Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Дезамидирование и протеолиз запасного белка пшеницы при прорастании
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Белтей, Наталья Константиновна

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Запасные белки зерна пшеницы и их изменения при прорастании.

2,1.1. Запасные белки пшеницы.

2.1.1.1. Глиадин.

2.1.1.2. Глютенин

2.1.1.3. Белковый комплекс клейковины.

2.2. Изменения клейковины при прорастании •••.••.•••.

2.3. Дезамидирование запасных белков при прорастании.

2.4. Протеолитические ферменты в зерне злаков .•••.•

2.4.1. Протеолитические ферменты в покоящемся зерне.

2.4.2. Протеолитические ферменты в прорастающем зерне.

2.4.3. Очистка протеаз злаков

2.4.4. Экзопептидазы

2.4.4.1. Карбоксипептидазы

2.4.4.2. Амино- и дипептидазы.

2.5. Распад запасных белков двудольных растений при прорастании.••••

2.6. Сходство распада запасных белков в семенах двудольных и злаков.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Материалы.

3.1.1. Растительный материал .•••••.

3.1.2. Субстраты.

3.1.3. Хроматографические материалы.

3.2. Методы исследования

3.2.1. Определение протеолитической активности

3.2.2. Гидролиз белков клейковины

3.2.3. Определение амидного азота

3.2.4. Определение белка

3.2.5. Электрофорез.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1. Протеиназа А прорастающего зерна пшеницы

4.1.1. Исследование возможностей очистки протеиназы А.

4.1.2. Очистка протеиназы А

4.1.3. Некоторые свойства протеиназы А.

4.1.3.1. Оптимум активности

4.1.3.2. Молекулярная масса

4.1.3.3. Действие некоторых эффекторов

4.1.4. Изменение активности протеиназы А при прорастании зерна пшеницы.

4.1.5. Гидролиз клейковины пшеницы протеиназой А

4.1.6. Итоги исследования протеиназы А пшеницы.

4.2. Дезамидирование белков клейковины в прорастающем зерне пшеницы.

4.2.1. Дезамидирование запасных белков пшеницы

4.2.2. Дезамидирование белков in vitro ферментными препаратами из прорастающих семян пшеницы.

4.2.3. О существовании фермента, дезамидирующего белки.

5. ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Дезамидирование и протеолиз запасного белка пшеницы при прорастании"

Начальные этапы роста, предшествующие переходу растения к автотрофному питанию, во многом определяют его последующее развитие. Из многих биохимических процессов, протекающих в этот период, одним из наиболее существенных является распад запасных веществ и, в частности, запасных белков семян, обеспечивающий питание проростка. Протеолиз запасных белков отличается от обычного внутриклеточного протеолиза тем, что происходит расщепление ограниченного числа белков, обладающих специфичной структурой, и тем, что механизм протеолиза включается лишь на определенной стадии развития растения в начале прорастания.

Особый интерес поэтому представляют способы регуляции распада запасных белков и возможная роль структуры последних в этом процессе.

Исследования последнего десятилетия, основанные на использовании собственных запасных белков в качестве субстратов, позволили показать существование протеиназ, инициирующих распад запасных белков (протеиназы А) и изучить их действие на запасные белки /53, 55, 143, 185, 193, 204/. Выявлена также физиологическая роль уже сравнительно давно известной модификации запасных белков при прорастании /5, 43, 192/. Эти результаты, однако, получены в основном при изучении семян бобовых.

В случае злаков также обнаружены протеиназы, сходные с протеиназами А, но очищена только соответствующая протеиназа зерна кукурузы /45/, а их действие на запасные белки не исследовано.

Не установлена также модификация запасных белков злаков при прорастании. Единственным указанием на возможность такой модификации является изменение физических свойств запасного белка пшеницы - клейковины при прорастании зерна /34, 35/.

Таким образом, в настоящее время нет достаточных данных для сопоставления механизма распада запасных белков злаков и бобовых растений.

В связи со сказанным в задачу настоящей работы входили: разработка методов получения высокоочищенного препарата про-теиназы А пшеницы, изучение ее действия на клейковину и изучение дезамидирования клейковины при прорастании, как одного из возможных путей ее модификации.

Научная новизна. С помощью ковалентной хроматографии на ртуть-сефарозе, гель-фильтрации и аффинной хроматографии на иммобилизованном гемоглобине получен очищенный в 1680 раз препарат протеиназы А пшеницы, содержащий более 50% активного фермента. Показано, что протеиназа А пшеницы способна к практически полному расщеплению клейковины до коротких (тет-ра-дипептиды) пептидов. Гидролиз протеиназой А протекает по "поодиночному" механизму.

При прорастании пшеницы происходит дезамидирование клейковины. За первые два дня прорастания содержание амидного азота в клейковине снижается на 14-18$.

Показано, что дезамидирование при прорастании - ферментативный процесс, который является, очевидно, причиной ослабления клейковины и повышения ее растворимости в воде и растворах солей.

На защиту выносятся следующие положения:

I. Ковалентная хроматография на ртуть-сефарозе в сочетании с гель-фильтрацией на сефадексе Г-100 и аффинной хроматографией на иммобилизованном гемоглобине позволяет получить высокоочшценные препараты протеиназы А пшеницы.

2. Протеиназа А гидролизует до 90$ бежа клейковины пшеницы по "поодиночному" механизму с образованием коротких пептидов (тетра-дипептиды).

3. При прорастании пшеницы происходит частичное дезами-дирование клейковины, которое вызывает изменение ее реологических свойств.

4. Дезамидирование клейковины при прорастании является ферментативным процессом.

Настоящая работа выполнялась в лаборатории химии белка Кишиневского государственного университета им. В.И.Ленина в 1978-1983 гг. в связи с плановыми темами "Исследование растительных белков" (с 1978 по 1980 годы), номер госрегистрации 68071761 и "Исследование белков семян культурных растений, разработка основ повышения их качества и методов получения белковых изолятов для пищевых целей" (с 1981 года, номер госрегистрации 81012194).

