Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Диагностика, клинико-морфологическая характеристика и лечение краевого сосудистого кератита у лошадей

ВАК РФ 06.02.04, Частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства

Автореферат диссертации по теме "Диагностика, клинико-морфологическая характеристика и лечение краевого сосудистого кератита у лошадей"

Голубева Елена Александровна

ДИАГНОСТИКА, КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ

ХАРАКТЕРИСТИКА II ЛЕЧЕНИЕ КРАЕВОГО СОСУДИСТОГО КЕРАТИТА У ЛОШАДЕЙ

06.02.04 - ветеринарная хирургия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

1 9 СЕН 2013

00553ОА"э

Москва 2013

005533209

Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» (ФГБОУ ВПО МГАВМиБ)

Ведущая организация:

ФГБОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия имени П.А. Столыпина»

Защита диссертации состоится «9» октября 2013 года в 14.00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.042.02 при ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» по адресу: 109472, г. Москва, ул. Академии Скрябина, 23; тел. 377-93-83.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина».

Научный руководитель: Сотникова Лариса Федоровна

доктор ветеринарных наук, профессор, заведующая кафедрой биологии и патологии мелких домашних, лабораторных и экзотических животных ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина»

Официальные оппоненты: Видении Владимир Николаевич

доктор ветеринарных наук, доцент, профессор кафедры оперативной хирургии ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская академия ветеринарной медицины»

Шакирова Фаина Владимировна

доктор ветеринарных наук, доцент, доцент кафедры ветеринарной хирургии ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»

Автореферат разослан http://www.vak2.ed.gov.ru

года и размещен на сайте

Ученый секретарь диссертационного совета

Г.В. Сноз

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Раскрытие механизмом этиопатогенеза и разработка комплекса эффективной диагностики и терапии заболеваний роговицы у лошадей представляет одну из актуальных проблем ветеринарной медицины (Копенкин Е.П., Сотникова Л.Ф., 2008., Сотникова Л.Ф. 2010, 2012, Гончарова A.B. 2012, David J.Maggs, 2006, Charles L. Martin, 2007, Barnett К. С., 2002). При этом в последнее время особое внимание привлекает к себе краевой сосудистый кератит. Данное заболевание отличается быстротой и внезапностью проявления клинических признаков, а также сложностью и длительностью лечения.

Задача диагностики ее многочисленных клинических проявлений не может быть решена без анализа структурно-функционального состояния переднего отрезка глаза на различных этапах патологического процесса. В этой связи чрезвычайно важным и высокоинформативным является разработка алгоритма клинико-офтальмических исследований, позволяющих прогнозировать исход данного заболевания.

Развитие возможных осложнений (острый блефарит, сухой кератоконъюнктивит и др.) и отсутствие параллелей между клиническим течением, гематологическими, иммунобиологическими показателями крови диктует необходимость углубленного изучения клинической картины заболевания неотрывно с учетом состояния обмена веществ организма лошади, а также разработки комплексного метода диагностики и лечения лошадей с краевым сосудистым кератитом.

Недостаточная освещенность данной проблемы в ветеринарной литературе, сложность и многогранность патогенеза заболевания роговицы у лошади, необходимость комплексного изучения данной кератопатии.

Цель исследования: разработать научно обоснованный подход к диагностике, клинико-морфологической, иммунобиологической характеристике и лечению краевого сосудистого кератита у лошадей. Задачи исследования:

1. Изучить факторы риска возникновения и развития краевого сосудистого кератита у лошадей.

2. Представить клинические дифференциально-диагностические критерии краевого сосудистого кератита и изучить его прогностическую значимость.

3. Выявить патоморфологические изменения ткани роговицы у лошадей.

4. Определить морфологические и биохимические показатели крови у лошадей с краевым сосудистом кератитом.

5. Определить иммунобиологические показатели у лошадей с краевым сосудистым кератитом.

6. Разработать схему комплексного лечения краевого сосудистого кератита у лошадей.

Научная новизна. Впервые представлен научно-обоснованный подход к диагностике, клинико-морфологической и иммунобиологической характеристике краевого сосудистого кератита у лошадей. Установлена совокупность факторов предрасполагающих к возникновению (особенности анатомического строения переднего отрезка глаза лошади, иммунодепрессивное состояние) и развитию краевого сосудистого кератита (нагрузки, вакцинации, содержание, эксплуатация).

Выявлено, что краевая васкуляризация, сопровождающаяся инфильтратами и снижением общей слезопродукции являются основными клинико-офтальмическими критериями краевого сосудистого кератита, что нашло подтверждение в результатах, полученных с использованием функционального тестирования (флюоресцеиновый тест, тест Ширмера, проба по Норну). И послужило обоснованием для выявления двух форм заболевания: острой и хронической, характеризующихся патогномоничными признаками и дифференциально-диагностическими критериями. Острое течение протекает с явлениями смешанной инъекцией сосудов конъюнктивы и поверхностной или глубокой краевой васкуляризацией, хроническое течение - перикорнеальной инъекцией с обширными участками инфильтрата в месте локализации сосудов.

