Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биологические свойства Y. enterocolitica в условиях микробных ассоциаций с C. albicans

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Биологические свойства Y. enterocolitica в условиях микробных ассоциаций с C. albicans"

РОССИЙСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ДРУЖБЫ НАРОДОВ

На правах рукописи СШШ Константин Александрович

БаОЛОГИЧвСКяе ОВОЙОТШ У»еп1егосо1:и1са в условиях шкробных ассопяапий о (¡.аХМсгтв.

03.00.07 - микробиология

-А в т о р е ф е р а т Длосертапаи на соискание ученой степени кандидата медяпинсках наук

■Москва 1992

Рибои »«полнена на кафедре микробиологии, 1ирусологии и иммунологии Рязанского медицинского института имени академика И.П.Павлова

Научный руководитель -заслуженный деятель науки РСФСР, доктор медицинских наук, профессор Р.Н.Реброва

Официальные оппоненты -доктор медицинских наук, профессор С.А.Дратвин

доктор медицинских наук, профессор В.М.Лещенко

• Ведущая организация -Централей Ордена Ленина институт усовершенствования врачей

Защита, состоится " " 199гг. в

на заседании специализированного совета К 053.22.16 в Российском университете дружб« народов по адресу: 117198, г.Москва, ул.Миклухо-Маклая, д.8. '

С диссертацией можно ознакомится в научной библиотеке Российского университета дружбы народов по адресу: 11719а, г.Москва, ул.Миклухо-Маклая, д.6.

Автореферат разослан "

1992г1

Учений секретарь специализированного совета, кандидат биологических наук

илиарова

Актуальность темы. Проблема воспалительных заболеваний киишч ника, вызванных условно-патог,енными микроорганизмами, в нас-•гоящеа время праобретевт важное социальное значение в связи с увеличением их частоты. .Возрастание роли условно-патогенных Микроорганизмов, активизация их факторов патогенности, связаны с продолжающимся ухудшением экологических условий на планете, nj-ti водящих к изменению традиционных взаимоотношений микробов и орга низма человека ( Р.Н.Рейрова, 1979, 1989; В.И.Покровский 198.0, 1989; С.А.Дратвин 1989 ).

Ассоциативный характер участия условно-патогенных микроорганизмов при нарушениях микробного биоценоза кишечника, не вызываем сомнений ( Р.Н.Реброва, 1979, 1991; В.Н.Кроснсголовеп, 1989 ).

Значительное место среди условно-патогенных микроорганизмов занимают грибы рода Кандида и кишечные иерскнии ( В.Ы.Ле-щенко, 1989; И.В.Смирнов, 1991; Р.Н.Р.еброва, IS92 ). В последние годы появились отдельные публикации, указывающие на возможность одновременного выделения из окруаающей среды и от взрослых и детей, больных острыми кишечшвд ин^еишяш ( ОНИ ) ассопиашй грибов рода Кандида я иерсиний ( Т.А.Абдыкеримова, 1982; Н.И.Александрова с соавт., 1388; В.И.Пушкарева с соавт., 1989, 1991 ).

Однако, вопросы взаимодействия грабов рода Кандида и кишечных иерсиний остаются неизученными. Неизвестно, как влияют грабы на рост иерсиний в смешанных культурах, на течение экспериментальной иерсиниозной инфекции, на латогенность и некоторые другие биологические свойства кишечных иерсиний. В литературе отсутствуют сведения и рекомендации iro способам и питательным средам для совместного культивирования кишечных иерсиний и грибов рода Кандида.

Исходя аз изложенного, мы поставили пель - изучить влияние л.albicans на факторы патогенности и некоторые другие биологические свойства кишечных иерсиний в условиях in vitro и in. vivo.

Для достижения поставленной пели необходимо было решить следующие задачи:

- изучить распространение грибов рода Кандида у больных острыми кишечными инфекциями и здоровых лип;

- разработать способы совместного культивирования кишечных иерсиний и грибов в условиях1п vitro и in vivo

- исследовать влияние грибов на патогенные и некоторые другие

биологические свойства кишечных иврсингй, несущих плазмиду вирулентности и их безплазмиднкх вариантов, в условиях vitro К in vivo.

Научная новизна.

