Эколого-географические особенности листерионосительства в ихтиофауне акватории Иваньковского водохранилища

Воронин, Михаил Сергеевич

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Эколого-географические особенности листерионосительства в ихтиофауне акватории Иваньковского водохранилища
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Эколого-географические особенности листерионосительства в ихтиофауне акватории Иваньковского водохранилища"

На правах рукописи

4846321 /

ВОРОНИН МИХАИЛ СЕРГЕЕВИЧ

Эколого-географические особенности листерионосительства в ихтиофауне акватории Иваньковского водохранилища

06.02.02 Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

1 2 МАЙ 2011

Покров-2011

4846321

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной вирусологии и микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии) и Национальном парке «Завидово» Тверской области.

Научный руководитель:

кандидат ветеринарных наук Егорова Ирина Юрьевна

(ГНУ ВНИИВВиМ

Россельхозакадемии)

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор Русалеев Владимир Сергеевич (ФГУ ВНИИЗЖ)

кандидат биологических наук Щелкунов Игорь Степанович

(ГНУ ВНИИВВиМ

Россельхозакадемии)

Ведущая организация: Государственное научное

учреждение Всероссийский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко, г. Москва

Защита диссертации состоится «19» мая 2011 г. в «Ю00» часов на заседании диссертационного совета при ГНУ Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной вирусологии и микробиологии I Россельхозакадемии по адресу: 601120, Владимирская обл., Покров, ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии. Тел/факс: (49243) 62125.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии.

Автореферат разослан «14» апреля 2011 г. и размещен на официальном сайте ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии www.vniiwim.ru.

Ученый секретарь диссертационного совета, ГНУ ВНИИВВИМ Россельхозакадемии кандидат биологических наук

Е.А. Балашова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Листериоз является актуальной проблемой в системе эпидемиологического и эпизоотологического надзора за инфекционными болезнями в Российской Федерации. Его природная очаговость и широкое распространение возбудителя в окружающей среде требуют к себе пристального внимания специалистов ветеринарной сети.

За последние 25 лет сформировалась новая группа болезней известных как пищевые токсикоинфекции человека, к которым относится и листериоз. Установлено, что большинство вспышек пищевого листериоза человека связано с потреблением контаминированной продукции, в том числе и рыбной.

Большинство работ отечественных и зарубежных исследователей посвящены изучению контаминации готовой продукции и полуфабрикатов. Так, например, корюшка, вылавливаемая весной вблизи Санкт-Петербурга, заражена патогенными листериями на 10%. При последующей транспортировке и сортировке доля зараженной рыбы возрастает до 30%. К моменту реализации в торговой сети доля зараженного улова достигает 40% [Л.Б. Мухина, Е.Ю. Дмитриева, 2002].

В то же время, наибольший научный и практический интерес представляет изучение вопросов естественного листерионосительства как пресноводной, так и морской рыбы. Исследованию этого вопроса на территории РФ посвящены единичные работы [Е.А. Зайцева и др., 2002; Л.Б. Мухина, Е.Ю. Дмитриева, 2002; И.А. Беленева, Э.Ф. Масленникова, 2002 и ДР-]-

Считается, что эколого-географические особенности территории являются важным фактором в развитии эпизоотического процесса [C.B. Кашапова, 2007; А.Ю. Бондарев, 2010J.B этой связи особый интерес представляет Иваньковское водохранилище, в котором созданы все условия для обитания представителей аквафауны различных видов. В частности, в

нем обитает 34 вида рыб. Конаковский район, на территории которого

размещается большая часть водохранилища, занимает в Тверской области второе место по численности населения и объему промышленного производства, третье - по объему сельскохозяйственного производства, что, безусловно, оказывает влияние на экологию самого водохранилища.

До 1960 года государственного контроля за эпизоотическим состоянием рыб, обитающих в естественных водоемах и выращиваемых в рыбоводных хозяйствах, не существовало, а осуществляемый в настоящее время надзор не включает контроль водоемов и их обитателей на наличие листерий.

Таким образом, учитывая вышеизложенное, становится очевидной необходимость проведения более детальных исследований по изучению особенностей распространения листерий в ихтиофауне Иваньковского водохранилища, являющегося источником питьевой воды г. Москва.

Степень разработанности проблемы

Изучению вопросов контаминации рыбы и рыбных полуфабрикатов были посвящены работы как отечественных, так и зарубежных ученых - R. Fuchs, Р. Surendran (1989), Е. 3. Ермолаева, Е. В. Карасева, Н. В. Степанова, (1997), Л.Б.Мухина, Е.Ю. Дмитриева, Э.Б. Борисовская (2003), G. Wulff et al„ (2006) и др.

Имеющиеся данные свидетельствуют о том, что листерии в разные годы изолировали из речной воды и бентоса, от морского гребешка, морской звезды, морского ежа, камбалы, наваги, корюшки, волосозуба, форели, горбуши, культивируемых мидий, ракообразных, устриц, лягушек [N. Stamatin, 1957; V. Roska, 1962; Шарма Р. К., 1999; Е.А. Зайцева и др., 2002; И.А. Беленева, Э.Ф. Масленникова, 2002; Г.Л. Сомов и др., 2002; Л.Б. Мухина с соавт., 2003; Е.А.Зайцева, 2010; К. Todar, 2004; Н. Miettinen, G. Wirtanen, 2005;В.Е. Терехова и др., 2006 и др.].

В основном большинство работ, проводимых на территории РФ, посвящены изучению вопросов естественной зараженности морских гидробионтов и искусственно культивируемых моллюсков. Сведения о распространении листерий в пресных водоемах ЦФО РФ у представителей

ихтиофауны, а также их биологических и генетических характеристиках в доступной литературе отсутствуют.

Цель и задачи исследований

Целью данной работы являлось выявление особенностей листерионосительства в популяциях рыб Иваньковского водохранилища и установление источников поступления листерий в аквафауну на примере Шошинского плеса.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить климато-географические и экологические особенности Шошинского плеса Иваньковского водохранилища;

2. Определить распространение листерий в ихтиофауне Шошинского плеса;

3. Выявить преимущественные места локализации листерий в различных органах пресноводной рыбы и изучить частоту выявления листерионосителей в различные сезоны года;

4. Установить источники поступления листерий в аквафауну Иваньковского водохранилища;

5. Изучить в сравнительном аспекте фенотипические и генетические характеристики выделенных изолятов Listeria monocytogenes;

6. Выявить ведущие клональные варианты L. monocytogenes, циркулирующие в популяциях рыб Иваньковского водохранилища;

7. Разработать на основе полученных данных рекомендации по предупреждению распространения листерий в аквафауне пресноводных водоемов.

Научная новизна работы

Впервые установлены особенности циркуляции листерий патогенных и непатогенных видов в ихтиофауне Шошинского плеса Иваньковского водохранилища..

Установлены источники поступления листерий в аквафауну

Иваньковского водохранилища.

Выявлена циркуляция трех клональных вариантов L. monocytogenes в популяциях рыб Иваньковского водохранилища.

Практическая значимость результатов исследования

1. На основе результатов исследований разработаны «Методические рекомендации по отбору проб и предупреждению распространения листерий в аквафауне пресноводных водоемов (на примере Шошинского плеса Иваньковского водохранилища)», рассмотренные на секции «Инфекционная патология» отделения Ветеринарной медицины Россельхозакадемии 30.09.2010 г. и утвержденные академиком-секретарем РАСХН А. М. Смирновым 24.11.2010 г.

2. Определены критические точки отбора проб гидробионтов при проведении мониторинговых исследований на листерионосительство.

3. Составлена карта-схема Шошинского плеса Иваньковского водохранилища с указанием расположения точек обнаружения патогенных листерий в популяциях рыб.

Основные положения диссертационной работы, выдвигаемые на защиту

Экспериментальные данные особенностей листерионосительства в популяциях рыб Шошинского плеса Иваньковского водохранилища.

Экспериментальные данные о циркуляции различных клональных вариантов L. monocytogenes в популяциях пресноводной рыбы.

Пути реализации

Результаты исследований могут быть использованы при проведении мониторинговых исследований на территории пресноводных водоемов в других регионах РФ, в учебно-педагогическом процессе при подготовке специалистов биологических, медицинских и ветеринарных профессий, а также курсах повышения квалификации ветеринарных специалистов.

Апробация и публикация результатов

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях Ученого совета ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии и Научно-технического совета Национального парка «Завидово» ФСО РФ (2007-2009 гг.).

Материалы диссертации представлены и доложены на XVI Московском международном конгрессе по болезням мелких домашних животных (Москва, 2008); Международной научно-практической конференции «Проблемы аграрной науки и образования» (Тверь, 2008), XVII международном симпозиуме по проблеме листериоза (г. Порто, Португалия, 2010).

По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе 1 статья в журнале «Ветеринария» и I статья в «Докладах Российской академии сельскохозяйственных наук», включенных в перечень изданий, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ.

Личный вклад автора в выполнении работы

Основной объем исследований проведен автором самостоятельно. При исследовании материала на контаминацию листериями, изучении биологических свойств выделенных изолятов консультативную и практическую помощь оказывали сотрудники ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии: зав. лабораторией Бактериологии, к.в.н. И. Ю. Егорова; при проведении молекулярно-генетических исследований - зав. лабораторией Экспериментальной микробиологии, д.б.н., профессор Ю. О. Селянинов, при определении размерно-возрастных характеристик рыбы -сотрудник Национального парка «Завидово» к.б.н. Н. А. Полякова, при организации проведения работ - зам. начальника Госкомплекса «Завидово», д.б.н., профессор В. И. Фертиков, за что автор выражает свою искреннюю признательность и благодарность.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов,

практических предложений и списка использованной литературы. Работа изложена на 93 страницах машинописного текста, содержит 13 таблиц, 9 рисунков. Список цитированной литературы включает 130 источников, из которых 31 иностранных авторов.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа выполнена на базе Национального парка «Завидово», лабораторий «Бактериологии» и «Экспериментальной микробиологии» ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии.

В качестве объектов для исследования использовали 966 проб различных образцов, включающих: пресноводную рыбу, моллюсков, членистоногих, полуводных млекопитающих отряда грызунов, дикую птицу, водную растительность, поверхностные слои речной воды, донные отложения, трупы затонувших диких животных. Отбор проб проводили в период с декабря 2006 года по II квартал 2010 года в различные сезоны года.

Всего на листерионосительство исследовано 862 экземпляра рыбы, принадлежащей к 19 различным видам, из которых 8 видов являлись хищными, 2 вида растительноядными и 9 видов представлены особями со смешанным типом питания. Видовой состав рыбы, подвергнутой исследованию, и их тип питания приведены в табл. 1.

