в плане профилактики гастродуоденальных осложнений при проведении продолжительной противовоспалительной терапии, более или менее продолжительной. Непродолжительный прием ингибиторов протонной помпы обеспечивает нормализацию

кислотообразования и предотвращает повреждение слизистой оболочки желудка под действием соляной кислоты и пепсина, продуцируемых эпителиоцитами в избытке при данной ситуации, а

также под действием непосредственно самих НПВП. В то же время, непродолжительность приема ИПП ограничивает возможность развития нежелательных побочных эффектов от проводимой терапии. С другой стороны, длительное применение комплекса пищевых волокон и короткоцепочечных жирных кислот обеспечивает нормализацию слизеобразования в слизистой оболочке желудка, процессов пролиферации, апоптоза и нормализацию клеточных популяций дисперсной эндокринной системы.

ВЫВОДЫ

1. Разработанная экспериментальная модель, заключающаяся в пероральном введении нелинейным белым крысам нестероидного противовоспалительного препарата (кетопрофен, нимесулид) в сочетании с 5%-ным раствором аскорбиновой кислоты в течение 21 дня, позволяет воспроизвести изменения слизистой оболочки желудка, типичные для химического гастрита, вызванного длительным приемом нестероидных противовоспалительных препаратов.

2. При моделировании химического гастрита нестероидными противовоспалительными препаратами в эпителии слизистой оболочки желудка отмечается нарушение локализации нейтральных, кислых и сульфатированных гликозаминогликанов, активация процессов апоптоза и аномальная пролиферация эпителиоцитов в желудочных ямках.

3. Применение антисекреторных средств (ингибиторов протонной помпы и блокаторов Н2-рецепторов гистамина) для лечения животных с экспериментальным химическим гастритом, вызванным длительным приемом нестероидных противовоспалительных препаратов, способствует восстановлению целостности слизистой оболочки желудка, нивелированию сосудистых расстройств, нормализации зонального распределения муцинов, но приводит к гипертрофии париетальных экзокриноцитов и нарушению взаимоотношений в дисперсной эндокринной системе.

4. Комплекс ферментированных пищевых волокон и короткоцепочечных жирных кислот «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» нормализует процессы слизеобразования и защищает слизистую оболочку желудка как от повреждающего действия самих нестероидных противовоспалительных препаратов, так и от повышенной активности кислотно-пептического фактора, вызванной их приемом, но не способствует уменьшению гиперсекреции соляной кислоты и пищеварительных ферментов, о чем может свидетельствовать увеличенное по сравнению с контролем количество париетальных экзокриноцитов и эндокриноцитов О в слизистой оболочке желудка.

5. На основании сравнительного анализа различных схем терапии показаны преимущества короткого курса антисекреторных средств и последующего продолжительного применения продукта «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами». Схема №2 является оптимальной для профилактики гастродуоденальных осложнений при проведении противовоспалительной терапии, поскольку обеспечивает нормализацию кислотообразования и слизеобразования, а также процессов пролиферации, апоптоза и востановление корреляционных связей эндокриноцитов.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ

ВЫВОДОВ

1. Разработанная оригинальная экспериментальная модель химического гастрита предлагается к использованию для проведения доклинической апробации новых средств патогенетической терапии данной нозологической формы и изучения патогенеза поражения слизистой оболочки желудка при длительном приеме нестероидных противовоспалительных препаратов.

2. В комплексную терапию хронических гастритов, вызванных приемом нестероидных противовоспалительных препаратов, необходимо включать помимо традиционно

используемых антисекреторных средств комплекс пищевых волокон и короткоцепочечных жирных кислот «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами».

3. Рекомендуемая схема применения у животных продукта «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» при химическом гастрите, обусловленном длительным приемом нестероидных противовоспалительных препаратов: 10% суточного объема пищи одновременно с 7-ми дневным курсом терапии антисекреторным средством (омепразол) и последующим курсом в течение 21 дня.

