Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Частота обнаружения Мycoplasma hominis и Ureaplasma urealytiсum и их чувствительность к антибиотикам у больных с урогенитальной патологией

ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Частота обнаружения Мycoplasma hominis и Ureaplasma urealytiсum и их чувствительность к антибиотикам у больных с урогенитальной патологией"

На правах рукописи

СТУКОЛКИНА Наталья Евгеньевна

ЧАСТОТА ОБНАРУЖЕНИЯ MYCOPLASMA HOMINIS II UREAPLASMA UREALYTICUM И ИХ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К АНТИБИОТИКАМ У БОЛЬНЫХ С УРОГЕНИТАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИЕЙ

03.02.03 - «Микробиология»

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 6 ИЮН 2011

Уфа-2011

4849962

Работа выполнена на кафедре микробиологии, иммунологии и инфекционных болезней Института медицинского образования в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Новгородский государственный университет имени Ярослава Мудрого".

Научный руководитель - доктор медицинских наук, профессор

Чеботкевич Виталий Николаевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Чемерис Алексей Викторович доктор медицинских наук, профессор Сбойчаков Виктор Борисович Ведущая организация - Государственное образовательное учреждение

высшего профессионального образования "Московский государственный медико-стоматологический университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"

Защита диссертации состоится «06 2011г. в « часов на заседании Объединенного диссертационного Совета ДМ 208.006.05 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3 ^

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Автореферат разослан « *» 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Лукманова К.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Инфекции, передаваемые половым путем (ИППП), являются одной из важнейших проблем современной медицины. В начале XX] века в мире значительно возросла частота этих инфекций. В Российской Федерации эпидемическая обстановка по ИППП также остается напряженной. Во многом это обусловлено ранним началом половой жизни, наличием нескольких половых партнеров, пренебрежением к использованию барьерных методов контрацепции, бесконтрольным применением антибиотиков, самолечением и рядом других факторов [Гранская Ю.В. и др., 2005; Шипицина Е.В. и др., 2010; Рищук С.В., 2011].

Среди возбудителей урогенитальных инфекций особое место занимают микоплазмы в связи с особенностями их биологии как мембранных паразитов [Борхсениус С.Н. и др., 2002]. Для них характерна длительная персистенция и влияние на ряд систем организма, в частности - иммунную. Урогенитальные микоплазмозы с трудом поддаются антибиотикотерапии ввиду частого развития резистентности к антибиотикам. Особую эпидемическую опасность представляют лица с выявленными Mycoplasma hominis (M.hominis) и Ureaplasma urealyticum (U.urealyticum), ассоциированными с другими инфекционными агентами урогенитального тракта. Со смешанными урогенитапьными инфекциями чаще всего связывают развитие у женщин цервицита, вагиноза, вторичного бесплодия и привычного невынашивания [Билалов Ф.С. и др., 2011; Андросова Л.Д., 2011]. В виду того, что урогенитальные микоплазмы и другие возбудители ИППП могут вызывать воспалительную реакцию в зоне маточно-плацентарного барьера, они могут являться причиной осложнений беременности - эктопической беременности, спонтанных абортов и преждевременных родов, могут приводить к антенатальному и перинатальному инфицированию, задержке развития плода и гибели новорожденных [Nigro G. et al., 2011; TaylorRobinson D., Lamont R. F., 2011].

У мужчин урогенитальные микоплазмозы и, в частности уреагшазмозы, играют значительную роль при негонококковых уретритах и простатитах [Егоров А.А., 2008]. Имеются данные о значении урогенитальных микоплазм в развитии мужского бесплодия. Установлено снижение подвижности сперматозоидов и ухудшение качественных характеристик спермы у мужчин с уреаплаз-менной и микоплазменной инфекцией мочеполового тракта [Wang Y et al., 2006; Liu DF et al., 2007; Gdoura R. et al., 2008]. Дополнительные трудности в понимании этиологической роли M.hominis и U.urealyticum связаны с их частым обнаружением у здоровых лиц и отсутствием единого мнения о критериях постановки диагноза урогенитального микоплазмоза. Спорным является вопрос о значении некоторых современных лабораторных тестов, в частности полиме-разной цепной реакции (ПЦР), в диагностике ИППГТ и их роли в установлении критериев излеченности [Савичева A.M. и др., 2002; Раковская И.В. и др., 2008]. Актуальность проблемы связана также с возможными серьезными социально-демографическими последствиями широкого распространения урогенитальных микоплазмозов, хламидиоза и других ИППП в отдельных группах населения. Этот рост поддерживается высоким уровнем рискованного сексуального поведения, в частности среди студенческой молодежи [Архипова Е.И. и др., 2007]. Однако в литературе практически отсутствуют данные, охватывающие последние годы, по частоте обнаружения микоплазм у разных групп населения, единичными являются работы по длительному наблюдению в динамике изменений чувствительности урогенитальных микоплазм к антибиотикам. В связи с изложенным необходимы научно-прикладные клинико-микробиологические исследования разных групп населения с целью получения достоверной информации о частоте обнаружения микоплазм, разработка методов количественной оценки содержания микоплазм в биоматериале, их чувствительности к наиболее широко используемым антибиотикам, которые должны явиться основой широких эпидемических исследований, установления адекватного диагноза и, при необходимости, соответствующей терапии.

Цель исследования

Определить частоту обнаружения и. игеа1уисит и М.Ьогшгш у больных с урогенитальной патологией, оценить чувствительность выделенных штаммов к антибиотикам, усовершенствовать методики их определения для выбора оптимальных методов диагностики и лечения урогенитальных микоплазмозов.

Задачи исследования

1. Изучить частоту выявления и.игеа1у1юит и М.Ьопишз и их ассоциаций с другими инфекционными агентами у лиц, обследуемых на инфекции, передаваемые половым путем.

2. Охарактеризовать особенности клинических проявлений микоплаз-менной инфекции у женщин и мужчин.

3. Определить динамику изменений чувствительности штаммов М.Ьотшз и и.игеа1у1юит, выделенных у больных, к основным антибиотикам, применяемым при лечении урогенитальных микоплазмозов.

4. Разработать полуколичественный метод определения и.игеа1уйсит и М.ИотЫз в исследуемом биоматериале на жидких питательных средах с визуальной оценкой изменения цвета индикатора - фенолового красного.

5. Усовершенствовать методику культивирования штаммов и.игеа^сит, полученных у больных, в жидкой питательной среде с использованием буферных растворов.

Научная новизна исследования

Впервые проведено изучение частоты обнаружения и.игеа1уисит и М.Иоггмгш на большом контингенте обследованных лиц за последние 7 лет. Установлена частота их выявления у студенческой молодежи, некоторые факторы риска, способствующие распространению среди студентов инфекций, передаваемых половым путём.

Новыми являются данные по динамике изменений чувствительности МИопигш и и.игеа1уисит, выделенных у лиц, обследованных на ИППП, к основным антибиотикам, применяемым для их лечения.

Усовершенствована методика полуколичественного определения

Л Е

М.Ьогттш и и.игеа1у1'|сиш в исследуемом биоматериале, полученном у больных, а также методика культивирования штаммов и.игеа1уйсит в жидкой питательной среде с использованием буферного раствора НЕРЕБ, что позволяет повысить жизнеспособность микроорганизмов и увеличить их титры в инкубационной среде.

Практическая значимость работы

Разработана модификация микробиологического метода выявления и полуколичественного определения М.Иогтигш и 1_1.игеа1у1кит, необходимая для скрининга и диагностики урогенитапьного микоплазмоза в условиях практического здравоохранения. Модифицирован бактериологический метод определения и.игеа^Исит в биоматериале больных с добавлением в культуральную среду буфера НЕРЕ8. Проведена оценка чувствительности выделенных штаммов М.Ьогшгш и и.игеа1уШсит к наиболее широко используемым лекарственным препаратам. Показана их высокая чувствительность к доксициклину и джозамицину и резистентность к ломефлоксацину, офлоксацину и азитромици-ну. Разработаны практические рекомендации по выбору антибиотиков для лечения микоплазмозов, исходя из данных о чувствительности к ним и.игеа1уисшп и М.Ьотиш.

Основные положения, выносимые на защиту

1 Среди лиц, впервые обратившихся в лечебно-профилактические учреждения для обследования на заболевания, передаваемые половым путём, отмечается высокая частота обнаружения в биоматериале урогенитального тракта МЛютЫв и и.игеа1уисит в высоких титрах. У обследованных на заболевания, передаваемые половым путём, урогенитальные микоплазмозы и уреаплазмозы чаще протекают в ассоциации с другими возбудителями инфекций, передаваемых половым путем.

2 При наличии высоких титров и.игеа1уИсиш в биоматериале из урогенитального тракта у женщин выявляется высокая частота уретритов, кольпитов, у

мужчин - уретритов и простатитов. Высокие титры М-Иопишв в биоматериале у мужчин ассоциируются с уретритами, у женщин - с бактериальными вагиноза-ми.

3 Штаммы 11.игеа1уисит и М.Ьопигш, выделенные у лиц с жалобами, характерными для заболеваний урогенитальной сферы, наиболее чувствительны к доксициклину и джозамицину, наименее - к азитромицину, офлоксацину и ло-мефлоксацину.

4 Методика определения и.игса1уИсит и М.ИотМз в жидкой питательной среде с визуальной регистрацией изменения цвета индикатора фенолового красного в динамике позволяет проводить полуколичественную оценку их содержания в биоматериале.

5 Методика культивирования штаммов и.игеа1у1лсит, полученных от больных, в жидкой питательной среде с использованием буферного раствора НЕРЕБ позволяет повысить жизнеспособность микроорганизмов и увеличить их титры.

Внедрение результатов исследования в практику

Материалы исследования внедрены в практическую деятельность лабораторий Новгородского областного кожно-венерологического диспансера, Городской женской консультации № 1, Лечебно-диагностического центра (Городская женская консультация №3) г. Великий Новгород. Основные положения диссертационной работы используются в учебном процессе кафедры микробиологии, иммунологии и инфекционных болезней Института медицинского образования ГОУ ВПО «Новгородский государственный университет имени Ярослава Мудрого».

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на 5-ой Всероссийской конференции «Генодиагностика инфекционных болезней» (Москва, 2004), конференции, посвященной 10-летию Новгородского государственного университета имени

Ярослава Мудрого (Великий Новгород, 2004), XIII и XIV Международной конференции «СПИД, рак и родственные проблемы» (Санкт-Петербург, 2005, 2006), XVI научно-практической конференции сотрудников и студентов ИМО (Великий Новгород, 2010), конференции молодых учёных Санкт-Петербургской медицинской академии последипломного образования (Санкт-Петербург, 2011).

Диссертация доложена и обсуждена на совместном заседании научно-плановой экспертной комиссии ИМО НовГУ и кафедры микробиологии, иммунологии и инфекционных болезней института медицинского образования ГОУ ВПО «Новгородский государственный университет имени Ярослава Мудрого» (протокол от 22 ноября 2010 года № 5).

Диссертация апробирована на заседании Объединённого диссертационного Совета ДМ 208.006.05 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (протокол от 14 апреля 2011 года №5).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ, в том числе 3 в журналах, включенных в перечень рецензируемых журналов и изданий, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки Российской Федерации для публикации основных результатов диссертаций.

Объём и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 112 страницах текста, содержит 19 таблиц, 7 рисунков. Она состоит из введения, обзора литературы (1 плава), собственных исследований (4 главы), заключения, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы, включающего 53 отечественных и 95 зарубежных источников.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

В соответствии с поставленными задачами нами были обследованы на инфекции, передаваемые половым путём, пациенты обоего пола - 54 мужчины и 73 женщины в возрасте от 17 до 58 лет, обратившиеся по поводу заболеваний урогенитального тракта в лечебно-профилактические учреждения г. Великий Новгород. Для сравнения была изучена частота обнаружения и.игеа1уксит и М.Ьогтшв среди студенческой молодежи. Было обследовано 18 студентов и 57 студенток в возрасте от 18 до 22 лет, обучавшихся в институте медицинского образования Новгородского государственного университета имени Ярослава Мудрого г. Великий Новгород в 2007-2008 гг. Общее число обследованных лиц составило 202 человека (табл.1).

Таблица 1 - Характеристика обследованных контиигентов лиц

Пол обследованных Группы обследованных Кол-во обследованных

Мужчины Обследованные на ИППП 54

Студенты 18

Женщины Обследованные на ИППП 73

Студентки 57

Итого 202

Критериями исключения из числа обследованных лиц были: возраст менее 16 и старше 60 лет, наличие социально значимых сопутствующих заболеваний: туберкулеза, сифилиса; тяжелых заболеваний сердечно-сосудистой и гепатоби-лиарной системы, почек, а также заболеваний крови. На проведение обследования было получено информированное согласие участников.

Для ретроспективной оценки частоты обнаружения U.urealyitcum и M.hominis были проанализированы результаты обследования 4100 больных за период с 2002 по 2008 год. Чувствительность выделенных у больных штаммов U.urealyitcum и M.hominis к антибиотикам была изучена за период с 2005 по 2008 год. Всего исследовано 373 штамма M.hominis и 617 - уреаплазм. В качестве исследуемого биоматериала при проведении лабораторных исследований

у женщин использовали содержимое уретры, цервикапьного канала и заднего свода влагалища, у мужчин - содержимое уретры. Забор биоматериала производили с помощью одноразовых зондов.

Частоту обнаружения M.hominis и U.urealyticum среди обследованных лиц изучали микробиологическим методом [Чеботкевич В.Н., 1981]. Материал засевали в две пробирки с жидкой питательной средой, приготовленной с добавлением L-аргинина или мочевины, а также индикатора фенолового красного (0,002%-ного водного раствора). Рост культуры регистрировали по изменению цвета индикатора. При изменении цвета индикатора производили пересев на плотные питательные среды аналогичного состава с добавлением 1,3 % агара Difco (США) без фенолового красного. M.hominis образовывали типичные колонии диаметром 0,1-0,3 мм с врастающим в глубь агара темным центром и более светлой периферией. Для U.urealyticum были характерны мелкие колонии без периферической зоны. Дифференцировку уреаплазм проводили методом ПЦР с помощью тест-систем ООО «ИнтерЛабсервис» (Москва). Выявление Chlamydia trachomatis (С.trachomatis), Neisseria gonorrhoeae (N.gonorrhoeae), Gardnerella vaginalis (G.vaginalis), Trichomonas vaginalis (T.vaginalis), Herpes simplex virus (HSV) и цитомегаловирусов (CMV) проводили полимеразной цепной реакцией (ПЦР) с набором диагностикумов производства ООО «ИнтерЛабсервис (Москва). Чувствительность U. urealyticum и М. hominis к антибиотикам оценивали с помощью жидких питательных сред в планшетах для иммунологических исследований производства «Медполимер» (Санкт-Петербург), в лунки которых вносили концентрации антибиотиков, соответствующие терапевтическим дозам препаратов. Результат выражали в цветонзменяющих единицах на 1мл (ЦИЕ/мл).

Статистическую обработку результатов исследования проводили параметрическими и непарамегфическими методами с применением современных программных пакетов математико-статистического анализа. Отличия считали статистически значимыми при р<0,05 [Реброва О.Ю., 2002]. Для описания нор-

мально распределенных количественных переменных использовали показатели: среднее значение признака (М), стандартную ошибку среднего (ш). При сравнении количественных признаков применялся критерий Стьюдента (I). При сравнении качественных признаков использовался критерий х' Пирсона. Для сравнения процентных долей применяли угловое преобразование Фишера (ф-преобразование), г-критерий. Был рассчитан относительный риск (ОР) и его 95% доверительный интервал.

Результаты собственных исследований и их обсуждение На первом этапе нами была изучена частота обнаружения и.игеа1уйсит и М.Ьопнгт, а также их ассоциации с другими микроорганизмами у лиц разного пола, обратившихся по поводу обследования на инфекции, передаваемые половым путем. Исследования проведены микробиологическими методами с применением собственной модификации метода культивирования на жидких питательных средах, позволяющей определять количественные показатели содержания микроорганизмов (табл. 2).

Таблица 2 - Частота выявления и.игеа1уисшп и М.Ьотнш у лиц, обследованных на инфекции, передаваемые половым путем

Группы обследованных лиц U. urealyticum М. hominis

всего в т.ч. в ассоциации всего в т.ч. в ассоциации

Мужчины, п=54 14(25,9%) 9 (64,3 %) 9 (16,7 %) 5 (56,0 %)

Женщины, п=73 39 (53,4 %) 32 (82;0 %) 15(20,5%) 15(100%)

р - уровень значимости 0,0044 0,0032 0,7469 0,0227*

X2 8,555 36,667 0,1048 -

ОР 2,061 4,924 1,233 -

95 % ДИ 1,23-3,61 2,77-8,55 0,55-2,89 -

Примечания. *- достоверность различий оценена по угловому преобразованию Фишера (ф-преобразоваиие).

Обнаружение (J. urealyticum и М. hominis в исследуемом материале в титре 104 ЦИЕ/мл и более свидетельствовало об их выраженных патогенных свойствах, а 103 ЦИЕ/мл и меньше - о колонизации микоплазмами тканей. Выявление других возбудителей (Т. vaginalis, С. trachomatis, G. vaginalis, CMV, HSV, N. gonorrhoeae) осуществляли полимеразной цепной реакцией.

Установлено, что частота выявления уреаплазм не одинакова у мужчин и женщин. Встречаемость U.urealyticum была достоверно выше у женщин, чем у мужчин: 53,4% ( 39 случаев из 73) против 25,9 % (14 случаев из 54) соответственно, [х2= 8,555; р=0,0044; ОР = 2,061; 95 % ДИ (1,23-3,61)]. Частота обнаружения U.urealyticum в ассоциации также достоверно выше была у женщин, она составила 82 % (32 из 39) против 64,3 % (9 из 14) у мужчин, [х2 = 36,667; р=0,0032; ОР = 4,924; 95 % ДИ (2,77 - 8,55)].

Не выявлено достоверных различий по полу в частоте встречаемости M.hominis: 20,5 % (15 из 73) у женщин против 16,7 % (9 из 54) у мужчин, [х2 = 0,1048, р=0,7469; ОР = 1,233; 95 % ДИ (0,55 - 2,89)]. Однако частота обнаружения M.hominis в ассоциации с другими микроорганизмами существенно различалась и достоверно выше была у женщин, она составила 100 % (15 из 15) против 56,0 % (5 из 9) у мужчин, [р=0,0227].

U. urealyticum были выявлены у 53, 4 % (39 из 73) обследованных женщин. При этом только в 18,0% случаях (7из 39) U. urealyticum выделялись изолированно, в 82,0% случаях (32 из 39) - встречались в ассоциации с другими микроорганизмами.

M.hominis являлась ассоциантом в 12 (37, 5 %) случаях от общего числа смешанных инфекций, при этом только в 1-м случае она была единственным ассоциантом. Ассоциации из 2-х микроорганизмов наблюдались в 17 (53,1 %) случаях. При этом в подавляющем большинстве (15 случаев, 46,8 %) обнаруживались G.vaginalis. Ассоциации из 3-х инфекционных агентов наблюдались в 11 (34,4 %) случаях. В качестве ассоциантов также чаще обнаруживались G.vaginalis (9 случаев, 28,1 %), в 6-ти (18,7 %) - М. hominis, в 3-х (9,4 %) -CMV и 1 (3,1 %) - Т.vaginalis. Смешанные инфекции из 4-х возбудителей наблюдалась в 3-х (9,4 %) случаях. При этом во всех эпизодах в качестве ассоциантов выявлялись M.hominis, в 2-х - G.vaginalis или HSV, в 1-м случае -

12

C.trachomatis или T.vaginalis. В 1-м (3,1 %) случае была выявлена ассоциация из 6-ти возбудителей, включавшая M.hominis, C.trachomatis, T.vaginalis, G.vaginalis и HSV.

Следовательно, при выявлении U.urealyticum среди женщин, обследуемых на инфекции, передаваемые половым путём, преобладают лица, преимущественно имеющие ассоциированные инфекции (82,0 %), при этом M.hominis выявляется в 37,5 % случаев от общего числа смешанных инфекций.

M.hominis были выявлены у 20,5 % (15 из 73) обследованных женщин. При этом в 100 % (15 из 15) случаев наблюдались их ассоциации с другими микроорганизмами. В большинстве эпизодов (11 случаев, 73,3 %) в качестве ассоци-антов выступали U.urealyticum. Ассоциации из двух микроорганизмов при наличии M.hominis наблюдались только в 4-х (26,5 %) эпизодах. В качестве ассо-циантов при этом были выявлены U.urealyticum, T.vaginalis и в 2-х случаях -G.vaginalis. В 7 (46,6 %) случаях наблюдались ассоциации из 3-х инфекционных агентов. Чаще всего обнаруживали U.urealyticum (6 случаев, 85,7 %) и G.vaginalis (5 случаев, 71,4 %), по одному случаю выявлены ассоциации с C.trachomatis, N.gonorhoeae или T.vaginalis.

Клинические особенности при обнаружении U.urealyticum в высоких титрах характеризовались наиболее частым поражением уретры. Уретрит у женщин наблюдался в 14 (35,8 %) случаях. В большинстве случаев (10 из 14-ти, 71,4 %) симптомы уретрита отмечались при смешанной уреаплазменной инфекции в сочетании с M.hominis или T.vaginalis.

Кольпит был выявлен у 10 (25,6 %) женщин, больных уреаплазмозом. Во всех случаях он наблюдался при смешанной инфекции, чаще сочетанной с M.hominis, C.trachomatis или T.vaginalis. Цервицит был выявлен в 2 (5,1 %) случаях, причем в обоих из них отмечалась смешанная хламидийно-уреаплазменная инфекция. Сальпингоофорит был выявлен у 6 (15,4 %) больных, во всех случаях отмечалась смешанная инфекция, ассоциированная с M.hominis, G. vaginalis и T.vaginalis.

При наличии у женщин M.hominis в высоких титрах уретрит наблюдался в 3 (20,0 %) случаях из 15-ти. Наиболее часто при этом выявлялся бактериальный вагиноз (В случаев, 53,0 %), ассоциированный с G.vaginalis. При уреаплаз-менной инфекции этот синдром был выявлен только у 16 (36,0 %) пациенток. Во всех случаях уреаплазмоз протекал в ассоциации с G.vaginalis, у 12 (80,0 %) больных в качестве ассоциантов выявлялись также M.hominis.

Следовательно, к клиническим особенностям уреаплазмозов у женщин относится высокая частота поражения уретры (35,8 %), кольпитов (25,6 %), реже встречаются цервициты (5,1 %) и сальпингоофориты (15,4 %). В большинстве случаев при этом отмечаются ассоциации U.urealyticum с M.hominis. При обнаружении M.hominis в высоких титрах у женщин чаще встречаются бактериальные вагинозы (53,0 %) и уретриты (20,0 %). Чаще при этом наблюдаются ассоциации M.hominis и G.vaginalis.

U.urealyticum у мужчин выявлялись в 25,9 % (у 14 пациентов из 54 обследованных) случаев. Из них у 5-ти (35,7 %) они встречались в виде моноинфекции, у 9-ти (64,3 %) - в ассоциации с другими возбудителями.

Таким образом, частота обнаружения U.urealyticum у мужчин ниже, чем у женщин (25,9 % и 53,4 %, соответственно, [р=0,0044]). Однако при этом одинаково часто отмечаются их ассоциации с другими инфекционными агентами.

Структура смешанных инфекций у мужчин, так же как у женщин, при выявлении U.urealyticum характеризовалась частой ассоциацией с M.hominis (5 случаев, 55,5 %). В 4-х (44,4 %) случаях наблюдалась смешанная инфекция с C.trachomatis и в 3-х (33,3 %) с G.vaginalis.

Ассоциации из 2-х микроорганизмов у мужчин наблюдались в 6-ти случаях. В качестве ассоциантов в 2-х случаях выступали M.hominis, в 2-х -C.trachomatis, в 1-м случае - Herpes simplex virus. Смешанные инфекции из 3-х инфекционных агентов были выявлены в 3-х случаях. В качестве ассоциантов выступали C.trachomatis и G.vaginalis (по 2 случая) и T.vaginalis и N.gonorhoeae (по 1-му случаю).

Далее нами было установлено, что М.1югшгш выявлялись у 16,7 % (9 из 54) обследованных мужчин, из которых у 55,5 % (5 из 9) наблюдалась ассоциированная инфекция. В качестве ассоциантов при этом чаще выступали СЛгасЬота^ или и.игеа1уНсит (по 3 случая).

Анализ клинических проявлений при урогенитальных микоплазмозах у мужчин выявил различные воспалительные поражения мочеполовых органов -уретриты, простатиты, эпидидимиты, в ряде случаев сопровождавшихся синдромом артралпш.

Наиболее частым синдромом поражения при выявлении и.игеа1уи'сит в высоких титрах был уретрит, который наблюдался у 11 (40,7 %) из 27 больных с диагностированной уреаплазменной инфекцией. Клинические симптомы при этом были слабо выражены и характеризовались неприятными ощущениями при мочеиспускании, учащенными позывами к мочеиспусканию и чувством покалывания или, реже, жжения в уретре. Выделения из уретры у большинства больных отсутствовали. В 2-х случаях у больных с выявленной ассоциированной уреаплазменно-хламидийной инфекцией наблюдался артралгический синдром. Клинически он проявлялся периодическими болями в крупных суставах. Признаков развития артрита - нарушений функций суставов, увеличения их объема или местной гиперемии в наблюдаемых нами случаях не выявлено.

При наличии МИогшшб в высоких титрах симптомы уретрита наблюдались у 3-х (33,3 %) больных. Причем во всех случаях они проявлялись при смешанных инфекциях, обусловленных ассоциацией с СДгасЬотайв и/или и.игеа1}11'сшп.

В следующей серии исследований мы изучили частоту обнаружения 1).игеа1уйсит и М.Ьоггнгш у студентов. Выбор этой группы был обусловлен тем, что по данным ряда исследователей [Дятлов Р.В. и др., 2004; Соколов Н.В. и др., 2007; Шипицина Е.В., 2010], риск заражения ИППП особенно велик среди молодежи. В данном исследовании приняло участие 75 студентов в возрасте от 18 до 22 лет, выразивших согласие на проведение обследования. Процедура

включала обследование мазков из уретры и шейки матки у женщин, из уретры у мужчин. Исследования микоплазменной флоры у студентов проводились в сравнительном плане.

Для сравнения были использованы данные группы пациентов, обследованных нами на инфекции, передаваемые половым путём (табл. 3).

Таблица 3 - Частота выявления и.игеа^сит и М.Иогшгш у студентов и пациентов, обследованных на ннфекцни, передаваемые половым путём

Группы обследованных Число лиц с выявленными урогенитальными микоплазмами

и. игса1>1юит М. ИопишБ

Мужчины Обследованные на ИППП, п=54 14(26%) 9(16,7%)

Студенты, п=18 4 (22,2 %) 2(11,1 %)

р-уровень значимости 0,7353 0,5444

Женщины Обследованные на ИППП, п=73 39 (53,4 %) 15(20,5%)

Студентки, п=57 18 (31,6%) 9(15,8%)

р - уровень значимости 0,0181 0,4705

Нами было установлено, что частота выявления как и.игеа1уЦ'сит, так и

М.Иогтгш у студентов была несколько ниже по сравнению с лицами, обследованными на ИППП, но не имела достоверных различий за исключением частоты встречаемости и.игеа1уйсит у женщин, обследуемых на инфекции, передаваемые половым путем и у студенток (р = 0,0181).

Следовательно, риск развития манифестных форм урогенитальных инфекций у студенческой молодежи представляется достаточно высоким.

Одним из этапов нашей работы явилось изучение частоты обнаружения и.игеа1уйсит и М.Ьоггпгш у лиц, обратившихся с жалобами и обследованных на инфекции, передаваемые половым путем за последние годы. Был проведён анализ частоты выявления основных возбудителей урогенитальных инфекций у пациентов, обследованных на ИППП, в период 2002-2008 гг. в ряде лечебно-профилактических учреждений г. Великий Новгород. В связи с тем, что по нашим данным наиболее часто выявляемыми как у женщин, так и у мужчин являются и.игеа1уйсшп, М.Ьоттв и СЛгасИотайз в исследование были внесены только эти микроорганизмы.

Анализируя полученные данные, необходимо отметить высокую выявляе-мость у обследованных лиц и.игеа1уисит (от 26,0 до 37,0 %) и М.Ьогшшз (от 11,0 до 22,0 %) за последние годы.

В настоящее время данные различных исследователей о патогенности и.игеа1уИсит и и.ратдт достаточно противоречивы, поэтому представилось необходимым изучить частоту их выявления у обследованных нами континген-тов лиц.

Всего было изучено 86 штаммов уреаплазм, выделенных у больных, обследованных на инфекции, передаваемые половым путем (табл.4).

Таблица - 4 Частота выявления и.игеа1уИсит и и.рагуцт у больных

Число и.игеа1у11сиш и.рагуиш

выделенных штаммов

Мужчины 17(56,7%) 13 (43,3 %)

п=30

Женщины 12(21,4%) 44 (78,6 %)

п=56

Установлено, что частота выявления и. игеа1уйсшп и и. рап/агп имеет определенные половые различия: у мужчин чаще выявлялись и. игеа1уисит (56,7 %), а у женщин - и. рагуит (78,6 %), \%2 = 9,334; р=0,002].

Смешанная уреаплазменная инфекция (и.игеа1у11'сиш и и.рагуит) наблюдалась одинаково часто как у мужчин, так и у женщин (10,0 и 11,0 % случаев, соответствено).

Далее нами были проведены исследования чувствительности штаммов и.игеа1уИсит и М.Ьопшш , выделенных от больных к антибиотикам. Полученные результаты исследования представлены на рисунке 1.

W - U.urealyticum, Ш- M.hominis, - 95 % ДИ Рисунок I - Чувствительность M. hominis и U.urealyticum к антибиотикам: А- доке и цикл и ну; Б- джозамицину; В- клнндамицину; I'- офлоксацину; Д-азитромицину; Е — ломефлоксаципу.

Примечание: по осп абсцисс чувствительность М. hominis и U. urealylicum к антибиотикам по годам наблюдения, по оси ординат проценты (%), ЛИ границы 45 % доверительного интервала.

Наиболее высокая чувствительность исследованных штаммов как М.hominis так и U.urealyticum во все годы наблюдения была установлена к доксициклину и джозамицину. Несколько ниже была их чувствительность к клиндамицииу. Причем в 2007 и 2008 гг. наблюдалась тенденция к повышению числа устойчивых к антибиотикам штаммов. Эффективность фторхинолонов (офлоксацин, ломефлоксацин) оказалась достаточно низкой, что согласуется с данными C.B. Ященко с соавт. (2000) и М.В. Шапрана (2005), установивших повышение числа устойчивых штаммов урогенитальных уреаплазм к офлокса-цину и другим фторхинолонам в последние годы. Большое количество устойчивых штаммов наблюдалось, по нашим данным к азитромицину. Препаратом, показавшим почти 100 %-ную эффективность в отношении U.urealyticum и M.hominis, является доксициклин. Это доказывает обоснованность его применения при лечении урогенитальных микоплазмозов.

В процессе проведения исследований нами была разработана собственная модификация микробиологического метода выявления U. urealyticum и M.hominis с добавлением L-аргинина (до 1,0 % для M.hominis) или мочевины (до 0,5 % для U.urealyticum), а также индикатора фенолового красного (0,002 %-ного водного раствора), позволяющая определить титр микоплазм в исследуемом материале в динамике времени.

В результате изучения особенностей роста U.urealyticum и M.hominis нами было установлено, что при посеве исследуемого биоматериала на жидкие питательные среды динамика изменения цвета индикатора зависела от титра этих микоплазм в исходном материале. Так, при титре U.urealyticum < 103 ЦИЕ/мл через 24 часа наблюдалось незначительное частичное изменение цвета индикатора в среде с мочевиной с желтого на красный, а через 48 часов отмечалось покраснение среды во всей пробирке. При титре > 104 ЦИЕ/мл изменение цвета среды наблюдалось уже через 8-24 часа.

При наличии в исследуемом материале M.hominis в титре < 103 ЦИЕ/мл покраснение среды, как правило, наблюдалось только на 3-5-е сутки. Измене-

ние цвета индикатора уже через 24-48 часов указывало на титр М.hominis > 104 ЦИЕ/мл. Этот способ оценки результатов был использован нами в работе для установления полуколичественного содержания микроорганизмов в исследуемом материале.

Далее для повышения качества выявления U.urealyticum, выделенных у больных, нами была разработана собственная модификация микробиологического метода культивирования U.urealyticum в жидкой питательной среде с использованием буфера HEPES, способствующая повышению жизнеспособности микроорганизмов в культуральной среде. Были проведены исследования влияния добавления буфера HEPES в культуральную среду на время обнаружения U.urealyticum в клиническом материале и возможности применения таких сред при изучении антибиотикорезистентности микроорганизмов. Было установлено, что введение буфера HEPES (0,05М) в жидкую питательную среду задерживало изменение цвета индикатора фенолового красного (изменение окраски при pH 7,0) в накопительной культуре по сравнению с контролем. Данная методика позволила увеличить продолжительность выживания штаммов U.urealyticum в культуре в среднем на 4 часа и повысить их титры в 10 раз. Полученные результаты позволили проведение теста определения чувствительности к антибиотикам с жизнеспособной культурой и обеспечили возможность изучения антибиотикорезистентности свежевыделенных штаммов U.urealyticum у больных.

Таким образом, проведенные нами исследования показали, что у больных с урогенитальной патологией наблюдается высокая частота обнаружения в биоматериале урогеиитального тракта M.hominis и U.urealyticum. Среди обследованных на ИППП преобладают лица, имеющие ассоциированные инфекции, составляющие 64,3 % у мужчин и 82,0 % у женщин при U.urealyticum инфекции и 56,Ои 100 % соответственно при M.hominis инфекции. Клинические особенности уреаплазменной инфекции характеризуются у женщин высокой частотой уретритов, кольпитов, у мужчин - уретритов. При M.hominis ин-

фекции у мужчин чаще выявляются уретриты, у женщин - бактериальные ваги-нозы. Наибольшая чувствительность штаммов микоплазм, выделенных у больных, отмечается к доксициклину и джозамицину, наименьшая - к офлоксацину, ломефлоксацину и азитромицину. Для этиологической диагностики урогени-тальных микоплазмозов нами разработан микробиологический метод, позволяющий полуколичественно оценить содержание возбудителей в биоматериале, полученном у больных. Наряду с этим нами была усовершенствована методика культивирования штаммов и.игеа1у1юит, полученных от больных, в жидкой питательной среде с использованием буферного раствора НЕРЕБ, что позволило повысить жизнеспособность микроорганизмов и увеличить титры микробных тел. Усовершенствованная методика культивирования необходима для изучения чувствительности и резистентности выделенных штаммов и.игеа1у1юит к антибактериальным препаратам.

ВЫВОДЫ

1 Среди лиц, обследованных на инфекции, передаваемые половым путем, выявлена высокая частота обнаружения микоплазм в биоматериале урогени-тального тракта: и.игеа1у1юит - 25,9 % у мужчин и 53,4 % у женщин (р=0,0044); М.Ьопншб - 16,7 % и 20,5% (р=0,7469) соответственно. В группе больных с урогениталыюй патологией преобладают лица, имеющие ассоциированные и.игеа1уисшп инфекции (64,3 % у мужчин, 82,0 % у женщин; [р=0,0032]) и смешанные М.Ьогшшб инфекции (56,0 % у мужчин, 100 % у женщин; [р=0,0227]).

2 Клинические особенности уреаплазменной инфекции у мужчин характеризуются высокой частотой уретритов (40,7 %), у женщин - уретритов (35,8 %) и кольпитов (25,6 %). При М.Ьотиш инфекции у мужчин чаще выявляются уретриты (33,3%), у женщин - бактериальные вагинозы (53,0%).

3 Штаммы и.игеа1уисит и М.Ьоггпгш, выделенные у больных, наиболее чувствительны к доксициклину (89,8-100 %) и джозамицину (76,9-87,8 %), наи-

менее - к офлоксацину (22,7-61,5 %), ломефлоксацину (28,0-64,0 %) и азитро-мицину (50,0-71,1 %).

4 Разработанный метод определения титров и. игеа1уИсиш и М.Ьотпш в жидкой питательной среде с визуальной регистрацией изменения цвета индикатора фенолового красного в динамике времени позволяет проводить полуколичественную оценку содержания микоплазм в биоматериале, полученном от больных, что необходимо для проведения скрининговых исследований у населения, адекватной диагностики и терапии урогенитальных инфекций.

5 Усовершенствованная методика культивирования штаммов и.игеа1уйсит в жидкой питательной среде с использованием буферного раствора НЕРЕБ, позволяет повысить жизнеспособность микроорганизмов, полученных от больных и увеличить титры микробных тел, что необходимо при изучении их антибио-тикочувствительности и резистентности.

Практические рекомендации

1 При проведении скрининговых исследований частоты обнаружения ми-коплазменной инфекции у населения рекомендуется использовать способ микробиологической диагностики, позволяющий полуколичественно оценить концентрацию возбудителя в исследуемом материале по изменению цвета индикатора фенолового красного (0,002 %-ный водный раствор) в динамике.

2 В исследованиях, требующих накопления больших масс и.игеа1у1юит, целесообразно использовать метод микробиологической диагностики с добавлением в культурапьную среду 0,05М буфера НЕРЕБ (N-2-Ьу^охуе1Ьу1р1'регагте-1^'-2-еЙ1апе5и1Гопа1е).

3 Для проведения целенаправленного этиотропного лечения больных рекомендуется проводить мониторинг чувствительности к антибиотикам клинических штаммов МЛкнтшв и и.игеа^юшп. Выделенные у больных штаммы М.Иогшшз и и.игеа1уИсиш наиболее чувствительны к доксициклину, джозами-цину, наименее - к офлоксацину, ломефлоксацину и азитромицину.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

I. Егоров A.A., Стуколкина Н.Е., Федюра И.Ф., Волков A.B., Чеботкевич В.Н. Клинико-этиологические особенности моно- и смешанных микоплазмен-ных инфекций урогенитального тракта // Актуальные вопросы инфекционной патологии. Материалы научно - практической конференции, посвященной 10-летию кафедры МИиИБ. 23-24 сентября 2004 г. Великий Новгород, 2004,- С. 173 - 179.

2 Стуколкина Н.Е. Современные аспекты биологии микоплазм. // Вест-ннк НовГУ. - 2005. - № 32. - С. 58 - 63.

3. Архипова Е.И., Стрибук В.В., Степанова И.В., Ковалевская H.H., Стуколкина Н.Е. Микоплазменные инфекции и их распространенность // Актуальные проблемы современной медицины. / Материалы XII научной конференции ИМО НовГУ. Вып.7. Великий Новгород. - 2005 . - С. 198 - 201.

4. Васильева Т.М., Стуколкина Н.Е., Архипова Е.И., Чеботкевич В.Н. Заболевания мочеполовой системы, вызванные микоплазмами. // Актуальные проблемы современной медицины. / Материалы XII научной конференции ИМО НовГУ. Вып.7. Великий Новгород. - 2005. - С. 209 - 210.

5. Стуколкина Н.Е., Архипова Е.И. Некоторые биологические свойства патогенных видов микоплазм // Актуальные проблемы современной медицины. Материалы XII научной конференции ИМО НовГУ. Вып.7. Великий Новгород. -2005,- С. 225 -226.

6. Архипова Е.И., Стрибук В.В., Степанова И.В., Ковалевская H.H., Исаков В.А., Стуколкина Н.Е. Урогенитальные инфекции. Учебно-метод. пособие.

B.Новгород: НовГУ им. Ярослава Мудрого, 2005. - 60 с.

7. Архипова Е.И., Стрибук В.В., Стуколкина Н.Е. Бактериальный вагиноз. Клиника. Диагностика. Лечение. Учебное пособие. В.Новгород: НовГУ им. Ярослава Мудрого, 2005. - 52 с.

8. Архипова Е.И., Стрибук В.В., Могилевец Т.Л., Ковалевская H.H., Степанова И.В., Исаков В.А., Москвин И.И., Стуколкина Н.Е. Урогенитальные инфекции. Клиника. Диагностика. Лечение. Учебно-метод. пособие. В.Новгород: НовГУ им. Ярослава Мудрого, 2006. - 55 с.

9. Архипова Е.И., Стрибук В.В., Стуколкина Н.Е. Современные представления о распространении и диагностике бактериальных вагинозов // Клиническая медицина. Том 11. Межвузовский сборник стран СНГ / Под ред. проф. Андреева Г.Н., Вебера В,Р., Брыжахина Г.Г., Корабельникова А.И., Ибадильди-на A.C. Великий Новгород-Алматы. - 2006. - С. 49-51.

10. Егоров A.A., Стуколкина Н.Е., Чеботкевич В.Н. Клинико-этиологические особенности микоплазменных инфекций урогенитального тракта // Вестник Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова. - 2008. - № 4. - С. 162 -165.

II. Стуколкина Н.Е.Уровень распространённости урогенитальных мико-плазмозов среди студенческой молодёжи. // Вестник НовГУ. - 2010. - № 59. -

C. 102-103.

о

л.

)

СТУКОЛКИНА Наталья Евгеньевна

ЧАСТОТА ОБНАРУЖЕНИЯ MYCOPLASMA HOMINIS И UREAPLASMA UREALYTICUM И ИХ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К АНТИБИОТИКАМ У БОЛЬНЫХ С УРОГЕНИТАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИЕЙ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Лицензия на издательскую деятельность ЛР№ 021319 от 05.01.99 г.

Подписано в печать 30.05.2011 г. Формат 60x84/16. Усл. печ. л. 1,38. Уч.-изд. л. 1,18. Тираж 100 экз. Заказ 343.

Редащионно-издательский центр Башкирского государственного университета 450074, РБ, г. Уфа, ул. Заки Валиди, 32.

Отпечатано на множительном участке Башкирского государственного университета 450074, РБ, г. Уфа, ул. Заки Валиди, 32.

Текст научной работыДиссертация по биологии, кандидата биологических наук, Стуколкина, Наталья Евгеньевна, Уфа

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Новгородский государственный университет имени Ярослава Мудрого»

„ ,_0 На правах рукописи

04201162 436 р ^

СТУКОЛКИНА НАТАЛЬЯ ЕВГЕНЬЕВНА

ЧАСТОТА ОБНАРУЖЕНИЯ MYCOPLASMA HOMINIS И UREAPLASMA UREALYTICUM И ИХ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К АНТИБИОТИКАМ У БОЛЬНЫХ С УРОГЕНИТАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИЕЙ

03.02.03 - микробиология

Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Научный руководитель -доктор медицинских наук профессор Чеботкевич В.Н.

Великий Новгород - 2011

Оглавление

Стр

Список сокращений............................................................... 4

Введение............................................................................ 5

Обзор литературы..................................................................... 11

Глава I Характеристика и методы определения урогенитальных мико-плазм. Распространенность U. urealyticum и М. hominis среди больных с урогенитальной патологией и их чувствительность к антибиотикам.............................................................. 11

1.1 Общая характеристика урогенитальных микоплазм............. 11

1.2 Методы определения урогенитальных микоплазм............... 15

1.3 Распространенность генитальных микоплазм у больных с урогенитальной патологией................................................ 18

1.4 Чувствительность и резистентность урогенитальных микоплазм к антибиотикам................................................... 28

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 2 Материалы и методы исследования.................................. 34

2.1 Характеристика обследованных контингентов больных....... 34

2.2 Микробиологические и молекулярно-биологические методы исследования............................................................... 36

2.3 Иммунологические методы исследования............................ 42

2.4 Статистические методы исследования................................. 45

Глава 3 Частота встречаемости Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma

hominis и состояние урогенитального тракта у больных с урогенитальной патологией.................................................. 46

3.1 Этиологическая структура обследуемых групп больных с урогенитальной патологией................................................. 46

3.2 Особенности состояния урогенитального тракта у женщин с выявленными Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis 49

3.3 Особенности состояния урогенитального тракта у обследованных мужчин с выявленными штаммами Ureaplasma urealyticum

и Mycoplasma hominis................................................... 53

3.4 Исследование частоты обнаружения Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum у лиц, обследованных на инфекции, передаваемые половым путем за последние годы (2002 - 2008

гг).............................................................................. 56

3.5 Исследование частоты встречаемости Ureaplasma urealyticum

и Mycoplasma hominis среди студенческой молодежи........... 63

Глава 4 Разработка полуколичественного метода определения

Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis. Усовершенствование микробиологического метода культивирования уреап -лазм в жидкой питательной среде................................................................67

4.1 Методика полуколичественной оценки содержания Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis в биоматериале урогенитального тракта................................................................ 67

4.2 Методика культивирования Ureaplasma urealyticum в жидкой питательной среде с использованием буфера HEPES............ 71

Глава 5 Оценка чувствительности к антибиотикам штаммов Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis у больных с

урогенитальной патологией.......................................... 78

Заключение............................................................................ 82

Выводы................................................................................. 93

Практические рекомендации...................................................... 94

Список литературы.................................................................. 95

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

Ш11111 - инфекции, передаваемые половым путём

ИФ - иммунофлюоресценция

ИЭМ - институт экспериментальной медицины

РНК - рибонуклеиновая кислота

ПЦР - полимеразная цепная реакция

ЦИЕ - цветоизменяющие единицы

CMV - cytomegalovirus

С. trachomatis - Chlamydia trachomatis

G. vaginalis - Gardnerella vaginalis

HSV - Herpes simplex virus

M. genitalium - Mycoplasma genitalium

M. hominis - Mycoplasma hominis

M. pneumoniae - Mycoplasma pneumoniae

N. gonorrhoeae - Neisseria gonorrhoeae

spp. - виды (species)

T. vaginalis - Trichomonas vaginalis

U. parvum - Ureaplasma parvum

U. urealyticum - Ureaplasma urealyticum

Введение

Актуальность проблемы

Инфекции, передаваемые половым путем (ИППП), являются одной из важнейших проблем современной медицины и биологии. В начале XXI века в мире значительно возросла частота этих инфекций. В Российской Федерации эпидемическая обстановка по ИППП также остается напряженной. Во многом это обусловлено ранним началом половой жизни, наличием нескольких половых партнеров, пренебрежением к использованию барьерных методов контрацепции, бесконтрольным применением антибиотиков, самолечением и рядом других факторов [Гранская Ю.В. и др., 2005; Шипицина Е.В. и др., 2010; Рищук С.В., 2011].

Среди возбудителей урогенитальных инфекций особое место занимают микоплазмы в связи с особенностями их биологии как мембранных паразитов [Борхсениус С.Н. и др., 2002]. Для них характерна длительная персистенция и влияние на ряд систем организма, в частности иммунную. Урогенитальные ми-коплазмозы с трудом поддаются антибиотикотерапии ввиду частого развития резистентности к антибиотикам. Особую эпидемическую опасность представляют лица с выявленными Mycoplasma hominis (М. hominis) и Ureaplasma urealyticum (U.urealyticum), ассоциированными с другими инфекционными агентами урогенитального тракта. Со смешанными урогенитальными инфекциями чаще всего связывают развитие у женщин цервицита, вагиноза, вторичного бесплодия и привычного невынашивания [Билалов Ф.С. и др., 2011; Андросова Л.Д., 2011]. В виду того, что урогенитальные микоплазмы и другие возбудители ИППП могут вызывать воспалительную реакцию в зоне маточно-плацентарного барьера, они могут являться причиной осложнений беременности: эктопической беременности, спонтанных абортов и преждевременных родов, могут приводить к антенатальному и перинатальному инфицированию, задержке развития плода и гибели новорожденных [Nigro G. et al., 2011; TaylorRobinson D., Lamont R. F., 2011].

У мужчин урогенитальные микоплазмозы и, в частности уреаплазмозы, играют значительную роль при негонококковых уретритах и простатитах [Егоров A.A., 2008]. Имеются данные о значении урогенитальных микоплазм в развитии мужского бесплодия. Установлено снижение подвижности сперматозоидов и ухудшение качественных характеристик спермы у мужчин с уреаплаз-менной и микоплазменной инфекцией мочеполового тракта [Wang Y. et al., 2006; Liu D.F. et al., 2007; Gdoura R. et al., 2008]. Дополнительные трудности в понимании этиологической роли М. hominis и U. urealyticum связаны с их частым обнаружением у здоровых лиц и отсутствием единого мнения о критериях постановки диагноза урогенитального микоплазмоза. Спорным является вопрос о значении некоторых современных лабораторных тестов, в частности полимеразной цепной реакции (ПЦР), в диагностике ИППП и их роли в установлении критериев излеченности [Савичева A.M. и др., 2002; Раковская И.В. и др., 2008]. Актуальность проблемы связана таюке с возможными серьезными социально-демографическими последствиями широкого распространения урогенитальных микоплазмозов, хламидиоза и других ИППП в отдельных группах населения. Этот рост поддерживается высоким уровнем рискованного сексуального поведения, в частности среди студенческой молодежи [Архипова Е.И. и др., 2007]. Однако в литературе практически отсутствуют данные, охватывающие последние годы, по частоте обнаружения микоплазм у разных групп населения, единичными являются работы по длительному наблюдению в динамике чувствительности урогенитальных микоплазм к антибиотикам. В связи с изложенным необходимы научно-прикладные клинико-микробиологические исследования разных групп населения с целью получения достоверной информации о частоте обнаружения микоплазм, разработка методов количественной оценки содержания микоплазм в биоматериале, их чувст-вительности к наиболее широко используемым антибиотикам, которые должны явиться основой широких эпидемических исследований, установления адекватного диагноза и, при необходимости, соответствующей терапии.

Цель исследования

Определить частоту обнаружения Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis у больных с урогенитальной патологией, оценить чувствительность выделенных штаммов к антибиотикам, усовершенствовать методики их определения для выбора оптимальных методов диагностики и лечения урогениталь-ных микоплазмозов.

Задачи исследования

1 Изучить частоту выявления Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis и их ассоциаций с другими инфекционными агентами у лиц, обследуемых на инфекции, передаваемые половым путем.

2 Охарактеризовать особенности клинических проявлений микоплазмен-ной инфекции у мужчин и женщин.

3 Определить динамику изменений чувствительности штаммов Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis, выделенных у больных, к основным антибиотикам, применяемым при лечении урогенитальных микоплазмозов.

4 Разработать полуколичественный метод определения Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis в исследуемом биоматериале на жидких питательных средах с визуальной оценкой изменения цвета индикатора - фенолового красного.

5 Усовершенствовать методику культивирования штаммов Ureaplasma urealyticum, полученных у больных, в жидкой питательной среде с использованием буферных растворов.

Научная новизна исследования

Впервые в условиях длительного наблюдения проведено изучение частоты обнаружения Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis на большом контингенте обследованных лиц. Установлена частота их выявления у студенческой молодежи, некоторые факторы риска, способствующие распространению среди студентов инфекций, передаваемых половым путём (ШИШ).

Новыми являются данные по динамике чувствительности Ureaplasma

urealyticum и Mycoplasma hominis, выделенных у лиц, обследованных на инфекции, передаваемые половым путем, к основным антибиотикам, применяемым для их лечения.

Усовершенствована методика полуколичественного определения Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis в исследуемом биоматериале, полученном у больных, а также методика культивирования штаммов Ureaplasma urealyticum в жидкой питательной среде с использованием буферного раствора HEPES, что позволяет повысить жизнеспособность микроорганизмов и увеличить их титры в инкубационной среде.

Практическая значимость работы

Разработана модификация микробиологического метода выявления и полуколичественного определения Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis, необходимая для скрининга и диагностики урогенитального микоплазмоза в условиях практического здравоохранения. Модифицирован бактериологический метод определения Ureaplasma urealyticum в биоматериале больных с добавлением в питательную среду буфера HEPES. Проведена оценка чувствительности выделенных штаммов Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis к наиболее широко используемым лекарственным препаратам. Показана их высокая чувствительность к доксициклину и джозамицину и резистентность к ломефлоксацину, офлоксацину и азитромицину. Разработаны практические рекомендации по выбору антибиотиков для лечения микоплазмозов, исходя из данных о чувствительности к ним U. urealyticum и М. hominis.

Основные положения, выносимые на защиту

1 Среди лиц, впервые обратившихся в лечебно-профилактические учреждения для обследования на заболевания, передаваемые половым путём, отмечается высокая частота обнаружения в биоматериале урогенитального тракта Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis в высоких титрах. У обследованных на заболевания, передаваемые половым путём, урогенитальные микоплаз-мозы чаще протекают в ассоциации с другими возбудителями инфекций, пере-

даваемых половым путем.

2 При наличии высоких титров Ureaplasma urealyticum в биоматериале урогенитального тракта у женщин выявляется высокая частота уретритов, кольпитов, у мужчин — уретритов и простатитов. Высокие титры Mycoplasma hominis в биоматериале у мужчин ассоциируются с уретритами, у женщин - с бактериальными вагинозами.

3 Штаммы Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis, выделенные у лиц с жалобами, характерными для заболеваний урогенитальной сферы, наиболее чувствительны к доксициклину и джозамицину, наименее - к азитромици-ну, офлоксацину и ломефлоксацину.

4 Методика определения Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis в жидкой питательной среде с визуальной регистрацией изменения цвета индикатора фенолового красного в динамике позволяет проводить полуколичественную оценку их содержания в биоматериале.

5 Методика культивирования штаммов U. urealyticum, полученных у больных, в жидкой питательной среде с использованием буферного раствора HEPES позволяет повысить жизнеспособность микоплазм и увеличить их титры.

Внедрение результатов исследования в практику

Результаты исследования внедрены в практическую деятельность лабораторий Новгородского областного кожно - венерологического диспансера, Центральной городской клинической больницы: женской консультации № 1 Клинического родильного дома и женской консультации № 3 Лечебно-диагностического центра г. Великий Новгород. Основные положения диссертационной работы используются в учебном процессе кафедры микробиологии, иммунологии и инфекционных болезней Института медицинского образования ГОУ ВПО «Новгородский государственный университет имени Ярослава Мудрого».

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на пятой Всероссийской конферен-

ции «Генодиагностика инфекционных болезней» (Москва, 2004); конференции посвященной 10-летию Новгородского государственного университета имени Ярослава Мудрого (Великий Новгород, 2004); XIII и XIV Международной конференции «СПИД, рак и родственные проблемы» (Санкт-Петербург, 2005, 2006); XVI научно-практической конференции сотрудников и студентов ИМО (Великий Новгород, 2010); конференции молодых учёных Санкт-Петербургской медицинской академии последипломного образования (Санкт-Петербург, 2011).

Диссертация доложена и обсуждена на совместном заседании научно-плановой экспертной комиссии ИМО НовГУ и кафедры микробиологии, иммунологии и инфекционных болезней Института медицинского образования ГОУ ВПО «Новгородский государственный университет имени Ярослава Мудрого» (протокол от 22 ноября 2010 года № 5).

Диссертация апробирована на заседании Объединённого диссертационного Совета ДМ 208.006.05 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (протокол от 14 апреля 2011 года № 5).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 11 научных работ, в том числе 3 в журналах, включенных в перечень рецензируемых журналов и изданий, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки Российской Федерации для публикации основных результатов диссертаций.

Объём и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 112 страницах, содержит 19 таблиц, 7 рисунков. Она состоит из введения, обзора литературы (1 глава), собственных исследований (4 главы), заключения, выводов и практических рекомендаций. Список использованной литературы включает 53 отечественных и 95 зарубежных источников.

Обзор литературы Глава I Характеристика и методы определения урогенитальных ми-коплазм. Распространенность U. urealyticum и М. hominis среди больных с урогенитальной патологией и их чувствительность к антибиотикам 1.1 Общая характеристика урогенитальных микоплазм История изучения заболеваний, вызываемых микоплазмами, начинается с 1898 г., когда Е. Nocard и Е. Roux открыли микроорганизмы, впоследствии названные микоплазмами. Начало изучению роли микоплазм в патологии мочеполовой сферы человека было положено L. Dienes, J. Edsall (1937), которые впервые выделили микоплазмы из абсцесса бартолиниевой железы. Микоплаз-мы относятся к мельчайшим свободно живущим прокариотам, ограниченным одной трехслойной мембраной, лишенным клеточной стенки, способным паразитировать на мембране клетки - хозяина [Fraser Е. et al., 1995; Борхсениус С.Н. и др., 2002]. По современной классификации микоплазмы относятся к классу Mollicutes, порядку Mycoplasmatales, включающему в себя два рода: Mycoplasma и Ureaplasma.

В 90-е годы прошлого века в результате успехов в изучении генома микоплазм было предложено пересмотреть их классификацию. Однако эти предложения были отвергнуты подкомитетом по таксономии класса Mollicutes. Основанием для такого решения послужил тот факт, что перемещение известных и активно изучаемых микоплазм в другие таксоны, могут породить хаос и проблемы при идентификации микоплазм у медиков и ветеринаров [International..., 1997]. В эти годы были получены принципиально новые данные об ультраструктуре микоплазм, их клеточной мембране, метаболизме и строении их генома. Эти данные позволили осмыслить многие факты, полученные ранее о взаимодействии микоплазм с клетками иммунной системы, способности микоплазм к длительной персистенции. Поэтому представляется необходимым специально рассмотреть новые данные о биологических свойствах микоплазм, важных для понимания патогенетических механизмов генитальных микоплаз

мозов.

Средний размер