Отбор проб воды, водной растительности, гибробионтов, донных отложений проводили в соответствие с ГОСТ Р 51592-2000 Вода. Общие требования к отбору проб. Пробы воды, донных отложений и водной растительности отбирали с глубин от 1 до 2 метров в разные сезоны года. Одновременно при отборе проб воды производили замер температуры воды.

Таблица i Видовой состав рыбы, подвергнутой исследованию на листерионосительство

№ л/п Вид рыбы Тип питания Количество экземпляров Доля от общего количества проб, %

1. Судак обыкновенный (Stizostedion lucioperca) хищник 15 1,7

2. Щука обыкновенная (Esox lucius) хищник 41 4,8

3. Окунь обыкновенный (Perca fluviatilis) хищник 137 15,9

4. Ерш обыкновенный (Gymnocephalus cernua) хищник 13 1,5

5. Белый амур Ctenopharyngodon idella) растительноядный 7 0,8

6. Толстолобик пестрый (Aristichthys nobilis) растительноядный 9 1,0

7. Карась и дикие гибриды Carassius sp. смешанный 88 10,2

8. Карп (Cyprinus carpió L.) смешанный 25 2,9

9. Лещ (Abramis brama) смешанный 287 33,3

10. Красноперка (Scardinius erythrophthalmus) смешанный 131 15,2

11. Густера (Blicca bjoerkna) смешанный 64 7,4

12. Плотва (Rutilus rutilus) смешанный 22 2,6

13. Другие виды* 23 2,7

Примечание: * - количество исследованных образцов менее 6.

Определение рода и вида отловленной рыбы проводили по атласам-определителям [H.A. Мягков, 1994; Е.Д. Васильева, 2004; Ю. С. Решетников, 1989]. Возраст рыбы определяли по методике, описанной И.Ф. Правдиным (1966). До транспортировки материала в лабораторию ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии он подвергался замораживанию при температуре минус 18°С.

Физико-химический анализ воды проводили в соответствии с ОСТ 155372-87 на базе гидрохимической лаборатории ГФУП по ЭИВ «Центрводхоз» (г. Конаково, Тверская область).

Отлов полуводных млекопитающих проводили путем расстановки капканов типа КПН 140. Дикую птицу отстреливали при проведении

мониторинговых исследований на вирусные и бактериальные болезни, в том числе и на листериоз. Для исследования отбирали пробы паренхиматозных органов, сердце с кровью и помет.

Сбор трупов затонувших диких животных и отбор от них материала проводили в весенний период после освобождения водоема от льда.

Исследование проб на наличие листерий, идентификацию выделенных культур, изучение культурально-морфологических, биохимических, серологических свойств проводили в соответствие с «Методическими рекомендациями по лабораторной диагностике листериоза животных и людей» (Москва, 1996) и МУК 4.2.1122-02 «Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Организация контроля и методы выявления бактерий Listeria monocytogenes в пищевых продуктах».

Чувствительность культур к антибактериальным препаратам выявляли в соответствии с МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам»

Патогенность культур определяли постановкой качественного теста -кератоконъюнктивальной пробы на морских свинках живой массой 300-400 г, которых получали из сектора подготовки подопытных животных ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии.

Выделение бактериальной ДНК для постановки ПЦР проводили методом нуклеосорбции с использованием коммерческого «Набора ДНК-сорб» (ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, Москва) по алгоритму, описанному в инструкции. Постановку ПЦР осуществляли с использованием коммерческой ПЦР тест-системы «Листер» (Интерлабсервис, Москва) согласно инструкции по применению.

Геномный полиморфизм изучали методом рестрикционного анализа и разделения фрагментов рестрикции электрофорезом в пульсирующем поле (REA PFGE) с использованием набора реагентов GENPATH (BIO-RAD). Выделение ДНК проводили в блоках агарозы согласно инструкции фирмы-изготовителя набора. Для расщепления ДНК исследуемых культур

использовали эндонуклеазы рестрикции Sma I и Ара I.

Фрагменты ДНК разделяли в 1% геле агарозы электрофорезом в пульсирующем поле на аппарате CHEF Mapper TM (BIO-RAD) в течение 1820 часов при 6 v/cm. Документирование изображения проводили с помощью системы BioRad и анализировали в программе Gel-Pro 3.1.

Степень различия рестрикционных профилей оценивали по числу общих и различающихся фрагментов с вычислением коэффициента Дайса (Dice's distance):

Dij=l-2C/(Ni+Nj)

где С - число полос, общих для культур I и J; N - общее число полос в культурах I и J, соответственно.

Анализ и статистическую обработку полученных результатов проводили общепринятыми методами, используемыми в биологии [Г.Ф. Лакин, 1980]. При обработке результатов использовали пакет прикладных программ Statgraphics, версия 2.1.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1 Климато-географическая и экологическая характеристика Шошинского плеса Иваньковского водохранилища

Шошинский плес является одним из самых мелководных плесов Иваньковского водохранилища, средняя глубина составляет 1,7 м, протяженность 36 км, а средняя ширина 4,0 км.

Климат умеренно-континентальный со сменой циклональной и антициклональной ситуаций в течение года. Среднегодовая величина радиационного баланса для исследуемой территории равна 33,1 ккал/см2, среднегодовая температура воздуха составляет 3,8°С. Для гидродинамического режима плеса в летний период характерны небольшие скорости течения, наличие, наряду со стоковыми течениями, циркуляционных зон в расширениях плеса, противотечений устьевой части. В навигационный период средние скорости течения не превышают 0,06 м/с. Наполнение Шошинского плёса осуществляется водами реки Шоши и её

основными притоками: реками Ламой, Инюхой, Котевлей. В свою очередь, в Ламу впадает Яуза, которая в своем верховье принимает воды Ивановского ручья, вытекающего из болот.

По физико-химическому составу воды Шошинского плеса относятся к слабо-щелочным, со средней жесткостью. В целом, по показателям pH, температурного фактора, жесткости, концентрации основных ионов и минерализации вода плеса удовлетворяет требованиям, предъявляемым к воде водоемов рыбохозяйственного использования. Прогрев воды и мелководность плеса способствуют его интенсивному зарастанию высшей водной растительностью, которая занимает до 30% акватории. Наибольшее распространение присуще формации телореза алоэвидного, который служит кормовой базой основным видам растительноядной рыбы. Общая площадь зарастания водной растительностью Шошинского плеса составляет 6064 гектара.

Наблюдения за распределением основных видов рыб в Иваньковском водохранилище показали, что в Шошинском плесе они распространены повсеместно и лишь при неблагоприятном кислородном режиме в зимнее время наблюдается их миграция в верхние участки рек Ламы и Шоши, где имеются благоприятные условия для зимовки. К весне рыба скатывается опять в плес к основным местам нерестилищ. Ихтиофауна формируется в основном из рыб Волжского бассейна и представлена двадцатью восемью видами рыб. Из хищников преобладает щука обыкновенная (Esox lucius), из растительноядных - толстолобик пестрый (Aristichthys nobilis), а со смешанным типом питания - лещ (Abramis brama) и густера (Blicca bjoerkna).

В прибрежной зоне акватории Иваньковского водохранилища расположены очистные сооружения, птицеводческая и свиноводческая фермы, подкормочные площадки с выходом диких животных к водопою.

3.2 Изучение распространения листерий в аквафауне Шошинского плеса Иваньковского водохранилища

Всего от рыбы за весь период наблюдений изолировали 52 культуры

листерий, из которых 7 культур принадлежало к виду L. monocytogenes, а 45 -к виду L. innocua. Частота выделения листерий от общего числа проб составила 6,0 %, из них на долю L. monocytogenes пришлось 0,8% всех случаев.

Листерии обоих видов выделили как от хищной, так и от растительноядной рыбы и рыбы со смешанным типом питания. Культуры патогенного вида L. monocytogenes в 2006 - 2008 г.г. изолировали преимущественно от таких рыб, как лещ, карась, густера и окунь. Культуры непатогенного вида L. innocua выделили от леща, щуки, густеры, красноперки, карася, и окуня, выловленных в период с 2007 по 2009 года (табл. 2).

Таблица 2 Частота выделения листерий от различных видов рыб

Вид рыбы L. monocytogenes L. innocua

Количество Доля от Количество Доля от

обнаруженных общего обнаруженных общего

листерио- числа проб листерио- числа проб

носителей данного носителеи данного

вида рыб, % вида рыб, %

Лещ 2 0,69 7 2,4

Густера 1 1,6 6 9,4

Карась 2 2,3 2 2,3

Красноперка 0 0 9 6,9

Щука 0 0 4 9,8

обыкновенная

Окунь 2 1,45 3 2,2

обыкновенный

L. innocua обнаруживали в рыбе, выловленной в трех из 4-х рек (Лама,

Шоша, Котевля), формирующих бассейн Шошинского плеса, в то время как L. monocytogenes изолировали от рыб, обитающих в реках Шоша и Котевля.

Максимальное количество, как патогенных, так и непатогенных изолятов листерий выделили из рыбы, выловленной в реке Котевля - 30 культур. При нанесении на карту точек, в которых были выявлены листерионосители, установлено, что большинство из них обнаружены в местах расположения на берегах реки Котевля (п. Козлово) птицеводческой

фермы и очистных сооружений.

При проведении предварительного контроля вселяемой молоди рыб, завезенной из Липецкой области, было установлено носительство последними листерий непатогенного вида - L. innocua. У 5-ти из 6 образцов вселяемой молоди толстолобика пестрого и 100% (8 экземпляров рыбы) вселяемой молоди карпа обнаружено носительство листерий непатогенных видов.

Какой-либо зависимости частоты выделения листерий от вида рыбы и ее возрастом не обнаружено. Листерии изолировали от рыб всех возрастных групп - от 1 года до 9 лет (максимальный возраст исследованной рыбы).

3.2.1 Изучение частоты изоляции листерий из различных органов рыбы

Для изучения тропизма листерий у рыб исследованию подвергали следующие органы и ткани: жаберные лепестки, кожу, освобожденную от чешуи, печень, селезенку, кишечник с его содержимым, а также молоки и икру. Кроме того, принимая во внимание, что по данным литературы некоторые патогенные бактерии способны к персистенции в организме ленточных и круглых гельминтов [Ю.Н. Романцева, 2009], дополнительно исследовали экземпляры ленточных гельминтов (Ligiila intestinalis), отобранных от 57 экземпляров рыбы, пораженной лигулезом.

Изоляция листерий из различных органов представлена на рис. 1.