Впервые разработал способ совместного культивирования кишечных аерсиний я грабов на питательном.бульоне, содержащем пептон, сорбит, хлорид натрия, двузамещенный фосфат калия, мети он» л, тиачнна бромид ( способ защищен авторским свидетельством, 1991 ). При совместном культивировали« вдавлено взаимное стимулирующее влияние я нерсляяй, л грибов на кинетику размножения мякроба-ассопланта.

Впервые воспо»яведена аерсааяозао-гкаадвдозвая ¿щфекпия у белых беспородных ышей при пероралвном заражении грибными клеткащ и кишечными иерсаниями, несущими плазмяду вирулентности и безплазщдными вариантами. Показано отягощающее ьлаяние иа течение экспериментальной иерсиниоэной инфекпии.

Впервые установлена способность кишечных иерсиний быстрее гемолазировать эритроциты,'взятые от белых беспородных мышей при еерсиниозно-кандидозной инфекции, чем от здоровых животных. Среда с конго-красным использована для выявления вирулентных штаммов клиечяых иерсиняй и Для изучения относительной активности ферментов дыхания. Установлено, что дерсвник, несущие плаэмаду вирулентности, обладали более выраженной активностью ' ферментов дыхания, чем их безплазшдные варианты..

Разработан оригинальный способ определения -адгезивной активности. кишечгах версикий к полистиролу, позволивший установить выраженное влияние грибов на этот вакяый фактор патогеяности.

Установлено, что грабы активировали выработку лепитшазы у . шашечных иерсиняй и адаптировали к повышенному содержанию хлорида натрия иерсинан, несущие плазмяду вирулентности.

Впервые предложен оригинальный способ выделения кишечных аерсиний с применением питательного бульона с сорбитом а гей-пианвиолетом ( ПБСГ ) из субстратов, конташнированных различными видами бактерий а грибов. .

Практическая генность. Диссертационная-работа проводилась в соответствии с планом научно-исследовательской, работы института. Тема': " Биологические свойства l'.ea-lerocoiitioQ в условиях микробных ассоциаций с С.albicans "( номер госрегистраияя 01900040903 ).

На основе изучения датательв.их потребностей кишечнкх передний и грибов рода Кандида, кия ехидн и роста на раэл.ччних патательншс средах в условиях слеаакяы* культур разработан "Способ совместного культдвярсвания кг.шечннх иерсиний и грибов рода Кандида" ( положительное ревонге отдела пищевой промишлел-лооти и биотехнологии Щ11Ш1Э ГОСПАТВНТа СССР, сентябрь, 1991, январь, 1992 - принято ресение о ввдаче патента ),

По "Способу выделения кишечных иерсиний из субстратов, загрязненных различными видами бактерий л грибов" получено удостоверение на рационализаторское предложение ( декабрь, 1991 ), а также разработали методические рекомендации, внедренные в практическую работу врачей-бактериологов г.Рязани,

По "Способу определения адгезии кщечних иерсиний к полистиролу после совместного культивирования с грибами рода Кандида" получено удостоверение на рационализаторское предложение, оформлено информационное письмо, внедренное в работу централизованной бактериологической диагностической лаборатории г.Рязани.

Предлоаена модификация "Способа определения адгезии грабов рода Какдада к эпителиогштам слизистой оболочки ротовой полости", разработанного ранее на кафедре микробиологии Рязанского медицинского института Р. 11.Ребровой с соалт. ( Ï9B9 которая доложена на областном семинаре враче;-.~сактериологон и внедрена в работу облСЭС и централизованную бактериологическую 'дяагйостдческую лабораторию г.Рязани.

Апробация работы. ..

Материал!! диссертации опубликовали в 10 научных работах. Результаты исследований доложены на дьух международных симпозиумах ( г.Росток, ГДР, 1990; г.Санкт-Петербург,' 1991), на научной конференции молодых ученых, специалистов ЛагССР и студентов Рижского медицинского института ( г.Рига, 1988 ), на итоговой объединенной конференции молодых учеши , специалистов и студентов Дагестана ( г.Махачкала, 1989 ), на итоговой научной конференции молодых ученых д студентов ( г.Рязань, 1689 ), на конференции "Разработка и производство препаратов биотехнологии" ( г .Махачкала,. 1990 ), на У1 Всероссийской съезде микробиологов, эпидемиологов и паразитологов ( г.НиашиЛ Новгород, 1991 ). 3

Полотгопдя. выносимно на защиту :

1. Гриб с.alb1сапа существенно влияет in vitro на некоторые биологические свойства ï.enterocolitica , несущих плазми-ду вирулентности и их безплазмидные варианты.

2. Гриб с.albicans отягощает течение экспериментальной иер-синуоэнои инс]екгии, вызванной не только плазмидосодерианшм, но

И безплазулдным вариантом Y.enterocolitica , а также способствует колонизации иерсиний во внутренних органах и длительному бактсриоввдслекию из кишечника.

3. Разработанные оригинальные способы "Способ совместного культивирования кишечных иерсиний и грибов рода Кандида", "Способ выделения кишечных иерсиний аз субстратов, загрязненных различными видами бактерий и грибов", "Способ определения адгезии кишечных иерсиний к полистиролу после совместного культивирования с грибами рода Кандида" эффективны, не требувт дорогостоящих компанентов; больших трудозатрат и могут быть рекомендо-в£1лы к использовании в бактериологических я научно-исследовательских лабораториях.

Структура и объем работы.

Дяссертагйя состоит из введения, обзора литературы, 6, глав' собственных исследований, выводов, практических рекомендаций, списка литературу. Материал изложен на 156 страницах машинописного текста, содержат 22 таблипы и 22 рисунка. Список литературы включает 290 источников: 119 - отечественных и 171 - иностранных..

ОСНОВНОЕ СОДЬРШИЕ РАБОТЫ

Материалы и метопы.

Материалом для исследования были: штамкы кишечных иерсиний , ееровяров 03, 05, 07, 09, вццеленные от взрослых больных острыми кииечными ии$.етаяки, от грызунов, а также полученные путем селекгии; грибы С.albicans , выделенные от взрослых и детей, больных острыми кишечными инфекциями, и здоровых лип, а таете штаммы энтеробактсрин и кокков (E.ooli , Sti.sonne , Pr.mirabi -lie et vulgaris , r»t.aureun ), выделенные от больных острыми кишечными инфекпияш. Всего в работе использовано 44 штам-.ма микроорганизмов. Объем исследований представлен в таблаге I.

Таблица I

Объем исследований

наименование исследований , количество

Обследовано больных ОКИ.. 135

здоровых лиц •42

биосубстрагы 259

Изучено штаммов 162

грибов 140

энтеробактерий и др. 22

Определены биологические свойства 648

Разработка способа совместного культивирования иерсиний я грибов 582

Совместное культивировали иерсиний и

грибов ' 936

6416

• Разработка способа выделения иерсиний

аз микробных аосодаапий 1512

Изучение некоторых биологических свойств

адгезия грабов ( шт. ) 140 адгезия, галотолерантность, относительная активность ферментов дыхания, лепитинвзная и гемолитическая активность иерсиний 1674

Всего исследований ' 11.667

Для совместного культивировании кишечных иерсиний и грибов применяли сахарный бульон с 1% глюкоза и питательный бульон с сорбитом ( ИБС ). Для выделения иерсиний из субстратов, конта-мянированних различными видами бактерий и грибов - качестве среды накопления ПБСГ и дистиллированную воду ( ЛВ ), в качестве плотных селективных и дифферетыально-диагноотических - Эндо, ахаризованную среду Кода. Для выделения грибов рода Кандида -кандида-агар. Для изучения некоторых биологических свойств кишечных иерсиний - лселточно-солевой агар ( ЖА ) и его модификации ( содержание хлорида натрия-2^,^,-1%,), мясо-пеп-тошшй агар с добавлением конго-красного, кровяной агар со

Ь

язвасью эригропятов мьшей или человека.

Выделение и ндентифакапая кишечных иерсиний и грибов рода Кандида проводилось по общепринятым методикам. Совместное куль-пшировашш кишечных иерсииий и грибов осуществлялось по разработан пому H£w;¡ способу культивирования на ПБС; in vivo -при ■• пероральноы заражении.кишечными иерсиниямя и грибами белых беспородных мышей. Выделение иерсиний из гомогенатов внутренних органов яивотных проводилось по разработанному нами способу киделпнгя и, по способу, предлокенному Г.В.Ющеико с соавт. (1Э84) Идонтнфякапия к наличие плазмвды вирулентности - по комплексу,' культурально-морфологическиХ признаков и в реакпяи агглятинапив па стекла с поаацья сывороток, полученных и любезно предоставленных К.В,Смч.пипэн.ч. _

Определение галотолоралтности, лецитииазной и гемолитической активности - по общепринятым методикам.-.

Адгезивная активность грибов к эплтелаопитам ротовой полости проводилось по модиркапии методики Р.К.Ребровой с соавт. ( 1989 ); адгезивная активность кишечных иерсиний - по разработанному каш способу ( 1991 ).

Полученные результаты подвергались статистической обработке, используя общепринятые методы ( А.М.Керков, Л.Е.Поляков, 1974; ' И.П.Яисипни, 1937 ).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И IH ОБСУЗДЕНИЕ

I. Распространение.я адгезивная активность грибов, рода

Кандида, выделенных от больных ОКИ и здоровых лиг.

Микологические исследования показали, что у практически здоровых взрослых и детей грибы обнаруживаются в 13,33-16,215«, от больных острыми кишечными ипфекгпями - в 51,51-83,33$ случаев. Преобладающим видом был с,albicans( 55,С??). Наиболее разнообразный видовой состав выявлен среди штаммов, выделенных из фекалий взрослых, больных ОКИ ( n.tropicalia, C.pseudotropicalis, C.kru-sei, C.cuinarmondii.

Установлено, что наиболее высокие индексы адгезии обнаружены у грибов, выделенных из фекалий взрослых, больных ОКИ ( 12,56-1,82 ), причем индекс адгезии с.albicans превышал этот показатель других видов грибов в 1,67-3,22 раза ( pO,OI ). Не выявлено статистически достоверных различий адгезивной 6

активности грибов, выделенних ог мужчин и кенщин, девочек и мальчиков, а таетэ у грибов, выделенных в различных возрастных группах взрослых.

2. Совместное культивирование кишечных иерсиний и грибов

1П VI. "Ьго .

Опыты показали, что сахарный бульон, применяемы;; для совместного культивирования грибов рода Кандида и некоторых энти-рсбактерий, оказачся неприемлем для совместного длительного культивирования кишечных иерсиний и грибов - после незначительного увеличения количества клеток иерсиний к 3 суткам наступала полная ингцбипия их роста в течении всеги срока наблюдения ( 21 сутки ) как при 37°С, так и при 26°С.

Разработанный оригинальный способ совместного культивирования иерсиний и грибов позволяет осуществить наблюдение за влиянием грибов на разкнояение кишечных иерсиний. в течении трех недель при 26°С а при 3?°С ( табл.2 и 3 ). "

Сопоставление средних арифметических значений кратности увеличения количества плазмидосодержавдх и безплаз.чидных вариантов иерсиний а смешанных культурах по сравнению с числом клеток иерсиний в монокультурах показало их большее количество в присутствии трибои ( табл.4 )как при.26°С, так и при 37°С. Ста-тлстическидостоверная кратность увеличения числа'клеток иерсиний в опытных сериях при 26°С выявлена в '/5%, при 37°С - при 50% Случаев.

Ингибииия роста кишечных иерсиний на сахарном бульоне можно объяснить резким снижением на 3-5 -сутки концентрации водородных ионов с 7,6-0,2 до 5,1*0,2 ( контрольные сериди ) и 4,3*0,1 ( опытные )Пра 0(5еих температурах. Уровень рН в ПБС оставался, примерно, одинаковым ( по сравнению с походным ) - 7,3*0,3 , что подтверждает рациональность применения этой среди.

Ппособ культивирования на ПЕС кишечных иерсиний и грибов, такге как и на сахарном бульоне, позволяет выявить рост грибов в смешанных культурах во все сроки высевов при обеих температурах, причем увеличение числа клеток грибов лри высевах из смешанных культур на 21 сутки совпадает с аналогичными изменениями кинетики роста кишечных иерсиний в этот же период высевов

Таблица 2

со Средние Ееличины количества кииечных иерсиний в смепаяных культурах с грибами на сахарном

бульоне и питательном бульоне с сорбитом при 2б°С ( кл/мл Ю9).

сахарный бульон с I% глюкозы питательней бульон с сорбитом

Л1" П" П++грнбы П~+грибы ГР П~ П%гриби П +гриб

3 0,32±0,08 0,29±0,07 0,05-0,01 0,03±0,00, 6,ОЙЮ,34 :',78-0,17 6,0810,18 6,0410,05

5 0,20-0,01 0,1810,01 _ . 5,4410,23 5.2гЮ,'21 7,8010,34 6,4010,48

7 С,С2-0,00 0,01±0,00 - . 2.9810,09 4,2010.15 6,35И,15 6,3810,16

9 0,0110,00 0,0110,00 - 2,73-0,16 3,68^0,24 6,2010,15 3,7510,30

14 - - 2,50^0,12 1,2110,21 2,4510,04 1,53Ю,05

21 - - _ _ 2,9410,68 1,8210,61 4,6610,63 2,8410,10

ПРИМЕЧАНИЕ: П+ - монокультура иерсиний, несупих плазмиду вирулентности

П~ - монокультура безплазммних вариантов кизгчких иерсиний

П++гриби - смеаанние культуры плазмидосодсржацих иерсиний с грибами П~+гриба - смеаанние культуры безплазмидкых вариантов иерсиний с грибами

•Габлича 3

Средние величины количества кииечных иероиний в смешанных культурах с грибами на сахарном бульона и питательном бульоне о сорбитом при 37°С ( кл/мл 10® ),

сахарный бульон с 1% глюкозы питательный бульон с сорбитом

П+ П" П%грлби П~+грибы П+ П~ . [Г+гриби П'+Гр^бы

3 0,00^0,0 0,001±0,0 0,С001Ю,0 0,0001^0,0 1,6110,09 1,6810,01 0,69Ю,02 Э,03Ю,91

5 - 3,0210,11 1,8210,01 1,74Ю,03 З.С0Ю.15

7 - 1,57-0,05 1,6010,02 1,5610,07 2,0610,31

9 - 1,21^0,08 0,8410,07 0,7710,08 1,1910,15

14 - - - - 0,8910,16 0,9110,11 0,4510,13 0,4710,14

21 1,1010,01" 2,3110,04"35.Г9±0,19"94,17±0,28"

ПРИМЕЧАНИЕ: условные обозначения П+, П~, П^+гриба, П~+гриба указаны в примечании табл.2. " - кл/мл 10^

Таблица 4

Средние арифметические значения кратности увеличения колячест-ев клеток иерсиний в снеаанных культурах с грибами при разных услогшх культивирования.

йб°с | Ш

(П%гр;к5ы):П+ (1Г+грибц):ГГ | (П++грибь[) СИ" Vгрибы):П~

3 1,00 I ,'59+++ 0,43

0,56 I

7 1,52^ 0,99 1.29+<"

9 1.02 0,64 1.42++

14 0,98 1,2б++ 0 54 0,52

21 1.90-+4- 1,86+ь+ 40,77+++

ПРИМЕЧАНИЕ : условные обозначения указаны в примечании табл.2.

+ -р<0,05; ++ -р0,01; '-р<0,001

3. 'Влияние с.а1Ъ1сапа на .течение экспериментальной иерсдкиозной инфекпаи у белых беспородных ьшьей.

При вскрыгиии животных, забитых на 7,14 и 21 сутки, в большинстве' их внутренних органов обнаружены патологические изменения: печень я селезенка увеличены в размерах, на разрезе их ткань выбухала, была лишена обычного блоока, тусклая, мутная. Иа 14 а 21 сутки .у кивотных, зараженных иерсиниями,. несущими плаз-миду вирулентности, отмечены крупн'оочатовые деструктивные изме-¡¡еная в печени ( до 1/3. ) и множественные мелкоочаговые ( в диаметра до 1-2 ш ) - в селезенке; у некоторых животных этой группы выявлен геморрагический энтероколит; из очагов некроза высевались кишечные иерсинии и грибы.

Иерсиниоано-кавдидозная дн1екпия приводила к задержке роста животных, сплено- м гелатомегалиа С в 1,54-2,29 раза, р<0,05-рс ¿0,001 ).

На 7,14 и 21 сутки экспериментальной иерсиниозной и иерси-дйозно-кандидовной инйекпии можно отметить статистически достоверное более частое ввделение иерсиний из содержимого кишечника, чем из гомогеяатов легких, селезенки, печена ( соответственно в 2,75-7,33 и 1,37-9,17 раза ). 10 "

На 7 сутки устаюзлэяа болев ингенсягрлл янфипяровашюсть внутренних органов животных, зараженных иерсиниямя, несущими плазмиду вирулентности в сочетании с грибами. На 14 сутки - в группа животных, зараженных йезплазмадннм вариантом в ассоциация с грибами, ннфпгтированность внутренних органов статистически достоверно увеличилась в 1,88 раза, у аивотных, зараженных плаз-мидосодержащим штаммом а сочетании с грибами - осталась на прежнем уровне. К 21 суткал грибы пролонгировала двссемлневаю пасечных передний во внутренних органах животных, саражешшх не только плазмидосодеряащ'.м, но и безплаэмлдкш вариантом передний ( рис.1 и 2 ). .

Для выделения килечных иорсинлй из гомогепатов органов животных применялась модт{икагяя ПБС - ПБСГ. Полученные результаты сопоставлены с результатами выделения кишечных.иерсяний из ДЗ. Предложенная методике позволила выделять асрсянии из .гомогенатов органов животных раньше ( начиная с 1-2 суток инкубация ) и статистически достоверно более часто ( в 1,55-3,99 раза ),. чем из ДВ.

ПЕСТ использован при. выделении иерсяний из смешанных культур 1п т^го . В НБСГ иерсянии на 3 и 5 сутки инкубации обнаруживались соответственно больше в 3,25 п 12,91 раза (.р<0,001 ), чем в ДВ; из монокультур иерсяний в эти сроки инкубации ввделено в ПБСГ в 35,83 и 50,99 раза больше ( р<0,001 ), чем из ЛВ.

Таблица 5

Среднее количество колоний иероиниЯ при высевах из моно- и смешанных'культур на ПБСГ и ДВ.

ПБСГ ДВ

I 46,811,90 • II, 510,90

»1 2 (II,25±I.I6)'I03 (31,401б,ВД)*Ю*

5 (38,18-2.91)* 10^ (63,IOl9,CO)'lO

I 6,26-1,12 5,42ll,I6

К 2 1'»,Ъ9-1,99 4,57il,39

5 45,3113,17 3,5IH,85

ПРИМЕЧАНИЕ: »1 - монокультура иерешмй №2 - смеианнне культуры 1,2 и 5 - дим высевов

юс

80

60

40 20

п+

П"

шю

шш

легкие

селезенка

печеиь

кишечиик

П^+грибы П%грибы

гр.

кивот.

Рис Л Выделение кишечных иерсиний из внутренних органов животных на 7 сутки экспериментальной инфекции.

100 60 60 40 20

П'

П"

П -+гриби

П~+грибы

Рис.

Наделение кишечпих иерсиний из внутренних органов животных на 21 сутки экспериментальной инфекции.

гр.

живот.

4. Некоторые биологические свойства кишечных иерсиний после совместного культивирования с грибами.

При определении адгезивной активности кишечных иерсиний к полистиролу использована разработанная нами методика. Изученные плазмидосодержащие и безплазмидные варианты иерсиний в чистых культурах не обладали способностью адгезироЕаться к полистиролу ( табл.6 ).

Таблица б

Влияние грибов на адгезию кишечных иерсиний к полистиролу (количество колоний/лунка)(10^).

П++грибы П~+грибы П"

4° 2,8410,41 2,6310,33 - -

26° 12,3511,48 " 7,8110,97 -

37° 0,0710,02 0,2410,09 - -

Под влиянием совместной инкубами с грибными клетками в физиологическом растворе в течении суток иерсинии приобретали этот признак, оказавшийся температурозависимым: количество "адгезировавших при 26°С меток плазмидосодеряащих и безплаз-мидных иерсиний было больше, чем при 4°С соответственно в 4,35 и 2,97 раза ( рО.ОСХ ) и больше, чем при 37°С соответственно в 176,43 и 32,54 раза ( р<0,001 ). Однако, при'4°С почти все клетки иерсиний, перЕоиачальновнесенные в лунки культуральных планшетов, адгезировали к поверхности полистирола, в то время, как при 26°С это выявлено у 2,28-2,61$ плазмидосодержащих и I,44-1,65$ безплазмядннх клеток, а при 37°С - соответственно 0,01-0,02$ И 0,07-0,08$.

Установлено, что все штаммы иерсиний, несущие плазмиду вирулентности, через 24-48 часов формировали на среде с конго-красным ярко-красные колонии, в аналогичных условиях культивирования все безплазмиднь-е варианты давачи через сутки бесцветные колонии, через 48 часов - слегка розовые.

На кровяном агаре со взвесью эритропитов человека гемолиз не выявлен ни у одного пз изученных штаммов иерсиний.На среде о эритропитока мышей, взятыми до заражения жпвотгех иерспнияма, гемолиз контрольными и опнтодая штаммами лнявлен через 43-50 часов. На среде о эрмтропитащ, вплтт.'ч от шяей па 21 сутки яерсиняозно-кэвдидозпок !;т]скпт, гемог.пз шмвлен улге ^с.-ез

13

¿0-45 минут у всех штаммов.

. Изучение галотолерантностк на КСА о 5% и 1% хлорида натрия не выявило роста передний. На среде с 3% обнаружен рост как при 26°С, так "и при 37°С, тогда как на среде с 4% хлористого натрия - он отсутствовал у части контрольных штаммов. Наиболее интенсивный рост при 37°С выявлен у безплазмидных вариантов иерсиний.

Образование левитлказы не обнаружено при 26°С, при 37°С -ее действие выявлено у всех изукеншх штаммов на ЕСА как с 2$, Tait а 4$ хлорида натрия. Еифт с 26°С на 37°С привел к выявлению у всех контрольных и опытных &так:.:оз, культивируемых ери 2в°С, лепитаназаой активности, а также у штатов иерсиний .несущих плаэмиду вирулентности, вцдеденнвх после совместного хультивк-рованая с грибами при 37°С на Г1БС. Наиболее рано лепитиназная активность проявлялась у иерсиний, несущих плазмиду вирулентности.

ВЫВОДЫ

1. Кишечная микрофлора" здоровых лип и больных острыми лишенными • инфекциями характеризуется высокой частотой обсеменненыостя грибами рода Кандида. Доминирующим видом является C.clbicaae , Грибные клетю!, выделенные от больных ОКИ, обладают высокой адгезивной активностью.

2. Разработанный способ совместного культивирования кишечных иер- ' синий и грибов рода Кандида с использованием оригинальной питательной среды - питательного бульона с сорбитом - рационален, не требует дорогостоящих компанентов, позврляет длительно наблюдать за микробами ассопиантами при 26°С и 37°С. Иерсинии и грибы оказывают взаямостимулирующее влияние на кинетику размножения друг друга.

3. Иерсиниозная инфекция у белых беспородных мышей при оральном зара женяи кишечными иерсиниями, несущими плазмиду вирулентности, и

даже безплазмядными вариантами в ассогтиатши с грибами протекает тяжелее, с более выра^йнныки патологическими изменениями в печени, селезень«, кишечник«. Грибы способствуют колонизации иерсиний во внутренних органга, продолжительному бактериовцпелению из кишечника. Сочетаняая шцокцкя способствует ускорению гемолиза эритроцитов иерсиниями у экспериментальных животных.

4. ишвлеца способность грибов рода Кандида вызывать проявление адгезии к полистиролу у кишечных иерсиний, которые ранее этим 14

свойством не обладали. Адгезивная активность является темпера-typo3aBHCHMHM свойством иерсиний. Предложенная нами методика определения этого свойства проста, доступна, не требует больших трудозатрат. ^

'5. о.albicans при 37°С активирует выработку ленитивазы у плаз' гадосодержащизс и безплазмидных вариантов кишечных иерсиний, адаптирует к повышенному содержание хлорида натрия иерсинии, несу-дае плазмяду вирулентности. Гало толерантность и легттятиназная актив»* пость - температурозависимые свойства кишечных иерсиний.

6. Разработанный способ ввделения клиечяых иерсиний из материалов исследования, коятаминированных несколькими видами бактерий и. грибов, позволяет обнаружить иерсинии при меньшем их количестве в' материале, сокращает количество высевов в ходе исследования, уменьшает расход питательных сред и трудозатрат. .

7. ".albicans • способны усиливать ряд патогенных свойств.'у.en-tero-coiitica » несущих плазмиду вирулентности и безплазмидных вариантов как in vitro так и in' vivo , что может существенно вдиять на течение инфекционного процесса, приводить к его хронизапаи.'

Список работ, опубликованных поттеме диссертаттйи:

1. Использование адгезии грибов рода Кандида для выявления больных кандидозом и группы риска, у легочных больных // Тез.докл. объединенной яауч.конф.молодых ученых Лат.ССР и студентов-Рижского кедигинского института, п о с в. 7 0-л е т. ВЛ КС'А, МЗ Лат.ССР.-Рпга.-ч.1.-150-151.( соавт.С.А.Коптюбенко,В.И.ЕлыювД.Н.Усачева

2. Сравнительная характеристика адгезивных сеойств грибов c.oibioeno и с.guiiiormonaii // Тез.докл.итоговой конф. молод.учеяцх и студентов Рязанского медипянского института.-РязанЬ.-1989.-04-85. ( соавт.Л.Н.Усачева )

3. Распространение и свойства грибов рода Кандида, ввделенных, от больных нагноительными заболеваниями легких и здоровых ляп // Т.ез.докл.итоговой объед.науч.-практич.конф.молодых ученых спегиалистов д студентов Дагестана.-Кахачкаяа.-1539.-68-69.

С соавт.С.Л.Коптвбенко )

4. Изучение влияния некоторых микроорганизмов на адгезивные свойства грибов рода Кандида // М. ,I939.-I5c.-£eii.ВИНИТИ от 29.11.89. ,К?139 В-89. ( соавт.Р.Н.Реброва',Л.Н.Усачева )

5. Использование отечественных питательных сред для выделения и дифференциации вирулентных иерсиний // Разработка и произ-

15

видство препаратоа медицинской Йаотехнологяа: Тез.докл.конф. (29-30 мая, 1990).Махачкала, 1990.-ч.1,- 121-125. (.соавт.И.В.Смирнов )

6. Некоторые аспекта использования кандида-агара в практических а надчних исследованиях // Разработка и производство препаратов медицинской биотехнологии: Тез.докл.конф. (29-30 мая).-Махачкала, 1990,-4.I.-С.123-124. ('соавт.Р.Н.Реброва.С.А.Коптюбенко, Л.Н.Усачева, В.И.Кояоплева, И.В.Леонова, В.В.Бирюков )

7. Candida species in adulta and children with'diseases o£ the roapiratory tract and dyafunctions oi the intestines // 11 Tagung mit internatioaler Beteiligung in Rostock, 25 bis 27 April, .,990.-9*1 3- ( H.lf.Retrpva, S.A.Koptjubenko, L.JM,Usacheva, V .1 .Kertopleva,

A.A.Klimov )

B. Адгезивные свойства грибов рода Кандида, выделенные от больных острыми кашечн1йш инфекциями // Ы.1991.-Нс.-Деп.ШЩТИот

26.06.91.,№2714 B-SI ( соавт.В.В.Бирюков, В.И.Кояоплева, Е.Р.Кор-вякова, С.А.Коптюбенко, Т.И,Карпова, Т,В.Терехина,.Ц.В.НеДиля )

9. Взаимное влияние грибов рода Кандида r грамотрицательных бактерий на некоторые'факторы их патогенности // Тез.II междун. • школог.симпозиума'Шкозы и иммуноДефипиты".-г.Санкт-Петербург.-I99I.-C. 123 (соавт.Р.Н.Реброва, Л.Н.Усачева, Е.Р.Корвякова,

C.А.Коптюбе/жо )

10, Изучение влияния X.enterocolitica на адгезивные -свойства грабов рода Кандида 11 Гез.докл,У1 Всероссийок.съезда мякробяол,, апидемиол. а паразитологов.-Н.Новгород.-1991.-т.I.-С.270-271.