Диагностика респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота и особенности проявления болезни в современных условиях ведения животноводства

Строганова, Ирина Яковлевна

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Диагностика респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота и особенности проявления болезни в современных условиях ведения животноводства
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Диагностика респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота и особенности проявления болезни в современных условиях ведения животноводства"

На правах рукописи

СТРОГАНОВА ИРИНА ЯКОВЛЕВНА

ДИАГНОСТИКА РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И ОСОБЕННОСТИ ПРОЯВЛЕНИЯ БОЛЕЗНИ В СОВРЕМЕННЫХ УСЛОВИЯХ ВЕДЕНИЯ ЖИВОТНОВОДСТВА

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

-3 НОЯ 2011

Новосибирск - 2011

4858719

Работа выполнена в ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии и в Институте прикладной биотехнологии и ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет»

доктор ветеринарных наук, профессор Глотов Александр Гаврилович

доктор биологических наук, старший научный сотрудник Семенихии Владимир Иванович,

доктор ветеринарных наук, профессор Барышников Петр Иванович,

доктор биологических наук, профессор Забережный Алексей Дмитриевич

Ведущая организация: ГНУ Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии

Защита состоится «29» ноября 2011 г. в «10» часов на заседании диссертационного совета Д.006.045.01. при Государственном научном учреждении Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии по адресу: 630501, Новосибирская область, Новосибирский район, п. Краснообск, ГНУ ИЭВСиДВ, а/я 8, тел/факс (383) 348-44-62.

С диссертацией можно ознакомиться в Сибирской научной сельскохозяйственной библиотеке Россельхозакадемии.

Автореферат разослан «¿У»

Научный консультант: Официальные оппоненты:

Ученый секретарь диссертационного совета

Г.М. Стеблева

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время в России возрастает удельный вес хозяйств по производству молока. В некоторые из них осуществляется ввоз высокопродуктивного скота из других стран. Высокая молочная продуктивность коров часто сопровождается нарушением обмена веществ, что приводит, в частности, к активизации различных инфекционных агентов (А.Г. Шахов и соавт., 2000; Ю.Н. Федоров, 2006). Существуют также молочно-товарные фермы, в которых концентрация животных и их продуктивность бывают разными, а ввод новых животных ограничен. Учитывая существование различных по направлению, численности, концентрации и продуктивности животных хозяйств, эпизоотическая ситуация в них по инфекционным болезням может различаться.

Широкое распространение в молочных хозяйствах получили респираторные болезни животных (О.Г. Петрова и соавт., 2002; К.П. Юров и соавт., 2003; Т.И. Глотова, 2006; М.И. Гулкжин и соавт., 2007; J. Kampa et al., 2009; К.А. Woodbine, 2009; J.F. Ridpath, 2010).

Эти болезни, как правило, протекают с участием нескольких возбудителей, синергетическое взаимодействие которых приводит к усилению тяжести инфекционного процесса (H.H. Крюков и соавт., 1984; В.А. Мищенко и соавт., 2000; Н.Ю. Басова, 2002; А.Г. Глотов и соавт., 2008; Н.Р. Будулов, 2009; D.G. Bryson, 2000; К. А. Brogden et al., 2002).

Одним из этиологических агентов данной патологии является респира-торно-синцитиальный вирус крупного рогатого скота (PCB КРС), относящийся к семейству Paramyxoviridae, роду Pneumovirus. Во многих зарубежных странах его относят к числу наиболее важных патогенов молочного скота (L.E. Larsen, 2000; S. Hagglund, 2005; С. Luzzago et al., 2010; B.W. Brodersen, 2010).

Первые сообщения о РСИ КРС в нашей стране относятся к 1975 году (В.В. Гуненков и соавт., 1975). Изучению болезни и разработке средств и методов диагностики были посвящены работы Г. А. Халенева (1976), Г.Д. Метревели (1983), Т.М. Кочиш (2004), И.Н. Матвеевой (2008) и других.

Несмотря на относительно высокую степень изученности многих вирусных болезней, в нашей стране данных, касающихся роли этого возбудителя в возникновении респираторных болезней, в том числе в ассоциациях с другими вирусами, недостаточно. Изучение этой инфекции длительное время сдерживалось из-за высокой лабильности вируса и слабой его способности к размножению в культурах клеток, что, в свою очередь препятствовало разработке диагностических препаратов. Поэтому многие вопросы, касающиеся диагностики, особенностей эпизоотической ситуации, возрастной восприимчивости животных к инфицированию вирусом, характера проявления болезни в молочных хозяйствах в зависимости от их специализации и уровня молочной продуктивности коров остаются открытыми.

Цель и задачи исследований. В связи с этим целью работы являлась разработка эффективных способов серологической и вирусологической диагностики респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота и изучение их роли при комплексной оценке особенностей проявления болезни в современных условиях ведения молочного животноводства, в том числе в аспекте смешанных инфекций, протекающих с участием других вирусов и условно-патогенных бактерий.

Для достижения указанной цели были поставлены задачи:

1. Определить и отработать оптимальные параметры выделения, типиро-вания и культивирования PCB КРС в различных культурах клеток с целью получения антигена, а также - изготовить и испытать эффективность экспериментальных серий эритроцитарного диапностикума в РНГА для выявления антител к вирусу.

2. Изучить пригодность ОТ-ПЦР для типирования вируса в лабораторных условиях, определить ее значение в диагностике болезни у крупного рогатого скота, выяснении роли вируса в этиологии массовых респираторных болезней, а также выявлении наиболее восприимчивых половозрастных групп животных в молочных хозяйствах различного профиля, с учетом наличия импортного и местного скота.

3. С использованием серологического и молекулярного методов исследований провести комплексный анализ особенностей проявления респираторно-синцитиальной инфекции в современных условиях при различных эпизоотических и хозяйственных ситуациях, в том числе в ассоциации с другими вирусными и бактериальными агентами.

Научная новизна. Выделен штамм вируса К-18, депонированный в коллекции микроорганизмов ФГУ ГНЦ вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора под наименованием «Штамм вируса респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота К-18, V-406». Подана заявка на получение патента на изобретение РФ № №2010134476 от 17.08.2010 г. «Метод первичной изоляции штаммов вируса респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота, штамм вируса Bovine Respiratory Syncitial Virus для изготовления диагностических препаратов».

Новизной обладают данные по изучению чувствительности первично-трипсинизированных и перевиваемых (гомологичных и гетерологичных) линий культур клеток к PCB КРС. Подобраны и рекомендованы для практического использования наиболее чувствительные культуры клеток. Определены оптимальные условия культивирования, обеспечивающие максимальное накопление вируса. Показана чувствительность к вирусу новой перевиваемой линии культуры клеток ТЭБ, рекомендованной для его выделения из проб биоматериала от животных.

бляшкообразующих единиц (БОЕ) и фондообразующих единиц (ФОБ); цито-морфологические исследования и электронная микроскопия. Установлены сроки хранения вируссодержащей суспензии и выделенной РНК вируса при различных температурных режимах. Изучена возможность дальнейшего использования штаммов вируса РС-Б и К-18 для изготовления эритроцитарного диагно-стикума. Показано, что чувствительность культур клеток к вирусу имеет «штаммовую» зависимость. Разработан лабораторный регламент культивирования вируса с целью изготовления специфического эритроцитарного антигена для серологической диагностики респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота, овец и коз в РИГА.

С помощью серологических и молекулярных методов исследований показано широкое распространение РСИ КРС в Российской Федерации, а также в хозяйствах региона Сибири с интенсивным типом ведения молочного животноводства. При помощи ОТ-ПЦР выявлены наиболее восприимчивые к инфицированию вирусом половозрастные группы животных. Выявлены особенности эпизоотической ситуации по РСИ КРС, а также смешанным вирусно-бактериальным болезням в условиях промышленного молочного животноводства Сибири с наличием или отсутствием импортированного скота. Изучена частота проявления болезни в зависимости от наличия сопутствующих вирусных инфекций (инфекционный ринотрахеит, вирусная диарея, аденовирусная инфекция и других), а также от некоторых эпизоотологических и хозяйственных факторов. Впервые показана зависимость частоты инцидентности болезни в крупных молочных хозяйствах от уровня серопозитивности и наличия животных, персистентно инфицированных вирусом ВД-БС КРС. Выявлены и изучены ассоциации вирусов и бактерий, возникающие при вспышках массовых респираторных болезней, протекающих у крупного рогатого скота с участием PCB КРС. Изучена частота выявления вируса в моноварианте и в ассоциациях с бактериями семейства Pasteurellacceae.

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные результаты создают перспективы использования серологического и вирусологического методов диагностики РСИ КРС в производственных условиях с целью объективной комплексной оценки эпизоотической ситуации и для оптимизации противоэпизоотических мероприятий в хозяйствах с интенсивным типом ведения животноводства, в том числе решении вопроса о специфической профилактике болезни.

Кроме того, они расширяют научные знания относительно спектра чувствительных культур клеток к PCB КРС, биологических свойств и роли вируса в этиологии респираторных болезней крупного рогатого скота на крупных молочных комплексах. Комплекс диагностических методов исследований может использоваться также при дальнейшем изучении эпизоотической ситуации, патогенеза РСИ КРС и смешанных вирусных и вирусно-бактериальных инфекций, протекающих по синергетическому типу.

Внедрение полученных результатов. Материалы диссертации использованы при разработке научно-методических рекомендаций и положений:

- «Респираторно-синцитиальная инфекция крупного рогатого скота», утвержденных подсекцией "Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока" отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 1 от 26 января 2010 г.).

- «Вирусные и вирусно-бактериальные респираторные болезни молодняка крупного рогатого скота», утвержденных научно-техническим советом Федерального государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Красноярский государственный аграрный университет" (протокол № 2 от 14 декабря 2010 г.).

- «Стратегия общих и специальных мероприятий при респираторных болезнях молодняка крупного рогатого скота вирусно-бактериальной природы», утвержденных научно-техническим советом Федерального государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Красноярский государственный аграрный университет" (протокол № 2 от 14 декабря 2010 г.).

- «Методы молекулярной биологии и их использование в диагностике вирусных болезней крупного рогатого скота», утвержденных подсекцией "Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока" отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 1 от 11 февраля 2011 г.).

- «Индикация и идентификация респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота в культурах клеток», утвержденных подсекцией "Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока" отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 1 от 11 февраля 2011 г.).

- «Профилактика и лечение вирусных респираторных болезней молодняка крупного рогатого скота", утвержденных научно-техническим советом Федерального государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Красноярский государственный аграрный университет" (протокол № 4 от 20 апреля 2011 г.).

Основные положения диссертационной работы использованы при разработке научно-технической документации на:

1. Тест-систему для серологической диагностики респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота, овец и коз в РИГА (ТУ-10-19-162-91).

2. Тест-систему для выявления вируса респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции» (Свидетельство о Госрелистрации № ПВР-1-8.9/02499).

ГАУ «Наука - сельскохозяйственному производству», Красноярск, 1995; XI Международном симпозиуме «Реконструкция гомеостаза», Красноярск, 1998; «Актуальные проблемы ветеринарного обеспечения животноводства Сибири», Новосибирск, 2006; Международной школе ~ конференции «Социально-экологические проблемы природопользования в Центральной Сибири», Красноярск, 2008; Всероссийской научно-практической конференции ФГОУ ВПО КрасГАУ «Инновации в науке и образовании: опыт, проблемы, перспективы развития», Красноярск, 2009; Межрегионарной научно-практической конференции «Аграрно-экономическая наука республики Тыва: основные результаты и перспективы», Кызыл, 2009; Международной конференции «Проблемы современной аграрной науки» ФГОУ ВПО КрасГАУ, Красноярск, 2009; Международной конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», посвященной 40-летию ВНИТИБП, Московская область, Щелковский район, поселок Биокомбината, ВНИТИБП, 2009; Международной научно-практической конференции «Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития», Саратов, 2010; Международной научно-практической конференции «Современные научно-практические достижения в ветеринарии», Киров, 2010; IV Международной конференции молодых ученых «Новейшие направления развития аграрной науки в работах молодых ученых», Новосибирская область, п. Краснообск, 2010; Всероссийской очно-заочной научно-практической конференции «Инновация в науке и образовании: опыт, проблемы, перспективы развития», Красноярск, 2010; Международной научно-практической конференции «Научные основы улучшения ветеринарного благополучия и продуктивности сельскохозяйственных животных», Кызыл, 2010; XIII Международной научно-практической конференции «Аграрная наука -сельскохозяйственному производству Монголии, Сибири и Казахстана», Ула-анбаатар, 2010; Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы экономического развития и обеспечения безопасности в области ветеринарии», Троицк, 2010; Международной заочной научной конференции «Проблемы современной аграрной науки», Красноярск, 2010; Международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию со дня основания Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока «Актуальные вопросы ветеринарной медицины Сибири», Новосибирская область, п. Краснообск, 2010; VII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика -2010», Москва, 2010.

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 47 научных работ, в том числе 20 - в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки Российской Федерации («Ветеринария», «Сибирский вестник сельскохозяйственной науки», «Вестник КрасГАУ», «Достижения науки и техники АПК», «Аграрный вестник Урала», «Сельскохозяйственная биология»).

водов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 36 таблицами и 33 рисунками. Список литературы включает 486 источников, из них 135 отечественных и 351 зарубежных авторов.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Результаты разработки и изучения эффективности серологического и молекулярного методов диагностики РСИ КРС в экспериментальных и производственных условиях;

2. Эффективность усовершенствованных методов диагностики РСИ КРС при комплексной оценке особенностей проявления болезни в различных эпизоотических и хозяйственных условиях, в том числе в ассоциациях с другими вирусами и условно-патогенными бактериями в хозяйствах региона Сибири с интенсивным типом ведения молочного животноводства с наличием импортного скота и без него.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы

Работа выполнена в лаборатории биотехнологии-диагностический центр ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии и на кафедре эпизоотологии и паразитологии Института прикладной биотехнологии и ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет» в 1988-2011 гг. Отдельные разделы диссертации выполнены совместно с сотрудниками проблемной лаборатории ветеринарной вирусологии ФГОУ ВПО Московской академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина.

Вирус. В опытах использовали штаммы РС-Б, полученный из БелНИИЭВ им. С.Н. Вышелесского, и К-18, выделенный и охарактеризованный нами.

Культуры клеток. Для выделения, адаптации и крупномасштабного культивирования вируса использовали 18 культур клеток различного происхождения. В качестве ростовой использовали питательную среду Игла MEM с однократным набором аминокислот и витаминов, 0,06% L-глутамина, 100мкг/мл канамицина. Клетки культивировали при 37°С в условиях 5% С02. В качестве ростового фактора добавляли 5-10% эмбриональной сыворотки крови (HyClone, лот №ASA28574), тестированной на наличие вируса ВД-БС КРС и антител к нему. В качестве поддерживающей использовали ту же среду с 2% сыворотки.

При выращивании культур клеток и для культивирования вируса использовали 0,25% раствор трипсина, 0,01% раствор химопсина в 0,02% растворе Версена, диметилсульфоксид (ДМСО), ДЭАЭ - декстран, дрожжевой экстракт (ДЭ), фитогемагглютинин (ФГА), коммерческий 7,5% раствор бикарбоната натрия.

Реакцию нейтрализации проводили микрометодом с использованием наиболее чувствительных культур клеток. Инфекционную активность вируса определяли титрованием в чувствительной культуре клеток по ЦПД: в пробирочных культурах клеток и микрометодом; титр рассчитывали по методу Reed и Muencn (1938) и выражали в ТЩ^о/^,. Использовали также методы бляшек (БОЕ) по ГГрингл К. (1988) и окрашенных фокусов по Calnek В. et al. (1972); титр выражали в БОЕ/мл и ФОЕ/мл.

Электронная микроскопия. Образцы культурального и концентрированного очищенного вируса просматривали на электронном микроскопе JEM-100 CX-II совместно со ст. науч. сотр., канд. биол. наук ФГУ ВГНКИ ветпрепа-ратов Россельхознадзора Ю.И. Могильным Препараты готовили по методу негативного контрастирования с применением 2%-ного водного раствора фос-форно-вольфрамовой кислоты (рН 7,0).

Препараты для цигоморфологического исследования готовили из пробирочных культур клеток целлоидиновым методом и окрашивали гематоксилин-эозином по методу Волковой О.В., Елецкого Ю.К. (1971).

Эритроцитарный диагностикум готовили по методу Л. Денер. и др. (1976), H. Martin (1983) в нашей модификации. Полученные препараты использовали для серодиагностики РСИ КРС, овец и коз в реакции непрямой гемагг-лютинации (РИГА).

Для получения гипериммунных сывороток к РСВ КРС использовали белых мышей линии BALB/c массой 20-30 г и морских свинок массой 300-350 г. Гипериммунизацию животных проводили путем введения культуральной ви-руссодержащей суспензии, а также концентрированного и очищенного по методу Trudel M. (1986) вируса интраназально с учетом схемы, предложенной Астаховой JI.H. и Брайнингер М.Г. (1976). Дополнительно использовали баранов и кроликов.

Вирусологические и молекулярные исследования. При изучении распространения РСИ КРС использовали результаты собственных исследований. Дополнительно анализу были подвергнуты результаты серологических, вирусологических и бактериологические исследований, проведенных в ФГУ Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория (ЦНМВЛ), ГУ Тюменская областная ветеринарная лаборатория, ФГУ Новосибирская межобластная ветеринарная лаборатория, КГУ Алтайская ветеринарная лаборатория, КГУ Красноярская краевая ветеринарная лаборатория, ФГУ Иркутская межобластная ветеринарная лаборатория, РГУ Хакасская ветеринарная лаборатория, проведенных в 1991-2010 гг.

При анализе материалов по распространению инфекционного ринотра-хеита и вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота использовали результаты вирусологических исследований, предусмотренные Стандартом МЭБ (OIE Manual, Manual of Standarts //Chapter 2.3.5., 2000; Chapter 2.Ю.6., 2004), а также полученные при помощи ПЦР-тест-систем на основе ПЦР для диагностики ИРТ, ВД-БС, респираторно-синцитиальной инфекции (РСИ), разработанных в ГНУ ИЭВСиДВ Россельхозакадемии: Свидетельства о

Госрегистрации №№ ПВР-1-2.6/01845; ПВР-1-8.9/02498 и ПВР-1-8.9/02499. При исследовании на хламидиоз использовали тест-систему «Хлаком» производства ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора.

Биоматериал. Выделение вируса проводили из проб носовых выделений, трахеального, бронхиального экссудатов, бронхов и легких больных и вынужденно убитых с диагностической целью животных, подозреваемых в инфицировании вирусом из нескольких областей Сибири.

Для доставки биоматериала использовали 3 метода. В двух - пробы помещали в пластиковые контейнеры и транспортировали в лабораторию в охлажденном виде на льду или в замороженном состоянии. В третьем случае их доставляли в пластиковых пробирках с транспортной средой в течение не более 24 часов с момента отбора.

В лаборатории пробы в день доставки гомогенизировали, разводили 1:10 питательной средой Игла MEM, центрифугировали, а надосадочную жидкость фильтровали через фильтры диаметром 0,22 -|лш. Полученные суспензии исследовали методом ОТ-ПЦР. Пробы, давшие положительный результат, использовали для выделения вируса. Для этого их в объеме 0,1 мл вносили в монослой культур клеток, выращенных микрометодом в 24-луночных пластиковых планшетах или 25 см3 матрасах.

Культивирование инфицированных культур клеток проводили при 20-37°С в атмосфере 5 ±0,5% С02 в течение 5-8 дней. Всего проводили не менее 10 «слепых» пассажей до наступления видимого цитопатического действия (ЦПД) вируса.

Для заражения культур клеток использовали три метода: с адсорбцией вируссодержащей суспензии в течение часа при +20 °С и последующим внесением поддерживающей среды с 2% эмбриональной сыворотки крови, с предварительным внесением в монослой культуры клеток 1% диметилсульфоксида (ДМСО) и адсорбцией вируссодержащей суспензии в течение часа при +20 °С и с внесением вируса без адсорбции.

Идентификация цитопатических агентов. Вируссодержащую суспензию каждого пассажа исследовали в ОТ-ПЦР на наличие РНК вируса. Для выявления синцитиев под световым микроскопом просматривали фиксированные и окрашенные по Романовскому-Гимза препараты инфицированных культур клеток каждого пассажа (об. 40х, ок. 10х), выращенных в пробирках на покровных стеклах. После образования монослоя клеток его трижды отмывали раствором Хенкса и вносили вирус из расчета 1-2 ТЦ Д50на клетку и добавляли питательную среду. Покровные стекла с монослоем культуры клеток извлекали из пробирок через 24;48;72;96 и 120 часов после заражения, промывали теплым раствором Хенкса и просушивали под струей теплого воздуха.

После тридцатиминутной фиксации в смеси этилового спирта и ледяной уксусной кислоты (3:1) их промывали 70° этиловым спиртом, просушивали и окрашивали, доводя рН красителя до 7,0 при помощи 1% раствора бикарбоната натрия. Препараты погружали в краситель на 60-90 минут, затем тщательно ополаскивали теплой дистиллированной водой и высушивали.

Гемагглютинирующие и гемадсорбирующие свойства изучали по общепринятым методикам.

Изучение эпизоотической ситуации по респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота. Исследования проводили на крупных молочных комплексах, средних и мелких молочно-товарных фермах в 16 административных регионах России, в том числе двух республиках, расположенных на территории Сибири, а также Республики Казахстан среди местного и импортированного скота.

Математические расчеты. Статистическую обработку проводили общепринятыми методами (И.П. Ашмарин и соавт., 1962). Достоверность результатов подтверждали с помощью критерия Стьюдента. Результаты считали достоверными при Р<0,05. Для обработки данных использовали программу «Microsoft Excel», входящую в пакет программ «Microsoft Office 7.0».

Личное участие автора. Теоретический анализ, обобщение результатов, экспериментальные исследования выполнены автором самостоятельно. Участие соавторов отражено в совместно изданных научных статьях. В выполнении отдельных этапов работы принимали участие сотрудники ГНУ ИЭВСиДВ Рос-сельхозакадемии: д-р биол. наук, проф. Т.И. Глотова, ст. науч. сотр., канд. биол. наук О.В. Кунгурцева, ст. науч. сотр., канд. ветеринар, наук С.В. Котенева и А.В. Нефедченко, аспирант К.В. Войтова, а также ст. науч. сотр. проблемной лаборатории ветеринарной вирусологии ФГОУ ВПО Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина JI.M. Акбаева, которым автор выражает глубокую благодарность.

2.2. Результаты исследований 2.2.1. Параметры выделения респираторно-синцитнального вируса в культурах клеток

На начальном этапе предварительному исследованию в ОТ-ПЦР подвергли 190 проб биоматериала, из них выявили положительных 38, что составило 20%. В первично-трипсинизированной культуре клеток ТБ из проб легких, бронхов и трахеального экссудата, отобранных от животных на ранней стадии развития клинических признаков, выделили 6 изолятов вируса.

Наиболее эффективным было выделение вируса при условии транспорта-ровки проб биоматериала не дольше 24 часов с момента отбора, в охлажденном состоянии на льду или в транспортной среде, заражения двухсуточного монослоя клеток в день доставки, избегая заморозки и хранения при низких температурах.

Дальнейшую работу проводили с изолятом К-18, выделенным из легких 3-месячного теленка с признаками интерстициальной бронхопневмонии. В связи с невозможностью получения культуры клеток ТБ, его адаптацию с целью получения стабильного ЦПД и «урожая» проводили в перевиваемых линиях культур клеток.

Наиболее чувствительной к вирусу оказалась перевиваемая линия куль-

туры клеток ТЭБ. В ней видимое ЦПД регистрировали после 8 «слепых» пассажей. Оно проявлялось на четвертые сутки девятого пассажа в виде образования характерных синцитиев. В окрашенных препаратах наблюдали гигантские клетки, содержащие от 4-х до 10-ти ядер, формирование которых начиналось уже с 24-72 часов после заражения до наступления видимого ЦПД. Результаты ОТ-ПЦР были положительными на протяжении всех пассажей. Титр вируса на уровне девятого пассажа составил 10 ,5ТЦЦ5о/м. Наиболее эффективным способом оказалось заражение монослоя клеток с часовой адсорбцией и добавлением 2% фетальной сыворотки КРС при 37°С.

Выделенный изолят не обладал гемагглютинирующими и гемадсорби-рующими свойствами в отношении эритроцитов морской свинки.

При электронной микроскопии концентрированного препарата вируса девятого пассажа выявили филаментозные вирусные частицы размером 160 нанометров, однако часть из них была повреждена.

Адаптировать вирус к другим перевиваемым линиям культур клеток при данной методике заражения не удалось. Линии Vero, FLK, Taurus, MDBK, FBN, FBTR, KCT, T-l, не поддерживали репликацию вируса, и результаты выделения в них были отрицательными. Однако чувствительность их к вирусу была различной. Так, например, результаты ОТ-ПЦР были положительными на протяжении 2 «слепых» пассажей в культурах клеток FLK, MDBK, КСТ и Vero, после чего вирус не выявляли.

В результате изолят был депонирован нами в коллекции микроорганизмов ФГУ Государственного научного центра вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора под наименованием «Штамм вируса респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота К-18, V-406».

2.2.1.1. Спектр чувствительных культур клеток к штаммам респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота

При выборе чувствительной клеточной системы использовали 18 разных культур клеток, учитывая время проявления ЦПД и накопление вируса в пяти серийных пассажах. Исходный титр вируса при заражении составлял 1,5-3,0 lg ТЩЬо/мл- Культивирование осуществляли при 37°С в стационарных условиях. Результаты представлены в таблице 1.

Чувствительность первично-трипсшшзированных культур клеток к штаммам РС-Б и К-18. В результате установили, что штаммы PCB КРС РС-Б и К-18 репродуцировались в культурах клеток: ТЭК, ПЭК, ЛЭК, ТБ и их субкультурах. Титры вируса были выше в первично-трипсинизированных культурах клеток ЛЭК, ПЭК и ТБ, чем в их субкультурах и ТЭК.