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Белтей, Наталья Константиновна

5. В Ы В О Д Ы

1. С помощью ковалентной хроматографии на ртуть-сефарозе, гель-фильтрации на сефадексе Г-100 и аффинной хроматографии на иммобилизованном гемоглобине получен очищенный в 1680 раз препарат протеиназы А пшеницы (выход 11,5%, удельная активность 5130 мЕ/мг). По данным электрофореза в полиакриламидном геле препарат содержит более 50% фермента.

2. Протеиназа А является цистеиновой протеиназой с молекулярной массой 22000 дальтон (по данным гель-фильтрации через сефадекс Г-100) и оптимумом активности при рН 4,1-4,2,

3.Активность протеиназы А отсутствует в непроросшем зерне, появляется при прорастании, быстро увеличивается в период наибольшей скорости распада запасных белков, достигая максимума на 4-й день, и затем убывает.

4. Протеиназа А способна к расщеплению по крайней мере 90% белка клейковины до ди-тетрапептидов. Гидролиз протеиназой А протекает по поодиночному механизму.

5. При прорастании пшеницы происходит частичное дезами-дирование клейковины (содержание амидного азота за первые двое суток прорастания снижается на 14-18%), которое, по-видимому, является причиной изменения ее реологических свойств.

6. Получены данные, показывающие, что дезамидирование клейковины при прорастании зерна пшеницы обусловлено действием специфического фермента.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Белтей, Наталья Константиновна, Кишинев

1. Бабинцева В.И. Белки зерна индуцированных мутантов мягкой озимой пшеницы. Дис. . канд. биол. наук. - Кишинев, 1982. - 220 с.

2. Белозерский М.А. Выделение и свойства 11 s-глобулина семян гречихи. В кн.: Растительные белки и их биосинтез. - М.: Наука, 1975, с.152-156.

3. Береш И.Д. Протеолиз клейковины во время прорастания пшеницы. Труды ВНИИЗ, 1969, т.66, C.III-II7.

4. Береш И.Д., Вакар А.Б., Соседов Н.И. Некоторые кинетические свойства протеолитических ферментов прорастающего зерна пшеницы. ДАН СССР, 1972, т.203, № 2, с.473-476.

5. Бульмага В.П., Щутов А.Д. Частичная очистка и характеристика протеазы А прорастающих семян вики, гидролизующей натив-ные запасные белки. Биохимия, 1977, т.42, № II, о.1983-1989.

6. Бульмага В.П. Очистка и изучение физиологической роли протеазы А прорастающих семян вики. Дис. канд. биол. наук, Кишинев, 1983. - 139 с.

7. Вайнтрауб И.А. Исследование глобулинов семян бобовых. -Дис. . докт. биол. наук. Кишинев, 1970. - 421 с.

8. Вайнтрауб И.А., Нгуен Тхань Туен. 0 четвертичной структуре легумина вики. Молек. биол., 1971, т.5, № I, с.59-67.

9. Вайнтрауб И.А., Шутов А.Д., Королева Т.Н., Бульмага В.П. Действие протеаз семян вики на собственные запасные белки. -В кн.: ХП Мезкд. бот. конгр. Тезисы докладов. Ленинград, 1975, т.2, с.381.

10. Вайнтрауб И.А., Щутов А.Д. Протеиназы семян. В кн.: Химия протеолитических ферментов. Материалы II Всес. симп. Углич, 1979, с.19-24.

11. Вакар А.Б. Клейковина пшеницы. М.: Изд, АН СССР, 1961. -249 о.

12. Вакар А.Б. Белковый комплекс клейковины. В кн.: Растительные белки и их биосинтез. - М.: Наука, 1975, с.38-58.

13. Гаврилюк И.П., Губарева Н.К., Конарев В.Г. Выделение, фракционирование и идентификация белков, используемых в геномном анализе культурных растений. Тр. по прикл. бот., генетике и селекции, 1973, т.52, вып.1, с.249-281.

14. Детерман Г. Гель хроматография. Гель-фильтрация. Гель-цро-никающая хроматография. Молекулярные сита. М.: Мир, 1970. -252 с.

15. Козьмина Н.П., Резниченко М.С. Дезагрегирующий белки фермент пшеницы и ячменя. Биохимия, 1937, т.II, выл.4,с.630-636.

16. Козьмина Н.П. Биохимия зерна и продуктов его переработки. -М.: Колос, 1976. 375 с.

17. Конарев В.Г., Гаврилюк И.П., Губарева Н.К. О природе глюте-нина пшеницы по данным иммунохимического анализа. Докл. ВАСХНИЖ, 1970, № 7, с.16-18.

18. Конарев В.Г. Бежи пшеницы. М.: Колос, 1980. - 350 с.

19. Королева Т.Н., Алексеева М.В., Шутов А.Д., Вайнтрауб И.А. О локализации протеолитических ферментов в алейроновых зернах семян вики. Физиол. раст., 1973, т.20, № 4, с.769-772.

20. Королева Т.Н. Идентификация протеаз семян вики, участвующих в распаде запасных белков при прорастании. Дис. . канд. биол. наук. Кишинев, 1977. - 131 с.

21. Кретович В.Л. Белковый обмен высшего растения. В сб.: Труды У конференции по высокомолекулярным соединениям. -М.-Л.: АН СССР, 1948, с.239-256.

22. Кретович В.Л., Вакар А.Б. Проблема качества белка зерновых культур. Труды ВНИИЗ, 1967, вып. 58-59, с.5-22.

23. Маурер Г. Диск-электрофорез. М.: Мир, 1971. - 247 о.