п=52

внутр. органм 13%

енутр. органы 14%

■ ■ . : '

ткань

3954

ПОКрСБЫ

47%

А В

Рисунок I Частота обнаружения культур L monocytogenes (А) и L. innocua (В) в органах рыбы

Наиболее часто культуры листерий патогенных и непатогенных видов выделяли из кожных покровов рыб (в 50% случаев - L. monocytogenes и в 47,0% случаев L. innocua), затем в 37,0 - 39% случаев - из жаберных лепестков ив 13,0 - 14,5% случаев - из органов кровотока и кишечника соответственно.

Из икры, молок рыбы, гомогената Ligula intestinalis листерии как патогенных, так и непатогенных видов не были изолированы.

3.2.2 Изучение частоты изоляции листерий в различные сезоны

года

Какой-либо закономерности в сезонности листериносительства у рыб не выявили. Листерионосителей обнаруживали во все сезоны года. Однако, необходимо отметить, что наиболее часто носителей листерий патогенных и непатогенных видов обнаруживали среди особей рыб, выловленных в летний период (40% всех положительных случаев), что, вероятно, объясняется наличием в этот период для листерий оптимальных условий для размножения и распространения.

3.2.3 Изучение распространения листерий в объектах внешней среды, среди представителей водной и полуводной фауны, трупах затонувших животных

Ранее нами было установлено, что одним из источников попадания листерий в водохранилище является вселение молоди рыб, зараженной листериями (разд. 3.3.2.1). Для установления дополнительных источников поступления листерий в аквафауну Шошинского плеса и их резервуаров нами отобрано и исследовано 104 различных пробы, включающие биологический материал от дикой перелетной птицы, полуводных млекопитающих отряда грызунов, моллюсков, членистоногих, донные отложения рек, водную растительность, поверхностные слои речной воды и трупы затонувших пятнистых оленей.

Из отобранных образцов придонного грунта, водной растительности,

представленной различными видами водорослей и полупогружными растениями, поверхностных слоев речной воды, членистоногих и моллюсков, биологического материала от дикой перелетной птицы и полуводных млекопитающих листерии изолированы не были.

При исследовании проб патологического материала (ножки диафрагмы, фрагмент печени и селезенки, содержимое желудка) от 34 трупов затонувших пятнистых оленей лишь в двух случаях были обнаружены либо листерии, либо их генетический материал. В одном случае в ПЦР в 20% суспензии, приготовленной из ножек диафрагмы трупа затонувшего пятнистого оленя, были выявлены специфические фрагменты генома L. monocytogenes (hly-ген), однако, при проведении последующего бактериологического исследования культуру изолировать не удалось. Во втором случае из содержимого желудка трупа затонувшего пятнистого оленя удалось выделить культуру L. innocua.

3.3 Изучение биологических свойств выделенных изолятов L. monocytogenes

Одним из компонентов микробиологического слежения за тем или иным возбудителем болезни является анализ коллекции выделенных изолятов, который в свою очередь позволяет выявить клональное распространение возбудителя и определить источник его заноса[В.Д. Беляков, Р.Х. Яфаев, 1989].

Методология исследования клонального распространения включает изучение изолятов по фенотипическим и генетическим признакам.

3.3.1 Изучение фенотипических признаков изолятов L. monocytogenes

Изучали следующие фенотипические признаки: культурально-морфологические свойства, способность вырабатывать каталазу, оксидазу, индол, H2S, гемолизины, фосфолипазу С, ферментировать углеводы и многоатомные спирты, антигенные и патогенные свойства. Перечень изучаемых изолятов представлен в табл. 3.

Таблица 3 Перечень изучаемых изолятов L. monocytogenes

№ п/п Условное обозначение изолята Объект выделения Место отлова рыбы

1. 69-06 лещ река Шоша

2. 71-06 густера река Шоша

3. 276в/о-07 карась река Шоша, о. Кабановское

4. 277ж-07 карась река Шоша, о. Кабановское

5. 311-07 окунь очистной канал сельскохозяйственных полей, река Котевля

6. 165-08 окунь очистной канал сельскохозяйственных полей, река Котевля

При изучении основных свойств выделенных изолятов L. monocytogenes установлено, что популяции всех культур листерий были представлены клетками палочковидной формы не образующих споры. При окраске мазков по Граму клетки окрашивались положительно - в синий цвет. На жидких питательных средах изоляты вызывали равномерное помутнение среды, а на твердых - формировали мелкие колонии в S-форме с голубоватым отливом.

Изучаемые изоляты обладали подвижностью при комнатной температуре (22±1)°С и, наоборот, были не подвижны при (37±1)°С.

По способности продуцировать оксидазу, H2S, индол, каталазу, окислять и ферментировать глюкозу, отсутствию редукции цитратов на среде Симмонса, расщеплению мочевины на агаре Кристенсена и восстановлению нитратов до нитритов все изоляты не отличались между собой.

При изучении ферментативной активности углеводов и многоатомных спиртов также не выявлено существенных отличий: все они ферментировали глюкозу, мальтозу, рамнозу, салицин, эскулин и фруктозу, не разлагали манит, дульцит, арабинозу, инозит, сорбит, галактозу, ксилозу, раффинозу и глицерин. Изолят №165-08, выделенный от окуня, дополнительно ферментировал сахарозу.

Все изоляты вызывали лизис эритроцитов кролика по р-типу и

расщепляли фосфатидилхолининозитол, что подтверждало их принадлежность к патогенному виду. Это также подтверждено в опытах на морских свинках: все изоляты листерий вызывали формирование гнойного кератоконъюнктивита у морских свинок на 2 - 3-й сутки после инокуляции патогена и соответствовали по патогенности клинически значимым изолятам L. monocytogenes [Е.А. Зайцева, 2010].

Согласно данным литературы большинство культур L. monocytogenes, выделяемых на территории РФ от животных и гидробионтов, принадлежит к первой серологической группе [И.А. Бакулов и др., 2008; Е.А. Зайцева, 2010]. Результаты наших исследований также подтверждают эти данные. Все культуры агглютинировались в течение 3-х минут поливалентной сывороткой и сывороткой 1 серотипа и не вступали в специфическое взаимодействие с сывороткой 4 серотипа.

Типирование культур с помощью специфических листериозных бактериофагов также подтвердило принадлежность 4 из 6 исследуемых изолятов к I серогруппе - все они лизировались фагом L2A. Изолят №311-07, выделенный от окуня, не лизировался фагами L2A и L4A.

Одним из показателей антропогенного воздействия на адаптацию микроорганизмов принято считать формирование у последних лекарственной устойчивости. Работы последнего десятилетия показывают формирование устойчивости у листерий к препаратам следующих групп: цефалоспорины I и III поколений, фторхинолонам, ингибиторам фолиевой кислоты и др.

Результаты наших исследований по определению чувствительности

выделенных изолятов к антибактериальным препаратам (АБП),

принадлежащим к 11 группам: пенициллины, цефалоспорины,

аминогликозиды, хинолоны фторированные, макролиды, линкозамиды,

тетрациклины, гликопептиды, ингибиторы биосинтеза фолиевой кислоты,

полимиксины и бацитрацин - показали, что все без исключения изоляты

были чувствительны к испытанным АБП, за исключением полимиксина Б. К

препарату цефапоспоринового ряда (цефаклору) и бацитрацину все культуры

были малочувствительны.

3.3.2 Изучение генетических характеристик изолятов L. monocytogenes

Помимо мономорфных фенотипических признаков одни и те же клональные варианты L. monocytogenes должны обладать и генетической идентичностью. Поэтому на следующем этапе нашей работы были изучены генетические особенности изолятов методом REA PFGE с применением рестриктаз Smal и Apal.

При расщеплении геномной ДНК рестриктазами Smal и Apal и дальнейшем разделении фрагментов ДНК электрофорезом в пульсирующем поле в профилях рестрикции выявлялось от 18 до 21 фрагмента (рис. 2).

123456789 10 11 12 3456789 10

Z я— «V mm **

с 5- Щ ш»

ш в яр ш

т т 9

2 . • г ш • w

Щ ш

- ■ ... iS"» Я

Рисунок 2 Электрофореграмма разделения в пульсирующем поле Srna I -(А) и Ара I -(фрагментов ДНК изолятов L. monocytogenes

Треки: 1,11 - маркер; 2 - № 311-07; 3,6, 8 - изоляты, выделенные от диких животных; 4 - №276 в/о-07; 5 - №71-06; 7 - №69-06; 9 - №277ж-07; 10 - S, aureus.

Изоляты №№ 276в.о.-07 и 277ж-07, а также изоляты №№ 69-06 и 71-06 имели 100% сходство в распределении фрагментов рестрикционных профилей. Эти же изоляты между собой отличались по 10 (Apal) - 11 (Sma I) фрагментам, что свидетельствовало об их различном происхождении. От изолята № 311-07 изоляты №№ 276в.о.-07 и 277ж-07 отличались по 3 (Apal) -4 (Sma I) фрагментам, а изоляты №№ 69-06 и 71-06 - по 9 фрагментам.

Результаты оценки генетического родства изолятов L. monocytogenes с использованием коэффициента Дайса представлены в табл. 5Т

Таблица ^ Оценка степени генетического родства изолятов L. monocytogenes с использованием коэффициента Дайса (Sma I)

Условное обозначение изолята 69-06 71-06 276в/о-07 277ж-07 311-07 699-09

69-06 - 0 0,27 0,27 0,21 0,3

71-06 - 0,27 0,27 0,21 0,3

276в/0-07 - 0 0,09 0,17

277ж-07 - 0,09 0,17

311-07 - 0,07

Таблица 5~ Оценка степени генетического родства изолятов L. monocytogenes с использованием коэффициента Дайса (Ара I)

Условное обозначение изолята 69-06 71-06 276в/о-07 277ж-07 311-07 699-09

69-06 - 0 0,26 0,26 0,26 0,32

71-06 - 0,26 0,26 0,26 0,32

276в/0-07 - 0 0,11 0,17

277ж-07 - 0,11 0,17

311-07 - 0,06

На основании результатов изучения биологических свойств и вычисления коэффициента Дайса по результатам генетических исследований были выделены три клональных варианта L. monocytogenes, циркулирующих в Шошинском плесе. Первый клональный вариант был представлен

идентичными изолятами №№ 69-06 и 71-06, выделенными от густеры и леща, выловленных в реке Шоша. Второй - идентичными изолятами №№ 276в/о-07 и 277ж-07, изолированными от годовиков карася, обитающих в реке Шоша в районе о. Кабановское. Третий клональный вариант включал изолят № 31107, выделенный от окуня 2-х лет, выловленного в реке Котевля, причем этот клон был близкородственен первому клональному варианту (коэффициент Дайса равен 0,09).

