Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биологические свойства микросимбионтов при длительно текущих урогенитальных заболеваниях микробной этиологии у мужчин

ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Биологические свойства микросимбионтов при длительно текущих урогенитальных заболеваниях микробной этиологии у мужчин"

На правах рукописи

Михайлова Елена Алексеевна

Биологические свойства микросимбионтов при длительно текущих урогенитальных заболеваниях микробной этиологии у мужчин

03.02.03 — микробиология

Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук

0050Ьиоу«

Москва-2013

3 О МАЙ 2013

005060656

Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении «Оренбургская государственная медицинская академия» Министерства Здравоохранения Российской Федерации

Научные консультанты: доктор медицинских наук, профессор

Миронов Андрей Юрьевич

доктор медицинских наук, профессор Харсеева Галина Георгиевна

Официальные оппоненты:

Червинец Вячеслав Михайлович

Митрохин Сергей Дмитриевич

Игнатов Сергей Георгиевич

Доктор медицинских наук, профессор ВБОУ ВПО «Тверская медицинская академия», зав. кафедрой микробиологии и вирусологии с курсом иммунологии

Доктор медицинских наук, профессор ФБУН МНИИЭМ им. Г. Н. Габричевского Роспотребнадзора, главный научный сотрудник лаборатории биологии бифидобактерий

Доктор биологических наук, ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора, зав. лабораторией нанобиотехнологии отдела иммунобиохимии патогенных микроорганизмов

Ведущая организация:

ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Минздрава России

Защита состоится «21» июня 2013 г. в 13 ч. 00 мин, на заседании диссертационного совета Д 350.002.01 при ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора (142279, Московская область, Серпуховский район, п. Оболенск, конференс-зап зд. № 1), тел.: 8(4967)36-00-03, факс: 8(4967) 36-00-10 e-mail: info@obolensk.org

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора (142279, Московская область, Серпуховский район, п. Оболенск, зд. №32).

Автореферат разослан <¡¿0» мая 2013 г., автореферат и текст объявления размещены на официальном сайте ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации

Учёный секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

Надежда Константиновна Фурсова

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. По социологическим прогнозам в предстоящие 50 лет население России может сократиться вдвое [Материалы заседания Экспертного совета Совета Федерации «Мужское здоровье как демографический фактор», 8 июня 2007 г.].

Воспалительные заболевания урогенитального тракта микробной этиологии являются распространёнными у мужчин [Семёнов А. В., 2010]. Это в полной мере относится к бактериальным уретритам и простатитам [Божедомов В. А. с соавт., 2004; Diemer Т et al., 2008; Wagenlehner F. M. et al., 2008]. Этиологическими агентами бактериальных уретритов и простатитов являяются как специфические возбудители, например N. gonorrhoeae, так и условно-патогенные микроорганизмы урогенитального биотопа, вызывающие неспецифические воспаления [Кузьмин М. Д., 2004; Черкасов С. В, 2007].

В настоящее время неспецифические уретриты и простатиты занимают от 30 до 50% в структуре всех инфекционных воспалительных процессов мочеполовой системы у мужчин [Денисов И. Н. с соавт., 2001; Долгушин И. И. с соавт., 2001, Лопаткин Н. А. с соавт., 2006; Homer P. J., 2001; Schaeffer A. J. et al., 2003]. Эти заболевания имеют тенденцию к хроническому рецидивирующему течению и приводят к болевому синдрому, дизурии, сексуальным расстройствам и нарушению репродуктивной функции, что наряду с проблемой высокой смертности мужчин в трудоспособном возрасте, ведёт к усугублению демографического кризиса [Белов В. Б. с соавт., 2008, Рожавский Л. А., 2008; Lutz W., 2006].

Отмечающаяся в настоящее время тенденция развития длительно текущих, малосимптомных форм урогенитальных заболеваний микробной этиологии у мужчин, в большой степени зависит от свойств микроорганизмов, являющихся этиологическими агентами заболевания [Батыршина С. В., Симбирцев А. С., Юнусова Е. И., 2006]. Бактерии располагают целым арсеналом средств для сохранения в организме хозяина, в том числе группой факторов, направленных на инактивацию механизмов иммунного ответа. Необходимость существования таких секретируемых факторов у бактерий очевидна, как для патогенных, так и для условно-патогенных микроорганизмов (УПМ), и диктуется необходимостью противостоять бактерицидным факторам гуморального и клеточного иммунитета.

Развитие инфекционного процесса определяется иммунореактивностью организма.

При хроническом осложненном течении воспалительного процесса нередко регистрируются значимые изменения в гуморальном и клеточном звеньях иммунитета [Зипшшин О. В., Долгушин И. И., 2001,2007; Семёнов А. В., 2010; Николаева М. Н., 2007].

Микроорганизмы при урогенитальных инфекциях повреждают эпителиальные клетки, при разрушении которых происходит выброс цитокинов (ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8, макрофагального колониестимулирующего фактора, ФНО и др.), взаимодействующих с иммуннокомпетентными клетками. Характер иммунного ответа человека на микроорганизм определяет количество и спектр продуцируемых цитокинов [Александрова Ю. Н., 2006; Железникова Г. Ф., 2009].

Компрометированные механизмы антибактериального иммунитета приводят к распространению и хронизации воспалительного процесса, что, в свою очередь, ведёт к формированию осложнений, в том числе - бесплодия. Иммуноопосредованный характер мужского бесплодия при бактериальных уретритах и простатитах остается предметом дискуссий. Не определены факторы риска снижения фертильности у больных с урогенитальными заболеваниями. Не проведён системный анализ механизмов нарушения и сохранения иммунного гомеостаза у больных с воспалительными болезнями уретры и простаты. Дисбиотические и иммунные изменения урогенитального биотопа могут являться важным ориентиром в прогнозе течения, полноценности излеченности и реабилитации, а также могут быть основанием для существенной коррекции лечения [Кошкин С. В., 2007; Смирнова О. В. 2007; Железникова Г. Ф., 2009]. Это диктует необходимость поиска новых эффективных и доступных алгоритмов прогностического и диагностического обследования пациентов с урогенитальными заболеваниями микробной этиологии, включающих полноценную оценку иммунитета и свойств этиологических агентов.

Цель исследования - оценка биологических свойств микробиоты при развитии хронических урогенитальных заболеваний микробной этиологии у мужчин, для определения их диагностической и прогностической ценности.

Задачи исследования.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Определить видовой и количественный состав микрофлоры репродуктивного тракта здоровых мужчин и мужчин с различными формами урогенитальной инфекции.

2. Оценить пенетрантность и экспрессию способности урогенитальной микрофлоры при воспалительных заболеваниях у мужчин инактивировать факторы местной антимикробной защиты.

3. Изучить особенности системного и местного иммунитета при неспецифических урогенитальных заболеваниях микробной этиологии и разных клинических формах гонококковой инфекции у мужчин.

4. Провести сравнительный анализ свойств микрофлоры и состояния иммунитета при неспецифических и гонококковых поражениях мочеполовых органов у мужчин.

5. Провести анализ способности урогенитальной микрофлоры инактивировать факторы системы антиинфекционной резистентности и показателей иммунитета при воспалительных заболеваниях репродуктивного тракта у мужчин.

6. Оценшъ связь качества спермы, биологических свойств микрофлоры и факторов секреторного иммунитета при неспецифических и гонококковых урогенитальных заболеваниях.

7. Выявил, информативные диагностические и прогностические параметры для длительно текущих и осложнённых урогенитальных заболеваний микробной этиологии у мужчин.

Научная новизна. Впервые дана комплексная оценка специфического и неспецифического воспалительных процессов мочеполовой системы мужчин, которая учитывает: характеристику видового состава и иммунонейтрализующих свойств микрофлоры, изменение системного и местного иммунитета, а также качество спермы, при гонококковых и неспецифических урогенитальных воспалительных заболеваниях. Определена корреляционная зависимость между уровнем лизоцима в эякуляте и подвижностью сперматозоидов. Разработан новый способ диагностики мужского бесплодия по уровню лизоцима в эякуляте (А. С. СССР № 1601576). Оценено влияние лизоцима на подвижность сперматозоидов, что послужило основанием для разработки нового способа лечения семейного бесплодия (А. С. СССР № 1671308). Разработан новый способ дифференциальной диагностики различных форм гонококковой инфекции при её малосимптомном

течении, основанный на определении иммунологических показателей эякулята — в^А и ЛФ (патент РФ № 2400754). Изучена способность сопутствующей микрофлоры инактивировать эффекторы мукозального иммунитета - лизоцим и комплемент. Выявлены факторы риска развития неблагоприятного течения гонококковой инфекции и определены их граничные значения. Полученные данные легли в основу способа прогнозирования хронического течения урогенитальной гонококковой инфекции (патент РФ № 2332671). На основе анализа связи качества спермы и факторов секреторного иммунитета при неспецифических и гонококковых урогенитальных заболеваниях разработан способ прогнозирования риска развития репродуктивных нарушений при урогенитальных воспалительных заболеваниях (приоритет № 2012128391).

Практическая значимость. Получены новые данные, расширяющие представления о патогенетических механизмах взаимодействия симбиотических микроорганизмов и организма в реализации колонизационной резистентности биотопов мочеполового тракта мужчин. Полученные результаты позволили дать оценку биологической значимости микрофлоры, с учётом её вирулентных свойств и факторов врождённого иммунитета в формировании хронической урогенитальной патологии и инфертильности у мужчин. Установлена возможность использования уровня лизоцима как диагностического теста при бесплодии, а также применение лизоцима в качестве патогенетического фактора при лечении семейного бесплодия. Выявленные информативные микробиологические и иммунологические показатели позволяют рекомендовать их для использования в практике в качестве критериев интенсивности местной воспалительной реакции и оценки эффективности лечебных мероприятий при урогенитальной гонорее. Разработанные способы диагностики, прогнозирования могут быть включены в алгоритм наблюдения больных с длительно текущими урогенитальными заболеваниями микробной этиологии.

Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательской работы ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия» Министерства Здравоохранения Российской Федерации, тема «Биологические свойства микросимбионтов при длительно текущих урогенитальных заболеваниях микробной этиологии у мужчин», № гос. регистрации 01201274420.

Внедрение в практику. Методики внедрены в работу Областного центра планирования семьи и репродукции (г. Оренбург), ГБУЗ «ООКВД» (г. Оренбург), а также в учебный процесс на кафедрах дерматовенерологии; акушерства и гинекологии; микробиологии, вирусологии и иммунологии ГБОУ ВПО Оренбургской государственной медицинской академии Министерства Здравоохранения.

Положения, выносимые на защиту:

1. Усиление персистентного потенциала урогенитальной микрофлоры и дисбаланс системных и локальных механизмов антибактериальной защиты -биологическая основа формирования хронических урогенитальных заболеваний различной этиологии у мужчин.

2. Условно-патогенная микрофлора урогенитального тракта мужчин может быть самостоятельным этиологическим агентом при уретритах и простатитах, а также выступает в роли синергидного симбионта, усиливая вирулентный потенциал возбудителя при урогенитальной гонорее.

3. Низкое содержание slgA с одновременно высоким уровнем лактоферрина и выраженным персистентным потенциалом выделенной микрофлоры являются диагностическими показателями различных форм урогенитальной инфекции.

4. Цитокиновый профиль и уровень лизоцима являются диагностическими критериями инфертильности спермы и могут определять пути её коррекции.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на заседаниях Оренбургского Областного отделения Российского общества дерматовенерологов (Оренбург, 2003, 2004, 2005, 2006, 2007, 2011, 2012); на заседаниях Оренбургского Областного отделения Российского научного общества Иммунологов и Аллергологов (Оренбург, 2003 , 2004, 2005, 2006, 2007, 2011, 2012); на Межрегиональной конференции дерматовенерологов, посвященной 1000-летию города Казани «Актуальные вопросы дерматовенерологии» (Казань, 2005); на V и VT Всероссийских конференциях «Персистенция микроорганизмов» (Оренбург, 2006, 2009); на IV Региональной конференции иммунологов Урала (Оренбург, 2006); Российских научных конференциях «Репродуктивное здоровье населения»

г. Оренбург, 2005; на V Всероссийской научно-практической конференции «Терапия социально значимых заболеваний в дерматовенерологии» (Москва, 2006); на IV Всероссийском конгрессе по медицинской микологии (Москва, 2006); VII Конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Москва, 2007); Объединённом иммунологическом форуме (Санкт-Петербург, 2008); X Конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Казань, 2009 г.); X и ХП Всероссийских научно-практических конференциях врачей Приволжско-Уральского военного округа «Актуальные вопросы военной и практической медицины» (Оренбург, 2009; 2011); V конференции иммунологов Урала «Актуальные вопросы фундаментальной и клинической аллергологии и иммунологии» (Оренбург, 2006); на IX Российской конфе-ренции иммунологов Урала, посвященной 90-летию профессора Л. Я. Эберта (Челябинск, 2011), X конференции иммунологов Урала (Тюмень, 2012).

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Научные положения диссертации соответствуют пунктам 2 и 3 паспорта специальности 03.02.03 - «микробиология».

Личный вклад. Весь материал диссертации собран, обработан и проанализирован лично автором. Вклад автора является определяющим и в обсуждении результатов исследования в научных публикациях и докладах.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 45 работ, в том числе 21 статья в изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ, 1 монография, 1 информационное письмо, 1 методические рекомендации для врачей, слушателей факультета последипломного образования, студентов медицинских ВУЗов. Получено 4 патента РФ на изобретения, подана заявка на изобретение «№ 2012128391».

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 268 страницах и содержит введение, обзор литературы, описание материалов и методов, 4 главы собственных исследований, заключение, выводы, практические рекомендации и указатель литературы, включающий 127 отечественных и 96 зарубежных источников. Иллюстрации представлены 28 таблицами и 33 рисунками.

Содержание работы

Материалы и методы исследования

Исследовано 1589 штаммов аэробных и облигатно-анаэробных микроорганизмов, в том числе - гонококков и грибов, выделенных из эякулята здоровых мужчин и больных с урогенитальной инфекцией.

Все выделенные штаммы идентифицированы общепринятыми методами на основании морфологических, тинкториальных, культуральных, ферментативных и антигенных свойств [Берджи, 1997]. Выполнялся секторный посев эякулята на элективные питательные среды с последующей идентификацией культур на основе тест-систем en-coccustest, STREPTOtest 16, STAPHYtest 16, ANAEROtest 23, ENTEROtest 24 (Lachema, Чехия). Выделение грибов рода Candida проводилось посевом с помощью шпателя 0,2 мл эякулята и последующей идентификации на тест-системах APIR20CAUX (Biomerieux, Франция). Определяли частоту выделения (%) и количественное содержание - показатель микробной обсеменённости (ПМО, КОЕ/мл) отдельных видов микроорганизмов, их биологические свойства, оценивали пенетрантность и экспрессию биологических свойств микрофлоры, в том числе их способность нейтрализовать эффекторы системы антиинфекционной резистентности. Гемолиз эритроцитов учитывали на кровяном агаре. Липолитическую активность определяли на агаре с Твином-80, ДНК-азную активность - на агаризованных средах DNASETESTAGAR (BBL, США). Факторы персистенции - ЛА, АЛА, АКА, антикарнозиновую активность (АКрА) определяли по методикам О. В. Бухарина с соавторами (1999).

Микроорганизмы выделены от 441 мужчины репродуктивного возраста (18-40 лет). Все мужчины проходили обследование и, при необходимости, лечение в Оренбургском областном кожно-венероло-гическом диспансере, в Областном центре планирования семьи и репродукции (г. Оренбург), а также в филиале № 6 ФГКУ «354 В КГ» Минобороны России (г. Оренбург).

Выделены группы: 1 группа (группа «а») - 81 фертильный мужчина - не имеющий признаков воспалительных процессов в урогенитальном тракте и с нормальными показателями спермограммы (группа здоровых мужчин). В эту группу также включены доноры, эякулят которых использован для искусственной инсеминации.

2 группа (группа «б») — 107 человек - страдающих малосимптомными хроническими гонококковыми воспалительными заболеваниями предстательной железы и уретры.

3 группа (группа «в») — 79 человек — страдающих малосимптомными хроническими гонококковыми воспалительными заболеваниями предстательной железы и уретры.

4 группа (группа «г») - 88 человек — страдающих хроническими неспецифическими воспалительными заболеваниями уретры.

5 группа (группа «д») - 86 человек - страдающих хроническими неспецифическими воспалительными заболеваниями предстательной железы.

Критериями отбора мужчин в группу больных с урогенитальной инфекцией явились: репродуктивный возраст; клиникомикробиологическое подтверждение диагноза «гонококковая инфекция» либо «неспецифический бактериальный уретрит или простатит»; наличие характерных жалоб. Критериями исключения явились: наличие ВИЧ-инфекциии, вирусные гепатиты, хламидиоз, трихомоноз, сифилис, микоплазмоз, уреаплазмоз и их сочетание, урогенитальные вирусные инфекции (генитальный герпес, папилломавирусная инфекция, контагиозный моллюск).

Группа сравнения (1 группа) представлена здоровыми мужчинами. Критериями отбора мужчин в контрольную группу явились репродуктивный возраст, фертильность, отсутствие в анамнезе соматической патологии, перенесенного урогенитального инфекционного процесса, в том числе вирусной этиологии, ИППП и характерных жалоб.

Наличие микоплазм и уреаплазм определяли с помощью прямой иммунофлюоресценции (ПИФ) и высевом на элективные питательные официнальные среды, хламидий — методом ПЦР, трихомонад - окраской мазков по Граму. Обследование на сифилис проводилось серологическим методом (ИФА, РСК, РМП). Диагностику гонореи проводили в соответствии с приказом МЗ РФ № 415 от 20 августа 2003 года.

У обследуемых всех групп определяли показатели системного и мукозального иммунитета. При исследовании системного иммунитета проводили подсчёт числа выделенных лимфоцитов (в камере Горяева), иммунофенотипирование субпопуляций клеток периферической крови (СБз+, СБ4+, СБ§+, СО 19+) с применением моноклональных антител («Сорбент», Москва). Содержание сывороточных иммуноглобулинов классов А, М, в определяли методомрадиальной

иммунодиффузии [Mancini G. et al., 1965]; содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови исследовали в реакции преципитации с раствором полиэтиленгликоля [Haskova et al., 1978]. Количество секреторного IgA (slgA), лактоферрина (ЛФ) в сьшоротке крови определяли методом иммуноферментного анализа («Вектор-Бест», Новосибирск). Фагоцитарный показатель (ФП), фагоцитарный индекс (ФИ), метаболическая активность нейтрофилов (тест восстановления нитросинего тетразолия - НСТ-тест) исследовали в соответствии с методиками, изложенными в справочнике «Медицинские лабораторные технологии и диагностика» под редакцией А. И. Карпищенко (1999).

Исследование параметров местного иммунитета (ЛФ, общего IgA, slgA, ИЛ-lß, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10) в эякуляте проводили методом ИФА («Вектор-Бест», Новосибирск; «Цитокин», С-Пб) с регистрацией результатов на фотометре «Multiskan» (Labsystems, Финляндия). Лизоцим в эякуляте определяли по скорости лизиса М. Intens [Бухарин О. В. с соавт., 1990].

Статистическую обработку результатов проводили методами вариационной статистики из пакета прикладных программ Microsoft Office Excel 2003, рассчитывая средние арифметические, доверительный интервал и стандартное отклонение [Лакин Г. Ф., 1990]. Достоверность различий между средними арифметическими величинами при нормальном распределении оценивали по t-критерию Стьюдента. Корреляционные связи между показателями местного иммунитета и свойствами гонококков анализировали с использованием программы «корреляционный анализ» Microsoft Excel 1997, при этом достоверность выявленных связей определяли по достижению коэффициентами «г» пороговых величин, соответствующих размерам анализируемой выборки и заданной значимости достоверности (р<0,05).

Результаты и обсуждение

В эякуляте здоровых мужчин (рис. 1) в 59,3% случаев обнаружены Micrococcus spp.\ у 31,7% обследованных этой же группы - стрептококки {Streptococcus agalactiae, Streptococcus sanguis), у 8,9% — энтерококки (Enterococcus faeciun, Enterococcus faecalis). Коагулазоотрицательные стафилококки выделялись в 98,0% случаев. КОС представлены видами: Staphylococcus saprophytics, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus capitis, Staphylococcus haemolyticus. Энтеробактерии (Enterobacter

coli, Citrobacter freundii, Enterobacter cloacae) изолировались у 4,7% обследуемых.

Рисунок 1 - Частота встречаемости (%) микроорганизмов различных групп в эякуляте здоровых мужчин (1), больных с локализованной (2) и осложненной (3) гонореей.

i i — микрококки;

I-1 — стафилококки (КОС и КПС);

^ШШ — стрептококки; I I — энтерококки;

— энтеробактерии; [~~1 - анаэробы; ГШ - грибы рода Candida.

Анаэробные и микроаэрофильные бактерии (Bacteroides dictasonis, Fusobacterium nucleatum, Eggerthella lenta) высевались в 16,0% случаев. Общая интенсивность бактериоспермии не превышала 10^ КОЕ/мл (рис 2, 3). У 8,0% здоровых мужчин выявлены грибы рода Candida, их ПМО составлял 10-Ю2 КОЕ/мл. (рис. 4). Среднее количество видов микроорганизмов, выделенных из одного биоценоза, составило 3,6±0,7.

Рисунок 2 - ПМО аэробами эякулята здоровых мужчин (а), больных с локализованной (б) и с гонококковой инфекцией с системными проявлениями (в).

Стрепт. - стрептококки; Стаф. - стафилококки (КОС и КПС); Энтеробак. - энтеробактерии

Рисунок 3 - ПМО анаэробами эякулята здоровых мужчин (а), больных с локализованной (б) и с гонококковой инфекцией с системными проявлениями (в).

Из репродуктивного тракта мужчин с локализованной гонореей высевали в 30,0% случаев стафилококки (S. haemolyticus, S. saprophytics, S. epidermidis, ПМО 10-102 КОЕ/мл), у 7,9 % - стрептококки (S. agalactiae, ПМО 10 КОЕ/мл), у 15,0% обследуемых — энтерококки (Е. faecalis, ПМО 10 КОЕ/мл). Выделяли облигатные анаэробы и микроаэрофилы (Bacteroides dictasonis, Fusobacterium nucleatum, Propionibacterium granulosum, Actinomyces israelii, ПМО 10 КОЕ/мл) (рис. 3). Грибы рода Candida изолировали в 8,3% случаев (ПМО 102 КОЕ/мл) (рис. 4). Среднее количество видов микроорганизмов, выделенных от одного пациента данной группы, составляло 1,7±0,5.

Рисунок 4 - ПМО для Candida в эякуляте здоровых мужчин (а), больных с локализованной (б) и с гонококковой инфекцией с системными проявлениями (в).

Изучение микрофлоры эякулята больных с гонококковой инфекцией с системными проявлениями показало, что в 91,1% случаев выделялись стафилококки (S. epidermidis S. haemolyticus, S. aureus, ПМО 103-105 КОЕ/мл), в 44,4% - стрептококки (S. agalactiae, S. pyogenes, ПМО 103 КОЕ/мл), в 22,0% -энтерококки (Е. faecalis, Е. faecium, ПМО 103 КОЕ/мл) и в 66,0% -грамотрицательные палочки (Е. coli, Е. cloacae, М. morganii, К. pneumoniae, P. vulgaris, ПМО 103-104 КОЕ/мл). Наблюдалось увеличение видового разнообразия облигатных анаэробов. Кроме видов, присутствующих у пациентов первых двух групп, изолированы штаммы Eubacterium contortum, Peptococcus niger, Peptostreptococcus anaerobius. Анаэробы высевались у 55,5 % пациентов (ПМО 102-103 КОЕ/мл).

У пациентов группы «в» отмечалось значительное увеличение частоты высеваемости (в 77,0% случаев) и ПМО (Ю^-103 КОЕ/мл) грибов рода Candida по сравнению с лицами 1 и 2 групп. В среднем из одного биоценоза выделялось 2,9±0,3 различных видов микроорганизмов.

Состав микрофлоры и частота её выделения от больных с уретритами (группа «г») представлена на рис. 5.

Ч астота встречаемости, %

Рисунок 5 - Частота встречаемости (%) микроорганизмов различных групп в микробиоценозе уретры у больных с уретритом.

Обозначения: 1 — стафилококки; 2 - коринебактерии; 3 — лактобактерии; 4 - микрококки; 5 - энтеробактерии; 6 - стрептококки; 7 - коагулазоположительные стафилококки.

Стафилококки выделялись в 68,8% случаев, причём в 6,8% случаев появились КПС, стрептококки - в 15,4% случаев. Выделялись также лактобактерии (28,3%), коринебактерии (49,8%), микрококки (24,3%) и энтеробактерии (20,4%). В среднем от одного больного из данного биотопа выделялось 3,2±0,3 вида микроорганизмов. Интенсивность микробной обсеменённости исследуемых биотопов выше таковой у здоровых мужчин и составила для стафилококков 3,9±0,2 lgKOE/мл, для стрептококков — 3,0±0,4 lgKOE/мл, для коринебактерий, микрококков, лактобактерий, энтеробактерии обсеменённость составила 4,0±1,1 lgKOE/мл, 3,5±0,2 lgKOE/мл, 2,1 ±0,2 lgKOE/мл, 3,1±0,5 lg КОЕ/мл соответственно.

Видовой спектр микроорганизмов, выделенных от мужчин с неспецифическими воспалениями, оказался более богатым, чем у здоровых (табл. 1). S. epidermidis выделялся в 26,4%, S. aureus - в 6,8%, S. haemolyticus — 9,5%, S. hominis — 11,0%, S. saprophytics — 8,6%, E. faecium - 2,7%, E. faecalis - 4,5%, S. sanguius - 3,8% С. genitalium - 7,5%, C. pseudogenitalium - 1,8%, Candida spp. -2,0%, C. xerosis - 2,7%, E. cloaceae - 4,4%, E. coli - 8,2%, Lactobacillus spp. - 2,1%.

Таблица 1 - Показатель микробной обсеменённости (ПМО, ^КОЕ/мл) различных групп микроорганизмов, выделенных из эякулята мужчин с неспецифическим простатитом

Вид микроорганизмов ПМО, lg КОЕ/мл

S. epidermidis 3,8±0,3

S. hominis 3,4±0,5

S. auricularis 3,5±0,3

S. haemolyticus 3,5±0,7

S. capitis 3,5±0,5

S. aureus 3,5±0,7

Micrococcus spp. 3,5±1,2

Enterococcus spp. 3,8±0,9

Streptococcus spp. 3,6±0,5

Corynebacterium spp. 3,9±1,2

Lactobacillus spp. 3,1±0Д

E. coli 4,4±0,9

Citrobacter spp. 4,1 ±0,3

Enterobacter spp. 4,8±0,3

Morganella morganii 4,1 ±0,4

Коринебактерии выделены лишь у 43,3% обследованных мужчин с простатитами, лактобактерии - у 33,3%. Достаточно низкой была частот! встречаемости микрококков и стрептококков: указанные микроорганизмы выделялись в 23,3 и 20% случаев соответственно. В то же время в спектре изолируемых микроорганизмов наблюдалась фекальная флора, представленная энтерококками (40% случаев) и энтеробактериями (36,7% случаев).

Среднее количество видов микроорганизмов, выделенных от одного больного, составило 3,2±2,1. При оценке степени бактериоспермии установлено, что, несмотря на то, что колебания ПМО для отдельных видов бактерий составляли 3,0-6,5 IgKOE/мл, тем не менее в большинстве случаев интенсивность бактериоспермии не достигала диагностически значимого уровня (5,0 IgKOE/мл) (табл. 1). При этом средние значения ПМО составляли для стафилококков 3,4±0,6 IgKOE/мл, для энтеробактерий 4,2±0,8 и 3,9±1,2 IgKOE/мл для коринебакгерий.

Стафилококки представлены видами S. epidermidis (29,7%), S. hominis (27,4%), S. haemolyticus (28,2%). На долю S. aureus приходилось 6,2% штаммов, а 8,5% занимали другие виды КОС. Коринебактерии представлены видами С. genitalium (35%), С. equi (25%), С. xerosis (15%). На долю С. seminale и С. enzymicum приходилось по 10% изолятов, а С. pseudogenitalium составила 5% от выделенных коринебактерии. Среди изолированных стрептококков и энтерококков лидирующим видом являлся Е. faecalis — 66,3% штаммов; Е. faecium, S. gallinarum, S. mitior, S. salivarius, S. sanguis, S. acidominimus) составляли 33,7% изолятов. Среди энтеробактерий доминировала Е. coli, которая составила 80% от общего числа изолированных энтеробактерий. Другие представители семейства Enterobacteriacae (Morganella mirganii, Citrobacter spp., Enterobacter spp.) выделялись примерно с одинаковой частотой (6,67%).

Анаэробы эякулята мужчин с бактериальными неспецифическими уретритами (группа «г») и простатитами (группа «д») представлены Bacteroides distasonis (11,4% и 8,4% соответственно), Eggerthella lenta (9,6% и 9,3%), Fusobacterium nucleatum (15,2% и 14,2% соответственно) (рис. 6). Так же редко высевались и Propionibacterium granulosum в обеих группах (11,2 % - в группе «г» и 9,9 % -в группе «д»). Actinomyces israelii удалось высеять в 8,4% случаев только от больных с простатитом. Из материала всех обследуемых в довольно большом проценте случаев

системными проявлениями обладала в среднем AJIA - 2,0±0,3 мкг/мл ОП (77,8% штаммов), АКА - 7,8±1,2 анти-СН5о (44,3% штаммов), а также гемолитической активностью в 40,8% случаев, лизоцимной - в 39,7%, ДНК-азной - 28,4% и липолитической активностью в 41,3% случаев.

Гемолитические штаммы грибов рода Candida встречались в группе «а» в 28,9% случаев, грибы из исследуемого материала от пациентов группы «б» проявляли ГЕМ в 30,1% случаев, в группе «в» эта активность у грибов обнаружена в 35,0% случаев. Изоляты грибов рода Candida проявляли ДНК-азную активность. В разных группах частота выявления ДНК-азной активности у грибов рода Candida достоверно не отличалась и составляла для группы «а» 6,3%, для группы «б» - 5,8% и для группы «в» - 6,1%. Твиназная активность выявлена в группе «а» у 74,2% штаммов грибов, в группе «б» -у 82,7% штаммов и в группе «в» - у 79,4% штаммов. Различия в частоте встречаемости этого признака у грибов всех трёх групп — незначительные.

Лизоцимную активность в группе «а» проявляли 17,2% штаммов Candida spp. Пенетрантность ЛА в группах «б» и «в» составляла соответственно 46,8% и 18,2% от числа штаммов грибов этих групп. Способность деградировать лизоцим грибами рода Candida, выделенными из эякулята здоровых мужчин, выявлена у 68,3% штаммов (0,90±0,05 мкг/мл ОП); больных с локализованной гонококковой инфекцией - у 60,1% (1,1 ОАО,09 мкг/мл ОП); с гонококковой инфекцией с системными проявлениями -у 74,0% (1,30±0,10 мкг/мл ОП). У грибов, изолированных из эякулята здоровых мужчин, АКА встречалась у 83,2% штаммов на уровне (2,11±0,40) 106 анти-ЛЕК; в группе «б» этот признак составлял (1,10±0,31) 106 анти-ЛЕК у 80,0% штаммов; группе «в» грибы рода Candida обладали АКА у 91,0% штаммов на уровне (1,67±0,54) 106 анти-ЛЕК. АКрА выявлена у 80,0% аэробных кокков, выделенных от пациентов разных групп. Её средний уровень - 0,8±0,1 мг/мл достоверно не отличался у микроорганизмов, выделенных от здоровых и больных.

При уретрите способностью к продукции гемолизинов обладали 75,5% стафилококков, 88,4% стрептококков, 31,3% коринебактерий, 60% энтеробактерий. У лактобактерий и микрококков гемолитическая активность не регистрировалась. Комплекс персистентных свойств (АЛА и АКА) обнаружен у 100% энтеробактерий, 100% микрококков, 82,3% стафилококков, 47,23% коринебактерий. Уретральные штаммы стрептококков, выделенные у этой группы больных, определяемыми

Рисунок 8 - Частота встречаемости грибов рода Candida в эякуляте здоровых мужчин (а), больных с уретритами (г) и с простатитами (д)

Штаммы, выделенные от здоровых, обладали гемолитической активностью в 23,4% случаев, лизоцимной - в 42,1%, ДНК-азной - в 28,0%, липолитической - в 30,4%, антилизоцимной - в 20,2% и антикомплементарной активностями — в 23,2% случаев (рис. 9). Средние значения AJIA не превышали 0,5±0,2 мкг/мл ОП, АКА -3,8±0,9 антиСН50-

группа "а" группа "б" группа "в"

|_Ш ГЕМ ШЛА О АЛА ПАКА ИДНК-азная В Твиназная j

Рисунок 9 - Пенетрантность факторов вирулентности и персистенции бактериальной микрофлоры эякулята здоровых мужчин (а), больных с локализованной (б) и с гонококковой инфекцией с системными проявлениями (в).

Обозначения: ГЕМ — гемолитическая активность; JIA — лизоцимная активность; АЛА — антилизоцимная активность; АКА- антикомплементарная активность; ДНК-азная - ДНК-азная активность; Твиназная - твиназная активность.

Микроорганизмы, сопутствующие гонококку в биоценозе пациентов с локализованной гонококковой инфекцией, характеризовались способностью к продукции гемолизинов - (23,2% штаммов), деградации лизоцима в среднем 1,3 мг/мл ОП (у 55% штаммов), комплемента - 5,1±1,2 антиСН50 (у 28,0% штаммов). Лизоцимная активность выявлена у 30,0%, ДНК-азная - у 22,0%, а липолитическая активность определена у 44,0% культур.

Микрофлора репродуктивного тракта мужчин с гонококковой инфекцией с

системными проявлениями обладала в среднем АЛА - 2,0±0,3 мкг/мл ОП (77,8% штаммов), АКА - 7,8±1,2 анти-СН50 (44,3% штаммов), а также гемолитической активностью в 40,8% случаев, лизоцимной - в 39,7%, ДНК-азной — 28,4% и липолитической активностью в 41,3% случаев.

Гемолитические штаммы грибов рода Candida встречались в группе «а» в 28,9% случаев, грибы из исследуемого материала от пациентов группы «б» проявляли ГЕМ в 30,1% случаев, в группе «в» эта активность у грибов обнаружена в 35,0% случаев. Изолягы грибов рода Candida проявляли ДНК-азную активность. В разных группах частота выявления ДНК-азной активности у грибов рода Candida достоверно не отличалась и составляла для группы «а» 6,3%, для группы «б» - 5,8% и для группы «в» — 6,1%. Твиназная активность выявлена в группе «а» у 74,2% штаммов грибов, в груше «б» -у 82,7% штаммов и в группе «в» - у 79,4% штаммов. Различия в частоте встречаемости этого признака у грибов всех трёх групп—незначительные.

Лизоцимную активность в группе «а» проявляли 17,2% штаммов Candida spp. Пенетрантность ЛА в группах «б» и «в» составляла соответственно 46,8% и 18,2% от числа штаммов грибов этих групп. Способность деградировать лизоцим грибами рода Candida, выделенными из эякулята здоровых мужчин, выявлена у 68,3% штаммов (0,90±0,05 мкг/мл ОП); больных с локализованной гонококковой инфекцией - у 60,1% (1,10±0,09 мкг/мл ОП); с гонококковой инфекцией с системными проявлениями — у 74,0% (1,30±0,10 мкг/мл ОП). У грибов, изолированных из эякулята здоровых мужчин, АКА встречалась у 83,2% штаммов на уровне (2,11±0,40) 10^ анти-ЛЕК; в группе «б» этот признак составлял (1,10±0,31) 10^ анти-ЛЕК у 80,0% штаммов; группе «в» грибы рода Candida обладали АКА у 91,0% штаммов на уровне (1,67±0,54) 106 анти-ЛЕК. АКрА выявлена у 80,0% аэробных кокков, выделенных от пациентов разных групп. Её средний уровень - 0,8±0,1 мг/мл достоверно не отличался у микроорганизмов, выделенных от здоровых и больных.

При уретрите способностью к продукции гемолизинов обладали 75,5% стафилококков, 88,4% стрептококков, 31,3% коринебактерий, 60% энтеробактерий. У лактобактерий и микрококков гемолитическая активность не регистрировалась. Комплекс персистентных свойств (АЛА и АКА) обнаружен у 100% энтеробактерий, 100% микрококков, 82,3% стафилококков, 47,23% коринебактерий. Уретральные штаммы стрептококков, выделенные у этой группы больных, определяемыми

факторами персистенции обладали в 100% случаев. Выраженность исследуемых признаков различная у различных микроорганизмов.

У энтеробактерий средний уровень антилизоцимной активности составил 3,0±0,7 мкг/мл (р<0,05), микрококки и стафилококки инактивировали лизоцим в концентрациях 1,8±0,3 мкг/мл и 3,1±0,4 мкг/мл (р<0,05) соответственно (рис. 10). Антилизоцимная активность коринебактерий и стрептококков была невысокой, в среднем - 1,3±0,5 мкг/мл и 0,35±0,09 мкг/мл соответственно.

Рисунок 10 - Антилизоцимная активность микроорганизмов, выделенных из эякулята больных уретритом.

Антикомплементарная активность регистрировалась у 69% штаммов стафилококков, выраженность признака 6,7±0,9 антиСН50 (р<0,05) (рис. 11). У всех энтеробактерий отмечалась антикомплементарная активность выше средней — 10,8±0,4 антиСН50 (р<0,05). У микрококков и коринебактерий значения этого признака составили 6,3±0,7 антиСН50 и 7,0±1,1 антиСН50 соответственно. Стрептококки имели не высокие значения АКА - 1,17±0,20 антиСН50.

Рисунок 11 - Антикомплементарная активность микроорганизмов, выделенных из эякулята больных уретритом

При оценке персистентного потенциала изолятов выявлено, что отсутствие персистентных признаков наблюдалось лишь у 11,8% штаммов коринебактерий, а у большинства, выделенных штаммов микроорганизмов независимо от их видовой принадлежности регистрировалась способность к инактивации лизоцима и/или комплемента, при этом большинство изолятов обладали комплексом персистентных характеристик (рис. 12).

%

100 80 60 40 20 0

я стафилококки □ стрептококки ■ коринебактерии ■ энтерококки о микрококки ^ энтеробактерии

Рисунок 12 - Доля штаммов микроорганизмов с различным набором персистеитных признаков, выделенных из эякулята больных простатитом.

Изучение выраженности антилизоцимного признака у выделенных микроорганизмов показало, что большинство штаммов стафилококков и энтеробактерий обладали средними и высокими значениями АЛА (>2 мкг/мл) (рис. 13). Средние значения АЛА составили для стафилококков и энтеробактерий 2,7±0,8 и 3,5±0,9 мкг/мл соответственно. Микрококки и коринебактерии инактивировали лизоцим в концентрациях 1,3±0,7 и 0,8±0,9 мкг/мл соответственно, а стрептококки - в концентрации 1,3±0,6 мкг/мл (р<0,01).

%

Вше

АЛА, мкг/мл

И стафилококки СЗ стрептококки

■ коринеб актерии И энтерококки_

О микрококки Е1 энтероб актерии

Рисунок 13 - Антилизоцимная активность микроорганизмов, выделенных из эякулята больных простатитом.

Большинство штаммов бактерий, выделенных из эякулята больных, обладали способностью снижать активность комплемента в гемолитической системе, при этом почти у всех штаммов регистрировались средние и высокие значения АКА (рис. 14). АКА обладали 76,4±3,8% выделенных стафилококков при среднем уровне признака 7,8±1,2 анти-СН50 (р>0,05). Экзометаболиты энтеробактерий ингабировали активность комплемента коринебактерий в пределах 16,8±2,1 анти-СН5о. Средние значения АКА у стрептококков составляли 3,7±2,5 анти-СН50 (р>0,01), а у микрококков

- 11,6±3,3 анти-СН50 (р>0,05).

%

из стафилококки ■ коринебакгерии □ микрококки □ стрептококки_ш энтерококки_Я знтеробактерии

Рисунок 14 - Антикомплементарная активность микроорганизмов, выделенных из эякулята больных простатитом.

В сперме больных наблюдаются изменения видового состава микрофлоры, характеризующиеся появлением энтеробактерий с высоким персистентным потенциалом. Указанные изменения видового состава микрофлоры эякулята сопровождаются усилением вирулентных и персистентных свойств симбионтной сапрофитной микрофлоры, что позволяет сделать вывод о роли персистирующей микрофлоры в формировании хронического процесса.

Определение персистентных свойств гонококков выявило, что способность к инактивации карнозина отмечалась у трети исследуемых штаммов, изолированных от пациентов с локализованным процессом. В группе страдающих распространённой гонококковой инфекцией частота встречаемости этого признака несколько выше.

По уровню выраженности АКрА выявлены существенные различия между штаммами гонококков, выделенными от больных с локализованной гонококковой

инфекцией и гонореей с системными проявлениями. Степень выраженности АКрА выше (р<0,05) у мужчин с гонококковой инфекцией с системными проявле ниями (рис. 15).

АЛФА, |дА-прот., йдА-прот, АЛА, АКрА. АКА,

нг/мп мкг/мл мкг/мл мкг/мл мг/мл ед.СН®

| «ЛГИ тисп |

Рисунок 15 - Выраженность (б) биологических свойств гонококков, выделенных от больных с различными формами гонореи.

- достоверные различия (р<0,05), □ - достоверные различия (р<0,001).

Исследование свойств гонококков, связанных со способностью инактивировать лизоцим и комплемент, показало незначительное увеличение частоты встречаемости антилизоцимной и антикомплементарной активностей у микроорганизмов, выделенных от больных с распространёнными формами гонореи по сравнению с пациентами, имеющими локализованную форму инфекции. Уровень АЛА и АКА выше у штаммов, выделенных от больных с системными проявлениями гонореи по сравнению с изолятами от больных с локализованной гонореей.

Гонококки, изолированные от мужчин с системными формами заболевания, характеризовались наличием сочетания трёх или более факторов персистентности одновременно и обладали более высокими значениями антилизоцимной и 1«А-протеазной активности.

Полученные результаты свидетельствуют о преобладании в эякуляте здоровых мужчин грамположительных кокков с низким уровнем вирулентного и персистентного потенциала, что совпадает с данными других исследователей [Иванов Ю. Б., 1998; Кузьмин М. Д., 2002].

Исследование состояния микробиоценоза урогенитального тракта мужчин показало, что микрофлора эякулята мужчин с гонококковой инфекцией имеет существенные видовые и количественные отличия по сравнению со здоровыми,

выражающиеся в снижении уровня бактериоспермии и уменьшении видового разнообразия высеваемой микрофлоры, что, возможно, связано с максимальным проявлением вирулентного потенциала специфического возбудителя в начальной стадии инфекционного процесса.

Микрофлора эякулята мужчин с гонококковой инфекцией с системными проявлениями характеризовалась видовым разнообразием (в том числе облигатные анаэробы), повышением уровня бактериоспермии и степени высеваемости грибов, а также усилением их вирулентных и персистентных свойств.

Поскольку частым ассоциантом в микробиоценозе репродуктивного тракта мужчин с гонококковой инфекцией с системными проявлениями являются грибы рода Candida, оценено их возможное влияние на факторы персистенщш Neisseria gonorrhoeae. Изучено влияние внеклеточных факторов 11 клинических штаммов грибов рода Candida на антилизоцимную, антикарнозиновую и антикомплементарную активности 10 штаммов гонококков.

Установлено, что внеклеточные факторы грибов рода Candida в значительном проценте случаев повышают персистентные свойства Neisseria gonorhoeae (антилизоцимную и антикомплементарную активность), увеличивая, способность возбудителя удерживаться в организме. Грибы рода Candida также обладают AJIA и АКА, истощая факторы защиты хозяина. Используя комплекс программ многомерных вероятностно-статистических критериев: «Факторный анализ» и «Дискриминатный анализ» выявлены факторы риска развития неблагоприятного течения гонококковой инфекции и определены их граничные значения. Если в ассоциации с гонококком высеваются грибы рода Candida в титре не менее 102 КОЕ/мл, при проявлении одновременно антилизоцимной активности не менее 1,3 мкг/мл на единицу оптической плотности и антикомплементарной активности не менее 1,5 10^ антилитических единиц комплемента прогнозируют длительное течение урогенитальной инфекции (патент РФ № 2332671).

При изучении показателей периферической крови у больных с микробными заболеваниями урогенитального тракта выявлено, что при локализованной гонорее отмечается достоверное снижение относительного количества зрелых форм

24

лейкоцитов и, напротив, увеличение числа моноцитов (табл. 2).

Таблица 2 - Показатели периферической крови и фагоцитоза у больных урогенитальными микробными заболеваниями (М ± ш)

мО «3 н 1 О С Лейкоциты 109/л Лимфоциты, % Лимфоциты, 109/л Пало-чкоя-дерные нейтро-филы, % Сегме-нтоядер- ные нейтро-филы, % Моноциты, % Эози-нофи-лы, % ФП, % ФИ, ед. нет спонтанный, % нет стимулированный, % Функциональный резерв (НСТст ■ НСТспо нт), ед.

Здоровые лица (п = 28) 6,22 ± 0,19 35,30 ± 0,62 2,20 ± 0,07 1,98 ± 0,23 56,90 ± 0,51 3,19 ± 0,28 2,57 ± 0,23 59,50 ± 1,17 3,67 ± 0,08 6,46 ± 0,31 37,20 ± 4,53 28,20 ± 3,21

Больные с локализованной гонококковой инфекцией (п = 26) 6,05 ± 0,16 47,40 ± 1,63* 2,52 ± 0,13 1,88 ± 0,31 43,90 ± 1,68 * 5,13 ± 0,31* 2,88 ± 0,20 51,50± 2,29* 3,16 ± 0,09* 15,40 ± 0,31 * 25,20 ± 1,77* 13,80 ± 0,81 *

Больные с гонококковой инфекцией с системными проявлениями (п = 25) 5,05 ± 0,19 *о 45,80 ± 1,22* 2,87 ± 0,05 * 2,33 ± 0,36 47,00 ± 1,48 * 2,83 ± 0,36 □ 2,17 ± 0,20 48,30 ± 1,33 * 2,88 ± 0,03 *□ 7,00 ± 0,13 а 11,70± 0,71 *о 8,30 ± 0,47 *□

Больные с неспецифическим уретритом (п = 24) 6,05 ± 0,16 32,3 ± 0,61* 2,18 ± 0,07 2,01 ± 0,35 44,30 ± 1,66* 3,13 ± 0,32 2,38 ± 0,20 52,2 ± 2,26* 3,23 ± 0,09* 14,2 ± 0,31* 26,10 ± 1,74* 28,30 ± 1,25*

Больные с неспецифическим простатитом (п=21) 35,8 ± 0,19*п 35,8 ± 0,19*° 2,23 ± 0,05*° 1,89 ± 0,31 44,90 ± 1,17* 3,16± 0,34 2,27 ± 0,20 50,5 ± 2,19* 3,20 ± 0,08* 8,4 ± 0,21*п 28,30 ± 1,25* 14,1 ± 0,80*°

Примечание: здесь и в табл. 2, 3 *- р<0,05 для различий с показателями у здоровых; р<0,05 для различий между показателями у больных с локализованной гонококковой инфекцией и гонококковой инфекцией с системными проявлениями

Изменения фагоцитарной активности лейкоцитов выражались в достоверном снижении значений ФИ, ослаблении метаболической активности нейтрофилов (стимулированный зимозаном НСТ-тест). Степень выраженности количественных изменений иммунных показателей при гонорее с системными проявлениями значительно выше по сравнению с локализованной формой гонореи. Выявлено

существенное снижение количественных значений ФИ, функционального резерва лейкоцитов в спонтанном и стимулированном НСТ-тесте, что согласуется с данными О. А. Сингур (2003), показавшей наличие дефектов фагоцитарно-клеточной защиты у больных с длительно текущей гонореей.

При неспецифическом поражении уретры отмечается умеренная лимфопения, достоверное снижение зрелых форм лейкоцитов. Фагоцитарная активность лейкоцитов характеризовалась усилением метаболической активности нейтрофилов в тесте спонтанного восстановления нитросинего тетразолия, на фоне достоверного снижения значений фагоцитарного индекса и фагоцитарного показателя. Значения стимулированного НСТ-теста меньше определяемых у здоровых мужчин, обусловливая достоверное ослабление функционального резерва нейтрофилов. Эозинофильная составляющая гранулоцитарного звена оставалась интактной.

Изменения гуморального звена иммунитета при локализованной гонорее, по сравнению с показателями у здоровых лиц, характеризовались значительным увеличением уровня ЛФ и существенным снижением уровня и (табл. 3), что можно рассматривать как следствие супрессирующего влияния гонококков на иммунный ответ [Рап1еНс М. е1 а1., 2005].

Выявленное повышение ЛФ является ответной реакцией на воспалительный процесс, развивающийся на слизистой урогенитального тракта [\Villcox М. Б. Р., 2008]. У больных с распространённым процессом изменения показателей гуморального иммунитета имели направленность, подобную локализованным формам гонореи и выражались в достоверном снижении уровня 1§А, в^А, и увеличение содержания ЦИК и ЛФ.

Изменения клеточного состава периферической крови при локализованной гонококковой инфекции, по сравнению со здоровыми, характеризовались снижением числа зрелых Т-лимфоцитов (СБз+) за счёт хелперно-индукторных (СЭ4+) и цитотоксических (СЭ8+) лимфоцитов (табл. 3).

Нарушения клеточного звена иммунитета при системных проявлениях гонореи выражались в уменьшении количества иммунорегуляторных Т-лимфоцитов с хелперной функцией, цитотоксических (СО§+) клеток.

Таблица 3 - Показатели клеточного, гуморального иммунитета и факторов естественной резистентности периферической крови больных у больных урогенитальными микробными заболеваниями (М ± ш)

Показатель m Q и "о О и SS + тГ а и V Q и "оО Q и + ОО Q и О4 <7\ о о "о 5 и Ig А, г/л slg А, мкг/мл Ig М, г/л Ig G, г/л ЦИК, ед. Лактоферрин, нг/мл

Здоровые лица (п = 28) 62,60 ± 0,74 1,40 ± 0,05 42,10 ±0,71 0,92 ±0,04 24,20 ±0,43 0,54 ± 0,02 14,20 ±0,47 0,31 ± 0,01 1,91 ± 0,03 1,40 ± 0,07 1,44 ± 0,04 12,80 ±0,42 68,00 ± 1,16 905 ± 128

Больные с локализованной гонокок- 41,60 ± 1,38 * 1,07 ± 0,06* 30,30 ± 1,63 * 0,34 ±0,03 * 18,50 ±0,81 * 0,21 ±0,01 * 13,30 ±0,77 0,33 ±0,03 1,63 ±0,09 * 3,38 ± 0,16 * 1,54 ± 0,09 8,31 ± 0,44* 75,50 ±5,51 985 ± 77*

ковой инфекцией (п = 26)

Больные с гонококковой инфекцией с системными 44,70 ± 0,92* 1,01 ± 0,04 * 28,50 ± 0,66* 0,30 ± 0,02 * 21,30 ± 1,28 0,23 ± 0,052 * 14,80 ± 0,66 0,34 ± 0,031 0,90 ± 0,03 *□ 2,88 ± 0,16 *□ 1,87 ± 0,01 *□ 8,50 ± 0,05 * 81,30 ± 2,45 * 2048 ± 74 *□

проявлениями (п = 25)

Больные с неспецифическим уретритом (п = 24) 48,0 ± 1,36* 1,23 ± 0,06* 33,3 ± 1,63* 0,39 ± 0,03* 20,3 ± 1,18* 0,21 ± 0,051 * 13,9 ± 0,56 0,37 ± 0,03* 1,64 ± 0,09* 2,40 ± 0,14* 1,54 ± 0,09 9,32 ± 0,43* 80,3 ± 2,09* 985 ± 77

Больные с неспецифическим простатитом (п=21) 47,0 ± 1,34* 1,20 ± 0,04* 31,5 ± 0,66* 0,37 ± 0,02* 22,6 ± 0,19* □ 0,31 ± 0,033 14,7 ± 0,64 0,31 ± 0,033 1,37 ± 0,07* о 2,38 ± 0,11 1,69 ± 0,03* □ 8,96 ± 0,05* 79,3 ± 2,38* 935 ± 72

Изменения иммунного статуса при гонококковой инфекции можно рассматривать как вторичную иммунную недостаточность с преимущественным угнетением клеточно-опосредованного звена, что согласуется с данными Г. В. Порядина и соавт. (2008), D. Н. Walker et al. (2000).

Проведённое исследование популяционного и субпопуляционного состава клеток периферической крови (табл. 3) у больных с малосимптомным неспецифическим бактериальным уретритом, показало, что по отношению к здоровым лицам, наибольшего внимания заслуживают: снижение общего числа Т-лимфоцитов за счёт CD4 и CDs популяций, наряду с ослаблением фагоцитарной

существенное снижение количественных значений ФИ, функционального резерва лейкоцитов в спонтанном и стимулированном НСТ-тесте, что согласуется с данными О. А. Сингур (2003), показавшей наличие дефектов фагоцитарно-клеточной защиты у больных с длительно текущей гонореей.

При неспецифическом поражении уретры отмечается умеренная лимфопения, достоверное снижение зрелых форм лейкоцитов. Фагоцитарная активность лейкоцитов характеризовалась усилением метаболической активности нейтрофилов в тесте спонтанного восстановления нитросинего тетразолия, на фоне достоверного снижения значений фагоцитарного индекса и фагоцитарного показателя. Значения стимулированного НСТ-теста меньше определяемых у здоровых мужчин, обусловливая достоверное ослабление функционального резерва нейтрофилов. Эозинофильная составляющая гранулоцитарного звена оставалась интактной.

Изменения гуморального звена иммунитета при локализованной гонорее, по сравнению с показателями у здоровых лиц, характеризовались значительным увеличением уровня ЛФ и существенным снижением уровня IgA и (табл. 3), что можно рассматривать как следствие супрессирующего влияния гонококков на иммунный ответ [РаШеНс М. е1 а1., 2005].

Выявленное повышение ЛФ является ответной реакцией на воспалительный процесс, развивающийся на слизистой урогенитального тракта [\Villcox М. Б. Р., 2008]. У больных с распространённым процессом изменения показателей гуморального иммунитета имели направленность, подобную локализованным формам гонореи и выражались в достоверном снижении уровня ^А, б^А, и увеличение содержания ^М, ЦИК и ЛФ.

Изменения клеточного состава периферической крови при локализованной гонококковой инфекции, по сравнению со здоровыми, характеризовались снижением числа зрелых Т-лимфоцитов (СБз+) за счёт хелперно-индукторных (С04+) и цитотоксических (СО§+) лимфоцитов (табл. 3).

Нарушения клеточного звена иммунитета при системных проявлениях гонореи выражались в уменьшении количества иммунорегуляторных Т-лимфоцитов с хелперной функцией, цитотоксических (СБ8+) клеток.

не выявлено.

Локализованная форма гонореи сопровождается значительным увеличением в эякуляте концентрации лизоцима, ЛФ и slgA. Распространение инфекционного процесса на окружающие органы и ткани характеризуется снижением в эякуляте лизоцима, slgA, нарастанием концентрации ЛФ и IgA. Хотя при малосимптомном течении гонореи отсутствуют ярко выраженные клинические признаки локальной воспалительной реакции, уровень ЛФ оказался достаточно информативным для оценки поражённости урогенитального тракта. Проведённые исследования не выявили интенсивной ответной реакции мукозального иммунитета на присутствие N. gonorrhoeae в различных отделах мочеполового тракта, оцениваемой по содержанию slgA, являющегося местно синтезируемым иммуноглобулином слизистых.

При неспецифических уретритах, анализ результатов исследования гуморальных факторов иммунитета и естественной резистентности в эякуляте больных по сравнению с контролем, показал, что происходило достоверное уменьшение концентрации лизоцима и увеличение концентрации лактоферрина (табл. 4). Существенных изменений в содержании slgA не выявлено. У больных с неспецифическим бактериальным простатитом уровень содержания в эякуляте ЛФ, относительно контрольной группы здоровых мужчин, достоверно увеличен, так же как и уровень содержания общего IgA. Уровень лизоцима и slgA в эякуляте больных с поражением простаты оказался достоверно сниженным относительно нормы. При сравнительном анализе изменений местного иммунитета у больных уретритами и простатитами выявлено, что уровень лактоферрина в эякуляте, у пациентов с уретритами и простатитами не имел групповых отличий. Концентрация общего IgA одинаково noBbimeiif в обеих группах.

Исследование содержания гамма интерферона (IFN-y) показало, что в группе здоровых мужчин выявлен уровень IFN-y равный 7,2±0,4 пг/мл (табл. 5).

Таблица 5 - Содержание IFN-y в эякуляте мужчин

Показатель Обследуемые

здоровые лица (п=14) больные с локализованной гонокок-кковой инфекцией (п = 18) больные с гонококковой инфекцией с системными проявлениями (п = 16) больные с уретритами (п = 18) больные с простатитами (п=21)

IFN-y, пг/мл 7,2 ± 0,4 3,1 ±0,4' 3,4 ± 0,5' 7,9 ± 0,7 12,3 ± 0,4' □

У всех пациентов с локализованным гонококковым поражением отмечено достоверно более низкое содержание 1Ш-у, чем в контрольной группе здоровых мужчин. У мужчин с уретритами не отмечено достоверных отличий в концентрации этого фактора.

Воспалительный процесс при локализованной гонорее сопровождается значительным увеличением уровня провоспалительных цитокинов ИЛ-10, ИЛ-8 и снижением концентрации противовоспалительного цитокина ИЛ-10. Вовлечение в инфекционный процесс окружающих органов и тканей (гонорея с системными проявлениями) характеризуется многократным ростом в эякуляте содержания ИЛ-6 и ИЛ-1р при отсутствии существенной динамики количественных значений ИЛ-10, по сравнению с локализованной формой гонореи.

Корреляционный анализ между персистентными свойствами гонококка и показателями местного иммунитета показал, что при локализованной гонорее выявляются высокие по уровню положительные связи АЛфА гонококков с уровнем ЛФ в эякуляте (г=0,85, р<0,001), и отрицательные, но менее значимые, - с ИЛ-8 (г=-0,32, р<0,02). Способность гонококков инактивировать имела прямые

корреляционные связи с уровнем данного иммуноглобулина в эякуляте (п=0,59, р<0,001). Способность гонококков к инактивации я^А находилась в высокой обратной корреляционной связи с уровнем б]£А в эякуляте (1^0,65, р<0,001), (г=-0,32, р<0,02) и концентрацией провоспалительного цитокина ИЛ-8 (г=-0,43, р<0,001).

У штаммов гонококков, выделенных от больных гонореей с системными проявлениями, АЛфА, также как и при локализованной гонорее, коррелировала с уровнем ЛФ в эякуляте (г=0,89, р<0,05). Вместе с тем выявлялась новая высокая по уровню положительная связь АЛфА со способностью гонококков к инактивации в^А (г=0,85, р<0,05), ранее не выявляемая прямая корреляционная связь б^А-протеазной активности гонококков с уровнем провоспалительного цитокина ИЛ-6 (г=-0,40, р<0,05) и 1§А-протеазной активности с уровнем 1§А (г=-0,72, р<0,05). Что касается корреляционных связей между 1§А и в^А, а также ^А и ^А-протсазной активностями гонококков, то при гонорее с системными проявлениями, по сравнению с локализованной гонореей, происходит усиление значимости этих связей (соответственно г=-0,86 и г=-0,86 против г=-0,57, г=-0,59). Это отражает

более частое выявление у больных с гонореей с системными проявлениями штаммов гонококков с сочетанной способностью инактивировать несколько эффекторов местного иммунитета.

Большинство штаммов гонококков, выделенных от больных с малосимптомной гонореей, способны продуцировать IgA-протеазы и инактивировать ЛФ, лизоцим, комплемент, карнозин. Продуценты с более значительной выраженностью данных свойств чаще выделялись со слизистой уретры больных с распространённым воспалительным процессом, что указывает на ассоциацию выраженности АЛфА, АКА, АКрА, IgA- и sIgA-протеазной активностей, с патогенностью бактерий и их способностью поражать различные отделы урогенитального тракта, участвуя в формировании недостаточности мукозального иммунитета. Учитывая достоверные различия в уровне АЛфА и slgA-протеазной активностей у штаммов гонококков, выделенных от больных гонореей с системными проявлениями, по сравнению с изолятами от больных с локализованной гонококковой инфекцией, данные свойства N. gonorrhoeae могут быть использованы как прогностические маркёры развития осложнённых форм гонореи. Комплексное воздействие ферментов агрессии гонококков, выделяемых протеазоположительными штаммами, супрессирует продукцию IgA, особенно slgA, который синтезируется локальными плазматическими клетками слизистых оболочек и является одним из важнейших факторов колонизационной резистентности. Об этом свидетельствует отсутствие увеличения концентрации slgA в эякуляте больных вялотекущей гонореей с распространением процесса на различные отделы урогенитального тракта и увеличение доли лиц, имеющих низкие уровни slgA в эякуляте. По-видимому, при этом создаются условия для возникновения вялотекущих распространённых форм гонококковой инфекции. Увеличение концентрации ЛФ у таких больных является, очевидно, свидетельством распространения воспалительного процесса с уретры на другие органы мочеполовой системы и, вероятно, способствуют селекции штаммов N. gonorrhoeae с высоким уровнем АЛфА, которая рассматривается как один из факторов персистенции бактерий [Валышев А. В., Валышева И. В., 2006].

При изучении местного иммунитета у больных с разными клиническими формами гонореи, разработан способ дифференциальной диагностики различных форм гонококковой инфекции при её малосимптомном течении, основанный на определении иммунологических показателей эякулята — в^А и ЛФ. При уровне б^А 2,51 мкг/мл и менее и одновременном уровне ЛФ 6965 нг/мл и более диагностируют гонококковую инфекцию с системными проявлениями, а при отсутствии указанного условия диагностируют локализованную гонорею. Апробация предложенного способа дифференциальной диагностики различных форм гонококковой инфекции при её малосимптомном течении проводилась на клинической выборке больных (п=61). Результаты апробации предложенного способа позволяют сделать вывод о его пригодности для диагностики малосимптомной гонореи с системными проявлениями.

Проведена оценка фертильности спермы у больных с урогенитальными воспалительными процессами, осложненными бесплодием. Установлено, что персистирующая микрофлора эякулята, вызывая лизоцимдефицитное состояние, способствует мужской инфертильности. Разработан способ диагностики мужского бесплодия по уровню лизоцима в эякуляте обследуемых (А. С. СССР № 1601576) и способ лечения мужского бесплодия с использованием коррекции уровня мурамидазы (А. С. СССР № 1671308).

Фертильность спермы зависит также от уровня в биологической жидкости интерлейкина 1 бета (ИЛ-1Р) и интерферона гамма (№N-7), поэтому они определены как информативные критерии формирования инфертильности. Это позволило предложить способ прогнозирования развития репродуктивных нарушений (№ 2012128391).

Изучение урогенитальной инфекции показало перспективность использования комплексного подхода в решении прикладных задач инфекционной патологии, что позволило, во-первых, дать оценку роли системного и местного иммунитета в формировании различных по распространённости форм гонококковой инфекции. Развитие локальной недостаточности антибактериальной защиты (особенно выраженной при гонорее с системными проявлениями) происходит в условиях

селекции штаммов патогена и его симбионтов с высоким персистентным потенциалом, что сопровождается формированием микроэкологических нарушений в урогенитальном биотопе и дальнейшей инактивацией естественных механизмов защиты организма, а также способствует сохранению возбудителя и распространению его по отделам урогенитальной системы. Во-вторых, использование комплексного клининико-иммунологического подхода позволило выявить ряд значимых признаков, определяющих биологию возбудителя и его симбионтов, а также ведущие механизмы защиты организма, пригодные для прогнозирования длительности инфекции и дифференциальной диагностики различных форм заболевания.

Выводы:

1. Нарушения микроэкологии репродуктивного тракта мужчин с неспецифическими уретритами и простатитами носят сходный характер и отличаются степенью выраженности; в отличие от здоровых, у них увеличено видовое разнообразие и обсеменённость бактериями и грибами, отличающимися выраженной способностью к деградации факторов мукозального иммунитета, что свидетельствует о формировании урогенитального дисбиоза.

2. У пациентов с локализованной гонореей, по сравнению со здоровыми, уменьшается ПМО и изменяется видовой спектр аэробов, увеличивается ПМО грибов. Микрофлора эякулята мужчин с системными проявлениями гонореи отличается видовым разнообразием аэробов и, особенно, анаэробов, повышением уровня бактериоспермии до 10^ КОЕ/мл и микоспермии до 10^ КОЕ/мл. Длительное течение гонореи сопровождается диагностически значимым увеличением в эякуляте грибов рода Candida, с выраженной способностью инактивировать лизоцим и комплемент.

3. При неспецифических уретропростатитах у бесплодных мужчин концентрация лизоцима в эякуляте в 6 раз меньше, чем у здоровых. Персистирующая микрофлора эякулята, вызывая лизоцимдефицитное состояние, способствует мужской инфертильности.

4. При неспецифических уретритах и простатитах, как и при гонорее, снижается количество CD3+ лимфоцитов за счёт CD44- и CDg+ клеток, продукция IgA, IgG,

однако, уровень лактоферрнна не повышался. При простатитах, по сравнению с уретритами, отмечается достоверно большее снижение количественных значений фагоцитарного индекса, функционального резерва лейкоцитов, за счёт спонтанного и стимулированного НСТ-теста и уровня IgA. В периферической крови больных с уретритом отмечается достоверно более высокий уровень IgM и slgA.

5. У больных гонореей сниается количество CD3+ лимфоцитов за счёт CD44- и CDg+ клеток, фагоцитарный индекс, функциональный резерв нейтрофилов за счёт ослабления метаболической активности, продукция IgA, IgG, но отмечается более высокий уровнь slgA, лактоферрина. При гонорее с системными проявлениями указанные изменения более выражены.

6. При неспецифических уретритах и простатитах снижается содержание в эякуляте лизоцима, увеличивается уровень провоспалительных цитокинов ИЛ-1Р, ИЛ-8, противовоспалительного цитокина ИЛ-10 и IFN-y. Простатит, в том числе осложненный бесплодием, характеризуется нарастанием в эякуляте концентрации лактоферрина и IgA, на фоне достоверно пониженного уровня slgA. Разработан способ оценки риска нарушений фертильности у мужчин на основе параметров местного иммунитета и цитокинового профиля.

7. При гонококковом уретрите в эякуляте увеличивается уровень лактоферрина, при нормальной концентрации IgA и slgA; умеренно повышается содержание провоспалительных интерлейкинов (ИЛ-ф, ИЛ-8), при пониженном уровне ИЛ-10, IFN-y. В эякуляте мужчин с системными проявлениями инфекции, по сравнению с больными локализованной гонореей и здоровыми, достоверно увеличивается уровень лактоферрина, IgA, ИЛ-6, ИЛ-ip, снижается концентрация slgA.

Практические рекомендации:

1. Для диагностики гонореи с системными проявлениями необходимо определение уровня бактериоспермии 10^ КОЕ/мл и более и микоспермии 103 КОЕ/мл и более.

2. Для диагностики хронического течения гонореи необходимо определять диагностически значимый титр в эякуляте грибов рода Candida, с выраженной способностью инактивировать лизоцим и комплемент.

3. Для диагностики мужского бесплодия необходимо определять уровнь

лизоцима в эякуляте обследуемых, который при неспецифических уретропростатитах у бесплодных мужчин в эякуляте в 6 раз меньше, чем у здоровых.

4. Для лечения семейного бесплодия рекомендуется использовать стимулирующий эффект на подвижность сперматозоидов лизоцима в концентрации 5-15 мкг/мл.

5. Для оценки риска нарушений фертильности у мужчин необходимо определять параметры местного иммунитета и цитокинового профиля (ИЛ-10 и IFN-y). О неспецифических уретритах и простатитах свидетельствует снижение содержания в эякуляте лизоцима, увеличение уровней ИЛ-ip, ИЛ-8, ИЛ-10 и IFN-y. Простатит, в том числе осложненный бесплодием, характеризуется нарастанием в эякуляте концентрации лактоферрина и IgA, на фоне достоверно пониженного уровня slgA.

6. Для дифференциальной диагностики гонококкового уретрита и простатита необходимо определять уровнь slgA и концентрацию лактоферрина в эякуляте. При гонококковом уретрите в эякуляте увеличен уровень лактоферрина, при нормальной концентрации IgA и slgA; умеренно повышено содержание ИЛ-ip, ИЛ-8, при пониженном уровне ИЛ-10 и IFN-y. В эякуляте мужчин с системными проявлениями гонореи как по отношению к здоровым, так и по отношению к больным локализованной гонореей, достоверно увеличен уровень лактоферрина, IgA, ИЛ-6, ИЛ-1(3, снижена концентрация slgA.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

Статьи в реферируемых журналах

1. Михайлова Е. А. Диагностика мужского бесплодия по уровню лизоцима в сперме

/Кузьмин М. Д., Михайлова Е. А.// Лабораторное дело. - 1991 - № 7 - С.41-44

2. Михайлова ЕА. Роль персистирующей микрофлоры в формировании патоспермии, статья / О.В.Бухарин, МДКузьмин, ЕА.Михайлова, Ю.Б.Иванов //Урология и нефрология -1998. - № 2

3. Михайлова Е.А. Влияние лекарственных растений на персистентные свойства микроорганизмов / А.В.Тарасевич, Б.Я.Усвяцов, Е.А.Михайлова, Н.Б.Перунова, С.В.Фомичева // Антибиотики и химиотерапия - 2003 - № 5. - С.53-56.

4. Михайлова Е.А. Влияние радиоволновой гипертермии на микрофлору предстательной железы при лечении простатита, осложненного бесплодием / О.В.Бухарин, М.Д.Кузьмин, Ю.Б.Иванов, Е.А.Михайлова // Журн. микробиологии, эпидемиологии

и иммунологии - 2001 - № 4. - С.95-97.

5. Михайлова Е.А. Патогенетическое значение микрофлоры эякулята в формировании гонококковой инфекции / Е.К.Кузнецова, О.О. Михайлова, Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, Н.Б.Перунова, Л.Н.Генелес // Вестник ОГУ - 2005,- С.55-57.

6. Михайлова Е.А. Антилизоцимная активность микроорганизмов в ассоциации грибов с гонококками / О.О.Михайлова, Е.А.Михайлова, Н.Б.Перунова, Л.Г.Воронина, Е.К.Кузнецова // Проблемы медицинской микологии. - 2006. - т. 2., № 2 - С. 76-77.

7. Михайлова Е.А. Характеристика ассоциативной микрофлоры эякулята мужчин с гонококковой инфекцией / Е.К.Кузнецова, Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, Н.Б.Перунова // Жури, микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2006. -№ 4. — С. 89-92.

8. Михайлова Е.А. Факторы защиты Neisseria gonorrhoea от эффекторов иммунной системы человека / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, Н.Б.Перунова, Е.ККузнецова, О.О.Михайлова, А.И.Смолягин // Российский аллергологический журнал. - 2007 -№ 3 - С. 286.

9. Михайлова Е.А. Состояние локальной антимикробной защиты слизистых оболочек половых путей у мужчин больных гонореей / О.О.Михайлова, Е.А.Михайлова, И.Н.Чайникова, Л.Г.Воронина, // Российский иммунологический журнал Russian Journal of Immunology. - 2008. - т. 2 (11), № 2-3

Ю.Михайлова Е.А. Клинико-микробиологические особенности течения инфекции, обусловленной Neisseria gonorrhoea / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, Е.К.Кузнецова, Ю.Ф.Шерман // Вестник дерматологии и венерологии. - 2008. - № 6 с. 94-98.

П.Михайлова Е.А. Оценка реактивных и репаративных изменений слизистой оболочки шейки матки при ее эктопии под воздействием Neisseria gonorrhoea / Л.Г.Воронина, Е.А.Михайлова, Ю.Ф.Шерман, Н.Н.Шевлюк // Морфология. Архив анатомии, гистологии и эмбриологии- 2008,- т. 134, № 5

12. Михайлова Е.А. Характеристика биологических свойств Neisseria gonorrhoea и местного иммунитета при урогенитальной гонококковой / Е.А.Михайлова, О.О.Михайлова, И.НЧайникова, А.И.Смолягин // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2009. - №4 -С.103-106.

13. Михайлова Е.А. Оценка иммунного статуса у больных с различными формами гонококковой инфекции / Е.А.Михайлова, И.Н.Чайникова, О.О.Штиль, Л.Г.Воронина, О.А.Темников, А.И.Смолягин // Российский аллергологический журнал. - 2010 -№ 1. - С. 220-221.

14. Михайлова Е.А. Использование способности гонококка инактивировать факторы врожденного иммунитета слизистых оболочек для иммунодиагностики локализованной гонококковой инфекции и гонореи с системными проявлениями / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, О.О.Штиль, И.Н.Чайникова, Л.А.Первушина,

Ю.Ф.Шерман // Аллергология и иммунология. - 2011,— т. 12, №1. — С. 93.

15. Михайлова Е.А. Микроэкологические и иммунологические аспекты формиро-вания нарушений репродуктивной функции / Е.А.Михайлова, Н.П.Сетко, Л.Г.Воронина, О.О.Штиль, Л.Н.Генелес // Известия Самарского научного центра Российской академии наук.-2011. -т. 13, №1(7).-С. 1760-1763.

16. Михайлова Е.А. Цитокины в эякуляте больных с различными формами гонококковой инфекции / Е.А.Михайлова, О.О.Штиль, И.Н.Чайникова, Л.Г.Воронина, О.А.Темников // Вестник Уральской медицинской академической науки. - 2011. - №2/1, (35), С.174-175.

П.Михайлова Е.А. Иммунологические и патогистологические изменения слизистых оболочек при длительно текущих урогенитальных заболеваниях микробной этиологии / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, Н.Н.Шевлкж, Л.А.Первушина, О.О.Жеребятьева, Ю.Ф.Шерман, Г.О.Махалова // Иммунопатология, аллергология, инфектология. -

2011.-№ 2-С. 31-33.

18. Михайлова Е.А. Роль гонококковой инфекции и ее ассоциированных форм с другими инфекциями, передаваемыми преимущественно половым путем, в развитии клинико-морфологических изменений шейки матки / Е.А.Михайлова, Ю.Ф.Шерман, Л.Г.Воронина, Н.Н.Шевлюк, О.О.Штиль // Вестник дерматологии и венерологии. -

2012.-№ 1-С. 34-37.

19. Михайлова Е.А. Факторы риска нарушений фертильности мужчин на урбанизированной территории / Е.А.Михайлова, Н.П.Сетко, О.О.Штиль, И.Н.Чайникова, Л.Г.Воронина, А.И.Смолягин // Гигиена и Санитария. - 2012. - т. 5, № 3. - С. 29-31.

20. Михайлова Е.А. Факторы защиты в локальном иммунном ответе при урогенитальных бактериальных заболеваниях / Е.А.Михайлова, О.О.Жеребятьева, Л.Г.Воронина, Г.О.Махалова, Е.В.Попова, В.Ю.Махалов // Аллергология и иммунология. - 2012. -т. 12, №1,- С.93.

21. Миронов А. Ю., Харсеева Г. Г., Михайлова Е. А., Жеребятьева О. О. Диагностически значимые характеристики урогенитальной микрофлоры при определении длительности течения гонореи // Клиническая лабораторная диагностика. - 2012. - № 9. - С. 84-85.

Монографии и методические публикации

22. Инфектологические аспекты урогенитальных микробных заболеваний/ /Михайлова Е.А., Воронина Л.Г., Сетко Н.П., Миронов А.Ю., Харсеева Г.Г., Жеребятьева О.О. - Оренбург. ГБОУ ВПО ОрГМа МЗ РФ, 2012, 184 с.

23. Диагностика и лечение урогенитальной бактериальной патологии. // Л.Г. Воронина, Е.А. Михайлова, Н.П. Сетко, О.О. Жеребятьева, А.Ю. Миронов, Г.Г. Харсеева/ Методические рекомендации - Оренбург, 2012. - 48 с.

24. Способ прогнозирования хронического течения урогсниталыгой гонококковой инфекции // Е.К. Кузнецова, Л.Г. Воронина, ЕА. Михайлова, В.П. Карянов, О.О. Михайлова, JI.B Нестеренко. / Информационно-методическое письмо. - Оренбург. - 2006 - 20 с.

Патенты

25. Способ диагностики мужского бесплодия // М.Д.Кузьмин, А.П.Луда, О.В.Бухарин, Е.А.Михайлова /Авторское свидетельство СССР на изобретение №1601576. - 1990.

26. Способ искусственной инсеминации//М.Д.Кузьмин, А.ПЛуда, О.В.Бухарин, Михайлова Е.А. /Авторское свидетельство СССР на изобретение № 1671308 - 1992.

27. Способ прогнозирования хронического течения урогенитальной гонококковой инфекции//Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, Е.К.Кузнецова, Н.Б.Перунова О.О.Штиль /Патент РФ на изобретение № 2332671 от 27 мая 2008 г. - МПК G01N 33/53, C12Q 1/06. - Бюл. № 24. - 8 с.

28. Способ дифференциальной диагностики различных форм гонококковой инфекции при ее малосимптомном течении// Е.А.Михайлова, И.Н.Чайникова, Л.Г.Воронина, А.И.Смолягин, О.О.Штиль, Ю.Ф.Шерман, Г.О.Михайлова / Патент РФ на изобретение № 2400754.

Публикации в других изданиях

29. Михайлова Е.А. Иммунологические параметры оценки риска развития длительного

текущих урогенитальных заболеваний микробной этиологии / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, Г.О.Махалова, Л.А.Первушина, О.О.Штиль // Информационный Архив -2011. - Т. 5, № 2-3. - С. 31-33.

30. Михайлова Е.А. Влияние микрофлоры эякулята на плодовитость у мужчин, тезизы доклада / Е.А.Михайлова, М.Д.Кузьмин // Тезисы докладов к IV Всесоюзному съезду урологов/-М.-1990.

31. Михайлова Е.А. Антииммуноглобулиновая активность бактерий и ее диагностическая ценность, статья // Е.А.Михайлова, А.П.Луда, М.И.Бигеев // Персистенция бактерий: Сб.научн.тр. / под ред. О.В.Бухарина / - Куйбышев, 1990.

32. Михайлова Е.А. Видовой состав и биологические свойства анаэробной микрофлоры урогенитального тракта у мужчин с хроническим простатитом / Е.А.Михайлова, О.О.Михайлова, Н.Б.Перунова // Тезисы V Российской конференции «Современные проблемы антимикробной химиотерапии». - 2-3 октября 2003 г. — Москва. — С.30.

33. Михайлова Е.А. Видовой состав и биологические свойства бактериальной флоры репродуктивного тракта мужчин с гонококковой инфекцией / Е.А.Михайлова, О.О.Михайлова, Л.Г.Воронина, А.В.Валышев, Н.Б.Перунова, Е.К.Кузнецова // Сборник трудов V научно-практической конференции «терапия социально-значимых заболеваний в дерматовенерологии». Москва, 2005. - С.247-248.

34. Михайлова Е.А. Состав и биологические свойства факультативно-анаэробной

микрофлоры урогениталыюго тракта мужчин при гонококковой инфекции / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, О.О.Михайлова, Е.К.Кузнецова // Тезисы научных работ IX Всероссийского съезда дерматовенерологов. Том II. Москва, 2005.-С.70.

35. Михайлова Е.А. Характеристика микробиоценоза урогенитального тракта мужчин при гонококковой инфекции / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, О.О.Михайлова, Е.К.Кузнецова // Сборник трудов VI научно-практической конференции врачей Приволжско-Уральского военного округа» Актуальные вопросы военной и практической медицины» Оренбург, 2005, Т 2 - С.682-684.

36. Михайлова Е.А. Характеристика микрофлоры эякулята здоровых мужчин и с хроническими негонококковыми уретритами / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, О.О.Михайлова, Е.К.Кузнецова // Сборник тезисов межрегиональной конференции дерматовенерологов, посвященная 1000-летию г.Казани» Актуальные вопросы дерматовенерологов» Казань, 2005.-С.116-117.

37. Михайлова Е.А. Бактериально-грибковые ассоциации в микробиоценозе урогенитального тракта мужчин с неспецифическими и гонококковыми уретритами / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, А.В.Валышев, Н.Б.Перунова, Е.К.Кузнецова // V научно-практическая конференция. Терапия социально значимых заболеваний в дерматовенерологии. Новые лекарственные препараты и средства в дерматовенерологии и косметологии. - М. - 2005. - С. 70-71.

38. Михайлова Е.А. Видовой состав и биологические свойства грибковой флоры при гонококковой инфекции / Е.А.Михайлова, Н.Б.Перунова, О.О.Михайлова // IV Всероссийский конгресс по медицинской микологии. - Москва. - Т. VIII. - 2006. - С. 35-36.

39. Михайлова Е.А. К вопросу о микробиоценозе урогенитального тракта мужчин с неспецифическими и гонококковыми уретритами / Е.А.Михайлова, О.О.Михайлова, Н.М.Карпова, Е.К.Кузнецова, Л.В.Нестеренко // Журнал «Вестник последипломного медицинского образования». - Москва. - № 1,2006. - С. 25-26.

40. Михайлова Е.А. Межмикробные взаимодействия Neisseria gonorheae и сопутствующей анаэробной микрофлоры / Е.А.Михайлова, Н.Б.Перунова, О.О.Михайлова, Л.Г.Воронина, Е.ККузнецова // Сборник трудов VII научно-практической конференции врачей Приволжско-Уральского военного округа «Актуальные вопросы военной и практической медицины». Оренбург. - 2006. - т.2. - С.672-673.

41. Михайлова Е.А. Характеристика антикарнозиновой активности Neisseria gonorheae, выделенных от больных со свежей и хронической гонококковой инфекцией / Е.А.Михайлова, О.О.Михайлова, Л.Г.Воронина, Е.К.Кузнецова, Э.А.Чуенко // Тезисы начных работ X Всероссийской конференции дерматовенерологов «Организация оказания дерматовенерологической помощи в современных условиях» 23-24 ноября 2006 г. с. 12.

42. Михайлова Е.А. Биологические свойства гонококка / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина,

В.П.Карянов, О.О.Михайлова, Е.К.Кузнецова, Т.В.Нестерова // VII Всероссийская научно-практическая конференция «Социально значимые заболевания в дерматовенерологии. Диагностика, терапия, профилактика». Сборник тезисов. — 6-7 сентября 2007. - Москва - С. 67-68.

43. Михайлова Е.А. Особенности микрофлоры эякулята мужчин при различных формах гонококковой инфекции / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, О.О.Михайлова, В.П.Карянов, Е.ККузнецова IIII Всероссийский конгресс дерматовенерологов. Тезисы научных работ. -25-28 сентября 2007. - СПб. - С. 139.

44. Михайлова Е.А. Способ прогнозирования хронического течения урогенитального гонококковой инфекции / Е.А.Михайлова, Е.К.Кузнецова, Л.Г.Воронина, О.О.Михайлова, В.П.Карянов, Л.В.Нестеренко // Информационно-методическое письмо. - 0ренбург.-2006 - 18 с.

45. Михайлова Е.А. Изучение гистологических препаратов слизистой оболочки и пенетрантности факторов защиты гонококков от эффекторов местного иммунитета при локализованной гонококковой инфекции / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, О.О.Михайлова, Н.Н.Шевлюк, Л.А.Первушина, Ю.Ф.Шерман, И.Д.Панченко, И.А.Ичкинеев // Материлы научно-практической конференции акушеро-гинекологов и анестезиологов-реаниматологов. Актуальные вопросы вопрос анестезиолого-реанимационного обеспечения беременных, рожениц и новорожденных. 27-28 марта 2008 года Оренбург // Теоретический и научно-практический журнал «Информационный архив (МЕДИЦИНА, БИОЛОГИЯ, ОБРАЗОВАНИЕ)» - Оренбург. - Т. 2, № 1. - 2008. - С. 23-24.

Список сокращений

АКА — антикомплементарная активность

АКрА - антикарнозиновая активность

АЛА — антилизоцимная активность

АЛфА — антилактоферриновая активность

ИЛ - интерлейкины

ИППП — инфекции, передаваемые половым путем

КА - кровяной агар

КОЕ - колониеобразующие единицы

КОС — коагулазоотрицательные стафилококки

КПС — коагулазоположительные стафилококки

ЛПС — липополисахарид

ЛФ -лактоферрин

МКБ-10 — международная классификация болезней, 10-го пересмотра

нет — тест восстановления нитросинего тетразолия

нет СП — спонтанный НСТ - тест

ПМО — показатель микробной обсеменённости

УПМ - условно-патогенные микроорганизмы;

ФИ — фагоцитарный индекс

ФП — фагоцитарный показатель

ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы

А1ёА — антииммуноглобулиновая активность

ч - иммуноглобулины

— секреторный иммуноглобулин А

А(1§А)А, А(б1£А)А - антииммуноглобулиновая активность в отношении иммуноглобулинов классов А и секреторного ^А

МИХАЙЛОВА Елена Алексеевна

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА МИКРОСИМБИОНТОВ ПРИ ДЛИТЕЛЬНО ТЕКУЩИХ УРОГЕИИТАЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ МИКРОБНОЙ ЭТИОЛОГИИ У МУЖЧИН

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Заказ № 7434. Тираж 100 экз. Усл. печ. л. 2,44 Подписано в печать 11.12.2012 г.

ЛР№ 063109 от 04.02.1999 г. Отпечатано в ООО «Агентство «Пресса» ИНН/КПП 5610056518/561001001 460015, г. Оренбург, ул. Комсомольская, 45, тел. 30-61-83, e-mail: presal999@mail.ru