24. Осборн Т.Б. Растительные бежи. М.-Л.: Биомедгиз, 1935.

25. Попов М.П., Карпиленко Г.П. Исследование кислых протеаз ячменя и ячменного солода. Прикл. биохим. и микробиол., 1974, т.10, № 2, с.301-305.

26. Попов М.П., Карпиленко Г.П. Свойства кислой протеазы ячменя. Прикл. биохим. и микробиол., 1975, т.П, № 5, с.757-759.

27. Попов М.П., Карпиленко Г.П., Глинская E.H. Исследование продуктов протеолиза альбуминов и белков эндосперма ячменя кислой протеиназой ячменя. Прикл. биохим. и микро-биол., 1976, т.12, Ш 3, с.438-441.

28. Проскуряков Н.И., Бундель A.A., Зезюлинский В.М. Характеристика качества белков клейковины и их изменений с помощью метода диспергирования в молочной кислоте. Биохимия, 1940, № 5, вып. 5, с.557-566.

29. Проскуряков Н.И., Бундель A.A., Бухарина Е.В. Изменения протеазно-белкового комплекса в прорастающем и созревающем зерне пшеницы. Биохимия, 1941, № 6, вып. 3, с.347-354.

30. Степанов В.М. О микрогетерогенности белка. Усп. совр. биол., 1982, т.93, № I, с.35-45.

31. Хавкин Э.Е. Формирование метаболических систем в растущих клетках растений. Новосибирск: Наука, 1977. - 221 с.

32. Шорина О.С., Вакар А.Б. Изменения клейковины в прорастающем зерне пшеницы. Известия ВУЗов. Пищевая технология,1965, № 4 (47), с.19-23.

33. Шорина О.С., Вакар А.Б., Кретович В.Л. Физико-химические изменения клейковины при прорастании пшеницы. I. Вискози-метрические исследования. Прикл. биохимия и микробиол.,1966, т.2, № 2, с.20-26.

34. Шорина О.С., Вакар А.Б., Кретович В.Л. Физико-химические изменения клейковины при прорастании пшеницы. II. Аминокислотный состав. Прикл. биохимия и микробиол., 1966, т.2, № 2, с.121-127.

35. Шутов А.Д., Вайнтрауб И.А. Применение метода зонного осаждения для разделения глобулинов семян бобовых. Укр. биохим. журнал, 1965, т.37, с.177-181.

36. Щутов А.Д., Вайнтрауб И.А. Хроматографическое выделение и некоторые свойства легумина и вицилина вики. Биохимия, 1966, т.31, № 4, с.726-735.

37. Щутов А.Д., Вайнтрауб И.А. Первоначальные изменения запасных белков при прорастании семян вики. Физиол. раст., 1973, т.20, № 3, с.504-509.

38. Шутов А.Д. О модификации запасных белков при прорастании семян вики. Изв. АН МССР, сер. биол. хим. наук, 1976, № 5, с.20-26.

39. Шутов А.Д., Королева Т.Н., Нгуен Тхи Хонг Хань, Вайнтрауб И.А. Протеаза прорастающих семян вики, гидролизугощая но-тивные запасные белки. Докл. АН СССР, 1976, т.231, № 4, с.1010-1013.

40. Шутов А.Д., Бульмага В.П., Королева Т.Н. Протеолиз запасных белков прорастающих семян вики. В кн.: Актуальные вопросы физиологии и биохимии растений Молдавии: Материалы П республиканской конференции физиологов и биохимиков. -Кишинев, 1977, с.229-231.

41. Шутов А.Д. Протеолиз запасных белков в прорастающих семенах бобовых. Дис. . докт. биол. наук. М., 1983. - 395 с.

42. Щутов А.Д., Поло Р.Э. Об участии фенилаланин-п-нитроани-лидазы в распаде запасных белков прорастающих семян вики.

43. Биохимия, 1983, т.48, № 5, с.869-874.

44. АЪе-М., Arai S., Fujimaki М. Purification,Characterizationof а Protease Occuring in Endosperm of Germinating Com. -Agric. Biol. Chem., 1977, v.41, N 5, p.893-899.

45. Abe M., Arai S., Fujimaki M. Substrate Specifity of Sulf-hydryl Protease Purified from Germinating Corn. Agric. Biol. Chem., 1978, v.42, N 10, p.1813-1817.

46. Anson M. The estimation of pepsin, trypsin, papain and cathepsin with hemoglobin. J. gen. Physiol., 1938, v.22, p.79-89.

47. Ashton P.M., Dahmen W.J. Purification and characterization of a dipeptidase from Cucurbita maxima cotyledons. Phyto-chem., 1967, v.6, N 9, p.1215-1225.

48. Baker J.L., Hulton H.F.E. Considerations affecting the "strength" of wheat flours. Journ. Soc. Chem. Ind., 1908, v.27, IT 7, p.368.

49. Balls A.K., Hale W.S. Proteolitic enzymes of flour. Cereal Chem., 1936, v.13, H 1, p.54-60.

50. Balls A.K., Hale W.S. The preparation and properties of wheat proteinases. Cereal Chem., 1938, v.15, p.622-628.

51. Barret A.J. Human cathepsin B^. Purification and some properties of the enzyme. Biochem. J., 1973, v.131, N 4,p.809-822.

52. Basha S.M.M., Beevers L. The development of proteolytic activity and protein degradation during the germination of Pisum sativum L. Planta, 1975, v.124, N 1, p.77-87.

53. Basha S.M.M. Identification of a cultivar differences in seed polypeptide composition of peanuts (Arachis hypogaea L.) by two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis.-Plant Physiol., 1979, v.63, N 2, p.301-306.

54. Baumgarthner B., Chrispeels M.J. Purification and characterization of vicilinpeptidhydrolase, the major endopepti-dase in the cotyledons of mung-bean seedlings. Eur. J. Biochem., 1977, v.77, N 2, p.223-233.

