Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Эффективность использования усовершенствованной технологии трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Эффективность использования усовершенствованной технологии трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота"

^ ц \\\0\\ ДОЗ

БЕЛОРУССКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬШЯ ИНСТИТУТ _ЖИВОТНОВОДСТВА_

На правах рукописи

БАБЕНКОВ Владимир Ерьевит

УДК 636.2.031:612.6.02-

еотективность испольтшш уоовепиепствовлгсюя

ТЕХНОЛОГ,« ТРАНСПЛАНТАЦИИ СИБГИОНОВ КШИОГО РОГАТОГО СКОТА

АВТОРЕФЕРАТ

аиссергации на соискание ученой степени канаипага сельскохозяйственных наук

Специальность 06.02.01 - разведение, селекция

и воспроизводство сепьскохоэяПственных животных

У'одино - 1993 г.

Робота выполнена в лаборатории трансппиктиции эмбрионов сельскохозяйственных животных Белорусского научно-исспедо-ватепьского института животноводства.

Научные руководители: чп. корр. АН PR, профессор ■НШШТЧЕНКО U.U., доктор с.-х. наук БУДЕВИЧ И.И.

Официальные оппоненты: доктор с.-х. наук, профессор

SABEPTgSB Б.П., кандидат сельскохозяйственных наук КО ГОНЕЦ H.H.

Ведущее учреждение: Белорусская сельскохозяйственная академия

Защита диссертации состоится " lu<?ир, на заседании специализированного cDpstö Д 020.49.01 при Л(5ПО-Хусском науччо-исспедоватепьскон икетитуте животноводогиа по адресу: 222160, г.'jiедино, ул.Фгунэе,!!.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан " " &_^

Учений секретарь специализированного совета, кандидат биологических наук

С.И.Лосьмаков

ОБИАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Основной задачей сельскохозяйственного роиэводства являетоя обеспечение раотущей потребности насепе-ия в продуктах питания, среди которых приоритетная ропь прк-адпежит продуктам животного происхождения.

Современное животноводство вступило в такуо стадио развития, огда дяпытейиее интенсивное продвижение вперед невозможно без рименения новейиих достижений генетики, селекции и биотехнопо-ии.

Крупная рогатый окот, явпяяоь мапоплодным видом, в то же вре-я, обладает высоким репродуктивным потенциалом, использование оторого стапо возможный о развитием биотехнического метода -ранеппантации эмбрионов. Учитывая, что'от-одной оамки номно опучать зародыши 4-5 раз в год( очевидна реальная возможность негодного получения от коровы-рекордистки до 10-30 и более тент (Эрнст Л.К., Сергеев Н.И.,1989; Бугров А.Д.,1989). Это поэ-опяет значительно ускорить ежегодный генетический прогреоо в таде путей увеличения интенсивности отбора, точнооти оценки атерей бнков и племенного использования животных о высоким ге-егическим потенциалом (Завертяев Б.П.,1969).

На оегодняиний день в реализации метода транеппантации энбри-нов достигнут весьма существенный прогреоо. Тем не менее, чно-ие вопросы теории и практики требует дальнейшего изучения и со -зрпенствования.

Не известна ропь ряда факторов, оказыватдих влияние на уро-ель полиовупяции, качество и приживляеиооть эмбрионов. Получасе большого числа: эмбрионов, как правило, сопровождается вы-окии процентом дегенерации и низкой оллодотворяемоотью яйце-петок. Имеет место большая вариабельность и непредсказуемость закции яичников у оуперовулированних коров (Прокофьев М.И., ?83; Яблонский Й.А.,1988). .

Техника нехирургического извпечонкя' и пересадки эмбрионов усыпает по эффективности хиигргиче.ским методам, не гарантирует габильнЫх результатов к не исключает вероятность повреждения низистой матки животных. Однако преимущества при использовании производственных условиях, простота исполнения и возможность *огокрагного использования доноров и реципиентов, предполагают тьнейший рас}о?ы над усове!>шенотвованием технологических прис-зз, способов и инструментов для нехирг/ргического извлечения н ;ресадки .эмбрионоя.

<

При применении криоконсервирования зародышей эффективность трансплантации снижается на 15-30£, существующая технология о тается сложной,, трудоемкой и не всегда достаточно эффективной Поэтому одним из актуальных вопросов является дальнейшее сове оенствоваиие методов замораживания-оттаивания эмбрионов, поис надежных и нетоксичных криопротекторов, упрощение самой проце ры криоконсервирования.

Цепь и задачи исследований. Цепь наших исследований ззклрч пась в усовершенствовании способов индуцирования суперовупяци приемов и инструментов.дпя нехирургического извлечения, перес ки и криоконсервирования эмбрионов, изучении эффективности дп тепьного использования высокопродуктивных коров в качестве до ров эмбрионов.

Для достижения поставленной цепи решались спедурщие задачи

- усовершенствовать схемы обработки коров-доноров гонадотр пинами разного типа, в различных сочетаниях, позволяющие увел чить выход пригодных эмбрионов, снизить трудоемкость и сгоимо обработки;

- провести сравнительное изучение различных способов нехир гического извлечения зародышей, разработать, новые приемы и ин рументы, позволявшие повысить общий-выход эмбрионов;

- определить зависимость притовпяемости эмбрионов от места аппликации в роге матки и разработать инструмент для осууеств ния пересадки в верхушку рога с минимальным риском повреждени эндометрия матки;

- установить влияние на сохранность и прикивпяемость криок сервированных эмбрионов способов оттаивания и провести сравни тельное изучение эффективности использования замороженно-отта ных и свежепопученннх эмбрионов; ■

- изучить возможность многократного использования непактир щих высокопродуктивных коров в качестве доноров эмбрионов.

■ Научная новизна таботы состоит в усовершенствовании способ индуцирования суперовуляции, извлечения, пересадки и криоконс вирования бмбрионов. Установлена зависимость приживляемости э рионов от места аппликации в роге матки, а такке ряд факторов впияощих на эффективность извлечения и качество эмбрионов при суперовуляции; разработаны и апробированы инструменты для не хирургического извлечения, сбора и пересадки эмбрионов; модиф цирован способ оттаивания криоконсервиврванных эмбрионов; опр

делена эффективность практического использбвания метода крио-консервирования и длительной эксплуатации £ кйчеотве доноров непакти'русщих высокопродуктивных коров.

