Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

ДИАГНОСТИКА ВИРУСНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ШАМПИНЬОНА ДВУСПОРОВОГО В СВЯЗИ С ИХ ПРОФИЛАКТИКОЙ В УСЛОВИЯХ ПРОМЫШЛЕННОГО ПРОИЗВОДСТВА

ВАК РФ 06.01.11, Защита растений

Автореферат диссертации по теме "ДИАГНОСТИКА ВИРУСНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ШАМПИНЬОНА ДВУСПОРОВОГО В СВЯЗИ С ИХ ПРОФИЛАКТИКОЙ В УСЛОВИЯХ ПРОМЫШЛЕННОГО ПРОИЗВОДСТВА"

Д-2Ш1ь

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРОПРОМЫШЛЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ имени К. А. ТИМИРЯЗЕВА

На правах рукописи АЛЕКСЕЕВА Ксения Леонидовна

УДК 635.82 : 632.3

ДИАГНОСТИКА ВИРУСНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ШАМПИНЬОНА ДВУСПОРОВОГО В СВЯЗИ С ИХ ПРОФИЛАКТИКОЙ В УСЛОВИЯХ ПРОМЫШЛЕННОГО ПРОИЗВОДСТВА

Специальность — 06.01.11 — защита растений от вредителей и болезней

, Автореферат 4

' диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА — 1988

Работа выполнена на кафедре вирусологии Биологического факультета Московского государственного университета имени М. В. Ломоносова и в лаборатории грибоводства отдела защищенного грунта Научно-исследовательского института овощного хозяйства.

Научные руководители — доктор биологических наук М. Э. Тальянский, кандидат сельскохозяйственных наук Л. А. Девочкин.

Официальные оппоненты — член-корр. АН СССР, профессор М. В. Горленко, кандидат биологических наук,' доцент В. А. Шмыгля.

Ведущая организация — ВНИИ сельскохозяйственной биотехнологии.

Защита состоится « . ¿¿¿¿^РЯ-. 1988 г. в «'^аГчас.

мин. на заседании Специализированного совета К 120.35.03 в Московской сельскохозяйственной академии им. К. А. Тимирязева по адресу: Москва, 127550, ул. Тимирязевская, дом 49.

С диссертацией можно ознакомиться а ЦНБ ТСХА. • •

Автореферат разослан «

_ 1988 года.

Ученый секретарь Специализированного совета^

Н. К. Торянская.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В утвержденных XXVII съездом КПСС «Основных направлениях экономического и социального развития СССР на 1986—1990 годы и на период до '2000 года» и в Продовольственной программе СССР намечено значительное увеличение производства. овощной продукции за счет внедрения интенсивных и безотходных технологий. В связи с решением поставленных задач все более широкое развитие получает промышленное производство съедобных грибов (шампиньонов). Важным фактором, обеспечивающим высокие урожаи грибов, является защита культуры шампиньона от вредителей и болезней. Одно из первых мест по вредоносности занимают вирусные болезни шампиньона, наносящие значительный ущерб грибоводству во всем мире..

Решение проблемы защиты грибов от вирусных болезней связано с разработкой методов диагностики вирусов шампиньона, достаточно надежных и доступных для проведения анализов в условиях производства. Необходимо отметить, что индикаторный и гистологический методы, широко используемые в фитовирусологии, неприменимы для диагностики вирусов шампиньона, а наиболее разработанный и распространенный метод электронной микроскопии малодоступен в условиях производства.

Важной мерой профилактики вирусных болезней шампиньона является применение безвирусного посадочного материала. Известные способы оздоровления вируссодержащего мицелия шампиньона (термотерапия в сочетании с культурой верхушек гиф) имеют существенные недостатки. Основной из . них — низкая эффективность оздоровления.

В связи с большой экономической значимостью вирусных болезней шампиньона повышение эффективности мер борьбы с ними на основе применения безвирусного посадочного материала является актуальным.

Цель и задачи исследования. Целью настоящих исследований являлась разработка методов диагностики и обоснова-

Центральная Пауча-я 1л;СлиотЕ::а Москоас.«>3 очдгва Леашм

1.1. !.'. Л. 'ичиына

ние мероприятий по борьбе с вирусными болезнями шампиньона.

В задачи исследования входило:

1. Получение очищенного препарата вирусов шампиньона и диагностической антисывороткн.

2. Разработка методов диагностики вирусов шампиньона в плодовых телах и мицелии для проведения анализов в условиях производственной лаборатории.

3. Оценка распространенности вирусных болезней в шампиньонных хозяйствах Московской области.

4. Изучение 'влияния вирусной 'инфекции на 'рост мицелия шампиньона в условиях in vitro и на урожайность культуры шампиньона.

Ъ. 'Изучение действия нативного лейкоцитарного интерферона человека на репродукцию вирусов шампиньона.

'Научная новизна. Впервые в СССР выявлены вирусные болезни шампиньона. Получен очищенный вирусный препарат и 'поливалентная диагностическая аитисыворотка к сферическим вирусным частицам диаметром 25 нм (ВШ-25) н к палочковидным вирусным частицам размером 17/350 нм (ВШ-17/350). Разработаны методы иммунодиагностики вирусов в плодовых телах и мицелии шампиньона для применения в условиях производственной лаборатории. Проведена оценка распространенности вирусных болезней в шампиньонных хозяйствах Московской области. Изучено влияние вирусной инфекции на рост мицелия шампиньона в условиях in vitro "и-в субстрате, а также на динамику плодоношения, урожаи и качество продукции. Показана принципиальная возможность •использования нативного лейкоцитарного интерферона человекам -качестве инактиватора вирусов шампиньона.

'Практическая ценность работы. Разработаны методы диагностики 'вирусов шампиньона в плодовых телах и мицелии. Показана необходимость вирусологического контроля при первичном отборе штаммов в селекционной работе, а также при производстве посадочного материала. Предложен способ ■оздоровления'вируссодержащего мицелия шампиньона. Полу-ченные'результаты использованы при составлении «Методических указаний по иммунодиагностике и профилактике вирусных'болезней-шампиньонов» (1986).

'Апробация работы. Основные положения диссертации были доложены на Межфакультетской научно-практической конференции «МГУ — сельскому хозяйству» :(хМосква, 1982), на XI и XII конференциях молодых ученых и аспирантов •НИИОХ (Мытищи, 1984, 1986), на II Всесоюзном совещании «Состояние и перспективы производства высших съедобных .грибов.в СССР» (Чернигов, 1985). Полностью материалы диссертации были рассмотрены и одобрены на заседаниях мето-

днческой комиссии отдела защищенного грунта НИИОХ, ученого совета НИИОХ, кафедры сельскохозяйственной фитопатологии ТСХА.

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 5 работ, получено 1 авторское свидетельство на изобретение.

Объем работы. Диссертация изложена на страницах машинописного текста, содержит 7 глав, выводы и практические рекомендации. Список цитируемой литературы включает 199 наименований, в том числе 157 на иностранных языках. Текст иллюстрирован таблицами и /'¿¿'рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Введение

Во введении рассмотрены актуальность темы, определены цели и задачи исследования, отмечена новизна исследований и практическая ценность полученных результатов.

Обзор литературы

В главе I обсуждаются особенности культуры шампиньона дпуспорового, как объекта промышленного производства, и принципы организации мероприятий но защите от вредителей и болезней. В главе 2 приводятся литературные данные по распространению и вредоносности вирусных болезней шампиньона в различных странах, по свойствам вирусов шампиньона, методам их выделения и очистки. Обсуждаются методы диагностики вирусных болезнен шампиньона, их надежность и возможность применения в производственных условиях. Приводятся данные об источниках вирусной инфекции, способах заражения и мерах борьбы.

Материалы и методы исследований

Исходным материалом для выявления вирусов шампиньона и получения очищенных вирусных препаратов послужили пораженные вирусами плодовые тела различных штаммов из шампиньонниц Московской области. Отбор пораженных плодовых тел проводили на основе симптомов вирусного поражения, описанных в литературе (Dieleman — van Zaayen, 1979): карликовость, раннее отмирание, водянистость тканей. Препаративное выделение вирусов шампиньона проводили по модифицированной методике Мойера'и Смита (Моуег, Smith, 1976), основанной на сочетании дифференциального центрифугирования и осаждения частиц в присутствии поли-

иЗ

этиленгликоля (ПЭГ м. в. 6000). Чистоту полученных вирусных препаратов определяли сиектрсфотометрически по отношению поглощения света в УФ области при длине волны 260 и 280 им, а также методом электронной микроскопии с применением электронного микроскопа фирмы Hitachi (Япония). Препараты контрастировали 2%-ным водным раствором уранилацетата (рН 5). Антисыворотку к полученному вирусному препарату получали, иммунизируя кроликов при трехкратном с интервалом 1 неделя внутривенном введении .тотального вирусного препарата в 0,01 м трис-НСГ буфере (рН 7,2) в смеси с равным объемом адъюванта Фрейнда. Кровь брали на 7-й и 9-й день после последней инъекции. Титр антисывороток определяли в реакции двойной нммуно-диффузии по методу Оухтерлони (Ouchterlony, 1958, 1961) в модификации Лбелева (1968). При постановке реакции радиальной иммунодиффузии 1%-ный бактоагар Дифко, приготовленный на 0,05 М трис-IICl буфере, содержащем 0,85% NaCl, инкубировали 10 минут при 48°С с антисывороткой в соотношении 1 :64 и наносили слоем 3 мм в чашки Петри. Готовили лунки диаметром 4 мм и заполняли их соком тестируемых плодовых тел. Реакцию виробактериальной агглютинации (АБВ-тест) проводили по методике Чиркова (1982). При постановке нммуноферментного анализа (ИФА) использовали «сэндвич»-вариант (Катков и др., 1985).

Распространенность вирусных болезней шампиньона определяли в шампиньонницах совхозов Московской области «Зеленоградский», «Заречье», «Московский» по модифицированной методике учета распространенности вирусных болезней овощных культур в условиях защищенного грунта (Чумаков и др., 1974) на основании результатов иммунодиагностики плодовых тел методом радиальной иммунодиффузии.

При изучении роста вируссодержащего мицелия шампиньона на агаризованных средах использовали общепринятую микробиологическую методику (Дудка и др.,. 1982). Инкубирование проводили при температуре 24°С на трех вариантах питательных сред (сусло-агар, картофельно-глюкозный агар, пшеничный агар). Скорость линейного роста колоний оценивали измерением их диаметров на 7-е, 14-е и 21-е сутки "после посева. Изучение влияния вирусной инфекции на антагонистическую активность мицелия шампиньона проводили методом совместного культивирования с микромицетами субстрата и покровного материала в чашках Петри. Типы взаимодействия колоний описывали в соответствии с классификацией Пестинской (1959).

Изучение действия человеческого лейкоцитарного интерферона (ИФН) на репродукцию вирусов шампиньона проводили, добавляя ИФН в жидкую питательную среду при посе-

Ч

не внруссодержащего мицелия шампиньона' в концентрациях 1, 5, 10, 50, 100 единиц активности на 1 мл среды (7-балльнос пивное сусло). Контролем служил вариант без добавления ИФН. Инкубирование осуществляли при температуре 24— 25°С при встряхивании на вращательной качалке. Все лабораторные опыты проводили в 4-, 5-кратной новторности и в

3 повторениях во времени.

Постановку, мелкоделяночных опытов осуществляли в контрольно-опытной шампиньоннице совхоза «Заречье» и в шампиньонном цехе совхоза «Зеленоградский» по методике, принятой в грибоводстве. Схема опытов: I вариант — безви-русиый посадочный мицелнн шампиньона; II вариант — ви-руссодержащий посадочный мицелий шампиньона. Площадь учетной делянки 1—1,25 м2. Повторность опыта 4-кратная с

4 повторениями во времени. Приготовление субстрата, покровного материала и уход за культурой шампиньона осуществляли по технологии, принятой в каждом из хозяйств. Сопутствующие наблюдения включали агрохимические анализы субстрата и покровного материала, учет параметров микроклимата, синологические наблюдения, биометрические исследования выборки плодовых тел и их вирусологический анализ.

Все результаты исследований обработаны статистически методом однофакторного дисперсионного анализа (Доспехов, 1979).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Получение очищенного препарата вирусов шампиньона и диагностической антисыворотки

Электронномикроскопический анализ экстрактов плодовых тел с симптомами вирусного заболевания выявил присутствие в них вирусных частиц, морфологически сходных с вирусами шампиньона, описанными в литературе в странах Европы, Азии, Америки. Здоровые плодовые тела, не имеющие явно выраженных признаков вирусного заболевания, не содержали вирусных частиц.

В процессе разработки метода препаративного выделения вирусов шампиньона из пораженных плодовых тел установлено, что максимальный выход нуклеопротеида может быть получен при использовании комбинации методик, в которой применялось осаждение частиц 10% ПЭГ в присутствии 0,6 М N30 н дифференциальное центрифугирование. Тотальный вирусный препарат, выделенный из пораженных плодовых тел, содержал два типа частиц: ВШ-25 и ВШ-17/350. Выявленные компоненты были разделены в градиенте концентрации сахарозы (20—50%). Электронномикроскопический анализ пока-

зал, что быстрый компонент составляли палочковидные частицы, медленный компонент — сферические частицы с незначительной примесью коротких палочек. Спектры поглощения в ультрафиолетовой области были типичны для нуклеопро-теидов.

Тотальный вирусный препарат использовали для иммунизации кроликов и получения диагностической антисыворотки к обоим типам вирусных частиц. Титр полученной антисыворотки, определенный н реакции двойной иммунодиффузии, составлял 1/128. Исследования показали, что полученная антисыворотка специфична, так как она реагировала только с очищенным препаратом вирусов шампиньона и с соком пораженных плодовых тел и не реагировала с препаратом вируса табачной мозаики (ВТМ) и соком здоровых плодовых тел.-Нормальная кроличья сыворотка не образовывала полос преципитации с препаратом вирусов шампиньона.

2. ДИАГНОСТИКА ВИРУСОВ ШАМПИНЬОНА В ПЛОДОВЫХ ТЕЛАХ И МИЦЕЛИИ

Поливалентная антисыворотка была использована для диагностики вирусов шампиньона в плодовых телах и мицелии различными методами. При изучении возможности применения каждого из них в условиях производственной лаборатории оценивали чувствительность .метода, отсутствие неспецифических реакций, сложность постановки, затраты труда и времени. Результаты представлены в таблице 1. В наших опытах были получены отрицательные результаты при изучении возможности использования реакции двойной иммунодиффузии для диагностики вирусов, как в плодовых телах, так и в мицелии шампиньона, что связано с низкой чувствительностью метода. Реакция радиальной иммунодиффузии обладает более высокой чувствительностью и в связи с этим была использована для тестирования вирусов шампиньона в соке зараженных плодовых тел. При оценке возможности применения метода радиальной иммунодиффузии в условиях производства необходимо учитывать, что метод отличается простотой постановки, не требует дорогостоящих реактивов и оборудования. Подготовка к работе занимает 1—1,5 часа, в одной чашке Петри может быть проведено одновременно более 100 анализов.

Для диагностики вирусов шампиньона в мицелии необходимо привлечение более чувствительных методов. Виробак-териальная агглютинация (АБВ-тест) превышает по чувствительности реакцию двойной иммунодиффузии в 16 раз, реакцию радиальной иммунодиффузии — в 4 раза. Тестированию вирусов шампиньона в плодовых телах методом АБВ препят-

i-:-:—r-7-1—;-

3 4 5 волна плодо-. ношения

Рис.1 Распространенность вирусных болезней (%) шампиньона в совхозах Московской области (1981 - 1983 г.). I - совхоз "Зеленоградский; II - совхоз "Заречье"; III - совхоз "Московский"

8. 642

сусло-агар

пшеничный агар каргофельно-глюкозный

т Щ

Ш

В;

7-е 14-е 21-е 7-е 14-е 21-е

7-е 14-е 21-е сутки после посева

Рис.2 Влияние вирусной инфекции на'рост мицелия шампиньона в условиях чистой культуры 1 1 - безвирусный мицелий

- вирусссщержащий мицелий

<4.

я о хэ

сц и

о

л

неделя плодоношения

1-я 2-я 3-я 4-я 5-я

Рис.3 Влияние вирусной инфекции на динамику . плодоношения культуры шампиньона

с

тхщт - то же, что на рис.2

отрицательный контроль 0,031 положительный контроль 1,5

>

20

40

60

80

100 концентрация й$Н ед. /ж среды

Рис. 4 Инактивация вирусов в мщелии шампиньона под действием человеческого лейкоцитарного интерферона .

Таблица I

Диагностика вирусов шампиньона в плодовых телах и мицелии

Метод диагностики

Величины предельных разведений при тестировании

мицелий

шампиньона

Двойная иммунодиффузия . . . Радиальная иммунодиффузия . .

гадлц,101шл »шм^пидпцл^^нл , .

Виробактериальная агглютинация Иммуноферментный анализ . . .

1/16 1/64 1/256 1/1024

1-1/2 1/1024

1/16-1/32 1/128

Примечание: Прочерк в таблице обозначает отсутствие регистрируемой реакции.

ствуют неснецифические реакции агглютинации. Вместе с тем, АБВ-тест может быть использован для тестирования вирусов шампиньона в экстрактах зернового мицелия. Для получения диагностнкума смешивали 1 объем 10%-нон суспензии золотистого стафилококка и 5 объемов антисыворотки в рабочем разведении 1 : 100. АБВ-тест требует меньшего расхода антисыворотки по сравнению с иммунодиффузионными тестами, характеризуется простотой постановки и быстротой получения результатов тестирования (1—3 минуты). Иммуноферментный анализ позволяет тестировать вирусы шампиньона как в плодовых телах, так и в мицелии шампиньона. Благодаря высокой чувствительности метод дает возможность выявлять вирусы шампиньона, содержащиеся в анализируемом материале в низких концентрациях, при этом характеризуется более сложной постановкой.

3. Тестирование вирусных болезней шампиньона в совхозах Московской области

Метод радиальной иммунодиффузии был использован для тестирования вирусов шампиньона в плодовых телах с целью оценки распространенности вирусных болезней шампиньона в совхозах Московской области. Общее число проведенных анализов составило 6284. Вирусные болезни шампиньона были зарегистрированы в каждом из обследованных хозяйств. Результаты учета распространенности вирусных болезней шампиньона представлены на рис. 1.

Наиболее низкая степень зараженности отмечена в шампиньоннице совхоза-комбината «Московский», где вирусные заболевания проявлялись к концу плодоношения, а средневзвешенный показатель распространенности по шампиньон-

нице* на 5-й волне плодоношения составил 5,5%. Наиболее высокая степень поражения; вирусными! болезнями отмечена в шампиньонном цехе совхоза «Зеленоградский», где доля пораженных плодовых тел на второй волне плодоношения составила 16,8%, а на четвертой волне плодоношения увеличилась до 27,9%. В шампиньонном цехе совхоза «Заречье» распространенность вирусных болезней достигала к пятой волне плодоношения 23,2%, Установлено, что распространенность вирусных болезней шампионьона увеличивается к концу плодоношения. •

Сравнение норажаемостп различных штаммов шампиньона показало, что они не проявляли существенных различий между собой по устойчивости к вирусным болезням. Также выявлено, что время года не оказывало, существенного влияния на поражаемость культуры шампиньона вирусными болезнями в каждой из обследованных шампиньонниц. Вероятно, наиболее важное значение для степени распространенности ви: русных болезней шампиньона имеет общая фитосанитарная обстановка в шампиньоннице, что связано с технологией выращивания и системой защитных мероприятий, осуществляемой в каждом хозяйстве, общей культурой производства.

4. Изучение роста вируссодержащего мицелия

шампиньона в условиях in vitro

)

По результатам тестирования методом электронной микроскопии и методами иммунодиагностики • (АБВ-тест, ИФА) были отобраны изоляты безвирусного jи вируссодержащего мицелия шампиньона штамма Braunlinp немецкой селекции производства ГДР, полученного из совхоза «Зеленоградский».

Установлено, что наиболее благоприятными средами для культивирования как вируссодержащего, так и безвирусного мицелия шампиньона является сусло-агар и пшеничный агар. Показано, что внруссодержащий мицелйй в условиях поверхностного культивирования на всех изученных вариантах питательных сред не проявлял существенных различий на 5%-ном уровне значимости по скорости линейного роста, а также культурально-морфологическим особенностям колоний по сравнению с безвирусным мицелием того же штамма (рис. 2). Также не было.отмечено различий между изучаемыми вариантами мицелия при культивировании на зерновой среде. Отсутствие внешне выраженных 'признаков вирусного поражения мицелия шампиньона при культивировании в условиях in vitro свидетельствует о необходимости специального вирусологического контроля при производстве маточной и коммерческой ;культуры шампиньона, а также в селекционной работе. ...... .- .

5.. Динамика плодоношения и урожайность культуры шампиньона при использовании вируссодержащего посадочного мицелия

!Вируссодержащий и безвирусный мицелий шампиньона штамма ВгаигШпд, выращенный на зерновой среде, был использован в качестве посадочного материала при изучении влияния вирусной инфекции на развитие культуры шампиньона. Проведенные исследования показали, что вируссодержа-щий мицелий шампиньона характеризовался замедленной скоростью роста в субстрате и не обеспечивал полного зарастания субстрата за двухнедельный период после посева по сравненню с безвирусным мицелием шампиньона. На поверхности субстрата, засеянного вируссодержащим мицелием развивались очаги плесневых грибов. Для установления причины замедленного роста вируссодержащего мицелия шампиньона в субстрате было проведено изучение влияния вирусной инфекции на антагонистическую активность мицелия методом совместного культивирования в чашках Петри с микромице-тами, выделенными нз субстрата и покровного материала. Выявлено три типа взаимодействия между колониями шампиньона и колониями выделенных микромицетов. Получены данные, свидетельствующие о том, что вируссодержащий мицелий шампиньона обладает пониженной антагонистической активностью по отношению к микромицетам субстрата и покровного материала по'сравнению с безвирусным мицелием шампиньона того же штамма. Это является, вероятно, одной из причин пониженной конкурентной способности вируссодержащего мицелия шампиньона, что приводит к неполному зарастанию субстрата, образованию неосвоенных участков.

Наблюдения за развитием культуры шампиньона в- фазе плодоношения показали, что при использовании вируссодержащего посадочного мицелия сроки начала плодоношения запаздывали на 3—5 суток, культура шампиньона имела замедленные темпы отдачи урожая по сравненню с контрольным вариантом (безвирусный мицелий), характеризовалась низ* кой-урожайностью в первую неделю плодоношения, последу-'ющим постепенным ее повышением на 3—4 волне и резким спадом на 5-й волне плодоношения (рис. 3). Общий урожай грибов, полученный с учетных делянок, засеянных вируссодержащим мицелием шампиньона был на 38—42% ниже уро-■ жая' грибов, полученного с учетных делянок, засеянных без-■внрусным мицелием.

Изучение' влияния вирусной инфекции на показатели га-битуса;и массу плодовых тел показало, что при использовании вируссодержащего посадочного мицелия плодовые тела имели достоверно (при'Р05) более мелкие размеры (меньший

диаМетр шляпки и более.вытянутую ножку), меньшую массу (табл. 2), содержали повышенную концентрацию вирусных частиц, характеризовались редким-расположением по поверхности покровного материала по сравнению с плодовыми телами контрольного варианта (безвирусный посадочный мицелий). ' . -1 !.* -г ; : ,

* . . ■ Таблица 2

Масса и габитус плодовых тел шампиньона при использовании безвирусного й вируссодержащего посадочного мицелия

Вариант посадочного мицелия шампиньона 'Средняя масса плодовых ; тел, г Средний диаметр шляпки, мм Средняя. " высота •ножки, мм Средний диаметр * ножки, мм

Безвирусний * - •28,7 ±1,9 43,1 ± 1,1 2 7,6 ±2,0 20,5 ±0,8

В н руссодерж ащи й - 17,4± 1,3 ";* 31,7=4=1,4 36,7 ±1,3 14,4±0,8

6. Изучение действия нативного лейкоцитарного интерферона человека на репродукцию вирусов шампиньона

Основанием для испытания нативного лейкоцитарного интерферона человека (ИФН) в качестве "инактиватора вирусов шампиньона послужили дакие его свойства, как высокая антивирусная активность, нетоксичность для клеток организма-хозяина, универсальность' противовирусной активности, способность ИФН подавлять;, репродукцию вирусов человека, животных, растений- . (ОгсЬапэку е! а1., 1982; Йе1з1тап е! а1., 1983). ч ;

. В результате проведенных исследований установлено, что ИФН проявляет противовирусную активность в отношении вирусов шампиньона. Выявлены,оптимальные условия культивирования н оптимальные концентрации ИФН, обеспечивающие подавление репродукции вирусов шампиньона. Показана возможность оздоровления, вируссодержащего мицелия шампиньона при добавлении ИФН в жидкую питательную среду при посеве гриба в . концентрации 5—10 единиц. активности "на 1 мл среды (рис. 4).г; <ч

-;. Преимущества предложенного способа по сравнению с известными способами, оздоровления • в11руссодержащего мицелия шампиньона заключаются в его.высокой эффективности, простоте постановки, экономичности,- нетоксичности- для мицелия шампиньона, а также для человека при работе с этим препаратом. В проведенных экспериментах зерновой мицелий шампиньона, полученный из исходной.культуры, оздоровление

ной ИФН, обеспечивал »получение ^урожая грибов на уровне контрольного варианта (безвирусный посадочной мицелий).