4. Результаты диссертационного исследования могут быть использованы в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по внутренним незаразным болезням, гистологии, анатомии, патологической физиологии и оперативной хирургии, а так же в научных исследованиях и практической работе специалистов ветеринарного профиля.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Черанёва М.В. Моделирование и терапия НПВП-гастропатии / М.В. Черанёва, В.В. Неклюдова, П.В. Косарева, Е.И. Самоделкин // Современные наукоемкие технологии. - М., 2010. - №12. - С. 40-41.

2. Применение растительных ферментированных пищевых волокон и короткоцепочечных жирных кислот с целью устранения побочных эффектов нестероидных противовоспалительных препаратов / Е.И. Самоделкин, В.Ф. Кузнецов, М.В. Черанёва, В.В. Неклюдова, М.Н. Кульневская, П.В. Косарева, C.B. Никитин // Ученые записки Казанской ветеринарной академии им. Н.Э. Баумана, Казань, 2011. - Т. 208. - С. 140-145.

3. Черанёва М.В. Морфологические параметры слизистой оболочки желудка беспроводных белых крыс, используемых в эксперименте / М.В. Черанёва // Ученые

записки Казанской ветеринарной академии им. Н.Э. Баумана, Казань, 2011. - Т. 208. - С. 407- 412.

4. Кульневская М. Н. Способ моделирования гастропатии: патент на изобретение № 2424578 РФ / М.Н. Кульневская, В.В. Неклюдова, М.В. Черанёва, П.В. Косарева, Е.И. Самоделкин, В. А. Черешнев, Н.И. Аверьянова. №2009145268; заявлен 07.12.2009г.; зарегистрировано в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 20 июля 2011г.

5. Черанёва М.В. Моделирование, терапия и профилактика побочных эффектов применения нестероидных противовоспалительных препаратов при НПВП -гастропатии в эксперименте на животных / М.В. Черанёва // Ветеринария и кормление,- М., 2012. - №2. - С. 30-31.

Список сокращений, использованных в автореферате

ГАГ - гликозаминогликаны

ДЭС - дисперсная эндокринная система

ИП - индекс пролиферации

ИПП - ингибиторы протонной помпы

КЦЖК - короткоцепочечные жирные кислоты

НПВП — нестероидные противовоспалительные препараты

ПВ - пищевые волокна

СОЖ - слизистая оболочка желудка

СЦК - средний цитохимический коэффициент

1АПТ - индекс апоптоза

FasL - Fas Ligand

Отпечатано в типографии Екатеринбургской митрополии (г. Екатеринбург, ул. Репина, 6), тел.: 8 (343) 278-96-42 e-mail: baibakov@etel.ru http://orthodox.etel.ru Тираж 100 экз. Усл. печ. л. 1.0

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Черанёва, Мария Викторовна, Пермь

61 12-3/941

ФГБОУ ВПО «ПЕРМСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ

СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ИМЕНИ АКАДЕМИКА Д.Н. ПРЯНИШНИКОВА»

На правах рукописи

Черанёва Мария Викторовна

ВОСПРОИЗВЕДЕНИЕ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ И ТЕРАПИЯ ХИМИЧЕСКОГО ГАСТРИТА У ЖИВОТНЫХ

06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

Диссертация

на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Е.И. Самоделкин

Пермь, 2012

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИ................................................................6

ВВЕДЕНИ....................................................................................7

ГЛАВА 1. НАИБОЛЕЕ ЗНАЧИМЫЕ ЭТИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ И МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ВАРИАНТЫ ХРОНИЧЕСКОГО ГАСТРИТА У ЖИВОТНЫХ. ХИМИЧЕСКИЙ ГАСТРИТ В ПРАКТИКЕ ВЕТЕРИНАРНОГО ВРАЧА. МОДЕЛИРОВАНИЕ ХИМИЧЕСКОГО ГАСТРИТА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ НА ЖИВОТНЫХ. ПРОФИЛАКТИКА ПОРАЖЕНИЯ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ЖЕЛУДКА ПРИ ДЛИТЕЛЬНОМ ПРЕМЕНЕНИИ НЕСТЕРОИДНЫХ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ............................. 15