55. Baxter E.D. The use of hordein fractions to estimate proteolytic activity in barley and malt. J. Inst. Brew.,1976, v.82, N 4, p.203-208.

56. Baxter E.D. Purification and properties of malt carboxy-peptidases attacking hordien. J. Inst. Brew., 1978, v.84, N 5, p.271-275.

57. Beckwith A.C., Wall J.S., Dimler R.J. Effect of altering amide groups on wheat gluten properties. Amide groups as interaction sites in wheat gluten proteins: effects of amide-ester conversion. Arch. Biochem. and Biophys., 1963, v.103, p.319-330.

58. Beckwith A.C., Wall J.S. Reduction and reoxidation of wheat glutenin. Biochem. Biophys. Acta, 1966, 130, p.150-162.

59. Beckwith A.C., Nielsen H.C., Wall J.S., Huebner P.R. Isolation, characterization of high-molecular-weight protein from wheat gluadin. Cer. Chem., 1966, 43, p.14^28.

60. Belitz H.D., Ly-^nen P. Uber die proteolytische Activitut von Weizen: Vorkommen eines trypsin ulichen Enzyms.

61. Chem. Microbiol. Technol. Lebensen., 1974, 3, N 2, p.60-64.

62. Bernardin J.E., Kasarda D.D., Mecham D.K. Preparation and characterization of £X.-gliadin. J. Biol. Chem., 1967, 242, N3, p.445-450.

63. Bewley J.D., Black M. Physiology and biochemistry of seeds in relation to germination. I. Development, germination and growth. Springer-Verlag-Berlin-Heidelberg-New York, 1978, 306 p.

64. Beynon R.J. Protein modification and the control of intracellular protein degradation. In: The enzymology of posttranslational modification of proteins. - New York: Acad. Press, 1980, p.363-385.

65. Bhatty R.S. Note of the development of proteolytic enzymes in germinating barley. Cereal. Chem., 1969, 46, N 1, p.74-77.

66. Bietz J.A., Huebner F.R., Rothfus J.A. Comparision of peptic digests of individual gliadin proteins. Cereal. Chem., 1970, 47, p.391-404.

67. Bietz J.A., Wall J.S. Wheat gluten subunits: Molecular weights determined by sodium dodecyl sulfate-polyacrylami-de gel electrophoresis. Cereal. Chem., 1972, 49, p.416-430.

68. Bietz J.A., Wall J.S. Isolation and characterization of gliadine-like subunits from glutenin. Cereal Chem., 1973, 50, p.537-547.

69. Bietz J.A., Wall J.S. The effect of various extractants on the subunit composition and associations of wheat glutenin.-Cereal Chem., 1975, 52, p.145-155.

70. Bond H.M., Bowles D.S. Characterization of soybean endo-peptidase activity using Exogeneous and endogeneous substrates. Plant Physiol., 1983, v.70, N 2, p.345-350.

71. Booth M.R., Ewart J.A.D. Studies of flour components of wheat gliadins. Biochim. Biophys. Acta, 1969, 181, p.226-233.

72. Booth M.R. Isolation of further components from wheat gliadins. J. Sci. Food Agric., 1970, 21, p.185-186.

73. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analyt. Biochem., 1976, v.72, N 1-2, p.248-254.

74. Burger W.C. Multiple forms of acidic endopeptidase from germinated barley. Plant Physiol., 1973, v.51, H 6,1015-1021.

75. Castimpoolas N., Campbell J.G., Meyer E.W. Immunochemical study in changes in reserve proteins of germinating soy bean seeds. Plant Physiol., 1968, v.43, N 5, p.799-805.

76. Charbonnier L. Studies of the alcohol-soluble proteins of wheat flour. Biochimie, 1973, 55, p.1217-1225.

77. Charbonnier L. Isolation and characterization of w-gliadin fractions. Biochim. Biophys. Acta, 1974, 359, p.142-151.

78. Chrispeels M.J., Varner J.E. Hormonal control of enzyme synthesis: On the mode of action of GA and abscisin in aleurone layers of barley. Plant Physiol., 1967, v.42, p.1008-1016.

79. Chrispeels M.J., Baumgartner B., Harris H. Regulation of reserve protein metabolism in the cotyledons of mung bean seedlings. Proc. Hatl. Acad. Sci. USA, 1976, v.73, If 9, p.3168-3172.

80. Chua G.K., Bushuk W. Purification of wheat proteases by a affinity chromatography on hemoglobin-sepharose column. -Biochem. Biophys. Res. Communs, 1969, v.37, N 3, p.545-550.

81. Cluskey J.E., Wu Y.V. Optical rotary dispersion, cireular dichroism and infrared studies of wheat gluten proteinin various solvents. Cer. Chem., 1971, v.48, p.203-211.

82. Cohen B.-S., Leskem Y., Pinsky A. Gibberellin and protease activity in Medicago sativa. Physiol. Plant., 1969, v.22, N 1, p.37-42.

83. Cole E.W., NGH., Mecham D.K. Some chemical and physical properties of the mercuric chloride solubilized gel protein from different wheat varieties. Cereal. Chem., 1976, v.53, p.250-257.

84. Goulaon C.B., Sim A.K. Wheat proteins II. Changes in protein composition of Triticum vulgare during the life cycle of the plant. J. Sci. Pood Agric., 1965, v.16, N 9,p.499-508.

85. Danielson C.E. Seed globulins of the gramineae and legumi-nosae. Biochem. J., 1949, v.44, N 4, p.387-400.

86. Daussant J., Neucere N.J., Conkerton E.J. Immunochemical studies of Arachis hypogaea proteins with particular reference to the reserve proteins. II. Protein modification during germination. Plant Physiol., 1969, v.44, N 4,p.480-484.