Выводы

1. Впервые в СССР из пораженных плодовых тел шампиньона выделен очищенный вирусный препарат, содержащий изометрические частицы диаметром 25 им (ВШ-25) и палочковидные частицы размером 17/350 нм (ВШ-17/350).

2. Получена поливалентная диагностическая антисыворотка с титром 1Н28, специфичная к двум типам вирусных частиц (ВШ-25, ВШ-17/350).

3. Разработаны методы иммунодиагностики вирусов шампиньона в плодовых телах и мицелии для проведения анализов в условиях производственной лаборатории (радиальная иммунодиффузия, виробактериальнаи агглютинация, иммуно-■ферментный анализ).

4. Распространенность вирусных болезней шампиньона в совхозах Московской области в 1981—1983 годах составила от 5,5% до 27,9%.

5. Вирусная инфекция, содержащаяся в посадочном материале шампиньона (мицелии), снижает скорость его роста е субстрате и покровном материале, вызывает задержку сроков начала плодоношения, снижение урожая на 38—42%, ухудшает качество плодовых тел.

6. Выявлена противовирусная активность натнвного лейкоцитарного интерферона человека в отношении вирусов шампиньона..

Практические рекомендации

1. Для проведения массовых вирусологических анализов в условиях производственной лаборатории необходимо использовать следующие методы: радиальную иммунодиффузию (диагностика пораженных плодовых тел), виробактернальную агглютинацию (диагностика мицелия), иммуноферментный анализ (диагностика плодовых тел и мицелия).

2. Осуществлять вирусологический контроль исходных культур при производстве посадочного материала шампиньона, а также при первичном отборе штаммов для селекционного процесса путем тестирования и выбраковки вирус-зара-женного материала.

3. Использовать антивирусное действие лейкоцитарного интерферона человека для оздоровления внруссодержащего мицелия шампиньона.

'4; В целях профилактики вирусных болезнен шампиньона использовать безвирусный посадочной мицелий.

и

Список опубликованных оабот

1. Алексеева К. Л., Самусенко Г. Е., Тальянскнй М. Э., Л т а б е к о в И. Г. Обнаружение и тестирование вирусов шам-пиньонов//Защита растений, — 1982,— №10. — С.'28—29.

2. Алексеева К. Л., Тальянскнй М. Э„ Атабеков И. Г. Диагностика вирусных болезней шампиньонов//Тезисы докладов научно-практической конференции «МГУ — сельскому хозяйству». — 1982, Изд-в'о МГУ, —С. 112—113.

3. А л е к с е е в а К. Л., К а з о к и н Ю. И; Меры борьбы с вирусными болезнями шампиньонов/Жартофель и овощи.— 1983.—№ 3.— С. 30—31.

4. Алексеева К. Л. Влияние вирусной инфекции на приживаемость мицелия шампиньона двуспорового в субстрате//Производство высших съедобных грибов в СССР: Тезисы докладов II Всесоюзного совещания,-Чернигов, май, 1985 г.— Киев; Наукова думка, 1985.— С. 65—67.

5. Алексе в а К. Л., Атабеков И. Г., Огарков В. И., Тальянскнй М. Э. Инактиватор миковирусов//Авторское свидетельство на изобретение № 1131900. — 1984. — Бюл. .V» 48.

6. Алексеева К. Л., Атабеков И. Г., Кап лай И. Б., Тальянскнй М. Э. Методические указания по иммунодиагностике и профилактике вирусных болезней шампиньонов. — Изд-во ВАСХНИЛ. — М:, 1986, — 20 с. •

Л 58978 31/ХН—87 г. Объем'3/< п. л. Заказ 3613. Тираж 100

Типография Московской с.-х. академии им. К. А. Тимирязева 127550, Москва И-550, Тимирязевская ул., 44

Бесолатн*