Чувствительность перевиваемых клеточных линий к штаммам РС-Б и К-18. Из перевиваемых культур клеток крупного рогатого скота нечувствительными к штамму РС-Б оказались четыре (FBG, FBN, FBTR, КСТ и CEF). Наибольшую чувствительность проявила линия T-I, в которой на протяжении 5

пассажей цитопатическое действие вируса было наиболее стабильным. Клеточная линия овечьего происхождения FLK также поддерживала репликацию этого штамма, титр которого в ней составил 3,74±0,12 lg ТЦЦ50/Ш. Линии культур клеток Vero, FLK, Taurus, MDBK, FBN, FBTR, KCT, T-l не поддерживали репликацию штамма К-18 PCB КРС.

Таблица I - Спектр чувствительных культур клеток к двум штаммам вируса РСИ КРС

(п = 3; Р < 0,05)

№ п/п Вид клеточной культуры Наименование культуры клеток Сроки наступления ЦПД, сутки после заражения штаммом PCB КРС Титр вируса в lg ТЦ Д50/МЛ (M±m)

РС-Б К-18 РС-Б К-18

1 Первично -трипсинизи-рованные ТЭК 3-4 4-5 2,89±0,20 2,92±0,07

2 пэк 4-5 3-5 3,20±0Д5 3,58±0.07

3 ЛЭК 3-5 4-5 3,36±0,17 4,83±0,07

4 ТБ

5 Субкультуры ПЭК 4-5 3-4 2,87±0,07 2,83±0,07

6 ЛЭК 3-5 3-6 2,95±0,05 2,79±0,03

7 ТБ

8 Перевиваемые линии FBG - - - -

9 FBN

10 FBTR

11 MDBK 4-6 - 1,65±0,10 -

12 Т-1 2-3 3-4 3,63±0,П 2,92±0,07

13 ТЭБ 3-5 3-5 3,17±0,07 4,58±0,07

14 Taurus 1,75±0,12 1,75±0,12

15 Vero 2-3 - 0,75±0,38 -

16 FLK - 3,74±0,12 -

17 CEF - - -

18 KCT - - - -

Результаты исследований показали, что чувствительность культур клеток к вирусу имеет «штаммовую» зависимость, т.к. спектр чувствительных культур клеток для двух штаммов вируса оказался различным. В связи с этим дальнейшую работу проводили с использованием первично трипсинизированной культуры клеток ЛЭК и перевиваемой линии РЬК.

2.2.1.2. Оптимизация параметров культивирования вируса в чувствительных клеточных системах

Изучение оптимальных условий культивирования вируса проводили по следующим параметрам: метод (стационарный и роллерный), температура культивирования в атмосфере 5% С02 при 33-37°С; возраст культуры клеток

• (2-7 суток); время адсорбции вируссодержащей суспензии (I-1,5-2 ч), множественность заражения (0,0001-0,1 ТЦДго/юкгш), рН питательной среды (6,0-7,8); вид сыворотки в под держивающей среде (крупного рогатого скота, телят, эмбриона коровы, северных оленей, цыплят) и ее процентное содержание (2, 5 и 10%%).

В результате опытов изучили динамику накопления вируса, а также влияние некоторых биологических и химических веществ (ДЭ, ФГА, трипсин, ДМС0, ДЭАЭ-декстран) на титр вируса при культивировании. Была проведена адаптация штамма к чувствительным культурам клеток.

В результате серии опытов установили, что оптимальными условиями для накопления штамма РС-Б вируса являлись: использование 3-5-суточной культуры клеток ЛЭК и Л5Э и 3-суточной БЬК с предварительным 3-кратным отмыванием монослоя от ростовой среды, в состав которой входит коммерческая сыворотка крови крупного рогатого скота или телят (10%),

Оптимальными условиями культивирования штамма К-18 были: использование 2-3-суточных культур клеток ТЭБ и ТБ с предварительным 3-кратным отмыванием монослоя клеток от ростовой среды. При использовании сыворотки эмбриона коровы производства фирмы «Нус1опе» необходимость отмывания монослоя клеток отпадала.

В процессе адаптации штаммов вируса к различным культурам клеток установили, что в 30 сериях коммерческих сывороток взрослого крупного рогатого скота и телят, используемых для культивирования культур клеток, присутствовали антитела к вирусу в титрах 4-7 отрицательно влияющие на сроки появления и характер ЦПД вируса и его репродукцию.

Множественность заражения составила 0,1 ТЦЦ5о/кзетха; время адсорбции 1,5 ч с использованием питательной среды Игла МЕМ, Игла и ЯРМ1 -1640 (2:1) с добавлением 2% фетальной сыворотки крупного рогатого скота, сыворотки северных оленей или сыворотки цыплят при рН 7,4-7,8 с последующим инкубированием в стационарных или роллерных условиях при температуре 37°С.

При данном режиме культивирования максимальное накопление вируса происходило на 6 сутки культивирования в ЛЭК и на 5 сутки в Л5Э и РЬК, а для штамма К-18 - в ТЭБ. Добавление ДЭАЭ-декстрана 50 мкг на 1 мл и ДМСО в 1%-ной концентрации повышало инфекционную активность вируса на 0,84 1§ ТЦЦ5о/шИ 0,52 % ТЦЦ50/МД! соответственно.

В результате адаптации штамма к Л5Э и П5Э к 20-му пассажу титр вируса составлял 4,96±0,03 и 4,95±0,05 ^ ТЦЦ5о/мл, соответственно. С помощью перемежающихся пассажей (1:2) из указанных диплоидных культур клеток провели адаптацию вируса к культурам клеток ЛЭК и БЬК, в которых титр вируса к 10 пассажу достигал 4,82±0,07 и 4,83± 0,04 ^ ТЦД5о/л-„ соответственно. Дальнейшее пассирование вируса в этих культурах клеток не привело к повышению его инфекционной активности.

2.2.2. Эффективность различных методов индикации вируса в инфицированных культурах клеток

В связи с тем, что размножение вируса в культурах клеток не всегда сопровождается развитием видимого цитопатического действия (ЦПД), для его ранней индикации в них использовали методы бляшкообразования (БОЕ), окрашенных фокусов (ФОБ), цитоморфологические исследования (окраска инфицированных культур клеток 0,5%-ным раствором амидового черного на 0,5% -ной уксусной кислоте и выявление синцитиев в окрашенных по Романовскому-Гимза препаратах инфицированных клеток при помощи световой микроскопии), а также ОТ-ПЦР.

Учет результатов проводили в течение 7 суток культивирования вируса. Данные представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Сравнительная эффективность различных методов индикации вируса в инфицированных культурах клеток

Вид культуры клеток Метод индикации вируса Сроки выявления вируса, (сутки) Возможность количественного определения инфекционной активности вируса Специфичность метода, (+; -)

1;1_К, ТЭБ БОЕ 3-7 + +

ФОЕ 3-7 ± ±

Цитоморфологический 2-7 - ±

ОТ-ПЦР 1-7 + +

Из данных таблицы 2 видно, что наиболее точным методом титрования явился метод бляшек. Однако он более трудоемок, требует тщательного подбора ингредиентов и определенного навыка в постановке.

Фокусы цитопатического действия вируса в культуре клеток, различаемые микроскопически как скопления клеток, образовывались на 3-4 сутки после ее заражения и были видимыми на 5-8 день. Однако если деструкция в центре фокусов была слабо выражена, их учет без предварительной окраски затруднялся. Поэтому для выявления фокусов визуально необходимо дополнительно использовать окраску инфицированных клеточных культур 0,5%-ным раствором амидового черного на 0,5% -ной уксусной кислоте.

В фиксированных и окрашенных клеточных культурах фокусы ЦПД вируса были отчетливо видны и визуально. Окраска их не изменялась при длительном хранении, что значительно облегчало учет и анализ полученных результатов.

Далее необходимо было установить продолжительность инкубации вируса при окраске инфицированных культур для визуального учета фокусов. При окрашивании клеточных культур через 3-4 суток после заражения вирусом, различать и подсчитывать фокусы визуально было трудно. Окрашивание инфицированной культуры клеток БЬК на 5-6 сутки инкубирования приводило к

увеличению размеров фокусов и возможности их визуального подсчета, а на 78 сутки приводило к увеличению размеров фокусов, но и образованию вторичных фокусов или слиянию первичных. Поэтому окраску зараженных культур клеток проводили на 5-6 сутки инкубирования. Кроме того, указанный срок был признан оптимальным для накопления вируса, что было установлено в предыдущих исследованиях.

Результаты сравнительного определения инфекционной активности вируса штамма РС-Б в культуре клеток РЬК представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Сравнительное титрование штамма РС-Б респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота в культуре клеток Н.К (п=3)

Методы титрования Инфекционностъ вируса

М± ш Р

Титрование в пробирочной монослойной культуре клеток Титрование по ФОЕ в 50 мл флаконах 3,96± 0,021$ ТЦЦ 50/ил 4,40± 0,06 х Ю4,0 ФОЕ/ мл <0,001 <0,001

В результате метод титрования по ФОБ оказался несколько чувствительнее метода титрования по ЦПД в пробирках и простым в учете. Наиболее эффективными методами контроля репродукции вируса в инфицированных культурах клеток оказались ОТ-ПЦР и методы титрования по БОЕ и ФОБ, однако результаты ОТ-ПЦР были положительными в более ранние сроки.

При электронной микроскопии проб культурального, концентрированного и очищенного вирусов обнаруживали характерные для РС-вируса вирионы, морфологически представляющие собой округлые или полиморфные частицы (80-160 Нм), наружная мембрана которых покрыта отростками.

Изучение морфологических изменений в зараженных культурах клеток РЬК и ТЭБ проводили также на примере двух штаммов вируса - РС-Б и К-18. Размножение вируса сопровождалось образованием цитоплазматических включений, а также синцитиев различного размера, содержащих от 5 до 10 ядер. Ци-томорфологический метод позволял выявлять вирус в культуре клеток в затруднительных случаях учета ЦПД световым микроскопированием, обнаруживать его в клетках на ранних стадиях репродукции, а также подтверждать специфичность цитопатогенного действия, однако по срокам постановки и специфичности уступал ОТ-ПЦР.

2.2.3. Параметры хранения вируссодержащей суспензии в лабораторных условиях

Учитывая высокую чувствительность вируса к замораживанию и оттаиванию, изучали сроки его сохранности при различных температурных режимах. Результаты показали, что хранение культуральной вируссодержащей жидкости при температуре 4°С снижает инфекционную активность вируса на 3,0 в те-

чение 2 месяцев, при минус 25°С на 3,5 lg - в течение 6 месяцев, при минус 70° на 2,5 lg в течение 7 месяцев. Хранение лиофилизированного вируса при минус 25°С в течение 12 месяцев снижало его титр на 1 lg ТЦД5о/мл- Таким образом, оптимальными условиями хранения лиофилизированного вируса (штаммы РС-Б и К-18) являлись температура минус 25°С, а нативного - минус 70°С.

Хранение вируссодержащих суспензий, полученных из проб внутренних органов животных, при минус 18°С обеспечивало сохранность материала из слизистой оболочки трахеи в течение двух месяцев, носовых выделений и бронхов - 4-х месяцев, бронхиального экссудата - 6-ти месяцев, а легких -12 месяцев. Оптимальным режимом хранения выделенной РНК вируса являлся минус 18°С в течение 2-10 месяцев, в зависимости от вида исследуемого материала. Наиболее пригодным материалом для исследований в ОТ-ПЦР являлись пробы легких, бронхиального экссудата и бронхов.

2.2.4. Разработка эритроцитарного диагностикума для серологической диагностики респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота, овец и коз методом РНГА

При разработке специфического эритроцитарного антигена для серологической диагностики болезни использовали методы Денера и Martin в авторской модификации. Технология изготовления антигена изложена в НТД на «Набор для серодиагностики респираторно-синцитиальной инфекции (РС-инфекции) крупного рогатого скота, овец и коз» (ТУ-10-19-162-91). Данные по сравнительной активности эритроцитарных антигенов представлены в таблице 4.

Таблица 4 - Сравнительная активность эритроцитарных антигенов, полученных при ре-

№ п/п Культура клеток Титр вируса, lg ТЦД50/МЛ M±m; Р<0,05 Количество серий Активность антигена со специфической сывороткой к PCB в титрах, lfe, M ±m; Р<0,05

1 MDBK 1,65±0,10 12 4,5±0,25

2 ДЛЭК 2,14±0,21 2 5,5±0,25

3 элэк 2,17±0,4б 3 5,67±0,24

4 ТБ 3,04±0,04 2 6,5±0,25

5 ПЭК 3,20±0,15 3 6,67±0^24

6 Т-1 3,78±0,11 29 7,52±0,12

7 46/47 3,64±0,11 2 6,5±0,25

8 ЛЭК 4,75±0,14 19 7,73±0,11

9 FLK 4,76±0,13 18 8,55±0,09

10 П5Э 4,95±0,05 7 9,36±0,12

И Л5Э 4,9б±0,03 16 9,69±0,14

12 пт 3,74±0,11 13 7,38±0,09

Всего серий 126

Из данных таблицы 4 следует, что активность эритроцитарных антигенов зависела от титра вируса, который Использовали для их получения. По мере повышения титра вируса повышался и титр антигена, что было связано с видом

культуры клеток, в которой размножали вирус. Так, в культуре клеток 46/47 титр вируса составил 3,64±0,11 ^ ТЦД 50/1«, а титр эритроцитарного антигена 6,5±0,25. В культуре клеток ЛЭК титр вируса составил 4,75±0,14 ^ ТЦЦ 50/мл, в РЬК - 4,76±0,13 ТЦЦ 5о/«, П5Э -4,95±0,05 1ё ТЦД 50ш, Л5Э -4,96±0,03 1ё ТЦД 50/мл, а активность антигена в разведениях - 7,73±0,11; 8,55±0,09; 9,36±0,12 и 9,69±0,14 ^2, соответственно.

После адаптации штамма к перевиваемым линиям культур клеток Т-1 и ПТ его титр достигал 3,78±0,11 ^ ТЦД 50/мл и 3,74±0,11 ^ ТЦД 50/мл, а активность эритроцитарного антигена 7,52±0,12 и 7,38±0,09

Таким образом, было показано, что наиболее пригодными для репродукции штамма РС-Б с целью получения эритроцитарного антигена оказались диплоидные клетки легких и почки эмбриона коровы, несколько уступали им перевиваемая линия почки эмбриона овцы и первичная культура легкого эмбриона коровы и перевиваемые линии почка теленка (Т-1) и почка теленка (ПТ).

Из вируссодержащей суспензии, полученной в этих кулмурах клеток, готовили наиболее активные эритроцитарные антигены, титры которых со специфической к РС-вирусу сывороткой составляли от 7,92±0,22 до 10,15±0,09

Совместно с Л.М. Акбаевой изготовили 126 серий эритроцитарного антигена, из них 96 использовали для выявления антител к вирусу в сыворотках крови крупного рогатого скота, овец и коз в РИГА. Полученные антигены сохраняли активность в течение 12 месяцев со дня приготовления при хранении в сухом месте и температуре 2-10°С.

С целью получения положительного контроля в РИГА получали специфические гипериммунные сыворотаи к штамму РС-Б РСВ КРС с использованием мышей, морских свинок, баранов и кроликов. Результаты, опытов показали, что штамм РС-Б РС-вируса крупного рогатого скота не обладает выраженной антигенной активностью для белых мышей и морских свинок при использованном способе иммунизации. На его введение у животных синтезировались ви-руснейтрализующие антитела в титре 2,22 ±0,11 1я2. Для иммунизации баранов и кроликов использовали концентрированный препарат РСВ КРС с адьювантом Фрейнда, на который получили сыворотки крови с титром в РН у баранов 6,08±0,09 У кроликов 5,38±0,16 которые и использовали в дальнейшей работе.

2.2.5. Распространение РСИ КРС в хозяйствах Российской Федерации по результатам серологических исследований

Исследованию подвергли 3623 пробы сыворотки крови от крупного рогатого скота различных половозрастных групп из 16 регионов Российской Федерации. Результаты показали, что РСИ КРС широко распространена во всех обследованных областях и краях Российской Федерации. Наибольшее распространение она получила в регионе 12 (94,9%), 13 (93,2%), 7 (87,2%) и 9 (86,6%), 11 (83,3%), 10 (83,2%). В других регионах инфицированность животных находилась в пределах 52,6% - 81,8%. Наименьшее количество положительных проб

выявляли от животных из регионов 1 и 2: 34,7% и 15,1%, соответственно.

Нами не установлено различий в географическом распространении болезни среди крупного рогатого скота различных возрастов. Наибольшее количество серопозитивных к вирусу животных выявили в крупных молочных хозяйствах с высокой концентрацией и молочной продуктивностью коров, куда вводились новые животные. Инфицированность крупного рогатого скота в средних и мелких хозяйствах была ниже, однако при повышении молочной продуктивности она возрастала, а вместе с ней - риск возникновения респираторных болезней, протекающих с участием данного вируса. Большое значение имела плотность животных на единицу площади, а также ввод вирусоносителей в стадо.

Антитела к вирусу чаще выявляли у молодняка крупного рогатого скота в возрасте: 4-6 месяцев (71,9%); 2-4 месяца (69,2%); 6-9 месяцев (55,9%); взрослых животных (50,8%) и до 1,5 месяцев (36,8%).

При ретроспективных исследованиях сероконверсию к вирусу, свидетельствующую о его роли в развитии респираторной патологии, выявляли у телят в возрасте: 4-6 месяцев в 52,6% случаев; 7-9 месяцев в 50,0%; 3-4 месяца в 37,5%; 6-8 месяцев - 25,0%; 2-3 месяца - 6,7%; 1 месяц - 4,0% случаев.

Таблица 5 - Результаты серологических исследований крупного рогатого скота на респираторно-синцитиальную инфекцию в различных регионах РФ

Регион Исследовано проб всего Выявлено положительных

всего % от числа исследованных

1 533 185 34,71

2 378 57 15,08

3 165 135 81,82

4 57 30 52,63

5 233 130 55,79

6 32 25 78,13

7 179 156 87,15

8 139 108 77,70

9 575 498 86,61

10 196 163 83,16

11 215 179 83,26

12 237 225 94,94

13 44 41 93,18

14 239 140 58,58

15 351 191 54,42

16 50 40 80,00

Всего 3623 2303 63,57

Данные таблицы 5 свидетельствуют о том, что наиболее восприимчивыми к заболеванию респираторно-синцитиальной инфекцией являются телята в возрасте от одного до 6-месячного возраста. В некоторых случаях болезнь может проявляться и у животных старших возрастов.

Наличие циркуляции вируса подтверждено также среди овец и коз. Анти-

тела к вирусу выявляли у 33,01% обследованных овец и 87,76% коз, что может свидетельствовать о межвидовой передаче возбудителя и роли этих животных в эпизоотическом процессе болезни. Полученные результаты свидетельствуют также о возможности применения РИГА для ретроспективной диагностики РС-инфекции крупного рогатого скота, овец и коз.

2.2.6. Особенности эпизоотической ситуации по респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота в современных условиях

2.2.6.1. Распространение и характер проявления РСИ КРС в хозяйствах региона Сибири в зависимости от наличия импортного скота

Характеристика хозяйств. Сопоставляемые хозяйства, несмотря на сходство целого ряда элементов в технологии производства молока, имели существенные различия в системе содержания, кормления, эксплуатации, а также отличались по ряду других хозяйственных признаков. В связи с этим они были разделены на три группы. Первая группа включала шесть крупных молочных комплексов, куда осуществлялся ввоз импортного скота из различных стран, и концентрация и молочная продуктивность животных были высокими (интенсивный способ ведения животноводства: 800 и более дойных коров со среднегодовой молочной продуктивностью около 7000 л молока). Вторая группа: 14 крупных молочных хозяйств аналогичного профиля со среднегодовой продуктивностью от 4000 до 7000 л молока, куда не было ввода животных, поступающих по импорту. Третья насчитывала 9 мелких и средних хозяйств, где концентрация животных и их продуктивность были относительно невысоки (в среднем до 300 дойных коров с продуктивностью не выше 3000-4000 л молока в год), куда новых животных не вводили в течение нескольких лет.

До 2008 г. случаев массовых заболеваний РСИ КРС животных в Сибири не регистрировали в связи с тем, что лабораторные исследования проводились в незначительном объеме. В период с декабря 2007 г. по январь 2008 г. инфекцию установили на молочном комплексе в Иркутской области после завоза нетелей из Канады.

Во все хозяйства первой группы (табл. 6) осуществлялся импорт скота из разных стран. В некоторых случаях животные за 2 недели до отправки были иммунизированы вакциной против РСИ КРС, поэтому уровень их серопозитив-ности к полевому вирусу установить было сложно. В двух хозяйствах импортные животные содержались отдельно, и признаки болезни регистрировались, в основном, у телят до 6 месяцев, рожденных от них (до 80%) и у незначительного количества нетелей и коров до 5 лет. В остальных допускали смешивание местного и импортного скота. Несмотря на хорошие условия кормления и содержания в одном из хозяйств признаки болезни выявили у коров и телят мест-

ной фермы, тогда как импортные нетели не болели. Заболеваемость и отход коров и телят были очень высокими. В других хозяйствах заболеванию были подвержены телята до 6-месячного возраста, рожденные как от импортированных, так и от местных матерей, а также незначительное количество молодых коров. Большой разницы в показателях заболеваемости и падежа импортных и местных телят не выявляли. Клинические признаки болезни у местного скота после контакта с завезенным развивались через 2-5 дней. В одном хозяйстве болели телята в возрасте до 10 дней.

Таблица 6 - Особенности проявления РСИ КРС на крупных молочных комплексах после завоза импортных животных

№ хозяйства Категории восприимчивых животных, (+;-) Сопутствующие инфекции Выявление ля/ наличи версии к ви возбудите-серокон- русу, (+;-)

нетели, коровы телята нетели, коровы телята нетели, коровы телята

1 + + ИРТ, ВД-БС Сальмонеллез, мико-плазмоз +/+ +/+

2 + + ИРТ, ВД-БС, хлами-диоз Диплококковая септицемия, сальмонеллез, -/+ +/+

3 + ВД-БС ВД, ИРТ, ПГ-3, сальмонеллез, диплококковая септицемия +/+ +/+

4 + ВД-БС ВД, ИРТ, ПГ-3, сальмонеллез, диплококковая септицемия Не проводили +/+

5 + + ВД-БС, ИРТ диплококковая септицемия, сальмонеллез +/+

6 + + ВД-БС, ИРТ ИРТ, ВД-БС, диплококковая септицемия, сальмонеллез +/+ +/+

Течение болезни и характер клинических признаков можно было разделить на три группы: сверхострая форма инфекции, сопровождавшаяся угнетением, повышением температуры тела до 42°С, снижением молочной продуктивности у коров, выделением обильной пены из ротовой полости, хрипами, кашлем, конъюнктивитами и быстрой гибелью животных. Такую ситуацию наблюдали в хозяйстве №1 у коров и телят и в хозяйствах №№ 2-4 только у телят до 6-месячного возраста и у незначительного количества молодых коров. Летальность во всех случаях была высокой. На вскрытии регистрировали интер-стициальную пневмонию вплоть до полного разрушения паренхимы, бронхиты, увеличение и геморрагическое воспаление легочных лимфоузлов и легочную или бронхиальную эмфизему. Гибель животных наступала в течение нескольких дней, несмотря на проводимое лечение.

При остром течении у животных регистрировали бронхиты и интерсти-циальную бронхопневмонию. При всех клинических формах течение болезни осложнялось развитием вторичной микрофлоры (пастереллез) с выделением из легких павших и вынужденно убитых животных всех возрастов МаппИеШа Ьаето1уНса и Ра«еиге//д тикоас1а. На вскрытии выявляли петехиальные кровоизлияния на миокарде и фибринозную бронхопневмонию.

В некоторых хозяйствах второй и третьей категорий, неблагополучных по бронхопневмониям, произошло наслоение РСИ КРС на хроническое течение сальмонеллеза и диплококковой септицемии у телят. Кроме этого у коров и телят регистрировали ИРТ и ВД-БС, что было подтверждено вирусологическими и ретроспективными серологическими исследованиями. Однако уровень серо-конверсии к вирусу РСИ в хозяйствах с наличием импортного скота был очень высоким (до 128-кратного), что, на наш взгляд, свидетельствовало о его ведущей роли в этиологии массовых вспышек респираторных болезней. Во всех случаях результаты ОТ-ПЦР были положительными, а от животных различного возраста выделили изоляты вируса.

Субклиническая форма болезни проявлялась у восприимчивых животных в виде слабого респираторного синдрома.

2.2.6.2. Распространение и характер проявления РСИ КРС в хозяйствах Сибири с наличием местного скота

В крупных и мелких хозяйствах второй и третьей групп, куда не вводился импортный скот, клинические признаки болезни регистрировали только у телят в виде острой или субклинической формы инфекции, а ее признаки варьировали от транзитной лихорадки до одышки. Серопозитив-ность к вирусу варьировала от 20 до 70%% у коров и 20-40%% у телят. Поражались органы верхнего, либо одновременно верхнего и нижнего респираторного тракта, сопровождавшиеся повышением температуры тела, брюшным типом дыхания, выделением слюны из ротовой полости, кашлем с серозно-слизистыми выделениями из носа и глаз. При хороших условиях кормления и содержания выздоровление наступало в течение недели, однако переболевшие животные отставали в росте, не давали высоких привесов. Сероконверсию к вирусу устанавливали не у всех животных, однако не всегда удавалось получить парные пробы сыворотки крови от них, поэтому истинную роль вируса в возникновении респираторных болезней в этих хозяйствах установить было трудно. Результаты ОТ-ПЦР были положительными в 8 хозяйствах, однако вирус выделить не удалось.

Зимой 2009 г. болезнь зарегистрировали в 6 закрытых хозяйствах (крупных и мелких), находящихся в разных территориальных зонах одной области, и стационарно неблагополучных по респираторным болезням. Между ними хозяйственных связей не было, как и ввода новых животных из других источников. Серопозитивность скота была несколько выше (в пределах 40-70%% у ко-

ров и 40-60%% у телят), при этом сероконверсию к вирусу установили во всех из них. Геном вируса был выявлен в ОТ-ПЦР. Болезнь проявлялась на всех возрастных группах, но заболеваемость и летальность среди телят были выше. В настоящее время трудно установить причину этих вспышек, но, возможно, что их возникновению способствовали плохие условия содержания и кормления животных. В одном из них возникновению вспышки РСИ КРС предшествовала вакцинация поголовья против ящура. Возможно, что в этих хозяйствах болезнь носила стационарный характер и при воздействии отрицательных факторов внешней среды она проявилась клинически.

