Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Экологические особенности ларвицидных штаммов BACILLUS SPHAERICUS и BACILLUS THURINGIENSIS H14

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Экологические особенности ларвицидных штаммов BACILLUS SPHAERICUS и BACILLUS THURINGIENSIS H14"

ВСЕСОЮЗНАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК имени В.И. ЛЕНИНА. ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО -ИССЛЕДОВАТЕЛЬ СККй ИНСТИТУТ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОЙ МИКРОБИОЛОГИИ

йа правах рукописи

КСВАЧЕВА Татьяна Сергеевна

Уда 632.95.021.2+631.95

ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЛАРВИЩНЫХ ШТАММОВ

ВАСГШЮ Бкшнюиз и ВАСИЛИЯ СЕШЕЖаХКЯЗХЗ н1,

Специальность: 03.СЮ.07 - Микробиология

Автореферат диссертации ка соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ленинград 1990

Работа выполнена во Всесовзном научно-исследоватедь-ском институте сельскохозяйственной микробиологии (г. Ленинград)

Научный руководитель - доктор биологических наук .профессор

Н.В.КАЦДЫБИН

Официальна оппоненты- доктор биологических наук,профессор

A.М.ДУБЩЩ

кандидат биологических наук

B.А.ПШШЙН

Ведущее учреждение - Институт микробшлогии АН Армянской

ССР (г.Абовян)

Защита диссертации состоится " " _ 1990 г.

в _час. -— мин на заседании Специализированного совета К 020.26,01 по присуждению ученой степени кандидата биологичеоких наук во Всесовзном научно исследовательском институте сельскохозяйственной микробиологии, г.Ленинград-Пушкин, шосое Подбельского, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан " " _ 1990 г.

Ученый секретарь Специализированного совета, кандидат биологичеоких наук

А.Н.Зарецкая

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Изучение и применение микробиологических методов борьбы о вредоносными насекомыми является частью перспективного направления научно-технического прогресса. Успехи сельскохозяйственной микробиологии и биотехнологии способствовали получению и внедрения в производство ряда высокоэффективных микробных инсектицедов, широкое практическое использование которых вызвано необходимостью ограничить применение химических препаратов, и природоохранными мероприятиями.

Разработка и широкое внедрение в практику микробиологических средств, обеспечивающих высокую эффективность и экологическую безвредность представляет исключительное значение в интегрированной системе мер борьбы с кровососущими комарами - переносчиками инфекционных заболеваний человека и жиэотных.

Важным моментом в системе этих мер явилось выделение в 1977 г. штамма Bac.tíiuriagiensis, отнесенного к сероти-пу За 10 лет изучения этой бациллы создан ряд зарубежных и отечественных препаратов, используемых в народном хозяйстве. Особ.й же интерес представляет применение другой спорообразукщей бактерии Bac.sphaericua, в экологическом отношении более пластичного вида, чем его предшественник, способного вызывать эпизоотии личинок комаров.

Исследования по изучению отих бактерии и создание на их основе ларвицадных препаратов требует большого комплекса микробиологических, энтомологических, технологических исследований.

Цели и задачи исследований.- Цель работы - изучение экологтеских особенностей Bac.sphaericus в сравнении с Вас. thuringiensls н^, как основы для совервенствования технологии применения этой бактерии для борьбы с кровососущими комарами (Díptera). Для осуществления этой цели перед нами были поставлены следующие задачи:

- изучить культурально-физиологические свойства энтонопа--тогенных штаммов Вас.sphaericus;

- определить ларвициднуо активность Bao.sphaericus и Вас. thurinflensis для разных видов кровососуних комаров;

У

~ исследовать сохранение бактерий Вас. sphaericus и Вас. thuringiensis Hw ВО внешней среде.

Научная новизна.Впервые проведено сравнительное изучение экологических особенностей ларвицидных штаммов Бас. epbbericus н Вас. thuringieivsis н,,^. Установленная экологическая пластичность Вас. spbaericus, в отлтие от Bao. thú-riiigiensis н^ способствует созданию более продолжительных очагов контроля численности кровососущих комаров в водоёмах. Показана возможность сохранения и размножения Bao, epbaericus в воде,в придонном иле .почве .трупах личинок и, как следствие, последующая рециркуляция с длительной остаточной ларвиццдной активностью.