Госкомитетом по цепам изобретений и открытий признаны изобретениями "Устройство для сбора эмбрионов животных" (а.с. 1704775), "Устройство цггд разделения эмбрионов животных (а.с. 1727819), "Устройство дпя трансплантации эмбрионов" (.положи-тепьное рейекие по заявке 4769683 от 27.12.89 г.), "Устройство дпя нехир^ргического извлечения эмбрионов у животных" (положи-тЬпьнбе решение по заявке 4907495 от 4.02.1991 г.), "Устройство д^Л культивирования эмбрионов животных" (положительное реаеяие пЬ заявке 4901036 от 24.01.1991 г.).

Практическая значимость работы. Полученные нами данные поз-вопягт качественно повысить результаты супяровуллции, сиизить трудоемкость и стоимость горюнальной обработки, увеличить выход зародышей до 74,1* при использовании модифицированного способа вымывания и стельность реципиентов до 67,при аппликат» эмбрионов в вегхунку рога натки о помощьс разработанного кнстц* иентя. Разрзбоглии устройства дпя нехирургического извлечения и сбора эмбрионов, при эксплуатации которых извпекаемость заго-дывей увеличивается на 17,1.', онижаогся трудоемкость и потери эмбрионов. Модифицированный способ оттаивания позволяет повысить сохранность эмбрионов на 8,3 и приживляемость на 9,3;'. Доказано, что пересадка свежепппученных и замороженно-оттаянных эмбрионов обеспечивает 45 и 53,2& степьностей соответственно. Многократное использование иелактирусщих высокопродуктивных коров в качестве доноров не снижает их эчбриопродукцио и позволяет, в зависимости от выхода эмбрионов, получать ежегодно от 3,7 до 9,3 телят на донора.

• Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано двенадцать научных табот.

Апробация гяботы. Материалы диссертации доложены на заседаниях Ученого совета Рресгской областной государственной сельскохозяйственной опытной станции (19П8-Г9Г2 гг.); на республиканской научной конференции Сг.Минск,1989 г.); на республиканском яаучнО-мегодичесноч оовещании (гДодино,1989 г.); на ВсесоозноЯ научйо-практической конференции (г.Горки,1991 г.), на расширенном заседании отдела биотехнологии БепНИИК (г.Годико,1993 г;), не заседании Ученого совета Ересгкой ШСХОСС" 1993г.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на I?.? ' страницах машинописного текста, состоит на Бвс7*ения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов и практических предложений. Иппсстрирована 24 таблицами ч 3 рисунками Список литературы вклсчает 214 источников, в той числе 155 иностранных авторов.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования проведены в период с I960 по 1992 годы в набора тории трансплантации эмбрионов с.-х. животных БепНШП, Ерестско государственной областной сельскохозяйственной огвдтйгой станции, на областном центре трансплантации эмбрионов крупного рогатого : скота, племенном заводе "Нача" и колхозе "Рассвет" Брестской области.

В качестве коров-доноров многократно использовались клинически здоровые непактирущие коровы с продуктивностью 6,9-10,0 тн кг молока, в качестве реципиентов - гепки случного возраста живой массой 340-400 кг.

Для стиму'пй^йания суперовупяции применяли гипофиэарные го-надотропины ФСГ-п (США) и фоппикогропин (!ЮФР), которые вводили 8-кратно в убывающих дозах в течение 4-х анея, начиная с IO-II дня полового цикпв, с интервалом между инъекциями 12 часов в со четании с простагпандинами.

При совершенствовании схем гормональных обработок <?СГ-п и фолпикогропином 4~d инъекцио препаратов, предшествующую введе--ни» простагпандина, из схем обработки исключали, теч самым прерывая пштеотропное влияние ЯГ-активности препаратов. Интервал v времени между 3-й и 4-й инъекциями был увеличен по 24 часов. В' остальном схемы оставались без изменений.

Для снижения трудоемкости и стоимости обработки фолпикотропи применяли в сочетании с сывороточным гонадотропином (ЧС19Р). Фон ликотропин вводили четырехкратно о интервалом между инъекциями 24 часа в дозе 240 ИЕ. Через 12 часов после первой инъекции вве дипи ГЗПС в дозе 2500 м.е. В качестве контроля обрабатывали 2 группы доноров по схемам: ГС1К однократно в дозе 5000 ч.е. и фолпикотропин в дозе 480 ИЕ по обычной схеме.

Извлечение эмбрионов проводили на 7 или 8 день индуцирован--ного полового цийла нехирургическим путем с использованием ка-> тетера "Нойвтадг" (ФРГ) и разработанного нами устройства тремя

способами: введение и сбор промывной степы шприцами, самотеком через замккутуо систему шлангов и моцистицированныч, вклпчаслим попеременное введение порций среды и воздуха в полость рога матки с последующим сбором жидкости с эмбрионами через замкну туп систему шлангов.

Качество эмбрионов определяли по пятибальноп «капе морфологической оценки согласно инструкции по трансплантации эмбрионов BMF (Ч.,1507 г.). Поиск вибрионов проводили после отстаивания промывной среды в течение 20-30 кинут или, при использовании разработанного устройства - фипьтра для сбора эмбрионов, непосредственно после извлечения эмбрионов.

Для изучения влияния на прикквпяемость эмбрионов места аппликации в роге матки было сконструировано нами специальное устройство, позволяющее производить пересадку в верхучку рога, с поморье нового устройства эмбрионы эплпииирозапи в велху^ку и середину рога, при использовании катетеров "Нойптадт", "M'IB" и отечественного - в середину рогз.

При недостаточном числе репипиеятол, при наличии свежепопу-ченных эмбрионов, часть эмбрионов подвергали криоконсервчрованип. Для замораиивания использовались норупы и бпастоцнсты в возрасте 7-8 дней отличного, хороного и удовлетворительного качества. Перед охлаждением эмбриона проводили чегез растворы 1,4 М глицерина повышасщейся концентрации.

Замораживали эчбриони на программном устройстве ЗЭМ-4 в автоматическом режиме охлаждения от 20°С до -36°С со скоростью от 1,13 до 0,3°С в минуту с последующим помещением пайегг с эмбрионами в жидкий азог.

Дпя определения влияния режима оттаивания на выживаемость эмбрионов, их оттаивали двумя способами: I - по обычной технологии в водяной бане при 25°С в течение 10 секунд, 2 - в ива этапа -сначала на воздухе при 20°С в течение 10 секунд, затем в водяной бане при 25°С также 10 секунд../читывали качество эмбрионов цо к после оггаияания, процент стельности реципиентов в завией-йости ог качес**а замороженно-оттаянных эмбрионов, способа оттаивания и числа эмбрионов, пересаженных одному реципиенту.

При многоразовой использовании коров-доноров на 27 животных изучали влияние кратности гормональных обработок на овупирующую реакций яичников, количество и качество эмбрионов. Учитывали чпопо полученных телят ъ зависимости от сроков использования до-

воров и выхода пригодных к переоадке вибрионов.

