Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА VIBRIO FETUS INTESTINALIS, ВЫДЕЛЕННОГО ОТ РАЗНЫХ ВИДОВ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА VIBRIO FETUS INTESTINALIS, ВЫДЕЛЕННОГО ОТ РАЗНЫХ ВИДОВ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ"



ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА ИНСТИТУТ' ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ

ВСЕСОЮЗНОЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА АКАДЕМИИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ИМЕНИ В. И. ЛЕНИНА

На правах рукописи Аспирант БАБАКИШВИЛИ Джем ал Иванович

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА VIBRIO FETUS

*

INTESTINALiS, ВЫДЕЛЕННОГО ОТ РАЗНЫХ ВИДОВ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

(03.00.07 — микробиология)

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва — 1975

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ

ВСЕСОЮЗНОЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА АКАДЕМИИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ИМЕНИ В. И. ЛЕНИНА

На правах рукописи Аспирант БАБАКИШВИЛИ Джемал Иванович

биологические свойства vibrio fetus intestinalis, .выделенного от разных видов

сельскохозяйственных животных

{03,00.07 — микробиология)

автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

.......

MoeäOECXiii V-;»;. j

Москва — 1976

; Работа выполн&на !в лаборатории физиологии и патологии размножения сельскохозяйственных животных Всесоюзного ордена Ленина. института экспериментальной ветеринарии (директор заслуженный деятель наук РСФСР доктор ветеринарных'.наук, академик'ВАСХНИЛ [профессор Я. Р. КОВАЛЕНКО).

Материалы диссертации изложены на 129 страницах машинописи, в том числе: введение 2 и обзор литературы — 33 стр., собственные исследования — 65, обсуждение .полученных результатов — 8, выводы и -практические предложения— 3, описок литературы — 17 стр. Работа иллюстрирована 14 таблицами, 10 рисунками.

^"Научные .руководители — доктор ветеринарных наук, . профессор Н. Н. МИХАИЛОВ;

кандидат биологических наук М. А. ЛУЧКО> Официальные огагюненты:«

1Доктор ветеринарных наук.А..В. ГОЛИКОВ;

2. Кандидат ветеринарных наук Т. И. МАЛАХОВА.

Ведущее, учреждение! Белорусский научно-исследовательский ■ ветеринарный' институт.. ■■■:-.■;.

Автореферат разослан « V » мая 1975 г. . ' , . Защита диссертации состоится « V » '' 1975 г.

в 14 часов на заседании Ученого Совета Всесоюзного ордена Ленина института экспериментальной .ветеринарии-по адресу: Москва, 109472, Кузьминки, ВИЭВ.

Ученый секретарь — кандидат биологическнх'наук . В.В.КАЛУГИН.-

; Организация мероприятий п-о воспроизводству . скота , и увеличению продукции животноводства, особенно в промышленных, комплексах, является основой роста рентабельности производства й -снижения потерь, которые все еще. имеют место ла животноводческих фермах. Эти ¡потери, прежде все: ¡го, обусловлены различными -нарушениями репродукция крупного -рогатого скота, овец и свиней. При этом вопросы профилактики патологии репродуктивной функции у сельскохозяйственных животных до сих пор остаются проблемными.

. Инфекционные болезни животных, вызываемые различными возбудителями, являются одной из причин, тормозящих .воспроиэвосдтво стада. К таким заболеваниям сельскохозяйственных животных относится и внбриоз, который сопровождается абортами, бесплодием, рождением мертвого или нежизнеспособного приплода, а иногда преждевременной гибелью маточного состава, как следствие' осложнения абортов. ' '

Определенный вклад в изучение вибриоза крупного рогатого скота и овец внесли: В. М. Якимов ' (1926), В. П. Та-вельский (1929), Е, В. Козловский (1938), П А. Триленко (1950), В. В. Павловский (I960), t В. Г. Меликян , (1961)', И. Г; Левина (1963), Т. В. Чайкин О965). О. А. Полякова (1966), А. В. Голиков (1966), Я- А. Крылов (1968), М. А. Лучко (1970), Г. К- Ивахнемко (1970), В. Ф. Шаталов < (1970), В. В. Велик (1972), А. Н. Трубицкий (1972),, Мае Fadian (1913), Plastridg (1941), Terpstra (1951),.Florent (Î951), March et Timikliff (1956), Firchammer (1961), H. Ca-BOB (1966), 1966), Berg et al. (1971) и др.

: Однако в отечественной я зарубежной литературе неполностью освещены вопросы этиологии, диагностики, профилактики и терапии вибриоза сельскохозяйственных животных. ,

Кроме этого, изучение вибриоза осложняется наличием нескольких типов вибрионов, этиологическое значение которых для отдельных видов животных окончательно ещё не вы-

..'■■■ S

яснено. Вместе с тем, определение биологических Tfi.noв вибрионов,. выделенных от животных,'« выяснение-их >роля в ¡патологии репродуктивных органов имеет определенное; научное "и практическоезначение три -разработке методов ,'диа.г-. лостнки и специфической: профилактики этого заболевали я. .. Учитывая '.вышеизложенное, мы поставили .: для разрешения следующие задачи: ... /'.'1. В сравнительном аспекте изучить культурально-морфо-логические и биохимические,, ■свойства . .вибрионов; имтести-налького типа, выделенных от крупного рогатого скота, овец ; ' и свиней; /■.'"'." — ■*. "V" '-;;,"."■ '■.;;'*;

Изучить серологические свойства ;штаммов.""вибрионов ни т ее тин а льн о г о* тип а в:'РА; с моноспецифнческим-и вибриоз-'; нымн; сыворотка-ми, методом .флуоресцирующих антител в/ перекрестной-¡реакции, агглютинации сих~кроличьи'ми'гмиер-"; иммунными антисызороткамн. "■' :; • ".'"'Г

;3, 'На кур им ыкэ мб р к о л а х изучить- "^патогенные;." свойства .V.. 1 выделенного от разных видов" животных.