Подробно исследована ларвицвдная активность Вас. spha«-rieua и Вас. thuringiensis н14 для разных видов кровососущих комаров родов Culex, Anopiieles, Aedes.

Созданы лабораторные образцы препарата на основе Вас. epbeericus штамм 2362 по своей ларвицвдной активности не уступающие зарубежным аналогам и бактокулициду.

На основе математического анализа и обработки данных на ЭВМ оптимизирована питательная среда для глубинного культивирования Вас. sphaericus.

Практическая ценность.Результаты собственных исследований показывают,что интенсивное изучение факторов.влиявщи* на длительность сохранения живых спор и токсинов ларвицвд-ных штаммов Вас, spbaericus и Вас, thuringiensis н.^ во внешней среде .необходимо, для разработки приемов .увеличивающих атот период. Этим достигается более интенсивное инфицирование личинок комаров »накопление бацилл в местах обитания последних,Показанная зависимость сохранности патогенов в различных уоловиях дает основания к рациональному Использование микробных культур с учетом окологшеоких особенностей,не прибегая к завышенным дозам применения.

Апробация работы.Результатц исследования доложены на* Всесоозной конференции "Пути повышения микробиологической борьбу с вредными насекомыми и болезнями растений" (Оболе иск Д 986); на заседаниях Ученого Совета Института сельскохозяйственной микробиологии ВАСХНИД (Ленинград,1985, .1986,1987,1988 Гг,)$ Всесоюзной конференции молодых уче-

них ""Завита растений s условиях ускорения научно-технического прогресса "(Ленинград ,1986); Всесоюзной конференции молодых ученых "Защита растений в условиях интенсивных технология возделывания сельскохозяйственных культур" (Ленинград, 1988).

Публикации.По материалам диссертации опубликовано б работ и Э работы находятся в печати.

Обгём и структура диссертации.Работа состоит из введения, обзора литературы, 3-х глав экспериментальной части, выводов,практических рекомендаций. Содержит 155 страниц машинописного текста, 32 таблицы, 16 рисунков. Список использованной лэтературы включает 201 работу, в том числе 98 отечествьнных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

В обзоре литературы обобщен материал современных методов биологической борьбы с хроиососуцюш насекомыми,как более безопасный и обладавший избирательным действием. Приводится современное состояние изучения энтомопатогенов Вас. sphaericua и Bac.thuringiensis Н^ -перспективных агентов в бгаконтроле численности комаров.

Глава 2. Культурально-физиологическке свойства энтоио-патогенных штаммов Bacillus зрЬаег!сиз

Объектами исследований служили бактерии Вас. sphaericua штамм 2362 .полученный из коллекции ОСЕВ (Прага .Институт он-томологии, ЧСЛН) и Вас.thuringieneis Н14 штамм 266/1-2 из коплекции ВНИИСХМ. В отдельных опытах использовали препарат бактокулицад производства Бердского химического завода.

Продуктизность культуры определяли методом серийных разведений с высевом на МПА. Для определения влияния дозы и возраста посевного материала на развитие культуры Еас. sphaericua и накопление ларзицидногс эндотоксина.Посевной материал готовили путем засева жадкой среды суспензией споровой культуры.выращенной на скопенном МПА. 3 одном случае культуру инкубировали до спорообразования,в другом 16 часов, когда культура состояла из вегетатизных клеток.Качество посевного материала определяли микрескопкроганием.Число клеток подсчитывали в камере Горяева и методом предельных разведения. с

Ларвицидную активность определяли по ЛК^ (мг. препарата/л или тыс.кл./мл) для лицинок Ш возраста Сх. р!р1епз шо-

Оптимизацию питательной среди для культивирования Вас. ирЬегго-сие проводили методом математического планирования эксперимента по программе н-шддлг (Смирнов.Растегаев, 1962). Согласно матрицы планирования эксперимента и уровней варьирозания факторов были получены 25 вариантов питательных сред.Критерием оценки эксперимента являлась ларвиццдная активность (ЛКзд) патогена.

Для получения образцов препарата на основе Вас.арЬае-г1сиз использовали сублимационный метод.