1.1. Этиологические и патогенетические факторы хронического гастрита и характер морфологических изменений слизистой оболочки желудка у животных. Место химического гастрита в структуре поражения слизистой оболочки желудка......................................................................... 15

1.2. Лечение и профилактика поражения слизистой оболочки желудка у животных, вызванного длительным применением нестероидных

противовоспалител ьны х препаратов.................................................. 39

1.3. Моделирование химического гастрита в эксперименте.....................44

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ................49

2.1. Общая характеристика материалов исследования...........................49

2.1.1. Характеристика экспериментального материала.................... 49

2.1.2. Характеристика препаратов, использованных в исследованиях 50

2.2. Основные методы исследования..................................................52

2.2.1. Моделирование НПВП-гастропатии в эксперименте.............. 52

2.2.2. Лабораторные методы, использованные в экспериментальных исследованиях......................................................................54

2.2.3. Методы статистической обработки материала......................58

ГЛАВА 3. ВОСПРОИЗВЕДЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО ГАСТРИТА В УСЛОВИЯХ ЭКСПЕРИМЕНТА................................................................... 60

3.1. Результаты гематологических исследований в экспериментальных группах при моделировании химического гастрита...............................60

3.2. Результаты гистологического, иммуногистохимического и морфометрического исследований...................................................68

3.2.1. Гистологическая, иммуногистохимическая и морфометрическая характеристика стенки желудка интактных животных...................68

3.2.2. Результаты гистологического, иммуногистохимического и морфометрического исследования стенки желудка крыс, получавших с целью моделирования химического гастрита в эксперименте нестероидный противовоспалительный препарат кетопрофен в сочетании с 5%-ным раствором аскорбиновой кислоты.................. 78

3.2.3. Результаты гистологического, иммуногистохимического и морфометрического исследования стенки желудка крыс, получавших с целью моделирования химического гастрита в эксперименте нестероидный противовоспалительный препарат нимесулид в сочетании с 5%-ным раствором аскорбиновой кислоты..................88

ГЛАВА 4. ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ РЕГУЛЯЦИЯ АКТИВНОСТИ КИСЛОТНО-ПЕПТИЧЕСКОГО ФАКТОРА ПРИ ДЛИТЕЛЬНОМ ПРИЕМЕ НЕСТЕРОИДНЫХ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ

ПРЕПАРАТОВ...........................................................................93

4.1. Результаты гистологического, гистохимического, иммуногистохимического и морфометрического исследований стенки желудка крыс с химическим гастритом, получавших в качестве экспериментальной терапии в течение 21 дня ингибиторы Н+- и К+, Ма+-АТФазы (омепразол)............................................................... 93

4.1.1. Результаты гистологического исследования.........................94

4.1.2. Результаты гистохимических исследований........................97

4.1.3. Результаты иммуногистохимического исследования............ 107

4.1.4. Результаты морфометрических исследований..................... ПО

4.2. Результаты гистологического, гистохимического, иммуногистохимического и морфометрического исследований стенки желудка крыс с химическим гастритом, получавших в качестве экспериментальной терапии в течение 21 дня блокаторы Н2-рецепторов гистамина (фамотидин)................................................................ 115

4.2.1. Результаты гистологического исследования.......................116

4.2.2. Результаты гистохимических исследований.......................117

4.2.3. Результаты иммуногистохимических исследований............. 119

4.2.4. Результаты морфометрических исследований..................... 120

ГЛАВА 5. ПРИМЕНЕНИЕ РАСТИТЕЛЬНЫХ ФЕРМЕНТИРОВАННЫХ ПИЩЕВЫХ ВОЛ ОКОН И КОРОТКОЦЕПОЧЕЧНЫХ ЖИРНЫХ КИСЛОТ С ЦЕЛЬЮ УСТРАНЕНИЯ ПОБОЧНЫХ ЭФФЕКТОВ НЕСТЕРОИДНЫХ

ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ..........................123

5.1. Результаты гистологического, гистохимического, иммуногистохимического и морфометрического исследований стенки желудка крыс с химическим гастритом, получавших в качестве компонента функционального питания «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» .... 123

5.1.1. Результаты гистологического исследования.......................124

5.1.2. Результаты гистохимических исследований....................... 127

5.1.3. Результаты иммуногистохимического исследования............ 132

5.1.4. Результаты морфометрических исследований.....................134

5.2. Результаты гистологического, гистохимического, иммуногистохимического и морфометрического исследований стенки

желудка крыс с химическим гастритом, получавших в качестве экспериментальной терапии омепразол и «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» ............................................................. 136

5.2.1. Результаты гистологического исследования....................... 137

5.2.2. Результаты гистохимических исследований....................... 138

5.2.3. Результаты иммуногистохимического исследования............ 141

5.2.4. Результаты морфометрических исследований..................... 143

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.................................................146

ВЫВОДЫ................................................................................171

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ

ВЫВОДОВ.............................................................................. 172

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ..........................................................174

СПИСОК СОКРАЩЕНИИ

ГАГ гликозаминогликаны

ДГР дуоденогастральный рефлюкс

ДПК двенадцатиперстная кишка

ДЭС дисперсная эндокринная система

ЖКТ желудочно-кишечный тракт

ИП индекс пролиферации

ИПП ингибиторы протонной помпы

КЦЖК короткоцепочечные жирные кислоты

НПВП нестероидные противовоспалительные препараты

НПВП-гастропатия поражение слизистой оболочки желудка,

индуцированное приемом нестероидных противовоспалительных препаратов

сож слизистая оболочка желудка

сцк средний цитохимический коэффициент

ФГДС фиброгастродуоденоскопия

цог циклооксигеназа

FasL Fas Ligand

HP Helicobacter pylori

1АПТ индекс апоптоза

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) относятся к числу наиболее распространенных лекарственных средств, часто назначаемых ветеринарными врачами для лечения костно-суставной патологии. При этом прием НПВП приводит к развитию острого гастрита через неделю после начала лечения практически в 100% случаев (Дроздов В.Н., 2005).

В настоящее время в РФ для применения животным доступно несколько препаратов из группы НПВП. Большая часть этих лекарственных средств предназначена для лечения людей. Традиционно назначаемыми медикаментами из этой группы являются: метамизол натрия (Metamizole sodium) - Анальгин, Баралгин® М, Максиган; ацетилсалициловая кислота (Acetylsalicylic acid) - Аспирин®; парацетамол (Paracetamol) - Панадол, Ацетаминофен; индометацин (Indometacin) - Метиндол; диклофенак (Diclofenac) - Вольтарен®, Диклонат® П, Ортофен; кеторолак (Ketorolac) -Кеторол®, Кетродол; кетопрофен (Ketoprofen) - Кетонал®, Кетофен; ведапрофен (Vedaprofen) - Квадрисол 5; карпрофен (Carprofen) - Римадил Р. Все перечисленные препараты обладают анальгетическим эффектом различной силы (Vidal, 2008; Видаль Ветеринар, 2011).

Побочные действия и осложнения от применения НПВП общеизвестны: снижение свертываемости крови, нарушение фильтрационной функции почек, гастриты, язвы желудка и кишечника, желудочные и кишечные кровотечения. Нередки случаи гибели животных из-за некорректного применения данных препаратов (особенно диклофенака, индометацина и кеторолака) (Albretsen J.C., 2002; Sharkey М. et al, 2006). Среди осложнений от приема НПВП чаще всего встречаются явления гастрита и желудочные кровотечения, клинически проявляющиеся острой нарастающей рвотой, обезвоживанием, анемией. Желудочное кровотечение - очень серьезная, опасная для жизни животного патология, требующая интенсивных лечебных мероприятий (Bergh M.S, Budsberg S.C., 2005).