4: В экоперименте «а .половозрелых :телках" выяснить ;воз-. можность их-заражения вибрионами интестинальногог типа; выделенными от ■крупного рогатого скота," овецп свиней.

■'; ^ г собственные; исследования ;

■ .......Материалы и методики ~ ' ^ """"

;..Работа выполнена . в - лаборатории; патологии и физиологии размножения сельскохозяйственных животных ВИЭВ и на базе' откормочного хозяйства " «Джандара» Хрузинской; ССР -в период с- 1972 то 1975 гг. ■ - •

';-■'-В опытах по изучению биологических свойств V. паЛз было, использовало - 33. штамма ^вибрионов,. выделенных от круп н о го р огат ого . ск о т а, овец и свиней, различных географических зон страны- , V1 . 1 ; Сравнительное * изучение 'кулътуральио-бдахимических . свойств и морфологии вибрионов проводили на жидких, иолу' жидких - и .плотных, питательных-средах. Для диф-феремциа-,.цин' вибрионов кроме общегаринятых биохимических методов, применяли тест разложения селенита ..натрия.^- (ша (плотной среде . Альби,ми. агар), ц.р е д л о жени ын , ^ Б р и ансом ;н Смитом (1960), в Модификации лаборатории-патологии и физиологии ■размножения сельскохозяйственных животных ВИЭВ. .•••...

' Серологические свойства 33 штаммов вибрионов, .•выделенных от крушю.го -рогатого скота, огвец и свиней изучали по РА и методом "флуоресцирующих антител' со стандартными вибриозными сыворотками Витебской' ; биофабрики. "Из

■них 13 штаммов были изучены также в перекрестнойреакции 'агглютинации с , их кроличьими гипериммумны м и'. сыворотками. ,'. ■ '-..;.",. .■'.■'.'' "'■■Г-'* -■-Антиген для с&ролошческой тилизация^готовили^по мето-' днке, рекомендуемой ПНКИ, но вместо .-бактериологических чашек, ;для большего '"(накопления, 'бактериальной "' массы,' культуру, вибрионов .'засевали в матры'на плотный (3—4%) мяеотпеченочно-<пептонный агар (Л1ППА) с - - добавлением' . 5—10% амшшпептида—2, или такого же количества "сыворотки крови крупного рогатого скота,

Люмпнесцен-пно-серологическую идентификацию указанных 33 штаммов вибрионов проводили по методике, предложенной О. Л. Поляковой (1965), V:'. ■■ ■

Для получения гип е рн м му н ных сывороток и постановки РА -использовали .11 типичных штаммов V. f. intestinalis, вы-делешшх от разных видов животных, с четко выраженными культур ал ьно-биохим и ческими и "(морфологическими < свойствами. ■ Иммунизацию кроликов проводили формалинизярован-^ ными ОН—антигенами, приготовленными на плотной среде (3%—М.ППА) с добавлением 10% а м ияонепти д а —2; „ Антигены в концентрации 8 млрд/мл «водили .кроликам внутривенно и подкожно, четырехкратно, с интервалом 5 дней,-в нарастающих дозах: 0,5; 1,0; 1,5 и 2,0 мл дри внутривенном введении и 1,0; 1,5; 2,0 и 2,5 мл при подкожном. Кроликов обескровливали через 7—8 дней после окончания иммунизации. г,.''.. - Патогенные свойства' V- I. intestinalis, выделенных от разных «видов животных, изучали ¡на 8—9-дневных куриных эм-" брионах. Эмбрионы заражали в аллантоисную полость двухсуточным» культурами вибрионов, выращенных -на плотном1 МП ПА, с 10% аминопептида—2. Культуры вибрионов; суспендировали в стерильном физиологическом растворе "до концентрации 50 млн/мл (по оптическому стандарту мутности. После заражения эмбрионов их инкубировали в термостате при 37—38°С. /.T'.V -.. ' . :

' .'Экспериментальное заражение половозрелых телок проводили.путем осеменения их сиермой быка инфицированной V. f. intestinalis, выделенным от разных видов животных. В опыте использовали 42 половозрелые телки. Для зараже: «ия 'было отобрано 4 штамма ©ибрионов интестинального -типа и один венериального (для контроля). Перед заражением культуры вибрионов'были освежены путем' культивн-. ровання их на куриных эмбрионах. После четырехсуточной инкубации на куриных эмбрионах, штаммы высевали ; на плотный (3%) МППА с аминопептадом—2. Вовремя половой

охоты'телкам вводили со спермой по 0,2 мл ■ бактериалшой суспензии вибрионов 6 млрд/мл концентрации по аптическо-. му стандарту мутности. В. течение трех месяцев после осеменения телок исследовали гинекологически, б а ктер и о л о гй ч ес-кн ; (цервикальная слизь) и серологически по РА - (сыворотки , крови и вагинальная слизь). Через три месяца все подапыт-. иые телки были убиты и исследованы бактериологически и: патологоанатомически. • - ■ ^■'■ ■г-

; РЕЗУЛЬТАТЫ И CCJ1ЕДО В А НИ И

'I- г культурально-биохимическяе свойства, и морфология. ; * вибрионов, выделенных от разных видов сельскохозяйственных животных

В этом разделе работы представлены результаты сравнительного изучения . культур а льно-биохимических свойств, морфологии 33 штаммов вибрионов, выделенных от разных видов животных, в том числе: 14 — от крупного рогатого, скота, 13 — от овец и 6 — от свиней- '

. По-культурально-биохимическим свойствам из 14 штаммов вибрионов, выделенных из желчи, половых органов и;, абортированного плода крупного.рогатого -скота — 2 штамма отнесены к V. f.-venerealis, 9 —; к V, f. intestinalis. . и З —. к V. bubulus. Из 13 штаммов вибрионов, изолированных ; из ; абортированных плодов и желчи овец — 12 были отнесены ко второму биохимическому типу — V. f. intestinalis и только одиик первому, биохимическому типу — V. f. venerealis. Все-6. штаммов вибрионов, выделенных из желчи свиней,' отнесены ко второму, биохимическому типу —V.f. intestinalis. , '," .^ Следует отметить, что культурально-биохимическйе свойства у всех штаммов не были строго закономерны для каждого типа вибрионов. Так, .при 3-суточном .культивировании на жидких питательных средах вибрионы интестнналыюго типа, изолированные из абортированных плодов'овец, желчи крупного рогатого скота и свиней, (из 6 штаммов — 4) росли в виде длинных спирилл, тогда, как два штамма, выделенные из желчи свиней и один штамм (№ 82335), бычьего происхождения имели, главным образом, короткие:изогнутые палочковидные формы или напоминали «летящую.чайку» и ла-.тинскую букву «S»,.,При культивировании: на плотных лита-,, 'тельных средах у,вибрионов также отмечали варйабилъность в .морфологии^ колоний .—..S, R и М формы. Наилучший рост, вибрионов отмечен на ПЖА и .плотном М.ППА'с добавлением 5—Ш%Уаминопептида—2Г(.или1 такого. же: количества ;,'де-фй бронированной крови крупного рогатого скота или'сыво-ротки крови: ' " ' ' • *' '

';.■'.■*■ ' \ ' ' ■ ■■ ■ * ■. Таблица I

Культу рально-биохим нческ не свойства штаммов вибрионов, г выделенных , от крупного рогатого скота, овец н свиней

. в о - г X . .Образование сероводорода яа " : Рост яа:ПЖА с добавлением = « . г ,. в ■а . о г-: к ж ■ 0 С '

^Источник выделения ■ штамма Количество шта! я м а Ч О «I из С .8 | ПЖА с 0.02Ч цистина « . ■а <и 9 ■ : Ч '■ т Й я Ч ■; И о. и. « . и ■■ - ж ■ ■ У к . ч V ' 1 1 а • " I я &я I я ■ V ч V N ; -я р> л О и -2 ю * «а П ■ V Й Л X ™ 2 <- ' <0 п <3 Л ю " о о : ч ! О ч ; я о, * я X £ я * ? н ж а. а щ я ^ к х а О К 38 Ч ГТ1 а, и 1-3 а ■ ' и « 2 ВТ . к к . п N о К * о о О 1 -м - »1 ■ К' 85 О т о ж Ж ' Я о <11 - V ■ . * ■ я. Ж ' . « , о ю

.Из абортированных плодов и желчи овец 12 1 — , — . + + + +. -и-+ + + + — - И л

Из желчи, яоловыл органов, . абортированного плода. крупного . рогатого - скота 9 , 3 2 + — : + ■"К ..— - + +■ , -I- -; II (И I

Из желчи свиней ; 6 + — + ■' —. - + 1 ¡: + Г" II

.'^-Примечание: г (+) —положительная .проба, .;■' ... (±) —слабая проба, , .

-'(—) — ; отрнцательнаяпроба ,

' Кроме этого, в посевах из .первичного патологического маклер нала и при длительном хранении на ПЖА у 'вибрионов отмечали вар иа бильность /биохимических, свойств. Из 27 штаммов вибрионов и н те с тан а льног о типа, выделенных от разных видов сельскохозяйственных животных, каталазная • активность была пониженной или утрачена у 8 штаммов; Некоторые штаммы плохо росли на среде с добавлением 1% глицина ,и 10% желчи, не выделяли сероводород , на среде с 0,02% цксганом. В дальнейшем, после д ву х - тр е хжр а тного пересева на ПЖА с добавлением 10—15% дефнбрвнирован-ной крови овцы, и отбора активных ; форм вибрионов (посев «а дно иробярки со столбиком' среды 10—^12 см) биохимические свойства у этих штаммов были восстановлены. После-адаптации штаммов на искусственных ■ питательных средах, вибрионов подвергали культура льно-биохнмическому- нссле-: дованиго и изучали их морфологические особенности. Результаты этих исследований представлены в таблице 1.

Из таблицы 1 видно, что V. f. intestinalis и V- f. venerea-1 Iis, выделенные от разных видов животных, обладают рядом сходных свойств: каталазогтоложительные, не выделяют сероводород на МПБ я среде Балчева, не образуют индол, переводят нитрагьг в нитриты, не растут на, ПЖА с .3,5% хлористого натрия и на МПА;в аэробных условиях, растут . на. питательной среде с добавлением 10% желчи. Основным от-,лнчительньш биохимическим признаком вибрионов интести-наль-тго тина от ве.нериального является способность-V. f. ; intestinalis к росту на,. ПЖА с,1% глицином. Следует также.отметить, что у вибрионов цнтёстинальяого типа 'биохимический тест выделения сероводорода на среде с 0,02% цистина не .всегда был достоянным. " , | , - В связи с этим для дифференциации вида V. fetus мы испытали-среду Альбими агар е 1—2% селенита натрия. Биохимическая, проба" с селенитом иатрия была проведена на 33 штаммах вибрионов, выделенных от -крупного рогатого ско-, та", овец и свиней. Результаты опыта показали, что возбуди-Тель;вибрио.за крупного рогатого скота V. f. venerea Iis не спос&бен разлагать селенит натрия (бесцветные колонии)т тогда как при росте вибрионов интест и,н а льног о типа и V bu-bulus на поверхности агара .появляются отдельные, или в виде налета колонии ярко-ора-нжевого цвета, что служит ' дополнительным критерием оценки штамма. -

. Серологические свойства вибрионов, выделенных от разных видов сельскохозяйственных животных

Биохимический метод идентификации вибрионов в некоторых случаях не позволяет, четко дифференцировать выделен-

: ные культуры .вибрионов,и во многом'зависит от качества лнтательных сред, применяемых реактивов, степени адаптации штамма к питательной среде, и* его диссоциации. Поэтому возникает необходимость дифференцировать культуры вибрионов, выделяемые от сельскохозяйственных животных на основании их комплексного исследования по куль ту р а л ьн о- био -химическим и серологическим свойствам с учетом их. места локализации в организме животных. Серологические свой-' ства вибрионов изучали в целях определения типов у возбудителя вябриоза овец и сходного с ним по культуральночбио-хи-мическим свойствам вибриона интестинадьного типа, выде-, ленного от крупного рогатого скота и свиней.

Серологической типизации всего было подвергнуто 33 штамма вибрионов, выделенных от разных видов сельскохо--зяйственных животных, в том числе; 14 штаммов, изолированных от крупного рогатого скота, 13 — от овец и 6—; от свиней.

Результаты изучения серологических свойств вибрионов по РА н методом флуоресцирующих антител с вибриознымн сыворотками представлены в таблице 2. , '

• Из таблицы 2 видно, что штаммы вибрионов, выделенные . из а Сортировал пых (плодов овец, серологически неоднородны. Так, из 12'Штаммов — 11 агглютинировались сывороткой типа' (V. f. intestinalis) и один (№ 419) агглютинировался сывороткой типа I (V. f, venerealis).

Из 8 штаммов вибрионов, изолированных из желчи крупного рогатого скота все восемь агглютинировались сывороткой типа II, тогда как из 6 штаммов, выделенных из желчи свиней — 4 агглютинировались сывороткой 'типа II, а два штам,ма — сывороткой типа I.

Из 6 штаммов вибрионов, изолированных из половых ор- ■ гаиов и абортированного плода крупного -рогатого скота —2 . агглютинировались сывороткой типа I, три — сывороткой типа III (V. bubulus) и один штамм (№ 82335) агглютинировался сывороткой типа II.

Результаты серологической дифференциации вибрионов по РА и методом флуоресцирующих антител, в основном, совпадали. Однако, нами отмечено, что при (просмотре под лю- -минесцентным микроскопом V- fetus первого и второго серо-тилов, некоторые штаммы вибрионов засвечивались одновременно как 1-Й, так и И сыворотками. Однако, степень свечения была различной- Поэтому ,если испытуемая культура вибриона засвечивалась двумя люминесцирующими сыворотками, то типовую принадлежность штамма определяли по стешени наибольшего засвечивания, оценивая в крестах^ С -помощью метода флуоресцирующих антител V. fetus четко . дифференцировался от V. bubulus. 9

./. ' ,; .." , ■ Л > .: " ■ V \ .. Таблица ¡2

^Серологические типы вибрионов, выделенных от крупного ,

рогатого скота, овец н свиней _ ^

Пронсхождеие . ' штамма Источ««К)Выдслеиия : штаммов Изучено штампов Биохимический ТИП Серотип Количество штаммов

от овец Абортированные плоды и желчъ абортированный плод „12 V, Ыг^езИпаИз : V. {.. уелвГеа1Ь 11 ' 1 '■ 12 1 ■

от крупного рогатого скота желчь половце органы быков Абортированный ллод коровы 8 1 VI : 1 ■ V. V. ЬиЬиЬз V. 1 И11в®ипаа5 ; V. 1. уепегеа1)я : . V. .уепегва!!« | и ; ш ...■ ;11 I ; : ' 8 3 1 1 1

от.свиней ■ желчь 1 .,6 V. ЫезИпаПз . 1 м : ■■ 4 . ' : 1

-Всего ; ' ; ■ .. . ■ :27 3 . , 3 V. Г. ЫезфаПз \ V. {.^епесваИв " ■ V. ЬиЬцЫз . 11 ■ ■ ' 1 ш 25 5 V 3

■'■■;'■■.■".'-'-'■.:-'-.'/'.. ' 'Г'' -'■■'■'. '■■■'■" '' V; Т я б л«и а 3

Результаты перекрестное реакции агглютинации с Н-антигеном 13 штаммов, выделенных от разных видов животных

X х § к Я (ЕС Проасхождеие ; штамма 0 01 » ■ ■ * р. О »а £ В Ш к — . Сы й о р о т к и

■ се р о г и п 11 серотнп I ■"; сера-тип 111 ■410

■ 130 | Зи| 190/8 Даз-1 бек* 1 1107 82335 105 30 73 (123 22 ' 9

Т и т р ы I: ■1 .. - . ■

1123 Из абортированного 1 6400 3200 3200 ■ — ■

плода коровы , у

22 ; Из.желчи-подсвинка :П 800 800 : 400 800 800' 800 400 800 г 800 3200 6400 3200 :—:

= 9 , Из; желчи свиньи Н 800 800, 400 800 400 ; 400 400 400 400 3200 3200 800 — '"

130 ' Из,абортшюда овцы |[ 6400 3200 800 1600 3200, 1600 800 1600 1600 — 600 800

311 » ;И 3200 6400 - 8С0 3200 3200 1600 800 16Ш 1600 . ■ 1600 800 —.

190/3 Из;желчи коровы 11 - 800 800 3200 1600 800 .800 1600 800 ;4оо —' 800 . 800 " —. ■

„Каа- » ;11 3200 3200; 1600 6400 3200 "1600 16001600 1600 — 1600 : 800

бе*1. Из желчи ягненка -

И17 11 3200 3200 1600 3200 6400 3200 1600 3200 3200 ■ — 1600 800

82333 Из:лрепуцнальной , : И 3200 3200 : 800 1600 3200 6400 1600 3200 3220 г 800 ' 800

слизи быка : >

" 105 Из желчи коровы 800 800 800 800 1600 ■800 1600 800 400 . —;. Ш : 600 —

:.30 Из .желчи свиньи . '11 3200 3200 .1600 3200 3200 1600 16006400 3300 800 : 800

73 11 3200 3200 1600 3200 3200 3200 16003200 6400 — >800 400 —

410 Из спермы,быка ■ ш 3200

: Прл изучении серологических свойств II штаммов вибрионов интестинального типа, выделенных от крутного рогатого-.■■.■■•■.\\ скота, овец и свиней, в перекрестной РА "(таблица. 3) было установлено, что'антигены, приготовленные из 9 штаммов II - серологического типа и соответствующие им пшериммунные-кроличьи сыворотки взаимно реагировали друге другом. Однако антигены из штаммов №№ 9 и 22 (из желчи свиней) в ' перекрестной РА агглютинировались сыворотками типа II в г низких титрах — 1:400 — 1:800, тогда как с сыворотками '.*" ■ . типа I агглютинировались в разведениях 1:3200—1:6400.

В наших опытах по изучению серологических свойств вибрионов были использованы^формалннизированные цедьнокле-. ■. . точные «Н» и соматические прокиияченые «О»—антигены.*. При этом было' установлено, что «Ш—ал та ген характернзу-'■'.'', ется более высокой агглютинабельиостью, чем кипяченый.

«О» —. антигев. ■ 1

Таким образом, на основании проведенной серологической : Г-. типизации 33 штаммов вибрионов, выделенных от разных видов сельскохозяйственных животных, определено .три серо- -логических типа. Выяснено также, что в большинстве случаев вибрионы, изолированные из абортнрованныхллодов овец, V . - желчи крупного роТатого скота и свиней, относятся ко 11-му ,: . . серологическому типу и, значительно реже, к,первому. ,

Изучение патогенностн V. ¿п1е$1[паН$ на куриных эмбрионах

-■"" С целью изучения патогенных свойств вибрионов интести-" нального типа, выделенных от разных видов селыжохозяйст- ," венных животных нами поставлены опыты на куриных эмб- -. ■ рионах. После заражения 8—9-дневных: эмбрионов, их ежедневно овоскопировалн и .яри наступлении гибели произво--. дили бактериологические высевы из пораженных органов и , ^жидкостей. Результаты овоскскпии, бактериологического • нс' следования погибших эмбрионов и др. материа лы опыта тока-залы -в таблице 4.

■Из приведенных в таблице 4 данных »видно, что штаммы №N3 130, 22, 62335 и «Казбек» интестинзльного типа, а также контрольный штамм'№ 1123 V, Г. уепегеаИз, в равной степени были патогенными для развивающихся эмбрионов, гибель которых .наступала в первые 3—5 дней после заражения (до 80%), и к 7 дню погибали все. Из хорноаллантоисной жидкости, (печени, почек, селезенки, содержимого желудка и ; головного мозга погибших эмбрионов изолировали ретро-культуры.1, ■ " ^

■У'' 12 ' : ■ ■'■■'/,. '■''■.'.■'.■■-

Т - V -*1' V '.■ V; . '■■ У: '■■■'' Л ■■ ■ ■ " "Таблица 4'

; Результаты заражения куриных эмбрионов вибрионами . : > .■..■'.'■; " _ \';

интестинального типа, выделенными от крупного рогатого скота. ■"■', - : -

V- «вен И свиней - '■'■'■:-■■

№ штам-/ма Серологи- Количе- Доза введенной - Гибель эмбрионов, дни , s ■> • »0 .. ■■■■ (- 5 ■. _ Д « 2 « t ï

Источник выделения .■' штамма ческий тип _ ьнбрнопа ство эмбрионов суспензии ввбрионов (50 млн. . . в мл.) ; . 3 '4 -5' 6, ' 7. \ - :' 8 . '■S л»« : S * «s- ■ u 9 ï 3c d 1 Я il я ж » P. О-Л

1123 Из. абортированного плода : коровы 1 сиротила (контроль) 0,2 0,5 ■ ' П : 3+ 24- .2+ 1 + 2+ 2+ + " .. + ,

"22 Из желчи свиньи , 1 серотина 0,2 1 0,5 ■:, 1+. 2+ : 3+ 1 + 1 + 2+ 1 + 2+ < + __L л ■ — '*

130 Нз абортированного плода овца И серогнпа 0,2 0,5 . 1 + 2-V ' 2 + 3+ 1 + 2 + — - — :

.Kas-i бек* Из желчи телки ]] серотнпа 0,2 : 0.5 ' ;i+ 3+ . 2+ .2+ 3+ — ■ ■" - +

82335 Из п реп у вдаль кой СД.Ш быка , ; U серотипа 0,2 ; I+-i.21- 3+ .1 + 2+ 3+ ' Л' H- -.г-к 'H

- ПРИМЕЧАНИЕ: Г-j- млн количество погибших эмбрионов.:

- Опыт на куриных эмбрионах показал, что эмбриональная ткань и алла-нтоисная жидкость являются хорошей биологической питательной средой для культивирования' вибрионов. При этом высокая -восприимчивость куриных "" эм-брионов V.fetus, по-видимому, связана,' в"основном,"с отсутствием 'у них лейкоцитарной реакции и способности образования антител. Кроме этого метод паосажа вибрионов на куриных эмбрионах можно использовать с целью повышения биологической активности возбудителя вибрноза и изучения вызываемой им патологии. - ..... . .* -«-..."

Экспериментальное воспроизведение вибриоза у - ' половозрелых телок

■ В этом разделе представлены данные по выяснению этиологической роли V. f. intestinalis в инфекционном бесплодии крупного рогатого скота. С этой целью было проведено два опыта- ' "

В первом опыте для исключения вибрион (жительства иос-леубойно -бактериологически исследовали 10 .... клинически здоровых .половозрелых телок. Бактериологические ' высевы на ПЖА произвели из влагалища, рогов маткн, яйцепрово-дов, яичников, желчного лузыря, двенадцатиперстной'кишки, селезенки и региональных лимфатических узлов. ■ ' ■■'■ ■■;'*• ■'.

В результате исследования установили, что половые органы телок свободны от вибрионов, но «з желчи 4 телок выделили V. f. intestinalis и от одной V. aerobici из двенадцатиперстной кишки. ,

■ Данные этого эксперимента еще раз (подтвердили тот факт, что в желчном пузыре у телок м-огут обитать вибрионы интестинального типа. " - ■

, . Во втором опыте выясняли возможность заражения половозрелых телок путем осеменения их спермой, инфицированной V. f. intestinalis.

. Под опытом находились 42 половозрелые ~ телки, 17 — 18-месячного возраста. С учетом результатов первого опыта, всех животных с целью уничтожения вибрионов, возможно находящихся в желчи, [подвергли обработке 'антибиотиками по методике А. В. Голикова (1970). Пенициллин и стрептомицин в дозе по 10 тыс-'ёд/кг веса растворяли на 0,5% новокаине и вводили внутримышечно один раз в сутки в течение 5 дней. Через'10 дней (после окончания инъекций антибиотиков всех телок исследовали на вибриоз по .РД с влагалищной слизью и сывороткой крови трижды, с интервалом 7 дней, а также бактериологически (щервикалыная слизь). -V 14

/ ' Результаты бактериологического исследования и ,РА с влагалищной, слизью у всех телок , были", отрицательными. Однако следует отметить,; что РА у. большинства телок с сывороткой-крови была положительной с антигеном И сероти- > па (ВИЭВ) в разведении 1:251:50 и редко 1:100 интенсив,-ностью в. два или три креста, - % ■'■■■'■ ::■.'■',-.;

: После обработки антибиотиками и исследования на ;виб-риозвсех телок подразделили на б групп (ло 7 животных в каждой); Перед заражением всем подопытным телкам , с целью вызывания половой охоты ввели подкожно ' препарат» СЖК в дозе 1500—200 м. е.' В состоянии .половой охоты / телок искусственно (^сменяли дважды (утром и вечером) спер-, мой быка, контаминированной двухсуточными . культурами вибрионов, предварительно освеженных на1 куриных эмбрионах и. выращенных и а .плотном мясо-печен очно^пептонн ом агаре, с добавлением 10% а мин о лепта да—2. Осеменение проводили согласно действующей инструкции. Во вводимой дозе спермы (1 мл) содержалось 0,2 мл суопензии. вибрионов (6 млрд/мл).,Телок первой группы (7 животных) осемени-" ли спермой бы,кз," инфицированной культурой V. f. intestina-, Iis, выделенной яз абортированного плода, овцы. (№130).* .>

7 телок второй группы осеменили спермой быка, контами--ннроваиной культурой V- f. intestinalis («Казбек»,), изолированной из желчи телки. . '. ''

J 7 телок третьей группы осеменили опермой, инфицированной культурой V. f. intestinalis (№ 22), выделенной из желчи .подсвинка, " ■ ,

Телок четвертой труппы (7. животных) осеменили опермой быка, инфицированной культурой V, Г intestinalis .(№,82335), изолированной из прелуциальной : слизи быка-производителя, ' " - - л „

7 телок .пятой грушш осеменили спермой быка, контами-нированной культурой V, f. venerealis (Ks 1123) i выделенной из абортированного плода коровы — первый контроль.;

Шестую группу телок (7 — второй -контроль) осеменили не контаминированной вибрионами спермой того же быка/

■ В течение трех месяцев после осеменения проводили ежедневное клиническое наблюдение за .телками и периодически

■ исследовали .их гинекологически. .. ■ . ■ ч.

> ^В сроки через 3, 7, 14, 21, 35, 45, 60 и 90 дней после осеменения от:.,животных получали цервико-вагинальную слизь -для бактериологического/исследования' и: постановки реакции агглютинации. Слизь брали усовершенствованным на-:ми прибо'ром'. В^эти же сроки брали.кровь для постановки "РА. ' . ■ . -.' - ' ■ :

' V.. у '.■■-' ■■ . . ■ ■'-'■.-. ■■ '. ■' ■ '-'V Таблица &

Результаты исследования на внбриоз экспериментально зараженных телок до и после убоя - I

1 щ Тип вибриона и источник виделеиия Выделение ретрокультур «> - ж и Й» ' ра ■ ■ Обнаружение вибрионов нослеубой И о

а >1 о. ь. Я ? я « 5 32 с 3 по С день с Ь по 90 день ? а с? 5 я * я с влагал нщной слизью ■ ■ с "' ' сывороткой крови в половых органах в желчи

( .7 II серотип Из абортированного плода овцы от 6 телок ие выделены не отмечено отрицательная 1:25-1:50 (одна 1:100) не выделена у 2-х телок

И 7 Н серотип . }[з желчи теми -о 5 телок не выделены не отмечено отрицатели! а я 1:25-1:50 не выделено у одной телки

Ш 7 I серотил Из желчи подсвинка от 6 телок от 4 ; тело» у 4-х телок V ■ . . . положительная у у 4-я телок . 1:25-1:50 (одна 1:200,1 Выделена регро-культура от 4 телок у 3-Х телок

IV .7 II серотип Из препуция быка от 6 телок не выделены яе отмечены отрицательная 1:25—1:50 1 •. не выделено у. 2-х. телок

V. .7 I серошг Из абортированного . -плода коровы от 7 телок от 5 телок У.5 дело к положительная ■ 5 тело« , .1:50—1:150 (о та 1:400) у 5 тел. выделена ре-троку л ь-тура у 1-й телки:

VI -7 Не контаминированная сперма ■ не выделена яе выделена вс отмечены отрицательная 1:25-1:50 ие выделено < у 2-х телок

* ПРИМЕЧАНИЕ;" из желчи телок выделен : V.' {. ¡тЛег^паИ» 11 серологического типа V",

..'•• Материалы опыта суммированы в таблице 5- ; f/ .v

•■"';-Как -внд.но из-таблицы- 5,'исходные;культуры': вибрионов' . "из цервнкальной -слизи телок в сроки с 3 по'6 дни'лосле за1- -ряжения выделены во всех"группах, за исключением шестой. . группы,(контроль): С 6 по 90 день ретрокультуры были изолированы только от. 4-х телок третьей группы,: зараженной V: f.;int«stinalis (suis) и-от 5,телок пятой группы, инфицнро-' ванны-х V. f. venerealis.y телок 3 и 5 групп на:М—21 и ■ 35 V лнн'после осеменения; их контаминировакиой указанными ■ .типами вибрионов спермой, отмечали выраженный воспали-тельный процесс вгенитальном аппарате (вагинит, цервицит, .эндометрит л. у некоторых, салытшгит). Специфические " аг- ; глютнняны диагностическом; титре РА. - были обнаружены v во'влагалищной слизи телок 3 и 5 групп в сроки на 35--45 .дни -после заражения, которые сохранялись в течение двух : месяцев {срок наблюдения); Титры агглютининов всыворот-. ке «рови у всех подопытных животных были на уровне нормальных (не диагностнечских — 1:25—1:50 и -1:100), за"ис-, ключением двух телок, из.третьей и .пятой групп (1:200— 1:400). У "телок 1, 2, 4 и 6 групп РА с влагалшцной'слизью э период-опыта была отрицательной. ■ ..........7, .

После убоя (через 3 месяца) из половых органов телок ретрокультуры были выделены ог4|Жшотных третьей группы, и от 5 из пятой. Все изолированные культуры вибрионов ¡были':, ■ тшнрованы по культур а льно-биохимическим н серологичес- . !ким свойствам. Однако следует отметить,' что из желчи" от ^некоторых телок изолированы вибрионы интестинального ти-^ ' па, Патолого-анатомичеокие изменения у . зараженных телок - отмечали в слизистых- оболочках половых-органов- ■

• ••• Таким образом, нами установлено, что V. ' f. intestinalis (suis) первого серологического типа, в равной мере как и плодовый внбрион V. f. venereaiis приживается ; в половых' органах телок,, вызывает воспалительные процессы и стимулирует образование специфических антител, обнаруживаемых в РА с влагалищной слизью с гомологичным, антигеном.' .Не' удалось вызвать -вышеуказанным методом1; заражения .телок культурами вибрионов и н тест ин а л ьн ого типа, выделенными из абортированного плода овцы, желчи телки н препу-: .циалыюй слизи быка-производителя.' . ... ;

:.■■.'' 1 """'.V.1- выводы'; '; Y'--;

. ■' 1. На' основании изучения культур а льно-морфологических ,и биохимических свойств 33 штаммов, вибрионов, . выделенных в различных географических зонах страньГ от крупного

■рогатого скота, овец и свилей, 27 из них отнесены к V. f. intestinalis, 3 — V. f. venerealis и 3^— к V. bubulus.' : ,

• 2. При изучении серологических, свойств 33 штаммов вибрионов- выделенных от разных видов животных, ,-по реакции агглютинации и методом, флуоресцирующих антител,со.стандартными внбриозными сыворотками 25 были отнесены' ко второму, 5 — к первому и 3 штамма к третьему серологическому типу- ;■ .

3. При сравнении результатов биохимической ^типизации культур вибрионов интестинального типа с данным и серологического исследования, показатели у ^большинства., ^штаммов — 25 из 27 (92,6%) совпадали, и только у.двух штаммов, (7,4%), выделенных от-свиней, результаты были'разноречивы. . ;■ -

, ■'. 4. При использовании формалиинзированного (Н) и гретого (0) , антигенов в прямой и перекрестной .: РА агглютина-бильные свойства вибрионов -были лучше выражены у. формалиинзированного, цельноклетного антигена,' чем у гретого соматического антигена. . . ■ .

- 5. Куриные эмбрионы 8—9-дневного возраста чувствительные к заражению V. f. inestinalis, -выделенным, от крупного рогатого скота, овец и свиней. Гибель развивающихся эмбрионов ластупала <на 3—8 день после заражения. Эмбрн- ,г ональная ткань и аллантоисная жидкость куриных эмбрионов являются хорошей средой для культивирования вибрионов. * .

6. .При осеменении телок спермой зараженной V. f. intestinalis, выделенным из абортированного ¡плода овцы, желчи и препуциальной слизи крупного рогатого скота, вибрионы сохранялись в половом аппарате подопытных животных только в течение 3—7 дней, не вызывали воспалительного процесса в нем, и не стимулировали образование специфических антител,

7. V. f. intestinalis (suis) первого серологического типа, в равной степени как и V. f. venerealis приживался в половых органах телок в течение 3-х месяцев (срок наблюдения), вызывал патологию генитального тракта (вагиниты, цервициты, эндометриты и сальпингиты), вследствие чего нарушалась воспроизводительная функция. ;

; 8. Специфические агглютинины в сыворотке крови зараженных половым путем телок и исследованных в сроки с 3 по 90 день лосле.заражения были на уровне «нормальных» тигров (1:25—1:100), за исключением двух животных, у ко-; торых титры в РА были 1=200—1:400. ........

9. Подтверждено, что РА с влагалищной слизью при виб-риозе крупного рогатого скота-специфична и дополняет ком-

18 "V ."V ' ' ' ; ' •

ллекс диагностических .методов.. Специфические англ юти к и- ' ны во влагалищной слизи при экюперииентальном вкбриозе : у телок появились-на 21—35 день после заражения. .

10. V. f. intestinalis (suis), первого серологического типа, выделенный из желчи свиньи, вызывал патологию решродук-■. , тинных органов у телок, тогда как интесгинальные вибрионы второго серологического типа, выделенные из абортирован- -ното плода овцы, желчи и препуциальной слизи крупного рогатого скота оказались нелатоген,ны.ми для них. i.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Выделяемый от свиней V. f- intestinalis -первого сероло-■ гического типа является патогенным для ' телок и может '■' быть источником «ибриозной инфекции' у -крупного рогатого , скота, что следует учитывать три анализе эпизоотической .-■ситуации в неблагополучных по вибриозу хозясйтвах.

. ' '- . . 2. Предложенный нами «Прибор для стериального получения це_рвнкальной слизи» позволяет одновременно полу; : чатъ слизь для бактериологического исследования и поста- ' - ловки РА да вибриоз. .

- Список опубликованных работ по теме диссертации:

1. К язучелию свойств'Вибрионов,- выделенных от овец. : ■-■.: Бюллетень ВИЭВ, 1974, выл, XIX, с. 25—27 (в соавт. с А. Н. ; Трубицхи.ч). - : - ■

Материалы диссертации доложены ,

I. На Ученом совете ВИЗВ, Москва, 1974, 16 декабря.

, Ответственный за иипуск автореферата

. кандидат биологических паук М. А. Лучко. 1

Заказ 629 Тираж 150

Типография Мьйскавскон ордена Трудового Красного Звамени ветеринарной академии имени К. И, Скрябина