Результаты исследований показали, что рост Вас.ерЬаа-гхсиа на жадкой питательной среде сопровождается изменениями рН культуральной жедкости.а именно её подщелачиваяием в экспоненциальной фазе роста,за 25 ч роста рН достигает величины 8,95 (исходное рН 6,5) при этом максимальная ларви-цвдная активность наблюдалась в диапазоне исходных величин рН от 7,05 до 9,05.

Значительное влияние-на развитие и продукт:аность Вас, арЬвег1сиз в жидкой культуре оказывает степень аэрации.Оп-тииаллное развитие, спорообразование и накопление ларвицвд-ного токсина происходит в таком режиме аэрации,когда соотношение объема среды к объёму колбы не менее 1:18 при 220 об/мин качалки.Культуральная

жидкость Вас. ар!шег1.сиа ,выращенная при этих режимах обладает максимальной ларвицид-ной активностью .вызывая 100^-уп гибель личинок Сх.р1р1епз иоЬвсиа. Важно отметить .Что аэрирование оказывает влияние на образование опор,а,следовательно,на тохсинообразование, что выражается в Повышении Ларвицидной активности штамма.

Диапазон температур от 30 до 36°С является оптимальным для культивирования Вас*врЬаеПсиз. Отмечено влияние теьпе-ратуры воды На Аффективное ть действия Вас» врЬаег1сиз на личинок комаров* В ааййоймооти от температура среди у пой-килотермних Насекомых сей, Ои11с1(1ае инфекционные и токсические процесса сонрйяаны & физиологическими процессами организма.которУз и оказывав! решающее влияние на ход ток-ошсойнфекции. Например ,прй йвийении температура окрунаощвй 6

среды до 18° эффективность Вас. sphaerieus падает.Это объясняется изменением функциональной деятельности личинок,обменными процессами и потреблением бактериального токсина (Wraight et al., 1981a).

Для Вас. sphaerieus характерна высокая ларвицидность на самой ранней стадии вегетативного роста (табл.1), что свидетельствует о наличии токсина как составной части клетки. Дальнейшее накопление токсина,а,следовательно,и инсек-тицедная активность особенно возрастает,когда клетки входят в период опоруляции. В этот период наблюдается максимальное увеличение и накопление продуктов обмена веществ,в том числе и ларвицвдного эндотоксина,что касается Bao. thuringi-ensis н^, то здесь,в ochoehom,процесс токсинообраэования протекает в период спорообразования,когда формируется спора и параллельно кристаллический эндотоксин,отделенный от споры.

Оптимизации питательной среды для глубинного культивирования Вас. sphaerieus проводили с использованием метода математического планирования по программе R-ШШИГ. Программа позволила установить оптимальные концентрация изучаемых компонентов среды в протеозопептон - 2,0; БВК -2,0; Мп80^-Н20 - 0,001) UgS0^TH20 - 0,01; рН среды 7,2, и определить влияние их на ларвициднуп активность.

Изучая культурально-физиологические и ларвицидные свойства Вас. sphaerieus, мы завершили эту работу созданием образцов препарата в виде сухого порошка. Проверка биологической активности образцов препарата в сравнении с аналогичными зарубежными образцами (фирма Abbott, Solvey, лаборатории Dulmage ) И бактокулицидом (Вас. thuriiigieEsia Н^) показала внеокув эффективность наяих образцов для Lj ex. pipiens taolestus (табл.2).

Глава 3. Ларвицидная активность Bacillus aphaerlcuq и Bacillua thurlnglenBla H,,,t ДЛЯ разных ВИДОВ кровосо-суиих комаров.

В процессе экспериментов использовали готовые бактериальные препараты: бактокулнцвд и лабораторные образцы препарата Вас. sphssericus итамм 2362.