87. Dechary J.M., Talluto K.F», Evans M.J., Carney W.B., Alt-shul A.M. rt-conarachin. Nature, 1961, v.190, N 4781,p.1125-1126.

88. Dieckert J., Dieckert M. The comparative anatomy of the principle reserve proteins of seeds. In: Seed Proteins of Dicotyledonous Plants. - Proc. Symp. Gatersleben. -Abh. Akad. Wiss. DDR, Abt. Math. Naturwiss., Techn., 1979, N 4, s.73-86.

89. Derbishire E., Wright D.J., Boulter D. Legumin and vicilin, storage proteins of legumine seeds. Phytochem., 1976, v.15, N 1, p.3-24.

90. Doi E., Shibata D., Matoba I., Yonezawa D. Evidence for the presence of two types of acid proteases in germinating seeds of rice. Agric. biol. chem., 1980, v.44, N 2,p.435-436.

91. Elleman T.C. Aminopeptidases of pea. Biochem. J., 1974, v. 144, H 1, p.113-118.

92. Elving P.J., Markowitz J.M., Rosenthal T. Preparation of buffer system of constant ionic strength. Analyt. Chem., 1956, v.28, IT 7, p. 1179-1180.

93. Enary T.M., Mikola J. Characterization of the soluble proteolytic enzymes of greem malt. Jn: European Brewery Conv. Amsterdam: Elsevier, 1968, p.9-16.

94. Ewart J.A.D. Fingerprinting of glutenin and gliadin. J. Sci. FoodAgric., 1966, v.17, p.30-33.95« Ewart J.A.D. Amino acid analyses of glutenins and gliadins.-J. Sci. FoodAgric., 1967, v.18, p.111-115.

95. Ewart J.A.D. A hypothesis for the structure and rheology of glutenin. J. Sci. Food Agric., 1968, v.19, p.617-623.

96. Ewart J.A.D. Futher studies S-S bonds in cereal glutelin.-J. Sci. FoodAgric., 1972, v.23, p.567-579.

97. Ewart J.A.D. A Cappell-Desprez gliadin of high mobility. -J. Sci. Agric., 1976, v.27, p.695-698.

98. Feller U., Soong T.-S.I., Hageman R.H. Patterns of proteolytic enzyme activities in different tissues of germinating corn (Zea mays Z.). Planta, 1978, v.140, N 2, p.155-162.

99. Filner P., Wray J.Z., Varner J.E. Enzyme induction in Righer plants. Science , 1969, v.165, N 3891, p.358-367.

100. Flattmark T., Sletten K. Multiple forms of Cytochrome C in the rat Precusos-product relationship between the main component Cy I and the minor components Cy II and Cy III in vivo. J. Biol. Chem., 1968, v.243, p.1623-1629.

101. Fleming J.R., Johnson J.A., Miller B.S. Effect of malting procedure and wheat storage conditions on alpha-amylase and protease activities. Cereal Chem., 1960, v.37,p.363-370,

102. Fleming J.R., Johnson J.A. Effects of potassium gibberel-late on the production of ck and ^-amylase and protease activities during the malting of wheat. - J. Agric. Pood Chem., 1961, v. 9, N 2, p.152-155.

103. Ford J.S., Guthrie J.M. The amylolytic and proteolytic ferments of wheat flours and their relation to baking strength. J. Soc. Chem. Ind., 1908, v. 27, p.389-393.

104. Fujimaki M., Abe M., Arai S. Degradation of Zein during germination of com. Agric. Biol. Chem., 1977, v.41, IT 5, p.887-891.

105. Ganesh Kumar K., Venkataraman L.V. Chickpea seed proteins: modification during germination. Phytochemistry, 1978, v.17, N 4, p.605-609.

106. Ganesh Kumar K., Venkataraman L.V., Appu Rao A.-G. Chik-pea seed proteins: Conformational changes in 10,3Sprotein during germination. J. Agric. Food. Chem., 1980, v.28, N 3, p.518-524.

107. Garg G.K., Virupaksha T.K. Acid protease from germinating sorghum. I. Purification and characterization of the enzyme. Eur. J. Biochem., 1970, v.17, N 1, p.4-12.

108. Garg G.K., Virupaksha T.K. Acid protease from germinating sorgum. II. Substrate specificity with synthetic peptides and ribonuclease A. Eur. J. Biochem., 1970, v. 17, N 1, p.13-18.

109. Gatehouse J.A., Croy R.R.D., Morton H., Tyler M., Boulter D. Characterization and subunit structure of the vi-cilin storage proteins of pea (Pisum sativum L.). Eur. J. Biochem., 1981, v.118, N 3, p.627-633.

110. Gibson R.A., Paleg L.G. Lysosomal nature of hormonally induced enzymes in wheat aleurone cells. Biochem. J., 1972, v.128, N 2, p.367-375.

111. Greenwood C.T., Ewart J.A.D. Hypothesis for the structure of glutelin in relation to rheological properties of gluten and dough. Cer. Chem., 1975, v.52, p.146-153.

112. Harris R.H., Frokjer D. Gluten fractions of hard red spring and durum wheat and their baking quality. Cer. Chem., 1952, v.29, N 3, p.212-222.

113. Harris N., Chrispeels M.J., Boulter D. Biochemical and histochemical studies on protease activity and reserve protein metabolisme in the cotyledons of germinating cow peas (vigna unguiculata). J. Exp. Bot., 1975, v.26,1. N 95, p.544-557.

114. Harvey B.M.R., Oaks A. Characteristics of an acid protease from maize endosperm. Plant Physiol., 1974, v.53,1. N 3, p.449-452.

115. Harvey B.M.R., Oaks A. The hydrolysis of endosperm protein in Zea mays. Plant Physiol., 1974, v.53, N3, p.453-457.

116. Harvey B.M.R., Oaks A. The role of gibberellic acid in the hydrolysis of endosperm reserves in Zea mays.- Planta, 1974, v.121, N 1, p.67-74.

117. Holme J., Briggs D.R. Studies on the physical nature of gliadin.-- Cer. Chem., 1959, v.36, p.321-340.

118. Huebner F.R., Rothfus J.A., Wall J.S. Isolation and chemical comparison of different ganmia-gliadins from hard red winter wheat flour. Cer. Chem., 19&7, v.44, p.221-228.

119. Huebner P.R., Wall J.S. Fractionation and quantitative differences of glutenin from wheat varieties varying in baking quality. Cer. Chem., 1976, v.53, p.258-269.

120. Hwang P., Bushuk W. Some changes in the endosperm proteins during sprouting of wheat. Cer. Chem., 1973, v.50, p.147-160.

121. Ihle J.N., Dure L.S. The developmental biochemistry of cotton seed embryogenesis and germination. I. Purification and properties of a carboxypeptidase from germinating cotyledons. - J. Biol. Chem., 1972, v.247, N 16,p.5034-5040.

122. Ingle J., Hageman R.H. Metabolic changes associated with the germination of com. III. Effects of gibberellic acid on endosperm metabolism. Plant Physiol., 1965, v.40,1. H 4, p.672-675.

123. Jacobsen J.V., Varner J.E. Gibberellic acid-induced synthesis of protease by isolated aleuron layers of barley. Plant Physiol., 1967, v.42, H 11, p.1596-1600.

124. Jankiewiez M., Pomeranz Y. Isolation and characterisation of wheat flour proteins. II. Effects of urea and N-ethyl-maleimide on the behaviour of wheat proteins during extraction and fractionation. J. Sci. Pood Agric., 1965,v.16, p.652-658.

125. Jones R.W., Taylor N.W., Senti P.R. Electrophoresis and fractionation of wheat gluten. Arch. Biochem. and Bio-phys., 1959, v. 84, U 2, p.363-376.

126. Jones R.W., Babcock G.E., Taylor N.W., Senti P.R. Molecular weights of wheat gluten fractions. Arch. Biochem. and Biophys., 1961, v.94, p.483-488.

127. Jones R.W., Babcock G.E., Taylor N.W., Dimler R.J. Fractionation of wheat gluten by gel filtration. Cer. Chem., 1963, v.40, p.409-414.

128. Jones R.W., Babcock G.E., Dimler R.J. Molecular weights of the gamma-gliadin component of wheat gluten. Cer. Chem., 1965, v.40, p.210-214.

129. Jones R.L. Gibbereliic acid and the fine structure of barley aleurone cells. Planta, 1969, v.87, U1/2, p.119-133.

130. Jones I.K., Carnegie P.R. Binding of oxidized glutathione to dough proteins and a new explanation, involving thiol-disulphide exchange, of the physical properties of dough. J. Sci. Pood Agric., 1971, v.22, p.358-364.

131. Jjirgensen M. The existence of poweful but lutent proteolytic enzymes in wheat flour. Cer. Chem., 1936, v.13, p.346-355.

132. Kaczkowski J. Study of molecular structure of gluten proteins obtained from wheat differing in baking quality. -Pinal Technical report, V/arszawa, 1974.

133. Kaminski E., Bushuk W. Wheat proteases. I. Separation and detection by stachgel electrophoresis. Cer. Chem., 1969, v.46, IT 3, p.317-324.

134. Kasarda D.D., Bernardin J.E., Nimmo C.C. Wheat protens. -In: Advances in Cereal Science and Technology, USA, 1976, p.158-236.

135. Kloz J., Turkova V., Klozova E. Protein found during maturation and germination of seeds of Phaseolus vulgaris L. Biol, plant, 1966, v.8, N 2, p.164-173.

136. Kikuchi M., Hayashida H., Nakano E., Sagaguchi K. Pepti-doglutaminase. Enzymes for selective deamidation of j^~"-amide of peptidebound glutamin. Bio chem., 1971, v. 10, IT 7, p.1222-1229. •

137. Kolehmainen L., Mikola J. Partial purifucation and enzymatic properties of an aminopeptidase from barley. -Arch. Biochem. Biophys., 1971, v.145, H 2, p.633-642.

138. Korolyova T.H., Shutov A.D., Vaintraub J.A. The action of the proteolytic enzymes of dry vetch seeds on their own reserve proteins. Plant Sci. Letters, 1975 , v. 4, IT 5, p.309-313.

139. Kruger J.E. Changes in the levels of proteolytic enzymes from hard red spring wheat during growth and maturation.-Cer. Chem., 1973, v.50, IT 1, p.122-131.

140. Kruger J.E., Preston K. Changes in aminopeptidases of wheat Kërnels during growth and maturation. Cer. Chem., 1978, v.55, N 3, p.360-372.

141. Kubota Y., Shoji S., Funakoshi T., Veki H. Carboxypepti-dase Cjj I. Purification and characterization of the enzyme from exocarp of Citrus natsudaidai Hagata. J. Bio-chem., 1973, v.73, IT 4, p.757-770.

142. Kubota Y., Shoji S., Yamanaka T., Yamato M. Carboxypepti-dases from germinating soy beans. I. Purification and properties of two carboxypeptidases. J. Pharm. Soc., Jap., 1976, v.96, N 5, p.639-647.

143. Kunitz M. Crystalline soybean trypsin inhibitor. II. General properties. J. gen. Physiol., 1947, v.30, IT 4, p.291-310.

144. Langner J., Ansorge S., Bohley P., Kirschke H., Hanson H. Intracellular protein breakdown. I. Activity determinations of endopeptidases using protein substrates. Acta Biol. Med. Ger., 1971, v.26, IT 5, p.935-951.

145. Lasztity R. Rheologische Eigenschaften von Weizen-Kleber und ihre Beziehungen zu molekularen Parametern. Nahrung, 1975, v.19, N 9/10, p.749-758.