Результаты серологических исследований показали, что в настоящее время РСИ КРС имеет широкое распространение в хозяйствах с интенсивным типом ведения животноводства региона Сибири. Однако инфицированность животных по различным административным территориям несколько различается.

Так, серопозитивность животных к вирусу составила в среднем по Тюменской области 66,6%, Новосибирской - 43,8; Омской - 42,8; Иркутской -32,6; Красноярскому краю - 38,4; Республике Хакасия - 30,8%.

По результатам обследования хозяйств Новосибирской области установили, что у 92,6% телят до 30-ти дневного возраста отсутствовали колостраль-ные антитела к вирусу. Серопозитивность телят 1-6-месячного возраста составила 25,5%, а средние титры антител - 2,1±0,33 телят от 6 месяцев и старше - 50,0% (2,4±0,67 Ы, телок - 66,7% (5,2±0,14 ^2), а коров и быков 76,3% (4,5±0,09 Средние титры антител у животных всех половозрастных групп составили 3,02±0,47

Инфицированность животных вирусом была выше в хозяйствах Тюменской области, что, возможно, связано с интенсивным типом ведения животноводства (с высокой молочной продуктивностью и концентрацией животных на единицу площади) и наличием импортного скота.

Серопозитивность телят до 30 дней составила 45,7%, а величина средних титров антител - 1,9±0,42 телят 1-6-месячного возраста - 29,9% (1,81±0,06 1&), телок - 100% (5,4±0,43 Ы, нетелей - 82,6% (5,1±0,02 ^2), коров и быков -86,7% (4,8±0,19 ^.Средние титры антител у животных всех половозрастных групп были равны 3,8±0,43 Высокая инфицированность животных этого региона связана, вероятно, с более активной циркуляцией вируса среди нетелей, завезенных по импорту (нетели-5,1±0,021§2).

Особый интерес представляли три крупных хозяйства Красноярского края, куда не было ввоза импортного скота. Серопозитивность животных всех обследованных категорий составила в среднем 38,4%. В том числе: телят до 30 дней - 34,6Уо (средние титры антител 2,5±0,72 ^2), телят 1-6-месячного возраста 20,4% (1,5±0,03 35,5% телят до 30 дней не имели колостральных антител. Серопозитивность коров достигала 75%, а титры антител к вирусу -7,4±0,21 что было выше, чем у животных этой категории в хозяйствах Новосибирской и Тюменской областей (4,5±0,09 и 4,8±0,19 соответственно). Разница достоверна при Р<0,05.

Титры антител к вирусу у телят до одного месяца были также выше

(2,5±0,72 чем у животных других областей (0,9±0,57 и 1,9±0,42 1&, соответственно). Это можно объяснить тем, что на момент исследований в данных хозяйствах регистрировали вспышки респираторных болезней среди телят до 6-месячного возраста и коров.

Уровень инфицированности животных в Омской области находился в пределах 42,8%. 63,6% телят до 30-ти дневного возраста также не содержали антител к вирусу. Серопозитивность телят 1-6-месячного возраста составила 23,8%, а средние титры антител - 2,2±0,03 1§2, телят от 6 месяцев и старше -40,0% (2,4±0,67 Ы телок - 56,2% (5,2±0,18 Ы, а коров 72,4% (4,5±0,09 1й2). Средние титры антител у животных всех половозрастных групп составили 3,02±0,47

Уровень инфицированности животных в Иркутской области был ниже, чем в других территориальных регионах Сибири, за исключением хозяйств, куда осуществлялся ввоз импортного скота.

Показатели инфицированности животных в Республике Хакасия были низкими, что связано, вероятно, с низкой концентрацией поголовья в хозяйствах.

Таким образом, уровень серопозитивности к вирусу увеличивался с возрастом животных, а титры антител достоверно повышались к 12-ти месяцам и старше. Высокие титры антител к вирусу у коров, вероятно, являлись следствием его активной циркуляции среди этой категории животных, являющейся источником возбудителя для неимунных телят.

Сероконверсию (4 - 32-кратное повышение титров антител) к вирусу чаще выявляли у телят в возрасте 4-6 месяцев и коров. Однако уровень серокон-версии к вирусу РСИ в хозяйствах с наличием импортного скота был более высоким (до 256-кратного).

2.2.7. Частота выявления вируса у животных различных половозрастных групп методом ОТ-ПЦР

С целью изучения возрастной восприимчивости животных к инфицированию вирусом методом ОТ-ПЦР исследовали 273 пробы биологического материала от телят до 6-ти месяцев, телок, нетелей и коров.

Из данных таблицы 7 видно, что в среднем вирус присутствовал в 15,4% исследованных проб биоматериала, полученных от крупного рогатого скота при вспышках болезни. Чаще геном вируса выявляли у телят до 6-месячного (27/19,7%) и коров (10/16,1%), что свидетельствует об их восприимчивости к инфицированию вирусом. При исследовании биоматериала от телят до 10-дневного возраста количество положительных проб составило 4,5% от числа исследованных.

Таблица 7 - Частота выявления PCB КРС у животных различных половозрастных групп

Половозрастная группа животных Исследовано проб биоматериала Выявлено положительных проб Процент положительных проб от числа исследованных

Телята от 10 дней до 1 месяца 66 3 4,5

Телята от 1 мес. до 6 мсс. 137 27 19,7

Телки 3 0 0

Нетели 5 2 40,0

Коровы 62 10 16,1

Всего: 273 42 15,4

Таким образом, по данным ОТ-ПЦР, к инфицированию вирусом восприимчивы все категории животных, но наиболее восприимчивыми являются телята до 6-месячного возраста и коровы. Выявление генома вируса в пробах биоматериала от телят до 10-дневного возраста свидетельствует, по нашему мнению, о вовлечении в эпизоотический процесс этой категории животных. Полученные результаты согласуются с результатами серологических исследований, приведенных в предыдущем разделе.

2.2.8. Особенности течения РСИ КРС в ассоциации с другими инфекционными заболеваниями по результатам серологических исследований

При серологическом обследовании животных хозяйств региона, отнесенных ко всем категориям, выявили специфические антитела к вирусам РСИ, ИРТ, ВД-БС и ПГ-3 КРС в 63,8 %, ИРТ, ВД-БС и возбудителям хламидиоза в 9,5 %; ИРТ, ВД-БС КРС, аденовирусной инфекции в 70,6%, этим возбудителям и рота- и коронавирусным инфекциям в 23,4% случаев.

Таким образом, в племенных и товарных хозяйствах РСИ, ИРТ и ВД-БС КРС у телят могут протекать в ассоциации с другими инфекциями. Однако наличие диагностического прироста титров вируснейтрализующих антител чаще выявляемое у больных животных именно к этим вирусам, а также более частое выделение возбудителей от больных животных свидетельствует, на наш взгляд, об их ведущей роли в данных ассоциациях.

2.2.8.1. Частота инцидентности РСИ КРС в молочных хозяйствах

в зависимости от уровня серопозитивности животных к вирусу ВД-БС КРС и наличия в них персистентно инфицированных животных

Известно, что возбудитель ВД-БС КРС способен вызывать иммунотоле-рантные эмбриональные инфекции, что приводит к рождению персистентно инфицированных (ПИ) телят, служащих постоянным источником (резервуаром) возбудителя инфекции в популяции КРС. Вследствие иммуносупрессивного

свойства вируса у инфицированных животных повышается восприимчивость к инфицированию другими вирусными и бактериальными патогенами. Высокий уровень серопозитивности животных в стадах, где не проводится специфическая профилактика болезни, может свидетельствовать о наличии в них ПИ животных.

В связи с этим целью настоящего раздела было изучение влияния уровня серопозитивности к вирусу ВД-БС КРС и наличия в стадах ПИ животных на частоту проявления респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота.

Из данных таблицы 8 видно, что в хозяйствах с наличием импортированного скота уровень инфицированности животных вирусом ВД-БС КРС был высоким и достигал 90,27%. Количество ПИ животных в них составило 3,13%. В этих хозяйствах регистрировали острые вспышки инфекции, сопровождающиеся, в частности, болезнями молодняка в постнатальный период.

Таблица 8 - Частота проявления РСИ КРС в зависимости от уровня инфицированно-сти животных вирусом ВД-БС КРС и наличия ПИ-животных в молочных стадах различного размера_. _

Категория хозяйств Половозрастные группы животных Исследовано проб Серопо-зитив-ность к вирусу ВД-БС КРС, % Выявление ПИ животных, % Серопози-тивность к PCB КРС Наличие клинических признаков РСИ КРС/выявление вируса в ОТ-ПЦР (+;-)

Крупные с наличием импортного скота Телята до 6 мес. 372 92,74 9,14 29,9 -(-/высокая

Телки случного возраста 445 73,26 6,74 86,2 -/низкая

Коровы и нетели 2 060 93,50 1,26 86,6 -(-/высокая

Всего 2877 90,27 3,13 67,5

Крупные без импортного скота Телята до 6 мес. 488 83,40 6,56 25,5 +/ высокая

Телки случного возраста 1588 65,43 1,13 66,6 -/ низкая

Коровы и нетели 3292 83,29 0,94 76,3 +/низкая

Всего 5368 78,02 1,51 56,1

Средние и мелкие без импортного скота Телята до 6 мес. 364 67,31 3,30 20,4 ±/низкая

Телки случного возраста 1499 27,69 0,87 Не исследовали -/ низкая

Коровы и нетели 2232 41,31 1,12 75 -/ низкая

Всего 4095 38,63 1,03 47,7

Количество ПИ животных по половозрастным группам распределилось следующим образом: телята до 6 месяцев - 9,14 %, телки - 6,74 %, коровы и нетели - 1,26%. Анализ происхождения этих животных показал, что более 80% инфицированных телят были рождены от нетелей, завезенных из-за рубежа. Уровень серопозитивности животных к PCB КРС в этих хозяйствах был также высоким и достигал 67,5%. Частота проявления клинических признаков респи-раторно-синцитиальной инфекции в них была выше, чем в хозяйствах второй и третьей категорий. Регистрировали клинические проявления как ВД-БС, так и РСИ КРС у телят до 6-месячного возраста и коров. У телок случного возраста отмечали только проявление вирусной диареи, но не респираторно-синцигаальной инфекции.

В крупных молочных комплексах без импорта скота (вторая категория) уровень инфицированности животных вирусом ВД-БС КРС был также высоким (78,02%). Превалентность ПИ животных в них была ниже и составила 1,51%, а по половозрастным грушам: 6,56%, 1,13 % и 0,94 %, соответственно. В этих хозяйствах также регистрировали респираторные болезни телят.

Инфицированность животных PCB КРС в этих хозяйствах находилась в пределах 25,5% у телят 1-6-месячного возраста, 50% у телят от 6 месяцев и старше, телок - 66,6%, а у коров 76,3% (в среднем 56,1%). Частота выявления PCB была также высокой, однако его чаще обнаруживали у телят.

В мелких товарных хозяйствах серопозитивность скота к вирусу ВД-БС КРС составила 38,63%, а превалентность ПИ животных - 1,03 %. Болезнь протекала в субклинической, реже в острой форме у телят и нетелей в респираторной форме ассоциативно с другими инфекциями.

Респираторно-синцитиальная инфекция имела распространение и в этих хозяйствах, однако уровень инфицированности животных был ниже, чем в хозяйствах первой и второй категории и составлял 47,7%. Клинические признаки болезни у животных регистрировались значительно реже и только у телят до 6-месячного возраста в виде слабого респираторного синдрома.

Таким образом, в крупных молочных стадах установлено ассоциативное течение вирусной диареи-болезни слизистых и респираторно-синцигальной инфекции крупного рогатого скота. Установлена взаимосвязь между уровнем инфицированности животных вирусом ВД-БС КРС и наличием в них животных, персистентно инфицированных этим вирусом. Количество ПИ животных коррелировало с возникновением клинических признаков респираторных болезней у телят, протекающих с участием респираторно-синцитиального вируса. Инцидентность респираторных болезней телят в крупных молочных хозяйствах с высокой молочной продуктивностью коров была выше, чем в средних и малых за счет наличия в них ПИ телят. Частота проявления клинических признаков РСИ у телят была выше в крупных хозяйствах и также зависела от количества персистентно инфицированных вирусом ВД-БС КРС животных.

2.2.8.2. Влияние хозяйственных факторов на частоту проявления клинических признаков респираторно-синцитиальной инфекции и легочного пастереллеза крупного рогатого скота

Целью этого раздела являлось изучение влияния концентрации животных и уровня молочной продуктивности коров на проявление РСИ и легочного пастереллеза КРС (табл. 9).

Предварительные результаты серологических и вирусологических исследований также позволили разделить все хозяйства на три категории. К первой (низкий уровень серопозитивности) отнесли 9%, ко второй (средний) - 22, а к третьей (высокий уровень) - 60% от числа обследованных хозяйств.

Таблица 9 - Проявление РСИ КРС и легочного пастереллеза в зависимости от концентрации и продуктивности животных в хозяйстве

Поголовье (коров) Среднего- Серопозитивность, (%)/наличие сероконвер-сии (+;±;-) Выделе- Клинические проявления (+;-) Частота выделения бактерий се-

довой на- ние воз- РСИ КРС мейства Лигеи-

дой на фур. голову, кг будителя (+;±;-) коровы телята геИасеае, их патогенность (+; -)

До 300 До 500 800 и более До 2500 2500-4000 0-30/-31-60/± ± + ± ± + Редко (-) Относительно редко (±)

4000-7000 61 и выше/+ + + + Часто (±)

Известно, что на возникновение, развитие и течение респираторных болезней большое влияние оказывают хозяйственные факторы, в том числе, концентрация животных и их продуктивность (H.H. Крюков и соавт., 1984).

Анализируя влияние хозяйственных факторов на проявление вирусных инфекций, нами высказано предположение, что интенсивность проявления респираторных болезней молодняка КРС, а также их этиологическая структура различны и зависели от концентрации животных в хозяйствах и их продуктивности, в частности, молочной.

В мелких хозяйствах серопозитивность животных к вирусам ИРТ и ВД-БС КРС составляла 20-30%, отмечалась, как правило, циркуляция одного-двух возбудителей бактериальной природы, вызывающих респираторные болезни молодняка КРС до 1,5-месячного возраста. В хозяйствах, насчитывающих более 500 коров, серопозитивность животных к этим вирусам достигала 60%. В такой ситуации происходила активизация вирусных агентов и их участие в возникновении и развитии респираторных болезней молодняка. От больных телят выделялись вирусы, и отмечалась сероконверсия к ним. Спектр бактериальных агентов возрастал и насчитывал 4-5 и более, патогенность их варьировала от низкой до высокой. Возраст восприимчивых животных достигал 6 месяцев.

В хозяйствах, насчитывающих 800 и более коров с высокой молочной продуктивностью, инфицированностъ животных достигала 90-100%, выделение

вирусов происходило чаще, процент сероконверсии также значительно возрастал. Спектр возбудителей бактериальной природы, вовлекаемых в инфекционный процесс, значительно расширялся, патогенность их также варьировала от низкой до высокой.

Важным аспектом патогенеза РСИ КРС является подавление неспецифических механизмов иммунной защиты респираторного тракта, а также инициация и усиление бактериальной колонизации легких после первичного размножения возбудителя. Вирус может вызывать бронхиты, пневмонии и эмфиземы легких самостоятельно, но главным его свойством является иммуносупрессия и формирование предрасположенности к возникновению бактериальных пневмоний, в частности, легочного пастереллеза. Исследованиями установлено, что культуры пастерелл, выступающие в качестве основного агента, осложняющего течение вирусных болезней, изолировали в 33,3% случаев, при этом они относились к родам тикоаДа и haemolytica, вирулентность их варьировала от низкой до высокой.

Анализ данных ветеринарной отчетности за 1992-2010 гг. показал, что пастереллез крупного рогатого скота регистрировался в нескольких областях Сибири и чаще протекал в виде эндогенной инфекции на фоне предшествующих вирусных инфекций. С середины 90-х годов была отмечена тенденция к снижению случаев выделения этих бактерий (рис.).

Частота выделения бактерий сем. Раз1еигейасеае при респираторных болезнях крупного рогатого скота в молочных хозяйствах, % от числа исследованных проб.

В 1992-1997 гг. культуры пастерелл выделяли чаще от телят в крупных животноводческих хозяйствах по откорму молодняка. В период 1998-2006 гг. они присутствовали в пробах биоматериала от телят из хозяйств различного направления значительно реже. Начиная с 2007 г. количество проб, содержащих этот возбудитель, также стало возрастать.

В настоящее время заболевание телят пастереллезом, подтвержденное ла-

бораторными исследованиями, регистрируется в хозяйствах с высокой концентрацией животных, специализирующихся на производстве молока, где серопо-зитивность животных к вирусам ВД-БС, ИРТ, РСИ КРС достигает 60-70% и выше.

2.2.8.3. Частота выделения возбудителей смешанных вирусных

инфекций и бактерий семейства Ра$1еиге11асеае от больных телят в молочных хозяйствах, неблагополучных по респираторным болезням

Целью настоящего раздела было изучение частоты выявления респира-торно-синцитиального вируса в ассоциациях с вирусами ИРТ, ВД-БС и бактериями семейства РаяГеигеИасеае в крупных молочных хозяйствах, стационарно неблагополучных по респираторным болезням КРС.

Из данных таблицы 10 видно, что количество проб, содержащих вирус ИРТ в моноварианте, составляло 30%, ВД-БС КРС - 18%; ассоциации этих вирусов - 71,7%. Высокий процент выявления положительных проб свидетельствует о широком распространении этих инфекций среди восприимчивого поголовья и, возможно, ведущей роли вирусов в инфекционном процессе. Культуры пастерелл изолировали в 33,3% случаев; при этом они относились к видам Р. тикоайа (20%) и М. каето1уИса (13,3%).

Таблица 10 - Частота выделения вирусов ВД-БС, ИРТ, РСИ КРС и бактерий семейства Ра51еиге11асеае от больных телят в хозяйствах, стационарно неблагополучных по респираторным

болезням (2001-2010 гг.)

__п=998

№ п/п Наименование возбудителя, ассоциации возбудителей Количество положительных Выявлено положительных проб от числа ис-

проб следованных, %

1 Вирус ИРТ КРС 299 30

2 Вирус ВД-БС КРС 180 18

Бактерии семейства Раз1еиге11асеае: 133 13,3

3 а) М. Ьаето1уИса

б) Р. тикоШа (А и Б) 200 20

4 Вирус ИРТ КРС и ВД-БС 716 71,7

5 Вирус ИРТ КРС и РаБХеигеНа врр. 200 20

б Вирус ВД-БС КРС и Раз1еиге11а ярр. 519 52,9

7 Вирус РСИ КРС 123 11,0

8 Вирус ИРТ, ВД-БС и РСИ КРС 89 10,0

9 Вирус РСИ КРС и Ра8«еиге11а 5рр. 123 20,0

10 Вирус ИРТ, ВД-БС и РСИ КРС и Ра51еи- 235 15,0

ге11а Брр.

Сочетание вирусов ИРТ и ВД-БС чаще всего выявляли в легких (37,8%), трахеальном и бронхиальном экссудате (16,5%), слизистой носа (10,2%) и трахеи (9,82%). Вирусно-бактериальные ассоциации - в легких: вирус ИРТ и бак-

терии семейства Pasteurellaceae - в 20,0%, а вирус ВД-БС КРС и бактерии этого семейства в 52,9% исследованных проб.

Количество проб биоматериала, содержащих вирус ВД-БС КРС и Р. multocida сероваров А и D, составило 6,8% в легочных лимфоузлах, 11,2% в бронхах, 3,4% в трахеальном и бронхиальном экссудатах. Число проб, содержащих этот вирус и М. haemolytica, составило 3,6% в легочных лимфоузлах и 9,9% в легких. Ассоциацию вирусов ИРТ, ВД-БС и бактерий семейства Pasteurellaceae выявляли также в легких (43,1%).

Количество проб, содержащих PCB КРС в моноварианте, составило 11,0%, ИРТ, ВД-БС и PCB КРС -10,0%, PCB КРС и бактерии семейства Pasteurellaceae - 20,0%, а вирус ИРТ, ВД-БС и PCB КРС в сочетании с бактериями этого семейства в 15,0% случаев. При этом PCB КРС чаще выявляли в легких и бронхах (35,0%), носовых выделениях и органах верхнего респираторного тракта (11,0%).

Результаты исследований показали, что спектр микроорганизмов, вызывающих патологию респираторной системы крупного рогатого скота достаточно широк. Бактериальные заболевания часто являются вторичными, но могут протекать как сопутствующие или самостоятельные. Это зависит от концентрации животных, наличия или отсутствия специфической профилактики вирусных и бактериальных болезней, а также хозяйственных факторов.

В таких случаях смешанного течения респираторных инфекций изолировать возбудители вирусной природы обычными вирусологическими методами сложно и часто их первичная этиологическая роль остается не установленной вследствие постановки диагноза на бактериальные инфекции.

В связи с этим при планировании противоэпизоотических мероприятий крайне необходимо проводить весь комплекс диагностических исследований (вирусологических, бактериологических) с целью расшифровки этиологической структуры конкретной вспышки респираторных заболеваний и выяснения этиологической роли каждого инфекционного агента.

3. ВЫВОДЫ

1. Оптимальными параметрами выделения PCB КРС являлись: отбор проб биоматериала от животных на ранних стадиях инфекции, транспортировка в охлажденном виде или в транспортной среде в течение суток в лабораторию с последующей немедленной обработкой и заражением культур клеток в день доставки. Выделение вируса эффективно в двухсуточной первично-трипсинизированной культуре клеток ТБ с адсорбцией в течение часа и добавлением 2% сыворотки плода крупного рогатого скота при 37°С с проведением не менее 8 «слепых» пассажей. Эффективность выделения повышалась при отсутствии стадии центрифугирования суспензии биоматериала или при адсорбции вируса на клетках в течение часа при +20°С с добавлением 1% димексида. Пригодной для выделения и культивирования вируса являлась также переви-

ваемая линия культуры клеток ТЭБ, обеспечивающая его накопление в титре не ниже 10J,S ТЦД50/И1. Контроль выделения, накопления, а также типирование вируса в зараженных культурах клеток необходимо осуществлять при помощи ОТ-ПЦР путем исследования вируссодержащей суспензии каждого пассажа.

2. При изучении чувствительности 18 культур клеток к двум штаммам вируса (РС-Б и К-18) установлено, что цитопатогенное действие вируса имело «штаммовый» характер. Наиболее чувствительной к штамму РС-Б оказались первично-трипсинизированная культура клеток ЛЭК и перевиваемая линия клеток FLK, титр вируса в которых составлял 3,74+0,12 ^ТЦДяуш и 3,36±0,17 lgTHZIso/M, а к штамму К-18 - ТБ и ТЭБ, обеспечивавшие его накопление в титре 4,83±0,07 lg ТЦД so« и 4,58±0,07 lg ТЦД 50/ил.

3. Размножение штаммов вируса в инфицированных культурах клеток не всегда сопровождалось развитием видимого ЦПД. Для контроля его репликации и определения инфекционной активности эффективными были методы бляшкообразующих единиц и окрашенных фокусов, электронная микроскопия, цитоморфологические исследования и ОТ-ПЦР. Более эффективным методом титрования вируса являлся метод БОЕ, наиболее простым - метод ФОБ, а наиболее специфичным - метод ОТ-ПЦР.

4. Оптимальными условиями культивирования штамма РС-Б вируса с целью получения эритроцитарного антигена являлись: возраст культуры клеток 35 суток; множественность заражения 0,1 ТЦД50/КЛГГИ; адсорбция 1,5 часа; поддерживающие, питательные среды - Игла МЕМ, Игла и RPMI -1640 в соотношении 2:1 с добавлением 2% фетальной сыворотки крупного рогатого скота, сыворотки северных оленей или сыворотки цыплят; pH 7,4-7,8; инкубирование в стационарных или роллерных условиях при температуре 37°С; культивирование в течение 5-6 суток до выраженного ЦПД. Добавление 1% ДМСО и ДЭАЭ - декстрана 50 мкг на 1 мл положительно влияло на проявление ЦПД и повышало титр вируса на 0,5 и 1 lg ТЦЦ50/М. Оптимальными условиями культивирования штамма К-18 были: использование 2-3 суточных культур клеток ТЭБ и ТБ с предварительным 3-х кратным отмыванием монослоя клеток от ростовой среды с 10% коммерческой сыворотки крови крупного рогатого скота или телят. При использовании сыворотки эмбриона коровы необходимость отмывания монослоя клеток отпадала.

5. Активность эритроцитарных антигенов зависела от титра вируса в чувствительной культуре клеток. Наиболее активные антигены, тигры которых со специфической к вирусу сывороткой составляли от 7,92±0,22 до 10,15±0,09 lg2, были получены из вируссодержащей суспензии, накопленной в культурах клеток Л5Э и П5Э, FLK и ЛЭК, а после адаптации и в перевиваемых линиях клеток Т-1 и ПТ. Штамм РС-Б обладал слабой антигенной активностью в отношении белых мышей линии BALB/c и морских свинок. Активность гипериммунных сывороток, использованных для положительного контроля набора, полученных на кроликах и баранах в реакции нейтрализации составила 5,38±0,16 - 6,08±0,09 lgz- Производственные испытания опытных серий специфических эритроцитарных антигенов в РИГА показали их высокую специфичность и активность.