Сравнитвльнуо лэозгаиднуа актизность энтонопатогенов

7

Таблица I

Сравнительная ларБицидкая активность Вас. sphaericus 2362 и Вас. thuringi-ensis Hj^ на разных стадиях роста для 1>ш Culex pipiens molestus

Вас. зрЬаейсиз 2362 Bac.thurinriensis %4

Возраст Стадия Тигр % гибели через Возраст Стадия Титр % гибели через

культуры, ч развития клеток в ЕЛ.. 12 ч 32 ч культуры, ч развития клеток в К.Ж. 20 ч 24 ч

6-12 вегетативные клетки 2,3 -Ю5 80,4±4,2 100 6-12 вегетативные клетки б.8-Ю5 89,0±2,1

16-16 просторы г.7-ю7 92,322,3 100 24 начало образования проспор 7,7 -Ю* 100 100

42-48 споры 2,95-ГО7 96,032,3 100 42-48 споры кристаллы 1.45-103 9,3 -В)4 100 100

проводили в лабораторных условиях на ятииках П,Ш,17 возрастов Aedeg coomunis, Anopheles maculipeimis, Culex pl-plens molestua.

Таблвда 2

Сравнительная биологююская активность препаратов

Тигр в Образцы препарате млрд клеток/г ХК50 (мг/л) ДЛЯ Culex pipiena inolestus

П ffl и

» 8 ИЗ 0,003 0,009 0,018

Л 26 125 0,0015 0,003 0,006

Abbott Ц6 0,062 о,оез О.Ш

Dulmage 150 0,021 0,084 0.ЗД2

Ш?-4 (Вас. sphae- 120 0,501 —

rlcus 2^62)

JE-109-a (Вас.sphae- 71 0,036 0,1959 0,698

ricua 23&2)

JE-113 (Bac.aphae- 104 0,218 0,575 „

rlcua 2362)

Solvey 0,008 0,010 O.OIf

Бактокулицвд 129 0,009 0,070 0,078

(I год хранения)

ко нтроль

В полевых опытах (в аедогекных и анофелогенкых водоёмах) изпытывалк доза препаратов от 0,3 до ОД г/м*\

Длительность токсического действия препаратов проверяли в лабораторных условиях путем подсадки личинок комаров природной популяции в воду.вэйтув из водоемов через определенные сроки после обработки препаратами.

Дяя выяснения гистологических изменений, про исходящих в среднем отделе кияечника при искусственном заражении личинок Сх.р1р1епа то1ев'Ьиз последних помещали в суспензии,содержание МО*; Э'Ю*'; 8'Ю'' клеток Вас.ариаег1сиа на I мл. При подготовке микроскопических препаратов использовали рекомендации Б.Ромейса (1953).

Представленные результаты сравнительной восприимчивости личинок отдельных ввдов комаров (табл.3) свидетельствует,что ИЗ трех испытуемых ввдов Ае.сст.т'.ш1з,Ап.таси11.ре1г-

9

nia ий. pipiens moiestus наиболее чувствительны к Вас. sphaericus личинки Сх. pipiens moleetus,их восприимчивость в 30 и 10 раз выше,чем у других вцдов комаров. Вао. •tivuringiensis Н.,^ почти одинаково активна для указанных вцдов комаров. Наиболее восприимчивыми стадиями комаров как К Вас. sphaericus, так и к Вас. timringiensie Н14 являются личинки первого и второго возрастов. На предку колок, куколок и имаго эти бактерии не действуют.

Таблица 3

ÏKijQ Вао. ephaericua 2362 для личинок комаров (лабораторный опыт)

Вид комаров JIK^q (мг/л) через 2») ч

Воз рост личинок

П ш 1У

Aed.es communis ¿nophelee moculipermis Culex pipiena molestas 0,71 0,24 0,02 0,31 0,034 0,69 о,ад 0,049

В полевых опытах активность препарата Вас.sphaericus не хуже,чем у бактокулицеда.Однако наблюдается разница в летальных концентрациях и в скорости их действия.

Сравнительная оценка эффективности Вас, Bphaericus 2362 и бактокулицвда в аедогенкых водоемах показала большую эффективность бактокулицида*. в дозе O»î-0»2 vf\? этот препарат вызвал 1ВД?~нуя гибель Личинок Ае.communia через 2Ч-ЧВ часов,тогда как s ¿ариайте опыта с Вас. sphaericus на 88,9-98,2$ в таких fee дозах гибель лиминок произошла лишь через 8 суток»Однако,в последнем случае отмечалось нарушение координации да»кения,пассивность.При обработке водоёмов дозой 0j3-dj5 r/tr ¡эффективность на 4-е сутки тоже составила ffi,8~0ô,Î$i т»о» дальнейшее увелшенюз доза до 0,8 v/tr m цепеооооравно» Аналогичная тенденция иаблпда-лаоь при обработке суспензией препарата Вас, sphaericus анофеяогеннмх йодоейов (в дайе ОД и Cj3 г/м^ на 7-е сутки гибель личинок to.aaouiipeimis coefaaiuia соответственно 15,0 и 85,02).