К специальным НПВП, предназначенныем эксклюзивно для мелких домашних животных, относится ведапрофен (Квадрисол 5), кетопрофен (Кетофен) и карпрофен (Римадил Р) (Видаль Ветеринар, 2011).

Вопрос обезболивания животного возникает перед врачом также во время оперативного вмешательства и в послеоперационный период, при травмах и заболеваниях, сопровождающихся болью. Эффективное устранение острой боли у животных в домашних условиях практически невозможно. В нашей стране запрещено назначать и применять животным наркотические анальгетики - морфин (Morphine), фентанил (Fentanyl), Тримеперидин (Trimeperidine), являющиеся наиболее мощными препаратами для купирования боли (Машковский М.Д., 2010).

Известно, что реактивная гастропатия, развивающаяся вследствие дуодено-гастрального рефлюкса или употребления НПВП, является вторым наиболее распространенным гистологическим диагнозом, устанавливаемым при проведении биопсии желудка (Owen D.A. et al., 2003). Тем не менее, характеристика морфологических изменений в слизистой оболочке желудка (СОЖ) при гастритах, индуцированных длительным приемом НПВП, как у людей, так и у животных до настоящего времени остается неполной. Так, несмотря на то, что эрозивные процессы в СОЖ в течение долгого времени считались маркером НПВП-гастропатии, на сегодняшний день имеются данные, свидетельствующие о том, что ульцерогеные эффекты этой группы препаратов не являются облигатными и возникают далеко не во всех случаях (Козлова И.В. и др., 2006), в связи с чем этот вопрос остается открытым.

Вскрытие патогенеза химического гастрита, вызванного НПВП, у животных является базой для его эффективной профилактики. На сегодняшний день существуют различные способы нивелирования нежелательных эффектов применения НПВП при их длительном назначении животным.

Так, с 80-х годов прошлого века в целях профилактики НПВП-индуцированных гастропатий у людей и животных применяют мизопростол

- синтетический аналог простагландина Е, являющийся специфическим антагонистом негативного влияния НПВП на слизистую пищеварительного канала, а также ингибиторы протонной помпы (ИПП) - омепразол, лансопразол, пантопразол. Эти препараты оказались весьма эффективными для лечения и профилактики НПВП-индуцированных язв и эрозий, локализованных как в желудке, так и в двенадцатиперстной кишке. Кроме того, для профилактики химического гастрита, обусловленного приемом НПВП, животным назначают и блокаторы Н2-рецепторов гистамина (Clark D., 1994; Taha A. et al, 1998).

На фоне определенных проблем, связанных с применением антисекреторных средств при НПВП-индуцированных гастропатиях, в последнее время вновь отмечается повышение интереса к использованию гастропротекторов, в частности, коллоидного субцитрата висмута - как в качестве монотерапии, так и в комбинации с ИПП (Roth S.FI., 2001). В настоящее время в ветеринарии разработаны рекомендации по предупреждению ульцерогенного действия НПВП, согласно которым, наиболее эффективным режимом лечения считается двойная терапия, состоящая из любого блокатора протонной помпы и препаратов сукральфата.

Некоторые исследователи идут по пути использования принципиально новых технологий. Так, Nancy F. M. и Donald S.R, 1997, предложено использовать гидроксипрополцеллюлозу в качестве стабилизатора и адсорбента НПВП в ветеринарной практике (Nancy F. M, Donald S.R, 1997). Однако этот метод не получил широкого применения. Существование разнообразия предлагаемых методов профилактики НПВП-индуцированного гастрита у животных свидетельствует о том, что эта проблема до настоящего времени остается нерешенной.

В сложившихся условиях становится весьма актуальной и обоснованной разработка способов предотвращения реализации побочных эффектов при приеме НПВП в ветеринарной практике, основанная на подробном изучении

патогенеза химического гастрита, индуцированного длительным приемом нестероидных противовоспалительных препаратов.

Цель исследования: разработать экспериментальную модель химического гастрита, вызванного приемом нестероидных противовоспалительных препаратов, и апробировать новые способы его профилактики.

Задачи исследования:

1. Разработать экспериментальную модель химического гастрита, вызванного длительным приемом нестероидных противовоспалительных препаратов.

2. Изучить структурные и функциональные изменения в слизистой оболочке желудка при химическом гастрите у животных.

3. На разработанной экспериментальной модели оценить эффективность антисекреторных препаратов в отношении нормализации структурно-функциональных характеристик слизистой оболочки желудка.

4. Изучить в эксперименте эффективность применения диеты с высоким содержанием метаболизированных пищевых волокон в комплексном лечении животных с химическим гастритом.

Положения, выносимые на защиту:

1. Разработанная модель позволяет воспроизвести в эксперименте изменения слизистой оболочки желудка, типичные для химического гастрита, вызванного длительным использованием нестероидных противовоспалительных препаратов.

2. Химический гастрит, обусловленный приемом нестероидных противовоспалительных препаратов, сопровождается активацией процессов апоптоза в эпителии слизистой оболочки желудка, аномальной пролиферацией эпителиоцитов в желудочных ямках и нарушением зонального распределения гликозаминогликанов.

3. Применение антисекреторных препаратов для терапии химического гастрита у животных способствует восстановлению целостности слизистой оболочки желудка, нивелированию сосудистых расстройств, нормализации распределения муцинов, с другой стороны - вызывает гипертрофию обкладочных клеток и нарушение взаимоотношений в дисперсной эндокринной системе.

4. Использование в эксперименте диеты с высоким содержанием метаболизированных пищевых волокон способствует эффективной регрессии структурно-функциональных изменений слизистой оболочки желудка при применении нестероидных противовоспалительных препаратов.

Научная новизна. Разработана экспериментальная модель химического гастрита, позволяющая выявить структурно-функциональные изменения в слизистой оболочке желудка у животных при длительном применении нестероидных противовоспалительных препаратов. Впервые иммуногистохимическими исследованиями установлено, что химический гастрит у животных сопровождается активацией процессов апоптоза и аномальной пролиферацией эпителиоцитов в желудочных ямках, а также нарушением секреции муцина М1 эпителиоцитами и пролиферацией эндокриноцитов G в эпителии слизистой оболочки желудка. На основании изучения процессов апоптоза в эпителии слизистой оболочки желудка, установлена экспрессия Fas Ligand, конъюгированного с Fas рецептором, что находит подтверждение в отсутствии лимфоцитарной инфильтрации собственной пластинки слизистой оболочки желудка.

Гистохимическими исследованиями обнаружено нарушение зонального распределения нейтральных, кислых и сульфатированных гликозаминогликанов (ГАГ) и пролиферация эндокриноцитов ЕС в эпителии слизистой оболочки желудка при длительном использовании НПВП.

Установлено, что применение антисекреторных средств (ингибиторов протонной помпы и блокаторов Н2-рецепторов гистамина) для лечения

животных с химическим гастритом, индуцированным нестероидными противовоспалительными препаратами, способствует восстановлению целостности слизистой оболочки желудка, нивелированию сосудистых расстройств, нормализации зонального распределения муцинов, но приводит к гипертрофии париетальных экзокриноцитов и нарушению взаимоотношений в дисперсной эндокринной системе.

Разработан и научно обоснован оптимальный способ применения комплекса метаболизированных пищевых волокон и короткой епочечных жирных кислот «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» для профилактики гастродуоденальных осложнений при проведении противовоспалительной терапии у животных.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты эксперимента позволяют расширить представление о патогенезе химического гастрита у животных, обусловленного применением нестероидных противовоспалительных препаратов, и определить оптима