6. С помощью РИГА выявлено наличие антител к вирусу респираторно-синцитиальной инфекции у 71,9% молодняка в возрасте 4-6 месяцев; 69,2% -в возрасте 2-4 месяца; 55,9% - в возрасте 6-9 месяцев и у 50,8% крупного рогатого скота в 16 регионах Российской Федерации, в том числе у 33,01% овец и 87,76% коз. Сероконверсию к вирусу устанавливали у телят в возрасте: 4-6 месяцев в 52,6% случаев; 7-9 месяцев - 50,0%; 3-4 месяца - 37,5%, что свидетельствовало о переболевании животных в эти возрастные периоды. Диагностический прирост титров антител к вирусу у телят в возрасте 1-3 месяца устанавливали редко: в 4,0 и 6,7% случаев, соответственно 1 месяц (4,0%). Уровень инфицированное™ и частота проявления клинических признаков болезни зависели от концентрации животных на единицу площади, уровня молочной продуктивности коров и частоты ввода новых животных. Средние показатели инфицированности крупного рогатого скота различались по регионам и варьировали от 30,8% в регионах с низкой плотностью скота до 66,6% в регионах с высокой плотностью и наличием завозного скота. В крупных хозяйствах циркуляция вируса могла быть непрерывной за счет транзитной инфекции у коров и телят, что обеспечивало постоянный риск возникновения повторных вспышек болезни.

7. По данным метода ОТ-ПЦР к инфицированию вирусом восприимчивы все половозрастные группы животных. В среднем вирус присутствовал в 15,4% исследованных проб биоматериала, полученных от крупного рогатого скота при вспышках болезни. Частота выявления генома вируса от телят до 6-месячного возраста составила 19,7%, а от коров - 16,1% при наличии признаков острых респираторных заболеваний. Выявление вируса в 4,5% проб биоматериала от телят до 10-дневного возраста свидетельствовало о вовлечении их в инфекционный процесс.

8. В крупных молочных комплексах частота проявления РСИ КРС зависела от уровня инфицированности животных вирусом ВД-БС КРС, а также наличия в стадах животных, персистентно инфицированных этим вирусом. При уровне инфицированности животных вирусом ВД-БС КРС от 78,02 до 90,3% и наличии в стадах крупного рогатого скота не менее 3,13% ПИ вирусоносителей инцидентность РСИ КРС повышалась и сопровождалась выявлением возбудителя и сероконверсией к нему у животных различных половозрастных групп, включая коров и телят до 6-месячного возраста.

9. Этиологическая структура респираторных болезней на молочных комплексах носила полиэтиологический характер. Количество проб, содержащих вирус ИРТ в моноварианте в среднем, составляло 30%, ВД-БС КРС - 18%; ассоциации этих вирусов - 71,7%. Сочетание этих вирусов выявляли в легких (37,8%), трахеальном и бронхиальном экссудате (16,5%), слизистой носа (10,2%) и трахеи (9,82%). Количество проб, содержащих PCB в моноварианте, составило 11,0%, его выявляли в 35,0% проб легких и бронхов, 11,0% проб носовых выделений и органов верхнего респираторного тракта. В 10,0% проб выявляли три вируса одновременно.

10. Вирусно-бактериальные ассоциации выявляли в легких: вирус ИРТ и бактерии семейства Рая1еиге11асеае - в 20,0%, а вирус ВД-БС КРС и бактерии этого семейства в 52,9% исследованных проб. РСВ КРС и бактерии семейства Рая1еиге11асеае - 20,0%, а сочетание трех вирусов и пастерелл - 15,0% случаев. Культуры пастерелл в моноварианте изолировали в 33,3% от общего числа исследованных проб, при этом они относились к видам Р. тикоайа (20,0%) и М. каето1уНса (13,3%). Патогенность их варьировала от низкой до высокой. М. Иаето1уНса выделяли от животных всех половозрастных групп с острой формой легочного пастереллеза при завозе импортированного скота, а Р. тикосШа от молодняка до 6-месяцев при энзоотическом проявлении болезни.

И. Результаты разработки и апробации комплекса диагностических исследований открывают возможность проведения мониторинга РСИ КРС в молочных хозяйствах различного профиля с наличием или отсутствием импортированных животных, а также послужат основой стратегии диагностических исследований для объективной оценки эпизоотической ситуации и установления роли вируса в этиологии массовых респираторных болезней, протекающих с участием этого патогена и других вирусов и бактерий, создавая перспективы оптимизации противоэпизоотических мероприятий, в том числе схем специфической профилактики болезни.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. В хозяйствах молочного направления, неблагополучных по вирусно-бактериальным болезням крупного рогатого скота, необходимо проводить комплекс серологических и молекулярных исследований с целью расшифровки этиологической структуры инфекционной патологии и установления роли рес-пираторно-синцитиального вируса;

2. Комплекс диагностических исследований проводить с использованием

- «Набора для серодиагностики респираторно-синцитиальной инфекции (РС-инфекции) крупного рогатого скота овец и коз в реакции непрямой гемагг-лютинации (РИГА)» ТУ-10-19-162-91.

- «Тест-системы для выявления вируса респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции» (Свидетельство о Госрегистрации № ПВР-1-8.9/02499).

Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе в программе подготовки студентов по курсам «Вирусология», «Эпизоотология» по специальности «Ветеринария» в ФГОУ ВПО «Новосибирский Государственный аграрный университет», ФГОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной медицины», ФГОУ ВПО «Красноярский Государственный аграрный университет», ФГОУ ВПО «Алтайский Государственный аграрный университет», ГОУ ВПО «Хакасский Государственный университет им. Н.Ф. Катанова».

5. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в ведущих научных журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ

1. Васильев, A.B. РНГА в серодиагностике респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота / A.B. Васильев, Н.Г. Осидзе, В.Н. Сюрин, JI.M. Акбаева, И.Я. Строганова, Л.И. Баринова // Ветеринария. - 1988. - № 10. -С. 33-34.

2. Строганова, И .Я. Специфические гипериммунные сыворотки к вирусу респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота / И.Я. Строганова // Вестник КрасГАУ. - 2009. - Вып. 11. - С. 161 -163.

3. Строганова, И.Я. Этиологические факторы и особенности эпизоотологии вирусных респираторных заболеваний крупного рогатого скота в условиях Красноярского края / И.Я. Строганова // Вестник КрасГАУ. - 2009. - Вып. 7 -С.116-119.

4. Строганова, И.Я. Реакция непрямой гемагглютинации в серодиагностике респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота / И.Я. Строганова // Вестник КрасГАУ. - 2009. - Вып. 9. - С. 134-136.

5. Строганова, И.Я. Распространение респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота / И.Я. Строганова, А.Г. Глотов // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. - 2009. - № 12. - С. 87-91.

6. Строганова, И.Я. Изучение активности эритроцитарных антигенов рес-пираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота для реакции непрямой гемагглютинации / И.Я. Строганова // Вестник КрасГАУ. - 2009. -Вып. 11.-С. 158-161.

7. Строганова, И.Я. Инфекционная активность респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота в процессе хранения / И.Я. Строганова // Вестник КрасГАУ. - 2009. - Вып. 12. - С.155-157.

8. Строганова, И.Я. Эритроцитарный антигенный диагностикум респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота / И.Я. Строганова // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. - 2010. - №6. - С.79-82.

9. Строганова, И Л. Анализ эпизоотической ситуации по вирусным респираторным болезням крупного рогатого скота в Средней Сибири / И.Я. Строганова // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. — 2010. — № 8.-С.73-76.

10. Глотова, Т.И. Выделение и типирование респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота при помощи ОТ-ПЦР / Т.И. Глотова, О.В. Кунгурцева, А.Г. Глотов, И.Я. Строганова, К.В. Войтова, Т.В. Гальнбек // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. - 2010. -№ 10. - С.59-64.

11. Строганова, И.Я. Особенности эпизоотической ситуации по вирусным респираторным болезням крупного рогатого скота в Восточной Сибири / И.Я. Строганова//Вестник КрасГАУ.-2011.-Вып. 1.-С.125-128.

12. Строганова, И.Я. Обнаружение и определение инфекционной активности респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота в культуре клеток / И.Я. Строганова // Достижения науки и техники АПК. - 2011. - № 2. -С. 59-60.

13. Строганова, И.Я. Чувствительность клеточных культур к различным штаммам респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота / И.Я. Строганова, Т.И. Глотова, А.Г. Глотов // Вестник КрасГАУ. - 2011. - Вып. 2. - С.127-130.

14. Строганова, И.Я. Методы обнаружения и идентификации респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота в культуре клеток / И.Я. Строганова, К.В. Войтова // Вестник КрасГАУ. - 2011. - Вып. 3. -С. 128-133.

15. Строганова, И.Я. Цитоморфологический метод исследования для контроля размножения респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота в культуре клеток / И.Я. Строганова // Аграрный вестник Урала. — 2011. — №3(82).-С. 29-31.

16. Строганова, И.Я. Распространение аденовирусной инфекции крупного рогатого скота в животноводческих хозяйствах Восточной Сибири / И.Я. Строганова // Вестник КрасГАУ. -2011,- Вып. 4. - С. 108-111.

17. Строганова, И.Я. Инфекционная активность респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота в клеточных культурах / И.Я. Строганова, JI.M. Акбаева // Сельскохозяйственная биология. - 2011. -№2.-С. 99-102.

18. Строганова, И.Я. Анализ распространения вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота в двух регионах Восточной Сибири / И.Я. Строганова // Вестник КрасГАУ. - 2011. - Вып. 5. - С. 124-127.

19. Строганова, И.Я. Распространение парагриппа-3 крупного рогатого скота в животноводческих хозяйствах Восточной Сибири / И.Я. Строганова // Вестник КрасГАУ. - 2011. - Вып. 6. - С. 115-118.

20. Строганова, И.Я. Закономерности распространения инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в Восточной Сибири / И.Я. Строганова II Вестник КрасГАУ.-2011.-Вып. 7.-С. 118-120.

Монография

21. Глотов, А,Г. Вирусные болезни крупного рогатого скота при интенсивном ведении молочного животноводства: монография / А.Г. Глотов, Т.И. Глотова, И.Я. Строганова; КрасГАУ. - Красноярск, 2010. - 188 с.

Учебное пособие

22. Строганова, И.Я. Вирусные болезни крупного рогатого скота: учебное пособие, рекомендованное Сибирским региональным методическим центром высшего профессионального образования для межвузовского использования/ И.Я. Строганова, А.Г. Глотов, Т.И. Глотова; КрасГАУ и ИЭВСиДВ Россельхо-закадемии. - Красноярск, 2011. - 192 с.

Работы, опубликованные в сборниках научных трудов, материалах конференций и других изданиях

23. Строганова, И.Я. Чувствительность диплоидных культур клеток к респираторно-синцитиальному вирусу крупного рогатого скота / И.Я. Строганова, Н.П. Симбирцев // Интенсификация сельскохозяйственного производства в условиях радикальной экономической реформы: тез. докл. Всесоюзной науч,-практ. конф. (Сумы, 1989). - Сумы, 1989. - С. 175-176.

24. Строганова, И.Я. Чувствительность перевиваемых клеточных линий к респираторно-синцитиальному вирусу крупного рогатого скота / И.Я. Строганова // Наука - сельскохозяйственному производству: тез. науч. конф. (Крас-ГАУ). - Красноярск, 1993. - С. 4-5.

25. Строганова, И.Я. Изучение оптимальных условий культивирования штамма «РС-Б» респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота в чувствительных культурах клеток / И.Я. Строганова // Наука - сельскохозяйственному производству: тез. науч. конф. (КрасГАУ). - Красноярск, 1995. -С. 36-37.

26. Строганова, И.Я. Методы контроля размножения и определения инфекционной активности респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота в культурах клеток / И.Я. Строганова // Реконструкция гомеостаза: материалы IX Международного симпозиума (Красноярск, 16-20 марта 1998). -Красноярск, 1998. - Т. 4. - С. 97-99.

27. Глотов, А.Г. Особенности эпизоотической ситуации по вирусным респираторным болезням крупного рогатого скота в Сибири / А.Г. Глотов, Т.И. Глотова, A.B. Нефедченко, В.И. Аксенов, И.Я. Строганова, В.А. Качанов, Ю.Н. Зайцев // Актуальные проблемы ветеринарного обеспечения животноводства Сибири: сб. науч. тр. (РАСХН. Сиб. отделен. ИЭВСиДВ). - Новосибирск, 2006.-С. 52-56.

28. Строганова, И.Я. Адаптация респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота к перевиваемым линиям клеток / И.Я. Строганова // Социально-экологические проблемы природопользования в Центральной Сибири: материалы междунар. школы - конф. (Красноярск, 7-9 октября 2008). -Красноярск, 2008. - С. 307-308.

29. Строганова, И.Я. Получение специфических гипериммунных сывороток к респираторно-синцитиальному вирусу крупного рогатого скота / И.Я. Строганова // Аграрно-экономическая наука республики Тыва: основные результаты и перспективы: сб. материалов межрегаон. науч.-практ. конф. (Кызыл, 8-10 августа 2009). - Кызыл, 2009. - С. 137-140.

30. Строганова, И.Я. Активность эритроцитарных антигенов респиратор-но-синцитиального вируса крупного рогатого скота / И.Я. Строганова, Л.М. Акбаева // Там же. - С. 141-144.

31. Строганова, И.Я. Серологическая диагностика респирагорно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота и коз в реакции непрямой гемагглютинации / И.Я. Строганова, А. М. Акбаева// Там же. - С. 144-148.

32. Строганова, И.Я. Распространение вирусных пневмоэнтеритов крупного рогатого скота в хозяйствах Красноярского края / И.Я. Строганова // Ин-

новации в науке и образовании: опыт, проблемы, перспективы развития: материалы Всероссийской науч.-практ. конф. (ФГОУ ВПО КрасГАУ, 20 апреля 2009). - Красноярск, 2009. - С. 308-309.

33. Строганова, И.Я. Распространение вирусных респираторных болезней крупного рогатого скота в хозяйствах Средней Сибири / И.Я. Строганова // Проблемы современной аграрной науки: материалы междунар. заочн. науч. конф. (Красноярск, 15 октября 2009). - Красноярск, 2009. - С. 99-101.

34. Войтова, К.В. Распространение респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота в молочно - товарных хозяйствах / К.В. Войтова, A.B. Нефедченко, С.В. Котенева, Т.И. Глотова, И.Я. Строганова, А.Г. Глотов // Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов: междунар. конф., посвящ. 40-летию ВНИТИБП, отдел вет. мед. Россельхозакадемии (Щелково, 9-10 декабря 2009). - ВНИТИБП, 2009. - С. 242-245.

35. Строганова, И.Я. Вирусные болезни крупного рогатого скота в Средней Сибири / И.Я. Строганова // Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития: междунар. науч.-практ. конф. (Саратов, 16 марта 2010). - Саратов, 2010. - С. 408-410.

36. Глотов, А,Г. Экономическая эффективность диагностических мероприятий при вирусных болезнях крупного рогатого скота /А.Г. Глотов, Т.И. Глотова, И.Я. Строганова, В.В. Краснов // Проблемы экономического развития и обеспечения безопасности в области ветеринарии: Всероссийская науч.-практ. конф. (Троицк,18 марта 2010). - Троицк, 2010 - С. 53-56.

37. Строганова, И.Я. Распространение вирусных респираторных болезней крупного рогатого скота в Восточной Сибири / И.Я. Строганова // Современные научно-практические достижения в ветеринарии: междунар. науч.-практ. конф. (Киров, 15-16 апреля 2010). - Киров, 2010. - С. 210-212.

38. Луков, П.В. Респираторные болезни крупного рогатого скота в Восточной Сибири / П.В. Луков, И.Я. Строганова // Новейшие направления развития аграрной науки в работах молодых ученых: тр. IV межд. науч. конф. молодых ученых 22-23 апреля 2010 г. (п. Краснообск, 22-23 апреля 2010). - Новосибирск, 2010. - С. 91-94.

39. Строганова, И.Я. Вирусная респираторно-синцитиальная инфекция крупного рогатого скота в хозяйствах Красноярского края / И.Я. Строганова, А.Г. Хлыстунов // Инновация в науке и образовании: опыт, проблемы перспективы развития: материалы Всероссийской очно-заочной науч.-практ. конф. (Красноярск, 22 апреля 2010). - Красноярск, 2010. - С. 256-258.

40. Строганова, И.Я. Анализ эпизоотической ситуации по вирусным респираторным болезням крупного рогатого скота в Иркутской области / И.Я. Строганова, В.И. Мельцов // Научные основы улучшения ветеринарного благополучия и продуктивности животных: сб. материалов междунар. науч.-практ. конф. (Кызыл, 14-16 июня 2010). - Кызыл, 2010. - С. 139-142.

41. Акбаева, Л.М. Получение специфических гипериммунных сывороток к респираторно-синцитиальному вирусу крупного рогатого скота на баранах и кроликах / Л.М. Акбаева, И.Я. Строганова // Там же. - С. 19-21.

42. Акбаева, JI.M. Подготовка антигена респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота при получении тест-системы для серологической диагностики РСИ в реакции непрямой гемагглютинации / Л.М. Акбаева, ИЛ. Строганова // Там же. - С. 15-18.

43. Глотов, А.Г. Использование ПЦР для индикации респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота / А.Г. Глотов, Т.И. Глотова, К.В. Войтова, И.Я.Строганова // Аграрная наука - сельскохозяйственному производству Монголии, Сибири и Казахстана: сб. науч. докл. XII междунар. науч.-практ. конф. (Улаанбаатор, 6-7 июня 2010). - Новосибирск, 2010. - С. 78-81.

44. Строганова, И.Я. Анализ эпизоотической сшуации по вирусным болезням крупного рогатого скота в Республике Хакасия / И.Я. Строганова, А.Г. Хлыстунов // Проблемы современной аграрной науки: материалы междунар. заочной науч. конф. (Красноярск, 15октября2010).-Красноярск,2010.-С. 68-70.

45. Глотов, А.Г. Молекулярные механизмы синергизма вирусов и бактерий Mannheimia haemolytica AI, способствующие возникновению бронхопневмонии у телят / А.Г. Глотов, Т.И. Глотова, И.Я. Строганова // Актуальные вопросы ветеринарной медицины Сибири: материалы междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 70-летию со дня основания ИЭВСиДВ (п. Краснообск, 28-29 октября 2010). Россельхозакадемия. Сиб. регион, отд-ние. ГНУ ИЭВСиДВ. -Краснообск, 2010. - С. 27-32.

46. Глотов, А.Г. Особенности диагностики респираторных болезней крупного рогатого скота, вызываемых РНК-содержащими вирусами / А.Г. Глотов, Т.И. Глотова, И .Я. Строганова, К.В. Войтова// Там же. - С. 33-40.

47. Войтова, К.В. Применение методов ПЦР для изучения распространения респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота в животноводческих хозяйствах Сибири / КВ. Войтова, Т.И. Глотова, А.Г. Глотов, И.Я. Строганова // Молекулярная диагностика - 2010: сб. науч. тр. VII Всероссийской науч.-практ. конф. с междунар. участием 24-26 ноября. Т.2. - Москва, 2010.-С. 79-80.

Санитарно-эпидемиологическое заключение Х° 24.49.04.953.П. 000381.09.03 от 25.09.2003 г. Подписано в печать 31.08.2011. Формат 60x84/16. Бумага тип. № 1 Печать -ризограф. Усл. печ. л. 2,0 Тираж 100 экз. Заказ № 1338 Издательство Красноярского государственного аграрного университета 660017, Красноярск, ул. Ленина, 117

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Строганова, Ирина Яковлевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Респираторно-синцитиальная инфекция крупного рогатого скота.

1.1.1. Историческая справка.

1.1.2. Характеристика возбудителя.

1.1.3. Структура и функционирование генома вируса.

1.1.4. Антигенные и генетические подгруппы вируса.

1.1.5. Репликация вируса.

1.2. Культуральные свойства респираторно-синцитиального вируса.

1.2.1. Культивирование РС-вируса в различных клеточных системах.

1.2.2. Условия и методы культивирования. Питательные среды, сыворотки, добавки.

1.2.3. Цитопатогенное действие вируса.

1.3. Эпизоотологические данные. Особенности проявления респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота в молочных хозяйствах.

1.4. Особенности патогенеза, клинических признаков и патоморфологических изменений при респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота.

1.4.1. Патогенез болезни.

1.4.2. Клинические признаки.

1.4.3. Патоморфологические изменения при респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота.

1.5. Диагностика респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота.

1.5.1. Выделение вируса в культурах клеток.

1.5.2. Выявление антигена вируса.

1.5.3. Разработка и применение полимеразной цепной реакции для диагностики РСИ КРС.

1.5.4. Серологическая диагностика болезни.

1.6. Характеристика инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.

1.6.1. Особенности течения инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в молочных стадах.

1.7. Характеристика вирусной диареи - болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота.

1.7.1. Особенности течения вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота в молочных стадах.

1.8. Респираторные болезни крупного рогатого скота, протекающие с участием вирусов и условно-патогенных бактерий.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Диагностика респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота и особенности проявления болезни в современных условиях ведения животноводства"

Актуальность проблемы. В настоящее время в России возрастает удельный вес хозяйств по производству молока. В некоторые из них осуществляется ввоз высокопродуктивного скота из других стран. Высокая молочная продуктивность коров часто сопровождается нарушением обмена веществ, что приводит, в частности, к активизации различных инфекционных агентов (А.Г. Шахов, В.Т. Самохин, 2000; Ю.Н. Федоров, 2006). Существуют также молочно-товарные фермы, в которых концентрация животных и их продуктивность бывают разными, а ввод новых животных ограничен. Учитывая существование различных по направлению, численности, концентрации и продуктивности животных хозяйств, эпизоотическая ситуация в них по инфекционным болезням может различаться.

Широкое распространение в молочных хозяйствах получили респираторные болезни животных (О.Г. Петрова и соавт., 2002; К.П. Юров и соавт., 2003; Т.И. Глотова, 2006; М.И. Гулюкин и соавт., 2007; J. Kampa et al., 2009; К.А. Woodbine, 2009; J.F. Ridpath, 2010).

Одним из этиологических агентов данной патологии является респираторно-синцитиальный вирус крупного рогатого скота (PCB КРС), относящийся к семейству Paramyxoviridae, роду Pneumovirus. Во многих зарубежных странах его относят к числу наиболее важных патогенов молочного скота (L.E. Larsen, 2000; S. Hagglund, 2005; С. Luzzago et al., 2010; B.W. Brodersen, 2010).

Первые сообщения о РСИ КРС в нашей стране относятся к 1975 году (В.В. Гуненков и соавт., 1975). Изучению болезни и разработке средств и методов диагностики были посвящены работы Г.А. Халенева (1976), Г.Д. Метревели (1983), Т.М. Кочиш (2004), И.Н. Матвеевой (2008) и других.

Для достижения указанной цели были поставлены задачи:

1. Определить и отработать оптимальные параметры выделения, типирования и культивирования РСВ КРС в различных культурах клеток с целью получения антигена, а также - изготовить и испытать эффективность экспериментальных серий эритроцитарного диагностикума в РИГА для выявления антител к вирусу.

Отработаны методы ранней индикации, контроля размножения и учета инфекционной активности вируса в чувствительных культурах клеток. В том числе показано преимущество ОТ-ПЦР перед традиционными методиками выявления и титрования вируса: цитопатическое действие (ЦПД); методы бляшкообразующих единиц (БОЕ) и фокусообразующих единиц (ФОБ); цитоморфологические исследования и электронная микроскопия. Установлены сроки хранения вируссодержащей суспензии и выделенной РНК вируса при различных температурных режимах. Изучена возможность дальнейшего использования штаммов вируса РС-Б и К-18 для изготовления эритроцитарного диагностикума. Показано, что чувствительность культур клеток к вирусу имеет «штаммовую» зависимость. Разработан лабораторный регламент культивирования вируса с целью изготовления специфического эритроцитарного антигена для серологической диагностики респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота, овец и коз в РНГА.

- «Профилактика и лечение вирусных респираторных болезней молодняка крупного рогатого скота», утвержденных научно-техническим советом Федерального государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Красноярский государственный аграрный университет" (протокол № 4 от 20 апреля 2011 г.).

Основные положения диссертационной работы использованы при разработке научно-технической документации на:

2. Тест-систему для выявления вируса респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции (Свидетельство о Госрегистрации № ПВР-1-8.9/02499).

Апробация работы. Основные положения диссертации были доложены на: Всесоюзной научно-практической конференции «Интенсификация сельскохозяйственного производства в условиях радикальной экономической реформы», Сумы, 1989; Научной конференции профессорско-преподовате-льского состава КрасГАУ «Наука - сельскохозяйственному производству», Красноярск, 1993; Научной конференции профессорско-преподавательского состава КрасГАУ «Наука - сельскохозяйственному производству», Красноярск, 1995; XI Международном симпозиуме «Реконструкция гомеостаза», Красноярск, 1998; «Актуальные проблемы ветеринарного обеспечения животноводства Сибири», Новосибирск, 2006; Международной школе - конференции «Социально-экологические проблемы природопользования в Центральной Сибири», Красноярск, 2008; Всероссийской научно-практической конференции ФГОУ ВПО КрасГАУ «Инновации в науке и образовании: опыт, проблемы, перспективы развития», Красноярск, 2009; Межрегионарной научно-практической конференции «Аграрно-экономическая наука республики Тыва: основные результаты и перспективы», Кызыл, 2009; Международной конференции «Проблемы современной аграрной науки» ФГОУ ВПО КрасГАУ, Красноярск, 2009; Международной конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», посвященной 40-летию ВНИТИБП, Московская область, Щелковский район, поселок Биокомбината, ВНИТИБП, 2009; Международной научно-практической конференции «Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития», Саратов, 2010; Международной научно-практической конференции «Современные научно-практические достижения в ветеринарии», Киров, 2010; IV Международной конференции молодых ученых «Новейшие направления развития аграрной науки в работах молодых ученых», Новосибирская область, п. Краснообск, 2010; Всероссийской очно-заочной научно-практической конференции «Инновация в науке и образовании: опыт, проблемы, перспективы развития», Красноярск, 2010; Международной научно-практической конференции «Научные основы улучшения ветеринарного благополучия и продуктивности сельскохозяйственных животных», Кызыл, 2010; XIII Международной научно-практической конференции «Аграрная наука - сельскохозяйственному производству Монголии, Сибири и Казахстана», Улаанбаатар, 2010; Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы экономического развития и обеспечения безопасности в области ветеринарии», Троицк, 2010; Международной заочно научной конференции «Проблемы современной аграрной науки», Красноярск, 2010; Международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию со дня основания Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока «Актуальные вопросы ветеринарной медицины Сибири», Новосибирская область, п. Краснообск, 2010; VII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика - 2010», Москва, 2010.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 330 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов исследований, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 36 таблицами и 33 рисунками. Список

Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Строганова, Ирина Яковлевна

4. ВЫВОДЫ

3 5 ниже 10 ' ТЦД5о/мл. Контроль выделения, накопления, а также типирование вируса в зараженных культурах клеток необходимо осуществлять при помощи ОТ-ПЦР путем исследования вируссодержащей суспензии каждого пассажа.