Вас. Bphaericus в 0ТЛИЧ1Ш от Вас. thuringienais Н,,^

Ю

оказывает замедленное действие на личинок Ае. ютшинХа и Ап. таеиИрегт1в. Это объясняется тем,что личинки Ае. сгашип1е и ли. тасиИрегш1з менее восприимчивы К препарату Бас. йрЬаегхсив 236а, чем личинки других видов.например, из рода си1ех. Однако, Вас.8ph.aeri.cue благодаря экологической пластичности обладает более продолжительным остаточным действием на личинок комаров,чем Вас. ШиПпв!.-епз1з Н14. Остаточная ларвицидность Вас, врЬоегхсиа возрастает с увеличением дозы препарата (табл.

Испытание эффективности Вас. врЬаеПсив 2362, проведенное в закрытых водоемах подвальных помещений - стойких очагах выплода комаров сх. р1р1епз шоХезЪив (самого восприимчивого вида комаров) показало 100^-ную гибель личинок на 5-е сутки во всех трех вариантах опытов.

Таблица

Остаточная ларвИцвдность Вас. врЬаег1оиз 2362 и Вас. Ш1г1пв1епз1з н^ (бактокулицвда) для I), АпорЬеХез иаеиИрет1в (лабораторный опыт)

Препарат Доза, г/м2 Сроки подсадки личинок (сутки после обработки препаратом)

3 5 б .4 . 20 ( 28

% смертности личинок черэз 18 ч

Вас.sphaeri- 0.1 35 10 9 8

cus 0,3 55 го 15 II

Bac.thuringi- од 5о 9

enaia Н,^ 0,3 68 12

Исследуй механизм ларэицидного действия Вас ^ sp&aerl— cus замечено,Что при заражений ЛИЧМйок Ox<plpiena molestas гистологические нарушений прежде всего про № ходят в среднем отделе пищеварительного канала. При заражении дозой I-10^ кл/ил через 16 Часов отмечается вакуолизация клеток кишечного эпителия. Чв^ез 24 часа после аараавния той же дозой в эпителиальных йле*ках увеличиваете« кол№1ество вакуолей и размеры tct. Спустя 43 часов происходи частичное нарушение слизттоа оболочки. Болие глубокие изменения и слизистой оболочке кишечника наотупапт через 72 часа

после заражения, Сохраняется только общая конфигурации пищеварительного канала» При инфицировании лтинок высокой дозой Св'Ю^ кл/мл) изменения в среднем отделе кипечника наступают раньше. Более глубокие изменения появляются раньше у личинок младаих (П-И) возрастов. Глубина гистологических изменений средней кишки зависит как от количества вводимого патогена, так и от времени его воздействия.

Глава Сохранение бактерий ВасШиа вр1шег1сиа И ВаоИХив <;Ьиг1пе1епв1в Н1<(_во внешней среде

Сохранность спор Вас. врЬаег1сив и Вас. Шхг:те:1еп-в!а в воде и почве определяли методом предельных разведений с высевом суспензий на МПА в чапки Петр и.При подготовке образцов к анализу использовали методику БИара&ип-*аси1 et а1.,(1983)« Инсектицвдность образцов оценивали биотестированием на личинках 1 возраста Ох. р1р1епв шо-1евЪиз.

В опыте по влиянию инсоляции на сохранность спор Вас. врЬаеПсив и Вас. №иг1пе1епе1а интенсивность ульт-

рафиолетового излучения определяли методом химической актинометрии на основе ферриоксалата калия (Калвер*, Пито, 1968). Снижение количества жизнеспособных спор оценивали по количеству выросших колоний в процентах к контролю.