146. Lichtenfeld C., Manteuffel K., Müntz K., Neumann D., Scholz G., Weber E. Protein degradation and proteolytic activities in germinating field beans (Vicia faba L., Var. minor). Biochem. Physiol. Pflanzen, 1979, v.174, N 4, p.255-274.

147. Lin Y., Means G.E., Peeney R.E. The action of proteolytic enzymes on N,lT-dimethyl proteins. J. Biol. Chem., 1969, v.244, N 4, p.789-793.

148. Mac Donald C.E., Chen L.L. Properties of wheat flour proteinases. Cereal. Chem., 1964, v.41, N 6, p.443-455.

149. Madl R.L., Tsen C.C. The proteolytic enzyme system of triticale. In: Triticale. First man-made cereal, -Amer. Ass. Cer. Chem. St. pane. Minn., 1974, p.157.

150. Matoba I., Doi E. Substrate specificity of carboxypepti-dase from watermelon. J. Biochem., 1975, v.77, U 6,p.1297-1303.

151. Melcher V., Varner J.E. Protein release by barley aleu-rone layers. J. Inst. Brew., 1971, v.77, U 5, p.456-462.

152. Middleton K.R. Hew Nessler reagent and its use in the direct nesslerisation of Kjeldhal digests. J. Appl. Chem., 1960, v.10, H 7, p.281-286.

153. Mikola J., Kolehmainen L. Localization and activity of various peptidases in germinating barley. Planta, 1972, v.104, N 2, p.167-177.

154. Mikola J., Pielota K., Enary I.-M. The role of malt car-boxypeptidases in the libaration of amino acids in mashing. In: European Brewery Convention: Proc. 13th Congr. Amsterdam: Elsevier, 1972, p.21-27.

155. Mikola J. Activities of various peptidases in cotyledons of germinating peanut (Arachis hypogaea). Physiol. Plant., 1976, v.36, N 3, p.255-258.

156. Mikola J. Functions of different plant peptidases in germinating seeds. In: Seed Proteins of Dicotyledonous Plants: Proc. Symp. Gatersleben, 1977 - Abhand. Akad. Wiss. DDR, Abt. Mathem. Naturwiss Technik, 1979,1. N 4, p. 125-132.

157. Mikola L., Mikola J. Mobilization of protein in thestarchy endosperm of germinated barley grain. Planta, 1980, v.149, N 2, p.149-154.

158. Minamikawa T. Hydrolytic enzyme activities and degradation of storage components in cotyledons of germinating Phaseolus mango seeds. Bot. Mag. Tokyo, 1979, v.92,1. N 1025, p.1-12.

159. Moeller M., Robbins C.S., Burger W.C., Prentice N.

160. A carboxypeptidase from germinated barley and its action on casein. J. Agric. Pood Chem., 1970, v. 18, IT 5, p.886-890.

161. Moureaux T. Protein breakdown and protease propertiesof germinating maize endosperm. Phytochem., 1979, v.18, IT 7, p.1113-1117.

162. Nielsen H.C., Babcock G.E., Senti F.R. Molecular weight studies of glutenin before and after disulfide-bond splitting. Arch. Biochem. Biophys., 1962, v.96, N 2, p.252-258.

163. Nielsen H.C., Beckwith A.C., Wall J.S. Effect of disul-fide-bond cleavage on wheat gliadin fractions obtained by gel filtration. Cer. Chem., 1968, v.45, p.37-47.

164. Ninomija K., Tanaka S., Kawata S., Makisumi S. Purification and properties of an aminopeptidase from seeds of Japanese apricot. J. Biochem., 1981, v.89, N 1, p.193-201.

165. Olcott H.S., Sapirstein L.A., Blish M.J. Stubility of wheat gluten dispersions toward reducting agents in the presence and absence of a gluten proteinase. Cer. Chem., 1943, v.20, N 1, p.87-97.

166. Orth R.A., Bushuk W. Studies of glutenin. II. Identification of subunits coded by the D-genome and their relation to breadmaking quality. Cer. Chem., 1973, v.50, p.680-687.

167. Ory R.L., Henning8en K.W. Enzymes associated with protein bodies, isolated from ungerminated barley seeds. -Plant Physiol., 1969, v. 44, p.1488-1498.

168. Palmiano E.P., Juliano B.O. Biochemical changes in the rice grain during germination. Plant Physiol., 1972, v.49, N 5, p.751-756.

169. Patey A.L., Waldron N.M. Gliadin proteins from Maris Widgeon wheat. J. Sci. Pood Agric., 1976, v.27, p.838-842.

170. Penner D., Ashton P.M. Proteolytic enzyme control in squash cotyledons. Nature, 1966, v.212, IT 5065, p.935936.

171. Penner D., Ashton P.M. Hormonal control of proteinase activity in squash cotyledons. Plant Physiol., 1967, v.42, N 6, p.791-796.

172. Perutz M.P., Pogg J.H., Pox J.A. Mechanism of deamida-tion of Haemoglobin Providence Asn. J. Mol. Biol., 1980, v.138, p.669-671.

173. Piatt S.G., Hasarda D.D. Separation and characterization of alpha-gliadin fractions. Biochim. Biophys. Acta, 1971, v.243, p.407-415.

174. Piatt S.G., Kasarda D.D., Qualset C.O. Varietal relationships of the alpha-gliadin proteins in wheat. J.

175. Sci. Pood Agric., 1974, v.25, p.1555-1561.

176. Pomèranz Y. Composition and functionality of wheat flourcomponents. In: Wheat Chemistry and Technology. - Ed. by Y.Pomeranz. Amer. Ass. Cereal Chem. St. Paul, Minn., 1971.

