Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биосинтез белка в глиальных клетках мозга при повреждении гематоэнцефалического барьера

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Биосинтез белка в глиальных клетках мозга при повреждении гематоэнцефалического барьера"

РГБ од

П ;л',!госсийаиа ушзЕРотт дгллїі наяодоз

На. правах рукописи УДК 6Іб.ШІ:577.І22,5:577.352.4:6І6-089.5 5-03.БІ

подішжа Андреи атроалч

SCCKHTiJ ЕЕШи а Г1ИМЫШ КЛЕТКАХ ШЗГА OPU ООВРВДШИ ГЕШСаНЦЕМШЯЕСШГО БАРЬЕРА

(03.00.04 - баотгая)

Авгорофэра*

ДЕСсэртацйи ка соасіншяз учетгоЯ степаїг.і шяядма цгдацянсюа наук

ІЬсква - 1993

Габота выполнена в Московской иединкнской академвж еы. И. и. Сеченова. .. - ....

Недчниа руковолктелъ: доктор иедшушскнх наук, профессор Хохлов А. П. ■

0Д.ШДПЛШ1» «шовеотм: ,

! вхадешх ТАгЮ жомор бамегвчасвп науж,профессор Авиври Й.й доктор ивдацигаии 1шук, профессор Шипвкхо Д.*.

! Ведущая организация - Институт питания РАМН. ,

' . Зааята состоятся тот

1 в /У час. ва заседатаи спвддагазж^аяаого совете ’ Д 053.2^.02 при Россвисаоы укжвврсетето хр/хйы вародов ; до вдрвгу: 117138, гъсваа, ул.Хгмузц>-Угыаа, д.а,

£ одшошсыы *а*ул**ет, х.224и

. с ДВССврТвЦНвй СШО 08ШК0УЗТКШ & ШучаоА бЕйЛЕОТеав

; Гостсаого ушшорсата хрувба Езрадоа со адресу: 117194,

: Москва, ул.Мах^хсн-йамаа, д.6. '' '

; АвтооеЬеют разослав *АУЩ<2^^^<%993тот.

. . .Гчвгы* секретарь ■ . у... \ . .. .

СПвцваЛэаровавноро совета Д 050.22.02

доктор кэдидасжах вауж, профессор В.&.Торбея

-Акттаокость теш. В иастояцее Бреия во аногах лааораторн-ах мдра проводят асследоьааая цо мзучешпо геиамэицвфаличесхо-2х> барьера /ГЫ/ дм аитигенов мозга пра крятвческах состояыа-вх а зайодвьанаях нервно! системы. Установлена ауюимукиад природа йогах вервии а ссмячесхвх зайолеваиам, разршЗотада патогеаетжчесхая терапия, направлекяак т удаление из крова , образуются аятател /Морс$ов Г.В., Ийрхаыят В.М., Чсхонаа В.П., ива/. ' • ;

Согласно дшишМ срьреиешшд асследовшыа, взшшодаиствкв , |сав1л4»чвсии вещвств /аит»генов/ иозга с кшукнои системой | оргшаэш I ответное образование аытнтел предотвращается за , счот *71и£Цконмрова<£нл Г5Ь. Изменения его прояацаемоста ды не-, 'СашцЦдчвсюа Ьелсоваа&июнрбвано пра многих патологических | ^состояниях /Лидиеаа Р.К., 1990, а такгз род действием ряда : |М1шрствеиш1хоре11а^атов.

| В то *а ьрсия нсследоьанхя по вэучешш цровяадемости ГаБ I ;Д ха макромолекул при ыеарооавратжБН»х ьмеиательствах крайне ! 'пышогочлолеша. хотя выясивккв этого вопроса имеет чрвзшчай-; а» важное эначеыив. В условиях кодекса; критических состоя- : як», таках, как нейрохирургическая операция, наличие опухоли I юага, дреме диг-ацая, ыцючаа вещества,/влияющие ка взиекеипе I проницаемости ГЭь /днурэтикж и коргикостероидшо гораоны/, | нарьотмческая кома /в рамках оОдам иместезЛи/, кесомненао, все! |ата состояния дслааыприводя?* а элшш^ьашио НСВ в оноквдко! |бтв.с стветнымоОраэоьаялом алт*?ел.Одащю, «тот вопрос на .■ |еегодцяяшяа:дёнк' остается;'^о^учеииьм;'•... !

.';^вё;Че^;,опаеавы _ щщявпяя- на .£&£•« ишуа- |

!вые процессы реатгсаохонтрастацх ; гацэств, ыеосыот)гческхх да- I

'^тжхов а гхгш^кортшсоадов, Одаако таор^жчаскяв осЗосковаякл \

1 Вх адаяаа иеодиозвачйм /Бретбври Ц. . 1583, Уоткиио да., Леако! !Дв-,1951/ а до с1а цор н9т единого ыыекая о ыахаяпэмах ах дей| стад* не структуры гематоэццефалачвского бартера. Ецеыевеа аа| зество об встшгеых процессах, црсасходяют галетках ЦНС в ор~' в целом, ва фоне налвЕеяяя прошюаеиоствГЗЬ.

Выяснению атах вовросов а аосвяцена првдстаывиная работа, Нель работа, ивлв адо’аоязв! .работы явилось изучение дкаа-ияем НСЬ в кровя пра нейрохарургвческом вмеиательстве а ириие-

Ц\.;-’ Г - .■ ;г

иеник ЛеларСТБиЯКЫ! средств, а такжз ЬыЯСН&ЦЙЯ иехалязиа Про-';

лонгироьанного увалнчешш НСБ в Оиохздкоста врв увелачешщ.........;

црошщаеыости.П)Ь. ■ ■ - - - " ' ' . '

В соотьетстьи с составленное целью были определена ело- 1 дуквдв задача: /' , ;

- изучать ц^онвцаеыость ГЭЬ для НСБ у ладей ва фоне вар- .

•коза и ^азиологического сна; , ’ ’

- выявить дкиоиаку ПСЕ. в крови крис. обработавшие галопе-;

радолом в ингибиторов белкового евдгеза; 1

- «следовать полисоиниЛ сро^лхь в актиноств РНХ-аз в. ‘

клетках глия после введения галоиервдола; !

' - определить ЕЗЫененйЯ риооиукле&овой ШСГИЕЦОСТИ в сы- !■

воротке крови у животных, обработавшие галоверядолоы; .

- на основания полученных результатов 8 даяшх лвтератури «

сделать вывод о состоящая саяховоскытвтнческаг процессов шага вра /велвченвя проницаембств ТоЬ. . ,

' ’ Научная новизна работы. Бпераыа установлено, что воибяни-

ровашшЁ наркоз .ыоцвает совмаевае арсизщааасств ГЭБ дш ШБ ( ь каправлекаа иозг-кровь./ ' . . ' . ■ . . '. .•

: Влерваа исследована ирошщаешеть ГсЬ в цалршиюаиа коаг-!

кровь в условиях нейрохирургического, шзаагельства каз с тргш-;магнза!Шоа иозгв, .так в Ьез'ноа. . ,■ Л,’. \ /

: ■ . Вдарено разрабегаа штод, доаводясаЗ оцеезть вутеа гша-.лвза крова с&орость бвоошяётст^йм» процоссоа в глвялмпа I слетках пря сграссоыи сатусшик в иринчестах состоявшее. \

: - Ьмскеси врачигш-. усгшаая бЕосвитсза Сож&а а тлкадша |

клетках. шзга ара варушмиш проащаеаосм’ ГЭБ. Порсход часта | ^РНК-*аао11 ихттагоста сэ клеток цозга в кровь сукзсгвввао снгаг зт количество ^е^акта в гда&шшх .глотках ьгозга, обусдавлквая! |теа сю шсо!фэ ста0щгьаост^ исишр11босойадьыого ксшяегчса.

■ Предложена гнаоаеза, позволлигая объяснять ааадтш^ кгха-таи клеток иозга ара взшявниз орошам.еиЬсти ГЗБ лвбоЁ отвол»-гм.'- ... . • ■’•■. : • V-, - "'.

:Установлено, чтоусалешга сшпсзаНСЬ способствует увалв-чешш их содеряаюш. в крова, в овяаа с чеа иродотвращаэтся посту плеша аатлтог в клетки мозга. : .'

! Практическая значимость шботы. Пдовеьвнта дсследоваша 1 дшашкв НСБ в крова больных ,позволяет прогнозировать течеииа 1 послеоав]рацаонного процесса.. .' ■ л;\;;.ч: .V

1~ 'Положения, иццосииие на завдту: -1

) І» указано яогшшецяе п^ошщаеыостя І\Л для НСБ и иі маси ‘ ісаровашшй выход б кровь по времл неирохлрургй'чвекого вмешательства еєспєцііідчші для разллчшх видов йейрохирууГаческом ш-| ТОЛО ГИИ И про ИСХОДЯТ ПОД воздействием общего ХОІіСШШрОБШІНОГО ( наркоза на основе немродептанальгезшт а барбитуратов. |

. 2. Транш 1-озга, Елзьондаи ие^рохирургичесшш шешательсі*-

всм, суцествекш яе оказывает вланшт ш скорость выхода НСБ. і |Па ото* процесс ішшот лекарствешшо средства, используемые !

•о предоперационном пзрлоде. і

| . 3. Еисокое содержание Н СБ в кровн, зцішссироватіое аиі-а *

1а послеоперационной периода, свидетельствует об шмииацан био-!сшпсвза а гляоцигах. '

I . 1

4, В иодвлаШАХ зкепаршзитах показано, что рагулящш бко-*< |<шгтйза белка гш ^лиа язеонеанд'проницаемости Год,происходит .

|Е2 уроенэ трансляция, за сч?т агрегации рябосоа в цолирзбооош-льгай комплекс,|

- 5, Стабильность поларзбосомального кошйокса ка 40 а о азиэ-

пэшш пронгцаакоста ГоЬ ооэспзгзйаэтся за счет енлзэнзя акт аз-, госта РНК-аз в мэтках шэзга в еле дет ей о парохода фермента в ібпогадаоств. '.■■■. . ' ' ' 1 . '

} , Вггадсэннй в практику: оптбляговани три иаучвиа работы,

|еэ газ дез а центральной почата,

і ■ Апробация Еабота*

Диссертацзл Енподпзаа в ллборатррвя пагоікил ооцзна из- і (г:эста.ШЩ, іГ-Ц са.И,Ц.Сзчегіоза а лаборатория «.гг/ука-топя судебі ісзЯ йсішгатрів Института.еы.Сербской. і

г Аарббацая состоялась 16 декабря 1992 года с?а совмзсткоА !

. кво^ярегтлп лаоораторяа патохисш обкзна-пещзс?з НИЦ, йіА пи. '•!1.13,С5чо4о-а а •ггаоорамр.’іл тз^йологт судебной псяхнатрзз йя-; Ьтетута-ва^СорбсЕого.. ' • ’ ■' ' >

ч- С?статура п о&?.?Ч гггссартмт: Ддссзртацпа состой? аз гшэ}> :Д9вая,: обзора литература, оягеггзая гатэриахоз а изтодов всаыЧ ІЛогігіля, собстссцізг рэзудьтчтов асслэдоаП:?,7,й, вакіючаиш а гаї | сэясо^'. Она азлолзаа т' іо$~ сгргніщах' кзшшіопнсгоґо такста, содзргзт 5" рлсуп=ол а 7* табІЕц. Ук&заталь літературі сгл»-( чгізт 23Р-Ясточшиіа, из хш/бу зарубзлкыг, . '

Ь процессе раооты обследовано 46 сольных, составивших ос- ' новную группу, группу сравнения - <:6 Человек.

I. ОСНОВНУЮ группу составил! сольные, оперированнне по поводу опухоли головного мозга /Диагноз ьермрицироьая на операция/, в том числе 2? хеняш и возрасте от 1« до 60 дет. Среда них 25 вольных менингеоиама, II - с внутримозгоьыми опухолями,

2 - с новообразованиями хназмально-дяэнце*альной ооласти, И -

0 с опухолями локализации.

И. Группу сравнения составили 26 оолъкых: 15 вешцмн а II мужчин » возрасте от Id до лет, оперированных в условиях комбинированного наркоза, среди них 22 солъних нейрохирургического профиля /грыжи иехпозвоиочного диска, спинальные оаухо-ли, посттраьматическаи периферическая нейропатия, дефекта кос- * те4 черепа/, 4 оперированы по поводу соматической патология /язвенная Оолеэнь хелудка и желчнокаменная болезнь/,

, Ш. Контрольную группу составили 30 практически здоровых людей /доноры/, аналогичных по возрасту и полу с основной группой. '

Для решения поставленных задач применены следувдие метода;

: оаоора крови в ойъеме 10 ил для оиохикическнх к иммуноло-

гических исследований, проводили до начала наркоза, перед началом операции /спустя 2C-3G шн. от начала анестезии/, через 2 | часа от начала операции, по окончании нейрохирургического вмешательства, на I, 3, 5, S, 14 и 21 сутки после операции. '

Средняя продолжительность комбинироьанного наркоза для ОГ и ГС, соответственно - 6 ч.26 и 4 ч.Об , операция 5 ч.26 !и ?, ч.Ь4 , Вводный наркоз осуществлялся гекс^иалои.дла релаксации применялся ардуран /павулон/ и дитилин /листенон/.. Для ос-, !новного маркоза вспользсзвалй и^ролецтанакхгеэию /НЛА/ ^мротан, кетатн-седуксе новую анестезию и закись азота. .

1 Б отдельном исследовании проводили изучение влияния фи- ’ экологического сна на проницаемость ГЭЪ для «акроыолекуд, !

Содержание нейроспеци^ических белков /НСЬ/ - аль<*а-1 в \ {альфа-2-глооулинов иозга /а1ГМ, а2Щ/, аль*а-2-гликопрогеЕда ; |/а2СР/, глиального *иОршлярного кислого белка /СГАР/ определяли методом иммуно^ерментного анализа /Чехонин В.П., Морозов j i Г.В., 1987/. Количественную оценку результатов проводили на 1 (многоканальном спектрофотометре Titefcetk МиЦиЫ^ирмн ’’Flow", ;

' Англия. • >

окспериыенгальнув часть раооты и^сшодт.те на аО крьсах ли-ння "Бастер". Моделирование ироницаеиости Гои вызывали внутривенным введением галоперидола в количестьв 15 шт/кг ьеса хи-вотного. Определение ЙСЬ » крови крыс после обработка прово-дали чяр®8 3, 12, 24, 43, 72 часа. Изучение цеханизма активация балоксинтетнческих процессов осущесталнли с поиодьв антибиотиков актиноивдап-Д н пуройшшш, которые вводила внутра-брхшгано в общеприняты! дозах.

Выделение обогаденпоа фракция ва гаэга крыс в не4роглип прсЕодаз в два этапа: получение клеточной суспензии и после-ЯУЕ538 еЗ разделение изтодоы даЙеРеиВД!бльного ультрацептрг^у-’ гароваяня в ляяеНаоа градиенте пдотнэста сахарозы н фтккола /Селшгазр 1971/. '

' Опраделешв агркввостн РШС-аа осуществляли двумя спектр^

! кетртявсялня способам с пслользозаивем в качество субстрата дрхЕОВсЯ ЙК и радвокзтрнчесай с ^4С-РВД/удельшш радвоактый-; песть ЗСО ООО пл/гязн па I от /Арбузов В.Д., Крзчетова Т.Д., ; 1230/. ■

За едгтгцу РИ-езаоД актЕзяоетп погадала количества фор» етпта ЕгяадлзируЕЧЭга осаобсадзага ел ^С-РЗХ 1x1 СГ^ раеазд* !

' а В"л\. рэдЕгсхтЕзызго кзгврхада в шига етслорастшразис прэ-, луктоэ арз 37°С а тзчеиле I часа. Удельнув аггивкость РШС-аз ) шралада кап количество вдккяц активности фер^зата на I иг белка. Содаряаняэ РЖ определила по методу Сдиргша А.С./195а/.

. . Опрздолежтэ поларибосоимьного профиля иозга проводила с . нсдользоЕМше.ч г<шогешз8рованша глдоцитов, получениях от 4-х шшотеюс. Гоиогшшровадн глиоцггги в 3-х объеггах С,ОСЬ Ы И^О^г

0,025 (4 КС1 а 0,25 (I сахарозы э стеклянном гогэтгзнлзаторэ с та-I фгозоЕыа пестикой. Гокогеажзат цевтрифугпроыиш пря 15 ООО ^

; в гачедзе 20 я постматохоцдрнаяъцую адееттв использоэа

' ла для получения подирябосом,. - ‘ . .. .1

I . - Для этого раствор центря^утароваля црв 60 ООО о в минуту ! обрабатывали дезохснхолатеи аатрня /концентрация 1£/ ц..нандси^

| да ш градиент сахарозы от 10—40/5. Центрифугирование проэсдага 1 пря 5°С в течение 3-х часов при 25 ООО об/шш. Собирали 4раг-, . ^ ции.ао I ил, и оптическую плотность растьора азыеряла на спеит^

| роуотоыетре С*>-26 при длине ьолны 2СС инк. . !

Радиоактивность измеряла С ПОМОЩЬ!) жидкостного сщштиля-

' цасьього ечотчика *!арк II /КисЫй Сйиа^о'•~<ХЯ/ПГка4сс1вЗ| сщшпшзциоиноЛ юикостн исвользовалл сшшталятор ЕС-8. I ! - - ^тематическую оораоотку получениях дщщцх проводала Ей |

: -ЕМ твиа Ы РС а1. Сценку результатов ясслодоъаиня о сухости- !

ляли с ио»!ога>11 иепараметрдческого аншши, с исдользоЕ-акиеи 1 : кратарая Лшимиссокач&шш-^нтш!, корреляцаоииого & рзгрссса- :.

I ониоге анализа /ликег ирогра^ ЗТАТСПШЦС5, 51(Р£йеА!.С ~4/.. I

I |

: РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 1

, - ' »

1 I. динааака НСБ крови о олыоа основной грушш к груиш !

: сралнешя ира ыеарохи^ургяческхм. кмиатсльствах , |

) ' |

: Для НЗУЧОЫЕЯ урОВНЯ ИСЬ ЯрВ аеарОХИрурГНЧВСКШЕ Е5згсатедь4.

■ спш в ыархоае сила проводекы ксследоваагд саворэтка ировЕ ,

; 31 о&аьаого. Осыовыуе группу /ОГ/ составили 20 Солыих о ■’ гноаси опухсшг иозга. В группу сравнения вопля II оолыпх о |,

; з&оолоэдшиш иеЯрохярургачсского профиля. ' .

; Аигишз иолучешшх дашшх позволил бшешть у 19 и 31 б»-|

^львого писогхй фоиоанй /до наркоза/ урзьсиь й1ПЗ в а2ГЫ,, а (

' хсдго достоверное иоЕивтшз концентраааа о2СР. Результата да«|

I Е£1шчзского ксследовшая представлгш в тайлзэз I. .1

' Чароз 20 шш. от качала адиашшрбышного .наркоза прзцзе-!

I схо достоверное уролдчвшш' дошшгрпцяи ВООХ.'ШБ б срздиса | в 1,&-2 раза,, Через 2 часа ог начало операции во всах груп-I пах опшчалось зиачптелъпоо повышзкда количества ШБ.

I Средний уровень а1Ш в ОГ а ГС составил 14,Ь к 5,28.соэт4-

: вотствзшю, что провисало гсходшг вгзченля в 10,2 /ОГ/ я 19,5 /ГС/ раза. Сродни! уровзш» дня с2П! Оол еыео, чса для аШ1, и составил с соответствусдах грушюх’1а к 6,4а цг/шг/прсгшЕ.-.4>

I изо исходного уровня в 15,6 ы 16,6 раз/. Через 6 часов от кь-(. I чада .анестезии количество глбоуянаов кэзга в крова возросло \ до ыаноьтьиих цай? во всех групдах. Среднестатистические шачешя дшг аШЗ в а2Ш в ОГ состслзля 22,72 и 2а, 64 ет/ш.

По сравагшэ с есхохцша! уровнем увеличение глобулинов изгга; пошсилесь в ОГ с 15,7 и 24,7 раза, в ГС в 67 /!/ к 53 /!/ ра| аа дня аШ1 а &2ГЫ соотвйтствешы» . ... . д!

Аналогичные ааконоигриосты ваявдеш а дая’других озлкос козга. Так, через ,2 -часа поело аностозла ерэдаше статпстачо-! скиа зилчо:-12я для а2СГ и СТАР составили соответственно для ОГ;

• 1

Гл____________________

Таблица I

Содержание НСБ в крови (нг/ыл) нейрохирургических вольных в до- и послеоперационном перкеде. .

аТПГ

и' (среднее) 1755

71' ГОП

П’ (среднее")

~72 ТГСТ

До операции! 33 мин

2 часа

б ч (конец) I сутки

3 сутки 5 сутки 9 сутки

14 сутки 21 сутки

татг~~~

Сре^Н'

1.2 5.23 16.08 13.38 10.84 7.32 4.34 .48 ■ I '

2.32

14.8

22.72

21.16

15

8.02

7.23

4.01

1.34

.04'

.000-01

.04

.75

.08

.197

.74

.12

.11

.0319

.0004

.003

.64

.13

.07 .006 .56______

б

До операции 30 иин

2 часа

4 (конец) I сутки

3 сутки

5 сутки 9 сутки 14 сутки 21 сутки

1.14

-2.06

18

23.16

23.6

18.68

9.62

8.02

3.57

1.32

.03

.000004

.03

.38

.3

.21

.58

.16

.15

.39 1.22 6.48 20.64 18.03 12.27 8.91 6.4 .48 Л______

.005

.001

.006

.46

.12

.33

.4

.01

.56

До операции 30 иин 2 часа ' 6 ч (конец) I сутки 3 сутки 5 сутки : 9 сутки 14 сутки 21 сутки 84.96 191.3 617.7 814.18 744.88 511.17 371.71 241.78 140.8 69.28 - .034 ■ .0005 .13 .52 .03 .54 .19 .35 .19 39.27 166.51 513.32 674.36 622.04 496.13 314.71 197.49 17.55 12.42 - .04 ,04 .43 .73 .45 .29 .45 .01 .84

а’АР

Дз операции ЗОиин 69.6 221.4 • .02 46.91 188.36 .08

2 часа 739;79 . .0001 373.2 .06

б ч (конец) 942 . .097 . 834,5 .055

I сутки 940.71 .36 963 .5

3 сутки 623.86 .067 484,5 ■ .03

5 сутки 390.8 .21 338.66 Л6

9 сутки ■ зос . .25 137 Л4 .06

14 сутки 129.73 • . ,057 19.17 .006

21 сутки 78.29- .,„116..-,.. 6 .42

- Коэффициенты достоверности изменения концентрации рекной в кащые <; близлежащих момента исследования /кокцен-

НСБ изме-

трация НСБ приведена в нг/ил, Р1 - коэффициент достоверности различий в ОГ, Р2 - в ГС/. Различия достоверны при Р 0,05.

017,7 а 7оЗ,70 аг/мл, для ТС - 513,32 £’'373'’кгАй'.“Гослйч21212'| до сравыеыьаэ с всходаш уровней произошло в среднем для а2СР ' 'а СТАР в 13 а 8 раз соответственно. За 6' часов, прошедашх о* ! начала коыошшрошшного наркоза, концентрация Селкои в про аз ' возросла до иаксодалЫгоЁ а составила в средней в 0Г дал а2СР !

; я СТАР в 13 е 8 раз сеответстваш:о« За 6 часов, прггзяшпс от :

• качала квыбнадр&мниог© иаркова, концентрация Саякол в крзля

: Бзврэсяа до иаксшальсэ& н составляй в средосу а 0Г дгя а2СР \

; 814,16 к 24 2 иг/т, а ГС - 674,36 и й34,5 пг/ш ссэгвогсгазя-

| иа„ , I

I Па порше сутка кгяпчесТео глгаяьшх белков в крова про- | писало в 60-67 раз исходные значения, в дальнейшей титр бел- !

1 коб полого снижался, не достигая, однако, гсходшх цс^р к 21 >

1 суткам. • >,

■ ■ - !

• 2. Изменение уровня Н СЬ в крова крас, оброботаш&а !

: галолеридолом, пря пряиенеиие шглОнторев белкового |

, синтеза . >

'с Как известно, изиенаква проиЕцаемэсти ГЗБ вэамхпо под |

, действлец ряда лекарственных препаратов, в частности такшс,

; каа гилоперидоя, оодадгхддД йлисарусда дейетшеи па цептраль-!пао аль^а-ыорадрензрпмаскао а, особенно, на цеатралъшо до; фешлергачеекко рецептора. '

1 . Впервые в 19оЭ году Чехопш В.Д. определял ваход НОВ у

I больных шшо1*реш1ей, лочеьших Ссльешд дозаш галепзрздола, . | !в гкспораг.зитах ка шнотиых ои.установил дозу препарата, пзиэМ ! шзщую проницаемость ГЭЬ для какроыолекуя. '

. Др£ шутршзениои аведешдг 15 ит/ет галоперадола в крова

к^ыс обнаруживается кассмроваиша выход ЙСь. Повторяя эхе |

псследоваяия, ш сочла иеооходоны увеличить яродсдгдтеяьпссть! эксперимента да 72 часов. Дашьмха содвряшшя оелков ара введс--шш препарата продставлоса с таояпцз 2. •'.■■■

. .Из шэшвдгввдцо, что усе через 3 часа поело ввадешш препарата увеличилось содаршшяе ксследусгаа ИСБ в кров». . Цаксакэльше значения Н СБ в сотпп раз праващалз йоиошв во-. |лачааи, зафагсировашшо. в интервале 12-24 чаза. К концу 2-х суток достоверного, снюшаш ка ответили. .

Таган ооразеы, дншшша Н СБ, полученная в. эксперименте на авотиих, .практически повторяет закопвмзрасста, ваявяешше у болыш;. посла вводеция хомбишзровшшого иар:юза( где шзмп-.

Гаолвда 2

11эмзыен:;0 содержания ЙСЬ в крови крыс поело введения . внутривенно 15 иг/кг гачодерддола •

Врг;гх

рлл »л

ЭУЗДЭ*

глл

Содзроитяе Е СЬ в нг/мл

<*эя ”|о,2? -

3 часа !1,36 !0,001 б часов |5,2£ |0,005 12 чнсоэШ,9210,01 РА таоа|9,М |о,3 {21,7

часов} 9,2 [0,2 *12,9 !0,07

72 чяса {5,1 |С,03 ]а,1 |0,05

а!ГМ

!-----

___!_____

I

а£Ш

Т

?

!2,0б

26,1

123,

! ~ "

1 - -

10,0001 Ю,7

]о,5

а2СР

СГАР

!

*,5С

Т

!

!

о,1 -

! ~ " !

151,3 !0,00011221,410.001, ! {

412.6 ,О,С5 Ш ,110,01 744 ,в}о,9 541,2 !С,1

314.7 |0,01

l739.0j0.0I Ь40,С!0,1 |оЭ4,0]0,5 !СГ2,7!0,4 {425,б|о,2

; 13р.?.'зча!£:;е: Б стзяоцзх дрхшодягся ерздош уроаеш. съ.'-.г.а /&/ а \ "оцтовернаа различия :,:с;1ду сзсйдын!'!! по вертикали |

1 ЛУ. Ризлячпя достозе^пы при Р <0,05. |

| калыгов вадупгнке проаицзешета ГЬЬ оша отнзченэ через 24 ча-

■ сд пгелт .качала анпстезиа. Дядеэ пологое снигеш'.о НСЬ в кровав | гпзяп нзето.гак а кдкипкв, так а в зкепвраиеатв. В та га вр«и!

| чет го усталовленэ, что период полугшэгш НСЬ г крови крыс колЭ-; Слетел гтпр-здзлах 12-14 чс.сов /Чсхоца:: В. II., 1991/, поз?с:-у Ы-: евттза сэдергапгэ НСС в хрзвя яшгегшх в лвдеа иескшенио поддей-1 гллг’зтея за счет усиления оштеза в метках глял. |

; Из дакиа литература известно, что синтез белка являет- 1

| ся слсллу;: шогостад'Шки процессом /Н а чаева Г.А., 1&36/. I

! Еулспзшю вротиц Езг-ененшг прочны азианешш скорости синтеза >

! озлга требует слозшх а т ч чела тих 1'ссдедоййшш. Лервосто-!

I пгнгзэ'значение :шэе? усталевлеана стаднн, гдэ щяет быть всу-4

I езетаденэ торгогеязв пгл лктшацня бквекнтотичвеках процессов.'

| Дм отогэ сслользуптся гыгабигогп сгетзза белка. !

| ' Введение бзепородтаи крыссл 50 ьзг/дг шяакядздаиа-Д, |

паем мутрквзипого введения галопзртп.эла, ив пршело в сус»о— | сгзггдеш Езмгиешшм содержания НСБ в креза ко сравнзшаз с кои-! трэльиэй группе!. Так гз,-кех д лрй иыутряззкнза введении од- * пзга галоцзрздола, э данной случае зарегистрировано няксимадь-н?8' увеличение НСЬ чер>ег 2 4 часа. Болез быстрое сшжегше г.э- • дэтества НСБ в кроач огиечалось в период от 4Ь до 72 часов, ; было из достонзрао но сравнению с контролышии гивотыыма.

. , • 1д-

Гадам образом, блокада ШЛ-полимеразы после Бведеьш! ад-; вотшш актиноютша-Д существенно но отразились на дна шике !

' НСБ в крови. В связи с эткы возникло предположение, что из-шнецяе скорости синтеза белка при азыенешш прошщаекэст& ’ Г ЗБ происходит па уровна трансляции. ‘

, Дяя этого крисаа после введения гадоперадола, внутрай'ргь; цаиыо инъецировала сиась антибиотиков /шстилошшдаа в иурогха-; шша/„ Из таблицы 3 следует, что дополнительное иведеиле нуро~

1 шщш пршоло к резкоиу увеличенш} Н СБ ва фойе Егизиешш 1

| проидцаеыости ГЭЬ. I

■ Таблхца 3

I Изиеыенне содерааыая НСЬ в кровл крис аа фово галовзра- ! дола и нуршаацгиа+актЕношщяда-Д /внутрзорсшшв/ {

Враыя ;

ВЗЯТИЯ а Крови 1

а1П1

Содергание НСЬ в . иг/из . "Г "

* А ! *

+■

!

а2П! к !

Т

в2Гй

Т

!

ГВА

Г

?5.3 { -" 1 9,2 1- - ■

1162.0 10,001 1124,0 Ю,0002

1453.0 ]0 «02 ‘ ' ‘

1612.0 10,4

0,01

Фен ! - -,3 часа . 11,74 6 часов }7,4 12 часов!9,Ш 10,04 24 часй |5,64 |0,02 4д часов!3,01 10,01 72 часа | — | - -

2 ,53 19,6 18,1 10,2

5.07

1.7

I ““ 1 - -

|0,002

10,3 1

|0,01 {445,0 {0,5 10,03 1203,0 10,02

(б92,0 |0,001| 1591,0 10,7 |

|378,0 |0,06 !1€а,0 10,04 !тт! !, '

{0,002 {1а,3 ; 0,0001{И,4 |0,001

Примечание: Разлачця достоверны прд Р < 0,05. ,

. Удксималыше цафра Сила зарзгистркроъахш в поригдо 5-12 часов после введения гилоперадола. К 24 часаа количество НСБ ь аровя достоверно сшвалссь, а к 72 часам праетвчесзш ворп7-лось к■ясхедному уровш». ■ ■ • . .

' Такам образом, лродпологекае, что изьацешю скорости .сап-* теза белка в глнадышх 'метках после введения галепорвдола ; происходит ва уровне тражшщкоишх процессов, подтвердилось. Выдвинутое предподогеиае-о возкодиоЯ прэтпае этого явления аа счет стабилизации поляркб^сотльного коипдекса нухдалас! в . • подтвераденаи. ' .. ' : ‘ ; ' ’ ■'

Согласна ынешш Хадзна, пра экстра»адьшх ситуациях, уве-1 личекяе синтеза белка в клетках иозга происходит за счетизио-; пения биохммаческлх процессов на уровне трансляции. В запаси- |

мости от нагрузка, выпадакцеИ на глиальные неЦроналыше клетка, иезду шиш молот происходить оОиен отдельных компонентов,: в том числе отдельных рибосом. Так, в процессе обучения у лл-вотных констатирован переход рнбосоц в нейроны с глиальных платок. Тем самым, усаливается белоксянтетнческая способность;

, а работах®» нервных клетках. ' |

Считывая тот ^акт, что в условиях данного эксперимента нервные клетки находятся в состоянии запредельного торг-юкецшт с понияенной белоксинтетяческоа активностью,, мояно предпола- | гать /исходя аз вышеизложенной гипотезы/ транспорт рибосом п |

. других компонентов из невроцитов в глию,’где изгоняется пропн+ цдемость биоаеиоран с потерей Оолызого количества Селлса. '

: .В даннои случае следует олздать изменения профиля полн-

; сом. Пэатсиу первоочередной задачей /шилось научение профл-

• ля полисом и глиальной ткана у животных, получавших галопе 1 дол. Ссатношэияо фракции полисом л іюиосон э глналышх метках •; і»зга крыс исследовали в следующих интервалах: до, через 24 | 'часа н 72 часа поело внутривенной инъекция галоперядола /рзо.

| I,2,3,4/. •

’ ' Как видно аз'рао.1, у контрольных зіівотішх /без ебраоет-: па галоперздолеу/ поласошшй я моносомялышэ фракции а коли- . : пестзеннэн отнопеиян бнлл сопоставимы.

: Через 24 часа после вбэдэняя препарата па фоне резкого

і язкзненяя проницаемости ГЭЬ а выхода НСБ в глиальных клетках

■ подавляйтее колнчестпо рибосом бил о обнаружено в составе поли--

соїшого комплекса /рас.З/, •

Так!2і образом, нам удалось показать, что но крайней мэра ; одиоа аз причин усиления синтеза НСБ в «ззге злвотных /и, по-(-; пад2і:оиуї у ладей яа ±оиа наркоза/ обусловлено стабилизацией

■ нолзсоіяшх кс:длексов, шсгяецо осуцесталящях синтез белковых!

. нэлекул. В са"08. паслодпеэ время результаты была подтверждены

' глорфзлогнческта псследоЕанняіа /Маоякоз С. С. с соавт.,

| 1992/. . ■ \. ... .

, 'В.тэ.гэ врег/л,'аналнз полисошюго профиля показал, что ! количество РІЙ комбинированное фракции к 24 часам после введе-[ пая галоперядола существенно не превысило фоновые значения з,

Iі таюш образом, притока дополнительных рибосом, пак иогно было ; ожидать согласно теории ївдеш, не происходит.

| Через 72 часа после введения галонерадола, видимо, начи-

гіс5т*»ілїсхадйть~ процесе”^соіЕЩаПкіЩюйеоЕШїогоПі^-] ловался. Ка рас.4 четш определяется сиб иоиосоц, содарїадчхі і:з ідзіієс 2С£ количества PH К, Учатизая тот «іапт, что срок азд-Е2 пашїошльхіого доинлекса в ви&чігеедькоі; изро оп,родгіш:гес£ ; Еаьлцоцивц актииаостк РШ£-ш, как аосоцзировалкшс с рэйоосш.-,

V'

ю

20

її

.нсиора фракций

позора фракций

ІРио.І, Профіт поллсоіі в глса- Рьо.2. Изшисшія п.ох:цр;:босо-Т ЛІЕУХ КЛОІІШЇ КОІІТрОГЬІШХ £2- іздіі^го про&іая посла оОработ-

' ------ ин 0,1$ расгворои р^Оскуидеази'

БО ЇШ

с с,

Ю

І5

- ■ ' номера фракций кодера фракций

;Рио.З. Изменение профиля полисов ргС.4. Шазцеше сіріші ео~ в глиальшх клетках чарза 24 ча- . д»с011 Б гжалькыг кгегкаг ■ I после введения галоперздола иазга через 72 часа после ;

Евадсшхя галопорадода 1

I

а

■яГ так и гі.’іаз.'.итйоскііУ,'йстб' прбЕядттямэрггш -иггазиютгг | двух ткпов ГИК-аз з готагевято, праготовланкоа пз злоток глнз^ од/мг

• Рг.с.5. Нз-'гзаоняв сСг;з^ гПіІ{-,гз::оЙ активности ^еркзнта

; . Каз пздііо аз ряс.5, чотко отвечается падение обцэй РНК, пзпоИ акткваоста ^ордепта о 1,9 /феиопт результаты/ до 0,7Э-1 0,82 од/гіг белка я 24 часаі! зксперішента /Р 0,001/. .

1 ..Логзчпо ярздаолсшть, пто поскольку ПК-пзц являются бел-

•гл, а пргзгсцаз:.*эсть ГЭБ дял иакраллекул на фоне галолерздо-’ 'а роз:со копилась, аозіяяен лерэход часта іївргзнтативной акти4 г поста в Оисгяякоога. Опродвлсизо суг^лрао’,1 активности фер;.;зи-1 їз з сиворотко крова подтвердило правильность выдвинутых прзд4 | ::слс.-ешіЗ, Проявление РНК-азксіІ активности было отыэчеио узэ | | ’гороз 6 часов поело введення препарата. ЬЬиссгмалыше цифра за4 , 1'эгастрароваш черзз 24 паса. 3 то 20 вреия, достоверное сна-| пеняв активности било отизчвно через 48 часов, а полное печоз-I поеєіінз - к 72 часам.

• Толга образом, дпнаюка ПНК^азкой активности в крова

: прздетавляат собой зеркальное отображение результатов, полу-І пенных пра изучения -энзиматической активности в глиальных гле-| тках. Тем самый можно утверждать, что при обработке аивотных

і.талоперадолоа имеет место выход РНК-аз из клеток мозга в бно-) яидкости. ■ . ; _;

г . Полученные результаты были существенно подарешеш изуче»-I шеи активности РНК-аз, ассоциированных с полисомшии коып- |

I яексаш. , |

■: Если через 3 часа после введения препарата активность

{ РНК-аа существенно но изменилась, то через 12 часов составила I ыеыее 502 исходного уровня /? 4. 0,С2/, через 24 часа, актив - '

{ ность фермента в составе полисом оставалась низкой, и только 1 I через 72 часа установили достоверное возрастание активности - |

I ^ериента, что совпадает с ыачадои диссоциации полусонного коя~

; текса„ - ‘ ;

| Таким образоы, подучешше результаты доказывав!, что пе-;

раод полухизим рнбосошльного комплекса определяется изменением активности РИК-из как в плазматических, так и рибосомаль- : шх. Максимальное снижение активности _ РИК-аз в период 12-24 | часов совпадает с процессом ассоциации рмбосоиалышх образо- | вшЖ, которае, по-вмдюацу, ииеют высокую белокскштозируэдую |

; активность. Следствием этого процесса является увеличение , ,

1 НСБ в крови подошлшх животных. ' ;

I ' ' ’ ’ ■ , 1, ■ ■ .; 1

■ ЗАКЛЮЧЕНИЕ ■ ‘ {

I Иного численные сооощення о повашнлой проницаемости ГЭ£ !

! для НСЪ пра неврологических и психических вайолеиаиилх, а такг I ке травматических состояниях головного иозга требуют пероа^эт* рения концепции о патогенезе перечисленных патологических со-; стоянии, так как выход ЫСБ з кровь сопровождается образовали-^ он антител с пссдедувдш повраздецием 1&53ГОЬ04 тшш. (

В последние годы установлено, что проницаемость ГЗБ для ’

{ иакрошлекул иеияетсд па ±оив приеш лекарственных средств, [

■! алкоголя и при стрессовых ситуациях. I '*

’ . Однако, неслО'хр! па образование антител, поразенкя шага; в большшстве случаев не происходит. По-вадншму, существуют лахааизкы, препятствующие осуществлении этого процесса. В то да время дакша по етоиу вопросу в доступной нал литература ад но. обнаружим. ~ " ■ .

В настоящей работе в качестве кодеди использовала иеаро-хирургические вмешательства /наркоз/ , как комплекс' критичес-■ кнх состояний , каждое иг которых шкет привести к нарушение проницаемости ГоЬ и выходу специфических для нервной тканп белковых соединении В Кровь. ' ;

В очсперзшэнтах па амйопшх изионеияе пронацаег-оотн ГЭБ "иэываля введением галоперадола.

’ Лолучсшшо яани результаты ухазывают па то, что у боль- j ' irxx з услогалх оСэтй ааоотозо с нейрохирургической патологией значительно язкзнявтся проняцаеиооть ГЭЪ для ИСЬ. !

! Кап показал корраляшшшшй аналлз, на ноходинй уровень j ! ПСБ и крова Сольных аднлля слодугаао <]актори: I/ тяяость обг,э-го состояния; 2/ количественная прекэдакацгя з прэдоперацаоп-, ций период. ‘

; Чзрзз 30 етиут от начала ойзэа алосгэзил произошло досто "31Л09 !ггогохрзтпов погыивзао уровня НСЬ'кая 11 ОГ, так а а ГС ; э шшразлзнкз козг-кровь а элшакацня ПСБ з кровь. ;

Воз дальцепгзо аэг-зроиая прободала ца ijone оперативного '

: £:.’2птвльст£д, одаако, учатшгая зиипятзльноэ поеыяэизз зогщги-< ■трацяз Сслг.сэ з срздлза а 10-67 раз из тсыпко з ОГ, ;:о я t пппктачсскл во есох больных ГС, поэтому :-ожо заглотить, по ' пзлуща фаяторся гзг.'заекдя продацаегмстл ГУБ яагяэтся кариоз,

‘а зэ гарзгрппеогяя зрзкатлзоцая гозга. ' .

„ Во врзг'л анзстезад а в послеоперацдошго;! перзодэ обрзгд-о? па себя EIE-—изо {дтг высокого содержащая ПСБ а дрова.

, .OfcapyaeanaU яамз гысокдё уроюаь БСБ а крова на протяго4 пзз 3- кэдsjs пЬслеспврацйошгаго периода аесогааыяо свядотоль-стзуст кэ только о поЕНсэяаа прснацаскоста ГЭБ для uaxpotauio-:сул, по л об усглензя биосинтеза белка глгадь'гш.п клеткяья ”ззга, что,.зда!»» ггзог вагиов фззаояогстесаов значеппа. Д.-' подтворздендя этого Earaoro.ncsossuai бнлл проводош! экспорл-гматальшо есслодоеолзл. Используя гзгдбггеоры синтеза белка, удзлссь установить, nr о стлыуялцз! .бкосгнгвза з отзх условиях происходя? ца уровне трансляция. Это шшдвкяо а послодкза го-"1 Сило ПОДТЕОрПДОИО ультраотруктурш’п ИССЛвДОЕШИЯиа.

ОбразоЕапяо активных стабалышх лолцсо;.:алышх образована: гадая» обсспочзвазт усалвизэ синтеза балка в течение даяталь-г:ого вреьтзаа. Кап паи удалось установить» одной нз причин зто4 гэ.явления было сшиеняе актаваоста FHK-аз в глиальных клотказ козга, а уксиьЕецца суммарной FHK-азноЁ активности обувловленс ЭЛ2!Л2ШЩ30а фвркэлта ИЗ ДЛ8ТОК козга з кровь.

Чехоннн В.П. a 1991 г. показал, что при шизофрении а Полазил Альцгвйкара колачоство антител значительно превышало со- 1 дерглияе антигенов козга. В зтах условиях создастся олагопри- !

'ятиие предпосылки ддя проникновения антител в ткань-мозгаПс.......

;последующш образованием имцунных комплексов, повреддащих

•клеточные структуры. ........................

| Фетисова И.Г. в 1992 г. показала, наоборот, что £ после-

операционном периоде количество антител у больних с различишь |зайолошшияли иеьелжхо. В эти условиях реакция (штжгеы-аитатв-'ло в динноы случае будет происходить в крови, препятствуя тем самии поражение ыозга.

Таккы образом, усиление синтеза бедка в клетках мозга при дИаивиешш проницаеиости ГЭБ способствует поддержанию высокого 'уровня специфических антигенов в биохидкости в течение ддоте-дьиого в рейс нк, создавав теи едины предпосылки для связывания штител вне юзга.

Быстрое падение уровня НСБ в биоаидкости из-за дефектов белоксинтезирувдсй системы в клетках иозга приводит к актитало-іобразоаашю, которое способствует поьреядешаз с гибели глша-'лмшх клеток. !

| виводи і

і I. Впервые показано, что на <іоиа наркоза и ио&рохЕрургвче«

ского виеаіательства изменяется проницаемость ГЭБ в шееввшш ' ішходаж неііроспеци*.ических белков в кровь.

! 2. Сравнительна клинико-биологический анализ динамики ,

НСБ в крови прооперированных с лорагением различных отделов цаг игральной нервной систеш в у пациентов без патологи: ЦЙС до-:ЗШШ ЕЫЯСНИТЬ, что основной причиной ішрусешш ПрОШЩаеШСТЁ 'ГЭБ является наркоз, тогда как хирургическая траваатвзамш ш-' і зга ш «тот процесс существенного влияния не оказывает,

і ' 3. Доказано влияние лекарственных веществ ш измзнензе і пронгцйсыостк ГЭБ: уровень ЕСБ б кроск -яовыезлсл ва фонд вмдэт ни диуретиков к скипался при введещш гормонов, в частности ■ доксаызтазона. . • . ‘ ,|

,' .’.Ч. Стабильное увеличение уровня НСБ в крови в послсопара-\ и^1ШЫ£ период позволило предположить, что при наиенешш прошіг цаеиостн ГЭБ в глкалькнх клетках могга происходит усиление синтеза белка. . |

5. Как впервые показали экспериментальные исследования, |

усиление синтеза белка при нарушении проницаемости ГЭБ пронсхот дат ка уровне трансляции за счет аггрегации рибосом в активные! полмрибосомалыше образования. ■

^!б і _ _ _ ' :________ _______________I -

6. СтаСильность полиркбосомальшх ко*тле*сов обусловлена ! снижением активности ИК-азы В клетках мозга. , !

'жадности. # ,

; 6. Высокий- стабильный уровень НСБ в крови при увеличении 1

проницаемости ГЭБ у больных и экспериментальных животных имеет важное физиологическое значение, препятствуя образовании !

:антител и поражению ткани мозга. ;

; СЛИСОК РаъСТ, ОПУЫШКОВАИЩХ ПО TEiffl ДИССЕРТАЦИИ ■

: I. Защитная реакция клеток мозга при изменении пронкцаега-

сти ГЭБ // Вопр.мед.химии, т.ЗС, й4, С.72-75 /Соавт.Хохлов А.Д., Фесова И.Г., Чехонин В.И./. j

■ 2. The chintfej m iht peumtabihly of Ibe blood-bnaiVt j

baRRieR when undea «euRosunqical ini«Rventlon/Mo!ecu|aR 1

7. Снижение активности ЕНК-аз в клетках ыозга при изме- ! нении проницаемости ГЭБ обусловлено переходом *ермента в био- ,

/

Г