Опыты свидетельствуют,что Вас. врЬаег1сив и Вас. Ши-г1п51вав1в Н14 длительно,но не одинаково сохраняются в водной среде вделовиях разных температур и различного рН. Низкие температуры воды (3-5°С), при длительном воздействии, снижают сохранность спор бактерий. При этом падает ларвицццная активность. Лучше сохраняются споры в воде с рН близки» к нейтральному (рН=7,85).

Исследования сохранности Вас. врЬаег1еив иВас.Уш-г1пй1епб1з н^ в воде разного органического состава свидетельствуют о влиянии орган>месккх примесей на численность и ларвщвдную активность Вас. врЬаеПсив и Вас. Шиг1пе1-епв!а н^ . В загрязненной воде активность бактерий ниже, чем в водопроводной. Загрязненность водоема особенно сильное влияние оказывает на остаточную ларвицвдность бактерия. Сопоставление численности бактерий с уровнем смертности личинок комаров показало флуктуация (колебание) числа бакте-12

рий и ларвицвдности Вас. sphaaricua, а также «зуклониов понижение числа бактерий и снижение активности Вас. thurin-giensis u12f. Опыты подтвердили вывод о кратковременном токсическом действии Вас. thuringieneia H1if. флуктуация Вас .sphaericue дает возможность предполагать размножение бациллы в тканях нертвых личинок и вода.

Полевые исследования подтвердили выводы лабораторных опытов о флуктуации, показали быстру» миграция спор Вас. aphaericus на глубину водоема 15-20 см. Установлено, что через четверо суток в верхнем и придонном слое водоема резко уменьшается число бактерий,тогда квН в средней по глубине толде воды их остается наибольшее количество.Количество опор на 21-е сутки наблюдений на глубина 15-20 см составило 6,5-10^ спор/мл и 2,3»1С? спор/мл для двух испытанных доз (0,1 и 0,?. г/м^). Несомненно,что На íanoe распределение оказывают влияние гвдробкологичеокйв условия и происходящие в них процессы»

Характер распределения спор Вас. thuxingieusie н^ аналогичен Вас. sphaericue, однако количественный уровень опор совервенно другой и он на обеспечивает достаточной и длительной ларвицидной активности,

В эпизоотическом очаге накопление зйтомопвтогешшх бактерий про 1С ходит за счет массового их размножения в трупах насекомых,погибших от отих бактерий, и число последних может возрастать в несколько раз (Гукааян идр,Д97б| Кулагин и др.,1980)»

Микробиологические анализы воды показали, что динамика численнооти Вес, ephaericus После его внесения в »оду зависит от количества трупов личинок .насыщенных бактериями. Содержание бактерия ь трупах личинок к концу вторых суток достигает 60,0'Ю^ и 89,5*10^ клеток на лтинку Ох. pipiens moleetus и ¿n. aaculipennis, соответственно. Споруляция бактерий в трупах протекает между 48-72 часами, когда число бактерия достигает максимального значения 93-10^ и 87*ТО-® кл/мл для вышеперечисленных джияок соответственно. При постепенном разложении трупов бактерии насыщают водную среду и при подсадке здировых особей возникает повторная эпизоотия. Кроме тоге,среди личинок комаров

15

йредмиагается канибализм.

Следовательно, размножение бактерий в трупах личинок ведет к насыщению водной среды этими бактериями, вызывает реинфекцш среди эдоровой части популяции личинок. Таким образом обеспечивается долговременное прюутс-гвие патогена в меоТах обитания личинок комаров и создается очаг епиэоотии.

Исследована сохранность Вас. sphaericus и Вас. thu-ringiensis u^ в почве. Ö лабораторных условиях использовали почвы: дерново-подзолистые СрНе7,0) и дерново-оред-неподзолистые <рй=4,6). Ежемесячные бактериологические анализа образцов почв с дозированно внесенными спорами,показали заметное снижение спор Вас. sphaericus и Вас. thu-ringiensis Hw в кислой почве. В дерново-средкеподзолис-той почве титр спор снизился через 5 меояцев у Bac.sph&e-г!сиз с 5,2-10^ спор/г до 7,3-10?,а у Вас. thuringiensia Hj^ о 6,7-Ю6 спор/г до if,9>I0it. В дерново-Подзолизтых почвах количество спор обоих патогенов в течение 5-ти месяцев оставалось приблизительно на одном уровне.

Поскольку при обработке водоемов бактериальной суспензией большое количество патогена попадает на дно водоема и смешивается с илом, интересно было проследить, как сохраняются эти микроорганизмы в илистой фракции, исследования показали,что спора Вас. sphaericus сохраняется в течение одного года (срок наблюдения),но тигр их значительно меняется. Через месяц количество бацилл в I г ила увеличилось до 1,7-1(Р, через 2,5 месяца до 4,6-ICr ,а через год составило 3,7»ic£. Эти показатели косвенно св1щетельству-вт.что Вас. sphaericus не только накапливаются в предои-ном иле за счет перемещения с верхних слоев водоема,но и размножается в этих условиях. Предполагается,что выпавшие осадки способствуют передвижению инфекции на глубину.

Изучение сохранности Вас. sphaericue и Вас. thurin-giensie н14 в трупах личинок комаров проводили в лабораторных опытах используя природные популяции личинок де. comamnis, Сх> pipiens aoleötua» а также лабораторную популяцию комара Aedes aegypti. Дичинок обрабатывали суспензией Вас, sphaericus, содержащей 7,4-10' кл/мл и II

Суспензией Вас. thuringiensie содержащее 6,0>10

кл/мл. 100#-ная смертность личинок в зависимости от вода отмечалась на 1-е или ¡¿-ые сутки для Вас. sphaericua и на 1-ые сутки для Bao. thuringiensis

Собранные трупы личинок хранили а лабораторных условиях при разных температурах v.b термостате,холодильнике и холодильной камере).Опыты показали,что Вас. thuringienels Hj^ и tíac. sphaericus сохраняются в трупах личинок в лабораторных условиях в течение Э лет,не теряя ларвицидиых свойств. Изменение условии хранения незначительно влияют на свойства бактерщ.

При изучении влияния инсоляции на сохранность спор Вас. sphaericus и Вас. thuringleneis Н14 , результаты,полученные в лаоираторных опытах,показали,что при Уа оолуче-Нии спор Вас. thuríngiecsis от 1,5 до 5 мин наблюдз-

ется гибель 50~ЮС$ спор, для Bao. sphaericus 2362 аналогичные результаты достигнуты при 2-10 мин. В полевых опытах количество жизнеспособных спир за сутки после облучения составила на затененном участке у Bao. thuringien-sis _ , у Вас. sphaericus - k%. Дисперсионный

анализ данных по влиянию инсоляции на сохранность спор Вас. sphaericus и Вас. thuringiensis н^ позволил установить, что факторы освещение и продолжительность облучения оказывают достоверное влияние на интенсивность отмирания спор. Инактивация спор Вас. sphaericue в ясную погоду tocce-денность 75 тыс.люкс) происходит быстрее,чем в пасмурнуп (освещенность 15 тыс.люко). При снижении числа спор на инсектицвдность вода ДЛЯ Лунинок Сх. pipiana moleetus снизилось лиаь на 35$. Это является косвенным свидетельством того, Что кристаллу эндотоксина слабо инантивйруются под влиянием инсоляции.

Выводы

I. Вас, sphaericuB обладает более продолжительным остаточным действием на личиной комаров, чем Bao. thuringiensis H1V ".Эффективность й продолжительность остаточного действия в значительной мере зависят от температурных услов® и органического состава водоема. Чем выше температура вода и, чем меньше загрязненность водоема, тем эффек-

15

тивнее м продолжительнее действие энтомопатогеиов.

2. Вас. epbeerlcus рециркулирует в водоеме за счет размножения в трупах личинок и последующем насыщении водоема новой генерацией бактерий. Эти экологические особенности Вас. ephaericua позволяют использовать ее для создания искусственных очагов эпизоотия в водоемах, заселенны}: личинками восприимчивых видов комаров и, таким образом, регулировать численность последних.

3. Споры Вас. aphaerir.ua и Вас. thuriügieneis H1(f хорошо сохраняются в воде, првдонном иле, почве разных типов (кроме кислых поча) и трупах личинок комаров. Длительное пребывание Вас. sphacricus в естественных условиях лишь незначительно снижает Ларвицвдвые свойства, которые легко восстанавливаются. Отрицательное влияние на выживаемость спор бактерий оказывает инсоляция.