Впервые, показано, что заболевание является видоспецифичным, обусловленным особенностями анатомического устройства переднего отрезка глаза лошади и провоцируется иммунодепрессивным состоянием организма, что подтверждается клинико-морфологической и иммунобиологической характеристиками данной патологии.

Выявлено, что иммунный дефицит индуцирует влияние способствующих краевому сосудистому кератиту факторов, таких как, проведение плановых противоэпизоотических мероприятий, перенесенные общесоматические, инфекционные заболевания и функциональные перегрузки.

Теоретическая н практическая значимость. Представлен научно-обоснованный подход к оценке форм течения краевого сосудистого кератита, основанный на анализе клинико-морфологического и иммунобиологического проявления заболевания. Показано, что особенности анатомического устройства переднего отрезка глаза лошади и иммунодепрессивное состояние организма являются основными клинико-офтальмическими маркерами и определяют характер течения заболевания и его прогноз.

Впервые выявлены морфологические закономерности проявления краевого сосудистого кератита, характеризующиеся дистрофическими изменениями кровеносных сосудов в области лимба, морфологическим эквивалентом которых является оксифильность цитоплазмы эндотелиоцитов, увеличением размеров ядер и, как следствие, склеротическими признаками состояния сосудистой стенки артерий и вен в области лимба. Такие локальные эффекты приводят к нарушению питания периферических участков роговицы, развитию краевой васкуляризации, выражающиеся деструктивными преобразованиями тканей роговицы, что подтверждается нарушением в них цитоархитектоники и наличием перицеллюлярного отёка.

Разработан алгоритм клинического исследования органа зрения с применением теста Ширмера, пробы по Норну, флюоресцеинового теста, щелевой биомикроскопии, микробиологического и гистологического исследования, являющиеся высокоинформативными методами дифференциальной диагностики острой и хронической форм краевого сосудистого кератита.

Полученные при клинико-офтальмическом, гистологическом и морфологическом исследованиях данные свидетельствуют, что острая форма краевого сосудистого кератита протекает со смешанной инъекцией сосудов глазного яблока, а так же краевой поверхностной или глубокой васкуляризацией, хроническая, с перикорнеальной инъекцией глазного яблока и обширными участками инфильтрата в месте локализации сосудов. Наличие в коньюнктивальной полости Staphylococcus aureus, Streptococcus spp., Candida spp., Mucor spp., Pseudomonas aeruginosa и др. не влияют на развитие заболевания, а также форму

течения краевого сосудистого кератита, так как степень их числа не превышает 104. А также снижением общего количества лейкоцитов, эозинофилов, палочкоядерных нейтрофилов, повышением содержания аспартатаминотрансферазы, гамма-глутамилтрансферазы и щелочной фосфотазы независимо от формы течения заболевания.

Показано, что основным нарушением клеточного звена иммунитета являлся дисбаланс Т- и В-систем, а также повышение абсолютного числа Т- и В-лимфоцитов по сравнению с контрольными животными. При остром течении это проявляется повышением фагоцитарной активности лейкоцитов на фоне угнетения их переваривающей способности, а при хроническом течении краевого сосудистого кератита - глубоким угнетение всех показателей фагоцитоза.

Выявленные клинико-морфологические параллели у лошадей с разным течением краевого сосудистого кератита позволили обосновать и внедрить в ветеринарную практику две схемы лечения, направленные при острой форме - на снижение воспалительных признаков переднего отрезка глаза и на предупреждение развития вторичной микрофлоры (1 этап); восстановление стабильности прекорнеальной слёзной плёнки (2 этап), при хроническом течении на повышение общей слезопродукции (блеска и влажности) и восстановление стабильности прекорнеальной слёзной плёнки (1 этап); восстановление прозрачности и сферичности роговицы (2 этап).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Формы течения заболевания и особенности клинической картины краевого сосудистого кератита.

2. Краевая васкуляризация, инфильтраты и снижение общей слезопродукции как основные клинико-офтальмические критерии краевого сосудистого кератита.

3. Анатомические особенности глазного яблока лошади и иммунобиологические нарушения - ведущие факторы в развитии краевого сосудистого кератита.

4. Алгоритм терапии краевого сосудистого кератита лошадей с разными формами течения. Критерии оценки эффективности проводимого лечения.

Сведения о практическом использовании научных результатов. Полученные данные используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедре ветеринарной хирургии ФГБОУ ВПО МГАВМиБ. Разработанные в результате научных исследований данные внедрены в ветеринарную практику.

Апробация и публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 7 работ, из них 4 в изданиях, входящих в перечень ВАК РФ. Основные положения работы бьии доложены на I Всероссийской межвузовской конференции по ветеринарной хирургии, Москва 2010, II Всероссийской межвузовской конференции по ветеринарной хирургии, Москва 2011, III Всероссийской межвузовской конференции по ветеринарной хирургии, Москва 2013.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 138 страницах машинописного текста и включает разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, библиографический список. Работа содержит 27 таблиц и 49 рисунков. Библиографический список включает в себя 92 наименования: 42 иностранных и 50 отечественных авторов.

2. СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 2.1.Материалы и методы исследования

Диссертационная работы выполнена на кафедре биологии и патологии мелких домашних, лабораторных и экзотических животных ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» с 2009 по 2013 год.

Для проведения исследования была отобрана группа спонтанно заболевших животных в количестве 46 голов лошадей разных возрастных и половых групп. Морфологические, гематологические, бактериологические и иммунобиологические исследования проводили на 30 животных подобранных по принципу аналогов с учетом возраста и пола, из них 10-е острым течением заболевания, 10 - с хроническим течением и 10 лошадей составляли группу контроля. Контрольные животные не страдали офтальмопатиями, их иммунный статус по данным иммунобиологических исследований, находился в пределах физиологической нормы.

Применяли комплекс методов, включающий, общее клиническое исследование животного, исследование патологической области, гематологические исследования, бактериологическое исследование смыва из конъюнктивальной полости, иммунобиологические и гистологические исследования.

Клинический статус животного оценивали по общепринятым методикам.

При исследовании зоны патологического очага проводили офтальмическое обследование, включающее клинические методы оценки структурного состояния органа зрения, осмотр при боковом (фокальном) освещении и офтальмоскопию. Критериями при этом служили форма и положение век, состояние кожных покровов и краев века, функция мышечного аппарата, форма и величина глазной щели, состояние слезного аппарата. При исследовании конъюнктивы оценивали ее цвет, влажность, количество и характер отделяемого из конъюнктивальной полости. При осмотре роговицы определяли ее форму (сферичность), прозрачность, влажность, зеркальность, наличие васкуляризации, пигментации, Рубцовых изменений и изъязвлений. Дополнительную информацию о состоянии роговицы получали при использовании витальных красителей (1% раствора флюоресцеина). Для определения суммарной слезопродукции использовали функциональный тест Ширмера. С этой целью рабочий конец тест-полоски (5 мм) сгибали на маркированном конце под углом 40-45° и помещали в нижний конъюнктивальный свод в наружной трети глазной щели. При этом перегиб лежал на краю века, а загнутая часть полоски не касалась конъюнктивы. Лошади закрывали глаз, через минуту извлекали тест-полоску и сразу же учитывали результат, измеряя длину увлажненного участка от линии сгиба. Оценку состояния прекорнеальной слезной пленки проводили с помощью пробы по Норну. В нижний конъюнктивальный мешок вводили одну каплю раствора флюоресцеина натрия, после чего определяли время от последнего моргания до появления в подкрашенной слезной пленке разрыва, имеющего вид черного пятна или щели на поверхности роговицы.

Клинико-морфологическое исследование крови проводили по общепринятой методике.

Биохимическое исследование крови выполняли на автоматических многофункциональных биохимических анализаторах: Синхрон 4 (фирма Бекман) и Хитачи (Япония). Использовали реактивы фирм Бекман и Хуматрон.

Бактериологические исследования проводили с использованием универсальных питательных сред: мясопептонного бульона (МПБ), мясопептонногоагара (МПА), специальных, избирательных, дифференциально-диагностических сред.

Для гистологического исследования использовали энуклеированное глазное яблоко от трупов животных. Гистологическое исследование осуществляли по стандартной методике. Изучали гистологические срезы роговицы, склеры, корнеосклерального угла. Полученный материал фиксировали в 10% нейтральном формалине и подвергали обработке по классическим методам. Гистологические срезы окрашивали гематоксилином и эозином и по методу Ван Гизона, подвергали светооптическому изучению и морфометрии с использованием микроскопа Nikon. Исследования и микрофотосъёмку подготовленного материала проводили на микроскопе Leica DMLS, фотографическая насадка Leica 60. Морфологию изучаемых структур осуществляли по методике Г.Г.Автандилова (1990).

Цифровой материал, полученный в процессе исследований подвергали статистической обработки по классической методике.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Результаты исследования факторов риска возникновения и развития краевого сосудистого кератита у лошадей

Результаты исследования факторов риска возникновения и развития краевого сосудистого кератита, свидетельствуют, что заболеванию подвержены лошади разного возраста, пола и породы. Так, в наших исследованиях 19 голов (41%) составляли жеребцы, 11 голов (24%) мерины и 16 голов (35%) составляли кобылы. Данное заболевание может наблюдаться как на одном- 17 лошадей (37% случаев), так и на обоих глазах-29 лошадей (63% случаев).

Краевым сосудистым кератитом страдают лошади орловской рысистой, чистокровной английской скаковой, ольденбургской, башкирской, голштинской, будёновской пород и др.

Отмечено, что краевой сосудистый кератит у лошадей характеризуется сезонностью проявления: чаще всего он встречается в весеннее (60% случаев) и осеннее время года (30 % случаев), в остальное время заболевание возникало зимой (10% случаев).

Установлено, что рекордисты и лошади высоких резвостных классов, чаще переносящие тяжелую физическую нагрузку, в большей степени подвержены данной патологии. Так, из 46 обследованных заболевших лошадей, 9 (20%) находились в интенсивном тренинге и ежемесячно выступали не менее 3 раз. При этом у данных животных после функциональных перегрузок состояние глаз. Вместе с тем, у отдельных особей прогрессирование заболевания не зависело от интенсивности тренинга.

Развитию заболеваний у 7 лошадей (15% случаев) способствовало проведение вакцинаций. Клиническая картина у таких лошадей начинала развиваться через несколько дней после её проведения. У 5 лошадей (11% случаев) отмечали фоновые заболевания глаз: конъюнктивит, блефарит, мейбомит. Клиническое обследование позволило выявить общесоматические заболевания (заболевания желудочно-кишечного тракта) у 11 лошадей (24% случаев), а у 5 лошадей (11% случаев) в результате лабораторных исследований был выявлен лептоспироз. У 4 лошадей (8% случаев) фактором, способствующем развитию краевого сосудистого кератита послужили неблагоприятные условия кормления и содержания: повышенная влажность, плесневые корма, содержание совместно с другими

сельскохозяйственными животными. Немаловажное значение в развитии краевого сосудистого кератита имели поздняя диагностика заболевания и бессистемное лечение (длительное применение стероидных препаратов, нарушение схемы лечения) (5 лошадей, 11% случаев).

Клинико-морфологическая и иммунобиологическая характеристика краевого сосудистого кератита свидетельствует о том, что данная кератопатия является специфическим проявлением анатомической особенности переднего отрезка глаза лошади и провоцируется развитием иммунодепрессивного состояния.

Особенности клинической картины краевого сосудистого кератита у лошадей

Краевая васкуляризация, сопровождающаяся инфильтратами и снижением общей слезопродукции являются основными клинико-офтальмическими критериями краевого сосудистого кератита, что нашло подтверждение в результатах, полученных с использованием функционального тестирования (флюоресцеиновый тест, тест Ширмера, проба по Норну), что послужило обоснованием для выявления двух форм заболевания: острой и хронической, характеризующихся патогномоничными признаками и дифференциально-диагностическими критериями. Острое течение протекает с явлениями смешанной инъекцией сосудов конъюнктивы и поверхностной или глубокой краевой васкуляризацией, хроническое течение - перикорнеальной инъекцией с обширными участками инфильтрата в месте локализации сосудов.

При остром течении у животных наблюдали блефароспазм, выражающийся в уменьшении размеров глазной щели, вплоть до полного смыкания век, усиливающийся после работы, слабовыраженное слезотечение с характерным выделением из носового отверстия у 10 лошадей (100%), гиперемию и отёк век наблюдали в 6 случаях (60%), отечную конъюнктиву ярко красного цвета у 10 лошадей (100%), смешанную инъекцию сосудов глазного яблока у всех исследуемых животных (100%). У 6 лошадей (60%) развивалась поверхностная васкуляризация роговицы. Поверхностные сосуды являлись продолжением сосудов конъюнктивы, они переходили через лимб на роговицу и располагались в её поверхностных слоях под эпителием, при этом древовидно ветвились, образуя анастомозы; имели ярко-красный цвет. В 4 случаях (40%) была отмечена глубокая васкуляризация роговицы, при этом глубокие сосуды, возникающие из склеральных сосудов, характеризовались бледной окраской и прямолинейностью хода.

При хроническом течении краевого сосудистого кератита у животных наблюдали незначительное количество серозно-слизистого экссудата (2 лошади, 20% случаев), перикорнеальную инъекцию сосудов глазного яблока (10 лошадей, 100% случаев), имеющую вид кольца или сектора красно-фиолетового цвета в перикорнеальной зоне, наиболее выраженного вокруг роговицы, которая уменьшалась по направлению к сводам. По мере удаления от роговицы интенсивность инъекции снижалась. Также у всех исследуемых животных была выявлена глубокая (3 лошадей, 30%) или поверхностная (7 лошадей, 70%) васкуляризация роговицы. Нарушение гладкости, сферичности и прозрачности роговицы наблюдали у 10 лошадей (в 100% случаев). При осмотре роговой оболочки у всех лошадей (100%) у самого лимба субэпителиально, а в отдельных случаях с захватом поверхностных или глубоких слоёв стромы, обнаружены инфильтраты серого, серо-белого или жёлто-серого цвета с нечёткими границами. Роговица под инфильтратом была тусклой, матовой и в месте воспаления шероховатой. Инфильтраты имели различную величину, форму, локализацию и

носили диффузный характер. Пропитывание ткани отёчной жидкостью обусловливало появление молочно-подобного помутнения вокруг инфильтрата.

Объективной оценкой состояния роговицы служили также показатели стабильности слёзной плёнки и количественный эквивалент слезопродукции. У всех заболевших животных выявлено снижение слезопродукции и нарушение функции прекорнеальной плёнки, что нашло подтверждение в показателях теста Ширмера и времени разрыва прекорнеальной плёнки (табл.1,2).

Таблица 1

Состояние слезопродукции при краевом сосудистом кератите у лошадей (тест Ширмера)

Длина увлажненного Острое течение 8-12 мм

участка тест- Хроническое течение 5-8 мм

полоски, мм

Контроль более 15 мм

р<0,05

Нарушение стабильности слёзной плёнки (проба по Норну) (Табл. 2) при остром и хроническом течении так же указывало на уменьшение слезопродукции. Выявленное снижение времени разрушения слёзной плёнки является важным показателем её стабильности.

Таблица 2

Оценка стабильности слезной пленки при краевом сосудистом кератите у лошадей

(проба по Норну)

Острое течение 5-8 секунд

Время разрушения менее 5 секунд

слезной пленки, сек Хроническое течение

Контроль 10 секунд и более

р<0,05

Гематологические показатели при краевом сосудистом кератите свидетельствуют о снижении общего количества лейкоцитов (4,9±0,3 р<0,05; 6,6±0,8; р<0,05), эозинофилов (2±1,0 р<0,05; 0; р<0,05) палочкоядерных нейтрофилов (0), скорости оседания эритроцитов независимо от формы течения заболевания и повышение общего количества моноцитов (6±1; р<0,05) при острой форме течения.

Таблица 3

Морфологический состав крови лошадей, больных краевым сосудистым

кератитом_____

П д Гем, Эрит. млн/м кл Лейк. Тыс/м кл Ба] Эоз Нейтрофилы, % Лимф Мон

= В о. я и Т г/л % % М ю пя С я % %

Контр ОЛЬ (11=10) 37,8 ±0,1 38± 3,0 13± 2,0 11,0 ±0,3 8,3±0,2 10±0,3 0 4±1,0 0 0 4±0, 5 51± 5,0 33±1,0 3±1

Первичная форма 38,0 ±0,3 32± 4 12± 3 10,0 ±0,5 8,8±0,7 4,9±0, 3 0 2±1,0 0 0 0 49± 3,0 35±5 6±1

Вторичная форма 37,9 ±0,2 35± 3 11± 2 7,4± 0,6 9,1±1,2 6,6±0, 8 0 0 0 0 0 53± 9,0 32±6,0 2±2

р<0,05

Таблица 4

Сравнительная характеристика скорости оседания эритроцитов при различном

характере течения краевого сосудистого кератита у лошадей_

СОЭ, мм

Группы животных 15 мин 30 мин 60 мин

Контроль (п=10) 6±4 24±7 56±5

Острая форма (п=10) 4±2 10±4 45±9

Хроническая форма (п=10) 0 5±2 35±6

р<0,05

Результаты иммунобиологических исследований у лошадей при краевом сосудистом

кератите

Результаты исследования состояния основных популяций Т- и В- лимфоцитов в зависимости от течения краевого сосудистого кератита представлены в таблице 7. У

больных лошадей выявлены нарушения клеточного звена иммунитета, в основе которых лежит дисбаланс Т- и В- систем, как при остром (65,62±4,7 Т-лимф.,34,38±7,2 В-лимф р<0,05), так и при хроническом (61,01±6,1 Т-лимф., 38,99±7,8 В-лимф. р<0,05) течении. Повышение абсолютного числа Т- и В- лимфоцитов при остром (3150+/-150 Т-лимф.,1650±120-В-лимф. р<0,05) и снижение при хроническом течении (1800±110 -Т-лимф.,1150±90-В-лимф. р<0,05).

Таблица 5

Абсолютное и относительное содержание Т- и В- лимфоцитов в периферической крови при различном характере течения краевого сосудистого кератита

Течение Группы Т-лимфоциты В-лимфоциты

Абс.число (тыс./мл) Отн.число (%) Абс.число (тыс./мл) Отн.число (%)

Острое 1 3150±150 65,62±4,7 1650±120 34,38±7,2

Хроническое 2 1800±110 61,01±6,1 1150±90 38,99±7,8

Контроль 3 2250±220 70,2±1,8 1100±100 28,58±1,65

р<0,05

В иммунограммах больных лошадей (Табл. 6) с острым течением наблюдали повышение фагоцитарной активности (72%±12 р<0,05) на фоне угнетения переваривающей способности (9,6±4,4 р<0,05), при хроническом течении угнетение показателей % фагоцитоза, фагоцитарного числа, на фоне высокого процента числа убитых микробов в стадии поглощения.

Таблица 6

Фагоцитарная активность нейтрофильных гранулоцитов крови у лошадей, больных краевым сосудистым кератитом

Течение Группы % фагоцитоза Фагоцитарное число % убитых микробов в стадии поглощения Индекс завершённости фагоцитоза

Острое 1 72±12 2,2±0,3 9,6±4,4 0,58±0,13

Хроническое 2 44±10 2,0±0,2 34±6,8 0,26±0Д5

Контроль 3 75±2,1 7,9±1,6 17,2±1,2 0,75±0,12

р<0,05

Результаты исследования бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови у опытных и контрольных животных отражены в таблицах 7 и 8. Из которых следует снижение бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови у лошадей с острым и

хроническим течением: 37,63 ± 1,7% ( Р < 0,05) и до 23,17±1,77% (Р<0,05); 42,5±4,25мкг/мл (Р <0,05) и 28,7±3,25мкг/мл (Р<0,05) соответственно.

Таблица 7

Бактерицидная активность сыворотки крови лошадей, больных краевым сосудистым

кератитом

Течение болезни Группы Количество больных животных Бактерицидная активность % Р

острое 1 10 37,63 ±1,7 <0,05

хроническое 2 10 23,17±1,77 <0,05

контроль 3 10 59,65+ 1,8 <0,05

Таблица 8

Лизоцимная активность сыворотки кроки лошадей, больных краевым сосудистым

кератитом

Течение Группы Количество больных животных Лизоцимная активность %к контролю Р

острое 1 10 42,5±4,25 94 <0,05

хроническое 2 10 28,7±3,25 108 <0,05

контроль 3 10 136,2±4,05 - <0,05

Результаты гистологического исследования При исследовании гистологических срезов выявлены деструктивные изменения в области лимба. Особенно ярко выражены дистрофические изменения в сосудах микрогемоциркуляторного русла корнеосклерального угла. В кровеносных капиллярах цитоплазма эндотелиоцитов резко оксифильна, ядра увеличены в размерах, часть клеток подвержена кариопикнозу. В артериях и венах обнаружены склеротические изменения сгенок, признаки хронического венозного застоя. В просвете некоторых вен выявлено присутствие фибриллярного материала, в артериях-вакуолизация цитоплазмы их миоцитов.

Питание участков роговицы, прилегающих непосредственно к лимбу нарушается, что приводит к деструктивным изменениям как клеток, так и межуточного вещества роговицы: отдельные фибробласты находятся в состоянии дистрофии и некроза, обращает на себя внимание перицеллюлярный отёк ткани роговицы.

Компенсаторные реакции нарушения питания периферических отделов роговицы проявляются краевой васкуляризацией.

Результаты исследования биохимических показателей состав сыворотки крови у лошадей при краевом сосудистом кератите При изучении динамики биохимических показателей сыворотки крови установлено, что у лошадей как с острой, так и с хронической формой краевого сосудистого кератита установлено повышение аспартатаминотрасферазы (ACT), (422,4±11,ЗМЕ/л, р< 0,05 и 755,1±34,7 МЕ/л р<0,05 соответственно); увеличение содержания щелочной фосфатазы (ЩФ) (433,0±44,5мг/л, р <0,05,263,0±13,7/мл р<0,05 соответственно).

У лошадей с острым течение установлено также повышение креатинфосфокиназы (КФК) (443,0±21,ОМЕ/л, р <0,05).

Результаты бактериологического исследования конъюнктивального содержимого лошадей с краевым сосудистым кератитом Сравнительный анализ микробного пейзажа конъюнктивальной полости у контрольных животных и лошадей, больных клинически разными формами краевого сосудистого кератита свидетельствует, что форма течения заболевания не зависит от характера микрофлоры, выделяемой из переднего отрезка глаза.

Выявленная условно-патогенная микрофлора: Staphylococcus aureus, Streptococcus spp., Candida spp., Mucor spp., Pseudomonas aeruginosa и др. степень числа которых не превышала 104.

Лечение краевого сосудистого кератита у лошадей Разработанное поэтапное лечение включало в себя как общие принципы терапии воспаления роговицы, так и дифференцированное лечение, с учетом особенностей течения краевого сосудистого кератита (острое и хроническое течение).

Учитывая результаты иммунобиологических, биохимических, морфологических исследований крови независимо от характера течения воспалительного процесса всем больным лошадям назначали общее лечение, включающее сосудоукрепляющие средства, гепатопротекторы и антигистаминные препараты, пробиотики (Табл. 9). Системное лечение назначалось курсами (2 курса) по 30 дней с интервалом 20-25 дней до полного восстановления гематологических показателей. При выявлении лептоспироза использовали препарат Пенстреп в дозе 20-25 мл внутримышечно в течение трёх дней.

Таблица 9

Схема системного лечения краевого сосудистого кератита у лошадей при острой и

хронической форме.

Лекарственные средства Кратность применения

1. Сосудоукрепляющие средства: кальция хлорид 120 мл внутривенно

2. Натрия хлорид 0,9% 3000 мл внутривенно

3. Аскорутин По В табл. 1 раз в день

4. Гепатопротекторы: орнипурал, эссенциале форте По 50 мл 2 раза в неделю По 20 мл в/в через день

5. Антигистаминные средства: димедрол, супрастин По 8 таблеток в течение 10 дней, или по 10 мл внутримышечно.

6. Пробиотики: бифидум По 30 мл 1 раз в день

Этапное местное лечение назначалось соответственно фазе течения воспалительного процесса. При острой форме на 1 этапе лечебная коррекция была направлена на снижение воспалительных признаков переднего отрезка глаза и на предупреждение развития вторичной микрофлоры; на втором - на восстановление стабильности прекорнеальной слёзной плёнки.

При хроническом течении на 1 этапе инициировали повышение общей слезопродукции (блеска и влажности) и восстановление стабильности прекорнеальной слёзной плёнки; на 2 этапе - добивались восстановление прозрачности и сферичности роговицы.

Таблица 10

Схема первого этапа медикаментозного лечения острой формы краевого сосудистого

кератита у лошадей_

Лекарственные средства Кратность применения

1. Стероидные противовоспалительные средства: дексаметазон-офтан, дексаметазон По 1 капле 3-4 раза в день

2. Антибиотики: тобрекс, ципровет, ирис, левомицетиновые глазные капли, флоксал По 1 капле 3-4 раза в день

3. Блокада краниального шейного ганглия: дексаметазон+гентамицин+0,5% новокаин. 1 инъекция через 4-5 дней.

Второй этап был направлен на восстановление стабильности слёзной плёнки.

Таблица 11

Схема второго этапа медикаментозного лечения острой формы краевого сосудистого

кератита у лошадей_

Лекарственные средства Кратность применения

1. Внутримитохондриальный антиоксидант:

«Визомитин» По 1 капле 3-4 раза в день

2. Витаминные препараты: тауфон 4%, витайодурол, офтан-катахром По 1 капле 4 раза в день |

При хроническом течении заболевания 1 этап лечения (Табл. 12) был направлен на повышение общей слезопродукции и восстановление стабильности прекорнеальной слёзной плёнки. Таблица 12 Схема первого этапа медикаментозного лечения хронической формы краевого сосудистого кератита у лошадей

Лекарственные средства Кратность применения

1. Стероидные противовоспалительные средства: дексаметзон-офтан, дексамегазон По 1 капле 3-4 раза в день

2. Антибиотики: тобрекс, ципровет, ирис.левомицетиновые глазные капли, флоксал По 1 капле 4 раза в день

3. Внугримитохондриальный антиоксидант: «Визомитин» По 1 капле 2 раза в день

4. Субъконьюнкгивальные инъекции: дексамегазон + гентамицин + 0,5% новокаин. 1 инъекция в 5-6 дней.

Второй этап лечения был направлен на активацию метаболических процессов в тканях глаза. Таблица 13 Схема второго этапа медикаментозного лечения хронической формы краевого сосудистого кератита у лошадей

Лекарственные средства Кратность применения

1. Внугримитохондриальный антиоксидант: «Визомитин» По 1 капле 2 раза в день

2. Витаминные препараты: тауфон 4%, витайдурол +ПДЭ По 1 капле 3 раза в день

Анализ результатов лечения показывает, что ремиссия воспалительного процесса в переднем отрезке глаза в ближайшем периоде лечения (через 1 месяц после лечения) была достигнута у 17 лошадей (74% случаев). У всех больных животных выявлено восстановление прозрачности и функций роговицы. О нормальном физиологическом состоянии роговицы свидетельствовали показатели стабильности слезной пленки и количественная оценка слезопродукции.

Ближайшие и отдаленные результаты лечения краевого сосудистого кератита у

лошадей

Оценка результатов лечения с различным течением краевого сосудистого кератита проводили в ближайшем периоде, через месяц, три месяца, 6 месяцев и двенадцать месяцев после использованной схемы терапевтических мероприятий.

Ремиссия воспалительного процесса в ближайшем периоде лечения была достигнута у большинства больных лошадей. Наилучшие результаты получены при лечении больных лошадей с начальным острым течением краевого сосудистого кератита. Важно отметить, что стабилизация воспалительного процесса удавалось добиться только при соблюдении рекомендуемых схем лечения.

Стабильное восстановление физиологических барьеров глазного яблока совпадало со сроками окончания системного лечения животного.

Количественной и качественной оценкой состояния роговицы явились показатели стабильности слезной пленки и количественная оценка слезопродукции.

ВЫВОДЫ

1. Краевой сосудистый кератит - специфическая кератопатия лошади, обусловленная особенностями анатомического устройства переднего отрезка глаза и провоцируемая развитием иммунодепрессивного состояния организма, что подтверждается клинико-морфологической и иммунобиологической характеристиками данной патологии.

2. Выявленные клинико-офтальмические и иммунобиологические закономерности свидетельствует о наличии двух основных клинических форм течения данной кератопатии: острой, характеризующейся конъюнктивитом со смешанной инъекцией сосудов глазного яблока, а так же краевой поверхностной или глубокой васкуляризацией, и хронической, с перикорнеальной инъекцией глазного яблока и обширными участками инфильтрата в месте локализации сосудов. Заболевание сопровождается нарушением стабильности слёзной плёнки и снижением количественного эквивалента слезопродукции.

3. Выявлены морфологические закономерности проявления краевого сосудистого кератита, характеризующиеся дистрофическими изменениями кровеносных сосудов в области лимба, морфологическим эквивалентом которых является оксифильносгь цитоплазмы эндотелиоцитов, увеличением размеров ядер и, как следствие, склеротическими признаками состояния сосудистой стенки артерий и вен в области лимба.

4. Такие локальные эффекты в области лимба выражаются деструктивными преобразованиями тканей роговицы, что подтверждается нарушением в них цитоархитекгоники и наличием перицеллюлярного отёка, приводящих к питания периферических участков роговицы и приводящие к краевой васкуляризации.

5. Гематологические показатели при краевом сосудистом кератите свидетельствуют о снижении общего количества лейкоцитов, эозинофилов, палочкоядерных нейтрофилов, и повышение общего количества моноцитов, независимо от формы течения заболевания. Биохимический анализ сыворотки крови выявил повышение содержания аспартатаминотрансферазы, гамма-глутамилтрансферазы и щелочной фосфатазы как при острой форме краевого сосудистого кератиа, так и при хронической.

6. Основным иммунным нарушением является дисбаланс Т- и B-систем. У лошадей с острым течением - повышение фагоцитарной активности лейкоцитов на фоне угнетения их переваривающей способности, а при хроническом течении - глубокое угнетение всех показателей фагоцитоза, а также снижение бактерицидной и лизоцимной активности

7. Вьивленная условно-патогенная микрофлора: Staphylococcus aureus, Streptococcus spp., Candida spp., Mucor spp., Pseudomonas aeruginosa и др. степень числа которых не превышала 104 не влияют на форму течения краевого сосудистого кератита.

8. Разработанное двух этапное лечение направлено при острой форме - на снижение воспалительных признаков переднего отрезка глаза и на предупреждение развития вторичной микрофлоры (1 этап); восстановление стабильности прекорнеальной слёзной плёнки (2 этап), при хроническом течении на повышение общей слезопродукции и восстановление стабильности прекорнеальной слёзной плёнки (1 этап); восстановление прозрачности и сферичности роговицы (2 этап).

Рекомендации по использованию научных выводов

1. Представленные данные о клинической картине, диагностике, морфологии и лечении краевого сосудистого кератита у лошадей, являются фундаментальными для дифференциальной диагностики и прогноза течения заболевания.

2. Целесообразно проводить полноценное обследование животных с использованием морфологического, биохимического и иммунологического анализа крови, теста Ширмера и пробы по Норну для оценки общего состояния организма и достоверной интерпретации структурных и функциональных изменений в тканях роговицы.

3. Полученные результаты целесообразно использовать для дальнейших исследований в области офтальмологии и расшифровке этиопатогенеза данной патологии, а также для разработки методических рекомендаций для ветеринарных офтальмологов, а также в учебном процессе зооветеринарных ВУЗов и факультетов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Голубева, Е.А. Патогенетические особенности течения и развития рубцовых помутнений роговицы у лошадей в условиях Центрального московского

ипподрома /Голубева Е.А.// Международный вестник ветеринарии.-2009.-№4.-с.55-57.

2. Голубева, Е.А. Патогенетические особенности течения краевого сосудистого кератита у лошадей /Голубева Е.А.// Российский ветеринарный журнал.-2009,-№4.-с.29-30.

3. Голубева, Е.А. Факторы, предрасполагающие к возникновению и развитию у лошадей краевого сосудистого кератита /Голубева Е.А.// Ветеринария.-2013.-№6.-с.45-47.

4. Голубева, Е.А. Диагностические критерии и лечение краевого сосудистого кератита у лошадей /Голубева Е.А., Сотникова Я.Ф.ІІ Ветеринарная медицина.-2013.-№1.-с.25-27.

5. Голубева, Е.А. Биохимические и морфологические показатели крови при краевом сосудистом кератите у лошадей /Голубева Е.А.// 1-ая всероссийская межвузовская конференция по ветеринарной хирургии: Сборник научных тезисов.-М. ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2010,- с.55-57.

6. Голубева, Е.А. Ближайшие и отдалённые результаты лечения лошадей с краевым сосудистым кератитом /Голубева Е.А.// 2-ая всероссийская межвузовская конференция по ветеринарной хирургии: Сборник научных тезисов.-М. ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2011.-С.87-91

7. Голубева, Е.А. Причины развития краевого сосудистого кератита у лошадей/Голубева Е.А.// 3-ая всероссийская межвузовская конференция по ветеринарной хирургии: Сборник научных тезисов.-М. ФГБОУ ВПО МГАВМиБ, 2013.-С.98-102.

Клиническая картина при острой форме течения краевого сосудистого кератита

Поверхностная васкуляризация роговицы. Конъюнктивит.

Краевой сосудистый кератит. Васкуляризация.

Блефароспазм. Отёк конъюнктивы и век. Поверхностная васкуляризация.

Гиперемия и отёк конъюнктивы при краевом сосудистом кератите.

Отёк век, поверхностная васкуляризация.

Клиническая картина при хронической форме течения краевого сосудистого кератита

Кровоизлияние в роговицу при краевом сосудистом кератите.

Инфильтрация роговицы воспалительными клетками.

Поверхностная васкуляризация роговицы. Множественные инфильтраты.

Инфильтраты при краевом сосудистом кератите.

Васкуляризация роговицы, инфильтраты.

Глубокая васкуляризация роговицы. Инфильтрат.

Глубокая васкуляризация роговицы.

Гистологические исследования

Склеротическое состояние сосудов лимба. Дистрофическое состояние в собственном Окраска гематоксилин и эозин, об.Ю ок. 20 веществе роговицы. Окраска гематоксилин

и эозин, об.Ю ок. 20

Аутоиммунный паренхиматозный краевой сосудистый кератит.

Подписано в печать: 20.08.2013 Тираж: 100 экз. Заказ №101 Отпечатано в типографии «Реглет» г. Москва, Ленинградский проспект д.74 (495)790-47-77 www.reglet.ru