177. Preston K.R. An automated fluorometric assay for proteolytic activity in wheat. Cer. Chem., 1975, v.52,p.451-458.

178. Preston K.R., Kruger J.E. Purification and properties of two protolytic enzymes with carboxypeptidase activity in germinated wheat. Plant Physiol., 1976,v.58,1. N 4, p.516-520.

179. Preston K.R. Note on the separation and partial purification of wheat proteases by affinity chromatography. -Cer. Chem., 1978, v.55, N 5, p.793-798.

180. T83. Preston K.R., Dexter J.E., Kruger J.E. Relationship of exo- and endoproteolytic activity to storage protein hydrolysis in germinating durum and hard red spring wheat. Cer. Chem., 1978, v.55,N 6, p.877-888.

181. Preston K.R., Kruger J.E. Physiological control of exo-and endoproteolytic activities in germinating wheat and their relationship to storage protein hydrolysis. -Plant Physiol., 1979, v.64, N 3, p.450-454.

182. Pusztai A., Czoy R.R.D., Grant G., Watt W.B. Compart-mentalization in the cotyledonary cells of Phaseolus vulgaris L. seeds: a differential sedimentation study. -New Phytol., 1977', v.79, N 1, p.61-71.

183. Redman D.G. Softening of gluten by wheat proteases. -J. Sci. Food Agric., 1971,v.22,N 2, p.75-78.

184. Rupley J.A. Susceptibility to attack by proteolytic enzymes. In: Methods in enzymology. New-York - London:

185. Acad. Press., 1967, v.11, p.905-917.

186. Schulerud A. Effect of some fatty materials on gluten and the baking quality of wheat flour. Brot. Gebaeck, 1957, v.11, p.240-243.

187. Sexcon K.R., Wu Y.V. Molecular weight of wheat. Jjj -and |^-gliadins in various solvents. Biochim. Bio-phys. Acta, 1972, v.263, p.651-658.

188. Shutov A.D., Bulmaga V.P., Vaintraub I.A. Protease A from germinated vetch seeds: purification by affinity chromatography and substratë specificity studies. Biochem. Physiol. Pflanzen, 1984, v.179, p.191-196.

189. Skupin J., Rosinska K., Skupin A., Warchalewski J. Sulf-hydril nature of wheat grain protease B. Bull. Acad. Polon. Sci. ser. biol., 1966, v.14,К 6, p. 397-400.

190. Skupin J., Warchalewski J. Isolation and properties ofa protease A from wheat grain. J. Sci. Pood and Agric., 1971, v.22, N 1, p.11-15.

191. Sopanen T., Mikola J. Purification and partial characterization of barley leucin aminopeptidase. Plant Physiol., 1975, v.55, N 5, p.809-814.

192. Sopanen T. Purification and partial characterization of a dipeptidase from barley. Plant Physiol., 1976, v.57, IT 6, p.867-871."

193. Spero L., Warren J.R., Metzger J.P. Microheterogeneity of staphylococcal enterotoxin B. Biochim. et Biophys. Acta, 1974, v.336, p.79-85.

194. Sullivan B., Hear C., Poley G.H. The role of the lipids in relation to flour quality. Cer. Chem., 1936, v.13, p.318-331.

195. Sundblom N.O., Mikola J. On the nature of proteinases secreted by the aleurone layers of barley grain. Physiol. Plant, 1972, v.27, IT 3, p.281-284.

196. Sutcliffe J.P., Baset Q.A. Control of hydrolysis of reserve materials in the endosperm of germinating oat (Avena sativa L.) grains. Plant Sci. Letters, 1973, v. 1, IT 1, p. 15-20.

197. Ternynck T., Avrameas S. Polyacrilamide protein immuno-adsorbents prepared with glutaraldehid. PEBS Letters, 1972, v.23, p.24-28.

198. Tully R.R., Beevers H. Protein bodies of castor bean endosperm. Isolation, fractionation and characterization of protein components. Plant Physiol., 1976, v.58, N 6, p.710-716.

199. Tully R.E •j Beevers H. Proteases and peptidases of castor bean endosperm. Enzyme characterization and changes during germination. Plant Physiol., 1978, v.62, N 5,p.746-750.

200. Varner J.E., Balce V., Huang R.C. Senescence of cotyledons of germinating peas. Influence of axis tissue. -Plant Physiol., 1963, v.38, H 1, p.89-92.

201. Virupaksha I.K., Wallenfels K. Affinity chromatography of sorgum acid protease. FEBS Letters, 1974, v.40, N 2, p.287-289.

202. Visuri K., Mikola J., Enary T.-M. Isolation and partial characterization of a carboxypeptidase from barley. -Eur. J. Biochem., 1969, v.7, N 1, p.193-199.

203. Voordouw G., Goucher G.M., Roche R.S. Anomalous molecular weights of proteases in gel chromatography. Biochem. Biophys. Res. Communs, 1974, v.58,ft 1, p.8-12.

204. Wall J.S., Beckwith A.C. Relationship between structure and rheological properties of gluten proteins. Cereal Sci. Today, 1969, v.14, N 1, p.16-21.

205. Wang C.C., Grant D.R. The proteolytic enzymes in wheat flour. Cer. Chem., 1969, v.46, 1I 5, p.537-544.

206. Woychik J.H., Boundy J.A., Dimler R.J. Starch-gel electrophoresis of wheat gluten proteins with concentrated urea. Arch. Biochem. Biophys., 1961, v.94, p.477-482.

207. Woychik J.H., Huebner P.R., Dimler R.J. Reduction and starch-gel electrophoresis of wheat gliadin and glute-nin.- Arch. Biochem. Biophys., 1964, v.105, p.151-155.

208. Wu Y.V., Cluskey J.E., Sexcon K.R. Effect of ionic strength on the molecular weight and conformation of wheat gluten proteins in 3 M urea solutions. Biochim. Biophys. Acta, 1967, v.133, p.83-90.