Ц. Препарат на основе Вас. spbaoricue, полученный в лабораторных условиях по ларвицидной активности не уступает аналогичным зарубежным препаратам и бахтокулицвду (Вас. timringlensis Н14). Эффективность препарата Бас. sphaariou3 в полевых условиях не хуже, чем у бахтокули-цода. Однако наблюдается разница в летальных концентрациях и в скорости их действия.

5. Наиболее восприимчивы к ларвицвдному эффекту Вас. ephaericue Лткнки комара Culex pipiens oolestus.

Их восприимчивость в 10 и 30 раз ваше таковой личинок l2 Anopheles Baculipennis И Aedes aegypti. Вас. thuringiensis почти одинаково активна для указан-

ных водов комаров. Наиболее восприимчивыми стадиями комаров для этих бактерий являются личинки первого и второго возрастов. На предкуколок, куколок и имаго эти бактерии не действуют.

6. Вас, sphaericus в отличие от Вас. thuringiensis Н^ обладает яарвицвдностью на ранней стадии вегетативного роста. Наибольшая ларвицидная активность в обо-vK случаях отмечена после завервения споро- и кристаллообразования.

7. Впервые методом математического планирования биологического эксперимента по программе R-мишх опти-16

иизирована питательная среда для глубинного культивирования Вас. spbaaricus, содержащая в качеотве основных компонентов рротеозопептон и БВК. Ларвицедиая активность Вас. ephaericus зависит от состава среды и режимов культивирование, температуры, pH среды и аэрирования.

8. Вас. sphaericua аналогично Вас. thui-lngiensie Hj^ яв/ястся бактерией кишечного действия на личинок комаров.

Практические рекомендации носят методический характер:

1. Считаем целесообразным использовать Вас. sphaari-cus в водоемах разного гвдрологического режима о целью внедрения микроорганизмов, способных размножаться в погибших насекомых и, таким обраэом, самовоспроизводигься в местах выплода объектов борьбы, ...

2. Наработанный нами образец препарата на основе Вас. sphaerioufl птвмм 2362 рекомендуем для дальнейшего технологического совершенствования,наработки в полупромышленных условиях и проверку, в крупномасштабных опытах.

3. Считаем необходимым о целы» ускорения подбора питательных сред для культивирования Вас. ephaericue использование метода математического планирования эксперимента по программе в-ШШПГ.

Рекомендуем в качестве базовой среда для глубинного культивирования Вас, apüaariaua птамм 2362 оптимизи-роааннув питательную среду, содержащую в качестве основных компонентов протеозопептон и БВК,

Список работ,опубликованных по теме диссертации: I. Кандыбин Н.В., Ермолова В.П., Иванова Т.С, К вопросу, изучения б«)логической активности Bacillus aphaerl-сиз// Пути совершексчвованип микробиологической борьба о вреднвми наоекомвми и болезнями растении: Тез,докл. Всесопз.конф,- 0боленок.-1986.- С.188-189, 2.Кандыбщ Н.В., Иванова Т.О., Ермолова В,П. и др. Влияние дозы и возраста посевного материала на развитие . культуры Bacillus spbaeyicus штамм 2362//Бол.В!{ЙИСХМ. - 1988.- f. 50,- С.31-32,

Кандыбин Н.В., Иванова Т.О., Ермолова В.П. и др. Вас. sphaericus как ларвицвд против кровососущих ко-иаров//Бпл.ВНШВХМ, - 1988.- * 50.- С.32-38.

4. Кандыбин KiB.f Иванова Т.С., Ермолова В.П. и др. Ларвицедное действие Бас. sphaericus на различные виды комаров//Бил. ВНИ11СХМ,- 1988,- № 49.- С.39-4Э.

5. Иванова 1иС. Сохранность жизнеспособности и свойств Bacillus sphaericus 2362 в водной суспенэии//Бгл. ВНИИСХМ,- £988,- № 49,- С.43-45.

6. Кандыбин Н.В., Ковачева Т.С. Bacillus sphaericus

как ларвицид (обзор)//Инфори.боллетень ВПС М0ББ.-19Э9,-М 15.- С.15-30.