Биометрическую обработку полученного цифрового материала проводили по Рокицкому П.». (1973 г.).

РЕЗУЛЬТАТУ ИССЛЕДОВАНИЯ

I. Усовершенствование методов индуцирования полиовупяции у коров-доноров

1.1. Эффективность стимулирования суперовупяции уменьшенными дозами ФСГ-п

При анапиве зависимости овулирувдей реакции яичников и качества эмбрионов ог использования ФСГ-п в дозах 50 мг и 27 иг не было установлено существенного влияния на эти показатели уменьшения дозы препарата (табл.1).

Таблица 1. Уровень суперовупяции, количество и качество зародышей в зависимости от дозы ФСГ-п

Показатели

Группы животных, доза препарата (мг)

I,

27

2, 50

Обработано доноров

Реагировало оуперовупя-цией (п-Ж)

Число овуляций в среднем на донот«

Положительных пй.иэвпече-нию доноров Сп-%)

Получено эмбрионов в среднем на донора

В том числе: - пригодных

- дегенерированных

- яйцеклеток

13

13 100,0 11,1+1,13 -13 100/0

13 13

11,0+1 до 12

100,0

92,3

10,340,96 6,5+1,08

г.з]о,5э

1,4+0,57

7,9+1,26 -6,1+1,23 -1,1+0,46 -0,740,20 -

В обеих группах суперовуляцией реагировали все обработанные животные. Среднее число овупяций в I и 2 группах было практически одинаковым (Л,1 и 11,0 соответственно!), но общий выход зародышей был больше во 2-й группе (7,9 и 10,3 на донора). По числу п хм годных эмбрионов различия были незначительны 1.6,1 и 6,5). Однако относительно общего числа зародыией, в 1-й группе пригодных эмбрионов получили на 13,3% больше,чте быпо связано со онитекиеч числа дегенерированных эмбрионов и неопло-дотворенных яйцеклеток. Имевшиеся небольшие различия были недостоверными.

1.2. Зависимость качества эмбрионов отувеличения интервала времени между 3-й и 4-й' инъекциями *ОГ-п и ^оппикотропинй

Согласно данных литературы, введение гонадотропиков у коров сопровождается потеотропннм действием, что связано с потеинизи-русчей активностью препаратов и увеличением секреции эндогенного ЛГ под воздействием эстрогенов СБошта-аЛ*, 3, ,1978; Прокофь*-ев Ч.'1, , 1°Я0,1983). Это задерживает регрессио желтого тепа, препятствует проявление предовупяторного пика ЛГ, что ведет к нарушении процессов овугрции, транспорте яйцеклеток и дегенерации зародылей вследствие изменения условий среды в матке ( На*р«с. П., Сксшд. п. - .1971; 0., Мооге. Г/. ,1971). Лотеотропное дей-

ствие ГГ обеспечивзетоя писть пги непрерывном его введении. Если оно прерывается на несколько часов, то лотеотропное влияние нарушается и не восстанавливается при повторном введении ( £>о-НоМьоп ,1965 ; К<х^еи.баск С. С. ,1968).

Чтобы обеспечить перерыв в поступлении ЛГ-компонента и, как следствие этого, переход от лотеотропного и лвтеолигическому ¿[ункционапьному состоянии желтого тепа, при обработке коров-до* норов 5СГ-п и фоппикотропином мы увеличили интервал времени между двумя повторными инъекциями препаратов по величины, превыиа!*» щей вгемя полного распада гормона в крови. Это, дпя усиления процесса*пютеопизиса, осуществлялось путем исключения 4-й инъекции препаратов, предшеотвуомй введенио простагландина. Таким обгаэсм, интервал между 3-й и 4-й инъекциями, вместо принятых I? часов, равных периоду попиого распада ФСГ в крови, был увеличен до ?Л часов,

'Сак показали результаты исследований, увеличение интервала времени между 3-й и 4-й инъекциями <РСГ-п'и фол пи ко тропи на (все* го 7 инъекций) повышает выход полноценных эмбрионов в ореднем-, на донора до 6,1 и 6,0 соответственно по оравненив о 8-кратным введением препаратов (5,6 и (5,0) (табл.2). Относительно общего числа зародышей эти показатели были также выпе (83,0 и 82,4# против 70,1 и 76,соответственно). При применении $СГ-п качество э!,гбрионов улучшалось за счет снижения числа дегенерирован-ных эмбрионов (0,62 против 1,65; Р<0,05), при применении фолли» ко тропика - яйцеклеток (0,27 против 0,78).

Таблица 2. Эффективность стимулирования суперовуляции при 6- и 7-кратном введении ЗСГ-п и фоппико'тропиза

Группы животных

Показатели 1(ЗСГ-8 инъекц.) 2 (ХГ-7 инъекц) 3 ОЖТ-З инъекц.) 4 ("7.Т-7 кньекцкй)

Обработано донорог, гол. 36 22 14 14

ра^ровапо суперовупяцией 34 94,4 21 95,4 14 100,0 14 100,0

Число овуляций в среднем на донора 10,0+0,73 10,4+0,86 - 11,5+0,92 - 10,9+0,91

Положительных по извлечению доноров (п-%) 32 94,1 21 100,0 14 100,0 II 78,6

Получено эмбрионов на положительного донора 7,8+0,85 - 7,7+0,81 - 7,8+1,08 - 8,3+1,55 -

В том числе:

- пригодных 5, 6+0, 76 - 6,1+0,72 - 6,0+1,22 - 6,8+1,38 -

- дегенэрированных 1,6540,33 - 0,62+0 ,24* - 1,07+0,49 - 1,18+0,42

яйцеклеток 0,68+0,24 - 0,56+0,23 - 0,78+0,33 0,27+0,19

•Здесь и далее: * Р<0,05, ** ?<£0,01, Р<0,001

1.3. Стимулирование оуперовупяции Фолпикотроиином 6 сочетании о ГСМ

С цельв снижения тдгдоемкооти и отоимооти гормональной обработки была изучена возможность стимулирования оуперовупяции фол-пикотропином при сокращенном числе инъекций в сочетании о ГСШ в уменьшенной дозе.

Исследования проведены на S njynnax коров-доноров, которых обрабатывали по охемам: I rjynna (опытная) - 4-кратное введение фопликогропина с интервалом 24 часа в дозе 240 ME, чехез 12 часов после первой инъекции (к моменту полного распада горюна в крови) вводили 2500 м.е. ГСГК; во 2 и 3-й группах (контрольные) соответственно: однократно 5000 м.е. ГСЗПС и фолликотропин в дозе 480 ИЕ О-кратно по обычной схеме.

Чек видно из результатов проведенных опытов, использование для стимуляции суперовуляции ГСП в 'дозе 5000 и.е. Cuno ниэко-вффектипным (габп.З). Суперовуляцией реагировало 75^ животных, при числе овуляций г»,1 обэдй выход зародышей составлял 2,6, в той числе пригодных 1,8.

Наиболее элективным было применение фолликотропина по общепринятой схеме обработки (3-я группа).

D сравнительном аспекте в Г-й и 3-й группах получили высокие результаты по числу суперовупировавиих животных (90,9 и IOOíí со* ответственно). Среднее число овуляций в 1-й группе было заметно ниже, чем в 3-Я (9,'t и II,5; Р<0,01). Аналогичная тенденция на-бподапась в общем выходе зародышей (5,7 и 7,8) и количестве пригодных эмбрионов (4,6 и 6,0).

Таким образом, комплексное применение фолликотропина и ПЗН по эффективности уступает традиционной обработке фолпикотропиком, но при умеренном уровне суперовуляции обеспечивает относительно высокий выход полноценных эмбрионов и позволяет вдвое сократить раоход дорогостоящего гипофизаркого пэнадотропкка, затрата труда и стрессовое воздействие на животное.

2. Усовершенствование технологии нехирургического извлечения и пересадки эмбрионов

2.1- Эффективность вшивания эмбрионов модифицированным оповобом и зависимость извпекаемооти ... от некоторых факторов

Основным показателем эффективности извлечения эмбрионов явпя-этоя полнота их попучения от числа овуляций в яичниках коровы-

Таблица 3. Результаты стимулирования суперовупяции ^оппикоттопином в сочетании о ГС) К

Опыт Кон г р 0 п ь

Показатели 1_т5КТ+ГС:'К 2-ГС?К-5000 З-якТ-е-крат.

Обработано доноров,

гол. 22 12 14

Реагировало суперовуляцией (п-^) 20 90,9 9 75,0 14 100,0

Овупировапо ^оппику-

лов от числа индуци-

рованных к росту 168 96,5

55 >34,8 161 95,6.

Число оэупяцип на В, 4+0,75**-

донора 6,1^0,77 - 11,5+0,92 . -

Положительных по из-

влечению доноров 19 95,0

(п-%) 5 55,5 14 100,0

Получено эмбрионов

на положительного

донора 5,740,67 - • 2,640,81 - 7,8+1,08 -

В том числе:

- пригодных 4,6+0,75 1,0+0,37 - 6,0+1,22 -

- дегенерированиях 0,8^0,37 - ; 0,6^0,Г,0 - 1,1+0.49 -

- яйцеклеток 0,3^0,13 0,2^0,20 - 0,8^0,33 -

донора. Потери зародышей при нехирургическом вымывании связаны с различными факторами, в том числе со способом извлечения.

Нами было проведено сравнительное изучение эффективности вымывания эмбрионов тремя способами: I - введение в полость рога матки и сбор промывной среды иприиами, 2 - самотеком через замкнутую систему шлангов, 3 - модифицированным через замкнутую

Яйр§^о|§ЯыГивйо1^5а!1Са;иМ попеГеие™°е введение в полость рога В результате исЗйедований установлено преимущество модифици- . рованного способа. Ь'спи.прй использовании I и 2 способов было по-пучено соответственно 59,3 и 53,25* зародышей от чиопа овуляций,

то применение 3 способа позволило повыоигь этот показатель до 74,11, (табл.4).

Среднее число полученных эмбрионов в 8-й группе быпо выше, че» в 1-й и 2-й (7,5 против 6,6 и 4,8 ооответбтвенйо). Разница между 8"й и2"й группами была высокодостоверной (Р<0,001).

Таблица 4. Результаты извлечения эмбрионор у коров-доноров тремя способами

группы животных

Показатели I . 2 3

Шерировано доноров 35 75 ' 72

[опожитепьных доноров ю извлечению эмбрио-юв (п-Я) 32 91,4 67 89,3 69 95,8

1испо овуляций в сред-гем на донора 11,2+0,79 - 9,0+0,48 - 10,1+0,48 -

!исло внчытых эмбрио-юв от обпего числа >вуляций (п-£; 233 59Í3 861 53,2 540 . 74,1

) среднем на донора 6,6+0,69 - 4,0+0,48 - 7,5+0,52***

Наблпцапась зависимость извпекаемости эмбрионов от числа ову-1яций у доноров (табл.5\ При числе овуляций от 3 до б и от 7 до :0 этот показатель практически не отличался и составлял 5?,Г и >4,7^ соответственно. При числе овуляций более 10 возрастал до 50,0?. Разница в чиспе овуляций и извлеченных зародышей была

Таблица 5. Зависимость извлекаемооти эмбрионов от числа овупяниа

Jjhmht числа овуляций

Показатели 3-6 7-10 более 10

)перировано доноров 46

{испо овупяций в сред-

1ем на донора 4,7+0,17

!звпечено эмбрионов в

¡реднем на донора 2,4+0,23

1звпечено эмбрионов от

7ххх

1исла .овупяций,/

52,1

59 77

.8,640,14 14,2+0,27*

4,7+0,35 9,7+0,53***

54,7 68,8

)ысокодоотоЕерной при лимите чиста, овупяций более 10 по сравнению 5 7-10 и З-б огуляциями (Р<0,001).

РФфективность вымывания эмбрионов достоверно повышалась с 'меныяением'потерь проиыяной жидкости.

2.2. Извлечение эмбрионов с помо'чьо нового инструмента

Одним из отрицательных Факторов при «¡хирургическом извлечении зяройи'чей является сжатие полости рога матки в процессе оттока промывной среич, что ведет к образовании естественных складок слизистой оболочки, задерживающих часть жидкости с эмбрионами.

Нами было сконструировано трехканальное устройство на основе категега Фоллея, имеющее в концевой части упругие пластины, в рабочем состоянии принимающие форму распорных дуг, препятствующих сжатио полости рога матки в процессе вымывания (рис.1).

В результате производственной проверки эффективности вымывания эмбрионов устройством нового типа в сравнении с катетером "Нойштадг", наиболее часто используемом на практике, установлен! преимущество первого в числе положительных по извлечению доноров (95,2 против £0,0^) и в количестве зародышей, полученных о* числа овуляций (67,0 против 55,9?) (табл.б).

Таблица б. Эффективность извлечения эмбрионов инструментом нового типа

Группы животных

Показатели I - контрольная

2 - опытная

Оперировано доноров, гоп. 20

Число овуляций в среднем

на донора 10,7+1,09

Положительных доноров по

извлечению эмбрионов (п-?) ' 16

Получено зародияей ог числа овуляций (п-,0 114

- в среднем на положительного донора

90,0

•ч К

21

10,9+1,12

20 146

7,4+1,14

95,2 67,0

6,3+1,00

На изобретение "Устройство для нехирургического извлечения эмбрионов у животных." по заявке Г3 4907495 от 4.02.91 г. получено положительное решение государственной патентной экспертизы.

2.3. Сбор эмбрионов с использованием йипьтра новой конструкции

Для снижения трудоемкости и уменьшения потерь эмбрионов в процессе сбора и поиска иногда применяют специальные фильтры с размером ячеек менее диаметра эмбриона. Общим недостатком этих при-

<Ьнг. 3. Сечеиие А -A . <Ьиг. U. Ы спереди ь- РАбочем

состоянии.

Г, 1С. 1. УСТРОЙСТВО дм ИЗШЗЧЕШ ЭМБ1ШЮВ У ШВОТНЫХ:

I - наружная зесткая трубка; 2 - гибкий катетер; 3 - кетадлкчески.; стянет; 4 - приаодноЛ патрубок; 5 - ушотннтьльная му-£та; 6 - воздушна канал; 7 - издутаои бачлон; 3 - полужесткие распорные дуги; 9 - входаие отверстия катетера

способлений является то, что отверстия фипьтра забиваются примесями в виде слизи и спущенного эпителия, что снижает эффективность их применения.

С цепьпустр«нения этого недостатка нами была разработана принципиально иная конструкция фильтра (рис.2). В отличие от известных устройств этого типа промивная среда из матки поступает под разделительное ситечко, а не фильтруется через него.

Опытный образец устройства был апробирован при извлечении эмбрионов у 24 коров-доноров (опытная группа) с использование« катетера "Ной>птадт" и.замкнутой системы шлангов. В контрольной пуппе эмбрионы извлекали этим же способом, но без применения фильтра. В опытной группе промывную среду из фильтра в объеме 2- чанек Петри просматривали под микроскопом. При атом затраты времени составляли в среднем на донора 30 минут. В контрольной группе емкость с промывной жидкостью отстаивали 20 минут, зате сливали надосадочный спой и остаток в объеме 2 чашек Петри так же просматривали под микроскопом. Затраты времени на донора со ставяяпи 60 минут. Затеи всю процедуру повторяли с надосадоч-ным споем жидкости для дополнительного контроля над потерями эмбрионов, на что затрачивапо'сь еще 30 минут.

Полученные результаты представлены в таблице 7.

Таблица 7. Эффективность выбывания эмбрионов с помочью разработанного устройства

Группы животных

Показатели контрольная опытная

Оперировано доноров, гол. 20 24

Чиспо овупяций в среднем на донора 10,7+1,09 9,8-Ю,92

Положительных по извлечении доноров (п-%; , _ 18 90,0 23 95,8

Извлечено .затадышей от числа овупяций КЛ-%) т 53,3 140 59,6

- в среднем на донора 5,7+1,00 5,8-Ю-, 97

Число утерянных .эмбрионов от чиспа овупяций (п-Ю 7 3,3

Общее числочвыиытых вибрионов

" ■■• 121 \ ; 56,6 110 59.,6

- в среднем на донора; "6,0^,98 3,8+0,97

НС. 2. УСТРОЙСТВО ДНЯ СЮРА ЭИБШОНОВ ЖИВОТНЫХ!

I - дадкзодькая воронка; 2 - крышка; 3 - отводаок'цййрубок; 4 - сливной патрубек; 5 - пржводаая трубка; 6 - раздааичвдьйая сетка; 7 - насадка; в - зажиы

ir

В опытной группе Cuno бопыае заровдией, полученных от числа овуляций (59,6 против 53,3?).

В контрольной ггуппе при просмотре надосадочного споя промывной жидкости бнпо обнаружено еще 7 эмбрионов (З.ЗГО, фактически утерянных в процессе первого спива.

Пгзупьтаты проведенных опытов показывают, что применение фильтра hoboíí конструкции позволяет в 2-3 раза сократить трудоемкость процесса сбора эмбрионов, уменьшить их потери и время нахождения вне организма.

На изобретение "Устройство для сбор эмбрионов животных" получено авторское свидетельство К1 1704775:

2.Ц. Эффективность аппликации эмбрионов в верхушку рога матки реципиента с помочьо разработанного инструмента

Данные литературы о влиянии места аппликации эмбриона в роге матки на его примивпяеуость разноречивы.

Большинство используемых для пересадки инструментов не всегда позвопяог проводить аппликацию эмбрионов далее большого изгиба рога матки. Специальный уретральный катетер не нашел широкого практического применения, поскойьку ненадежен в роботе из-за малого диаиетга гибкого зонда, который может изгибаться, не достигнув верхушки рога.

Нани бнпо разработано vi сконструировано устройство, лишенное этого недостатка (рис.з). Использование устройства позволило провести сравнительное изучение приживляемости эмбрюнов в зависимости ог места аппликации в роге натки.

Результаты наших исследований, представленные в таблице 8, показывает, что наиболее высокая прикивпяемость быпа достигнута при пересадке эмбрионов в верхушку рога матки с поио-дьи нового инструмента (67,тО, При пересадке эмбрионов в середину рога этим же инструментом показатель противняем ости бал ниже на 10(57,1/0. Инструменты известных- конструкций по результативности уступали новому образцу; лучший результат, полученный при пересадке эмбрионов в середину рога катетером "{Гой^тадт1 составлял 5°.,9%. Разница между 5 и 2 группами геципиентов била достоверной (Р<£0,05).

Полученные данные позвопяог заключить, что место аппликации эмбрионов в роге натки влияет нп их приямвляекость и возрастает

Таблица 8, Зависимость приживляемости эмбрионов от места аппликации в роге матки и типа инструмента

Группы Использованный инструмент Место П о к а з а т ели

животных аппликации число число стель-

пересадок отельно-отей ность,#

I . Катетер "ИМВ" Середина рога 28 И 39,3

2 Катетер "Нойитадт" 170 • 90 52,9

8 Катетер отечественный 17- ' 7 41,2

и Новый инструмент . 35 20 57,1

5 Верхушка рога 65 44 67,7*

при пересадке в верхушку рога по оравненип о серединой. Эта операция может быть легко выполнена при помощи созданного устройства На изобретение "Устройство для нехирургической трансплантации вибрионов" по заявке К» 4769683 от 19.12.89 г. получено положитель-нов решение государственной патентной экспертизы.

8. Практическое применение метода криоконсервирования вибрионов крупного рогатого скота

3.1. Влияние режима оттаивания и некоторых других факторов на выживаемость замороженных эмбрионов По данным ■ ТъЧхГй (1981) для получения высокого

уровня выживаемости вибрионов после оттаивания необходима неповрежденная прозрачная оболочка. В исследованиях ГЦ«-Т. (1989) изучалась чаЬтота повреждений оболочки при различных спооо-бах. оттаивания; Минимальные повреждения отмечались при двуэтап-ном оттаивании, «начала на воздухе, затем в водяной бане, по сравне нио о одновтапным оттаиванием в водяной бане (2 против 17^). Неизвестно влияние опособа оттаивания на прикивляемость эмбрионов поо-пе пересадки. *

Нами было изучено влияние двух режимов оттаивания на сохранность, и приживпяемосгь криоконсервированных эмбрионов.

При традиционном оттаивании эмбрионов в водяной-бзне при 25°С в течение 10 секунд (контрольная группа) рохранипи жизнеспособность 82,эмбрионов, в "да числе из числа отличных и хороших

87,6?, из чиола удовлетворительных на 25,3^ меньше (62,5#) (табл,9).

При оттаивании отличных и хороших эмбрионов сначала на воздухе при 20°С в течение 10 секунд, а затем в водяной бане при 25 0 также 10 секунд (опытная группа), сохранность эмбрионов была .на Я,35? выше, чем аналогичный показатель в контроле (96,1 прртив 87,8Я.

Таблица 9. Результаты оттаивания замороженных эмбрионов различными способами.

После оттаивания мор-йопогически пригодных

ачйрцЬнпб --

Группы

(октропь- заиорожено эмбрионов, 10Я воего

В том числе: ' отпичных и хороших удовлетворительных

Зпыгная Заморожено отличных и хороших эмбрионов

п

I_

180 148 82,2

140 123 87,8

40 25 62,5

78 75 96,1

Приживпяемооть эмбрионов контрольной группы быпа на 9,3# ниже, чем опнгной (46,8 против 56,1?0 (табп.Ю).

Таблица 10. Влияние способа оттаивания на приживпяемооть эмбрионов

Показатели

Группы реципиентов

I - контроль

2 - опыт

Количеств» реципиентов Пересажено амбрионов Стельных реципиентов Приживпяемооть эмбрионов,$

4,7 47 22 46,8

Сб 66 37 56,1

• Для контроля эффективноеги криоконсервирования сравнивали рвзупьтатн пересадки овежеполученных и замороженно-оттаянных эмбрионов отличного и хорошего качества (табп*П).

Как видно из приведенных данных, прикивпяемоегь Охчтичных и хо^яших эмбрионов по группам оущеотвенно не отпичапаоь; В цепом этот Нокааатега. .при пересадке ове«в4х эмбрионов 0нп на 10.ь' и б.5£ выше,-

Таблица II. Результаты пересадки замороженно-оттаянных __и свежепопученных эмбрионов

Показа тепи Качество эмбрионов

свежие криоконсервированны

отличные | хорошие отличные хорошие

Количество реципиен- 86 63

тов 44 69

Пересажено эмбрионов 86 63 ' 44 69

Степьных реципиентов 54 37 23 36

Процент приживляемости 62,8 58,7 52,3 52,2

3.2. ЗЯ-фективность трансплантации замороженно-оттаянных эмбрионов

Эффективность метода трансплантации во многом определяется во; мокностьо наиболее полной реализации генетического потенциала высокопродуктивных короь-доноров чегез низкопродуктивных приемных матерей-реципиентов.

На практике вопрос своевременного обеспечения необходимы».! количеством подходящих по циклу реципиентов всегда остается проблематичным. Метод криоконсервирования при достаточно высокой эффективности монет решать эту проблему с минимальными потерями.

В наших исследованиях бып проведен анализ двухлетнего использв вания 10 непактирующих высокопродуктивных коров-доноров, эмбрионы от которых пересаживали как свежими, так и после замораживания Оттаивания.

Из 256 пригодных эмбрионов 150 были использованы для пересадки овежими 124 реципиентам. При уровне стельности 53.2/J относительно числа пересаженных эмбрионов получили 49,3$ телят, или по 7,4 теленка на донора в среднем (табл.12). 106 эмбрионов, ввиду отсутствия реципиентов, подвергли замораживание с последующим оттаива-ниём при наличии реципиентов в нужные сроки. При сохранности эмбрионов 88,Tin стельности 45# было получено по 3,6 тепенгса на донора.

Таким образом, использование метода криоконсервирования при относительно небольших потерях, позволило повысить выход тепят на каждого донора о 7,4 до. 11,2.

Таблица 12. Эффективность трансплантации криокон-сервированных и свежепопученяых эмбрионов

Показатели Использованы эмбрионы В с его

криоконсерли-рованнье свекепопучен-ние

п а> ,ф

" 1 п 1

Число многократно

использованных до-

норов 10 10 10

Заморожено-оттаяно

эмбрионов 106 100,0 - - 106 100,0

Сохранилось эмбрионов 88,7

после оттаивания 94 - - 94 88,7

Пересажено эмбрионов 94

всего 100,0 150 100,0 244 100,0

- в средней на донора 9,4 - 15,0 - 14,4

Число реципиентов ЕО 100,0 124 100,0 204 100,0

Число стельных

реципиентов 36 45,0 66 53,2 102 50,0

Получено тепят в

среднем от каждого

донора 3,8 - 7,4 - И,2

4. Интенсивное использование высокопродуктивных нелак-тируощих коров в качестве доноров эмбрионов

4.1. "Влияние кратности гормональных обработок на суперовуляцию и вчход полноценных эмбрионов

Результатами исследований установлено, что кратность гормональных обработок не оказывает заметного влияния на основные показатели эффективности супероВупяцик: после 1-й и 8-й обработок соответственно, су'перовупяцией реагировали 100 и ЮОЙ обработанных животных, среднее число ову.ляций составляло 10,5 и 10,2, ореднее число эмбрионов и яйцеклеток 7,7 и 7,0, в том числе пригодных к пересадке 5,9 и 5,5 на донора (табп.13),

4.2. Эффективность многократного использования

коров-доноров

По мнению Багрт,Б.А. (1990), при интенсивном.использование коров-доноров необходимо получать от каждой не менее 12 качеог~ венных эмбрионов п к тёпяг в год»

Таблица 13. Уровень суперовупяцки и качество эмбрионов opt многократном использовании коров-доноров

Число обработок

Показатели I 2 •'•: 3 ■ 4 - 5 б 7 8

Обработано доноров 27 26 23 19 13 13 8 4

Реагировало суперовуля-

циейЛп-*) 27-100,0 25-96,1 23-100,0 17-89,5 11-84,6 13-100,0-8-100,0 «00,0

Число овушщкй в сред- :

век на донора 10,5+0,75 10,5+1,00 8,9+0,93 8,8+0,8110,3.^,31 10,2+1,13 9,7+1,39 10,2+1,65

Получено вибрионов в

.средней на донора 7,7+0,89 7,8+1,16 5,8+0,88 6.1+1,07 5,8+1,23 7,6+1,13 7,2+1,34 7,0+3,0

В том числе:

-пригодных 5,9^0,86 5,8+1,02 4,?+0,84 5,3+1,05 4,2+1,14 5,8+0,93 4,6+0,86 5,5+1,5

В процентном отношении 76,7 73,8 ' 72,4 86,Б 71,8 76,9 63,8 7В,6~

- иегенеркроваяных 1,16+0,32 1,52+0,34 1,1^6,35 0,б.+0,19 0,8+0,32 1,25+0,55 2,0+0,50 3 процентной отноаении 15,1 19,5 18,8 9,9 Г4.1 16,5 27,6

-яйцеклеток . 0,6210,19 0,5240,21 0,5^0,17 0,2+0,10 0,8+0,35 0,5+0,29 0,6+0,26 1,5+1,5

3 процентной отношении 8,1 б,? 8,7 3,3 14,1 6,6 8,6 21,4

В наших исследованиях была изучена эффективность многократного использования коров-доноров, проверенных по результатам попиовуяяции и извлечения, в зависимости от сроков использования и выхода качественных эмбрионов.

При использовании животных в течение полугода, одного и двух 'лет в ореднем от каждого извлекли по 22, 19,4 и 46,1 нормальных эмбрионов, ипи по 7,3; 3,9 и 5,4 за одно вымывание соответственно (табл.14).'При числе пересадок надонора 5,3; 12,3 и 25,5 было получено 3,3; 5,4 и 11,4 телят.

Таблица 14. Эффективность многократного использования коров-доноров при различных сроках использования

"СДОкИ "ИЬШШваНйя доноров,

Показатели пет

0,5 | 1.0 1 2,0

Числи доноров 3 10 8

Проведено вымываний эмбрионов в среднем на донора 3,0 5Д 8,9

Получено пригодных эмбрионов:

- в среднем на донора 22,0 19,4 46,1

- в среднем на одно вымывание 7,3 3,9 5,4

Проведено пересадок в среднем эт донора 5,3 12,3 25,5

пересажено эмбрионов в ореднем эт донора 7,0 14.4 32,9

Ьпучено тепят:

- в среднем на донора 3,3 5Л 11,4

- от числа пересадок,?? 62,5 43,9 44,6

Как видно из приведенных данных, относительно срока иопопь*. зования за полгода от 3 доноров было получено больше эмбрионов 1 телят,.чем 8а год и два года от 10 и 8 доноров, что было овя-»яно о более высоким выходом качественных эмбрионов у доноров [ервоя группы (7,3 против 8,9 и 5,4 соответственно).

Пеленаправленныйтотбор ив числа высокопродуктивных животных :оров-доноров| способных выделять Йопьяое чиспо качественных >мбрионов, позволяет оущеотввнно увеличить выход *еая1> по оравшими с пооредотвенйыми донорами. Так, в наших исследованиях ри использовании влечение одного к двух лет доноров о выходом ачесгвенных эмбрионов 2,9 и 3,3 ¡за одро, извлечение соотвего** енно, бнпо получено в среднем от каждогсгпР 15г,7и 34,5:пригод*

них вибрионов и 3,7 и 9,5 тенят (табп.15). В те же сроки от доноров о высоким выходом эмбрионов (6,5 и 6,9) получили соответственно по 28,0 и 57,6 качественных эмбрионов и 9,3 и 15,3 те пят.

Таблица 15. Эффективность многократного использования коров-доноров в зависимости от выхода качественных эмбрионов

Урок/ использования (пет) животных и группы

Показатели ---- I год 2 года

I 2 3 4

Число доноров 3 7 3 4

Число вымываний в среднем на донора 4,3 5.4 8,3 9,7

Получено пригодных эмбрионов:

- в среднем за вымывание 6,5 2.9 6.9 3.5

«•■'в среднем на донора 28,0 15,7 57,6 34,5'

Получено телят в среднем на донора 9.3 3,7 15,3 9,5

вывода

1. Использование дпя стимулирования суперовуляции ФСГ-п в дозе 27 мг по сравнение с 50 мг при практически одинаковом выходе полноценных эмбрионов на донора (оД и 6,5) повышает их качество относительно общего числа полученных зародышей на 13,3! и позволяет снизить расход препарата на одну обработку.

2. При стимулировании суперовуляции УСГ-п и Фопликотропином, увеличение интервала времени между 3-й и 4-й инъекциями препаратов с 12 до 24 часов позволяет повысить выход полноценных эмбрионов соответственно до 6,1 и 6,8 на донора по сравнение с традиционной схемой обработки (5,6 и 6,0).

3. Стимулирование суперовуляции фопликотропинои в сочетании

о ПЗЖК по схеме: 4 инъекции фоппикотропина о интервалом. 24 часа, черев 12 чаоов после первой инъекции фопликотропина - введение ТСКК й доёё 2500 м.е., через 43. часов - двухкратное введение вотрофана с интервалом 12 часов с последупдим осеменением в обычные сроки, при умеренном уровне суперовуляции (8,4) обеспечивает относительно высокий выход полноценных эмбрионов (4,б) И поавопяет в два раза сократить расход дорогостоящего гипофиз ;

эарного препарата, затраты труда и стрессовое воздействие на животное по сравнению с традиционным б-кратнын введением фоя-никотропина.

4. При нехирургическом извлечении вибрионов попеременное введение в полость рога матки порций промывной среды и воздуха ювншает выход зародышей на 14,8 и 20,952 по сравнению с вымыванием ширинами и самотеком через закнутуп систему шпангов. процент извлечения зародышей повышается татке при снижении потерь промывной среды и увеличении числа овуляций.

5. Использование разработанного устройства для нехирургиче-5Кого извлечения змбрюнов (положительное решение по заявке 4907495 от 4.02.91 г.) повышает эффективность вымывания зародышей па 11,1/2 по сравнению с катетером "Войштадт" (67,0 против 55,9#).

6. Применение фипьтра для сбора эмбрионов новой конструкции 'а.с Л704775) позволяет исключить потери эмбрионов при нехирур-шчеоком извлечении, в 2-3 раза сократить трудоемкость проце-(уры и время нахождения эмбрионов вне организма.

7. При нехирургической пересадке прюкивпяемость эмбрионов ювисит от места аппликации в роге матки: наиболее высокий уро-1ень стельности обеслечиваетоя аппликацией в верхушку рога с омощью специально разработанного инструмента (положительное ешение по заявке 4769683 от 19.12.89 г.) и составляет 67,75?

о сравнению с пересадкой в середину рога этим же инструментом (57,1$) или катетером "Нойягадт" (.52,9%),

8. Способ оттаивания замороженных эмбрионов, включающий вы* ержку их на воздухе при 20°0 в течение 10 оекунц о последующи» смещением в водяную баню при 25°С на 10 секунд, по сравнений

общепринятым оттаиванием в водяной бане при 25°С, повышает х сохранность на 8,3$ (96,1 против 87,856) и приживпяемостх осле пересадки на 9,3% (56,1 против 46,8#).

9. Криоконсервирование отличных и хороших эмбрионов повышает их сохранность ¡после'; оттаивания на 25..3Я по сравнению 6 50впетв0ригейьными ¡(87,8. против .'62*950. ' ■ -

10. ИпсипатерапьАая пересадка двух эамороиейнЬ^оттаянных 1брюнов одному реципиенту позволяет повысить уровень степь->сти на 8,7$ по ¡сравнению с пересадкой одного эмбриона (53¿5 ютив 46,®6).

1Г, Пересадка свежеполученных и заморокенно-оттаянных эмбрионов позволяет получать 45 и 53,25? бтепьностей соответственно.

12. При многоразовой использовании коров-доноров кратность гормональных обработок не оказывает существенного влияния на овупирующую реакцию яичников и выход полноценных эмбрионов, что позволяет получать от каждого животного при сроках использования 1-2 года от 19,4 до 46,1 пригодных дпя трансплантации вибрионов и 5,4-11,4 телят. Использование дпя этой цепи доноров, способных выделять повышенное число качественных эмбрионов, позволяет повысить ети показатели до 2,9-57,6 и 9,3-15,3 соответственно.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ .

1. Усовершенствованные схемы стимулирования суперовупяции, основанные на- уменьшении дозы, сокращении числй Инъекций и ком1-бинированном применении гипофизарного и сывороточного гонадо-' .тропинов, обеспечивавшие экономно препаратов, снижение затрат тру1*8» стоимости гормональной»обработки и стрессовое воздействие на животное, повышение выхода качественных эмбрионов.

2. Номинированный способ вымывания .зародышей, устройство для нехирургического извлечения эмбрионов (положительное репе-ние патентной экспертизы во заявке № 4907495 от 4.02.1991 г.) и устройство дпя сбора эмбрионов животных (а.с.¡МТС4775), позволявшие повысить общий выход зародышей на 11,1??, в 2-3 раза снизить трудоемкость и потери вымытых эмбрионов.

3. Устройство дпя нехирургической трансплантации эчбрионов (положительное решение патентной экспертизы по заявке •¡•4769683 о* 19.12.89 г.), применение которого обеспечивает повышение пдшшвляеиооти на 10,6-14,ва очет аппликации эмбрионов в верхушку рога матки.

4. Модифицированный .способ двухэтапного оттаивания запорошенных эмбрионов на воздухе и в водяной бане, повывающий их сохранность на 8,3$ и приживляемость после пересев,ки на 9,3$.

5. Дпя бопее полной реализации генетического потенциала высокопродуктивных животных рекомендуется многократное использование коров в качестве доноров эмбрионов.

27 .

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Кирилова Н.И., Лебедев В.и;, Бабенков B.D. Влияние кратности суперовупяции коров-доноров на качество эмбрионов У/3!'ивотноводство.-1986.-№10.-С.45-4б.

2. Бабенков В.Ю.,.Будевич И.И. Влияние некоторых факторов на результативность нехирургической трансплантации эмбрионов в скотоводстве //Интенсификация производства в отраслях агропромышленного комплекса на основе использования методов^био-технопогии: тез.докп.научной конференции.-Минск,I989.-С.39-40. .

3. Будевич И.И., Бабенков В.Ю. Эффективность использования новых биотехнопогических приемов при трансплантации эмбрионов //Интенсификация производства в отраслях агропромышленного комплекса на основе использования методов биотехнологии:, тез. докл.научной конвенции.-Минск, 1989.-С.40-41.

4. Бабенков B.D. Эффективность нехирургической трансппанта-> ции эмбрионов //Трансплантация эмбрионов крупного рогатого скота: тез.докл.научно-методического совещания.-Кодино,1989*- '

С. 63-65,.

5. Бабенков B.D. Совершенствование способа индуцирования суперовупяции у коров-доноров //Биотехнология и воспроизводство в животноводстве: тез.докл.научно-практической конференции, Горки,1991.-С.4-6. ' '

6. Бабенков В.Ю., Семечко А.П. Эффективность трансцервикапь-ной пересадки эмбрионов-с помощью ноеого инструмента //Биотехнология и воспроизводство в животноводстве: тез.докл.научно-практической конференции, Горки,1991.-С.6-8.

7. Бабенков В.Ю., Бабенкова Л.В, Допустимость изменений режима замораживания эмбрионов //Зоотехния,1991.-MI.-С.62-63.

8. Бабенков В.Ю., Бабенкова Л.В. Устройство для трансплантации эмбрионов //Положительное решение на изобретение государственной патентно;! экспертизы, 1989, заявка № 4769683.

9. Бабенков В.Ю. ,• Будевич И.И.,-Бабенкова Л.В. Устройство дпя нехирургического извлечения эмбрионов у животных //Попожи-тепьное решение на изобретение государственной патентной экспертизы, 1991, заявка № 4907495.

10. Бабенков В.Ю., Бабенкова JI.B. Устройство для сбора эмбрионов животных //Авторокое свидетельство СССР № 1704775,1992, бюллетень № 2.

11. Бабенков B.D., Бабенкова Л.В. Устройство дпя разделения эмбрионов животных //Авторское свидетельство СССР M7278I9, 1992, боппетень №15.

12. Кононенко В.Л., Романов О.Д., Бабенков B.D., Васин В,Т, Устройство дпя культивирования эмбрионов животных //Положительное решение на изобретение государственной патентной экспертизы, 1991, заявка № 4901036.

Подписано к пэчети 15. 04. .£3¿Тираж /СО Зякад Баонлетно

Отпечатано на ротопринта 1ЩИШЭСХ. 220610, Нинок, Кноринв,!,