Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Эффективность трансплантации эмбрионов в воспроизводстве мясного скота

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Эффективность трансплантации эмбрионов в воспроизводстве мясного скота"

Иа правах рукописи

КИНЗЕЕВ ВАЛЕРИЙ НИКОЛАЕВИЧ

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ В ВОСПРОИЗВОДСТВЕ «ЯСНОГО СКОТА

03.00.13 - физиология человека и животных

(физиология сельскохозяйственных животных)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

ц. ДуОровицы Московской области

1998 г.

- г -

^ссертациой'ная' работа выполнена в отделе трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных Всероссийского научно-иссле-Да8в*ельсйэга йяс*итута животноводства (ВИЖ)

ЙЙучШё рукЬёйдиТели: доктор биологических наук А.М.Г&вриков доктор с.-х. наук А.П.Васангов

О^йП^яаяййИё бйпоненты: доктор биологических наук, профессор

Е.Д.Баткеев кандидат биологических наук

А.Н.Новгородов

бёдуййё предприятие: Российская академия менеджмента в животноводстве

ФаЗДта состоится

1999 г. в 10 часов на эаседа-яии Диссертационного Совета Д.020.15.02. при Всероссийском науч-нЬ-й'сел^дова'гельском институте животноводства.

Адрес института: 142012, п.Дубровицы, Подольского района, Московской области.

б диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского ййУчйо-йЬследовательского института животноводства.

Автореферат разослан г.

УченУй секретарь диссертационного Совета, доктор сельскохозяйственны;

Н.В. Груздев

I. ОГ.ЦАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАШТЫ

Актуальность теки. Для современного животноводства основной еадачей является увеличение производства мяса, как наиболее! полноценного продукта питания народонаселения страны. Один из путей решения данной проблемы - это эффективное использование репродуктивного потенциала животных, способных интенсивно увеличивать массу тела с высоким коэффициентом трансформации корма в мясную продукцию.

Биотехнологический метод трансплантации эмбрионов является важным фактором ускорения процесса качественного улучшения популяций сельскохозяйственных животных, обеспечивающий более полное использование генетических ресурсов маточного поголовья.

Современный уровень развития биотехнологической науки позволяет более эффективно использовать ценный генетический материал маточного поголовья мясного скота путем применения современных технологических приемов. За счет двойневых отелов имеется реальная возможность увеличения выхода телят на 30-50Х.

В мясном скотоводстве метод трансплантации эмбрионов используется в основном для получения быков-производителей от выдающихся матерей, ускоренной проверки быков по качеству потомства, увеличения выхода телят за счет двойной стельности, которая достигается путем пересадки или подсадки эмбрионов ранее осемененным коровам или телкам.

Программа трансплантации эмбрионов в мясном скотоводстве име-. ет свою специфику, связанную с физиологическими и технологическими особенностями воспроизведения мясного скота.

Ряд вопросов, связанных с технологией трансплантации эмбрионов мясных пород, до последнего времени не решены в полной мере и требуются дальнейшие технологические и технические доработки в этом направлении. Необходимы более эффективные методы отбора и подготовки доноров к суперовуляции, прогнозирования и ччзывания множественной овуляции с помощью надежных гонадотропккэй, нехирургического извлечения и пересадки эмбрионов. Изучение влияния некоторых экзогенных и эндогенных факторов на прижналяемость ва-родышей и дальнейшие усовершенствования технологии двойневых пересадок позволит увеличить эффективность метода трансплантации эмбрионов и экономику мясного стада в целом.

№ш> и задачи иопмчщммщ*. Целью настоящих исследований является дальнейшее усовершенствование технологии трансплантация эмбрионов мясных пород и, на основании этого, повышение эффективности воспроизводства окота мясного направления.

В свиьи с вышеизложенным были поставлены оледувщие конкретные вадачи:

1. Иаучить физиологические и технологические особенное« воспроизведения мясного скота;

2. Обосновать критерии отбора доноров и реципиентов;

3. Усовершенствовать методы индуцирования суперовуляции у доноров с применением сывороточных и гипофизарных гонадотро-пиков. Изучить влияние некоторых факторов на результат! индуцирования множественной овуляции и качество эмбрионов;

4. Усовершенствовать технологические приемы змбриопересадок < целый повышения их результативности и получения двойиевш отелов-,

Б. 11ровести сравнительные исследования по определение эффективности воспроизводства мясного скота методом ооемененш и трансплантации эмбрионов.

Научная поймана. Обоснована эффективность трансплантации эмбрионов в воспроизводстве мясного скота.

Изучены особенности половой циклики у мясного скота по сего нам года. Усовершенствованы критерии отбора доноров и реципиен тов, методология индуцирования полиовуляции с помощью сывороточ пых и гипофизарных гонадотропинов. Изучены экзогенные и эндоген вые факторы, влияющие на результаты суперовуляции, нехирургичео кого извлечения и пересадки эмбрионов, возможности применения ре лаксантов и анестезирующих веществ при получении и пересадках аа родьшей.

Обоснованы технологические приемы эмбриопереоадок при получе ьии телят-двоен и одинцов.

Неучена эффективность искусственного и естественного осемене ЛИР, а также метод трансплантации эмбрионов в воспроизводив цчоного скота.

Практическая ашиошоот* работы щ рццнэации результат

Обоснованные и усовершенствованные элементы техве логии трансплантации эмбрионов, в том числе отбора доноров и ре ципиентов, индуцирования суперовуляции о помощью экзогенных гона

отропинов, технологических приемов получения телят-двоен и одия-рв позволило увеличить выход телят в 1,5 раза и число двойневых телов до 62,БХ. В итоге это обеспечивает более эффективное ио-ольэование ценного генофонда маточного поголовья при создании ысокопродуктивных стад и семейств коров-рекордисток, матерей бу-;ущих быков-производителей, родоначальников линий.

Реализация научных исследований по обоснованной методологии рансплантации эмбрионов мясных пород осуществляется в опытном юаяйстве Калмыцкого НИИ мясного скотоводства (г.Элиста) и пле-!енных совхозах:"Парижская Коммуна" и "Красный Октябрь" Волгог-«дской области.

Апробация работа. Материалы диссертации были доложены на еже-■одных научно-практических конференциях ВИЖа и КНИИМС [1991-1994гг.), на 11 межреспубликанской научно-практической конференции, г. Оренбург, 1992 г.; на 12 межрегиональной научной конференции, г. Оренбург, 1993 г.

Публикации: По материалам диссертации опубликовано 8 печатных «бот.

Осиоиимв положения, вмиосииие на ааарггу:

- Обоснованные методы эффективного применения трансплантации »мбрионов 8 воспроизводстве крупного рогатого скота мягггых пород.

- Методология получения одинцовых и двойневых отелов в мясном ¡котоводстве и предложения по ее использованию.

Объем работ. Диссертационная работа состоит из введения, об-юра литературы, собственных исследовании, обсуждения, выводов я фактических предложений, списка литературы и приложения. Матери-!л диссертации изложен на 122 страницах машинописного текста, содержит 18 таблиц, 5 рисунков. Список литературы включает 142 источника, в том числе 85 на иностранных языках.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Научные исследования проводились на маточном поголовье круп-юго рогатого скота калмыцкой, абердин-ангуоской и казахской безголовой породы в опытном хозяйстве Калмыцкого научно-исследовательского института мясного скотоводства (г. Элиста), племсовхо-!ах:"Парижская Коммуна" и "Красный Октябрь" Волгоградской области ю прилагаемой схеме.

Общая схема исследований

В экспериментах использовали телок олучного возраста и ко( о высоким генетическим потенциалом в возрасте от 3,5 до 10 лез не ранее 1,5-2 месяцев после отела.

При изучении состояния воспроизводительных функции у коров сеаонам года ректально определяли состояние матки и размеры я> ников, путем хрономегражных вамеров - продолжительность охоты, новотельных коров учитывали число трудных отелов, послеотель'

сложнении, среднюю продолжительность послеотельного периода и ервис-периода. У подопытных животных определяли стельность от -го осеменения и индекс осеменения при различных условиях их со-;ержания.

Биохимические исследования проб крови проводили в соответс-■вующей лаборатории КНИИМС и ВИЖа по общепринятым методикам. При itom определяли в крови: общий белок, альбумин, оСпща липиды, юсфолипиды, холестерин, триглицерин, креатинин, щелочную фосфа-. ■азу, каротин, .витамин А. Гормональный фон в организме подопытных ¡ивотных определяли радиоиммунологическим методом в лаборатории 1ИЖа по утвержденным методикам.

Гормональное индуцирование суперовуляции у доноров проводили ) помощью сывороточных (ГСЖК, фолли?он) и гипофизарных (ДСГ, фол-штропин) гонадотропинов в сочетании с простагландином (супер-ран) . При гормональных обработках животных учитывали: сезон года, юроду донора, способ осеменения и содержание маток. Осеменение (оноров проводили искусственным и естественным способами, двуЛ-затно, о учетом одноразовой дозы семени.

Нехирургическое извлечение эмбрионов проводили с помощью спе-деальных приборов отечественного производства по методике ВИЖа.

Оценку качества эмбрионов перед пересадкой или замораживанием зсуществляли по пятибальной системе визуально под микроскопом 'Wild" при 140-кратном увеличении.

Пересадку или подсадку свежеполученных или замороженно-отта-шных эмбрионов в правый или левый рог матки проводили о помощью, сатетеров "Нойштадт" и конструкции ВИЖа. В эксперименте по полу-leHim двойневых отелов пересадку проводили по эмбриону в оба рога латки или подсадку одного зародыша в противоположный рог от желтого тела.

Для снятия стресса у животных и напряжения о половых органов 1рименяли 27. раствор новокаина в дозе 5-10 мл сакрально, ромпун в \ове 0,5-1,2 мл и маточный релаксант в дозе 10-20 мл ннутримышеч-ю.

Условия содержания и кормления подопытных животных соответствовали физиологическим требованиям для мясного слота. Коров и гелок кормили по нормам ВИЖа,

Статистическую обработку экспериментальных данных проводили по методике Меркуръовой Е.К. (1970) с применением компьютерной

техники.

a. PEayjbTAiu иошедшнмй d.i. ОаМкишосяи оршшешя полижи! фугищци у магшмго сжим

Для животных мясного направления характерной чертой являете наличие некоторых особенностей проявления подовых функций. Есш глубокое изучение этих особенностей позволит достичь высоких предсказуемых результатов в воспроизводстве мясного скота. Hai были проведены исследования по научению физиологических и тех» логических особенностей воспроизведения крупного рогатого ско мясных пород шшых регионов России.

Установлено, что воспроизводительные функции мясного око проявляются по разному.

В аимний период года только 23,IX животных проявляли приане спонтанной охоты и ее визуальное наблюдение было возможно а теч ние 8,9 часов. Ректальный путем у 63,3% коров диагностировг атонии матки и гипофункции яичников. Весной более 88,ОХ живота проявляли спонтанную охоту и состояние матки и яичников были пределах физиологических норм. В летнее время половая активное животных несколько ослабевала под воздействием темпер&турш стресса и совместного содержания о телятами на подсосе.

В осенний период, когда нормализуется температура внеш среды и животные обеспечены полноценным питанием, половая функ животных приходит в норму. Наиболее высокая оолодотворяемооть i мок от 1-го осеменения достигается осенью (67,0Х). В весенний риод, при достаточно активном проявлении половой функции, оте ность коров и телок от 1-го осеменения не превышала 49,91 максимальном индексе осеменения (2,в).

Ив полученных данных следует, что проявление подовой фуни у мясного скота по сезонам года различное.Это, по-видимому, с ваио прежде всего о уровнем кормления животных и климатичео» факторами внешен среды (температура воздуха, продолжительне светового дня и т.д.).

3.2. Критерии отбора лоров для испольвожания а ятесяж доноров эмбрионов

Целенаправленный отбор высокопродуктивных генетически це

ивотньсх о хорошими воспроизводительными функциями, способных ре-гировать полиовуляцией на введение экзогенных гонадотропииов и авать достаточное количество полноценных эмбрионов, является ос-овой для повышения эффективности метода трансплантации эмбрио-ов. Существующие методы отбора доноров не отвечают в Полной мере ребованиям поставленных задач. Необходимы последующее исоледова-ия в этом направлении.

Результаты исследований биохимических показателей белкового, [ипидного обмена, каротина, витамина А позволили установить опрошенную закономерность в том, что у животных с низким уровнем юлиовуляции основные показатели крови ниже физиологических норм.

У животных, особенно в весенне-зимний период, под воздействи->м ряда факторов наблюдаются■отклонения в обмене веществ, что листает ответную полиовуляторную реакцию яичников на введение эк-югенньгх гонадотропинов.

У доноров с низким числом овуляций (от 2 до в; 1-8; 4-10; 1-0) биохимические показатели были достоверно ниже (р<0,0Б), чем з группе коров с высоким уровнем полиовуляции (9-14; 7-10; 11-19; ?-14).

В зимний период у доноров с высокой овуляторной реакцией (7-10), по сравнению с животными, имеющими от 1 до 6 овуляций, содержалось в крови больше белка на 23Х, альбумина - 20Х, общих пипидов и фосфолипидов - 127., каротина и витамина А в 1,5-2 раза. 8 весенний период при высокой (11-19) и низкой (4-10) полиовуля-горной реакции основные показатели были несколько сглажены, ва. исключением общего белка, разница которого составляла 35,IX.

Известно, что гормональный фон организма животных в различные стадии полового цикла отражает полноценность его протекания и может варьировать в определенных пределах. Изучив эти пределы, можно отбирать доноров только с гарантированной змбриопродукцией.

Установлена прямая зависимость между овуляторной реакцией яичников, числом извлекаемых эмбрионов и содержанием гормонов в крови подопытных животных (табл.1). При минимальной ст/ляторной реакции (0-3) и числом извлеченных эмбрионов (0-3), уровень прогестерона (0,0 нг/мл) и эстрадиола (11,8 нг/мл) в крови доноров был достаточно низким. При овуляторной реакции яичников от 4 до 16 и извлечении эмбрионов до 15 на донора, уровень прогестерона (до 2,94 нг/мл) и эстрадиола (до 21,0 нг/мл) был максимальным.

Содержание кортизола в крови доноров не отражало уровня овуляцш н числа извлеченных вибрионов, а существующая разница по группа! доноров беда недостоверной.

з;; Таблица 1

Щлшнио гормонального фона в крови доноров н# овуляцш и результаты извлечение эмбрионов

Число короа-доноров (п-х>

Число овуляций

(П)

Извлеченных эмбрионов

(п)

Гормоны

Прогестерон (НГ^мл)

Эотрадиол (нг/мл)

Кортиэол (нг/ил)

18-29,0 21-33,9 17-27,4

а- о,?

0-3 4-6 7-12 13-16

0-3 4-6 7-10 11-15

0,840,10

2,02±0,25 .

2,81*0,34 **

2,94*0,44

11,0±0,13

19.7il.25

21,0« ,68

18,3±1,Р2

10,4±0,8

12,0*0,76

12,6+0,05

П.610,16

( л - р<0,06; ** - р<0,01; *** - р<0,001)

По результатам опытов можно сделать заключение, что биохими ческие показатели и уровень гормонов в крови могут быть использо вана н ¡»чеотве объективных критериев отбора доноров и прогноаи рования результатов индуцирования полиовуляции и выхода эмбриона

З.В. Ииду^розакио супероаулщции / ящкмышх-доноро* V приыаиеиие снво/хшошшх и гипофиищтих аштдрюропшю'

В 30-е годы под руководством академика Ы.М.Заводовского бь ли разработаны теоретические основы гормонального метода вызыва ния оуперовуляции у сельскохозяйственных животных.

В последующие периоды исследователи делали попытки оптимизе '' ции метода гормонального воздействия на организм животных о цеди вызывания суперовуляции. Однако до последнего времени не решеь в полной мере вопросы, связанные о индуцированием полиовуляцм особенно у мяоного окота.

*

Для индуцирования суперовуляции у коров и телок использовали !ывороточные (ГСЖК, фоллигон) и гипофизарные (ФСГ, фоллитропин) •онадотропины в дозах, рекомендуемых наставлениями и инструкцией.

Применение ГСЖ и фоллигона позволило вызвать суперовуляцию у фактически одинакового числа животных (63,2-61,5*) и выход нор-«альных эмбрионов составил от 61,1 до 68,ЗК (табл.2). Однако при ^пользовании ГСЖК число дегенерировалных эмбрионов достигает 27,8?, т.е. почти в 2 раза больше, чем при введении фоллигона. )бщая оплодотворяемость яйцеклеток в обоих случаях была равна 38,9 и 83,ЭХ.

Таблица 2

Результата индуцирования суяеровуляцки у доноров о помощь я ецвороточнмк и гипофиз яря изг гонадотропинов

Показатель Гонадотропины (доза)

Сывороточные Гипофизарные

ГСЖК Фоллигоя ФСГ Фоллитропин

(3000 ИЕ) (9000 ИЕ) (50 мг) (1200 ИЕ)

Обработано животных 19 20 32 13

Доноров с полиову- 12 - 16 - 25 - 9

ляцией (п-Х) 63,2+11,06 61,5+9,54 78,1+7,3 69,2412,80

Среднее число А*«

овуляций 6,9+0,35 7,4+0,42 8,9+0,46 7,040,40

Получено в среднем

на донора эмбрионов

я я/яйцеклеток, 5,440,28 6,040,36 7,340,35 6,440,54

в т.ч. нормальных *

эмбрионов 3,340,21 4,140,32 5,340,24 4,540,23

% 61,1 68,3 72,6 70,3

дегенерировалных 1,5+0,20 0,9+0,12 1,040,16 0,940,15

X 27,8 15,0 13,7 14,1

н/яйцеклеток 0,6+0,10 1,040,11 1,0+0,18 1,040,14

% И,1 16,7 13,7 16,0

Оплодотворяемость

яйцеклеток,?. 68.91:7,21 83,3+7,37 86,346,13 84,4410,17

( * - р<0,05; *** - р<0,001) Использование ФСГ позволило вызвать оуперовудлш® у 78,IX

л

доноров при достоверно высоком числе овулирававших фолликулов (р<0,001). Выход качественных эмбрионов достиг 72.6Х и был достоверно выше по сравнению о ГСЭКК и фоллигоном (р<0,001). Применение фоллитропина несколько снизило эти показатели, но они остались достаточно высокими, по сравнению о сывороточными гонадотропнна-ми. Оплодотворяемость яйцеклеток в обоих случаях была практически одинаковой (86,3% и 84,4%). Разницу в результатах по индуцированию суперовуляции у доноров о применением сывороточных и гипофи-аарных гонадотропинов можно, по видимому, объяснить их химическим составом, степенью очистки и биологической активностью.

В целях получения высоких результатов по индуцированию полиовуляции с применением гипофизарного препарата, при оптимальном его дозировании, были проведены следующее эксперименты. Гипофи-ьарный препарат 4СГ использовали в дозах 32; 42 и ВО мг, по четырехдневной схеме обработки, в сочетании с простагдандином супер-фан (500 мг).

Установлено, что при обработке доноров препаратом ФСГ в дозах 32; 42 и БО мг получены практически равнозначные результаты

(табл.Э).

Таблица 3

Эффективность вывивают суцеривулящш у доносив ФСГ в рааниж др&ах

Показатель Доза ЯСГ (мг)

32 42 БО

Обработано животных 19 21 32

Число доноров с полиовуляцией 14 16 25

X 73,7110,10 76,149,32 78,117,32

среднее число овуляций на

донора 7,610,41 8,0±0,49 8,911,10

Подучена е сродней на донора

эмбрионов и н/яйцеклегак, 7,010,40 7,610,42 7,310,44

в т.ч. нормальных аыбрианов 5,010,30 6,410,39 5,310,38

*• 71,4 71,0 72,6

дегенерироаашшх 0,9*0,11 1,210,15 1,010,14

* 12,9 16,8 13,7

н/нйцеклеток 1,1*0,17 1,0*0,16 1,010,15

X 16,7 13,2 13>7

Оплодотворяемость яйцеклеток 84,318,41 85,8*7,34 86,318,13

От 73,7% до 78,1* доноров реагировали оуперовуляцией и выход качественных эмбрионов выл равен 71,4,7. и 71, ОХ при равнозначном соотношении дегенерированных эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток. Общей оплодотйоряемость яйцеклеток составила 84,ЭХ; 86,8Х и 8в,зх, соответственно.

Таким обраэом, При индуцировании оуперовуляции у мясного скота гйпофиварным гоиадотропином ФСГ в минимальной дозе, равной 32 мг, возможно получить ййолйе приемлимые результаты. При этом экономия дорогостоящего препарата составляет до 36,ОХ от рекомендуемой дозы.гонадотропина.

3.3.1. 9аяюрн, влияющие па реауяьтагт индуцирования супрроаултрт у доноров

Эффективность гормонального индуцирования оуперовуляции у животных зависит от многих факторов, некоторые из которых, по мнению большинства исследователей, мало изучены.

Сезон года является одйим иэ факторов, оказывающих существенное влияние на результаты гормонального вызывания оуперовуляции у доноров.

Учитывая особенности сезонного проявления половой циклики у мясного скота, мы изучили возможности индуцирования оуперовуляции у доноров калмыцкой, казахской белоголовой и абердин-ангусской пород о помощью экзогенных гонадотропинов по периодам года.

Исследования проводили на маточном поголовье крупного рогатого скота в хозяйствах южных регионов России. Индуцирование оуперовуляции проводили о помощью гонадотропина ФСГ в дозе 42 мг в Сочетаний о проотагландином суперфан (Б00 мкг).

Из полуденных данных следует, что в весенний период, при достаточно высокой полиовуляторной реакции яичников животных на введение экзогенного гонадотропина (75Х), выход качественных эмбрионов не превышает 44,6Х при максимальном числе дегенерациЙ (31,IX) и неоплодотворенных яйцеклеток (24,ЗХ) (таОл.4). Наиболее высокое чиолй нормальных эмбрионов получена осенью. При среднем числе, овуляций на донора 7,0 получено 6,5 качественных эмбрионов« что составляет 84,ВХ от числа извлеченных яйцеклеток. Разница по числу полученных эмбрионов осенью была доотоверко выше по сравнению о весной (р<0,0Б). В зимнее время года, когда у большинства

- и -

животных подовая активность несколько снижена, возникают оложнос-ти выбора животных даже в индуцированную охоту, что приводит к увеличению числа неоплодотворенных яйцеклеток (до 22?.). Летом, 'Особенно при высоких внешних температурах, число животных с полиовуляцией не превышает 66,7Х, при среднем числе овуляций 6,5 № донора. Однако выход качественных эмбрионов достаточно высо* (71,7%). Учитывая, что животные разных пород обладают различно» генетически обусловленной плодовитостью, исследования по изучении отейтпой реакции мясного скота на введение гормональных препаратов ш«:вт научное и практическое значение.

Таблица 4

£<к:«шье (¿«минного (икхора «а ре&ульхага суш-ривуляцин н качестш эмбрионов

Показатели Сезон года

Веска Лето Осень Зима

ОС с ■ а:.- )тд но ж1гьотных 12 21 40 17

'Ч^ож,- допоров с

ипличгу.г.йцяей 9 14 28 11

% 76,0x12,5 66,7*10,2 70,0+7,24 64,7111,5

Среднее число ову-

ляций на донора 8,11 0,37 6,510,33 7,0Ю,34 6,110,30

Получена в среднем

на донора эмбрионов * *

и Н/яйцоклвтол 7,4+ 0,45 6,0+0,30 6,510,32 6,110,30

в т.ч. нормальных

эмбрионов 3,31 0,31 4,3+0,28 5,55.0,22 3,910,26

%. 44,6 71,7 84,6 63,3

дагеьерировнина« 2,^0,18 1,010,65 0,410,21 0,Ь±0,15

% • «-А , 1 16,7 3,2 13,1

н/яйцеклетов 1,8+0,17 0,7±0,12 0,б±0,21 1,410,14

% 24,3 11,6 9,2 23,0

Оплодотворяемость

яйцеклеток, % 7Б,7±12,6 8В,317,09 90,814,52 72,6110,8

( * - р<0,05)

При индуцировании суперовуляции практически равнозначное чис ло доноров калмыцкой, казахской белоголовой и абердин-ангусскс пород положительно реагировали на введение гонадотропина ФС

(табл.5).

Таблица $

Сравнится»нив результаты гормонального вшивания оуперовуляцин у доноров раалинкмх пород

Показатели Породы коров-доноров

Калмыцкая Абердин-ангусская Казахская белоголовая

Обработано животных 51 24 15

Из них реагировали

суперовуляцией 36 17 11

X ба,б±о,з2 70,840,34 73,3+0,31

Среднее число овуляций на

донора 7,1+0,39 7,240,37 7,040,44

Получено в среднем на донора

эмбрионов и н/яйцеклеток, 8,740,33 7,040,31 8,240,45

в т.ч. нормальных эмбрионов 4,240,15 4,640,31 -1,340,30

% 62,8 65,7 69,4

дегенерированных 1,040,27 0,840,22 0,940,26

% 14,9 11,4 14,6

н/нйцекдеток 1,540,16 1,640,17 1,040,11

% 22,4* 22,9* 18, г

Оплодотворяемость яйцеклеток,X 77,748,12 77,148,31 63,9410,0

С * - р<0,01)

От 68,67. до 73, ЗХ животных имели 3 и более овуляций на яичниках. Наиболее высокий показатель по числу нормальных вибрионов получен в группе доноров к.-»аахикай белоголовой породы (69,41), при числе дегзнерировзнных эмбрионов 14,5% к нроплодо1-вор:-ниых ¡яйцеклеток 16,IX. В группа доноров калмыцкой и е<5ердин-ангу13оиой |пород, при среднем числе овуляций от 7,1 до 7,2, лыход качественных эмбрионов составил 62,8 и 65,7Х, т.е. был на одном уровне. |Вмеоте о этим следует отметить, что число неошюдотворенных яйцеклеток у доноров калмыцкой и аберидин-ангусской пород в 1,Б раза больше, чем у животных казахской белоголовой породы и эта разница достоверна (р<0,01). Подобную разницу в показателях можно объяснить повышенной возбудимоотью нервной системы у доноров калмыцкой и абердин-ангусской пород, что приводит к стрессу и снижению оплодотворяемости яйцеклеток (77,7% и 77,IX против,83,9%) у

казахской белоголовой породы.

В последующей серии опытов, на примере двух пород мяояоп окота: калмыцкой и кавахской белоголовой, отличающихся по стелен] возбудимости нервной системы, мы провели сравнительные исследо вания по изучению оплодотворяемости доноров при искусственном 1 естественном осеменении. Искусственное осеменение животных прово дили ректо-цервикалышм способом о помощью одноразовых инструмен тбв. Естественное осеменение доноров осуществляли быками ручно олучкой.

Наиболее низкие результаты по оплодотворяемости яйцеклеток выходу нормальных вибрионов получены у доноров калмыцкой пород при искусственном осеменении (табл.8).

Таблица 6

Сравнительная оплодотворяемость яйцеклеток я качество эибрмонм при искусственном и естественном осеменении доноров

Показатель Осеменение доноров

Искусственное Естественное

Породы

Калмыцкая Казахская белоголовая Калмыцкая Казахская белоголова;

Число доноров 31 и 17 18

Среднее число ову-

ляций на донора 7,1*0,38 8,0*0,49 7,6*0,66 7,3*0,62

Получено в среднем

на донора эмбрионов

и н/яйцеклеток 6,840,37 7,0*0,43 6,4*0,46 6,6*0,4"?

в т.ч. нормальных

эмбрионов 4,0*0,21 4,6*0,20 6,0*0,36 4,6*0,32

X Б8,8 78,1* 88,2

дегенерированных 1,0*0,18 1,4*0,24 1,0*0,24 1,1*0,26

X 14,71 20 16,6

и/нйцеклеток 1,8*0,22 1,0*0,20 0,410,15 1,0*0,24

X 26,6 14,3 6,3 16,1

Оплодотворяемойтъ •

яйцеклеток,X 73,6*7,88 86,7*7,08 63,7*6,70 84,8*8,42

„ ( * " Р<0,0Б)

В ореднем на донора подучено 4,0 нормальных эмбрионов, ч составляет Б8,6Х от всех извлечений, а общая оплодотворяемое яйцеклеток не превышала 73,БХ. В то же в груяв® д<ж:троа и

вахской белоголовой породы выход б^Орнснаа оаоты

65,7Х, а общая оплодотворяемость яйцеклеток достигала 65,71.

В группе доноров калмыцкой породы при естественном осеменении, когда стрессовые ситуации сведены до минимума, оплодотворие-мость яйцеклеток возрастает до 93,7Х, при выходе нормальных эмбрионов 6,0 (р<0,05) или 78,IX от числа извлечений.

Подсосный метод содержания телят под коровами-матерями является одной иа особенностей технологии содержания мясного скота. При атом достигается максимальная сохранность молодняка. Однако подсос в аначительной степени отрицательно сказывается на воспроизводительных возможностях коров, удлиняется продолжительность сервис-периода и снижается оплодотворяемость яйцеклеток.

В задачу наших исследований входило изучение степени влияния подсоса на результаты гормонального ьызывания суперовуляции у до-коров мясных пород.

Установлено, что животные с телятами на подсосе по всем показателям явно уступали контрольной группе коров без телят ?тайл.7).

Таблица ?

Влияние подсоса на результаты суперавуляцки и качество амбрионов у коров-доноров

Показатель Вез телят Продолжительность подсоса, мес.

(контроль) до 3-х 3-5 5 и более

Обработано животных 16 21 19 34

Число доноров о

суперовуляцией 14 13 12 23

X 87,б±8,12* 61,9110,6 63,1*11,0 67,648,0

Среднее число ову-

ляций на донора 9,0±0,62 6,1±0,40 6,3¿Q,44 6,9±0,62

Излучено в среднем

на донора амбрионов

и н/яйцеклеток 7,?± 0,69 Б,6±0,41 6,9tO,53 6,2±0,73

8 Т.Ч. нормальных

«Ирионов 5,8± 0,29 3,210,64 3,3±0,42 4,1±0,45

X 75,3* 67,2 55,9 66,1

дегенерированных 1,OtO,18 1,1±0,23 1,2*0,26 1,040,18

X 13,0 19,6 20,4 16,2 •

н/яйцеклеток 0,9*0,14 1,3±0,19 1,4*0,21 1,1«), 10

X 11,7 23,2 23,7 17,7

Оплодотворяемое»

яйцеклеток, X В8,3±8,12 76,8*9,18 76,3*9,10 82,316,69

( * - р<0,0б)

При продолжительности подсоса до 3 месяцев и от 3 до Б месяцев, основные показатели индуцированной полиовуляции были практически на одном уровне. От 61, $7. до 63, IX животных реагировали полиовуляцией и среднее число овуляций на донора было в пределе 6,1-6,3. Выход нормальных эмбрионов составил 57,2Х и 55,97., при равнозначном числе дегенерации (19,6Х и 20,47.) и неоплодотворен-ных яйцеклеток (23,27. и 23,77.). При продолжительности подсоса более 5 месяцев, когда телята достаточно хорошо поедают корма я нагрузка на матерей через подсос заметно ослабевает, результата индуцирования суперовуляции несколько возрастают. Число доноров с полиовуляцией увеличивается до 67,67.. При средней овуляции 6,9 нг донора, выход качественных эмбрионов возрастает до 66,IX и опло-дотворяемость яйцеклеток достигает В2,ЗХ.

В группе доноров без телят 87,57. реагировали суперовуляцией и выход морфологически нормальных эмбрионов составил 75,37., чтс достоверно выше, по сравнению о другими подопытными группами животных (р<0,05).

3.3.2. Испоялвовавие миорелаясатяов и авеспея1рутцх веществ при тяирургическот извлечении и пересадкая эмбрионов

Необходимым условием успешного проявления работ по нехирургическому извлечению и пересадке эмбрионов является частичное илг полное обездвиживание животных и снятие напряжения о половых органов. По мнению исследователей, усиление подвижности матки, яйцеводов и яичников, при манипуляции с ними, является главной причиной неудач при цервикальном извлечении и пересадках эмбрионов.

Учитывая специфические условия проведения работ по трансплантации эмбрионов в мясном скотоводстве и повышенную реакцию животного данного направления на внешние раздражители, нами были проведены исследования по использованию миорелакеактов и анестезирующих средотв при нехирургическом извлечении и пересадках эмбрионов.

Наиболее высокие результаты по нехирургическому извлечете вибрионов были получены в группе доноров, где использовали препараты (21 раствор новокаина, маточный релаксант и ромпун) в комплексе (табл.8). Извлекаемость среды, оплодотворенных и неоплодот-ворвшшх яйцеклеток ооотавила 98,7Х и В8,61, соответственно. Пр|

этой случаев трами половых путей маток не наблюдалось. При использовании каждого препарата в отдельнооти извлекаемое» среды и яйцеклеток соответственно были равны - „ 89,3%, 84,ЭХ и 69,ВХ, 70,6Х, то есть на 10-18?. были ниже, чем при использовании указанных препаратор в комплексе. Число случаев травм половых путей доноров достигало 12,БХ от числа проведенных операций.

Таблица в

Эффективности применения анестеаирумцих веществ и релаксантов при ««хирургическом извлечении эмбрионов у доноров кдлмшртой породы

Показатель Используемые препараты

2Х р-р Ромпун 2Х р-р

новокаина новокаина,

(контроль) ромпун

Число доноров 16 12 34

Введено промывной среды в оба

рога, мл 100 100 100

Извлечено среды, X 89,3 84,9 96,7

Среднее число овуляций на

донора 7,310,66 6,810,69 7,010,56

Иавдечено эмбрионов и неопло-

дотворенных яйцеклеток в

среднем на донора 5,110,38 4,8Ю,42 6,210,32*

Процент от числа овуляции 89,8121,43 70,6113,1 88,616,37

Число случаев травмирования

половых путей маток 210,35 110,29 -

В процентах от числа

извлечении 12,6 8.3 -

( *'- р<0,01)

Результаты применения анестезирующих препаратов и релаксантов при нехирургической пересадке амбрионов приведены в таблице 0.

Приживляемость эмбрионов у реципиентов о использованием релаксантов ("Ромпун", маточный релакотант) в комплексе, на фоне сакральной анеотевии (2Х раствор новокаина) достигает 64,БХ, что

-го-

на 12,4-16,ОХ выше, чем при применении отдельно новокаина или новокаина в оочетаиии только о "Ромпун".

Таблица в

ОЦшиианоот» применения анеотеаирумцкж аецеотв и релаксантов при цервпшяноА пересадке эмбрионов реципиентам

Показатель Используемые препараты

гх р-р 2Х р-р 2Х р-р

новокаина новокаина новокаина,

(контроль) Ромпун Ромпун,

маточный

релаксант

Число реципиентов 31 Б7 66

Ив них отали отельными 11 24 36

X 35,6*8,62 42,116,64 64,616,13

Число абортов 115,14 - 110,20

X 0,0 ■ - 2,7

Получено телят 10 24 35

8.4. Твятлояпшств приему амбриопересадек с цвмв пощучюяия одмдцошх и двойтвих июлям

Технология нехирургической пересадки позволяет трансплантировать эмбрионы в рог матки реципиентов, при атом используются специальные приборы и приспособления. Однако результаты пересади зависят от многих факторов, отепень изученности которых недостаточна.

На маточном поголовье крупного рогатого окота мясных поро; были изучены принципы технологических приемов эмбриопереоадок < целью получения двойнввых отелов.

При пересадке одного свежего эмбриона ранее осемененным жи вотиым было получено ВВ,7Х стельности к 10 телят, в ил кптори вши двойневыми (табл.10). Средний вьаод тэдпт на одну стёльноот составил 1,3.

Схема опыта получения дп»йне«мж оме лив

Состояние эмбриона Число реципиентов

Подсадка эмбриона Пересадка 2-х эмбрионов

Свежий 12 22

Оттаянный 19 22

Пересадка одного оттаянного эмбриона ранее осемененным коровам позволила получить 63,2% стельности. В обоих случаях стельность реципиентов при пересадке им свежеполученного или ваморо-женио-оттаянного эмбриона Была практически одинаковой.

Таблица 10

Реауяьтюи пожучемм» даоАмеаостм путем переезде» и подацфш амбриоио»

Показатель Подсадка 1 эмбриона Подсадка 2-х эмбрионов

Свежий Замороженно-оттаянный Свежий Заморожевно-оттаяиныА

Число реципиентов 12 19 22 22

Пересажена эмбрионов 12 19 44 44

Стельных реципиентов 'а 12 16 13

' г ' 66,7*13,£7 63,2*16,08 68,2*9,94 69,1*10,49

Число абортов, . . . 1 ' V 1 2 • . 1

Ь т.ч. двойневых "1 • 1

г : \ 12,5*9,54 8,3*6,22 13,3*7,7 7.7*6,ее

Получено телят,воего . 10 16 ' •

в т.ч. двойневых '•".'в '.:;'. 10 10 , 10

X 60,0*15', 49 62,6*12,10 65,6*11,71 68,8*11,98

Средний выход.телят ' - 1 - ' > ■

на одну стельность , 1,3*0,33 1,3*0,26 1,210,29 1,3*0,24

При пересадке двух aм6pиqнoв в оба рога матки, стельность реципиентов составила 68,2Х и Б9,1Х, причем, приживляемоеть свеже-

полученных эмбрионов Была на 9,IX выше, по сравнению о райорожеи-во-оттаянными зародышами. В обоих случаях средний выход Т&Дят на 1 стельность составил от 1,2 до 1,3.

Отмечено, что подсадка свежего эмбриона в правый рог матки позволяет получить 83.3Х отельности у реципиентов, при этом из чиояа отельных животных 76,ОХ имели по два плода. При левосторонней подсадке эмбрионов отельность не Превышала 60,ОХ.

Ив приведенных данных оледует, чТо Наиболее приемлимым варианте»! получения двойневых отелов является? подсадка одного эмбриона ранее осемененным животным. Это позволяет получить у реципиентов до 83,ЗХ стельности и 75,ОХ двойневых отелов. При этом, соблюдается экономия эмбрионов в 2 раза, при минимальном риске перегула реципиентов за счет их предварительного осеменения.

9.6. Сравнительная аффетиввость яоеприияяадеппа мясного стопа методам! осеменения u mpanvn яазтт г ш гмбриотя

Рентабельность мясного скотоводства во многом зависит от эффективности технологии воспроизводства маточного поголовья. Дс последнего времени на товарных фермах традиционно исполъвуетс* вольная или ручная случка. В лучших племенных хозяйствах Росою воспроизводство стада основывается на искусственном осемененга животных. Это позволяет в'значительной'степени ускорить прогресс в селекции, рационально использовать семя от выдающихся производителей.

Более широкие возможности открылись перед селекционерами мяо-та хоэяйотв при испольвовании бйотехнологического метода трансплантации эмбрионов в воспроизводстве отада. Практическое применение метода трансплантации эмбрионов в мясном скотоводстве основывается на интенсификации воспроизводства наиболее генетическ ценной части маточного поголовья, получении быков-производителе: от выдающихся матерей, ускоренной проверки быков по качеству по томотва, увеличения числа двойневооти аа очет пересадки или под садки эмбрионов ранее осеменённым животным.

В вадачу наших исследований входило сравнительное изучени эффективности воспроизводства маточного поголовья мясных поро методами искусственного, естественного осеменения и транспланта цкя вибрионов.

В результате проведенных исследований установлено, что при искусственном и естественном осеменении возможно получить практически равнозначные показатели по оплодотворяемости животных от 1-го осеменения (56,2% и 59,ЗХ). При атом средний выход телят на одну стельность в обоих случаях был равен 0,9 (табл.11). Пересадка эмбрионов реципиентам обеспечила 50,7Х стельности при выходе 0,9 теленка на стельность. Подсадка эмбрионов ранее осемененным животным увеличила отельность реципиентов до 64,БХ при 61, БХ двойневости. Выход телят на 1-у стельность составил 1.3. Это означает, что путем подсадку эмбрионов ранее осемененным животным возможно увеличить выход телят на 40,ОХ.

Таблица Н

Сравнительная эффективность вискромиводотва мясного ската методами осеменении и трансплантации эмбрионов

Показатель , Осеменение животных Трансплантация 1 эмбриона

Искусств. Естествен. Пересадка Подсадка

Число животных

(реципиентов) 153 69 138 3*

Из них стали стель-

ными от 1-го

осеменения

(эмбриопересадки) В6 35 70 20

Процент стельности 66,244,01 59,348,40 60,7*4,24 64,5*8,69

Число абортов, в а б 2

X а,9 8,6 7,1 10,0

Получено Фелят, 80 22 86 26

8 т.ч. двойневых - - 16

X

Средний выход телят •

не одну стельность 0,940,00 0,940,12 0,040,08 1,340,2р.

«вода

1. Проявление половой активности у мясного скота по сееояя года ревличное. Наиболее оптимальным периодом для реалиеащп воспроизводительних возможностей маточного поголовья являете! осень.

2. Биохимические показатели и уровень гормонов в крови животных можно иопольвовать, как критерии отбора доноров и прогнозирования результатов индуцирования суперовуляции у мясного скота.

3. Гютофиаарные гормональные препараты, в силу своих химических, биологических свойств и степени очиотки, позволяет получит] более высокие покаввтели по индуцированию оуперовуляции (78,IX) i выходу нормальных эмбрионов (72,62), по сравнению с сывороточнас гояадотрошшами (63,2Х и 68,37.). Использование минимальной до» вСГ, равной 32 мг, обеспечивает получение достаточно высоких ре вультатов по индуцированию суперовуляции (73,ЗХ) я выходу нор мальных эмбрионов (71,4Х), при этом экономия составляет 30,ОХ о рекомендуемой дозы гонадотропина.

4. Породный фактор оказывает существенное влияние на резуль таты индуцирования оуперовуляции. Более высокие показатели п гормональному вызыванию оуперовуляции (73,ЗХ) и выходу нормальны вибрионов (69,4Х) получены у коров-доноров казахской белоголово породы.

6. Степень возбудимости нервной системы доноров в еначитель мой степени влияет на оплодотворяемлзть яйцеклеток и выход ка чеотвенных эмбрионов. От спокойных животных, как при иокусютвен вам, так и при естественном осеменении получено в среднем на до вора по 4,5 - 4,6 качественных эмбрионов, что составляет 60,2% 66,7* от общего числа навлеченных вародыоей и яйцеклеток.

6. Подоооный метод содержания молодняка под норовами-матерям отрицательно сказывается на результатах гормонального вызывали оуперовуляции. В группе доноров бев телят получены достоверно вы оокяе показатели по оуперовуляции (87,БХ) и выходу качественны вибрионов (75,ЗХ) при максимальной оплодотворяемости яйцеклетс (88,31).

7. Комплексное применение аиестевирутпх веществ и релаксая Тов повывает извлекавмоеть вибрионов до 88,6Х и кх приживляемое! ДО 64,БХ.

8. Наиболее оптимальным вариантом получения двойневых отелов 1&ляется подсадка эмбриона ранее осемененным реципиентам, что ювволяет увеличить выход двоен до 62,51.

8. Правосторонняя подсадка свежеполучеяного эмбриона является ¡аиболее предпочтительной, т.к. это увеличивает стельность живот-пи до 83,ЗХ и выход двоен до 75,ОХ.

10. Метод трансплантации эмбрионов более эффективен по оряв-юнив с ооеменевием животных, т.к. это позволяет увеличить отель-¡ость маток да 64,БХ, число двойневых отелов - 62,БХ и выход тент на 40,ОХ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ШГСДОШШЯ

1. Виотехнологический метод трансплантации эмбрионов возможно юпольвовать для расширенного воспроизводства мясного енота о четом физиологических и технологических особенностей его равмно-»ния.

2. С целью увеличения двойневых отелов и выхода телят предлагается проводить подсадку эмбрионов ранее осемененным хивот-шм-реципиентам.

Основные положения диссертации опубликованы в следующих работах;

1. Басангов А.П., Лазарев Г.М., Ларионов И.П., Ккнзеев В.Н., 'авриков A.M., Богданова Т.К. Суперовуляторные возможности кал-едкого скота при использовании экзогенных гонадотропинон.// Научные труды КНИИМС, Элиста.- 1991.- С.11-115.

2. Гавриков A.M., Мукминов М.М., Ккнаеев В.Н. Индивидуальные I породные особенности коров-доноров мяоных пород при гормональ-IQM вызывании суперовуляции.// Сборник трудов НИИ мясного окото: юдства, Оренбург.- 1992.- С.34-37.

3. Гавриков A.M., Абуов A.M., КинзеевВ.Н., Мукмиио» U.M. кземенение коров-доноров мясных пород при суперовуляции.// Моаоч-юе и мясное скотоводство.- 1992.- N.3.- С.16-17.

4. Гавриков A.M., Мукминбв М.М., Кинзеев В.Н., Шдаоев М.О. критерии отбора я подготовки мясных доноров к оуперовуляции.// 'езиоы докладов 12 науч. коиф. Оренбург, 1993.- С.54-55.

5. Фунтиков В. Ф., КинзеевВ.Н., Корнейченко В. И., Тавогуха

- С.С7 ~

О.Г., Гавриков A.M. Стимуляция суперовуляции у мясных коров-доно ров с помощью ФСГ (США).// Научные труды НИИ мясного скотоводе тва, Оренбург.- 1993.- С.107-108.

6. Гавриков A.M., Кинаеев В.Н., Абуов A.M., Мукминов М.М. Ис польвование мясных коров в качестве доноров эмбрионов.// Молочко и мясное скотоводство.- 1993.- Н.1.- С.22-24.

7. Гавриков A.M., Васанов Е.Р., Кинэеев В.Н., Мукминов М.М Многократное использование коров в качестве доноров эмбрионов./ Ветеринария. - 1993.- N.5.- С.39-41.<та

8. Гавриков A.M., Кинаеев В.Н., "Мукминов М.М., Юлдашев М.С Влияние сезона года на результаты трансплантации эмбрионов.// Ma лочное и мясное скотоводство.- 1993.- N.5.- С.19-21.