2. При изучении чувствительности 18 культур клеток к двум штаммам вируса (РС-Б и К-18) установлено, что цитопатогенное действие вируса имело «штаммовый» характер. Наиболее чувствительной к штамму РС-Б оказались первично-трипсинизированная культура клеток ЛЭК и перевиваемая линия клеток FLK, титр вируса в которых составлял 3,74+0,12 ^ТЦД50/мл и 3,36±0,17 1§ТЦД50/мл » а к штамму К-18 - ТБ и ТЭБ, обеспечивавшие его накопление в титре 4,83±0,07 lg ТЦД 50/мл и 4,58±0,07 lg ТЦД 5о/Мл

3. Размножение штаммов вируса в инфицированных культурах клеток не всегда сопровождалось развитием видимого ЦПД. Для контроля его репликации и определения инфекционной активности эффективными были методы бляшкообразующих единиц и окрашенных фокусов, электронная микроскопия, цитоморфологические исследования и ОТ-ПЦР. Более эффективным методом титрования вируса являлся метод БОЕ, наиболее простым - метод ФОЕ, а наиболее специфичным - метод ОТ-ПЦР.

4. Оптимальными условиями культивирования штамма PC-Б вируса с целью получения эритроцитарного антигена являлись: возраст культуры клеток 3-5 суток; множественность заражения 0,1 ТЦД5о/Клетка; адсорбция 1,5 часа; поддерживающие, питательные среды - Игла МЕМ, Игла и RPMI -1640 в соотношении 2:1 с добавлением 2% фетальной сыворотки крупного рогатого скота, сыворотки северных оленей или сыворотки цыплят; pH 7,47,8; инкубирование в стационарных или роллерных условиях при температуре 37°С; культивирование в течение 5-6 суток до выраженного ЦП Д. Добавление 1% ДМСО и ДЭАЭ - декстрана 50 мкг на 1 мл положительно влияло на проявление ЦПД и повышало титр вируса на 0,5 и 1 lg ТЦД5о/мл. Оптимальными условиями культивирования штамма К-18 были: использование 2-3 суточных культур клеток ТЭБ и ТБ с предварительным 3-х кратным отмыванием монослоя клеток от ростовой среды с 10% коммерческой сыворотки крови крупного рогатого скота или телят. При использовании сыворотки эмбриона коровы необходимость отмывания монослоя клеток отпадала.

5. Активность эритроцитарных антигенов зависела от титра вируса в чувствительной культуре клеток. Наиболее активные антигены, титры которых со специфической к вирусу сывороткой составляли от 7,92±0,22 до 10,15±0,09 lg2, были получены из вируссодержащей суспензии, накопленной в культурах клеток Л5Э и П5Э, FLK и ЛЭК, а после адаптации и в перевиваемых линиях клеток Т-1 и ПТ. Штамм PC-Б обладал слабой антигенной активностью в отношении белых мышей линии BALB/c и морских свинок. Активность гипериммунных сывороток, использованных для положительного контроля набора, полученных на кроликах и баранах в реакции нейтрализации составила 5,38±0,16 - 6,08±0,09 Производственные испытания опытных серий специфических эритроцитарных антигенов в РИГА показали их высокую специфичность и активность.

6. С помощью РИГА выявлено наличие антител к вирусу респираторно-синцитиальной инфекции у 71,9% молодняка в возрасте 4-6 месяцев; 69,2% - в возрасте 2-4 месяца; 55,9% - в возрасте 6-9 месяцев и у 50,8% крупного рогатого скота в 16 регионах Российской Федерации, в том числе у 33,01% овец и 87,76% коз. Сероконверсию к вирусу устанавливали у телят в возрасте: 4-6 месяцев в 52,6% случаев; 7-9 месяцев - 50,0%; 3-4 месяца - 37,5%, что свидетельствовало о переболевании животных в эти возрастные периоды. Диагностический прирост титров антител к вирусу у телят в возрасте 1-3 месяца устанавливали редко: в 4,0 и 6,7% случаев, соответственно 1 месяц (4,0%). Уровень инфицированности и частота проявления клинических признаков болезни зависели от концентрации животных на единицу площади, уровня молочной продуктивности коров и частоты ввода новых животных. Средние показатели инфицированности крупного рогатого скота различались по регионам и варьировали от 30,8% в регионах с низкой плотностью скота до 66,6% в регионах с высокой плотностью и наличием завозного скота. В крупных хозяйствах циркуляция вируса могла быть непрерывной за счет транзитной инфекции у коров и телят, что обеспечивало постоянный риск возникновения повторных вспышек болезни.

8. В крупных молочных комплексах частота проявления РСИ КРС зависела от уровня инфицированное™ животных вирусом ВД-БС КРС, а также наличия в стадах животных, персистентно инфицированных этим вирусом. При уровне инфицированности животных вирусом ВД-БС КРС от 78,02 до 90,3% и наличии в стадах крупного рогатого скота не менее до 3,13% ПИ вирусоносителей инцидентность РСИ КРС повышалась и сопровождалась выявлением возбудителя и сероконверсией к нему у животных различных половозрастных групп, включая коров и телят до 6-месячного возраста.

10. Вирусно-бактериальные ассоциации выявляли в легких: вирус ИРТ и бактерии семейства Pasteurellaceae - в 20,0%, а вирус ВД-БС КРС и бактерии этого семейства в 52,9% исследованных проб. PCB КРС и бактерии семейства Pasteurellaceae - 20,0%, а сочетание трех вирусов и пастерелл -15,0% случаев. Культуры пастерелл в моноварианте изолировали в 33,3% от общего числа исследованных проб, при этом они относились к видам Р. multocida (20,0%) и М. haemolytica (13,3%). Патогенность их варьировала от низкой до высокой. М. haemolytica выделяли от животных всех половозрастных групп с острой формой легочного пастереллеза при завозе импортированного скота, а Р. multocida от молодняка до 6-месяцев при энзоотическом проявлении болезни.

11. Результаты разработки и апробации комплекса диагностических исследований открывают возможность проведения мониторинга РСИ КРС в молочных хозяйствах различного профиля с наличием или отсутствием импортированных животных, а также послужат основой стратегии диагностических исследований для объективной оценки эпизоотической ситуации и установления роли вируса в этиологии массовых респираторных болезней, протекающих с участием этого патогена и других вирусов и бактерий, создавая перспективы оптимизации противоэпизоотических мероприятий, в том числе схем специфической профилактики болезни.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. В хозяйствах молочного направления, неблагополучных по вирусно-бактериальным болезням крупного рогатого скота, необходимо проводить комплекс серологических и молекулярных исследований с целью расшифровки этиологической структуры инфекционной патологии и установления роли респираторно-синцитиального вируса;

2. Комплекс диагностических исследований проводить с использованием

Набора для серодиагностики респираторно-синцитиальной инфекции (РС-инфекции) крупного рогатого скота овец и коз в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА)» ТУ-10-19-162-91.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, доктора биологических наук, Строганова, Ирина Яковлевна, Краснообск

1. Азаренко, B.C. Результаты серологических исследований на вирусные заболевания органов дыхания / B.C. Азаренко, В.А. Демидов, Т.П. Плавник// «Ветеринарная наука производству», тр. БелНИВИ. - Минск, 1973 - Т. 9.

2. Андреев, Е.В. Герпетическая инфекция быков-производителей / Е.В. Андреев, Н.П. Чечеткина, О.В. Дудник // Ветеринария. -1977 №9- С.56-57.

3. Андреев, Е.В. Ассоциированное воздействие на организм вируса и условно-патогенных бактерий /Е.В. Андреев// Ветеринария. 1984. - № 6. -С. 25 - 27.

4. Архипов, Н.И. Патологоанатомическая диагностика вирусных болезней животных: Справочное издание / Н.И. Архипов и др.. Москва.: Колос, 1984.-С. 16-78.

5. Ашмарин, И.П. Быстрые методы статистической обработки и планирования экспериментов /И.П. Ашмарин, H.H. Васильев, В.А. Амбросов. Л.: Изд-во Ленингр. ун-та, 1974. - 76 с.

6. Бакулов, И.А. Новые проблемы эпизоотологии// Мат-лы междунар. Науч.-практ. конф., посвященной 40-летию ВНИИВВиМ, Покров. 1998. -С. 135 -138.

7. Баженов, К.С. Распространение вирусов прагриппа-3 и респираторно-синцитиальной инфекции среди телят на откорме в осенне-зимний период / К.С.Баженов // Бюл. ВИЭВ. 1983. - Вып. 50. - С. 6 - 8.

8. Басова, Н.Ю. Респираторные болезни молодняка крупного рогатого скота инфекционной этиологии в условиях Северного Кавказа: автореф. дис. .д-ра. вет. наук / Н.Ю. Басова. Краснодар, 2002. - 42 с.

9. Басова, Н.Ю. Распространение респираторных болезней молодняка КРС в Краснодарском крае/ Н.Ю. Басова, А.Г. Шипицын, В.В. Бель// Междунар. науч.-практ. конф. Воронеж, 2002. С. 129 - 130.

10. Бектемиров, Т.А. Состояние и перспективы специфической профилактики гриппа и других ОРЗ/ Т.А. Бектемиров и др..// Вопр. вирусологии.- 1987. №4. - С.393

11. Бостанджиева, Р. Доказване на респираторно-синцитиальната вирус -на инфекция по телятата через реакция за свързване на комплемента / Р. Бостанджиева, М. Текерлеков, Х.Е. Харалмбиев //Вет. мед. науки. София. 1984.- XXI. № 9. - С. 45 - 50.

12. Бостанджиева, Р. Иммунофлуоресцентное доказательство респираторно синцитиальной вирусной инфекции у телят / Р. Бостанджиева, Б. Митов, Х.Е. Харалмбиев //Вет. мед. науки. - София, 1985. - ХХП. - № 9. -С. 20-26.

13. Бостанджиева, Р. Чувствительност на клетьчните культури кьм говяждия респираторно синцитиален вирус / Р. Бостанджиева //Вет. мед. науки. София, 1986. - ХХП. - № 2. - С. 12 - 18.

14. Бостанджиева, Р. Культивирование и диагностика респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота: автореф. дис. . канд. биол. наук / Р. Бостанджиева. София, 1987. - 27 с.

15. Будулов, Н.Р. Профилактика и лечение пневмоэнтеритов телят /Н.Р. Будулов, П.Д. Устарханов, А.И. Алиев, Х.М. Гайдарбекова //Тез. докл. междунар. конф., посвящ. 275-летию РАН и 50-летию ДНЦ РАН, Махачкала. -1999.-С. 278-279.

16. Будулов, Н.Р. Респираторные болезни крупного рогатого скота в Дагестане: автореф. дисс. д-ра. вет. наук. / Н.Р. Будулов. Краснодар, 2009. - 43 с.

17. Бурцева, H.A. Вирусные пневмоэнтериты в условиях крайнего Севера/ H.A. Бурцева// Аграрный вестник Урала. 2008. - №1. - С. 59 - 60.

18. Бучнев, К.Н. Вирусное заболевание крупного рогатого скота с поражением слизистых оболочек / К.Н. Бучнев // Вестник с-х науки Казахстана. 1967. - №7. - С. 11 - 15.

19. Вазир, Я. Антигенные свойства экспериментальной ассоциированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота /Я. Вазир, И.В. Третьякова, Е.И. Ярыгина, Р.В. Белоусова // Ветеринария. 2008. - 4. - С. 23 - 26.

20. Васильев, A.B. РНГА в серодиагностике респираторно-синцити-альной инфекции крупного рогатого скота/ A.B. Васильев, Н.Г. Осидзе, В.Н. Сюрин и др. // Ветеринария. 1988. - №10. - С. 33 - 34.

21. Верховская, А.Е. Особенности диагностики и профилактики вирусной диареи крупного рогатого скота/ А.Е. Верховская и др.// Ветеринария. 2009. - №8. - С. 3 - 7.

22. Войтова, К.В. Диагностика респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции: автореф.дис. . .канд. вет. наук / К.В. Войтова. Новосибирск, 2011. - 20с.

23. Волкова, О.В. Основы гистологии с гистологической техникой/ О.В. Волкова, Ю.К. Елецкий. М.: Медицина - 1971. - С. 201 - 205.

24. Воронин, Е.С. Вирусные респираторные инфекции крупного рогатого скота в промышленных комплексах /Е.С. Воронин, A.A. Конопаткин // Лекции для слушателей факультета повышения квалификации. -М., 1982.-29 с.

25. Воронин, Е.С. Настоящее и будущее в профилактике болезней молодняка сельскохозяйственных животных / Е.С.Воронин // Сб. науч. тр.,посвящ. 100-летию ветеринарной науки в России и 30-летию СО РАСХН, Новосибирск. 1998. - С. 131 - 139.

26. Воронин, Е.С. Современная концепция этиологии, профилактики и лечения молодняка сельскохозяйственных животных / Е.С. Воронин, А.Г. Шахов // Мат-лы науч. сессии Россельхозакадемии.: Пленарное заседание, секции 1 11. - 1999. - С. 209 - 214.

27. Высокопоясный, А.И. К этиологии респираторных болезней телят в Краснодарском крае / А.И. Высокопоясный, Н.Ю. Басова, А.Г. Шипицын // Актуальные вопросы диагностики, профилактики и борьбы с болезнями животных: Сб. науч. тр. 1999. - С. 54 - 56.

28. Высокопоясный, А.И. Респираторные болезни телят на Кубани /А.И. Высокопоясный и др. // Ветеринария. 2000. - № 2. - С. 8-11.

29. Генчев, Г. Энзоотии респираторных заболеваний телят с признаками респираторно-синцитиального вируса //21 Всемирный вет. конгресс. Москва, 1979.-Т. 3.-101 с.

30. Глотов, А.Г. Распространение вирусных респираторных болезней крупного рогатого скота / А.Г. Глотов и др. // Ветеринария. 2002. - №3. -С. 17-21.

31. Глотов, А.Г. Генотип и вирулентность изолятов вируса ИРТ КРС / А.Г. Глотов и др. // Ветеринария. 2005. - №11. - С. 20 - 23.

32. Глотов, А.Г. Этиологическая структура массовых респираторных болезней молодняка крупного рогатого скота в хозяйствах, занимающихся производством молока / А.Г. Глотов и др. // Сиб. вестн. с.-х. науки. 2008. -№ 3. - С.72 - 78.

33. Глотов, А.Г. Респираторные болезни телят вирусно-бактериальной этиологии / А.Г. Глотов, Т.И. Глотова // РАСХН Сиб. отд-ние, ИЭВСиДВ. -Новосибирск.: Агрос 2008. - 258 с.

34. Глотов, А.Г. Вирусная диарея-болезнь слизистых оболочек крупного рогатого скота/ А.Г. Глотов// Ветеринария. 2008. - №11. С. 56 - 60.

35. Глотов, А.Г. Респираторно-синцитиальная инфекция крупного рогатого скота / А.Г. Глотов, Т.И. Глотова// Ветеринария. 2009. - № 11. -С. 18-23.

36. Говорун В.М. Новые направления в ДНК-диагностике. Полиме-разная цепная реакция в диагностике и контроле лечения инфекционных заболеваний / В.М. Говорун // Мат-лы 2-й Всероссийской науч.-практ. конф. (20-22 января 1998) Москва, 1998. - С. 12 - 13.

37. Гоппе, В.А. Этиологическое значение вирусов инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи-болезни слизистых в возникновении респираторных болезней телят: автореф. дисс. канд. вет. наук / В.А. Гоппе. Новосибирск, - 2005. - 19 с.

38. Грязин, В.Н. Вирусные респираторные заболевания телят и меры борьбы с ними: автореф. дисс. канд. вет. наук. / В.Н. Грязин. Новосибирск, 1983.-20 с.

39. Гулюкин, М.И. Система ветеринарно-санитарных, профилактических и лечебных мероприятий против инфекционных болезней крупного рогатого скота в хозяйствах российской Федерации / М.И. Гулюкин и др.; ГНУ ВИЭВ, ФГУ «Центр ветеринарии». М., - 2007. - С. 14.

40. Гуненков, B.B. Респираторно-синцитиальная инфекция/ B.B. Гуненков., Г.А. Халенев, В.Н. Сюрин// Животноводство и ветеринария. М.,1975. Т.8. - С. 70-76.

41. Денер, JI. Разработка метода получения высокоактивного респираторно-синцитиального вирусного диагностикума для непрямой реакции гемагглютинации/ JI. Денер, P.C. Дрейзен, О.Д. Янкевич и др.// Вопросы вирусологии. 1976. - №6. - С. 739 - 745.

42. Джупина, С.И. Методы эпизоотологического исследования и теория эпизоотического процесса. /С.И. Джупина Новосибирск: Наука, 1991.-142 с.

43. Жидков, С.А. Изучение этиологии респираторных заболеваний телят/ С.А. Жидков// Тезисы докладов IV Всесоюз. вет. вирусолог, конф.1976.-№2.-С. 34-40.

44. Жидков, С.А. Роль вирусной диареи в этиологии респираторных и желудочно-кишечных болезней телят/ С.А. Жидков и др. // Вест. Рос. акад. с-х наук. 1995. - №3. - С. 50 - 53.

45. Зайцев, Ю.Н. Особенности проявления ассоциированных инфекций телят, обусловленных вирусами вирусной диареи, инфекционного ринотрахеита и бактериями рода Pasteurella: автореф. дис. . канд. вет. наук / Ю.Н.Зайцев. Новосибирск, - 2007. - 17 с.

46. Закутский, Н.И. Инфекционный ринотрахеит (ИРТ) и парагрипп-3

47. ПГ-3) крупного рогатого скота на комплексах / Н.И. Закутский, В.И. Жестерев, Л.Д. Конакова// Ветеринарная газета. 2000. - № 22 (191). - С.4.

48. Иванова, И.П. Инфицированность стад крупного рогатого скота в хозяйствах Минской области / И.П. Иванова, П.А. Красочко// Актуальные проблемы патологии сельскохозяйственных животных: мат-лы между нар. конф. Минск, 2000. - С. 105 - 106.

49. Кашин, A.C. Профилактика и лечение респираторных болезней телят в современных экологических условиях / A.C. Кашин // Мат-лы. науч.-практ. конф. Иркутск, - 2001. - С. 81 - 84.

50. Коннов, Н.М. Проявление абортов и дерматита у крупного рогатого скота, вызванных вирусом инфекционного ринотрахеита / Н.М. Коннов, М.К. Нигматулин // Диагностика, профилактика и методы борьбы с туберкулёзом животных. Казань, - 1985. - С. 53 - 56.

51. Конопаткин, A.A. Эпизоотологические проблемы смешанных инфекций в современном животноводстве / А.А.Конопаткин // Патология органов дыхания и пищеварения сельскохозяйственных животных. М.: Изд-во MB А, - 1983. - С. 3 - 9.

52. Конопаткин, A.A. Эпизоотология и инфекционные болезни сельскохозяйственных животных /A.A. Конопаткин и др.. М.: Колос, -1984. - 544 с.

53. Кочиш, Т.М. Разработка набора реагентов для определения уровня антител к респираторно-синцитиальному вирусу крупного рогатого скота в иммуноферментном анализе: автореф. дис. . канд. биол. наук / Т.М. Кочиш. Щелково, 2004. - 23 с.

54. Красочко, П.А. Эпизоотологическое обследование коров на вирусы инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи по наличию антител в сборном молоке / П.А. Красочко // Тез. докл. 111 Всесоюз. конф., Новосибирск, 1991. - С. 123 - 124.

55. Крюков, H.H. Инфекционный ринотрахеит (пустулёзный вульвова-гинит) крупного рогатого скота / H.H. Крюков // Бюл. ВИЭВ. 1972. -Вып.37. - С. 146 - 149.

56. Крюков, H.H. Вирусные респираторные болезни крупного рогатого скота/ H.H. Крюков, З.Ф. Зудилина, С.И. Евдокимов // Ветеринария. 1976. -№6.-С. 111-113.

57. Крюков, H.H. Инфекционный ринотрахеит пустулёзный вульвовагинит крупного рогатого скота / H.H. Крюков// Итоги науки и техники. Животноводство и ветеринария. - М. - 1980. - С. 32 - 113.

58. Крюков, H.H. Микробный пейзаж и иммунологическая реактивность у телят, выращиваемых в условиях промышленной технологии / H.H. Крюков, А.Т. Семенюта, Э.А. Шегидевич // Тр. ВИЭВ. М., 1984. - Т.60. -С. 15-23.

59. Куриленко, А.Н. Инфекционные болезни молодняка сельскохозяйственных животных / А.Н. Куриленко, B.JI. Крупальник. М.: Колос, 2001.- 113 с.

60. Лебедев, Л.И., Авилов B.C. О некоторых биологических свойствах респираторно синцитиального вируса / Л.И. Лебедев, B.C. Авилов //Актуальные вопросы вет. вирусол. тез. докл. 5-й Всесоюз. науч. конф. -Казань, 1980.-С.83.

61. Лещинская, Н.П. Респираторно-синцитиальная вирусная инфекция / Н.П. Лещинская, Л.Е. Камфорин // Медицина и здравоохранение: сер. эпидемиология, вирусология и инфекционные заболевания. М.,1986. - 77 с.

62. Лисицын, В.В. Проблема колострального иммунитета у новорожденных телят / В.В. Лисицын и др. // Ветеринарная патология. 2007. - №1. -С. 161-164.

63. Магомедов, М.З. Бронхопневмония телят, её патогенез, функциональная морфология и фармакотерапия композиционными пролонгированными препаратами: автореф. дисс. . д-ра вет. наук / М.З. Магомедов. -Москва, 2007.-41 с.

64. Майборода, А.Д., Выделение вируса и клинико-морфологические особенности ИРТ у телят раннего возраста / А.Д. Майборода, К.А. Кашкинбаева // Ветеринария. 1977. - № 3. - С. 54 - 55.

65. Майярд, Р. Значимость вакцинации против вирусной респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота перед отелом/ Р. Майярд// Ветеринария. 2004. - №4. - С. 4 - 5.

66. Мак Керчер, Д.Г. Вирусы и проблема воспроизводства крупного рогатого скота /Д.Г. Мак Кечер //Сельское хозяйство за рубежом. 1970. -№7.-С. 31 -32.

67. Макаревич, В.Г. Чувствительность культур клеток к вирусу диареи крупного рогатого скота /В.Г. Макаревич, В.П. Назаров// Актуальные вопросы вет. вирусол. Изд-во MB А, 1967. 4.2. - С. 45 - 49.

68. Мартынов, Ю.В. Выделение РСВ от телят с респираторным синдромом// Патогенез, лечение и профилактика болезней жвачных животных в Западной Сибири / Ю.В. Мартынов, М.И. Орлов. Омск, 1985. -С. 22-24.

69. Марченко, С.Б. Синтез полистирольных латексов в присутствии смеси ПАВ для иммунодиагностических тест-систем/ С.Б. Марченко и др.// Вопросы физ.-хим. Биологии в ветеринарии. М., 2002. - С. 28-31.

70. Матвеева, И.Н. Тест-система ИФА для определения антител к респираторно-синцитиальному вирусу крупного рогатого скота/ И.Н. Матвеева и др. // Ветеринария и кормление. 2006. - № 6. - С.28 - 29.

71. Матвеева, И.Н. Получение антигена респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота для использования в ИФА / И.Н. Матвеева // Ветеринария. 2007. - № 11. С. 49 - 51.

72. Матвеева, И.Н. Промышленные технологии изготовления компонентов моно- и комплексных диагностикумов инфекционных заболеванийживотных: автореф. дис. д-ра биол. наук / И.Н. Матвеева. Кащинцево, 2008. - 24 с.

73. Метревели, Г.Д. Испытание сухого эритроцитарного диагностикума PC-инфекции крупного рогатого скота / Метревели Г.Д. и др. //Сб. науч. тр. ВГНКИ ветпрепаратов. М., 1983. - С. 57 - 60.

74. Метревели, Г.Д. Реакция непрямой гемагглютинации (РИГА) в диагностике респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота / Г.Д. Метревели //Сб. науч. тр. ВГНКИ ветпрепаратов. М., 1983. -С. 99 -100.

75. Метревели, Г.Д. Биологические свойства вируса и серологическая диагностика PC-инфекции крупного рогатого скота: автореф. дис.канд. биол. наук. / Г.Д. Метревели. Москва, 1989. - 19 с.

76. Методические указания по лабораторной диагностике пастереллезов животных и птиц; Министерство сельского хозяйства. — Москва, 1992. 16 с.

77. Мищенко, В.А. Особенности респираторных инфекций телят / В.А. Мищенко и др. // Ветеринария. 2000. - №9. - С. 5 - 6.

78. Мищенко, В.А. Особенности эпизоотологии инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота / В.А. Мищенко, О.И. Гетманский, Ю.Е. Ручнов, Ю.А. Костыркин // Мат-лы научно-практической конф.-Новосибирск, 2001.- С. 12 14.

79. Муравьев, В.Н. Вспышка острого респираторного заболевания телят, вызванная респираторно-синцитиальным и адено-вирусом/ В.Н. Муравьев, Г.В. Усманова, В.М. Беляев, В.И. Басов// РЖ Ветеринария.- 1986.-№7.-С. 11.

80. Науменков, В.И. Вопросы этиологии и динамики эпизоотического процесса при вирусных пневмоэнтеритах телят / В.И. Науменко // Ветеринария. 1994. - №2. - С. 23-24.

81. Немченко, М.И. Основные причины высокой заболеваемости телят / М.И. Немченко, М.М. Наумов // Ветеринария. 1987. - № 3. - С. 19-23.

82. Нестеренко, В.Ф. Действие диметилсульфоксида (ДМСО) на репродукцию вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней в культуре клеток/ В.Ф. Нестеренко, Е.С. Воронин// Сб. науч. тр. М., МВА, 1983. -С. 32-35.