Интересным на наш взгляд является факт выявления высокородственных изолятов L. monocytogenes (коэффициент Дайса 0,060,07), выделенных из фекалий пятнистого оленя, обитающего на территории Национального парка «Завидово» (при проведении мониторинговых исследований на листериоз) и окуня (изолят № 311-07), выловленного в реке Котевля (рис. 2, треки 2 и 3). Эти данные свидетельствуют о том, что одним из источников поступления листерий в аквафауну и заражения рыбы листериями могут являются фекалии диких животных.

ВЫВОДЫ

1. Климатические, географические и экологические факторы, сложившиеся в акватории Шошинского плеса Иваньковского водохранилища, способствуют созданию благоприятных условий для размножения листерий и поддержания стационарного очага листериоза.

2. В популяциях рыб Шошинского плеса циркулируют листерии как патогенных, так и непатогенных видов. Превалентность L. monocytogenes составила 0,8%, L. innocua - 5,2%.

3. Листерионосительство наблюдается как у растительноядных, так и хищных видов рыб. L. monocytogenes преимущественно изолировали от леща, карася, густеры и окуня, L. innocua - от леща, щуки, густеры, красноперки, карася и окуня.

4. Листерии патогенных и непатогенных видов преимущественно локализуются в кожных покровах (47,5 - 50% случаев) и жаберной ткани рыб (37,5 - 39% случаев).

5. Наибольшее количество листерионосителей в популяциях рыб Шошинского плеса Иваньковского водохранилища приходится на летний период.

6. Рыбы-листерионосители наиболее часто обнаруживаются вблизи мест прибрежного расположения очистных сооружений, животноводческих построек и подкормочных площадок для диких животных.

7. Установлено, что источниками поступления листерий в аквафауну Шошинского плеса помимо прочих могут являться вселение молоди рыбы, не прошедшей контроль на листерионосительство, и трупы затонувших диких животных-листерионосителей.

8. В популяциях рыб Шошинского плеса Иваньковского водохранилища циркулируют три клональных варианта L. monocytogenes, что свидетельствует о различных источниках заноса возбудителя.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. «Методические положения по отбору проб и предупреждению распространения листерий в аквафауне пресноводных водоемов (на примере Шошинского плеса Иваньковского водохранилища)», рассмотренные секцией «Инфекционная патология» отделения Ветеринарной медицины Россельхозакадемии 30.09.2010 г. и утвержденные академиком-секретарем РАСХН A.M. Смирновым 24.11.2010 г., рекомендуются в практику научно-исследовательских учреждений, заказников, заповедников, национальных парков, на территории которых имеются водоемы и позволяют снизить распространение листерий в ихтиофауне.

2. Материалы диссертации использованы при подготовке Информационного листка №69-001-11 «Эколого-географические особенности листерионосительства в ихтиофауне Иваньковского водохранилища», размещенного в базе данных «Промышленные инновации России».

3. Результаты исследований внедрены на пресноводных водоемах бассейна Иваньковского водохранилища; в учебный процесс ФГОУ ВПО

«Тверская государственная сельскохозяйственная академия» и используются при чтении курса лекций студентам 4-5 курсов обучения биотехнологического факультета и слушателям заочного отделения по специальности «Зоотехния».

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Беленева, И. А. Условно-патогенные бактерии, обнаруживаемые в культивируемых мидиях / И. А. Беленева, Э. Ф. Масленникова // Журнал микробиологии эпидемиологии и иммунологии. - 2002. - №.2. - С. 81-82.

2. Беляков, В. Д. Эпидемиология / В. Д. Беляков, P. X. Яфаев. - М.: Медицина, 1989.-416 с.

3. Бондарев, А.Ю. Мониторинг инфекционных болезней диких птиц в лесостепной области Алтайского края: автореф. дис. ... канд. вет. наук / Бондарев А.Ю. - Барнаул, 2010. - 23 с.

4. Васильева, Е. Д. Популярный атлас-определитель. Рыбы / Е. Д. Васильева. - М.: Дрофа, 2004. - 400 с.

5. Ермолаева, Е. 3. Мелкие млекопитающие - обитатели плодоовощных баз Москвы / Е. 3. Ермолаева, Е. В. Карасева, Н. В. Степанова // РЭТ-инфо. - 1997. - №4. - С. 2-9.

6. Зайцева, Е. А. Система анализа микробиологических и молекулярно-генетических маркеров для выявления высоковирулентных штаммов Listeria monocytogenes', дис. ... д-ра. мед. наук: 03.02.03. / Зайцева Е А.-М.,2010.-С. 10-312.

7. Изоляция Listeria monocytogenes из различных объектов в Приморском крае и их биологические свойства / Е. А. Зайцева, JI. С. Бузолева, В. Е. Терехова, Т. А. Глазырина, Г. П. Сомов // Эпидемиологические и инфекционные болезни. - 2002. - №1. - С. 47-49.

8. Кашапова, С.В. Эколого-географические особенности и этиологическая структура лептоспироза животных в Среднем Приобье: автореф. дис. ... канд. вет. наук / Кашапова С.В. - Барнаул, 2007. - 22 с.

9. Лакин, Г. Ф. Биометрия. Учеб. пособие для биол. спец. вузов.- 3-е

изд., перераб. и доп. / Г. Ф. Лакин. - М.: Высш. школа, 1980.- 293 с.

10. Листерии и листериоз / И. А. Бакулов, Д. А. Васильев, Ю. О. Селянинов, Д. В. Колбасов, Т. И. Кольпикова, И. Ю. Егорова. - Ульяновск: Color-Принт, 2008. - 168 с.

11. Льды Охотского моря как резервуар Listeria monocytogenes / В. Е. Терехова, Л. С. Бузолева, В. А. Соснин, Р. Б. Шакиров, Н. Бибоу, А. И. Обжиров, Е. П. Терехов, X. Соджи, Г. П. Сомов // Полар Биосайнс. Национальный Институт Полярных Исследований. - 2006. - Т.19. - С. 43-50.

12. Мухина, Л. Б. Возбудитель листериоза - показатель биологической опасности рыбной продукции / Л. Б. Мухина, Е. Ю. Дмитриева // Рыбное хозяйство. - 2002. - № 2. - С. 50-51.

13. Мухина, Л. Б. Методические рекомендации по выявлению возбудителя листериоза Listeria monocytogenes в рыбе и СПб рыбной продукции / Л. Б. Мухина, Е. Ю. Дмитриева, Э. Н. Борисовская. - СПб.: Моринтех, 2003.-28 с.

14. Мягков, Н. А. Атлас-определитель рыб: книга для учащихся / Н. А. Мягков. - М.: Просвещение, 1994. - 282 с.

15. Особенности экологии Listeria monocytogenes в океанской среде / Г. П. Сомов, В. Е. Терехова, Н. А. Айздайчер, Л. С. Бузолева, Е. А. Зайцева // Материалы VIII Всероссийского съезда эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, 26-28 марта. - М. - 2002. - Т.1. - С. 250.

16. Правдин, И. Ф. Руководство по изучению рыб (преимущественно пресноводных) / И. Ф. Правдин. - М.: Пищевая промышленность, 1966. - 376 с.

17. Пятиязычный словарь названий животных. Рыбы. Латинский — русский — английский — немецкий - французский / Ю. С. Решетников, А. Н. Котляр, Т. С. Расс, М. И. Шатуновский.- М.: Русский язык, 1989.- 733 с.

18. Романцева, Ю. Н. Этиология, характеристика микрофлоры и патоморфология при пневмониях маралов: автореф. дис. ... канд. вет. наук 16.00.03/ Румянцева Ю. Н. - Барнаул, 2009. - 22 с.

19. Шарма, Р. К. Совершенствование бактериологического анализа для индикации листерий в продуктах, импортированных в Россию: дис....канд. вет. наук: 16.00.03. / Шарма Р. К. - Покров, 1999. - 149 с.

20. Fuchs, R. S. Incidence of Listeria in tropical fish and fishery products / R. S. Fuchs, P. K. Surendran // Letters in Applied Microbiology. - 1989. - Vol. 9. -P. 49-51.

21. Infectia naturala cu Listeria monocytogenes la pastravul curcubeu Salmo irideus / N. Stamatin, C. Ungureanu, E. Constantinescu, A. Solnitzky, E. Vasilescu // Anuarul Inst. Anim. Pathol. Hyg. - 1957. - Vol. 7. - P. 163-180.

22. Miettinen, H. Prevalence and location of Listeria monocytogenes in farmed rainbow trout / H. Miettinen, G. Wirtanen // Int. J. Food Microbiol. - 2005. -Vol. 104.-P. 135-143.

23. One Group of Genetically Similar Listeria monocytogenes Strains Frequently Dominates and Persists in Several Fish Slaughter - and Smokehouses / G. Wulff, L. Gram, P. Ahrens, B.F. Vogel // Applied and environmental mycrobyology. -2006. - Vol. 3. - P. 4313-4322.

24. Roska, V. Identificarea Listeriosei la animalele activatice si in ара differitelor lazuri naturale / V. Roska // Communic Academici Rep. Popul. - 1962. -Vol. 12, №. l.-P. 87.

25. Todar, K. Listeria monocytogenes and Listeriosis / K. Todar. -Madison, Wisconsin: University Departmentof Bacteriology // SCIENCE Magazine. - 2004 [Электронный ресурс]. - URL: http://textbookofbacteriology.net/Listeria.html (дата обращения: 21.04.2010). -Загл. с экрана.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Воронин, М.С. Мониторинг L. monocytogenes в аквафауне Иваньковского водохранилища / М.С. Воронин, И.Ю. Егорова // XVI Московский Международный конгресс по болезням мелких домашних животных, 26-28 апреля 2008 г. - М., 2008. - С.131.

2. Воронин, М.С. Некоторые аспекты мониторинговых исследований ихтиофауны Иваньковского водохранилища / М.С. Воронин, И.Ю. Егорова // Проблемы аграрной науки и образования. Сборник научных трудов по материалам Международной научно-практической конференции, 3-5 июня 2008 г. Ч. 1. - Тверь: АГРОСФЕРА, 2008. - С.189-191.

3. Полякова, Н.А. Современное состояние и особенности в динамике рыбных запасов Шошинского плеса под влиянием некоторых факторов среды / Н.А. Полякова, М.С. Воронин // Национальный парк «Завидово» 80 лет (1929-2009). - М., 2009. - Вып.VII Юбилейные научные чтения.-С.124-132.

4. Егорова, И.Ю. К вопросу мониторинга листериоза в Шошинском плесе Иваньковского водохранилища / И.Ю. Егорова, М.С. Воронин // Национальный парк «Завидово» 80 лет (1929-2009). - М., 2009. - Вып. VII Юбилейные научные чтения. - С.133-134.

5. Егорова, И.Ю. Мониторинг листерий в водной фауне Иваньковского водохранилища / И.Ю. Егорова, Ю.О. Селянинов, М.С. Воронин // Ветеринария. - 2009,- № 8. - С. 29-31.

6. Бакулов, И.А. Распространение листерий в фауне Центрального региона России / И.А. Бакулов, И.Ю. Егорова, В.И. Фертиков, М.С. Воронин // Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2010. - № 1. -С.48-50.

7. Bakulov I.A., Spread of Listeria in Fauna of the Central Region of Russia/ I.Yu. Egorova, V.I. Fertikov, M.S. Voronin // Russian Agricultural Science. - 2010. - Vol. 36. -No.l. - P. 58-68.

8. Natural carriage of Listeria in fresh-water fish in Russia//1. Egorova, M. Voronin, Y. Selyaninov, D. Kolbasov // International symposium on problems of Listeriosis Book of abstracts, May 5-8th, 2010. - Porto: Portugal, 2010. - P.110.

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИИ

АБП антибактериальные препараты

ГУП по ЭИВ Государственное унитарное предприятие по эксплуатации

Иваньковского водохранилища ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота

ПЦР полимеразная цепная реакция

РАСХН Российская академия сельскохозяйственных наук

РФ Российская Федерация

ФСО Федеральная служба охраны

H2S сероводород

REA PFGE метод рестрикционного анализа с разделением фрагментов электрофорезом в пульсирующем поле

Отпечатано в типографии ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии, г. Покров Владимирской области Тираж 80экз.

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Воронин, Михаил Сергеевич

Список сокращений

1 Введение

1.1 Актуальность темы

1.2 Степень разработанности проблемы

1.3 Цель и задачи исследований

1.4 Научная новизна работы

1.5 Практическая значимость результатов исследования

1.6 Основные положения диссертационной работы, выдвигаемые 11 на защиту

1.7 Пути реализации

1.8 Апробация и публикация результатов

1.9 Личный вклад автора в выполнение работы

1.10 Структура и объем диссертации

2 Обзор литературы

2.1 Характеристика биологических свойств Ь. топосу^епеБ

2.2 Экология листерий

2.3 Распространение листерий в природе

2.4 Распространение листерий среди гидробионтов

2.5 Листериоз человека

2.6 Характеристика Иваньковского водохранилища

2.7 Ихтиофауна и состояние рыбных запасов Иваньковского 28 водохранилища

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Эколого-географические особенности листерионосительства в ихтиофауне акватории Иваньковского водохранилища"

1.1 Актуальность темы

Листериоз является актуальной; проблемой' в системе эпидемиологического и эпизоотологического надзора за инфекционными болезнями в РФ. Хотя в настоящее время, данная болезнь не доминирует в структуре инфекционных болезней животных,, тем не менее, его природная очаговость и широкое распространение возбудителя в окружающей среде требуют к себе пристального внимания специалистов ветеринарной сети.

В последнее время в мире доля потребления рыбы на душу населения возрастает в связи со смещением диетических предпочтений. В России резкое падение потребления рыбопродуктов произошло в начале 90-х годов. Плавный рост потребления рыбы начался в конце 90-х годов. Так, в 2005 г. потребление рыбы на душу населения в России составляло 11,5 кг, в настоящее время -примерно 13 кг [A.A. Кудряшова, 2007; A.A. Крайний, 2010].

Большинство работ отечественных и зарубежных исследователей посвящены изучению контаминации готовой продукции и полуфабрикатов, в том числе и из рыбы. Так, например, корюшка, вылавливаемая весной вблизи Санкт-Петербурга, заражена патогенными л истериями на 10%. При последующей транспортировке и сортировке доля зараженной рыбы возрастает до 30%. К моменту реализации в торговой сети доля зараженного улова достигает 40% [Л.Б. Мухина, Е.Ю. Дмитриева, 2002].

Считается, что эколого-географические особенности территории являются важным фактором в развитии эпизоотического процесса [С.В. Кашапова, 2007; А.Ю. Бондарев, 2010].В этой связи особый интерес представляет Иваньковское водохранилище, в котором созданы все условия для обитания представителей аквафауны различных видов. В частности, в нем обитает 34 вида рыб. Конаковский район, на территории которого размещается большая часть водохранилища, занимает в Тверской области второе место по численности населения и объему промышленного производства, третье — по объему сельскохозяйственного производства, что, безусловно, оказывает влияние на экологию самого водохранилища.

До 1960 года государственного контроля за эпизоотическим состоянием рыб, обитающих в естественных водоемах и выращиваемых в рыбоводных хозяйствах, не существовало. Вопросами- оценки эпизоотического состояния водоемов и организации борьбы с болезнями рыб занимались специалисты рыбохозяйственных организаций и различных научных подразделений рыбохозяйственных НИИ. В конце 1960 года был установлен ветеринарный надзор за рьтбохозяйственными водоемами России [Н. А. Головина и др., 2003], который, однако, не включал контроля последних на наличие листерий.

Таким образом, учитывая вышеизложенное, становится очевидной необходимость проведения более детальных исследований по изучению особенностей распространения листерий в ихтиофауне на примере Иваньковского водохранилища, являющегося источником питьевой воды г. Москва.

Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Воронин, Михаил Сергеевич

5. ВЫВОДЫ

2. В популяциях рыб Шошинского плеса циркулируют листерии как патогенных, так и непатогенных видов. Превалентность L. monocytogenes составила 0,8%, L. innocua — 5,2%.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

3. Результаты исследований внедрены на пресноводных водоемах бассейна Иваньковского водохранилища; в учебный процесс ФГОУ ВПО «Тверская государственная сельскохозяйственная академия» и используются при чтении курса лекций студентам 4-5 курсов обучения биотехнологического факультета и слушателям заочного отделения по специальности «Зоотехния».

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В данной работе представлены результаты изучения распространения листерий в аквафауне бассейна Иваньковского водохранилища, являющегося резервуаром питьевой воды г. Москвы.

Известно, что для большинства возбудителей сапрозоонозов большое значение имеют эколого-географические условия их среды обитания [С.В. Кашапова, 2007; А.Ю. Бондарев, 2010]. Это справедливо и в отношении возбудителя листериоза. Как было отмечено в обзоре литературы, на выживаемость и распространение листерий в объектах внешней среды оказывают влияние физико-химические и климатические характеристики, а также антропогенное воздействие. К первым можно причислить тип почвы, ее состав, влажность, рН, температурные показатели и др., ко вторым - внесение органических удобрений, сброс в реки и моря необезвреженных стоков животноводческой индустрии и пищевой промышленности и т.п.

Первичный анализ климато-географических и экологических характеристик Иваньковского водохранилища позволил предположить, что параметры Шошинского плеса способствуют созданию благоприятных условий для размножения и дальнейшего распространения листерий. Кроме того, ранее сотрудниками Национального парка «Завидово» совместно со специалистами ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии было установлено носительство патогенных и непатогенных видов листерий и у диких парнокопытных, обитающих на территории Национального парка «Завидово». Показано, что кабаны и пятнистые олени также являются биологическим резервуаром листерий в природе [В.И. Фертиков, И.Ю. Егорова, 2009].

Проводимые нами мониторинговые работы на протяжении 3,5 лет (с 2006 по 2010 г.г.) позволили выявить распространение листерий видов L. monocytogenes и L. innocua в популяциях рыб Шошинского плеса, причем наибольшее количество листерионосителей выявлено в летний период.

Превалентность листерионосительства в популяциях рыб составила 6%, что укладывалось в рамки существующего понятия о естественном листерионосительстве, не оказывающем существенного влияния на проявление эпизоотического и эпидемического процессов [J.C. Low, W. Donachie, 1997]. В 0,8% случаев? было выявлено носительство у рыб L. monocytogenes. Более высокий процент изоляции культур непатогенного вида листерий(5,2% всех случаев) по сравнению с данными Е.А. Зайцевой (2010), установившей, что на территории Дальнего Востока от морских гидробионтов L. innocua выделяется в* 0,4% случаев, вероятно, объясняется различием в составлении и презентабельности выборки. Кроме того, результаты мониторинговых исследований на листериоз, проводимых нами на территории Центрального региона РФ, свидетельствуют о более широком распространении L. innocua в объектах внешней, среды по сравнению с L. monocytogenes [И.А. Бакулов и др., 2010].

Согласно отчетности Роспотребнадзора за 2010 г. Тверская область, на территории которой расположена большая^ часть Иваньковского водохранилища, является благополучной по листериозу среди животных и человека [Приложение №№ 1, 2, 3]. В то же время уже в конце 2006 года нами был установлен факт листерионосительства в популяциях рыб, обитающих в Шошинском плесе Иваньковского водохранилища. На следующем этапе нами были проведены работы по изучению распространения листерий среди растительноядных, хищных рыб и рыб со смешанным типом питания. Прежде всего, нас интересовал вопрос: существует ли какая-либо взаимосвязь между заражением рыбы листериями и типом ее питания? Результаты наших исследований показали, что тип питания не оказывает какого-либо влияния на инфицированность рыб листериями. Листерионосительство обнаружено у всех рыб, питающихся одним из трех типов. Впоследствии, при изучении частоты изоляции листерий из различных органов было установлено, что они наиболее часто локализуются на кожных покровах и в жаберной ткани. Это в свою очередь подтверждало данные литературы и свидетельствовало о возможной передаче возбудителя через воду.

К сожалению, при исследовании поверхностных слоев речной воды нами листерии не были изолированы ни в одном из случаев. Вероятно, это связано с недостаточным объемом выборки проб.

Независимо от того, что нам не удалось выявить резервуары листерий в аквафауне (отрицательные результаты исследования проб воды, донных отложений, водной растительности, моллюсков, членистоногих) необходимо было выяснить, каким-образом листерии обоих видов попадают в акваторию Иваньковского водохранилища. С этой целью обследовали полу водных млекопитающих из отряда грызунов и дикую перелетную птицу. Результаты исследований также оказались отрицательными.

При установлении источников поступления листерий в акваторию Шошинского плеса нами получены положительные результаты только при исследовании на зараженность листериями вселяемой молоди рыб и трупов затонувших пятнистых оленей.

Согласно существующей нормативной документации [Ветеринарно-санитарные правила для рыбоводных хозяйств, 1998] вселяемая молодь рыбы должна быть получена из благополучных по инфекционным и инвазионным заболеваниям рыб хозяйств. Листериоз не вызывает болезни у рыб, поэтому исследований на зараженность ее листериями не проводится. Нами впервые на территории РФ установлено, что такая молодь рыб, не прошедшая контроля на листерионосительство, может являться одним из источников поступления листерий в аквафауну пресноводных водоемов.

Еще одним источником поступления листерий могут являться фекалии или трупы затонувших диких животных, в частности, пятнистых оленей листерионосителей. Вскрытие трупов вследствие прорыва брюшной полости трупными газами, приводит к попаданию содержимого желудка и кишечника в воды рек и последующей колонизации листерий на поверхности кожного покрова рыб. Свидетельством этому является выделение листерий

73 непатогенного вида из содержимого желудка трупа затонувшего пятнистого оленя. Кроме того, при проведении мониторинговых исследований на листериоз среди диких копытных Национального парка «Завидово» была изолирована культура L. ?nonocytogene №699-09, рестрикционный профиль которой высокородственен таковому изолята №311 -07, выделенного от окуня.

Таким образом, проведение первого этапа работ позволило выявить распространение листерий в ихтиофауне Шошинского плеса, особенности носительства листерий рыбами, установить новые источники поступления листерий в акваторию Иваньковского водохранилища. На основании полученных нами данных были разработаны «Методические рекомендации по отбору проб и предупреждению распространения листерий в аквафауне пресноводных водоемов (на примере Шошинского плеса Иваньковского водохранилища)». Рекомендации включают обязательное проведение мониторинговых исследований с отбором проб в критических точках, предварительную проверку вселяемой молоди рыбы на листерионосительство, сбор и уничтожение трупов затонувших диких животных. По нашему мнению проведение вышеперечисленных работ, во-первых, позволит контролировать в целом эпизоотическую и эпидемиологическую ситуацию в отношении листериоза; во-вторых - снизить распространение листерий патогенных и непатогенных видов в аквафауне пресноводных водоемов.

Вторым этапом нашей работы являлось изучение биологических свойств выделенных изолятов листерий. Известно, что для того, чтобы вызвать заболевание человека или животных любой возбудитель должен обладать определенными свойствами, в частности, продуцировать факторы агрессии и инвазивности, которые обусловливают его патогенность. С учетом того, что из двух выделенных нами- видов листерий только L. monocytogenes представляет эпидемиологическую и. эпизоотическую значимость, детальному изучению подвергали только изоляты этого вида.

Российскими исследователями было показано, что изоляты, выделенные от гидробионтов на Дальнем Востоке, характеризовались широким полиморфизмом фенотипических признаков [Е.А. Зайцева, 2010]. В зависимости от источника выделения встречались палочковидные, кокковидные, овоидные, нитевидные формы клеток листерий. У некоторых культур наблюдались капсулоподобные образования, на средах, содержащих кровь. От гидробионтов и из речной» воды изолировали культуры, принадлежащие как к первой, так и второй серологической группе [Е.А. Зайцева и др., 2006, 2008].

При изучении основных биологических свойств отмечено, что фенотипические характеристики выделенных изолятов существенно не отличаются от свойств типичного представителя этого вида, а по патогенности соответствуют клинически значимым изолятами листерий, выделяемым при вспышках листериоза у человека и животных. Уже на вторые сутки после инокуляции патогена на конъюнктиву глаза морской свинки наблюдали формирование гнойного кератоконъюнктивита. При постановке пробы Антона с суспензией клеток изолята №276 в/о-07 наблюдали гибель одной из двух морских свинок на 6-е сутки от генерализованной формы листериоза.

Все изоляты по серологической структуре принадлежали к 1 серотипу, что согласовывалось с данными отечественных ученых о преимущественной изоляции на территории России культур L. monocytogenes, принадлежащих к I серогруппе [И. А. Бакулов и др., 2008].

Основные отличия в проявлении фенотипических свойств заключались в следующем: изолят №311-07, выделенный от окуня, выловленного в реке

Котевля, был не чувствителен к воздействию специфических листериозных фагов и дополнительно сбраживал сахарозу; все изученные культуры показали высокую чувствительность к антибактериальным препаратам 11 различных групп, за исключением полимиксина Б. Согласно современным данным, как зарубежных, так и отечественных ученых листерии приобретают мультирезистентность ко многим препаратам. По результатам наших исследований чувствительность выделенных изолятов листерий к АБП соответствовала таковой изолятов, выделенных на территории бывшего СССР

75 в период с 1943 по 1976 г.г. и хранящихся в коллекции бактериальных штаммов ГНУ ВНИИВВиМ [А.И. Суняйкин, 2010], а также культур, изолированных от диких животных (неопубликованные данные). Отсутствие у листерий резистентности к АБП, вероятно, объясняется тем, что на территории Национального парка «Завидово» существует внутренний очаг листериоза, в л котором циркулируют культуры L. monocytogenes не подвергавшиеся антропогенному воздействию, в частности, применению антибиотиков.

Таким образом, в результате проведенных исследований установлено, что по биологическим свойствам выделенные изоляты L. monocytogenes являются типичными представителями своего вида и могут представлять угрозу здоровью человека и животных. Музей бактериальных штаммов ГНУ ВНИИВВиМ пополнен паспортизированными культурами L. monocytogenes, выделенными от рыб-листерионосителей. Данные культуры представляют научный и практический интерес, в частности, для сравнения их фено- и генотипов с изолятами, выделяемыми от диких парнокопытных, обитающих на территории Национального парка «Завидово», а также с изолятами листерий, выделяемыми от других гидробионтов.

Последним этапом нашей работы являлось изучение клонального распространения L. monocytogenes в популяциях рыб Шошинекого плеса Иваньковского водохранилища. На основании изучения фенотипических характеристик изолятов и результатов, полученных методом REA-PFGE, выявлено три клональных варианта L. monocytogenes, причем два из них являются близкородственными. Установлено, что в популяциях рыб, обитающих в реке Шоша, циркулируют два клональных варианта, что свидетельствует о различных источниках поступления патогенных листерий в аквафауну. Выявление идентичных рестрикционных профилей среди изолятов, выделенных от рыбы и пятнистого оленя, является свидетельством циркуляции патогенных листерий у представителей водной и наземной фауны и существования внутреннего стационарного очага листериоза на территории Национального парка «Завидово».

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Воронин, Михаил Сергеевич, Покров

1. Бакулов, И. А. Листериоз как пищевая инфекция: учеб. пособ. / И. А. Бакулов, Д. А. Васильев. Ульяновск: УГСХА, 1991. - С. 12-78.

2. Бакулов, И. А. Эпизоотология с микробиологией: учебник и практикум / И. А. Бакулов, В. А. Ведерников, А. Л. Семенихин. М.: Колос, 1997. - С. 221-225.

3. Бараненков, М. А. Дезинфекция шкур лошадей при листериозе / М. А. Бараненков // Ветеринария. 1965. - № 3. - С. 92-94.

4. Беленева, И. А. Психрофильность L. monocytogenes и ее эколого-эпидемическое значение: дис. . канд. биол. наук / Беленева И. А. -Владивосток, 1996. С. 146-154.

5. Беленева, И. А. Условно-патогенные бактерии, обнаруживаемые в культивируемых мидиях / И. А. Беленева, Э. Ф. Масленникова // Журнал микробиологии эпидемиологии и иммунологии. 2002. - №.2. - С. 81-82.

6. Беляков, В. Д. Эпидемиология / В. Д. Беляков, P. X. Яфаев. М.: Медицина, 1989. - 416 с.

7. Берестов, В. А. Звероводство: учеб. пособие / В. А. Берестов. Спб.: Лань, 2002.-С. 350-351.

8. Бондарев, А.Ю. Мониторинг инфекционных болезней диких птиц в лесостепной области Алтайского края: автореф. дис. . канд. вет. наук / Бондарев А.Ю. Барнаул, 2010. — 23 с.

9. Бузолева, Л. С. Выживаемость и адаптивная изменчивость штаммов Listeria monocytogenes в морской и речной воде / Л. С. Бузолева, В. Е. Терехова // Ветеринарная патология. 2004.- № 4.- С. 31-35.

10. Васильева, Е. Д. Популярный атлас-определитель. Рыбы / Е. Д. Васильева. М.: Дрофа, 2004. - 400 с.

11. Ветеринарные правила 13.4.1311-96. Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных Текст. Утв. 96-06

12. М.: Министерство сельского хозяйства и продовольствия РФ, 1996. - № 23.-С. 5-12.

13. Волгин, И. П. Выживаемость листерий во внешней среде / И. П. Волгин //Ветеринария. 1966. - №.10. - С. 17-19.

14. Гавеман, А. В. Московское море / А. В. Гавеман. Калинин: Калининское издательство, 1955. - С. 16-112.

15. Гершун, В. И. Листериоз сельскохозяйственных животных / В. И. Гершун. Алма-Ата: Кайнар, 1981. - С. 32-47.

16. Гершун, В. И. Влияние температурного режима на популяцию листерий в объектах внешней среды / В. И. Гершун // Ветеринария. 1983. -№8. - С. 29-30.

17. Гершун, В. И. Экология листерий и пути их циркуляции в природном очаге / В. И. Гершун // Экология возбудителей сапронозов. М., 1988.-С. 80-85.

18. Головина, Н. А. Ихтиопатология / Н. А. Головина, Ю. А. Стрелков, В. Н. Воронин. М.: Мир, 2003. - 448 с.

19. Григорьева, И. Л. Геоэкология Иваньковского водохранилища и его водосбора: научное издание / И. Л. Григорьева, И. В. Ланцова, Г. В. Тулякова.- Конаково, 2000. С. 3 - 9.

20. Гриницина, Г. А. Жизнеспособность листерий в различных экологических условиях: автореф. дис. . канд. вет. наук. / Гриницина Г. А. -Одесса, 1966. С.4 - 23.

21. ГОСТ Р 51592-2000. Вода общие требования к отбору проб Текст.- Введ. 2000-01-04. М.: Изд-во стандартов, 2003. - 31 с.

22. Громашевский, Л. В. Общая эпидемиология / Л. В. Громашевский. -М.: «МЕДГИЗ», 1949.- 320 с.

23. Ермолаева, Е. 3. Мелкие млекопитающие обитатели плодоовощных баз Москвы / Е. 3. Ермолаева, Е. В. Карасева, Н. В. Степанова // РЭТ-инфо. - 1997. - №4. - С. 2-9.

24. Ермолаева, С. А. Изменение уровня экспрессии факторов80вирулентности Listeria monocytogenes под влиянием внешних условий / С. А. Ермолаева, Ю. Ф. Белый, И. С. Тартаковский // Молекулярная генетическая микробиология и вирусология. 2000. - №1. - С. 9-17.

25. Ефимова, Т. Н. Перспектива вселения растительноядных рыб в Иваньковское водохранилище / Т. Н. Ефимова, Ю. И. Никоноров // Вопросы ихтиологии. 1977. - Т. 17. - Вып. 4 (195). - С. 21.

26. Жумаев, Н. С. Сроки сохранения возбудителя листериоза на пухе, пере и других птицеводческих объектах / Н. С. Жумаев // Труды ВНИИВС. -1967.-С. 68-71.

27. Зайцева, Е. А. Изучение чувствительности к антимикробным препаратам штаммов Listeria monocytogenes, выделенных в Приморском крае / Е. А. Зайцева // Антибиотики и химиотерапия: ежемесячный научно-практический журнал. 2005. - №7. - Т. 50. - С. 27-31.

28. Зайцева, Е. А. Микробиологическая характеристика Listeria monocytogenes, изолированных из различных источников в Приморском крае / Е. А. Зайцева, Г. П. Сомов // Журнал микробиологии эпидемиологии и иммунологии. 2006. - № 2. - С. 3 - 6.

29. Зайцева, Е.А. Распространение Listeria monocytogenes среди мышевидных грызунов на территории Приморского края / Е. А. Зайцева, С. А. Ермолаева, Г. П. Сомов // Pacific Medical Journal. 2008. - № 2. - С. 65-69.

30. Зайцева, Е. А. Система анализа микробиологических и молекулярно-генетических маркеров для выявления высоковирулентных штаммов Listeria monocytogenes: дис. . д-ра. мед. наук: 03.02.03. / Зайцева Е А.-М., 2010.-С. 10-312.

31. Изоляция Listeria monocytogenes из различных объектов в81

32. Приморском крае и их биологические свойства / Е. А. Зайцева, JI. С. Бузолева, В. Е. Терехова, Т. А. Глазырина, Г. П. Сомов // Эпидемиологические и инфекционные болезни. 2002. — №1. — С. 47-49.

33. Камалов, Р. А. Болезни охотничье-промысловых животных: учеб. пособие / Р. А. Камалов. М.: Колос, 2009. - С. 138-140.

34. Кашапова, C.B. Эколого-географические особенности и этиологическая структура лептоспироза животных в Среднем Приобье: автореф. дис. . канд. вет. наук / Кашапова C.B. Барнаул, 2007. - 22 с.

35. Кисленко, В. Н. Ветеринарная микробиология. Ч. 3. Частная микробиология: учебник для вузов / В. Н. Кисленко, H. М. Колычев, О. С. Суворина. М.: Колос, 2007. - С. 24-30.

36. Книзе, А. В. Эпизоотическая ситуация по листериозу в странах мира и России / А. В. Книзе, А. И. Бузун, Р. К. Шарма // Листериоз на рубеже тысячелетий: материалы Международного симпозиума / ВНИИВВМ. Покров, 1999. - С. 118-122.

37. Крайний, А. А. В кризис потребление рыбы возрастает / А. А. Крайний // Безопасность России информационный аналитический журнал. -2010. № 2 март-апрель. - С.56-59.

38. Кудряшова, A.A. Экологическая и товароведная экспертиза рыбных товаров / A.A. Кудряшова, Л.Ю. Савватеева, Е.В. Савватеев. М.: Колос, 2007. - С. 4-5.

39. Куликовский, А. Ф. Пищевые токсикоинфекции социальная проблема многих стран / А. Ф. Куликовский // Ветеринарная жизнь. 2004. - № 3-4(4).-С. 16.

40. К формированию бактерий рода Listeria в эпоху позднего плейстоцена: факты и гипотезы / В. И. Фертиков, А. Н. Тихонов, Е. М. Хрипунов, И. Ю. Егорова // Сельскохозяйственная биология, серия Биология животных. 2009. - № 6. - С. 18-26.

41. Лакин, Г. Ф. Биометрия. Учеб. пособие для биол. спец. вузов.- 3-е изд., перераб. и доп. / Г. Ф. Лакин. М.: Высш. школа, 1980.- 293 с.

42. Листерии и листериоз / И. А. Бакулов, Д. А. Васильев, Ю. О. Селянинов, Д. В. Колбасов, Т. И. Кольпикова, И. Ю. Егорова. Ульяновск: Color-Принт, 2008. - 168 с.

43. Литвин, В. Ю., Патогенные бактерии, общие для человека и растений: проблемы и факты / В. Ю. Литвин, Е. Н. Емельяненко, В. И. Пушкарева// Журнал микробиологии эпидемиологии и иммунологии. 1996. -№2. - С. 4-101.

44. Малеев, В. В. Опасные инфекции: листериоз / В. В. Малеев // Сестринское дело.- 2000. -№4. С. 35-36.

45. Мамедова, Д. Г. Роль клещей в эпизоотологии листериоза в условиях: автореф. дис. . канд. вет. наук / Мамедова Д. Г. Тбилиси, 1966. -22 с.

46. Меньшикова, 3. Н. Электронномикроскопическое изучение морфологии листерий и эризипелотриксов: автореф. дис. . кан. биол. наук / Меньшикова 3. Н. Покров, 1971. - С. 5-12.

47. Методические рекомендации по лабораторной диагностике листериоза животных и людей. М., 1996. - 67 с.

48. МУК 4.2.1122-02 Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Организация контроля и методы выявления бактерий Listeria monocytogenes в пищевых продуктах. М., 2002. - 31 с.

49. МУК 4.2.1890-04 Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. М., 2004. - 16 с.

50. Минаева, Н. Э. Микробиологические аспекты эпидемиологии листериоза / Н. Э. Минаева, В. И. Ладный // Листериоз на рубеже тысячелетий: материалы Международного симпозиума / ВНИИВВМ. Покров, 1999. - С. 137.

51. Мухина, JI. Б. Возбудитель лиетериоза показатель биологической опасности рыбной продукции / JI. Б. Мухина, Е. Ю. Дмитриева // Рыбное хозяйство. - 2002. - № 2. - С. 50-51.

52. Мухина, JI. Б. Методические рекомендации по выявлению возбудителя лиетериоза Listeria monocytogenes в рыбе и СПб рыбной продукции / JI. Б. Мухина, Е. Ю. Дмитриева, Э. Н. Борисовская. СПб.: Моринтех, 2003. - 28 с.

53. Мягков, Н. А. Атлас-определитель рыб: книга для учащихся / Н. А. Мягков. М.: Просвещение, 1994. - 282 с.

54. Никаноров, Ю. И. Иваньковское водохранилище / Ю. И. Никаноров // Известия ГосНИОРХ. 1975. - Т. 102. - С. 5-25.

55. Новикова, И. Н. Болезни домашней птицы / И.Н. Новикова. М.: Вече, 2006.-С. 118-119.

56. О заболевании свиней колибактериозом, паратифом и листериозом / Р. А. Хабибулин, Т. И. Шевнин, А. Е. Егорова, В. Ф. Шевнин // Труды Алма-Атинского зооветеринарного института. 1972. - Т. 20. - С. 102.

57. Олсуфьев, Н. Г. Об обнаружении возбудителей эризипелоида и лиетериоза в воде ручьёв / Н. Г. Олсуфьев, В. Г. Петров, К. Н. Шлыгина // Журнал микробиологии эпидемиологии и иммунологии. 1959. - №3. - С. 89.

58. Определитель бактерий Берджи: в 2-х т. Т. 2 / пер. с англ. / Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Снита, Дж. Стейли, С. Уильямса. М.: Мир, 1997. - С 573-577.-А

59. Патогенные листерии в почве и в ассоциации с водорослями:обратимый переход в некультивируемые состояние / В. И. Пушкарева, Е. Н.

60. Емельяненко, В. Ю. Литвин, А. Л. Гинцбург, Е. В. Кулеш, Г. А. Белякова //

61. Журнал микробиологии эпидемиологии и иммунологии. 1997. - №. 3. - С. 384

62. Перетрухина, А. Т. Микробиология сырья и продуктов водного происхождения: учеб. издание / А. Т. Перетрухина, И. В. Перетрухина. Спб.: ГИОРД, 2005. - 320 с.

63. Покровский, В. И. Медицинская микробиология / В. И. Покровский, О. К. Поздеев. М.: ГЭОТАР Медицина, 1999. - С. 221-226.

64. Поздеев, О. К. Медицинская микробиология: учеб. пособие / О. К Поздеев; под ред. В. И. Покровского. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006. - 305 с.

65. Полякова, Н. А. Гидрохимический режим рыбного заповедника Завидовского хозяйства / Н. А. Полякова // Труды Завидовского заповедно-охотничьего хозяйства. 1971. - Вып. 2. - С. 263-270.

66. Полякова, Н. А. Влияние дноуглубительных работ на ихтиофауну Шошинского плеса Иваньковского водохранилища / Н. А. Полякова // Юбил. науч. чтения. Национальный парк «Завидово» -75 лет. 2004. - Вып. 6. - С. 131-140.

67. Поманская, Л. А. Длительность сохранения листерий в объектах внешней среды / Л. А. Поманская // Ветеринария. 1961. - №12. - С. 21-24.

68. Прав дин, И. Ф. Руководство по изучению рыб (преимущественно пресноводных) / И. Ф. Правдин. М.: Пищевая промышленность, 1966. - 376 с.

69. Пушкарева, В. И. Патогенные бактерии в почвенных и водных сообществах (экспериментально-экологическое исследование): дис. . д-ра. биол. наук / Пушкарева В. И. М., 1994. - С. 51-199.

70. Пушкарева, В. И. Паразитизм в простейших как стратегия существования патогенных бактерий в почвах и водоемах / В. И. Пушкарева // Успехи современной биологии. 2006. - Т. 126. - № 4. - С. 323-333.

71. Пятиязычный словарь названий животных. Рыбы. Латинский — русский — английский — немецкий французский / Ю. С. Решетников, А. Н. Котляр, Т. С. Расс, М. И. Шатуновский.- М.: Русский язык, 1989.- 733 с.

72. Пяткин, К. Д. Микробиология (с вирусологией и иммунологией): учебник / К. Д. Пяткин, Ю. С. Кривошеин. М.: Медицина, 1981. - С. 341-343.

73. Распространение листерий в фауне Центрального региона России / И.А. Бакулов, И.Ю. Егорова, В.И. Фертиков, М.С. Воронин // Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук. 2010. - № 1. — С.48-50.

74. Романцева, Ю. Н. Этиология, характеристика микрофлоры и патоморфология при пневмониях маралов: автореф. дис. . канд. вет. наук 16.00.03/ Румянцева Ю. Н. Барнаул, 2009. - 22 с.

75. Сальников, Н. Е. Некоторые особенности формирования гидрохимического режима и качество воды Иваньковского водохранилища в 1996-2000 гг. / Н. Е. Сальников, Л. М. Саппо // Гидробиологический журнал. -2005. Т.41. - № 2. - С. 73-84.

76. Санитарные правила 3.1.088-96. Текст. Утв. 96-05-31. - М.: Информационно-издательский центр Госкомсанэпиднадзора РФ, 1996. - № 11. -С. 3-5.

77. Сборник инструкций по борьбе с болезнями рыб. М.: Отдел маркетинга АМБ-агро, 1999. - 4.2. - С. 186-189.

78. Селиванов, А. В. О выживаемости листерий во внешней среде / А.

79. B. Селиванов, Г. А. Гриницина // Сборник научных работ Сибирского НИВИ. -1961.-№9.-С. 95-120.

80. Сергиев, В. П. Инструкция о мероприятиях по профилактике и борьбе с листериозом животных / В. П. Сергиев, А. Д. Третьяков. М., 1987.1. C. 61-67.

81. Сидоренко, М. JI. Влияние свойств почв на сохранение и размножение листерии и иерсений / М; JI. Сидоренко, JI. С. Бузолева, Н. М; Костенков // Почвоведение. 2006. - № 2. - С. 237-243.

82. Сидоренко, ■ М. Л. Влияние различных видов; минеральных удобрений на размножение Listeria monocytogenes в почвах / М. Л. Сидоренко, Л. С. Бузолева//Агрохимия. -2008. -№5. С. 59-64.

83. Сидоров, М. А. Определитель зоопатогенных микроорганизмов / М. А. Сидоров, Д. И. Скородумов, В. Б. Федотов. М.: Колос, 1995. - С. 97-102.

84. Слабоспицкий, Т. П. О новом патогенном микроорганизме из рода Listerella / Т. П. Слабоспицкий // Ученые записки Казанского государственного зооветеринарного института. 1938. - Т. 49. - С. 152-153.

85. Сливко, В. В. Листериоз сельскохозяйственных животных: автореф. дис. . д-ра. вет. наук. / Сливко В. В. Вологда, 1957. - 40 с.

86. Сомов, Г. П. Сапрофитизм и паразитизм патогенных бактерий: экологические аспекты / Г. П. Сомов, В. Ю. Литвин.- Новосибирск: Наука, 1988.- 208 с.

87. Суняйкин, А. И. Биологические свойства изолятов Listeria monocytogenes, выделенных из различных объектов и территорий: дис. . канд. вет. наук 06.02.02. / Суняйкин А. И. Покров, 2010. - 107 с.

88. Сухотина, В. П. Выживаемость листерий в почвах под влиянием ризосферы некоторых растений: дис. . канд. вет. наук / Сухотина В. П. -Омск, 1978. С. 3-134.

89. Тартаковский, И. С. Листерии: роль в инфекционной патологии человека и лабораторная диагностика / И. С. Тартаковский, В. В. Малеев, С. А. Ермолаева. М:: Медицина для всех, 2002. - 200 с.

90. Фертиков, В. И., К вопросу о распространении листерий среди диких парнокопытных / В. И. Фертиков, И. Ю. Егорова // 29-й Международный конгресс биологов и охотоведов. 4.2 М., 2009. - С. 43-44.

91. Халимбеков, М. М. Листериоз овец и коз в Азербайджане: автореф. дис. д-ра. вет. наук / Халимбеков М. М. М., 1956. -18 с.

92. Шарма, Р. К. Совершенствование бактериологического анализа для индикации листерий в продуктах, импортированных в Россию: дис.канд. вет. наук: 16.00.03. / Шарма Р. К. Покров, 1999. - 149 с.

93. Шарма, Р. К. Обнаружение листерий в продуктах морей и океанов / Р. К. Шарма // Листериоз на рубеже тысячелетий: материалы Международного симпозиума. Покров, 1999. - С. 97-99.

94. Экзерцев, В. А. Флора Иваньковского водохранилища / В. А. Экзерцев // Труды института биологии внутренних вод АН СССР. М.; Л., 1966. - Вып. 11 (14): Растительность волжских водохранилищ. - С. 104—161.

95. Эпидемиологические аспекты экологии бактерий / В.Ю. Литвин, А.Л. Гинцбург, В.И. Пушкарева, Ю.М. Романова, Б.В. Боев. М.: Фармарус принт, 1998.-С. 115-119.

96. Эффект конститутивной активности генов патогенности у L. monocytogenes / Т. И. Карпова, Б. И. Маракуша, Т. П. Сапенко, И. С. Тартаковский, J. A. Vazquez-Boland, С. А. Ермолаева // Журнал микробиологии эпидемиологии и иммунологии. 2005. - № 3. - С. 3-8.

97. Antimicrobial susceptibilities of Listeria monocytogenes isolated in Japan / S. Monden; A. Okutani, H. Suzuki, H. Asakura, A. Nakama, S. Igimi, Y. Okada, T. Maruyama //ISOPOL XVII. Porto, 2010. - P. 73.

98. Antimicrobial resistance of Listeria monocytogenes human strans isolated since 1926 in France / C. Morvan, A. Moubareck, M. Leclercq, S. Herve-Bazin, P. Lecuit, A. Le Monnier Courvalin //ISOPOL XVII. Porto, 2010. - P. 108.

99. Antimicrobial susceptibility among Listeria monocytogenes isolates from non human sources in France over a ten year period / S. A. Granier, C. Moubareck, C. Colaneri, S. Roussel, P. Courvalin, A. Brisabois //ISOPOL XVII. Porto, 2010. - P. 63.

100. Atkinson, E. Meningitis associated with gram-positive bacilli of diphtheroid type / E. Atkinson // Med. J. Australia. -1917. Vol. 1. - P. 115-118.

101. Differential activation of virulence gene expression by prf A, the Listeria monocytogenes virulence regulator / B. Sheehan, A. Klarsfeld, Y. Shen, K. T. Msade, P. Cossart// J. Bacterid. 1995. - Vol. 177. - P.74-76.

102. Dumont, J. Bacille semblable au bacille du rouget du pore recontre'dans le liquide ce'phalo-rachidien d'un meingitique / J. Dumont, L. Cotoni // Ann. Inst. Pasteur.- 1921. Vol. 35. - P. 625-633.

103. Fenlon, D. R. Wild birds and silage as reservoirs of Lis teria in the agricultural environment / D. R. Fenlon // Journal of Applied Bacteriology. 1985. -Vol. 59. - P. 537-543.

104. Fuchs, R. S. Incidence of Listeria in tropical fish and fishery products / R. S. Fuchs, P. K. Surendran 11 Letters in Applied Microbiology. 1989. - Vol. 9. -P. 49-51.

105. Gray, M. L. Listeria monocytogenes and listeric infections / M. L. Gray, A.H. Killinger//Bacteriological Reviews. 1966. - Vol. 30. - P. 309-382.

106. Hatkin, J. M. Isolation of Listeria monocytogenes from an eastern wild turkey / J. M. Hatkin, W. E. Phillips Jr., G. A. Hurst // Journal of Wildlife Diseases. 1986.-Vol. 22.-P. 110-112.

107. Hulphers, G. Liver necrosis in rabbit caused by a hereto not described microorganism / G. Hulphers // Svensk Veterinär Tidskrift. 1911. - Vol. 16. - P. 265-273.

108. Hulphers, G. Lefvernekros has kanin orsakad af en ej förut beskrifVen bacterie / G. Hülphers // Sven. Vet. Tidskr.- 1911. Vol. 16. - P. 265-273.

109. Infectia naturala cu Listeria monocytogenes la pastravul curcubeu Salmo irideus / N. Stamatin, C. Ungureanu, E. Constantinescu, A. Solnitzky, E. Vasilescu // Anuarul Inst. Anim. Pathol. Hyg. 1957. - Vol. 7. - P. 163-180.

110. Listeriosis. In Infectious diseases of wild mammals / R. G. Dijkstra, J. W. Davis, L. H. Karstad, D. О Trainer // Ames: Iowa State University Press, 1981. -P. 306-316.

111. Miettinen, H. Prevalence and location of Listeria monocytogenes in fanned rainbow trout / H. Miettinen, G. Wirtanen // Int. J. Food Microbiol. 2005. -Vol. 104.-P. 135-143.

112. Nilsson, О. Listeria monocytogenes Isolerad fran djur i Sverige under Oren 1958-1972 / O. Nilsson, O. Soderlind // Nordisk Veterinarmedicin. 1974. -Vol. 26. - P. 248-255.

113. One Group of Genetically Similar Listeria monocytogenes Strains Frequently Dominates and Persists in Several Fish Slaughter and Smokehouses /

114. G. Wulff, L. Gram, P. Ahrens, B.F. Vogel // Applied and environmental mycrobyology. -2006. Vol. 3. - P. 4313-4322.

115. Pirie, J. H. H. A new disease of veld rodents. "Tiger River Disease"/ J.

116. H. H. Pirie // Publ. S. Aft. Inst. Med. Res. 1927. - Vol. 3. - P. 163-186.

117. Portnoy, D. A. Role of hemolysin for the intracellular growth of Listeria monocytogenes / D. A. Portnoy, P. S. Jacks, D. J. Hinrichs // J. Exp. Med. 1988. -№. 1. - Vol. 167. - P. 1459-1471.

118. Roche, S. Слабовирулентные полевые штаммы Listeria monocytogenes относятся к четырем фенотипическим группам / S. Roche^ Р. Gracieux, I. Albert and P. Velge // ISOPOL XVII. Swiden, 2004. - P. 85 перевод ГНУ ВНИИВВиМ.

119. Roska, V. Identificarea Listeriosei la animalele activatice si in ара differitelor lazuri naturale / V. Roska // Communic Academici Rep. Popul. 1962. -Vol. 12, №. 1. - P. 87.

120. Secic, I., Non-haemolytic and hypovirulent Listeria monocytogenes became haemolytic and virulent after passage through mice / I. Secic, T. Lindback, L.M. Rorvik // ISOPOL XVII. Porto, 2010. - P. 102.

121. Seeliger, H. P. Listeria and Law in "Listeria" / H. P. Seeliger // ISOPOL XI. Copenhagen, 1992. - P. 1-6.

122. Sheehan, В. Molecular and genetic determinants of the Listeria monocytogenes infections process / B. Sheehan, S. Kock, R. Dramsis // Curr Topics Microbiol Immunol. 1994. - Vol. 192. - P. 187-215.

Информация о работе

Воронин, Михаил Сергеевич
кандидата ветеринарных наук
Покров, 2011
ВАК 06.02.02

Диссертация

Эколого-географические особенности листерионосительства в ихтиофауне акватории Иваньковского водохранилища - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы