Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В ПРАКТИКЕ ЖИВОТНОВОДСТВА

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "ЭФФЕКТИВНОСТЬ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В ПРАКТИКЕ ЖИВОТНОВОДСТВА"

А-30869

ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА (ВИЖ)

На правах рукописи

ТАРАСЮК Николаи Николаевич

УДК 612.646.02

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В ПРАКТИКЕ ЖИВОТНОВОДСТВА

03.00.13—ФИЗИОЛОГИЯ ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

пос. Дубровнцы, Московская область 1989 год

Работа выполнена во Всесоюзном научно-исследовательском институте животноводства.

Научный руководитель — доктор биологических наук,

профессор Н. И. Сергеев

Официальные оппоненты; доктор биологических наук

И. Я. Шихов

Ведущее учреждение: Литовский научно-исследовательский институт животноводства и ветеринарии

АЗащнта диссертации состоится «

г-час. на заседании специализированного Совета Д.020,16.02 по

защите диссертации на соискание ученой степени доктора наук при Всесоюзном научно-исследовательском институте животноводства.

Адрес института: 142012, Московская область. Подольский р-н, пос. Дубровицы

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

кандидат сельскохозяйственных наук Е. В. Роко&ец

Автореферат разослан «

\

Ученый секретарь специализированного Совета кандидат биологических наук

; V

И. И. Шмыгнн

I. ОЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность» В основных направлениях эконоикческо-го и социального развития СССР на 1986-1990 годы и на период до 2000 года предусмотрено дадьне(Ьве увеличение производства продуктов животноводства к повшение продуктивности сельскохозяйственных животных. В решении этих задач, наряду с созданием прочной корковой базы« больаое значение имеет совершенствование качественного состава поголовья, ускорение темпов воспроизводства животных желательного типа и рационального использования ресурсов генофонда коров-рекоркисток.

В последнее время в СССР и развитых зарубежных странах уделяется большое внимание трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота. Трансплантация эмбрионов позволяет значительно сократить время на создание выдающихся семейств, линий и новых типов молочного скота, ускорить селекцию в 2-3 раза (Эрнст Л.К., 1970).

Одним из главных факторов, ограничивающих использование метода трансплантации эмбрионов является высокая изменчивость в реакции яичников коров на гормональную обработку.

Для увеличения масштаба практического применения метода трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота, необходимо совершенствование технологии вызывания суперовуляции.

В насояцее время в результате теоретических и технологических разработок, создано направление по криоконсервированию эмбрионов крупного рогатого скота. Поиск и разработки глубокого замораживания эмбрионов направлены на упрощение техники, используемой при замораживании.

Особую актуальность и практическую значимость имеет дальнейшее использование коров, которые закончили свой продуктивный пери-

ЦБНТРАЛЬНАИ !

' НАУЧНАЯ БИБЛИОТЕКА

| моек, еогдйлхза гадаем и<. К. А. '."»^¡РУ ""

, Инв.Кэ

од, но характеризуется ценными наследстве ними данными. С выбытием таххх животных теряется ценный генетический материал. Повтоцу. получение наибольшего числа потомства от таких животных представляет большой научный к практический интерес.

**2* Дмь и заката исследований. Целью исследований явилось усовершенствование методов гормонального вызывания суперо-щудяциж у хоров-доноров» извлечения я оценки качества, криоконсервирования и пересадки свежеподучейных и эамороменно-оттая-ных эмбрионов в условиях ферм.

В соответствии с втнм'былк поставлены следущие задачи:

- Определить влияние гипофиз арных фолликуло стимулирующих препаратов на уровень суперовуляции, качество вибрионов и их притуляемость при нехирургической пересадке.

- Усовершенствовать технологию нехирургического извлечения эмбрионов*

- Испытать в практических условиях способ криоконсервирова-нхя вибрионов в газообразном азоте, в неравномерном температурном поле с последующей транспортировкой и пересадкой их в разных хоеяйствах БССР.

- Изучить аффективность пересадки заыороженно-оттаянных эмбрионов транспортированных железнодорожным транспортом из хозяйств Московской области (ВИЖ, ГШ "Заря Комцуниэма").

- Определить эффективность однократной и двукратной обработок простагландином с цель» синхронизации охоты у телок-реципиентов.

1.3. Научная_новизна. Состоит в усоверввнствовании методов гормонального вызывания суперодуляции у коров-доноров, определении эффективности резных гилофиэарных препаратов» использовании новой технологии замораживания эмбрионов, дальней транспортировки и пересадки их в условиях ферм.

1.4. Црцддчучш НИШУСТЬ Эаыэтаатля в рааработк» систем »ргажквацм к пржмвк«жи траясшантацш м«^рхм«в в практкм колхоза "Советская Белорусом", вклдтащдя шмиш гврмашальяого внзнваякя суивровуляци у хорю» выдраквваяяях и еояошвх сэд шмшмпих зародов БССР, эяюрахявахя» мйрхмав

в гавообрааоам азот«*

1.5. Aup?tfawiff Н*^ Ословкнв поломки диоеартодш до-лахмн ж&:

- ваучяо-ттодгоокхх кокфвранцяжх ямтра трансплаетатя эжЗрюяав овльскохо&яаствмипа: хквотякх БШа 1987, 1968, 1989гг.

- Всеоогохок свмкяар» по траяошаятацяя мбраокол кртшвго рогатого скота, ВДЩ, март I98P7 г.

- I-S республжканской каучяо-нракткчвско! хаяфараяцяя *С»-стояяяа ж аврспектквн развжтжя траясихаятацни э*5риоюв групжо-го рогатого скота", г» Брест, 1988 г.

- Раапубджканско! каучно-прошвводстввхкой ховфармцяя "Тра-исплаятацхя амбржояо» хрупкого рогатого скота", г.Ходпо, 1989 г.

1.6. ЙЙМШаййШ* Дшосвртадка яаяомяа на 121 страккцах нвЕжяоЕхсяого текста, сод«рит 23 таблядя» 16 ржсукхов, состой ■s ввадияя, odsepa лятвратуры. эвсяарямаитаяьяай чаем, о<5суж-деяяя, «вводов ш предкоияи!, сшсш лхтвратурн, вкхочвщаго 150 источников, из ххх 101 на кшостражянх языках.

2. Щ.ТЕШД 11 МЕТОЛУ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа вшилненав отдам трансплантация аибршонов с.-х.

ч

животиях прх 33« я колхозе "Советская Белоруссия" Брестской схоласт* в ооотввтетвкк о планом ВИР БИЕа. В опытах (1985-1987гг.) бшо использовано 26 шимояинг коров с продуктивности) от 7 до 12 тысяч кг молока с законченным продухтявинк перкодом.

Ортпродаодв у хоров вызывали препаратом ФСГ в дозе 60, 36 к 32 «г. В сравнительных опытах для обработки коров применяли такхе фоллпготропин производства ЧССР. Коров-доноров осеменяли аамороженно-оттаянной спермой бьпсов канадской селекции. Извлечение эмбрионов проводили с помощи» закрытой модифицированной наш системы. Поиск, морфологическую оценку качества эмбрионов выполнял* по методике ВИКа.

Пересадку эмбрионов осуществляли на первом этапе приборами "Никитуб" (4РГ), на втором - приборами "ЙМВ" (Франция?. Прижив-ляемость эмбрионов устанавливали по 90-дневной стельности и по результатам отела.

Крноконсервировади эмбрионы в соломинках с криопротектором глицерин в Х(4 молярной концентрации в газообразном азоте, а также на программном замо ражи ват еде "Планер" Р-204. Цифровой материал обрабатывали на микрокалькуляторе "Электроника БЗ-21",

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИОСПВДШНИЙ

3.1. Отбор коров-доноров эмбрионов. При отборе коров для использования в качестве доноров эмбрионов учитывали интервал от отела до первой охоты, продолжительность астрального цикла. Из 12 коров, пять (41,7$) имели интервал о?>отела до первой охоты 37 дней, остальные семь (58,3£) - 57 дней. Средний интервал от отела до первой охоты составил 46,2 дня. Последующий астральный цикл у коров был синхронизирован простагландином в дозе 500 мкг. Обработку начинали с 10 дня от начала первой охоты. После первой обработки простаглачдином охота была зарегистрирована у 6 коров (50£). Остальные 6 коров проявили признаки охоты после второй обработки. Результаты гормонального вызывания суперову-

ляции у хоров-доноров препаратом ФСГ-п приведены г таблице I.

Таблица I

Уровень суперовуляции и качество эмбрионов у коров, обработанных гипофизарныы препаратом ФСГ-п

Показатель | ^^ Н0а __

______________1__I ~ 2_I

Обработано коров Реагировало суперовуляцией (п-%) Число овуляций на донора Коэффициент изменчивости (.%) Число зародышей на донора Б том числе: нормальных

16 12

11-68,7 9-75,0

9,8±1,2 И,1±1,7

29,9 55,1

7,0 5,4

2,3±0,8 3,0±0,9

В первой груше суперовуляцией реагировало 68, % хоров» во второй - 75£, или на 6,31 больше. Аналогичные результаты были подучены в числе овуляций (11,1 против 9,8), нормальных эмбрионов (3,0 против £,3). В целом следует отметить, что несмотря на наличие заметных различий по группам, использование выбракованных; коров в качестве доноров эмбрионов оказалось мало аффективным. Поэтому при отборе коров-доноров на племэаво-дах сделана попытка в дополнение к существующим требованиям использовать результаты первой гормональной обработки. В январе-марте 1966 года в племзаводах "Луч" Брестской области и племзаводе "Россь" Гродненской области была проведена гормональная обработка коров. Животные, давшие хорошую реакцию полиовуляции и достаточное число пригодных для трансплантации и криоконсервирования эмбрионов были переведены в донорскую группу.

Из 26 высокопродуктивных коров обработанных препаратом ФСГ все они реагировали суперовудяцией при среднем числе овуляций 6,6 ±0,4 на донора. Извлекали эмбрионы у 26 коров, положительных доноров по извлечению эмбрионов оказалось II (42,3£).

Подучено в среднем 7,7±0,83 зародопа я 6,2±0,41 нормальных амб-ряонов на донор« или 80,5$ от числа извлеченных эародьшей.

В исследованиях была определена эффективность использования' трех препаратов 4СГ производства США, ЧССР* СССР. Исследования проведены в колхозе "Советская Белоруссия" на 160 высокопродуктивных норовах черно-пестрой породы. Животных обрабатывали по 5-ти дневной схеме в' дозе $СГ {(Ж и ЧССР) 50 мг и фолдитропина (СССР) 1200 ИВ (табл. 2).

По числу реагирующих животных суперовудяцией разяща была несущественной (86,2; 100,0 и 84,2$), количество овуляций на донора было больше в группах коров, обработанных препаратами КГ

(СВА и ЧССР), при значительной разнице в вариабельности этого показателя. Коэффициент изменчивости в 1-й группе составил 39,во 2-й - 54,и в 3-Й - 69,3$* В числе нормальных эмбрионов существенных различий не выявлено. Имеющиеся различия, вероятно, связаны с числом животных в группах и индивидуальном особенностями животных, разным их физиологическим состоянием на день обработки, а также возрастом животных. Исходя из приведен«« данных можно заключить, что препараты ФСГ разных фирм можно использовать с равной долей успеха при гормональном вызывании суперовуляции у коров,

Таблица 2

Уровень суперовуляции и качество эмбрионов у коров-доноров, обработанных разными препаратами ФСГ

ГЪкаэ^тель II- "Готл^ны

Гормоны

Обработано коров Рваг^эовало суперозуляцией

Число овуляций на донора

94-€6,2 13-100,0 32-84,2 9,2±0,4 9,4±1,5 8,5±1,0

109 13 38

38

Продолжение таблицы %

1 __ __Гормоны____

I "Т»5лликотро-Т4оллйтро-

{ (СДАУ )пин (ЧССР) Iпин (СТО*)

Оперировано коров 94 13 32

Положительных доноров.по извлечении эмбрионов (п - %) 03-08,3 12-92,3 30-93,7

Подучено эародшей на донора 7,6*0,51 6,3*1,33 6,0*1,15

В том числе: нормальных 4,3*0,3 5,7*1,21 4,7*1,20

3.2. Синхронизацияиохота укоров^доноров и телок-р^ципнентов.

Особое значение для синхронизации охоты имеет простаглацдин - препарат, обладащий мощных лютеолизирущим действием. Для синхронизации охоты у телок-реципиентов был использован простаглан-дин "Эстрофан" в дозе 500 мкг в сочетании с препаратом СПС (фол-лигон). Вводили его внутримышечно через 48 часов после инъекции фоллигона (500 НЕ) с одновременным введением тривитамина.

Таблица 3

Синхронизация охоты у телок при однократной обработке про стагландином в сочетании с (Ж и тривита-мином

Показатель Группы

про стагландин+ШС+1 простагландин, «ривитамин | ЦК™'

п I % I п 1 %

Обработано животных 96 - 318

Проявили признаки охоты 91 94,0 217 58,9

в том числе: через 48 часов те 82,4 173 79,8

через 72 часа 3 3,3 4 1,8

через 96 часов 13 14,3 40 10,4

Не продли в охоту 5 5,2 151 41,1

Первая груша телок была обработана с учетом наличия желтого тела в яичнике, без фиксирования экстрального цикла, вторая -фронтально без контроля желтого тела в яичниках (табл. 3).

После инъекции простагландина в сочетании с СЯК и три витамином через 46 часов проявили признаки полноценной охоты большинство телок (82,и лишь незначительное число их прмпли в охоту через 72 и 96 часов (3,3 и 14,Из 318 телок 2-й группы пришли в охоту только 58,или меньше на 35,9% чем в 1-й группе. Как и в 1-й группе основная масса телок пришла в охоту через 48 часов (79,6$).

Во втором опыте определяли эффективность синхронизации охоты у телок простагландином при однократной обработке с фиксированным циклом и наличием желтого тела в яичнике перед обработкой. Инъекции простагландина осуществляли на 10-Й день полового цикла. В качестве сравнительного контроля была группа телок, обработанная простагландином 2-х кратно с интервалом 10 дней между инъекциями с неизвестным циклом и без контроля наличия желтого тела в одном из яичников перед обработкой (табл. 4).

Таблица 4

Результаты синхронизации охоты у телок при одно- и двукратной обработке простагландином

1 — Группа

Показатель 1 I ОДНО! ОбрЕ [ратная Лотка ( I $ /кратная работка

I п » п I %

Обработано животных 25 52

Проявили признаки охоты 23 92,0 44 84,6

В том числе: чере 48 часов 19 82,6 32 72,7

через 72 часа 4 17,4 10 22,7

через 96 часов - - 2 4,6

Не пришли в охоту 2 8,0 8 15,4

После однократного введения простаглацдина не все телки, имевшие в яичниках желтые тела проявили признаки охоты. По-ви-димоцу, причиной этоцу явились ошибки г определении качества

желтого.тела перед инъекцией эстрофана, а возможно, физиологическое состояние животного на день обработки. Из 25 обработанных телок 92% их проявили признаки охоты, а при двукратной обработке только 84,б^ или на 7,41 меньше. Аналогичная разница была отмечена и во времени прихода телок в охоту.

Из приведенного материала можно сделать заключение, что наиболее приемлемая технология подготовки реципиентов для пересадки является однократная обработка простагландином в сочетании с ЯК и витаминами и однократная обработка про стагландкном телок с фиксированным астральным циклом и наличием активного желтого тела в одном из яичников на день обработки. При массовой пересадке замо-роженно-оттаянных эмбрионов не исключается возможность использования метода фронтальной двукратной обработки про стагландкном, но при этом цужно обрабатывать на 30-40$ больше животных от потребности, чем при первых 2-х методах.

В наших исследованиях сделана попытка синхронизировать охоту у коров простагландином серед гормональным вызыванием супероцуля-ции. Использовали метод фронтальной двукратной обработки и метод однократной обработки простагландином коров с наличием активного желтого тела в одном из яичников (табл. 5).

Различий в числе животных пришедших в охоту после одно- и двукратной обработки практически не было. Несколько лучше были показатели синхронизации охоты при двукратной обработке, но они ниже, чем у телок. Вероятно, это было связано с лактацией, так как большинство коров находились в начальной стадии лактации (35-40 дней от отела). Известно, что вызывание синхронизированной охоты у лак-тирущих животных затруднено в связи со слабым действием проста-гландина в начале лактации (Л.К.Эрнст и да., 1964).

3.3. Многократное использование коров в качестве доноров.эмбрионов. 6 исследованиях по многократному использованию воров в качестве доноров эмбрионов были взяты в основном, выбракованные высокопродуктивные коровы, от которых за первое и второе извлечение быки подучены нормальные эмбрионы. Результаты исследований показали, что отбор коров по реакции яичников на первую и вторую гормональную обработку позволяет получать от них до 60 эмбрионов в год (табл. 6).

Таблица б

Уровень суперовуляции у хоров в зависимости от кратности гормональной обработки и нехирургического извлечения эмбрионов

Кратность обработки и извлечения ембркоков 1 Обработало 1 Число 1 Нормальных 1 Процент от ( коров I овуляций на 1 эмбрионов 1 числа 1 1 донора 1 на донора I овуляций

I 9 7,6*3,6 6,9*1,8 90,8

2 9 10,741,7 8,3*1,4 77,6

3 9 11,2*1,6 8,3*1,1 74,1

4 б 11,5*2,0 9,3*2,1 80,8

Выход нормальных эмбрионов после трехкратной обработки был относительно стабильным (6,9 и 8,3). После четвертой обработки отмечено увеличение числа нормальных эмбрионов до 9,3 на донора. Процент оплодотворяемости яйцеклеток независимо от кратности обработки и извлечения был высоким и составил в среднем 80,с колебаниями от 74,1 до 90,Отмечено незначительное снижение оплодотворяемости яйцеклеток с увеличением числа овуляций на донора.

3.4. Результаты нвхирургического получения эмбрионов у коров-доноров. Извлечение эмбрионов в условиях ферм вызвало необходимость модернизации технологии извлечения эмбрионов и отказаться от вышвания с использованием шприцов. Для этой цехи была сконст-

руироаана закрытая система, состоящая из шлангов диаметром 15 мм достаточной длины, обеспечиващих подъем флакона со средой на высоту 2-2,5 м с помощь» специального телескопического тетива. В качестве переходника использовали трехходоцув стеклянную "У"-образную трубку диаметром 15 мм. Для подключения системы к катетеру был изготовлен переходник иа наконечника вприца Луэра на 60,0 пл. Обор прошеной жидкости проводили в закрытый сосуд, размещенный в термостате фирмы "Кассу" (Франция). С целью исключения микробной контаминации при поступлении воздуха во флакон со средой использовали специальные иглы с фильтрами от системы для переливания крови.

Применение в качестве переходника "у"-образной стеклянной трубки имеет определенное преимущество перед использованием трехходового крана для этой цели. Так, шланги легко соединяются, демонтируются, трубка легко промывается и стерилизуется. К месту извлечения система поступает полностью смонтированной и остается только подключиться к флаконам.

Сравнительные результата нехирургического извлечения эмбрионов у коров с множественной овуляцией приведены в таблице 7.

Эффективность промывания рогов матки коров в зависимости от технологии введения и удаления промывной жидкости

Таблица 7

Способ извлечения

Показатель

¡открытая система! закрытая си-I с помощью шприца! стема самоте-1 1 ком_

Оперировано коров

77

Положительных доноров по извлечению эмбрионов (п - %)

69-89,6 23-88,5

9,4±0,4 9,0±0,9

497,7 463,6

Число овуляций на донор Средний объем введенной

Число овуляций на донора Средний объем введенной среды на один рог матки (мл) Средний объем подученной среды на один рог матки (мл) Процент от объема введенной Получено эародьшей на донора Процент от числа овуляций В тон числе нормальных

3,7+0,3 4,3+0,6

ВЬвтороЙ группе коров при промывании рогов натки было меньше изъято промывной среды на 7,6$ и зародышей от числа овуляций, чем у хоров первой группы (58,9 против 77,6$).

Из приведенных данных можно сделать вывод, что при хорошем навыке работы обе системы с успехом могут быть использованы для извлечения эмбрионов. Однако для извлечения эмбрионов в условиях ферм», предпочтение следует отдавать закрытой системе.

3.5. Морфологическая оценка качества эмбрионов крупного рогатого скора. Правильная оценка качества жизнеспособных эмбрионов на любых стадиях определяет успех трансплантации. Морфологической оценке было подвергнуто 1013 зародыаей, из них оказались пригодными для пересадки 68,1$ эмбрионов. В большинстве своем они были оценены как хорошие (54,6 и 40,£¡6). Сравнительно высокий процент было эмбрионов удовлетворительного качества <19,5 и 32,6$). На 7-й день извлечения было подучено 15,6$ ранних и 36,8$ поздних морул, 47,6$ ранних бластоцист. Из общего числа 892 эмбриона было зарегистрировано 33,9$ отличного, 47,7$ - хорошего и 18,4$ - удовлетворительного качества (табл. 8).

Таблица 8

Морфологическая оценка качества эмбрионов крупного рогатого скота (п - $)

Качество !---_0т&Ш ^»Н™----------

эмбрионов I---Й2ИШ----|бластоцис-|Всего

________________1, ранние_1 поздние 1ты ранние 1____

Исследовано эмбрионов 139 328 425 892 Процент от числа

исследованных эмбрионов 15,6 36,8 47,6 100,0

В том числе: отличные 36-25,9 89-27,2 178-41,9 303-33,9

хорошие 76-54,6 132-40,2 218-51,3 426-47,7

удовлетворительные 27-19,5 107-32,6 29-6,6 163-16,4

Из приведенных данных следует, что для практической трансп-

лантации целесообразно извлечение эмбрионов проводить на 7,5 день, когда они находятся на более поздних стадиях.

З.б. Замораживание и оттаивание„амбрмонов. В исследованиях была поставлена основная цель - разработать простые и ускоренные технологические приемы замораживания эмбрионов с сохранением их жизнеспособности до 90$ с приживляемостью до 50% при нехирургической пересадке, Замораживание эмбрионов в газообразном азоте пЬзволило сохранить жизнеспособность у 86,3$ эмбрионов с прижив-ляемостью 43,9$. Потеря эмбрионов после замораживания и оттаивания составила 13,7%. Стадия развития эмбрионов имеет определенное значение в технологии замораживания и оттаивания и находится в прямой связи с уровнем их приживляемости при нэхирургическо! пересадке (табл. 9).

Таблица 9

Жизнеспособность эмбрионов после замораживания в газообразном азоте

Показатель

}__Стадия_раэвития__I Итого

| морулы !бластоцисты {

Заморожено и оттаяно эмбрионов

Число жизнеспособных эмбрионов (п - % >

Пересажено эмбрионов

Число реципиентов

Стельных реципиентов

96 115 211

76-79,2 106-92,2 182-86,3

76 106 182

68 96 164

32-47,0 40-41,7 72-43,9

Одинаково приживлялись как поздние морулы, так и ранние блас-тоцисты при пересадке их реципиентам 7-го дня. Несколько больше этот показатель был при пересадке поздних морул (+5,3%). Вероятно, имеющиеся различия в приживляемости морул и бластоцист можно объяснить разнокачественностью физиологического состояния реципиентов. Телки по эстральноцу циклу были 7-го дня, для пересадки

раннжх и продвняушихся бластоцист предпочтительнее использовать животных с зкстральным отслои 7,5 дней.

Уровень жизнеспособности и приживляемое« вибрионов зависит также от их качества до м после замораживания (табл. 10).

Таблица 10

Хизнеспособкость эмбрионов в зависимости от их качества до и после замораживания-оттаивания

Качество амбрио- (Число ! Качество вибрионов после оттаива-

нов до закоражи- ^^-ЖЛь-аи.

вания I I отличныв! х°Р°шие !вори— !рирован-I_ 1 I _ ! тельные 1ные

Моруды: отличные 8 1-12,5 4-50,0 3-37,5

хорошие 76 - 37-40,7 27-35,5 12-15,8

удовлетворительные 12 - 4-33,3 8-66,7

Бластоцист:

отличные 41 6-14,6 19-46,3 16-39,1 -

хорош» 65 - 33-50,8 29-44,6 3-4,6

удовлетворительные 9 - - 3-33,3 6-66,7

Кркоконсервирование эмбрионов существенно сникает их качество. Так, из общего числа 49 эмбрионов отличного качества после замораживания и оттаивания сохранили свои качества - моруды 12,5$ и бластоцист 14,6$. Почти половина эмбрионов перешла в группу хорошего качества и небольшое число эмбрионов были оценены как удовлетворительные. При замораживании эмбрионов хорошего качества 48,7$ и 50,8$ морфологически были интактньши, 35:5$ и 44,6$ были удовлетворительного качества. В группе морул 15,6$, бластоцист -4,6$ оказались не пригодными для пересадки.

Эмбрионы удовлетворительного качества после замораживания и оттаивания сохранили свою первоначальную оценку только 33,3$, остальные эмбрионы (66,7$) имели необратимые дегенеративные изменения. Из этого следует, что эмбрионы удовлетверительного качества нецелесообразно подвергать криоконсервированио, их необходимо

пересаживать свекеполученныыи.

Эмбрионы отличного и хорошего качества при всех равных условиях лучше пркжимяются (табл. II).

Таблица II

Прижнвляемость эамороженно-оттелнных эмбрионов в зависимости от их качества

!__Качество амбряонов__I Итого

Показатель 'отличные [ хорошие {удовлетворите-]

| | | . ЛЬНЫв |

Пересажено эмбрионов 7 93 82 182

Число реципиентов 7 93 64 164

Отельных реципиен- 48 19 72

тов 5

Процент стельности

от числа реципиен- 71,4 51,6 29,7 43,9

тов

Средний процент стельности по отличным и хорошим эмбрионам составил 61,556; удовлетворительным - 29,7% животных. В целом приживляемоеть удовлетворительных эмбрионов от числа пересаженных обставила 25,6$ против 71,4% по группе отличных и составила 51,6$ по группе хороших. В результате общая стельность от пересадки 182 эмбрионов разного качества составила 43,с приживяяемостью 40,ЭД.

В исследованиях по замораживанию, наряду со ступенчатым выведением криокротектора глицерина был использован модифицированный способ удаления хриопротектора с использованием сахарозы в 0,7 молярной концентрации.

Применение сахарозы в 0,7 молярной концентрации заметно повышает процент эмбрионов отличного и хорошего качества, способствует снижению числа удовлетворительных и дегенерированных эмбрионов (табл. 12). Так, из общего числа 52 замороженно-оттаянных эмбрионов пригодными для пересадки оказались 4В (92,ЭД). Из них отличного и хорошего качества 64,6$; удовлетворительных - 31,& и не-

пригодных для пересадки - 11,556. По группе эмбрионов отличного и хорошего качества после оттаивания не было зарегистрировано деге-нерировакных, в группе удовлетворительных их было 60£.

Таблица 12

Качество эмбрионов до и после замораживания-оттаивания с сахарозой'

________________ _Каче ст во. _эмбрионо в______________________

, . I после оттаивания (п - %) До замораживания Са-%) {--------

отличные I хорошие !удовлетво-1дегенери-} I !рительные Iрованные

Ыорулы: отличные 5 2-40,0 2-40,0 1-20,0 _

хорошие 19 - 16-84,2 3-15,8 -

удовлетворительные 5 - - 2-40,0 3-60,0

Бластоцисты: отличные б 3-60,0 2-40,0 - -

хорошие 13 - 6-46,2 7-53,8 -

удовлетворительные 5 - ■ - 2-40,0 3-60,0

Существенных различий в жизнеспособности между ыорулаыи и бластоцистаыи не выявлено. Аналогичные различия были отмечены и в приживляемости эмбрионов после нехирургической пересадки

(табл. 13). Таблица 13

Приживляемость замороженно-оттаянных эмбрионов при применении сахарозы

I_Качество_эмб£ионов___! Итого

Показатель «отливе Псортши^удовлетм-' в ____1___рительные 1

-1-

Пересажено эмбрионов 5 26 15 46

Число реципиентов 5 25 15 45

Отельных реципиентов 4 15 6 25

Процент стельности 80,0 60,0 40,0 55,5

В итоге исследований по замораживанию эмбрионов, хранению, транспортировке, оттаивание и пересадке определено как неотъем-ливое условие повышения результативности пересадки, строгая селекция зародышей для замораживания по их качеству.

3.7. Нехирургическая_пересадка. После морфологической оценки качества свежих или замороженно-оттаянных эмбрионов и подбора реципиента с учетом возраста эмбриона, их помещали в специальные соломинки, & затем в прибор для пересадки. Ранние морулы размещали только в верхушку рога матки, как можно блике к маточно-труб-ноиу соединение. Поздние морулы и бластоцисты - в среднюю часть -ora матки за болыцую кривизну (табл. 14).

Таблица 14

Приживляемость свежепо дучеиных эмбрионов в зависи-

мости от стадии развития

Показатель ! Стадия развития ! мовулы t бластоцисты 1 Итого !

Пересажено эмбрионов 79 70 149

Число реципиентов 73 66 139

Стельных реципиентов 24 27 51

Процент стельности 32,9 40,9 36,7

Общая стельность от пересадки эмбрионов составила 36,7$. Выявлена некоторая зависимость в приживляемости эмбрионов от стадии развития и качества.

Таблица 15

Приживляемое» свежеподученных эмбрионов в зависимости от их качества

Качество !пёресаженоГ"Число [отельных [Процент

эмбрионов |эм^ионов |реГиен-;стель-

Морулы: отличные 12 12 6 50,0

хорошие 32 29 12 41,4

удовлетворительные 35 32 6 18,8

Бластоцисты: отличные 24 22 12 54,5

хорошие 33 31 13 42,0

удовлетворительные 13 13 2 15,4

Из 149 эмбрионов отличного качества было 24,256; хорошего -43, и удовлетворительного - 32,2£, что, вероятно, сказалось на ре-

зультатах их приживляемости после нехирург ической пересадки (табл. 15).

Пересадка эмбрионов отличного качества дает возможность получать высокий процент стельности (50,0-54,5). Приживляемость блас-тоцист была на 4,5$ вше, чем морул. Пересадка морул и бластоцист хорошего качества обеспечивала более 41$ стельностей (41,4 и 42,0).

В наших исследованиях была определена эффективность пересадки замороженно-оттаянных транспортированных эмбрионов из Московской области (ВИ1) в Брестскую область, колхоз "Советская Белоруссия", В среднем, стельность составила 39,5$ от числа пересадок. При пересадке эмбрионов отличного и хорошего качества уровень стельности составил 45,7$, удовлетворительного - только 26,2$ (табл. 16).

Таблица 16

Эффективность пересадки замороженно-оттаянных, транспортированных эмбрионов крупного рогатого скота

Пмгм&»1п. I Качество эмбрионов (п -_$)_ -_

показатель , "отлР^ГГ'м^ййе Гудоалмвб-Т й^п

1 I 1рительные I Игого

Оттаяно эмбрионов (п-152) 7-4,6 70-46,1 42-27,6 119

Пересажено эмбрионов 7 70 42 119

Отельных реципиентов 4 32 II 47

Процент стельности 57,1 45,7 26,2 39,5

Результаты пересадки заыороженно-оттаянных эмбрионов имеют пряцую зависимость от качества желтого тела в яичнике реципиента на день эмбриопересадки, что подтверждается данными, приведенными в таблице 17. Стельность реципиентов с желтым телом в яичнике хорошего и удовлетворительного качества практически была одинаковая, 46,7 и 45,4$ соответственно. Объясняется это, вероятно, способом оценки, который является сугубо субъективным и зависит от

квалификации оператора.

Таблица 17

Уровень прмживляемости заморожекно-оттаянных эмбрионов в зависимости от качества желтого тела в яичнике реципиента на день пересадки

Показатель _____

I хорошее I удовлетвори- 1 плохое, слабо-___________I____1_т§льно§____1. выраженное__

Пересажено эмбрионов 77 22 20

Число реципиентов 77 22 20

Отельных реципиентов 36 10 I

Процент стельности 46,7 45,4 5,0

Из наших данных следует, что при плохом,слабо выраженном желтом теле и отсутствии увеличения яичника на стороне предполагаемой овуляции у реципиента,пересади эмбрионов проводить нецелесообразно.

Дальняя транспортировка замороженных эмбрионов в жидком азоте не оказывает существенного влияния на результаты их пересадки. Для повшения эффективности пересадки транспортированных за-мороженно-оттаянных эмбрионов в условиях животноводческих ферм, необходимо соблюдение оптимальных условий технологии работы с эмбрионами и подготовки животных реципиентов.

4. ВЫВОДИ

1. Эффективность внедрения метода трансплантации эмбрионов в программе селекции молочного скота может быть обеспечена целенаправленным отбором коров-доноров как по племенным качествам, так и способности хорошо реагировать на гормональные препараты суперовуляцией и выделять достаточное количество жизнеспособных эмбрионов.

2. Препарат ФСГ (фоллитропин) отечественного производства по своему биологическому действию не уступает импортным препаратам ФСГ (США, ЧССР) и дает возможность получать суперовуляцию у 84$

коров, овуляций - 8,5 и нормальных эмбрионов - 4,7 на донора.

3. Комплексная обработка простагландином в сочетании с СЯК и витаминами животных реципиентов фронтально, без выявления желтого тела в яичнике,четко синхронизирует охоту У 96$ телок в течение 96 часов. Результаты синхронизации охоты у реципиентов снижаются на 41$ при фронтальной однократной обработке одним простагландином. Однократная обработка телок простагланднном с активным желтым телом в яичнике с 10 по 12-й день астрального цикла обеспечивает приход в охоту 92$ животных в течение 72 часов. Двукратная обработка без фиксации астрального цикла синхронизирует охоту у 85$ телок в течение 96 часов.

4. Многократная гормональная обработка препаратом ФСГ-п и нехирургическое извлечение'не оказывает отрицательного влияния на последующую воспроизводительную способность коров-доноров* При повторных гормональных обработках уровень суперовуляции повшает-ся с 7,6 до 11,5 овуляций и число нормальных эмбрионов с 6,9 до 9,3 на .донора.

5. Нехирургическая технология получения эмбрионов у коров с использованием усовершенствованной закрытой системы обеспечивает вымывание зародышей у 88,5$ животных и получение 59$ зародышей от общего числа овуляций и 4,3 нормальных эмбрионов на донора.

6. Замораживание эмбрионов в газообразном азоте без программных замораживателей сохраняет жизнеспособность 86,3$ эмбрионов. Продолжительность пребывания эмбрионов в низкотемпературной среде, транспортировка и оттаивание в условиях ферм не оказывает существенного влияния на последующую их приживляемость после оттаивания и пересадки. Этот показатель в значительной мере зависит от качества и стадии развития эмбрионов перед замораживанием.

7. Наиболее подходящими для нехирургической пересадки являются поздние морулы и ранние бластоцисты 7-го дня. Лучшая приживляемость

наблюдается при пересадке ранних бластоцист отличного и хорошего качества (54,550, несколько меньшая 45,7 - поздних морул. Пересадка замороженно-оттаянных эмбрионов отличного и хорошего качества сопровождается 51,4& стельностями.

5. ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для вызывания суперовуляции у высокопродуктивных коров-доноров рекомендуется использовать ФСГ (фоллитропин) отечественного производства в дозе 1200 ИЕ по 4-х дневной схеме с 10 дня эстраль-ного цикла. Синхронизацию охоты у животных реципиентов вызывать про стагландином в сочетании с СЯК и витаминами однократно без учета предыдущего астрального цикла.

2. Нехирургическое извлечение эмбрионов, особенно в условиях ферм осуществлять резиновыми катетерами с приспособлениями к ним из пластмассовых шлангов и зажимов по замкнутой системе, обеспечивающее максимальное извлечение зародышей и исключающее травмирование тканей зцдометрия и микробную контаминацию полости матки.

3. Замораживание эмбрионов проводить в газообразном азоте в ускоренном режиме охлаждения и быстром оттаивании без принудительной кристаллизации.

Основные результаты исследований опубликованы в следующих работах:

1. Сергеев Н.И., Нетеча В.И., Ыазепкин С.А., Ефремова H.H., Тарасюк H.H. Методические рекомендации по криоконсервированию эмбрионов крупного рогатого скота, овец и кроликов. // Дубровицы, ВИЯ. 1387 - С. 1-24.

2. Ыадисон В.Л., Сальникова ИЛ., Тарасюк H.H. Результаты кри-оконсервирования, дальней транспортировки и пересадки заморакенно-оттаянных эмбрионов крупного рогатого скота. // Бюллетень научных работ, выпуск 67, Дубровицы, 1967, - С. 47-49.

3. Алексеев A.A., Тарасы H.H. Оценка эффективности замораживают эмбрионов при использовании разных программна устройств.

// Бюллетень научных работ, выцуск 89 , Дубровицы, 1966. - С.55-56.

4. Тарасюк H.H. Формирование донорского стада. // Информационный листок, БелНИИТИ Госплана БССР, Брест, 1968, * 4 - С. 1-6.

Подписано в печать 3.08.89г, Л.-36474. Заказ 77у . Объем 1,0 п.л. Тираж ЮОэкз.

Типография НШТЭМР.