83. Обухов И.Л. Применение полимеразной цепной реакции в ветеринарии / И.Л. Обухов, А.Н. Панин // Аграрная Россия. 2002. - №2. - С. 62 - 64.

84. Петрова, И.А. Влияние некоторых веществ на повышение титра вируса инфекционного ринотрахеита в культуре клеток/ И.А. Петрова, О.И. Сухарев, А.В. Васильев// Сб. науч. тр. М.: МВА., 1980. - Т.113. - С. 56 - 58.

85. Петрова, О.Г. Острые респираторные заболевания крупного рогатого скота. Диагностика, профилактика, лечение /О.Г. Петрова// Екатеринбург. -1995.-41с.

86. Петрова, О.Г. Острые респираторные вирусные инфекции крупного рогатого скота в племенных хозяйствах среднего Урала и оптимизация системы противоэпизоотических мероприятий: автореф. дисс. д-ра. вет. наук / О.Г. Петрова. Москва, 2002. - 47 с.

87. Петрова, О.Г. Острые респираторные вирусные инфекции крупного рогатого скота в Свердловской области /О.Г. Петрова и др. // Ветеринария. 2002. -№ 2. - С. 11-15.

88. Петрова, О.Г. Особенности эпизоотического процесса и динамика распространения ОРВИ КРС на Среднем Урале/ О.Г. Петрова и др. // Вет.патология 2006. - №3. - С. 101 - 104.

89. Прингл, К. Пневмовирусы //Вирусология. Методы: Пер. с англ.; Под ред. Б. Мейхи /К. Прингл// М.: Мир, 1988. С. 131 - 159.

90. Пыталев, П.Н. Эпизоотологический надзор за важнейшими инфекциями крупного рогатого скота: автореф. дис. . канд. вет. наук / П.Н. Пыталев. Москва, 1996. - 21 с.

91. Саики, Р. Полимеразная цепная реакция. Анализ генома. Методы. Под ред. К. Дейвиса. /Р. Саики, У. Гиленстен, Г. Эрлих. М.: Мир, 1990. - С. 176-189.

92. Сергеев, В.А. Репродукция и выращивание вирусов животных/ В.А. Сергеев. М.: Колос, 1976. - 302 с.

93. Сергеев, В.А. Структура и биология вирусов животных/ В.А. Сергеев, Б.Г. Орлянкин. М.: Колос, 1983. - С. 252 - 267.

94. Слепенко, Т.Б. Выделение из клеток и изучение свойств вируса герпеса индеек: автореф. дис .канд. биол. наук/ Т.Б. Слепенко. Москва, 1987.- 19с.

95. Соминина, A.A. Получение комплементсвязывающего антигена PC в суспензионных клеточных культурах / A.A. Соминина, Н.Р. Румель //Сб. тр., ВНИИ гриппа. 1976. - №17. - С. 116 - 120.

96. Сюрин, В.Н. Диагностика вирусных болезней животных/ В.Н. Сюрин, Р.В. Белоусова, Н.В. Фомина. М.: Агропромиздат, 1991. - 528 с.

97. Сюрин, В.Н. Вирусные болезни животных/ В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьев, Н.В. Фомина. М. ВНИТБП, 1998. - 928 с.

98. Трофимова, М.Г. Повышение чувствительности реакции пассивной гемагглютинации с эритроцитарным диагностикумом респираторно-синцитиального вируса / М.Г. Трофимова, И.Н. Быков, Н.С. Семенов // Вопр. вирусологии. 1985. - № 2. - С. 236 - 239.

99. Третьяков, А.Д. Эпизоотическая ситуация в мире по ИРТ-ИПВ КРС /А.Д. Третьяков, H.H. Крюков, С.И. Картушин // Ветеринария. 1975. - № 5. -С. 103-110.

100. Усов, С.М. Иммунологические аспекты терапии и профилактики инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота: автореф. дис. . канд. вет. наук /С.М. Усов. Минск, 1998. - 21 с.

101. Устинов, Д.А. Стресс-факторы в промышленном животноводстве / Д.А. Устинов М.: Россельхозиздат, - 1976. - 166 с.

102. Фарботко, Г.Э. Эпизоотическая обстановка по инфекционному ринотрахеиту крупного рогатого скота на племпредприятиях / Г.Э. Фарботко, К.Н. Кондрахина, Л.Д. Павлова // Ветеринария. 1994. - № 8. - С. 27 - 30.

103. Федоров, Ю.Н. Иммунологический фактор, как причина желудочно-кишечных заболеваний у телят / Ю.Н. Федоров // Матер, кругл ого стола отд. вет. медицины РАСХН. М, 2000. - С. 36 - 37.

104. Федоров, Ю.Н. Иммунокоррекция: применение и механизм действия иммуномодулирующих препаратов / Ю.Н.Федоров // Ветеринария. -2005.-№2.-С. 3-6.

105. Федоров, Ю.Н. Иммунный статус и инфекционные болезни новорожденных телят и поросят / Ю.Н.Федоров //Ветеринария 2006. -№ 11.- С. 3 5.

106. Халенев, Г.А. Респираторно-синцитиальная, реовирусная и ринови-русная инфекция крупного рогатого скота/ Г.А. Халенев, В.В. Гуненков // Лекция 15-я. MBA. М., 1977. - С. 3 - 9.

107. Харламбиев, Х.Е. Изоляция респираторно-синцитиальния вируса от телят с респираторным заболеванием / Х.Е. Харламбиев, Р. Бостанджиева, Г.К. Георгиев, Б. Митов//Вет. мед. науки,- София, 1984.- XXI.- №2 -С. 3-7.

108. Чекишев, В.М. Профилактика респираторных заболеваний на крупных фермах / В.М. Чекишев, А.И. Кабанцев // Ветеринария. 1983 - №4.- С. 14-16.

109. Чекишев, В.М. Иммунологические аспекты резистентности телят: автореф. дисс. . д-ра вет.наук / В.М. Чекишев Москва,- 1985.- 42 с.

110. Шадрина, М.Н. Профилактика респираторных болезней телят / М.Н. Шадрина, А.Г. Хохлов // Ветеринария. 1983. - № 9. - С. 12.

111. Шахов, А.Г. Этиология, терапия и профилактика болезней молодняка сельскохозяйственных животных / А.Г. Шахов, С.М. Сулейманов // Мат-лы координац. совещ.- Воронеж, 1995. С. 12.

112. Шахов, А.Г. Нарушение обмена веществ у стельных коров / А.Г. Шахов, В.Т. Самохин // Мат-лы. круглого стола отд. вет. медицины РАСХН. М., 2000. - С. 10 - 14.

113. Шаматава, Н. М. Пастереллез (Инфекционные болезни крупного рогатого скота) /Н.М. Шаматава. М. : Колос, 1974. С. 157 - 169.

114. Шегидевич, Э.А. Состояние и перспективы изучения пастереллезов сельскохозяйственных животных / Э.А. Шегидевич // Тр. ВИЭВ. М, 1984. -Т. 60.-С. 58-63.

115. Шегидевич, Э.А. Роль пастерелл в респираторной патологии овец и крупного рогатого скота: автореф. дис. докт. вет. наук / Э.А. Шегидевич. -Москва, 1993.-42 с.

116. Шегидевич, Э.А. Природа, этиологическая структура, патогенез, диагностика массовых желудочно-кишечных заболеваний новорожденных телят и меры борьбы с ними /Э.А. Шегидевич и др. // Труды ВИЭВ. М., 2003. -Т.73. - С. 15-22.

117. Шипицын, А.Г. Особенности течения респираторных болезней телят на комплексах и в хозяйствах репродукторах в Краснодарском крае / А.Г. Шипицин // Мат-лы науч.-прак. конф. - Иркутск, - 2001. - С. 80.

118. Шкиль, H.A. Экологический подход к обоснованию методов профилактики болезней молодняка / H.A. Шкиль и др. // Мат-лы. науч.-практ. конф. Томск, 2002. - С. 92 - 96.

119. Шульпин, М.И. Индикация вируса диареи крупного рогатого скота, генотипирование и филогенетический анализ изолятов, выявленных на территории Российской Федерации / М.И. Шульпин, П.К. Аянот, В.А. Мищенко // Вопросы вирусологии. 2003. - №5. - С. 41 - 46.

120. Щербаков, П.Н. Профилактика и лечение при желудочно-кишечных и респираторных болезнях телят / П.Н. Щербаков, А.Г. Гусев // Ветеринария. 2002. -№ 3. - С. 15-16.

121. Южаков, А.Г. Типизация и филогенетический анализ нецитопатогенных изолятов вируса вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота / А.Г. Южаков и др. // Ветеринария. -2009. № 6. - С. 29 - 32.

122. Юрлова, Т.И. Изучение естественной популяционной изменчивости респираторно-синцитиальных вирусов по их интерферирующим и репродуктивным свойствам / Т.И. Юрлова, Н.Я. Зощенко, JI.C. Карпова //Acta vi rol. - 1985. - № 29. - С. 273 - 284.

123. Юров, К.П. Профилактика инфекционных болезней телят / К.П. Юров, А.Ф. Шуляк// Мат-лы науч.-практ. конф. Новосибирск, 2001. -С. 9-10.

124. Юров, К.П. Распространение инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота в различных регионах России / К.П. Юров и др. // Труды ВИЭВ. 2003, Т. 73.-С. 15-22.

125. Achenbach, J.E. Detection and quantitation of bovine respiratory syncytial virus using real-time quantitative RT-PCR and quantitative competitive RT-PCR assays/ J.E. Achenbachet al.// J. Virol. Methods. 2004. - P. 1 - 6.

126. Ackermann, M. Pro and contra IBR-eradication/ M. Ackermann, M. Engels //Veterinary Microbiology. 2006. - Vol.113. - P. 293 - 302.

127. Ames, T. R. The epidemiology of BRSV infection / T.R. Ames // Veterinary Medicine. 1993. -Vol. 88. - P. 881 - 884.

128. A1 Darraji, A.M. Experimental infection of lambs with bovine respiratory syncytial virus and Pasteurella heamolytica: clinical and microbiologic studies / A.M. A1 Darraji et al. // Am. J.Vet. Res.- 1982.- Vol. 43.- P. 236 240.

129. Aim, K. Acute BRSV infection in young AI bulls: effect on sperm quality / K. Aim, E. Koskinen, S. Vahtiala, M. Andersson // Reprod Domest Anim. 2009. - Vol. 44. - P. 456 - 459.

130. Almeida, R.S. Detection of bovine respiratory syncytial virus in experimentally infected balb/c mice / R.S. Almeidaet al. // Vet. Res. 2004. -Vol. 35.-P. 189-197.

131. Almeida, R.S., BRSV subgroup B is circulating in Brazil. / R.S. Almeida et al. // The Veterinary Record 2005.

132. Andrews, A.H. Respiratory disease. / A.H. Andrews, R. Blowey, H. Boyd, R. Eddy // Bovine Medicine: Diseases and Husbandry of Cattle. Blackwell Scientific Publications, Oxford: 2004. - P. 286 - 293.

133. Angen, O. Respiratory disease in calves: microbiological investigations on trans-tracheally aspirated bronchoalveolar fluid and acute phase protein response / O. Angenet al. //Vet. Microbiol. 2009. - Vol. 28. - P. 165 - 171.

134. Antonis, A.F.G. Vaccine-Induced Immunopathology during Bovine Respiratory Syncytial Virus Infection: Exploring the Parameters of Pathogenesis/ A.F.G. Antonis, R.S. Schrijver, F. Daus // Journal of Virology. 2003. - Vol. 77. -P. 12067 -12073.

135. Antonis, A.F. Vaccination with recombinant modified vaccinia virus Ankara expressing bovine respiratory syncytial virus (bRSV) proteins protects calves against RSV challenge / A.F. Antonis et al. // Vaccine. 2007. - Vol. 15. -P. 4818-4827.

136. Antonis, A.F. Age-dependent differences in the pathogenesis of bovine respiratory syncytial virus infections related to the development of natural immunocompetence / A.F. Antonis et al. // J. Gen. Virol. 2010. - Vol. 91. - P. 2497 - 2506.

137. Arns C.W., Characterization of bovine respiratory syncytial virus isolated in Brazil / C.W. Arns et al. // Brazilian Journal of Medical and Biological Research. 2003. - Vol. 36. - P. 213 - 218.

138. Atreya, P.L. The NS2 protein of human respiratory syncytial virus is a protein inhibitor of minigenome transcription and RNA replication / P.L. Atreya, M.E. Peeples, P.L. Collins // J. Virol. 1998. - Vol. 72. - P. 1452 - 1461.

139. Babiuk, L.A. Viral-bacterial synergistic interaction in respiratory disease. / L.A. Babiuk, M.J. Lawman, H.B. Ohmann // Advanced Virus Research -1988. Vol. 35. - P. 219 - 249.

140. Babiuk, L.A. Immunology of bovine herpesvirus 1 infection / L.A. Babiuk, S. Van Drunen Littel-van den Hurk, S.K. Tikoo // Vet. Microbiol. -1996. Vol. 53, № 1-2. - P. 31 - 42.

141. Bachi, T. Morphogenesis and ultrastructure of respiratory syncytial virus// T. Bachi, C. Howe// J. Virol. 1973. - Vol. 12. - P. 1173 - 1180.

142. Baker, J.C. Seroepizootiologic study of bovine respiratory syncytial virus in a dairy herd / J.C. Baker, T.R Ames, R.J. Markham // American Journal of Veterinary Research 1986. - Vol. 47. - P. 240 - 245.

143. Baker, J.C. Study on the etiologic role of bovine respiratory syncytial virus in pneumonia of dairy calves / J.C. Baker et al. // JAVMA 1986. - Vol. 189.-P. 66-70.

144. Baker, J.C. The characteristics of respiratory syncytial viruses / J.C. Baker // Vet. Med. 1993. - Vol. 88. - P. 1190 - 1195.

145. Baker, J.C. Bovine respiratory syncytial virus / J.C. Baker // Veterinary Clinics of North America Food Animal Practice. 1997. - Vol. 13. - P. 425 - 454.

146. Bartha, A. Bovin respiratory syncytial virusfertozottseg es kovetkez-menyei nagyuzemi szarvasmarhaallamanyokban / A. Bartha, M. Benko, F. Vetisi //Magyar allatov. Lapja. 1986. - v. 41. N 8. - P. 451 - 454.

147. Beaudeau, F. Spatial patterns of bovine corona virus and bovine respiratory syncytial virus in the Swedish beef cattle population /F. Beaudeau, C. Bjorkman, S. Alenius, J. Frossling // Acta. Vet. Scand. 2010. - Vol. 21. - P. 33.

148. Beaudeau, F. Associations between bovine coronavirus and bovine respiratory syncytial virus infections and animal performance in Swedish dairy herds / F. Beaudeau, A. Ohlson, U. Emanuelson // J. Dairy. Sci. 2010. - Vol. 93. -P. 1523-1533.

149. Belak, S. Application of the polymerase chain reaction (PCR) in veterinary diagnostic virology / S. Belak, A. Ballagi-Pordany // Veterinary Research Communications 1993a. - Vol. 17. - P. 55 - 72.

150. Belak, S. Experiences on the application of the polymerase chain reaction in a diagnostic laboratory / S. Belak, A. Ballagi-Pordany // Molecular and Cellular Probes. 1993b. - Vol. 7. - P. 241 - 248.

151. Belak, S. Molecular diagnosis of animal diseases: some experiences over the past decade / S. Belak, P. Thoren // Expert Review of Molecular Diagnostics -2001. Vol. 1. - P. 434 - 443.

152. Belanger, F. Electron microscopic evidence for bridges between bovine respiratory syncytial virus particles / F. Belanger et al. // J. Gen. Virol. 1988. -Vol. 69. - P. 1421 - 1424.

153. Belknap, E.B., The role of passive immunity in bovine respiratory syncytial virus-infected calves / E.B. Belknap et al. // Journal of Infectious Diseases 1991. - Vol. 163. - P. 470 - 476.

154. Belknap E.B. Recognizing the clinical signs of BRSV infection / E.B. Belknap // Vet. Med. 1993. - Vol. 88. - P. 886 - 887.

155. Belknap, E.B., Experimental respiratory syncytial virus infection in calves and lambs / E.B. Belknap, D.K. Ciszewski, J.C. Baker // Journal of Veterinary Diagnostic Investigation 1995. - Vol. 7. - P. 285 - 298.

156. Bengtsson, B. Respiratoriska virus projekt, panorama och behindlingsstrategier / B. Bengtsson, S. Viring // In: Veterinarmote, Uppsala, Sweden - 2000. - P. 153 - 158.

157. Berghaus, L.J. Effects of dual vaccination for bovine respiratory syncytial virus and Haemophilus somnus on immune responses / L.J. Berghaus et al. // Vaccine. 2006. - Vol. 14. - P. 6018 - 1627.

158. Berthiaume, L. Comparative structure, morphogenesis and biological characteristics of the respiratory syncytial (RS) virus and the pneumonia virus of mice / L. Berthiaume, J. Joncas, V. Pavilanis //Arch. ges. Virusforsch. 1974. -Vol. 45.-P. 39-51.

159. Bidokhti, M.R. Reduced likelihood of bovine coronavirus and bovine respiratory syncytial virus infection on organic compared to conventional dairy farms / M.R. Bidokhti et al. // Vet. J. 2009. - Vol. 182. - P. 436 - 440.

160. Bolin, S.R. Prevalence of bovine viral diarrhea virus genotypes and antibody against those viral genotypes in fetal bovine serum / S.R. Bolin, J.F. Ridpath // J. Vet. Diagn. Invest. 1998. - Vol. 10. - P. 135 - 139.

161. Bossert, B. Nonstructural proteins NS1 and NS2 of bovine respiratory syncytial virus bloc activation of interferon regulatory factor 3 / B. Bossert, S. Marozin, K.-K. Conzelmann // J. Virol. 2003. - Vol. 77. - P. 8661 - 8668.

162. Boxus, M. Real Time RT-PCR for the detection and quantitation of bovine respiratory syncytial virus / M. Boxus, C. Letellier, P. Kerkhofs // J. Virol. Methods. 2005. - Vol. 125. - P. 30.

163. Brodersen, B.W. Bovine respiratory syncytial virus. / B.W. Brodersen. // Vet Clin North Am Food Anim. Pract. 2010. - Vol. 26. - P. 323 - 333.

164. Brogden, K.A. Polymicrobial Diseases / K.A. Brogden, J.M. Guthmiller // J. Virol. 2002. - P. 328.

165. Brock, K.V. Development of a fetal challenge method for the evaluation of bovine diarrhea virus vaccines / K.V. Brock, C.C. Chase // Vet. Microbiol. -2000. Vol. 77. - P. 209 - 214.

166. Brock, K.V. Experimental fetal challenge using type II bovine viral diarrhea virus in cattle vaccinated with modified-live virus vaccine / K.V. Brock, V.S. Cortese // Vet. Therapeutics. 2001. - Vol.2. - P. 354 - 360.

167. Brock, K.V. Protection against Fetal Infection with Either Bovine Viral Diarrhea Virus Type 1 or Type 2 Using a Noncytopathic Type 1 Modified-Live Virus Vaccine / K.V. Brock et al. // Vet. Ther. 2006. - Vol. 7(1). - P. 27 - 34.

168. Bryson, D.G. Observations on outbreaks of respiratory disease in housed calves(l) Epidemiological, clinical and microbiological findings / Bryson, D.G.,

169. J.B. McFerran, H.J. Ball, S.D. Neill // The Veterinary Record 1978a. - Vol. 103.- P. 485 89.

170. Bryson, D.G. Observations on outbreaks of respiratory disease in housed calves(2) Pathological and microbiological findings /D.G. Bryson,, J.B. McFerran, HJ. Ball, S.D. Neill // The Veterinary Record 1978b. - Vol. 103. - P. 503 - 509.

171. Bryson, D.G. Respiratory syncytial virus pneumonia in young calves: clinical and pathologic findings / D.G. Bryson, M.S. McNulty, E.F. Logan, P.F. Cush //Am. J. Vet. Res. 1983. - Vol. 44. - P. 1648 - 1655.

172. Bryson, D.C. Ultrastructural features of alveolar lesions in induced respiratory syncytial virus pneumonia of calves / D.C. Biyson, S. McConnell, M. McAliskey, M.S. McNulty // Vet. Pathol. 1991. - Vol. 28. - P. 286 - 292.

173. Bryson, D.G. Necropsy findings associated with BRSV pneumonia / D.G. Bryson // Vet. Med. 1993. - Vol. 88. - P. 894 - 899.

174. Bryson, D.G. The calf pneumonia complex current thoughts on aetiology / D.G. Bryson // Cattle Practice 2000. - Vol.8. - P. 103 - 107.

175. Brownlie, J. Experimental production of fatal mucosal disease in cattle / J. Brownlie, M.C. Clarke, C.J. Howard//Vet. Rec.- 1984.- Vol. 114.-P. 535 536.

176. Brownlie, J. Experimental infection of cattle in early pregnancy with a cytopathic strain of bovine viral diarrhea virus / J. Brownlie, M.C. Clarke, C.J. Howard // ResVetSci. 1989. - Vol. 46. - P. 307 - 311.

177. Brownlie, J. Protection of the bovine fetus from bovine viral diarrhoea virus by means of a new inactivated vaccine / J. Brownlie,et al. // VetRec. -1995. Vol.137. - P. 58 - 62.

178. Bunt, A.A. Virus taxonomy, Eigth report of the International Committee on Taxonomy of Virus / A.A. Bunt et al. // London. 2005. - P. 655 - 671.

179. Calnek, B.W. In vitro methods for assay of turkey herpesvirus/ B.W. Calner et al.// Avian Dis. 1972. - Vol.16. - P. 52 - 56.

180. Cane, P.A. Identification of variable domains of the attachment (G) protein of subgroup A respiratory syncytial-virus / P.A. Cane, D.A. Matthews, C.R. Pringle// J. Gen. Virol. 1991. - Vol. 72. - P. 2091 - 2096.

181. Carman, S. Severe acute bovine viral diarrhea in Ontario 1993-1995/ S. Carman et al. // J. Vet. Diagn. Invest. 1996. - Vol.10. - P. 27 - 35.

182. Chalal, Y. D. The pathogenesis of bovine respiratory syncytial virus infection in lung organ cultures/ Y.D. Chalal, Y. Elazhary// Abstrs79th Annu. Mett. Amer. Soc. Microbiol. Los Angeles Calif., 1979.

183. Chang, J. Respiratory syncytial virus infection suppresses lung CD8+T-cell effector activity and peripheral CD8+T-cell memory in the respiratory tract / J. Chang, T.J. Braciale // Nat. Med. 2000. - Vol. 8. - P. 54 - 60.

184. Charlier, G. Propagation of bovine respiratory syncytial virus in calftesticle microcarrier culture/ G. Charlier et al.// Arch. exp. Veterinarmed. -1984. V.38, №6. - P. 894 - 899.

185. Childs, T.X. Disease in cattle Saskatchewan / T.X. Childs // Can. J. Comp. Med. 1946. - Vol.10. - P. 316 - 319.

186. Collins, J.K. Association of bovine respiratory syncytial virus with atypical interstitial pneumonia in feedlot cattle / J.K. Collins et al.// Am. J. Vet. Res. 1988. - Vol. 49. - P. 1045 - 1049.

187. Corbeil, L.B. Specificity of IgG and IgE antibody responses to Haemophilus somnus infection of calves / L.B. Corbeil et al. // Vet Immunol Immunopathol. 2006. - Vol. 15. - P. 191 - 199.

188. Corbeil, L.B. Histophilus somni host-parasite relationships / L.B. Corbeil // Anim. Health. Res. Rev. 2007. - Vol. 8. - P. 151 - 160.

189. Collett, M.S. Genomic structure of BVDV. Bovine Viral Diarrhea Virus: A 50 year review. Cornell University Press, Ithaca, NY.Compendium of Veterinary Products: 2003. Seven Edition. North American Compendiums, Pon Huron, MI. P. 302 - 309.

190. Cortese, V.S. Protection of pregnant cattle and their fetuses against infection with bovine viral diarrhea virus type 1 by use of a modified-live virus vaccine / V.S. Cortese et al. // Am. J. Vet. Res. 1998. - Vol. 59 (11). -P. 1409-1413.

191. Cortese, V.S. Clinical and immunological responses of vaccinated and unvaccinated calves to infection with avirulent type II isolate of bovine viral diarrhea virus / V.S. Cortese et al. // J. Am. Vet. Med. Assoc. 1998. - Vol. 213. -P. 1312-1319.

192. Cortese, V.S. Specificity and duration of neutralizing antibodies induced in healthy cattle after administration of a modified-live virus vaccine against bovine viral diarrhea / V.S. Cortese et al. // Am. J. Vet. Res. 1998. - Vol. 59. -P. 848 - 850.

193. Cote, P.J. Monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus: detection of virus neutralization and other antigen-antibody systems using infected human and murine cell/ P.J. Cote et al.// J. Virol. Meth. 1981. - Vol.3. - P. 137 - 147.

194. De Jong, M.C., Quantitative investigation of population persistence and recurrent outbreaks of bovine respiratory syncytial virus on dairy farms / M.C. De Jong et al. // American Journal of Veterinary Research 1996. - Vol. 57. - P. 628 - 633.

195. Deplanche, M. In vivo evidence for quasispecies distributions in the bovine respiratory syncytial virus genome / M. Deplanche et al. // J. Gen. Virol. -2007. Vol. 88. - P. 1260 - 1265.

196. Deregt, D. Bovine viral diarrhea virus: biotypes and disease /D. Deregt, K.G. Loewen // Can. Vet. J. 1995. - Vol. 36 (6). - P. 71 - 78.

197. Doggett, J.E. A study of an inhibitor in bovine serum active against respiratory syncytial virus/ J.E. Doggett et al.// Arch, ges.virusforsch. 1968. -Vol. 23. - P. 126 - 137.

198. Doreleijers, J.F. Solution structure of immunodominant region of protein G of bovine respiratory syncytial virus / J.F. Doreleijers et al. // Biochemastry -1996. Vol. 35. - P. 14684 - 14688.

199. Drew, T.W. The detection of bovine viral diarrhoea virus in bulk milk samples by the use of a single-tube RT-PCR. / T.W. Drew, F. Yapp, D.J. Paton // Vet. Microbiol. 1999. - Vol. 64(2-3). - P. 145 - 154.

200. Dubovi, E.J. Inhibition of respiratory syncytial virus by BIS (5-amidino-2-bensimidazolyl) met-hane / E.J. Dubovi, J.D. Gerats, R.R. Tidwell //Virology. 1980. - Vol. 103. - P. 502 - 504.

201. Dubovi, E.J. Enhancement of respiratory syncytial virus induced cytopathology by trypain, thrombin and plasmin / E.J. Dubovi, J.D. Gerats, R.R. Tidwell // Infect. Immun. -1983. -V. 40. - P. 351 - 358.

202. Dubovi, E.J. Diagnosing BRSV infection: A laboratory perspective / E.J. Dubovi // Veterinary Medicine. 1993. - Vol. 88. - P. 888 - 893.

203. Elazhary, M.A.S.Y. A natural outbreak of bovine respiratory disease caused by bovine respiratory syncytial virus / M.A.S.Y. Elazhary, A. Silim, M. Morin // Cornell. Vet. 1982. - Vol. 72. - P. - 352 - 333.

204. Eleraky, N.Z. The ovine respiratory syncytial virus F gene sequence and its diagnostic application/ N.Z. Eleraky, S.A. Kania, Z.N.D. Potgieter// Journal of Veterinary Diagnostic Invertigation. 2001. - Vol.13, №6. - P. 455 - 461.

205. Ellis, J.A. Fatal pneumonia in adult dairy cattle associated with active infection with bovine respiratory syncytial virus / J.A. Ellis et al. // Can. Vet. J. -1996. Vol. 3. - P. 103 - 105.

206. Ellis, J.A. Update on viral pathogenesis in BRD / J.A. Ellis // Anim. Health. Res. Rev. 2009. - Vol. 10. - P. 149 - 153.

207. Elvander, M. Severe respiratory disease in dairy cows caused by infection with bovine respiratory syncytial virus / M. Elvander // The Veterinary Record 1996. - Vol. 138. - P.loi - 105.

208. Engels, M. Pathogenesis of ruminant herpesvirus infections / M. Engels, M. Ackermann // Veterinary Microbiology. 1996. - Vol. 53. - P. 3 - 11.

209. Ersboll, A. K. Spatial modelling of the between-herd infection dynamics of bovine virus diarrhoea virus (BVDV) in dairy herds in Denmark / A. K. Ersboll et al. // Prev Vet Med. 2010. - Vol. 97. - P. 83 - 89.

210. Fent,G.M. Bovine adenovirus serotype 7 infections in postweaning calves / G.M. Fent, R.W. Fulton, J.T. Saliki. //American Journal of Veterinary Research. 2002. - Vol. 63. - P. 976 - 978.

211. Fernil B.F. The stabilization and purification of respiratory syncytial virus using MgS04. / B.F. Fernil, J.L. Gerin //Virology. 1980. - Vol. 106. -P. 141 -144.

212. Fernil B.F. The development of BALB/c cells persistent lye infected with respiratory syncytial virus: Presone of ribonucleoprotein on the cell surface / B.F. Fernil, E.C. Ford, J.L. Gerin // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1981. - Vol. 167. - P. 83 - 86.

213. Freymuth, F. Detection of respiratory syncytial virus by reverse transcription RCR and hybridization with a DNA enzyme immunoassay / F. Freymuth, G. Eugene, A. Varbret // J. Clin. Microbiol. - 1995. - Vol. 33. -P. 3352-3355.

214. Frey, H.R. Die IBR/IPV Infektionen und ihre Problematik / H.R. Frey // Rinderproduktion. - 1983. - Vol. 6. - P. 24 - 25.

215. Fulton R. W. Prevalence of bovine viral diarrhea virus (BVDV) in persistently infected cattle and BVDV subtypes in affected cattle in beef herds in south central United States / R. W. Fulton et al. // Can J Vet Res. 2009. - Vol. 73.-№4.-P. 283-291.

216. Furze, J.M. Antigenic heterogenicity of the attachment protein of bovine respiratory syncytial virus / J.M. Furze, G. Wertz, G. Taylor // J. Gen. Virol. -1994. Vol. 75. - P. 363 - 370.

217. Furze, J.M. Antigenically distinct G glucoproteins of BRSV strains shape a high degree of genetic homogeneity / J.M. Furze, S.R. Roberts, G.W. Wertz, G. Taylor // Virology. 1997. - Vol. 231. - P. 48 - 58.

218. Gabathuler, K. Respiratoriches Syncitialvirus in der Riderpraxis / K. Gabathuler //Schweiz. Arch. Tierheilk. 1983. - H. 125. - S.149 - 153.

219. Gaddum, R.M. Recognition of bovine respiratory syncytial virus protein by bovine CD8+T lymphocytes / R.M. Gaddum et al. // Immunology 2003. -Vol. 108. - P. 220 - 229.

220. Gaffuri, A. Serosurvey of roe deer, chamois and domestic sheep in the central Italian Alps /A. Gaffuri et al.//J Wildl Dis.- 2006.-Vol. 42.- P. 685 690.

221. Germann, D. Clinical evaluation of respiratory tract infections due to RSV. Adenovirus, Parainfluenza 1,2,3, Influenza A and B and diagnosed Within 24h using an EJA/ D. Germann et al.//Experientia.- 1986.-Vol. 42.- №1.- P. 91.

222. Gershwin, L.J. Bovine respiratory syncytial virus infection: immunopathogenic mechanisms / L.J. Gershwin // Anim. Health. Res. Rev. -2007. Vol. 8. - P. 207 - 213.

223. Gershwin, L.J. Effect of infection with bovine respiratory syncytial virus on pulmonary clearance of an inhaled antigen in calves / L.J. Gershwin, R.A. Gunther, W.J. Hornof, R.F. Larson //Am. J. Vet. Res. 2008. - Vol. 69. -P. 416-422.

224. Gibbs, E.P.J. Bovine Herpesviruses. Part 1. Bovine Herpesvirus 1/ E.P.J. Gibbs, M.M. Rweyemamu // Veterinary Bulletin, Weybridge. 1977. -Vol. 47. - P. 317 - 343.

225. Gilbert, S. A. Typing of Bovine Viral Diarrhea Viruses Directly from Blood of Persistently Infected Cattle by Multiplex PCR / S.A. Gilbert., K.M. Burton, S.E. Prins, D. Deregt// J. of Clin, microbiol. 1999. - Vol. 37. - №. 6. -P. 2020-2023.

226. Gillete, K.G. Respiratory syncytial virus infection in transported calves / K.G. Gillete, P.C. Smith //Am. J. Veter. Res. 1985. - Vol. 46. - P. 2596.

227. Goris, K. Differential sensitivity of differentiated epithelial cells to respiratory viruses reveals different viral strategies of host infection / K. Goris et al. // J. Virol. 2009. - Vol. 83. - P. 1962 - 1968.

228. Greenhalgh, D. Backward bifurcation, equilibrium and stability phenomena in a three-stage extended BRSV epidemic model / D. Greenhalgh, M. Griffiths // J. Math. Biol. 2009. - Vol. 59. - P. 1 - 36.

229. Grooms, D.L. Screening of neonatal calves for persistent infection with bovine viral diarrhea virus by immunohistochemistry on skin biopsy samples/ D.L. Grooms, E.D. Keilen// Clin. Diagn. Lab. Immunol.- 2002.-Vol.9 (4).- P.898 -900.

230. Gulliksen, S.M. Respiratory infections in Norwegian dairy calves / S.M. Gulliksen et al. // J. Dairy. Sci. 2009. - Vol. 92. - P. 5139 - 5146.

231. Hage, J.J. Population dynamics of bovine herpesvirus 1 infection in a dairy herd / J.J. Hage et al. // Vet. Microbiol.- 1996. Vol. 53. - P. 1690 - 1800.

232. Hagglund, S. Dynamics of virus infection involved in the bovine respiratory syncytial disease complex in Swedish dairy herds / S. Hagglund et al. // Vet. J. 2006. - Vol. 172. - P. 320 - 328.

233. Hakhverdyan, M. Evaluation of a single-tube fluorogenic RT-PCR assay for detection of bovine respiratory syncytial virus in clinical samples./ M. Hakhverdyan , S. Hagglund , L.E. Larsen , S. Belak // J. Virol. Methods. 2005. -P. 195 - 202.

234. Hall, C.B., Douglas R.G., Geiman J.M. Respiratory syncytial virus infections in infants; quantitation and duration of shedding / C.B. Hall, R.G. Douglas, J.M. Geiman //J. Pediat. 1976. - Vol. 89. - P. 11 - 15.

235. Hall, C.B. Possible transmission by fomites of respiratory syncytial virus / C.B. Hall, R.G. Douglas //J. Inf. Dis. 1980. - Vol.141. - P. 98 - 102.

236. Hall, C.B. Modes of transmission of respiratory syncytial virus / C.B. Hall, R.G. Douglas //J. Pediat. 1981. - Vol. 99. - P. 130 - 103.

237. Hall, C.B. Respiratory syncytial virus and parainfluenza virus / C.B. Hall // New England Journal of Medicine 2001. - Vol. 344 -P. 1917-1928.

238. Halstead, D.C. Evaluation of five methods for respiratory syncytial virus detection/ D.C. Halstead, S.Tood, G. Fritch// J. Clin. Microbiol. 1990. - 28. -№5.-P. 1021-1025.

239. Hartel, H. Viral and bacterial pathogensin bovine respiratory disease in Finland/ H. Hartel et al.// Acta vet.scand.- 2004.- Vol. 45, № 3- 4.- P. 193 200

240. Himmes, S.R. Bovine respiratory syncytial virus fusion protein gene: sequence analysis of cDNA and expression using a baculovirus vector / S.R. Himes, L.G. Gershwin // J. Gen. Virol. 1992. - Vol. 73. - P. 1563 - 1567.

241. Houe, H. Epidemiology of bovine viral diarrhea virus / H. Houe // Vet. Clin. N. Amer: Food An Pract. 1995. - Vol. 11. - P. 521 - 547.

242. Houe, H. Serological analysis of a small herd sample to predict presence or absence of animals persistently infected with bovine viral diarrhoea virus (BVDV) in dairy herds / H. Houe // Res. Vet. Sci.- 1992.- Vol. 53.- P. 320 323.

243. Inaba, Y. Nomi virus, a virus isolated from an appearently new epizootic respiratory disease of cattle / Y. Inaba, Y. Tanaka, H. Ito, T. Omori, M. Matumoto // Japan. J. Microbiol. 1970. - Vol. 14. - P. 246 - 248.

244. Inaba, Y. Bovine respiratory syncytial virus Studies on an outbreak in Japan, 1968 - 1969 / Y. Inaba et al. // Japanese Journal of Microbiology - 1972-Vol. 16. - P. 373 - 383.

245. Inhg, F.S.C.A.M. Clinical and pathological observations an spontaneous bovine respiratory syncytial virus infections in calves / F.S.C.A.M. Inhg, I. Verhoeff, A.P.K.M.I. Nieuwetad // Res. in veter. Sc. 1982. - Vol. 33. -P. 152-158.

246. Ito, Y. Structure of bovine respiratory syncytial virus / Y. Ito, Y. Tanaka, Y. Ianba, T. Omori //Arch. ges. Virusforsch. 1973. - Vol. 40. - P. 198 - 204.

247. Jericho, K.W.T. Bovine herpesvirus 1 and Pasteurella haemolitica: aerobiology in experimentally infected calves / K.W.T. Jericho, A. Lejeune, G.B. Tiffin"// Am. J. Of Vet. Res. - 1986. - Vol. 47. - P. 205 - 210.

248. Jolly, S. Extensive mast cell degranulation in bovine respiratory syncytial virus-associated paroxystic respiratory distress syndrome/ S. Jolly, J.Detilleux, D. Desmecht// Veterinary Immunology Immunopathology. 2004. -Vol. 97. - №3/4. - P. 125 - 136.

249. Jordan, W.S. Growth characteristics of respiratory syncytial virus / W.S. Jordan //J. Immunol. 1962. - Vol. 88. - P. 581 - 590.

250. Jubb, K.V.P. Pathology of Domestic Animals. 1st Ed, Vol 2., New York: Academic Pr. 1963. - P. 12 - 21.

251. Kargen, A. Recombinant respiratory syncytial virus with deletion of the G or SH genes: G and F proteins bind heparin / A. Kargen, U. Schmidt, U.J. Buchholz // J. Gen. Virol. 2001. - Vol. 82. - P. 631 - 640.

252. Kelling, C.L. Investigation of bovine viral diarrhea virus infections in a range beef cattle herd / C.L. Kelling et al. // J. Am. Vet. Med. Assoc. 1990. -Vol. 197. - P. 589 - 593.

253. Kelling, C.L. Testing and management Strategies for effective beef and dairy herd BVDV biosecurity programs / C.L. Kelling et al.// Bovine Practitioners. 2000. - Vol.34. - P. 13 - 22.

254. Kelling, C.L. Evolution of bovine viral diarrhea virus vaccines / C.L. Kelling // Vet Clin Food Anim. 2004. - Vol.20. - P. 115 - 1 29.

255. Kimman, T.O. Epidemiclogical study of bovine respiratory syncytial virus infection in calves: influence of maternal antibodies on the outcome of disease / T.O. Kimman et al. // Vet. Rec. 1988. - Vol. 123. - P. 104 - 109.

256. Kimman, T.G. Pathogenesis of natural acquired bovine respiratory syncytial virus infection in calves: morphologic and serologic findings / T.G.

257. Kimman, P.J. Straver, G.M. Zimmer // Am. J. Vet. Res. 1989. - Vol. 50. -P. 684 - 693.

258. Kingsbury, D.W. Paramyxoviridae and Their Replication. In: Fields Virology / D.W. Kingsbury // Ravens Press. New York 1990. - P. 945 - 962.

259. Kirkland, P.D. The outcome of widespread use of semen from a bull persistently infected with Pestivirus / P.D. Kirkland, S.G. Mackintosh, A. Moyle // Vet Ree. 1994. - Vol. 135. - P. 527 - 529.

260. Kovarcik, K. Respiratory syncytial viruses: pathogenesis, immunology and disease prevention / K. Kovarcik // Vet. Med. Czech. - 1997. - Vol. 42. -P. 256 - 278.

261. Kovarcik, K. Isolation of bovine respiratory syncytial virus during an outbreak of acute respiratory disease in calves / K. Kovarcik // Vet. Med. Czech. - 1999. - Vol. 44. - P. 121 - 127.

262. Kovarcik, K. The development and application of an indirect ELISA test for the detection of antibodies to bovine respiratory syncytial virus in blood serum / K. Kovarcik // Vet. Med.-Czech. 2001. - Vol. 46. - P. 29 - 34.

263. Koves, B. Isolation of respiratory syncytial (RS) virus from coffle diseased with respiratory symptoms / B. Koves, A. Bartha // Acta. vet. Acad. Sci. hung. 1975. - Vol. 25. - P. 357 - 362.

264. Krilov, I.R. Antibody- mediated enhancement of respiratory syncytial virus infection in two monocyte/ macrophage cell lines/ I.R. Krilov et al.// J. Infec. Diseases. 1989. - 160. - №5. - P. 777 - 782.

265. Lambert, D.M. Nucleic acids of respiratiry syncytial virus / D.M.Lambert , M.W. Pons , G.N. Mbuy, K. Dorsch-Hasler//J. Virol. 1980.-Vol. 36. - P. 837 - 846.

266. Lambert, D.M., Pone M.W. Respiratory syncytial virus glycoprotein's / D.M. Lambert, M.W. Pone //Virology. 1983. - Vol. 130. - P. 204 - 214.

267. Larsen, L.E. Extensive sequence divergence among bovine respiratory syncytial viruses isolated during recurrent outbreaks in closed herds / L.E. Larsen, K. Tjornehoj, B. Viuff // Journal of Clinical Microbiology 2000. - Vol. 38. - P. 4222 - 4227.

268. Larsen, L. E. Bovine Respiratory Syncytial Virus (BRSV): A review / L.E. Larsen // Acta. vet. scand. 2000. - Vol. 41. - P. 1 - 24.

269. Larsen, L.E. Bovine respiratory syncytial virus (BRSV) pneumonia in beef calf herds despite vaccination / L.E. Larsen, C. Tegtmeier, E. Pedersen // Acta. Veterinaria Scandinavia 2001. - Vol. 42. - P. 113 - 121.

270. Lathrop, S.L. Association between infection of the respiratory tract attributable to bovine coronavirus and health and growth performance of cattle in feedlots/ S.L. Lathrop et al. // Am. J. veter. Res. 2000. - Vol.61. - №9. -P.1062 -1066

271. Lehmkuhl, H.D. Characterization and identification of a bovine respiratory syncytial virus isolated from Young Calves / H.D. Lehmkuhl, P.M. Cough, D.E. Reed // An. J. veter. Res. 1979. - Vol. 40. - P. 124 - 126.

272. Lehmkuhl, H.D.Morphogenesis and structure of caprine respiratory syncytial virus / H.D. Lehmkuhl, M.H. Smith, R.C. Cutlip //Arch, virol. 1980. -Vol. 65.-P. 269-276.

273. Lekeux, P. Respiratory syncytial virus pneumonia in Friesian calves: physiological findiags / P. Lekeux, J. Verhoeff, R. Hajer, H.J. Breukink // Res. in veter. Sc. 1985. - Vol. 39.

274. Lekeux, P. Bovine respiratory disease complex: an European perspective / P. Lekeux // Bov. Pract. 1995. - Vol. 29. - P. 71 - 75.

275. Levine, S. Effect of respiratory syncytial virus infection on HeLa cell macromolecular synthesis / S. Levine, M. Peebles, R. Hemilton //J. gen. Virol. -1977. Vol. 37. - P. 53 - 63.

276. Lindberg, A.L.E. Bovine viral diarrhea virus infections and its control. A review / A.L.E. Lindberg // Veterinary Quarterly. 2003. - Vol. 5. - P. 1 - 16.

277. Liu, L. Phylogeny, classification and evolutionary insights into pestiviruses / L. Liu et al. //Virology. 2009. - Vol 385. - P. 351 - 357.

278. Luzzago, C. Bovine respiratory syncytial virus seroprevalence and risk factors in endemic dairy cattle herds / C. Luzzago et al. // Vet Res Commun. -2010. Vol. 34. - P. 19 - 24.

279. Madin, S.H. Isolation of IBR virus / S.H. Madin, C.J. York, D.G. Mc Kercher // Science. 1956. - Vol. 126. - P. 721 - 722.

280. Mallipeddi, S.K. Sequence variability of the glycoprotein gene of bovine respiratory syncytial virus / S.K. Mallipeddi, S.K. Samal // J. Gen. Virol. 1993. -Vol. 74. - P. 2001 - 2004.

281. Mallipeddi, S.K. Mapping the domains on the phosphoprotein bovine respiratory syncytial virus required for N-P interaction using a two-hybrid system / S.K. Mallipeddi, B. Lupiani, S.K. Samal // J. Gen. Virol. 1996. - Vol. 77. - P. 1019 -1023.

282. Martin, H.T. Indirect haemagglutination test for the detection and assay of antibody to bovine respiratory syncytial virus //Vet. Rec. 1983. - Vol. 113. -P. 290-293.

283. Matheise, G.P. Antigenic analysis of the F protein of the bovine respiratory syncytial virus: identification of two distinct antigenic sites involved infusion inhibition / G.P. Matheise et al. // Arch. Virol. 1995. - Vol. 140. -P.993 -1005.

284. Matthews, R.E.F. Classification and nomenclature of viruses / R.E.F. Matthews //Intervirology. 1982. - Vol. 17. - P. 104 - 105.

285. Matumoto, M. Bovine Respiratory syncytial Virus: Host Range in Laboratory Animals and Cell Cultures / M. Matumoto et al.//Arch. ges. Virusforsch. 1974. - Vol. 44. - P. 280 - 290.

286. Mawhinney, I.C. Protection against bovine respiratory syncytial virus challenge following a single dose of vaccine in young calves with maternal antibody / I.C. Mawhinney et al. // The Veterinary Record 2005. - Vol. 156. -P. 139-143.

287. McClurkin, A.W. Reproductive performance of apparently healthy cattle persistently infected with bovine viral diarrhea virus / A.W. McClurkin, M.F. Coria, R.C. Cutlip // J. Am. Vet. Med. Assoc. 1979.- Vol. 174. - P. 1116 - 1119.

288. Mcguire, T. Failure of colostral immunoglobulin transfer in calves tlviim from infectious disease / T. Mcguire, N. Pfeiffer, J. Weikel, R. Bartsch // J. Am. Vet. Med. Assoc. 1976. - Vol. 169. - P. 713 - 718.

289. Mcintosh, K. Respiratory Syncytial Viruses. In: Fields Virology / K. Mcintosh, R.M. Chanock // Raven Press. New York 1990. - P. 1045 - 1074.

290. McKercher, D.G. Complications in cattle following vaccination with a combined bovine viral diarrhea-infectious bovine rhinotracheitis vaccine / D.G. McKercher et al. // J. Am. Vet. Med. Assoc.- 1968.- Vol. 152. P. 1621 - 1624.

291. McNulty, M.S. Experimental respiratory syncytial virus pneumonia in young calves: Microbiologic and imnunofluorescent findings / M.S. McNulty, D.G. Bryson, G.M. Allan //Am. J. Vet. Res. 1983. - Vol. 44. - P. 1656 - 1659.

292. Metz, A.E. The epidemic in a closed population with all susceptibles equally vulnerable; some results for large populations and small initial infections / A.E. Metz // Acta Biotheoretica. 1978. - 27. - P. 75 - 123.

293. Metzler, A.E. Praevalenz des Bovinen Herpesvirus 4 in der schweizerischen Rinderpopulation und moeglische Kreuzreaktion mit dem Bovinen Herpesvirus 1/ A.E. Metzler, R. Wyler // Schweiz. Arch. Tierheilk. -1986. Vol.128. - P. 459 - 467.

294. Meyer, G. Human and bovine respiratory syncytial virus vaccine research and development / G. Meyer, M. Deplanche, F. Schelcher // Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. 2008. - Vol. 31. - P. 191 - 225.

295. Miller, A.L. Respiratory syncytial virus-induced chemokine production: linking viral replication to chemokine production in vitro and in vivo / A.L. Miller, T.L. Bowlin, N.W. Lukacs // J. Infect. Dis. 2004. - Vol. 189. - P. 1419 - 1430.

296. Misra, V. Analysis of bovine herpes virus type 1 isolates by restriction endonuclease fingerpritting / V. Misra, L.A. Babiuk, C. Darcel // Arch. Of Virol. 1983. - Vol. 76. - P. 341 - 354.

297. Morris, J.A. Recovery of cytopathogenic agent from chimpanzees with corysa / J.A. Morris, R.E. Blount, R.E. Savage // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. -1956. Vol. 92. - P. 544 - 549.

298. Motha, M.X. Prevalence of IBR, PI 3, BRS and BCV infections in the dairy cattle population of New Zealand / M.X. Motha, M.F. Hansen // New Zealand Veterinary Journal 1998. - Vol. 46. - P. 239 - 240.

299. Norrby, E. Differences on the appearance of antibodies to structural components of measles virus after insunisation with inactivated and live virus / E. Norrby, G. Enders-Ruchle, V. Ter-Meulen //J. Inf. Dis. 1975. - Vol. 132. -P. 262 - 269.

300. Nunez, A. Dofecoion de anticuerpos contra el virus sincitial respiratorio bovine por seroneutralizacion / A. Nunez, S. Castell //Rev. salud anim. 1987. -Vol. 9 - P. 266 - 267.

301. Odegaard, O.A. A field outbreak caused by bovine respiratory cyncytial virus/O.A. Odegaard, J. Krogsrud//Acta vet. Scand.- 1977.- Vol.18.- P.429 431.

302. Odeon, A.C. Experimental infection of calves with bovine viral diarrhea virus genotype II (NY-93)/A.C. Odeon et al. // Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. 1999. - Vol.11. - P. 221 - 228.

303. Ohlson, A. Risk factors for seropositivity to bovine coronavirus and bovine respiratory syncytial virus in dairy herds / A. Ohlson et al. // Vet. Rec. -2010. Vol. 167. - P. 201 -"206.

304. Olafson, P. An apparently new transmissible disease of cattle / P. Olafson, A.D. MacCallum, F.H. Fox // Cornell Veterinarian. 1946. - Vol. 36. -P. 205-213.

305. Openshaw, P.J. Immunopathogenesis of vaccine-enhanced RSV disease / P.J. Openshaw, F.J. Culley, W. 01szewska//Vaccine 2001.- Vol. 20.- P. 27 - 31.

306. Orro, T. Acute phase protein changes in calves during an outbreak of respiratory disease caused by bovine respiratory syncytial virus / T. Orro et al. // Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. 2009. - Vol. 6. - P. 11 - 17.

307. Ortman, K. Use of antimicrobial drugs in Swedish dairy calves and replacement heifers / K. Ortman, C. Svensson // The Veterinary Record 2004. -Vol. 154. - P. 136 - 140.

308. Paccaud, M.F. A respiratory syncytial virus of bovine origin / M.F. Paccaud, A. Jacquier // Arch. des. Virusforsch. 1970. - Vol. 30. - P. 327 -342.

309. Pastey, M.K. Structural and sequence comparison of bovine respiratory syncytial virus fusion protein / M.K. Pastey, S.K. Samal // Virus Res. 1993. -Vol. 29. - P. 195 - 202.

310. Pastey, M.K. Nucleotide sequence analysis of the non-structural NS1 (1C) and NS2 (IB) protein genes of bovine respiratory syncytial virus / M.K. Pastey, S.K. Samal //" Gen/Virol. 1995. - Vol. 76. - P. 193 -197.

311. Pastey, M.K. Analysis of bovine respiratory syncytial virus envelope glycoproteins in cell fusion / M.K. Pastey, S.K. Samal // J. Gen. Virol. 1997. -Vol. 78. - P. 1885 - 1889.

312. Pastoret, P.P. Bovid herpesvirus 1 infection in cattle: pathogenesis, consequences of latency / P.P. Pastoret, E. Thiry, B. Brochier, G. Derboven // Ann. Rech. Vet. -1982. - Vol.13. - P. 221 - 236.

313. Pastoret, P.P. Diagnosis and prophilaxis of infectious bovine rhinotracheitis: The role of virus latency / P.P. Pastoret, E. Thiry // Comp. Immunol. Micribiol. Infect. Dis. 1985. - Vol. 8. - P. 35 - 42.

314. Patel, J.R. Evaluation of efficacy of an inactivated vaccine against bovine respiratory syncytial virus in calves with maternal antibodies / J.R. Patel, S.A. Didlick // American Journal of Veterinary Research 2004. - Vol. 65. -P. 417-421.

315. Paton, A.W. Rapid detection of respiratory syncytial virus in nasopharyngeal aspirates by reverse transcription and polymerase chain amplification / A.W. Paton, J.C. Paton, A.P. Collins // J. Clin. Microbiol. 1992. -Vol. 30. - P. 901 - 904.

316. Pellerin, C. Identification of a new group of bovine viral diarrhea virus strains associated with severe outbreaks and high mortalities / C. Pellerin et al. // Virology. 1994. - Vol. 203. - P. 260 - 268.

317. Perino, L.J. A review of bovine respiratory disease vaccine field efficacy / L.J. Perino, B.D. Hunsaker // Bovine Practitioner 1997. - Vol. 31. - P. 59 - 66.

318. Pirie, H.M. Acute fatal pneumonia in calves due to respiratory syncytial virus/ H.M. Pirie, L. Petrie, E.M. Allan, C.R. Pringle //Vet. Res.- 1981.- Vol. 109. P. 87 - 89.

319. Ploeger, H.W. A sero-epidemiological survey of infections with the bovine respiratory syncytial virus in firstsea son grazing calves / H.W. Ploeger et al. //J. Vet. Med. 1986. - Vol. 33. - P. 311 - 318.

320. Pons Marcel, W. Improvement of respiratory syncytial virus replication in actively growing Hep-2 cells// W. Pons Marcel et al.// J.Virol. Meth. 1983. -Vol.7. - №4.-P. 217-221.

321. Potgieter, L. N. D. Use of the indirect fluorescent antebidy test in the detection of bovine respiratory syncytial virus antibodies in Bovine scrum/ L.N.D. Potgieter, P.L. Aldrida //Amer. J. Vet. Res. 1977. - Vol.38. - P. 1341 - 1343.

322. Potgeiter, L.N.D. Immunology of bovine viral diarrhea virus / L.N.D. Potgeiter // Vet. Clin. North. Am.: Food Anim. Pract. 1995. - Vol. 11. -P. 501-520.

323. Porter, D.D. The age dependence of respiratory syncytial virus growth in ferret lung can be shown in organ and monolayer cultures / D.D. Porter, K.B. Muck, G.A. Prince //Clink Immune. Immune path. - 1980. -Vol. 15.-P. 415-423.

324. Pospisil, L. Isolation and Identification of a Bovine Respiratory Syncytial Virus in Czechoslovekia / L. Pospisil, J. Menik, L. Valicek // Acta. Vet. Brno. 1978. - Vol. 47. - P. 79 - 86.

325. Pringle, C.R. Location and quantization of antigen en the surface of virus-infected cells by specific bacterial adherence and senhing electron microscopy / C.R. Pringle, Parry J.E. //J. Viral. Meth.- 1980.- Vol. 1.- P. 61 75.

326. Prozzi, D. Antigenic and molecular analyses of the variability of bovine respiratory syncytial virus G glycoprotein / D. Prozzi et al.// J. Gen. Virol. -1997. Vol. 78. - P. 359 - 366.

327. Quinting, B. Development of a 1-step enzyme-linked immunosorbent assay for the rapid diagnosis of bovine respiratory syncytial virus in postmortem specimens / B. Quinting et al. // J. Vet. Diagn. Invest. 2007. - Vol. 19. -P. 238 - 243.

328. Radostits, O.M. The control of infectious diseases of the respiratory and digestive tracts of cattle / O.M. Radostits // Can. Vet. J. 1991.-Vol. 32. -P. 311-314.

329. Ridpath, J.F. Segregation of bovine viral diarrhea virus into genotypes / J.F. Ridpath, S.R. Bolin, E.J. Dubovi // Virology. 1994. - Vol. 205. - P. 66 - 74.

330. Ridpath, J.F. Bovine viral diarrhea virus: global status / J.F. Ridpath //Vet. Clin. North. Am. Food Anim. Pract. 2010. - Vol. 26 (1). - P. 105 - 121.

331. Riffault, S. Replication of bovine respiratory syncytial virus in murine cells depends on type I interferon-receptor functionality / S. Riffault et al. // J. Gen. Virol. 2006. - Vol. 87. - P. 2145 - 2148.

332. Riffault, S. A new subunit vaccine based on nucleoprotein nanoparticles confers partial clinical and virological protection in calves against bovinerespiratory syncytial virus / S. Riffault et al.// Vaccine. 2010. - Vol. 7. -P. 3722 - 3734.

333. Rontved, C.M. Increased pulmonary secretion of tumor necrosis factor-alpha in calves experimentally infected with bovine respiratory syncytial virus / C.M. Rontved et al. // Vet. Immunol. Immunopathol. 2000. - Vol. 76. -P. 199-214.

334. Rossi, C.R. Serological evidence for the associationof bovine respiratory syncytial virus with respiratory tract disease in Alabama cattle / C.R. Rossi, G.K. Kiesel //Infect. Immun. 1974. - Vol. 10. - P. 293 - 298.

335. Rossi, C. R. Bovine respiratory syncytial virus infection of bovine embryonic lung cultures: a kinetic study by the fluorescent antibody teohique / C.R. Rossi, G.K. Kiesel //Amer. J. Vet. Res. 1977. - Vol. 38. - P. 1901 - 1904.

336. Rossi, C.R. Bovine respiratory syncytial virus infection of bovine embryonic lung cultures: enhancement of infectivicy with diethylamincethyl-dextran and virus-infected cells / C.R. Rossi, G.K. Kiesel //Arch. Virol. 1 978. -Vol. 58. - P. 227 - 236.

337. Routledge, E.G. The development of monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus and their use in diagnosis byindirect immunofluorescence / E.G. Routledge, J. McQuillin, A.C.R. Samson, G.L. Toms //J. Med. Virol. 1985. - Vol. 15. - P. 305 - 320.

338. Rudd, B.D. differential role for TLR3 in respiratory syncytial virus-induced chemokine expression / B.D. Rudd et al. // J. Virol. 2005. - Vol. 79. -P. 3350 - 3357.

339. Saliki, J. T. Laboratory diagnosis of bovine viral diarrhea virus infections / J. T. Saliki, E. J. Dubovi // Vet. Clin. North. Am. Food Anim. Pract. -2004. Vol.20.1. - P. 69 - 83.

340. Salt, J.S. Efficacy of a quadrivalent vaccine against respiratory diseases caused by BHV-1, PI3V, BVDV and BRSV in experimentally infected calves / J.S.

341. Salt, S J. Thevasagayam, A. Wiseman, A.R. Peters // Vet. J. 2007. - Vol. 174. -P. 616 - 626.

342. Samal, S.K. Molecular cloning and sequence analysis of bovine respiratory syncytial virus mRNA encoding the major nucleocapsid protein / S.K. Samal, M. Zamora, T.H. McPhillips, S.B. Mohanty // Vitology. 1991.- Vol. 180.- P. 453 456.

343. Sandbulte, M.R. T-cell populations responsive to bovine respiratory syncytial virus in seronegative calves/ M.R. Sandbulte, J.A. Roth// Veter. Immonol. Immunohfthol. 2002. - Vol. 84. - №1/2. - P. Ill - 123.

344. Sausker, E.A. Seroprevalence of OHV-2, BVDV, BHV-1 and BRSV in ranch-raised bison (Bison bison) / E.A. Sausker, N.W. Dyer // J. Vet. Diagn. Invest. 2002. - Vol. 14. - P. 68 - 70.

345. Schrijver, R.S. Antibody responses against the G and F proteins of bovine respiratory syncytial virus after experimental and natural infections / R.S. Schrijver et al.// Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology 1996 - Vol. 3 -P. 500-506.

346. Schrijver, R.S. Subgrouping of bovine respiratory syncytial virus strains detected in lung tissue / R.S. Schrijver et al. // Vet. Microbiol. 1996. - Vol. 53.- P. 253 260.

347. Shanthalingam, S. Bighorn sheep fetal lung cell line for detection of respiratory viruses / S. Shanthalingam, C. Topliff, C.L. Kelling, S. Srikumaran // Can. J. Vet. Res. 2010. - Vol. 74. - P. 75 - 77.

348. Shahrabadi, M.S. Calcium reguirement for syncytium formation in HEp-2 cells by respiratory syncytial virus / M.S. Shahrabadi, W.K. Lee Patrick //J. Clin. Microbiol. 1988. - Vol. 26. - P. 139 - 141.

349. Schefers, J. M. Detection, characterization, and control of bovine viral diarrhea virus infection in a large commercial dairy herd / J. M. Schefers, J. E. Collins, S. M. Goyal, T. R. Ames // Can Vet J. 2009.- Vol. 50. - P. 1075 - 1079.

350. Smith, M.H. Isolation and characterization of a. bovine syncytial virus / M.H. Smith, M.L. Frey, R.E. Dierks //Vet. Rec. 1974. - Vol. 94.- P. 599.

351. Spilki, F.R. Phylogenetic relationships of Brazilian bovine respiratory syncytial virus isolates and molecular homology modeling of attachment glucoprotein / F.R. Spilki et al. // Virus. Res. 2006. - Vol. 116. - P. 30 - 37.

352. Stine, L.C. Sequence conservation in the attachment glycoprotein and antigenic diversity among bovine respiratory syncytial virus isolates / L.C. Stine, D.K. Hoppe, C.L. Kelling //Vet. Microbiol. 1997. - Vol. 54. - P. 201 - 221.

353. Stott, E.J. A comparison of three vaccines against respiratory syncytiale virus in calves/ E.J. Stott et al.// J. Hyg. 1984. - Vol. 93. - P. 251 - 261.

354. Stott, E.J. Respiratory syncytial virus: brief review / E.J. Stott, G. Taylor // Arch. Virol. 1985. - Vol. 84. - P. 1 - 52.

355. Straub, O.C. Vorkommen der duren IBR-IPV-viren hervorgerufenen Krankheiten und Moglishe Differential Diagnostische Probleme in den Verschiedenen Kontinenten und Deren Laudern / O.C. Straub // Dt. Tierarztl. Wschr. - 1978. - Vol.85. - P. 84 - 90.

356. Straub, O.C. Advantages in BHV-1 (IBR) research / O.C. Straub // Dtsch. Tierarztl. Wochenschr. 2001. - Vol.108 (10). - P. 419 - 422.

357. Talens, L.T. Efficacy of viral components of a nonabortogenic vaccine for prevention of respiratory and reproductive system diseases in cattle / L.T. Talens, W.H. Beckenhauer, E.T. Thurfer // J. Am. Vet. Med. Assoc. 1989. -Vol. 194. - P. 1273 - 1280.

358. Taylor, G. Monoclonal omtibodies protect against respiratory syncytial virus infection in mice/ G. Taylor et al.//Immunol.- 1984.-Vol. 52.- P. 137 142.

359. Taylor, G. Protective on the fusion protein of respiratory syncytial virus recognized by murine and bovine monoclonal antibodies / G. Taylor et al. // J. Gen. Virol. 1992. - Vol. 73. - P. 2217 - 2223.

360. Taylor, G. Resistance to bovine respiratory syncytial virus (BRSV) induced in calves by a recombinant bovine herpesvirus-1 expressing theattachment glycoprotein of BRSV / G. Taylor et al. // J. Gen. Virol. 1998. -Vol. 79. - P. 1759 - 1767.

361. Taylor, G. DNA vaccination against respiratory syncytial virus in young calves / G. Taylor et al. // Vaccine 2005. - Vol. 23. - P. 1242 - 1250.

362. Teng, M.N. Identification of the respiratory syncytial virus proteins required for formation and passage of helper-dependent infectious particles / M.N. Teng, P.L. Collins // J. Virol. 1998. - Vol. 72. - P. 5707 - 5716.

363. Teng, M.N. Altered growth characteristics of recombinant respiratory syncytial virus which do not produce NS2 protein / M.N. Teng, P.L. Collins // J. Virol. 1999. - Vol. 73. - P. 466 - 473.

364. Thomas, L.H. The growth of respiratory syncytial virus in organ cultures of bovine foetal trachea / L.H. Thomas, E.J. Stoff, J. Jebbett, S. Hamiltot //Arch. Virol. 1976. - Vol. 52. - P. 251 - 258.

365. Thomas, L.H. The possible role of respiratory syncytial virus and Pasteurella spp. in calf respiratory disease / L.H. Thomas et al.// Vet. Rec. -1980. Vol. 107. - P. 304 - 307.

366. Thomas, L.H. Infection of gnotobiotic calves with a bovine and a human isolate of respiratory syncytial virus. Modification of the response by dexamethasone /L.H. Thomas et al.// Arch. Virol. 1984. - Vol. 79. - P. 67 - 77.

367. Timsit, E. Detection by real-time RT-PCR of a bovine respiratory syncytial virus vaccine in calves vaccinated intranasally / E. Timsit et al. // Vet. Rec. 2009. - Vol. 22. - P. 230 - 233.

368. Timsit, E. Evaluation of a commercial real-time reverse transcription polymerase chain reaction kit for the diagnosis of Bovine respiratory syncytialvirus infection / E. Timsit et al.// J. Vet. Diagn. Invest. 2010. - Vol. 22. -P. 238-241.

369. Tjornehoj, K. An experimental infection model for reproduction of calf pneumonia with bovine respiratory syncytial virus (BRSV) based on one combined exposure of calves / K. Tjornehoj et al.// Research in Veterinary Science 2003. -Vol. 74.-P. 55-65.

370. Tlorent, G. Bovines Respiratorisches Syncytial Virus (BRSV) in der Schweiz: Eiene serologische stutie / G. Tlorent, C. DeMarneffe, E. Boiler //Schwauz. I.s.h. Tiasfeuk. 1985. - Vol. 10. - P. 127.

371. Trepanier, P. Concentration of human respiratory syncytial virus usingammonium sulphate polyethylene glycol or hollow fibre ultrafiltration / P. Trepanier, P. Payment, M. Trudel // J. Virol. Meth.- 1981.- Vol. 3. P. 201 - 211.

372. Treuhaft, M.W. A colorimetric assay for quanti fication of defective interfering particles of respiratory syncytial virus / M.W. Treuhaft //J. gen. Virol.-1983. Vol. 64. - P. 1301 -T309.

373. Trudel, M. Comparison of caprine, human and bovine strains of respiratory syncytial virus / M. Trudel et al. // Arch. Virol. 1989. - Vol. 107. -P. 141 -149.

374. Trudel, M. Immunovirological studies on human respiratory syncytial virus structural proteins /M. Trudel et al. //Can. J. Microbiol. 1986. - Vol. 32. -№ l.-P. 15-12.

375. Ueba, O. Purification and polypeptides of respiratory syncytial virus / O. Ueba //Microbiol. Immunol.' 1980. - Vol. 24. - P. 361 - 364.

376. Uttenthal, A. Viral aetiology of enzootic pneumonia in Danish dairy herds: diagnostic tools and epidemiology / A. Uttenthal, N.P. Jensen, J.Y. Blom // The Veterinary Record 1996. - Vol. 139. - P. 114 -117.

377. Uttenthal, A. Antibody dynamics in BRSV-infected Danish dairy herds as determined by isotype-specific immunoglobulins / A. Uttenthal et al. // Veterinary Microbiology 2000. - Vol. 76 - P. 329 - 341.

378. Valarcher, J.-R. Evolution of bovine respiratory syncytial virus / J.-R. Valarcher, R. Schelcher, H. Bourhy //J. Virol.- 2000.- Vol. 74.- P. 10714 10728.

379. Valarcher, J-R. Bovine Respiratory Syncytial Virus Infection; J-F. Valarcher, G. Taylor // Vet. Res. 2007. - Vol. 8. - P. 153 - 180.

380. Valentova, V. Detection of Bovine Respiratory Syncytial Virus in Cell Cultures by Nested RT-PCR and Use of the Method for Virus Identification in Clinical Samples / V. Valentova, K. Kovalik, I. Pikal // Acta Vet. Brno. 2003. -Vol. 72.-P. 115-122.

381. Valentova, V. Restriction enzyme analysis of RT-PCR amplicons as a rapid method for detection of genetic diversity among bovine respiratory syncytial virus isolates / V. Valentova, A.F. Antonis, K. Kovarcik // Vet. Microbiol. 2005. -P. 1-12.

382. Van der Poel, W.H.M. Diagnosis of bovine respiratory syncytial virus infection: a longitudinal epidemiological study in dairy herds / W.H.M. Van der Poel et al.// Arch. Virol. 1993. - Vol. 133. - P. 309 - 321.

383. Van Campen, H. Evidence for bovine viral diarrhea virus type 2 (BVDV)-associated disease in beef herds vaccinated with a modified-live type 1 BVDV vaccine / H. Van Campen et al.// J. Vet. Diagn. Invest. 2000. - Vol. 12. -P. 263-265.

384. Van der Poel, W.H.M. Respiratory syncytial virus infection in human begins and in cattle / W.H.M. Van der Poel, A. Brand, J.A. Kramps, J.T. Van Oirschot // J. Infect. Dis. 1994. - Vol. 29. - P. 215 - 228.

385. Van der Poel, W.H.M. Serological indication for persistence respiratory syncytial virus in cattle and attempts to detect the virus / W.H.M. Van der Poel et al. // Arch. Virol. 1997. - Vol. 142. - P. 1682 - 1696.

386. Van Donkersgoed, J. Epidemiological features of calf mortality due to hemophilosis in a large feedlot / J.Van Donkersgoed, E.D.Janzen, R.J. Harland // Canadian Veterinary Journal. 1990. - Vol.31. - P. 821 - 825.

387. Van Donkersgoed, J. Enzootic calve pneumonia /J. Van Donkersgoed //Dairy Guide. 1991. - 8 p.

388. Van Donkersgoed, J. Epidemiological study of enzootic pneumonia in dairy calves in Saskatchewan / J.Van Donkersgoed, C.S. Ribble, L.G. Boyer, H.G. Townsend // Canadian Journal of Veterinary Research. 1993. - Vol. 57. -P. 247 - 2 54.

389. Van Nieuwstadt, A.P. Epizootological features of infection with infectious bovine rhinotracheitis virus on dairy farms / A.P. Van Nieuwstadt, J. Verhoeff // Tijdschr Diergeeskd. 1983. - Vol. 15(10). - P. 383 - 391.

390. Van Nieuwstadt, A.P. Serology for diagnosis and epizootiological studies of bovine respiratory syncytial virus infections / A.P. Van Nieuwstadt, J. Varhoeff// Research in Veterinary Science. 1983. - Vol. 35. - P. 153 - 159.

391. Van Oirschot, J.T. Bovine herpesvirus in semen of bulls and the risk of transmission: a brief review / J.T. Van Oirschot // Vet. Q. 1995a. - Vol. 17. -P. 29-33.

392. Van Oirschot, J.T. Virulence and genotype of a bovine herpesvirus 1 isolate from semen of a subclinically infected bulls / J.T. Van Oirschot et al. // Vet. Rec. 1995b. - Vol. 137. - P. 235 - 239.

393. Van Schaik, G. Introduction of BHV -1 on dairy farms. Risk assessment by cattle farmers and veterinarias / G. Van Schaik // Tijdschr. Diergeneeskd. -1998. Vol.15. - P. 180 - 183.

394. Verhoeff, J. Bovine respiratory syncytial virus infection young dairy cattle: clinical and haematological findinys / J. Vehoeff, M. Van der Ban, A.P.K.M.I. Nieuwstadt // Vet. Rec. 1984. - Vol. 114. - P. 9 - 12.

395. Vilcek, S. Development of Nested PCR Assays for Detection of Bovine Respiratory Syncytial Virus in Clinical Samples / S. Vilcek, M. Elvander, A. Bllagi-Pordany, S. Belak // Journal of Clinical Microbiology. 1994. - Vol. 32. -P. 2225-2231.

396. Viuff, B. Sites of replication of bovine respiratory syncytial virus in naturally infected calves as determined by in situ hybridization / B. Viuff, A. Uttenthal, C. Tegtmeier, S. Alexandersen // Vet. Pathol. 1996. - Vol. 33. -P. 383 - 390.

397. Wagne, K. Infektiose Bovine Rhinotracheitis Infectiose Pustulose Vulvovaginitis (IBR-IPV) / K. Wagne, W. Becker, K. Zettl // Tierarztl. Praxis. -1982. - Vol. 10. - P. 329 - 338.

398. Walsh, E.E. Purification and characterisation of GP90, one of the en velope dlycoproteins of respiratory syncytial virus / E.E. Walsh, J.J. Schlesinger, M.W. Brandriss // J. gen. Virol. 1984. - Vol. 65. - P. 761 - 767.

399. Waris, M.Rapid detection of respiratory syncytial virus in cell cultures by immunoperoxidase staining with monoclonal antibodies / M.Waris et al.// J.Clin. Microbiol. 1990. - 28. - №6. - C. 1159 - 1162.

400. Wentink, G.H. Risk of infection with bovine herpes virus 1 (BHV1): a review / G.H. Wentink, J.T. van Oirschot, J. Verhoeff. //Vet. Q. 1993. - Vol.15. - P. 30 - 33.

401. Wermann, S.F. Propertis ofa respiratory syncytia virus isolated from a sheep with rhinitis/J.F. Wermann et al.//J.Vet.Res.-1985.-V.46 P. 1230 - 1233.

402. West, K. A comparison of diagnostic methods for the detection of bovine respiratory syncytial virus in experimental clinical specimens / K. West et al.// Canadian Journal of Veterinary Research. 1998. - Vol. 62. - P. 245 - 250.

403. Whiteley, L.O. Pasteurella haemolytica A1 and bovine respiratory disease: pathogenesis / L.O. Whiteley et al.// Journal of Veterinary Internal Medicine. 1992. - Vol.6. - P. 11 - 22.

404. Wilkens, P.A. Diseases of the respiratory system / P.A. Wilkens, J.C. Baker, T.R. Ames // In Smith B.P. (eds) Large Animal Internal Medicine. Mosby Inc., St. Louis: 2002. P. 479 - 491.

405. Wilson, W.D. Alterations in respiratory function / W.D. Wilson, J. Lofstedt // In Smith B.P. (eds) Large Animal Internal Medicine. Mosby Inc., St. Louis: 2002.-P. 46-81.

406. Wittum, T. E. Persistent bovine viral diarrhoea virus infection in U.S. beef herds / T.E. Wittum, D.M. Grotelueschen, K.V. Brock // Prev. Vet. Med. -2001. -№49. -P. 83-94.

407. Woldehiwet, A. The effects of age, environmental temperature and relative humidity on the bacterial flora of the upper respiratory tract in calves / A. Woldehiwet, B. Mamache, T.G. Rowan. //Br. Vet. J. 1990. - Vol.146. -P. 211-218.

408. Woodbine, K.A. A four year longitudinal sero-epidemiological study of bovine herpesvirus type-1 (BHV-1) in adult cattle in 107 unvaccinated herds in south west England / K.A. Woodbine et al.// BMC Vet Res. 2009. - Vol. 30. -P. 55 - 60.

409. Wren, C.G. Detection of respiratory syncytial virus antigen in nasal washings by Abbott Test Pack enzyme Immunoassay/ C.G. Wren et al.// J. Clin. Microbiol. 1990. - 28. - №6. - P. 1395 - 1397.

410. Wunner, W.H Respiratory syncytial virus proteins / W.H. Wunner, C.R. Pringle // Viroligy. 1976. - Vol. 73. - P. 228 - 243.

411. Yaegashi, G. Genetic and antigenic analyses of bovine respiratory syncytial virus detected in Japan / G. Yaegashi, Y.M. Seimiya, Y. Seki, H. Tsunemitsu // J. Vet. Med. Sci. 2005. - Vol. 67. - P. 145 - 150.

412. Yates, W.D. A review of infectious bovine rhinotracheitis, shipping fever pneumonia and viral-bacterial synergism in respiratory disease of cattle /W.D. Yates// Canadian Journal of Comparative Medicine. 1982. - Vol. 46. -P. 225 - 263.

413. Yates, W.D. Interaction between viruses and bacteria in bovine respiratory disease / W.D. Yates // Canad. Veter. J. -1984. Vol.25. - P. 37 - 41.

414. Ye§ilbag, K. Seroprevalence of bovine respiratory viruses in Northwestern Turkey / K. Ye§ilbag, B. Giingor // Trop Anim Health Prod. 2008. -Vol. 40. - P. 55 - 60.

415. Yurlova, T.J. Natural variability of respiratory syncytial viruses, their interference and reproduction characteristics / T.J.Yurlova, N.Ya. Zoshchenkova, L.S. Karpova //Acta Virol. 1985. - Vol. 29. - № 4. - P. 279 - 284.

416. Zecchinon, L. How Mannheimia haemolytica defeats host defence through a kiss of death mechanism. Review article / L. Zecchinon, T. Fett, D. Desmecht // Vet. Res. 2005. - Vol. 36. - P. 133 - 156.

417. Zimmer, G. Proteolytic activation of respiratory syncytial virus fusion protein / G. Zimmer, L. Budz, G. Herrler // J. Biol. Chem. 2001. - Vol. 276. -P. 31642-31650.

418. Zimmer, G. Virokinin, a bioactive peptide of the tachykinin family, is released from the fusion protein of bovine respiratory syncytial virus / G. Zimmer et al. // J. Biol. Chem. 2003. - Vol. 278. - P. 46854 - 46861.

419. Zrein, M. Use of egg-yalk antibody for detection of respiratory syncytial virus in nasal secretions by ELISA/ M.Zrein, G. Obert, M.H. Regonmortel// Arch. Virol. 1986. - Vol. 90. - №3. - P. 197 - 206.

Информация о работе

Строганова, Ирина Яковлевна
доктора биологических наук
Краснообск, 2011
ВАК 06.02.02

Диссертация

Диагностика респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота и особенности проявления болезни в современных условиях ведения животноводства - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы