Антигенемия при урогенитальных микоплазменных инфекциях

Балабанов, Денис Николаевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Антигенемия при урогенитальных микоплазменных инфекциях
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Антигенемия при урогенитальных микоплазменных инфекциях"

<55

на правах рукописи

БАЛАБАНОВ ДЕНИС НИКОЛАЕВИЧ

АНТИГЕНЕМИЯ ПРИ УРОГЕНИТАЛЬНЫХ МИКОПЛАЗМЕННЫХ ИНФЕКЦИЯХ

03.00.07 - микробиология 14.00.11 - кожные и венерические болезни

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва-2009

1 0 .'«Юм

003473303

Работа выполнена в Государственном учреждении научно-исследовательском институте эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи РАМН.

Научный руководитель:

доктор биологических наук Раковская Ирина Валентиновна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Анкирская Алла Семеновна

доктор медицинских наук Рищук Сергей Владимирович

Ведущая организация: ГОУ ВПО Российский государственный медицинский университет Росздрава

Защита диссертации состоится "22" мая 2009 г. в 11-00 часов на заседании Диссертационного совета Д 001. 007. 01 в ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН по адресу: 123098, Москва, ул. Гамалеи, 18.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН

Автореферат разослан "21" апреля 2009 г.

Ученый секретарь Диссертационного сове доктор медицинских наук, профессор Русакова Екатерина Владимировна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Изучение биологии и роли микоплазм человека в инфекционной патологии продолжается уже несколько десятков лет (Прозоровский С. В., 1995; Раковская И.В., 2005; Baseman J., Tully J., 1997). Тем не менее, в настоящее время нет, по-видимому, другой такой группы микроорганизмов, споры о патогенности которых были бы столь продолжительны, а мнения столь противоречивы. Это связано с рядом причин, главной из которых является широкое распространение микоплазменных инфекций среди людей при отсутствии свойственных только этим инфекциям клинических проявлений (Razin Sh. et al., 1998; Taylor -Robinson D., 2007). Ранее в работах ряда авторов была показана способность микоплазм вызывать хромосомные аберрации (Fogh J., Fogh H., 1965). В последние годы у микоплазм обнаружены новые уникальные свойства. Установлено, что они обладают проапоптотической и антиапоптотической активностями, а при хронических формах инфекции в условиях in vitro могут быть причиной нестабильности генома и трансформации инфицированных клеток. Индукторами этих процессов, как показали исследования, являются антигены микоплазм липопротеиновой природы (Логунов Д. Ю. и др., 2008; Lo Sh.-Ch., 2002).

Из ветеринарной практики известно, что микоплазменные инфекции животных часто носят генерализованный характер и сопровождаются длительной персистенцией возбудителей даже после клинического выздоровления (Коромыслов Г.Ф. и др., 1987). Данные о генерализации микоплазменных инфекций человека известны лишь в отношение респираторного микоплазмоза (возбудитель М. pneumoniae).

В Лаборатории микоплазм и L- форм бактерий ГУ НИИЭМ имени Н.Ф. Гамалеи были созданы модели микоплазменных инфекций человека: ревматоидного артрита на мышах, кроликах и крысах (М. fermentans, M. arthritidis, U. urealyticum), респираторного микоплазмоза на морских свинках и хомяках (М. pneumoniae) и урогенитальной микоплазменной инфекции на морских свинках, кроликах и обезьянах (Каган Г.Я., 1983; Пронин A.B. и др., 1985; Марантиди А.Н. и др., 1990; Вульфович Ю.В., 1991; Прозоровский C.B. и др., 1995). Антигены микоплазм длительно выявляли в крови и

органах животных, однако оставалось неизвестным, принадлежат ли эти антигены живым персистирующим клеткам микоплазм или в инфицированном организме сохраняются антигены погибших клеток. Если последнее предположение справедливо, то необходимо знать, как долго и в каких очагах антигены сохраняются в организме и принимают ли они участие в патогенезе микоплазменных инфекций.

Новые данные об антиапоптотической, трансформирующей, иммуномодулирующей и других активностях некоторых антигенов микоплазм диктуют необходимость переоценки данных о роли микоплазм в инфекционной патологии человека и детального изучения феномена антигенемии.

Цель работы: выяснить возможность существования антигенемии при урогенитальных микоплазменных инфекциях человека, определить длительность, очаги и формы сохранения антигенов «урогенитальных микоплазм» в модельных опытах на животных.

Основные задачи исследования:

1. Сравнить частоту выявления антигенов, живых клеток, специфических антител и ДНК «урогенитальных микоплазм».

2. Изучить возможность выявления ДНК «урогенитальных микоплазм» в крови пациентов с помощью полимеразной цепной реакции.

3. Определить длительность сохранения жизнеспособных клеток «урогенитальных микоплазм», их ДНК и антигенов в сыворотке крови человека в условиях in vitro.

4. Определить длительность, формы и очаги сохранения жизнеспособных клеток «урогенитальных микоплазм», их ДНК и антигенов в организме экспериментально инфицированных ими кроликов и мышей.

5. Выявить растворимые антигены «урогенитальных микоплазм» в сыворотке крови пациентов с помощью иммуноблотинга.

6. Обосновать тактику ведения пациентов с длительно сохраняющейся микоплазменной антигенемией.

Научная новизна.

- Впервые показано, что растворимые антигены «урогенитальных микоплазм» выявляются с помощью реакции

агрегатгемагглютинации в крови пациентов и зараженных лабораторных животных значительно чаще, чем живые клетки микоплазм, антитела к ним и их ДНК. Экспериментальная микоплазменная инфекция лабораторных животных является генерализованной с длительной персистенцией возбудителя во внутренних органах и бактериемией.

- Установлено, что при введении животным антигенов, выделенных из клеток микоплазм, развивается антигенемия, сохраняющаяся на протяжении всего срока наблюдения (до трех месяцев).

- Показано, что антигены микоплазм сохраняются в организме в различных формах: в виде корпускулярных антигенов живых и погибших клеток, растворимых макромолекулярных соединений, циркулирующих в крови в свободном или связанном в иммунные комплексы состоянии.

- С помощью иммуноблотинга в пробах сыворотки крови пациентов выявлен спектр антигенов, принадлежащих М. hominis и уреаплазме.

Научно - практическая значимость работы.

Показано, что длительная бактериемия и антигенемия «урогенитальных микоплазм» являются не известными ранее особенностями патогенеза урогенитальных микоплазменных инфекций.

Получены данные в пользу представления о причастности уреаплазм и М. genitalium к развитию уретрита. Роль М. hominis сомнительна.

Показано, что исследование крови в ПЦР в диагностических целях менее информативно, чем исследование соскобов из урогенитального тракта.

Показано, что ПЦР нельзя использовать в качестве единственного критерия излеченности после антибиотикотерапии, поскольку ДНК погибших клеток и фрагменты самой ДНК могут длительно сохраняться в условиях in vivo.

Учитывая возможность антигенемии у пациентов, рекомендуем в комплекс диагностических методов включить реакцию агрегатгемагглютинации или иммуноферментный анализ, выявляющие растворимые антигены в крови.

На основе проведенных исследований созданы Методические рекомендации «Диагностика микоплазменных инфекций при

негонококковых уретритах у мужчин». Методические рекомендации одобрены и утверждены Советом по внедрению научных достижений в практику ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи: протокол №9 от 17 апреля 2009 года.

Данные работы могут быть использованы в клинических лабораториях и медицинских центрах, занимающихся диагностикой микоплазменных инфекций, а также включены в учебный процесс в курсы лекций по микробиологии и инфектологии.

Положения выносимые на защиту:

1. Доказано существование антигенемии при урогенитальных микоплазменных инфекциях.

2. У больных с острым и хроническим уретритом антигены микоплазм в крови выявляются значительно чаще, чем живые клетки и их ДНК в урогенитальном тракте.

3. Антигены микоплазм способны длительно сохраняться в крови и органах экспериментально инфицированных животных, зараженных как живой культурой микоплазм, так и препаратами антигенов.

4. В крови пациентов присутствуют растворимые антигены микоплазм, что установлено с помощью иммуноблотинга.

5. Формы сохранения антигенов различны: они могут принадлежать живым и погибшим клеткам, представлять собой растворимые молекулярные соединения, циркулирующие в крови в свободном состоянии или в составе иммунных комплексов.

Апробация работы. Материалы исследований были доложены: на IX съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2007), Научно-практической конференции, посвященной 25-летию ЦМСЧ №165 ФМБА России (Москва, 2008), X Всероссийском съезде дерматовенерологов (Москва, 2008).

Апробация диссертации состоялась на научной конференции Отдела медицинской микробиологии ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН 8 апреля 2009 г.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения результатов,

выводов и списка использованной литературы (45 отечественных и 165 иностранных работ). Диссертация иллюстрирована 29 таблицами, 8 рисунками.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы

Микоплазмы. М. hominis Н-34 (Mh), U. urealyticum VIII (Uu), М. genitalium (Mg) из коллекции лаборатории микоплазм ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи.

Животные. В работе использовали кроликов породы Шиншилла весом 2,5 кг и мышей BALB/c и белых беспородных весом 18-20 г обоих полов.

Пациенты. Мужчины, обследованные в ГУ Центральной медико-санитарной части №165 Федерального Медико Биологического Агенства России. От пациентов получали следующий биоматериал: соскобы из уретры, отделяемое из уретры и кровь.

Культуральный метод. Для выделения и культивирования микоплазм использовали бульонные и агаризованные коммерческие среды, в том числе среду SP-4, рекомендованную для выделения трудно культивируемых микоплазм.

Получение антигенов микоплазм. Культуры микоплазм центрифугировали при 10000 об/мин в течение 45 минут, трижды отмывали фосфатно-солевым буфером, pH 7,4, суспендировали в буфере, озвучивали при 20 кГц в течение 20 минут и прогревали 1 час при 56° С. Отсутствие живых клеток в препарате контролировали путем высева в культуральные среды с последующим проведением двух "слепых пассажей". Чистоту полученных антигенов (АГ) проверяли: 1) в перекрестных реакциях с антисыворотками к другим видам микоплазм и 2) с антисывороткой к белкам сыворотки лошади в реакции агрегатгемагглютинации. Титр перекрестных реакций не превышал 1:2-1:4. Эти показатели считали неспецифическими.

Реакция агрегатгемагглютинации (РАГА). Реакцию использовали для выявления растворимых АГ в сыворотке крови человека и животных и в гомогенатах органов животных. Постановку реакции проводили по методу Гориной Л.Г. с соавт. (1981). Диагностический титр АГ в РАГА составляет 1:8.

Реакция прямой иммунофлюоресценции (РИФ). Для выявления Mh и уреаплазм в соскобах из уретры пациентов и в мазках-

отпечатках органов животных использовали тест- системы "МикогомоФлюоскрин" и "УреагениФлюоскрин НИАРМЕДИК +".

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). В этой реакции выявляли антитела (AT) в сыворотки крови пациентов и животных. Реакцию проводили по обычной методике. Диагностический титр в РПГА составляет 1:32.

Иммуноферментный анализ (ИФА). Для выявления IgG и IgM к Mh в сыворотке крови пациентов использовали тест систему «МикогомоСкрин», приготовленную в Лаборатории микоплазм и L-форм бактерий ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи. Минимальный диагностический титр - 1:200 (IgG), 1:800 (IgM).

Определение циркулирующих в крови иммунных комплексов (ЦИК). Проводили по методике Digeon М. с соавт. (1977). Специфические иммунные комплексы определяли по методике, предложенной Л.Г. Гориной с соавт. (2006) с использованием реакции иммунофлюоресценции.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР). В работе использовали тест-системы, разработанные ООО "Интерлабсервис": "АмплиСенс Mycoplasma hominis", "АмплиСенс Ureaplasma species (Uspp)", "АмплиСенс Ureaplasma urealyticum", "АмплиСенс Mycoplasma genitalium" ФГУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора. Длина специфических полос амплифицированных фрагментов ДНК составляла: Mh - 450 п.н., Uspp - 330 п.н., Uu -670 п.н., Mg - 280 п.н.

Выделение РНК микоплазм. РНК микоплазм выделяли методом аффинной сорбции на силикогеле. Методика выделения и тест-системы разработаны ООО "Интерлабсервис" ФГУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.

Для получения комплементарной ДНК на матрице РНК (кДНК) использовали методику и тест систему "Реверта - L", разработанные ООО "Интерлабсервис". Для получения кДНК проводили реакцию обратной транскрипции (ОТ) с использованием фермента ревертазы MMLV (обратной транскриптазы) и раствор ДТТ (дитиотрейтола). Полученную кДНК выявляли в ПЦР.

Вестерн-блотинг. Использовали для выявления АГ микоплазм в сыворотке крови пациентов в соответствии с форматом Western blotting (Bio-Rad) в модификации Towbin Н et. al. (1979).

Статистическая обработка результатов. Полученные результаты были статистически обработаны с помощью

компьютерных программ Microsoft Excel» и «Biostat». Для выявления достоверности различий качественных признаков применяли критерий %2-квадрат. В группах, где ожидаемое число было меньше 5, применялась поправка Йейтса. Различия считали достоверными при Р <0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 1. Выявление "урогенитальных микоплазм" у пациентов.

Проведено комплексное клинико-лабораторное обследование 158 мужчин в возрасте от 18 до 52 лет, инфицированных «урогенитальными микоплазмами» и не имеющих других инфекций передающихся половым путем. Из них 22 пациентам поставлен диагноз острого уретрита, 50 - хронического и 86 были клинически здоровы. Диагноз острого или хронического уретрита устанавливали на основании жалоб и анамнеза заболевания, а также данных объективного и лабораторных исследований. Результаты обследования представлены на рис.1.

' iS —...........................Egg :*.".*. Щ I

■ Uspp il M. hominis

I ï

культуральныи метод

ПЦР

РАГА

РИФ

РПГА

ИФА

Рис. 1. Частота выявления клеток, ДНК и антигенов Uspp и М. hominis у пациентов.

Данные, представленные на рис. 1, показывают, что у обследованных пациентов растворимые АГ в РАГА выявляли чаще -53,1% (Uspp) и 63,3% (Mh), чем живые клетки культуральным методом - 20,2% (Uspp) и 5,7% (Mh) и ДНК в соскобах из УГТ -31,6% (Uspp) и 8,9% (Mh). AT к Uspp и к Mh выявляли только у части пациентов - в 22,1 % и 32,9% соответственно.

2. Выявления микоплазм у клинически здоровых мужчин и пациентов с острым и хроническим уретритом.

На рис. 2 представлены результаты выявления микоплазм у клинически здоровых мужчин и пациентов с острым и хроническим уретритом.

% М. hominis Uspp М. genitalium

метод (IgG) (IgM) метод

ЕВ Острый уретрит ш Хронический уретрит я Клинически здоровые Рис. 2. Выявление М. hominis, Uspp и М. genitalium у клинически здоровых мужчин и пациентов с острым и хроническим уретритом.

Из данных рис. 2 следует, что при остром и хроническом НГУ и в ПЦР, и культуральным методом Uspp выявляли значительно чаще, чем у клинически здоровых пациентов. Mg выявляли у пациентов с уретритом также значительно чаще. Mh обнаруживали у больных и с острым, и с хроническим НГУ, но примерно в 2 раза реже, чем Uspp. AT к Mh класса G выявляли в сыворотке крови больных чаще, чем в сыворотке клинически здоровых, класса М у больных острым НГУ почти в 2 раза чаще, чем у клинически здоровых.

43 образца сыворотки крови были исследованы на наличие АГ в составе циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК). У 50,0% из них были выявлены специфические ЦИК, содержащие АГ Uspp, в 47,8% случаях - АГ Mh. Таким образом, АГ Mh и Uspp могут присутствовать в крови не только в виде растворимых молекулярных соединений, циркулирующих в свободном состоянии, но и в составе иммунных комплексов.

Полученные результаты свидетельствуют в пользу представления о причастности уреаплазм и Mg к развитию НГУ. Данные об этиологической роли Mh неубедительны.

-ю-

Выявление АГ МЬ и Шрр в крови пациентов, в отсутствие живых клеток и ДНК может свидетельствовать как о длительной персистенции клеток микоплазм в небольшом количестве в каких-то не известных нам очагах и постоянным поступлением АГ в кровь, так и о персистенции АГ в отсутствие живых клеток.

3. Обнаружение «урогеиитальных микоплазм» в сыворотке крови пациентов методом ПЦР.

Изучение возможности выявления микоплазм в сыворотке крови с научной точки зрения необходимо для выяснения механизмов генерализации инфекции, а в практическом отношении - для решения вопроса о возможности использования этого биоматериала в диагностических целях.

С помощью ПЦР провели сравнительное изучение частоты выявления ДНК микоплазм в соскобах из уретры и пробах сыворотки крови одних и тех же пациентов (табл. 1).

Из представленных данных следует, что ДНК микоплазм выявляли в соскобах из УГТ значительно чаще, чем в сыворотке крови, поэтому мы рекомендуем в диагностических целях использовать материал из урогенитального тракта.

Табл. 1. Сравнение частоты выявления ДНК U. species, М. hominis и М. genitalium в соскобах из УГТ и пробах сыворотки крови методом ПЦР.

Урогенитальный тракт Сыворотка крови

Количество Количество

пациентов, пациентов,

микроорганизм Всего с выявленной ДНК Всего с выявленной ДНК

абс. % абс. %

числа числа

U. species 158 50 30,6±3,7 112 7 6,3±1,9

М. hominis 158 14 8,8±2,3 112 5 4,5+1,9

М. genitalium 95 22 23,2±4,3 95 9 9,5+3,0

Имеются сообщения о том, что метод классической ПЦР выявляет ДНК не только жизнеспособных бактерий, но и погибших клеток, а также их фрагментов, содержащих генетический материал. О присутствии жизнеспособных бактерий свидетельствует наличие специфичной для каждого гена молекулы мРНК. Все пробы

сыворотки крови пациентов, в которых в ПЦР была обнаружена ДНК, исследованы с помощью ОТ-ПЦР - метода, дающего возможность выявить мРНК возбудителя. Результаты исследования представлены в табл. 2.

Табл. 2. Сравнение частоты выявления ДНК и мРНК М. hominis и U. species в пробах сыворотки крови и соскобов из УГТ._

Микроорганизм Урогенитальный тракт Сыворотка крови

Днк мРНК ДНК мРНК

абс. числа % абс. числа %

U. species 19 2 10,5±7,0 40 3 7,5±4,2

М. hominis 32 14 43,8±8,8 7 1 14,3±13,2

Из данных табл. 2 следует, что среди всех проб сывороток, содержащих ДНК, в 14,3% (Mh) случаев и 7,5% (Uu) была выявлена мРНК.

Выявление живых клеток микоплазм в крови даже в единичных случаях свидетельствует о наличие бактериемии и гематогенном пути распространения возбудителей. Данные табл. 1 и 2 свидетельствуют также о том, что в диагностических целях исследование соскобов из УГТ значительно более информативно, чем исследование сыворотки крови.

4. Длительность выявления живых клеток, ДНК и антигенов М. hominis и U. urealyticum в сыворотке крови человека при 37° С в условиях in vitro.

Для понимания механизмов персистенции АГ прежде всего необходимо определить, как долго жизнеспособные клетки микоплазм, их АГ и ДНК сохраняются в крови человека при 37° С в условиях in vitro.

В первом варианте опыта исследовали длительность выявления живых клеток микоплазм и уреаплазм, внутриклеточной ДНК и АГ в динамике. Для этого в сыворотку крови человека, не содержащую ни АГ Mh и Uu, ни AT к ним, ни их ДНК, вносили культуры всех испытуемых бактерий с известным титром и помещали в термостат при 37° С. Через 1, 3, 5, 7, 12, 17, 30 и 40 суток определяли наличие живых клеток, их АГ и ДНК.

Титр исходной культуры

12 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 17 30 40 •---- ДНК * * Антиген *........* Живая клетка Сутки

Рис. 3. Длительность выявления живых клеток, антигенов и ДНК

М. hominis в условиях in vitro при 37° С в сыворотке крови человека.

Из данных рис. 3 следует, что клетки Mh остаются живыми в течение 12 суток. До 7 суток инкубации включительно выросшие колонии имели характерную для микоплазм морфологию, в более поздние сроки вырастали лишь единичные морфологически измененные колонии, которые не удавалось пассировать. АГ Mh в постепенно убывающем количестве также выявляли в течение 12 суток, тогда как ДНК в постепенно убывающем количестве выявляли на протяжении всего срока наблюдения - до 40 суток.

Жизнеспособные клетки Uu выявляли в сыворотке лишь в течение 20-24 часов, АГ в течение 3 суток, а ДНК - в течение всего срока наблюдения, около 40 суток (рис. 4).

Титр

Рис. 4. Длительность выявления живых клеток, ДНК и антигенов U. urealyticum в условиях in vitro при 37° С в сыворотке крови человека.

Во втором варианте опыта исследовали длительность выявления ДНК, выделенной из клеток, и АГ бактерий. Для этого в сыворотку крови человека вносили ДНК и АГ, выделенные из культур с титром 107-108 КОЕ/мл (МЬ) и 106 ЦОЕ/мл (11и). Пробы исследовали в те же сроки, как и в первом варианте опыта.

Обнаружена та же закономерность. АГ МЬ сохранялись в сыворотке крови на протяжении 1 недели, АГ Ци - 3 суток, а ДНК испытанных бактерий в постепенно убывающем количестве выявляли в сыворотке до 40 суток (срок наблюдения) (рис. 5,6).

Разведения сыворотки

•---- ДНК •-• Антиген Сутки

Рис. 5. Длительность выявления ДНК и антигенов, выделенных из клеток М. hominis, в сыворотке крови человека в условиях in vitro при 37°С.

Разведения

Рис. 6. Длительность выявления ДНК и антигенов, выделенных из клеток U. urealyticum, в сыворотке крови человека в условиях in vitro при 37° С.

Таким образом, ДНК, выделенная из клеток, выявляется в сыворотке крови человека при 37° С в условиях in vitro долго (до 40 дней - срок наблюдения). Полученные данные свидетельствуют о том, что ДНК, выявляемая с помощью ПЦР в биопробах, не всегда может свидетельствовать о наличии в них живых клеток. Эта реакция может выявлять ДНК погибших клеток, их фрагменты, несущие генетический материал, или фрагменты самой ДНК, способные длительно сохраняться в сыворотке крови при 37° С in vitro.

АГ микоплазм, напротив, сохраняются в сыворотке крови в условиях in vitro при 37° С непродолжительное время (3-12) суток.

5. Длительность сохранения живых клеток, антигенов и ДНК М. hominis и U. urealyticum в условиях in vivo.

Для определения длительности сохранения живых клеток микоплазм, их АГ и ДНК в условиях in vivo была проведена серия опытов.

В первом варианте опытов определяли длительность и очаги персистенции Mh и Uu в организме кроликов и мышей, предварительно проверенных на отсутствие микоплазменной инфекции.

Кроликам вводили внутрибрюшинно без адъюванта по 5 мл трижды отмытой фосфатным буфером бульонной культуры Mh (титр 10 КОЕ/мл) или культуры Uu (титр 105 - 106 ЦОЕ/мл), мышам внутрибрюшинно по 1 мл этих культур. В разные сроки после заражения у кроликов и мышей исследовали кровь из вены. По окончании опыта животных умерщвляли и определяли наличие в пробах сыворотки и гомогенатах органов (в костном мозге, тимусе, селезенке, печени, почках, сердце, легких, брыжеечных и паховых лимфоузлах и семенниках) живых клеток, их АГ, ДНК, мРНК и AT.

Из данных рис. 7 следует, что живые клетки Mh удавалось выделять из сыворотки крови и большинства исследованных органов кроликов (кроме сердца, легкого и почки) до 2 месяцев, что свидетельствовало о наличии бактериемии в течение этого периода. Колонии выделенных микроорганизмов никогда не имели классической формы "fried-egg", это были мельчайшие (0,01 - 0,03 мм) светопреломляющие колонии, состоящие из разнообразных

характерных микроструктур. Они с трудом пассировались, выдерживали не более 3-4 пассажей и погибали.

6 месяцев

®сыворотка крови 1 органы

РАГА

РИФ

4.5 месяца

культуральный ОТ-ПЦР метод

2 месяца

Рис. 7. Выявление живых клеток, антигенов и ДНК М. hominis в организме кроликов при заражении живой культурой.

АГ Mh в РАГА и РИФ выявляли в сыворотке крови и в большинстве исследованных органов кроликов (кроме сердца, легкого и почки) в течение 6 месяцев после заражения (срок наблюдения).

Результаты выявления ДНК Mh в сыворотке крови кроликов были положительными в течение всего срока наблюдения; через 2 месяца во всех исследованных органах (кроме сердца), через 6 месяцев - в костном мозге, селезенке и тимусе.

Сыворотка крови и гомогенаты органов кроликов были исследованы в ОТ-ПЦР. Реакция была положительной в сыворотке и органах через 2 месяца после заражения. Через 6 месяцев положительный результат получен при исследовании тимуса, селезенки и костного мозга, т. е. органов иммуногенеза.

Из сыворотки крови мышей живые клетки выделяли в течение 3 недель. Морфологически колонии были сходны с теми, которые вырастали из крови и органов кроликов.

АГ выявляли в пробах сыворотки через 3 недели после заражения, в органах - на протяжении всего срока наблюдения - 3 месяца. ДНК выявляли в сыворотке крови мышей через 3 недели после заражения, а в гомогенатах органов до 1,5 месяцев, результаты ОТ-ПЦР в органах были положительными также до 1,5 месяцев.

Пик титра AT у кроликов был отмечен через 2 месяца после заражения, у мышей через 3 недели.

2,5 месяца

сыворотка крови ■ органы

культуральный ОТ-ПЦР РАГА РИФ ПЦР

метод

Рис. 8. Выявление живых клеток, антигенов и ДНК U. urealyticum в организме кроликов при заражении живой культурой.

Из данных рис. 8 следует, что ни живые клетки Uu, ни их ДНК не выявлены в пробах сыворотки крови ни на одном из исследованных сроков, начиная с 1-ой недели. В то же время у кроликов АГ в крови и органах (кроме легкого и сердца) выявляли на протяжении всего срока наблюдения (2,5 месяца).

Из сыворотки крови мышей и гомогенатов органов выделить Uu не удалось уже на 2-е сутки после заражения.

АГ Uu выявляли в сыворотки крови мышей в течение 9 суток после заражения, в органах - на протяжении всего срока наблюдения (2 месяца).

Пик AT к Uu у кроликов отмечен на 2-ой неделе, у мышей на 9-20 сутки.

6. Персистенция антигенов М. hominis и U. urealyticum в организме кроликов и мышей.

Во втором варианте опыта кроликам вводили препараты АГ Mh и Uu. Кролики получали внутрибрюшинно по 5 мл разрушенных ультразвуком и прогретых при 56 С в течение 1 часа препаратов АГ Mh и Uu без адъюванта. Мышам вводили антигены внутрибрюшинно в объеме 1 мл. Пробы АГ содержали 1 мг/мл белка.

Наличие АГ исследовали в тех же органах и сыворотке крови кроликов и мышей в динамике, как и в предыдущих вариантах опыта.

АГ Mh циркулировали в крови и сохранялись в органах кроликов на протяжении всего срока наблюдения до 3-3,5 месяцев (рис. 9). AT выявляли на протяжении всего срока наблюдения.

3,5 месяца "3"месяца........

сыворотка крови i органы

РАГА РИФ

Рис. 9. Выявление антигенов М. hominis в сыворотке крови и органах

кроликов.

В сыворотке крови мышей АГ Mh выявляли на протяжении 2,5 месяцев, в гомогенатах органов на протяжении 3 месяцев. Длительное сохранение АГ сопровождалось синтезом AT, которые выявляли в течение 2,5 месяцев, после введения АГ.

3,5 месяца

3 месяца

¡ сыворотка крови 8 органы

РАГА РИФ

Рис. 10. Выявление антигенов U. urealyticum в сыворотке крови и органах

кроликов.

Из данных рис. 10 следует, что в отличие от живых клеток уреаплазм и их внутриклеточной ДНК, АГ выявляли в сыворотке крови и органах кроликов (кроме легкого и сердца) на протяжении 3,5 месяцев.

В сыворотке крови и органах мышей АГ Uu выявляли на протяжении одного месяца.

7. Выявление ДНК М. hominis и U. urealyticum в организме кроликов и мышей.

В третьем варианте опыта определяли длительность сохранения ДНК, выделенной из клеток Mh и Uu, в организме животных с помощью НЦР. Для этого кроликам и мышам вводили

внутрибрюшинно без адъюванта ДНК в физиологическом растворе, выделенную из 5 мл бульонной культуры Mh и Uu (для кроликов) и 1 мл (для мышей), при исходном титре клеток 108 КОЕ/мл и 106 ЦОЕ/мл соответственно. Результаты учитывали в те же сроки, что и в предыдущих вариантах опыта.

ДНК Mh выявляли в сыворотке крови и гомогенатах органов кролика (кроме сердца и легкого) в течение 2 месяцев после введения. ДНК Uu выявить в сыворотке крови и гомогенатах органов не удалось ни на одном из исследованных сроков.

У мышей ДНК Mh выявляли в сыворотке крови и в гомогенатах органов в течение 7 суток. ДНК Uu не удалось обнаружить уже через 3,5 часа и во все последующие сроки наблюдения.

8. Выявление антигенов М. hominis и U. urealyticum в составе циркулирующих иммунных комплексов.

При заражении кроликов живыми клетками Mh ее АГ в составе ЦИК выявляли уже через 7 дней после заражения и до 3 месяцев включительно (срок наблюдения), Uu до 1 месяца, в более поздние сроки АГ в составе ЦИК не выявили.

При заражении кроликов препаратами АГ Mh и Uu АГ Mh обнаруживали в крови в составе ЦИК в течение 2 месяцев, Uu в течение 20 дней (сроки наблюдения). Следует заметить, что во всех случаях в крови выявляли также АГ Mh и Uu в свободном, не связанном в ЦИК состоянии.

Таким образом, проведенные исследования показали, что при заражении кроликов и мышей развивается генерализованная инфекция, сопровождающаяся длительной персистенцией микоплазм. При этом их АГ сохраняются в органах и тканях значительно дольше, чем живые клетки и их ДНК. Данные, полученные при заражении животных препаратами АГ, не содержащих живых клеток, бесспорно свидетельствуют о возможности антигенемии при экспериментальной микоплазменной инфекции. Формы сохранения АГ в организме различны: АГ могут принадлежать живым и погибшим клеткам, сохраняться в корпускулярной форме и выявляться в РИФ в виде отдельных гранул, расположенных на мембране клеток и в межклеточных пространствах. АГ могут сохраняться также в виде растворимых молекулярных соединений, циркулирующих в крови в

свободном состоянии. И в той, и в другой форме АГ могут включаться в состав ЦИК.

9. Характеристика белкового профиля клеток М. hominis и U. urealyticum в ЭПАГ.

В результате электрофореза был выявлен широкий спектр белков Mh и Uu, молекулярную массу которых определяли путем сравнения с маркером молекулярных масс фирмы "BIO RAD".

Спектр белков Uu достаточно широк и включает в себя белки с молекулярной массой от 19 до 120 кД, а именно: 19, 30, 40, 55, 60, 70, 97, 100, 120 кД.

Спектр обнаруженных белков Mh также широк. Выявлены белки с молекулярной массой от 25 до 120 кД, а именно: 25, 40, 50, 55, 58, 60, 90, 100, 120 кД.

10. Выявление антигенов М. hominis и U. urealyticum в сыворотке крови пациентов.

В дальнейшем исследовали пробы сыворотки крови пациентов, положительных по АГ и не содержащих ни живых клеток, ни ДНК микоплазм, ни AT к ним. Исследовано 28 проб, содержащих АГ Uu, 22 пробы - АГ Mh и 12 проб контрольных, не содержащих ни АГ Uu,

В пробах сыворотки крови пациентов, имеющих АГ Ш (рис. 11), специфические белки располагались в границах от 19 до 120 кД. Белки с молекулярной массой 55, 60, 70 кД присутствовали во всех исследованных пробах сыворотки, тогда как белки с молекулярной массой 20, 84, 120 кД были выявлены только в некоторых образцах.

1 2 3 45 67*

Рис. №11. Электрофореграмма белков и. игеа1уНсит в пробах сыворотки крови пациентов (1-7 пробы сывороток крови пациентов).

ни Mh.

Молекулярная масса в кД

¡11 Щ ~ £ II

г - II

» Uli ** т Г? Й Ж Щ 11 Ч шш :

Iii *

1 II 1| Ii

Индивидуальные колебания в электрофореграммах могут быть связаны с высокой вариабельностью мембранных белков у разных штаммов (Cheng X. et al., 1994).

В пробах сыворотки пациентов, имеющих АГ Mh (рис. 12), специфические белки располагались в зоне от 25 до 120 кД. Во всех пробах присутствовали белки с молекулярной массой 55, 58 и 60 кД. В 10 пробах не выявили белки с высокой молекулярной массой (97-120 кД), а только с молекулярной массой 76, 70 и 60 кД.

-1.1 мш

12 3 4 567

Рис. №12. Электрофореграмма белков М. hominis в пробах сыворотки крови пациентов (1-7 пробы сывороток крови пациентов).

В контрольных пробах сыворотки крови, не содержащих АГ, с помощью специфических антивидовых конъюгатов указанные белки не выявлены.

В результате исследования, проведенного с помощью иммуноблотинга, удалось обнаружить белки с молекулярной массой, характерной для некоторых патогенетически значимых АГ, определяющих адгезивность, патогенность, иммуногенность микоплазм. Некоторые из них обладают, по данным литературы, иммуном оду лиру ющими свойствами (Razin Sh., et al., 1998).

Таким образом, с помощью иммуноблотинга мы подтвердили наличие АГ «урогенитальных микоплазм» в пробах сыворотки пациентов, что является одним из прямых доказательств наличия антигенемии при урогенитальных микоплазменных инфекциях.

Поскольку чужеродные АГ могут обладать побочным биологическим действием и приводить к различным формам иммуносупрессии и другим патологическим явлениям в организме, изучение их биологических и физико-химических свойств следует продолжить.

Молекулярная масса в кД

120

i 100

11. Тактика ведения пациентов с длительно сохраняющейся микоплазменной антигенемией.

Причинами длительной антигенемии у инфицированных микоплазмами людей может быть как персистенция живых клеток микоплазм в каких-то неизвестных очагах с постоянным поступлением АГ в кровь, так и истинная антигенемия, когда персистируют АГ микоплазм в отсутствие живых клеток. В первом случае титр АГ в крови сохраняется на одном уровне. При этом целесообразно повторное лечение препаратами, обладающими микоплазмоцидным действием. Во втором случае, когда титр АГ постепенно снижается, можно думать, что имеет место антигенемия в отсутствие живых клеток. В этом случае рекомендуется продолжить наблюдение больного в динамике. В свете новых данных о патогенетическом значении некоторых АГ микоплазм, изучение их роли в патогенезе инфекций следует продолжить.

Выводы:

1. Установлено, что антигены уреаплазм и М. hominis выявляются в сыворотке крови пациентов значительно чаще (53,1% и 63,3%), чем живые клетки (20,2% и 31,6%) и их ДНК в урогенитальном тракте (5,7% и 8,9%).

2. Путем сочетания ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) показано существование бактериемии у части пациентов с урогенитальной микоплазменной инфекцией, что свидетельствует о генерализации инфекционного процесса.

3. Экспериментальное инфицирование кроликов и мышей «урогенитальными микоплазмами человека» приводит к развитию генерализованной инфекции с длительной (до 6 месяцев) персистенцией возбудителя.

4. Получены доказательства существования феномена длительной (до 3 месяцев) антигенемии в результате введения лабораторным животным бесклеточных препаратов антигенов U. urealyticum и М. hominis.

5. Антигены могут сохраняться в организме в корпускулярной форме и принадлежать живым и погибшим клеткам микоплазм, в виде растворимых макромолекулярных соединений, циркулирующих в крови свободно или в составе иммунных комплексов.

6. В крови пациентов с помощью иммуноблоттинга выявлен широкий спектр специфических антигенов уреаплазм и М. hominis, что подтверждает существование феномена антигенемии у человека.

7. В результате комплексного обследования пациентов получены данные, свидетельствующие в пользу представления о причастности уреаплазм и М. genitalium к развитию негонококкового уретрита. Предложена тактика ведения пациентов с длительной антигенемией.

Список работ, опубликовапных по теме диссертации:

1. Балабанов Д.Н., Раковская И.В. Сравнительная оценка методов диагностики микоплазменных инфекций урогенитального тракта // Журнал микробиологии. -2006. -№4. - С. 82-85.

2. Балабанов Д.Н., Раковская И.В. Сравнительная характеристика методов диагностики микоплазменной инфекции // Материалы научно-практической конференции «Вакцинология 2006. Совершенствование иммунологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней», Москва. -2006. - С. 14-16.

3. Балабанов Д.Н., Раковская И.В. Микоплазмы при негонококковом уретрите // Клиническая и лабораторная диагностика. -2007. - №8. - С. 49-51.

4. Балабанов Д.Н., Раковская И.В. Сравнение методов диагностики микоплазменной инфекции // Материалы IX съезда всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, Москва. - 2007. -Т.З. - С. 10-11.

5. Бархатова О.И., Балабанов Д.Н., Раковская И.В. Обнаружение «урогенитальных микоплазм» человека в сыворотке крови // Клиническая и лабораторная диагностика. -2008. - №3. - С. 49-51.

6. Горина Л.Г., Шершнева Н.Н., Балабанов Д.Н., Гончарова С.А. Персистенция микоплазм при респираторных и урогенитальных микоплазменных инфекциях // Эпидемиология и вакцшопрофилактика. -2008. -№6. - С. 41-44.

7. Раковская И.В., Бархатова О.И., Балабанов Д.Н., Горина Л.Г., Гончарова С.А., Гамова Н.А. Длительность сохранения жизнеспособных клеток, ДНК и антигенов Mycoplasma hominis в сыворотке крови человека при 37° С // Клиническая и лабораторная диагностика. -2008. - №11. - С. 40-42.

8. Балабанов Д.Н. Природа антигенемии при микоплазменных инфекциях // Материалы X Всероссийского съезда дерматовенерологов, Москва. -2008. - С 59-60.

9. Бархатова О.И., Балабанов Д.Н., Растегаева И.Н. Сравнительное изучение частоты выявления ДНК, мРНК и антигенов М. hominis и U. urealyticum в клиническом материале от гинекологических и урологических больных // Материалы X Всероссийского съезда дерматовенерологов, Москва. - 2008. - С. 75-76.

10. Балабанов Д.Н., Савеличев Е.А. Роль микоплазм при негонококковом уретрите // Материалы научно-практической конференции, посвященной 25-летию ЦМСЧ №165 ФМБА России, Москва. - 2008. -С. 39-41.

11. Раковская И.В., Горина Л.Г., Бархатова О.И., Балабанов Д.Н., ГончароваС.А, Гамова Н.А., Левина Г.А. Персистенция Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum, сохранение их антигенов и ДНК в органах инфицированных животных // Журнал микробиологии. - 2009. -№4. - С.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Балабанов, Денис Николаевич

Список сокращений.

Введение.

Обзор литературы.

Глава 1. Таксономия, биологические свойства и патогенность микоплазм.

1.1. Таксономия представителей класса Mollicutes.

1.2. Уникальные биологические особенности микоплазм.

1.3. Факторы патогенности микоплазм.

1.4. Характеристика «урогенитальных микоплазм» человека.

1.5. Урогенитальные микоплазменные инфекции при воспалительных заболеваниях органов малого таза у женщин.

1.6. Микоплазменные инфекции у беременных.

1.7. Микоплазмы и бесплодие.

1.8. Урогенитальные микоплазменные инфекции у мужчин.

1.9. Микоплазменные инфекции при заболеваниях почек.

Глава 2. Антигены микоплазм.

2.1. Общая характеристика антигенов.

2.2. Антигены генитальных микоплазм.

2.3. Генетические механизмы вариабельности мембранных антигенов:.'.

Глава 3. Генерализованная инфекция и длительная персистенция микоплазм.

3.1. Особенности микоплазменных инфекций.

3.2. Механизмы длительной персистенции микоплазм.

3.3. Патогенетическое значение длительно сохраняющихся антигенов.

Собственные исследования.

Глава 4. Материалы и методы.

Глава 5. Выявление "урогенитальных микоплазм" у пациентов

5.1. Основные критерии и методы обследования пациентов.

5.2. Выявление Uspp у обследованных пациентов.

5.3. Выявление М. hominis у обследованных пациентов.

5.4. Сравнение результатов выявления микоплазм у клинически здоровых мужчин и пациентов с острым и хроническим уретритом.

Глава 6. Обнаружение «урогенитальных микоплазм» в сыворотке крови пациентов.

Глава 7. Сохранение живых клеток, ДНК и антигенов микоплазм в условиях in vitro.

7.1. Выявление живых клеток, ДНК и антигенов М. hominis и U. urealyticum в сыворотке крови человека при 37° С в условиях in vitro.

7.2. Выявление выделенных из клеток ДНК и антигенов М. hominis и U. urealyticum в сыворотке крови человека при 37° С в условиях in vitro.

Глава 8. Длительность сохранения живых клеток, антигенов и ДНК Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum в условиях in vivo.

8.1. Результаты выявления живых клеток М. hominis, их антигенов и ДНК в организме кроликов и мышей при заражении живой культурой.

8.2. Результаты выявления живых клеток U. urealyticum, их антигенов и ДНК в организме кроликов и мышей при заражении живой культурой.

8.3. Сохранение выделенных из клеток антигенов М. hominis и

U. urealyticum в организме кроликов и мышей.

8.4. Выявление ДНК М. hominis и U. urealyticum в организме кроликов и мышей.

8.5. Выявление живых клеток, антигенов и ДНК М. hominis и

U. urealyticum у иммунизированных кроликов.

8.6. Выявление антигенов М. hominis и U. urealyticum в составе ЦИК.

Глава 9. Выявление белков М. hominis и уреаплазм в пробах сыворотки крови инфицированных пациентов.

9.1. Характеристика белкового профиля клеток М. hominis и

U. urealyticum VIII в ЭПАГ.

9.2. Выявление антигенов М. hominis и уреаплазм в сыворотке крови пациентов с помощью иммуноблотинга.

Обсуяедение результатов.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Антигенемия при урогенитальных микоплазменных инфекциях"

Изучение биологии и роли микоплазм человека в инфекционной патологии продолжается уже несколько десятков лет. Тем не менее, в настоящее время пет, по-видимому, другой такой группы микроорганизмов, споры о патогенности которых были бы столь продолжительны, а мнения столь противоречивы. Это связано с рядом причин, главной из которых является широкое распространение микоплазменных инфекций среди людей при отсутствии свойственных только этим инфекциям клинических проявлений (157).

Ранее в работах ряда авторов была показана способность микоплазм вызывать хромосомные аберрации (84). В последние годы у микоплазм обнаружены новые уникальные свойства. Показано, что они обладают проапоптотической и антиапоптотической активностями, а при хронических формах инфекции в условиях in vivo и in vitro могут быть причиной нестабильности генома и трансформации инфицированных клеток. Индукторами этих процессов, как показали исследования, являются антигены микоплазм липопротеиновой природы (127, 128).

Из ветеринарной практики известно, что микоплазменные инфекции животных: птиц, свиней, крупного и мелкого рогатого скота часто носят генерализованный характер и сопровождаются длительной персистенцией возбудителей даже после клинического выздоровления (19). Данные о генерализации микоплазменных инфекций человека известны лишь в отношении респираторного микоплазмоза (возбудитель М. pneumaniae).

В лаборатории микоплазм и L- форм бактерий ГУ НИИЭМ имени Н.Ф. Гамалеи были созданы модели микоплазменных инфекций человека: ревматоидного артрита на мышах, кроликах и крысах (М. fermentans, М. arthritidis, U. urealyticum), респираторного микоплазмоза на морских свинках и хомяках (М. pneumoniae) и урогенитальной микоплазменной инфекции на морских свинках, кроликах и обезьянах (27). Антигены микоплазм длительно выявляли в крови и органах животных, однако оставалось неизвестным, принадлежат ли эти антигены живым персистирующим клеткам микоплазм или в инфицированном организме сохраняются антигены погибших клеток. Если последнее предположение справедливо, то необходимо знать, как долго и в каких очагах антигены сохраняются в организме и принимают ли они участие в патогенезе микоплазменных инфекций.

Новые данные об антиапоптотической, трансформирующей, иммуномодулирующей и других активностях микоплазм диктуют необходимость переоценки данных о роли антигенов микоплазм в инфекционной патологии человека и детального изучения феномена антигенемии.

Основные задачи исследования:

1. Получить данные о частоте выявления антигенов «урогенитальных микоплазм» в крови пациентов и сравнить их с результатами выявления живых клеток, ДНК и антител к ним.

6. Обосновать тактику ведения пациентов с длительно сохраняющейся микоплазменной антигенемией.

Научная новизна

- Впервые показано, что растворимые антигены «урогенитальных микоплазм» выявляются с помощью реакции агрегатгемагглютинации в крови пациентов и зараженных лабораторных животных значительно чаще, чем живые клетки микоплазм, антитела к ним и их ДНК. Экспериментальная микоплазменная инфекция лабораторных животных является генерализованной с длительной персистенцией возбудителя во внутренних органах и бактериемией.

- С помощью иммуноблотинга в пробах сыворотки крови пациентов выявлен спектр антигенов микоплазм и уреаплазм с молекулярной массой от 19 до 120 кД (Uu) и от 25 до 120 кД (Mh).

Научно - практическая значимость работы

Показано, что бактериемия и антигенемия «урогенитальных микоплазм» являются не известными ранее особенностями патогенеза урогенитальных микоплазменных инфекций.

Получены данные, свидетельствующие в пользу представления о причастности U. urealyticum и М. genitalium к развитию уретрита. Роль М. hominis сомнительна.

Показано, что исследование крови в ПЦР с целыо выявления ДНК «урогенитальных микоплазм» менее информативно, чем исследование соскобов из урогенитального тракта.

Предложена тактика ведения пациентов с длительной микоплазменной антигенемией.

Данные работы могут быть использованы в клинических лабораториях и медицинских центрах, занимающихся диагностикой микоплазменных инфекций, а также в учебном процессе на курсах лекций по микробиологии и инфектологии.

Созданы Методические рекомендации «Диагностика микоплазменных инфекций при негонококковых уретритах у мужчин». Утверждены на Ученом Совете по внедрению научных достижений в практику ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи. Протокол №9 от 17 апреля 2009 года.

Обзор литературы

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Балабанов, Денис Николаевич

136 Выводы:

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Балабанов, Денис Николаевич, Москва

1. Акопян Т. Э. Бактериальный вагиноз и беременность // Акушерство и гинекология. 1996. - № 1. - С. 3 - 5.

2. Анкирская А. С. Демидова Е.М. Генитальные микоплазмы как фактор риска развития акушерской и перинатальной патологии // Вестн. АМН СССР. 1991. - №6. - С. 17 - 19.

3. Байцур М. В., Екимов А. Н. Уреаплазменная инфекция // Кремлевская медицина. Клинический вестник. 2000. -№3. - С. 54.

4. Борисенко К. К., Тоскин И. А., Кисина В. И. О значении колонизации мочеполовых органов Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum // Проблемы ИППП. 1999. - № 3. - С. 28 - 32.

5. Борхсениус С. Н., Чернова О. А., Чернов В. М., Воинский М. С. Микоплазмы. Молекулярная и клеточная биология, взаимодействие с иммунной системой млекопитающих, патогенность, диагностика. -СПб.: Наука, 2002. 319 с.

6. Борхсениус С. Н., Чернова О. А. Микоплазмы. Молекулярная и клеточная биология, патогенность, диагностика. JL: Наука., 1989. -156 с.

7. Вульфович Ю.В. Артритогенность Mycoplasma hominis и микоплазменные артриты человека // Вест. АМН СССР. 1991. -№6. -С. 34-36.

8. Гасанова Т. А. Микробиоценозы при воспалительных заболеваниях репродуктивных органов женщин и перинатальной патологии: Дис. . д-ра биол. наук., Саратов. 2005. - 282 с.

9. Гланц С. Медико-биологическая статистика / Пер. с англ. М. -Практика. - 1998. 459 с.

10. Ю.Горина Л.Г., Гончарова С.А. Раковская И.В., Кузьменко Л.Г. Частота обнаружения антигенов микоплазм в свободном состоянии и всоставе циркулирующих иммунных комплексов у детей с бронхиальной астмой //Ж. микробиологи. 2006. - №4. С. 85 - 88.

11. П.Горина Л.Г., Жевержеева И.В., Гончарова С.А. Использование реакции агрегатгемаглютинации для выявления L- форм гемолитического стрептококка группы А и микоплазм // Лаборатор. дело. 1981. -№11. -С. 685-688.

12. Гублер Е. В., Генкин А. А. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. М. -Медицина. - 1973. - 142 с.

13. Иванов О. Л. Кожные и венерические болезни. М.: Медицина, 1997. - С. 292 - 295.

14. Каган Г.Я. Современные проблемы учения о микоплазменных инфекциях // Клин, медицина. 1983. - № 2. - С. 20 - 24.

15. Каган Г.Я., Раковская И.В. Микоплазма инфекция в культурах ткани. -М., 1968.- 168 с.

16. Козлова О. В. Эпидемиология М. hominis инфекции беременных, плода и новорожденных: Автореф. дис. канд.мед наук.- М., 1982.

17. Коромыслов Г.Ф. Мессарош Я., Штипкович Л. Микоплазма в патологии животных. М.: Агропромиздат, 1987. - 255 с.

18. Мавров И. И. Половые болезни: Руководство для врачей, интернов и студентов. Харьков: Факт, 2002. - 789 с.

19. Марантиди А.Н., Вульфович Ю.В., Гамова Н.А., Крылова Р.И. Заражение обезьян Ureaplasma urealyticum серовар VIII // Ж. Микробиологии. 1990. - №6. - С. 13 - 18.

20. Миллер Г. Г., Раковская И. В. Электронно-микроскопическое изучение ассоциации микоплазмы и бычьего лейкозного вируса в культуре ткани // Вопр. вирусологии. 1983. - № 5. - С. 615 - 621.

21. Прилепская В. Н., Быковская О. В. Уреаплазменная инфекция: клиника, диагностика, лечение. Патология шейки матки // Генитальные инфекции. 2006. - № 1. - С. 46 - 52.

22. Прозоровский С. В. Социальная значимость микоплазменных инфекций. Перспективы научных исследований // Вестн. АМН СССР. 1992. - № 2. - С. 3 - 5.

23. Прозоровский С. В., Раковская И. В., Вульфович Ю. В. Медицинская микоплазмология. М.: Медицина, 1995. - 285 с.

24. Прозоровский С.В., Покровский В. И., Васильева В. И. Микоплазма пневмонии инфекция. - М.: Медицина, 1978. - 167 с.

25. Прозоровский С.В., Пронин А.В., Санин А.В. Иммунологические механизмы персистенции микоплазм // Вестн. АМН СССР. 1985. -№10.-С. 43-51.

26. Разин Ш., Роттем Ш. Методы выделения мембран микоплазм. «Биохимическое исследование мембран». -М.: Мир, 1979. С. 9 - 29.

27. Раковская И.В. Микоплазмы // Клинич. лаборатор. аналитика. М.: Агат-Мед. 2003. - Т.4. - С. 590 - 607.

28. Раковская И.В. Микоплазмы человека и микоплазменные инфекции (Лекция. Часть 1) // Клин. Лаб. Диагн. 2005. - №2. - С. 25 - 32.

29. Савенков В.И., Шишхов Д.М., Ященко В.В. Место генодиагностики в лабораторных методах исследований туберкулеза // Генодиагностика в современном мире. Материалы 3 всероссийской конференции, Москва 2000. - С. 287 - 290.

30. Савилов Е. Д., Мамонтова Л. М., Астафьев В. А., Жданова С. Н. Применение статистических методов в эпидемиологическом анализе. М. - МЕД-пресс-информ. - 2004. - 112 с.

31. Савилова A.M., Трофимов Д.Ю., Алексеев Л.П., Хаитов P.M. ДНК-вакцины: современное состояние и перспективы // Иммунология. -2007.-№2.-С. 114-123.

32. Скрипаль И. Г. Биология микоплазм (моликутов) // Успехи микробиологии. 1984. - Том. 19. - С. 74 - 106.

33. Тимаков В. Д. Каган Г. Я. L формы бактерий и семейство Mycoplasmataceae в патологии. -М.: Медицина, 1973. -391 с.

34. Тюрк Дж. Иммунологические аспекты инфекционных заболеваний // Пер. с англ. Дик Дж., М. 1982.

35. Хадсон М. Ureaplasma urealyticum // ЗГТПП. 1998. - № 1. - С. 10-13.

36. Хантер X. Заболевания, передающиеся половым путем. Цветной атлас-справочник. М.: Бином, 2004. - 295 с.

37. Чернова О.А. Биохимические аспекты патогенеза при персистенции микоплазм у человека // Автореф. дис. докт.биол. наук. М., 1997. -с. 57.

38. Чернова О.А. Биохимические и молекулярно-генетические аспекты персистенции микоплазм у человека // Успехи биол. химии. 1999. -№39-С. 103- 140.

39. Шабад А. Л., Минаков Н. И., Мкртчян Г. Г., Кисина В. И. Патогенез и профилактика инфекции мочеполового тракта у женщин // Урол. и нефрол. 1994. - № 4.- С. 8 - 11.

40. Ягужинская О. Е. Белки сыворотки в препаратах клеток микоплазм // Ж. Микробиол. 1977. - №7. - С. 141 - 142.

41. Abele-Horn М, Wolf С, Dressel Р et al. Association of Ureaplasma urealyticum biovars with clinical outcome for neonates, obstetric patients, and gynecological patients with pelvic inflammatory disease // J. Clin. Microbiol. 1997. - P. 199 - 202.

42. Andersen H., Birklund S., Christiansen G., Freundt S. Electrophoretic analysis of proteins from Mycoplasma hominis strains delected by SDS-PAGE, two dimensional gel electrophoresis and immunobloting // J. Gen. Microbiol.-1987.-Vol. 133.-Nl.-P. 181-191.

43. Baseman J., Tully J. Mycoplasmas: sophisticated, reemerging, and burdened by their notoriety // Emerg. Infect. Dis. 1997. - Vol. 3. - N1. -P. 21 -32.

44. Bebear C., Bove J., Bebear C., Renaudin H. Characterization of Mycoplasma hominis mutations involved in rasistence to fluoroquinolones // Antimicrob. Agents Chemother. 1997. - Vol. 41. - P. 269 - 273.

45. Belkwill F., Mantovani A. Inflammation and cancer: back to Virchow // lancet. 2006. - Vol. 354. - P. 539 - 549.

46. Bendjennat M., Blanchard A., Loutfi M. et al. Role of Mycoplasma penetrans endonuclease P40 as a potential pathogenic determinant // Infect. Immun. 1999. - Vol. 67. - N9. - P. 4456 - 4462.

47. Blanchard A., Razin Sh., Kenny G., Barile M. Characterization of the Ureaplasma urealyticum urease // J. Bacteriol. 1998. - Vol. 170. - P. 2629 - 2697.

48. Boek A., Dekker J., Van Eijk J. et al. Effect of lactic acid suppositiries compared with oral metronidazol and placebo in bacterial vaginosis: a randomised clinical trial // Genitourin. Med. 1993. - Vol. 69. - N5. - P. 388 - 392.

49. Boesen Т., Emmersen J., Baczynska A. et al. The vaa locus of Mycoplasma hominis contains a divergent genetic islet encoding a putative membrane protein // BMC Microbiol. 2004. - Vol. 4. - P. 7.

50. Boesen Т., Emmersen J., Jensen L. et al. The Mycoplasma hominis vaa gene displays a mosaic gene structure // Mol. Microbiol. 1998. - Vol. 29. -Nl.-P. 97-110.

51. Boesen Т., Fedosova'N., Kjeldgaard M. et al. Molecular design of Mycoplasma hominis Vaa adhesion // Protein Sci. 2001. - Vol. 10. -N12.-P. 2577-2586.

52. Bove J. B. Molecular features of Mollicutes // Clin. Infect. Dis. 1993. -N17.-P. 10-31.

53. Bove J., Whitcomb R., McCoy R. Culture techniques for spiroplasmas from plants // Methods in Mycoplasmology / Eds. Razin Sh., NY. 1983. -Vol. 2. - P.225 - 234.

54. Bruner H. The mycoplasmacidal test (MCT) // Methods in Mycoplasmology / Razin Sh. NY. - Academ. Press. - 1983. - Vol. 1. -P. 423 - 430.

55. Burstein G., Zenilman J. Nongonococcal urethritis a new paradigm // Clin. Infect. Dis. - 1999. - Vol. 28 (Suppl 1). -P. 66 - 73.

56. Busolo F., Zanchetta R. Do mycoplasmas inhibit the human sperm fertilizing ability in vitro? // Isr. J. Med. Sci. -1984,- Vol. 20. -N10. P. 902 - 904.

57. Cahill J., Cole В., Wiley В., Ward J. Role of Biological Mimicry in the Pathogenesis of Rat Arthritis Induced by Mycoplasma arthritidis // Infect. Immun. 1971. - Vol. 3. - N1. - P. 24 - 35.

58. Caroll S., Philpott-Howard J., Nicolaides K. Amniotic fluid gram stain and leukocyte count in the prediction of intrauterene infection in pretern prelabour // Fetal. Diagh. Ther., Switzerland. 1996. - Vol. 1. - N1. - P. 1 -5.

59. Carson J., Ни P.-H., Collier A. Cell structural and functional elements / Mycoplasmas: molecular biology and pathogenesis / Eds. Maniloff J. et al. Washington. - 1992. - P: 63 -72.

60. Cassell G., Waits K., Watson H. et al. Ureaplasma urealyticum role in prematurity and disease in newborns // Clin. Microbiol. Rev. 1993. -Vol. 6. - P. 69 - 87.

61. Chambaud I., Blewski H., Blanchard A. Interaction between Mycoplasma lipoproteins and the host immune system // Trends. Microbiol. 1999. -Vol. 7.-P. 493-499.

62. Chang M-W., Kim K-H., Park In-Dal. Et al. Effect of Mycoplasma pneumonia antigen on the production of IL -4, IL-6 and IL-10 in spleen cells in mice // 13th Int. Congr. of IOM, Fukuoka. 2000. - P. 159.

63. Chen X., Guangfang S., Yunfeng Z., Yifei W. Evidence for an association between Ureaplasma urealyticum infection and reproductive failure // Abst. 13th Int. Cong, of IOM. Fukuoka, Japan. 2000. - P.233.

64. Cheng S., Ling Т., Fu Q. Ureaplasma urealyticum infection in spontaneous abortus // Chung Hua Fu Chan Ко Tsa Chin. 1994. - Vol. 29. - N4. - P. 230-231,254.

65. Cheng X., Naessens A., Lauwers S. Indentification of serotype 1,-3 and 6 specific antigens of Ureaplasma urealyticum by using monoclonal antibodies // J. Clin. Microbiol. 1994. - Vol. 32. - N4. - P. 1060 - 1062.

66. Chernov V., Gorshkov O., Chernova O. Variability of the Vaa cytoadhesin genes in clinical isolates of Mycoplasma hominis // New Microbiol. -2005. Vol. 28. - N4. - P. 373 - 376.

67. Christiansen C., Black F., Freundt E. Hybridization experiments with deoxyribonucleic acid from Ureaplasma urealyticum serovars I to VIII // Int. J. Syst. Bacterid. 1999. Vol. 31. - P. 259 - 262.

68. Cole В., Naot Y., Standridge E., Wise K. Interaction of mycoplasmas and their products with lymfoid cells in vitro // The mycoplasmas / Eds. Razin Sh., Barile M. Orlando. - 1985. - Vol. 4. - P. 204 - 257.

69. Colin R., Guadarrama M., Meesner M. et al. Immunostimulatory surface molecules of the urogenital mycoplasmas Mycoplasma hominis and Ureaplasma urealyticum // 13th Int. Congr. of IOM, Fukuoka. 2000. - P. 79.

70. Dandekar Th., Snel В., Schmidt S. et al. Comparative genome analysis of the Mollicutes // Molecular biology and pathogenicity of Mycoplasmas / Razin Sh., Herrmann R. 2002. - N9. - P. 255 - 278.

71. De Girolami P.C., Madoff S. Mycoplasma hominis septicemia // J. Clin. Microbiol. 1982. - Vol. 16. - N3. - P. 566 - 567.

72. Digeon M., Laver M., Riza J., Bach J. Defection of circulating immune complex in human sera by simplited assays with polyethylene glycol // J. Immunol. Meth. 1977. - Vol. 16. - P. 156 - 158.

73. Dybvig K., Voelker L. Molecular biology of mycoplasmas // Ann. Rev. Microbiol. 1996. - Vol. 50. - P. 25-57.

74. Feng SH., Lo SC. Lipid extract of Mycoplasma penetrans proteinase Indigested lipid-associated membrane proteins rapidly activates NF-kappaB and activator protein 1 // Infect. Immun. 1999. - Vol. 67. - N6. - P. 2951- 2956.

75. Fogh J., Fogh H. Chromosome changes in PPLO -infected F1 human amnion cells // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1965. - Vol. 119. - P. 79958002.

76. Foy H. Infections caused by Mycoplasma pneumoniae and possible carrier state in different populations of patients // Clin. Infect. Dis. 1993.- Vol. 17 (Suppl. 1). P. 37 - 46.

77. Franzoso G., Dimitrov D., Blumenthal R. et al. Fusion of Mycoplasma fermentas strain incognitus with T lymphocytes // FEBS Microbiol. Lett.- 1992. Vol. 303. - P. 251 - 254.

78. Fraser C., Gocayne J., White O. et al. The minimal gene complement of Mycoplasma genitalium // Science. 1995. - Vol. 270. - P. 397 - 403.

79. Furr P., Taylor-Robinson D. Prevalence and significance of Mycoplasma hominis and Ureaplasma urealyticum in the urines of a non-venerealdisease population // Epidemiol. Infect. 1987. - Vol. 98. - N3. - P. 353 -359.

80. Glass J., Assad-Garcia N., Alperovich N. et al. Essential genes of a minimal bacterium // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006. - Vol. 103. -N2. - P. 425 - 430.

81. Grenabo L., Hedelin H., Petterson S. Urinary infection stones caused by Ureaplasma urealyticum // Scand. J. Infect. Diseases. 1988. - Vol. 53.-P. 46 - 49.

82. Hall R., Agarwal S., Kestler D. Induction of leukemia cell differentiation and apoptosis by recombinant P48, a modulin derived from Mycoplasma fermentans // Bioch.Bioph.Res Commun. 2000. - Vol. 269. - N1. - P. 284-289.

83. Hay P., Morgan D., Ison C. et al. A longtitudinal study of bacterial vaginosis during pregnancy // Brit. J. Obstet. Gynaecol. 1994. - Vol. 101. -P. 1048 - 1053.

84. Henrich В., Feldmann R., Hadding U. Cytoadhesins of Mycoplasma hominis // Infect. Immun. 1993. - Vol. 61. - N7. - P. 2945 - 2951.

85. Henrich В., Lang K., Kitzerow A. et al Truncation as a novel form of variation of the p50 gene in Mycoplasma hominis // Microbiology. 1998. - Vol. 144. - N11. - P. 2979 - 2985.

86. Hergyndez-Pando R., Jeyanathan M., Mengistu G. et al. Persistence of DNA from Mycobacterium tuberculosis in superficially normal lung tissue during latent infection // Lancet. 2000. - Vol. 356. - N9248. - P. 21332138.

87. Higuchi M., Raqmires S. Infectious agents in coronary atherosmas: a possible role in the pathogenesis of plaque repture and acute myocardial infraction // Rev. Inst. Med. Trop., S.Paulo. 2002. - Vol. 44. - N2. -P. 217-224.

88. Himmelreich R., Plagens H., Hilbert H. et al. Comparative analysis of the genome of the bacteria Mycoplasma pneumoniae and Mycoplasma genitalium // Nucl. Acids Res. 1997. - Vol. 25. - P. 701 - 712.

89. Hopfe M., Henrich B. OppA, the ecto-ATPase of Mycoplasma hominis induces ATP release and cell death in HeLa cells // BMC Microbiol. -2008.-Vol. 8.-P. 55.

90. Hopfe M., Hoffmann R., Henrich В. P80, the Hin T interacting membrane protein, is a secreted antigen of Mycoplasma hominis // BMC Microbiol. 2004. - Vol. 4. - P. 46.

91. Horowitz Sh., Evinson В., Maor R., Horowitz J. Mycoplasmas and Chlamydia activate human synoviae mononuclear cells, to secter proinflammatorg Thl and Th2 cytokines // 13th Int. Congr. of IOM, Fukuoka. 2000. - P. 113 - 114.

92. Iverson-Cabral S., Astete S., Cohen C., Totten P. mgpB and mgpC sequence diversity in Mycoplasma genitalium is generated by segmental reciprocal recombination with repetitive chromosomal sequences // Mol. Microbiol. 2007. - Vol. 66. -Nl. - P. 55 - 73.

93. Jensen J., Blom J., Lind K. Intracellular location of Mycoplasma genitalium in cultured Vera cells as demonstrated by electron microscopy // Int. J. Exp. Pathol. 1994. - Vol. 75. - N2. - P. 91 - 98.

94. Jensen L., Thorsen P., Mheller B. et al. Antigenic and genomic homogeneity of successive Mycoplasma hominis isolates // J. Med. Microbiol. 1998. - Vol. 47. - N8. - P. 659 - 666.

95. Jeremias J., Giraldo P., Durrant S. et al. Relationship between Ureaplasma urealyticum vaginal colonization and polymorphism in theinterleukin-1 receptor antagonist gene // J. Infect. Dis. 1999. - Vol. 180. -N3.-P. 912-914.

96. Jones J., Pether J., Rainey H., Swinburn C. Recurrent Mycobacterium bovis infection following a ferret bite // J. Infect. 1993. - Vol. 26. - N2. -P. 225 - 226.

97. Keane F., Thomas В., Gilroy C. et al. The association of Chlamydia trachomatis and Mycoplasma genitalium with non gonococcal urethritis: observations on heterosexual men and their female partners // Int. J. STD AIDS. - 2000. - N11. - P. 435 -439.

98. Kelly V., Garland S., Gilbert G. Isolation of genital mycoplasmas from the blood of neonates and women with pelvir infection using conventional SPS-free blood culture // Media Pathology., Australia. 1987. - Vol. 19. -N3.-P. 277-278.

99. Kim K., Chang M., Sung M., Rhew H. Effects of mycoplasmas antigens on production of interleykin -6 and interferon gamma mice // 13th Int. Congr. of IOM, Fukuoka. 2000. - P. 166.

100. Kitzerow A., Hadding U., Henrich B. Cyto-adherence studies of the adhesin P50 of Mycoplasma hominis // J. Med. Microbiol. 1999. - Vol. 48.-N5.-P. 485-493.

101. Kong F., James G., Ma Z. et al. Phylogenetic analysis of support for the establishment of a new species, Ureaplasma parvum // Int. J. Syst. Bacterid. 1999. - Vol. 49 - N4. - P.1879 - 1889.

102. Kotani H., Phillips D., McGarrity G. Malignant transformation of NIH-3T3 and CV-1 cells by a helical Mycoplasma Spiroplasma mirum, strain SMCA // In Vitro. 1986. - Vol. 22.- P. 756 -763.

103. Krause D., Taylor-Robinson D. Mycoplasmas which infect humans// Mycoplasmas: molecular biology and pathogenesis / Eds. Maniloff J. et al. Washington. - 1992. - P. 417 - 444.

104. Kruger Т., Baier J. Induction of neutrophil chemoattractant cytokines by Mycoplasma hominis in alveolar type II cells // Infect. Immun. 1997. - Vol. 65. - N12. - P. 5131 - 5136.

105. Kundsin R., Ampola M., Streeter S., Neurath P. Chromosomal aberrations induced by T strains mycoplasmas // J. Med. Genet. 1971. -Vol. 8,-N2.-P. 181 - 187.

106. Kundsin R., Leviton A., Allred E., Poulin S. Ureaplasma urealyticum infection of the placenta in pregnancies that ended prematurely // Obstet. Gynecol. 1996. - Vol. 87. - N1. - P. 122 - 127.

107. Ladefoget S., Birkelund. S., Hauge S. et al. 135-kilodalton surface antigen of Mycoplasma hominis PG 21 contains multiple directly repeated seguences // Infect. Immun. 1995. - Vol. 63. - N1. - P. 212 - 223.

108. Laemmli U. Clevage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. London. - 1970. - Vol. 227. - P. 680-685.

109. Larsson P., Cano M., Grenabo L. Morphological lesions of the rat urinary tract induced by inoculation of mycoplasmas and other urinary tract pathogens // Urol. Int. 1989. - Vol. 44. - N4. - P. 210-217.

110. Lee Y., Tarr P., Schumacher J. et al. Reevaluation of the role of T-mycoplasmas in nongonococcal urethritis // J. Am. Vener. Dis. Assoc.-1976.- N3.- P. 25 28.

111. Levi N. Mycoplasma in urine and blood following catherisation of patients undergoing vascular surgery // J. Cardiovasc. Surg., Torino. -1997. Vol. 38. - N4. - P. 355 - 358.

112. Li YH., Chen M., Brauner A. Ureaplasma urealyticum induces apoptosis in human lung epithelial cells and macrophages // Biol. Neonate. 2002. - Vol. 82. - N3. - P. 166 - 173.

113. Liepmann M., Gireaudot P., Deletrez J. et al. Use of the Mycoplasma hominis 102-116 kD proteins as antigen in an enzyme-linked immunosorbent assay // Microbios. 1991. - Vol. 65. - P. 7 - 13.

114. Lin J. Human mycoplasmal infections: serologic observations // Rev. Infect. Dis. 1985. - Vol. 7. - P. 216 - 231.

115. Lo SH., Lo ТВ. Cten, a COOH-terminal tensin-like protein with prostate restricted expression, is down-regulated in prostate cancer // Cancer Res. 2002. - Vol. 62. - N15. - P. 4217 - 4221.

116. Lo Sh.-Ch. Apoptotic, antiappoptotic, clastogenic and oncogenic effects // Molecular Biology and Pathology of Mycoplasmas / Eds. Razin Sh., Herrmann R., NY., "Kluwer Academic".- 2002. P. 403 - 416.

117. Logunov DY, Scheblyakov DV, Zubkova O. et al. Mycoplasma infection suppresses p53, activates NF-kappaB and cooperates with oncogenic Ras in rodent fibroblast transformation // Oncogene. 2008. -Vol. 27.-P. 4521 -4531.

118. Ma L., Jensen J., Myers L. et al. Mycoplasma genitalium: an efficient strategy to generate genetic variation from a minimal genome // Mol. Microbiol. 2007. - Vol. 66. - N1. - P. 220 -236.

119. Maniloff J. Phylogeny of mycoplasmas // Mycoplasmas: molecular biology and pathogenesis / Eds Maniloff J. Washington: ASM. - 1992. -P. 549 - 559.

120. Maniloff J., McElhaney R., Finch L., Baseman J.B. Mycoplasmas: molecular biology and pathogenesis. Washington. - 1992. - 654 p.

121. Manimtim W., Hasday J., Hester L. Ureaplasma urealyticum modulates endotoxin-induced cytokine release by human monocytes derived from preterm and term newborns and adults // Infect. Immun. 2001. - Vol. 69. -N6.-P. 3906-3915.

122. Mardth P., Westrom L. Tubal and cervical cultures in acute salpingites with special references to Mycoplasma hominis and T-strain mycoplasma // Brit. J. Vener. Diseases. 1970. - Vol. 46. - P. 179 - 186.

123. Mathur S., Genco P., M0ller В., Mardh P.-A. Antibodies to microbial, leukocyte and organ antigens // J. Reprod. Immunol. 1985. - Vol. 8. -N4.-P. 353 -358.

124. Matsumato M., Nishiguchi M., Texeuchi O. et al. Mycoplasma fermentas lipoprotein M 161 Ag induced cell activation is mediated by Toll-like receptor 2 // 13 th Int. Congr. of IOM, Fukuoka. - 2000. - P. 77.

125. McCutchan J. Epidemiology of veneral urethritis: comparison of gonorrhea and nongonococcal urethritis // Rev. Infect. Dis. 1984. - Vol. -6.-N5.-P. 669-688.

126. McGarrity G., Vanaman V., Sarama J. Cytogenetic effects of mycoplasmal infection of cell cultures // In Vitro. 1984. - Vol. 20. - P. 1 - 19.

127. Melkova R., Kleinova D., Ciznar I. Immunoelectrophoretic analysis of medium-derived antigens bound to the surface of Mycoplasma hominis, Mycoplasma fermentans and Ureaplasma urealyticum // Folia Microbiol. -2000. Vol. 45. - N1. - P. 57 - 60.

128. Misawa S., Aoshima M., Takaku H. et al. High-level expression of Mycoplasma arginine deiminase in Escherichia coli and its efficient renaturation as an anti-tumor enzyme // J. Biotechnol. 1994. - Vol. 36. -N2.-P. 145- 155.

129. Miyata M., Yamamoto H., Shimizu T. et al. Gliding mutants of Mycoplasma mobile: relationships between motility and cell morphology,cell adhesion and microcolony formation // Microbiology. 2000. - Vol. 146.-P. 1311 - 1320.

130. M0ller В., Taylor-Robinson D., Furr P., et al. Serological evidence that chlamydiae and mycoplasmas are involved in infertility of women // J. Reprod. Fertil. 1985.- Vol. 73. - N1. - P. 237 - 240.

131. MollerB., Freundt E. Exp infect, of the genital tract of fetal grivet monkey //Infect, and Immunol. 1979. - Vol. 26. - N3. - P. 1123-1128.

132. Monecke S., Helbig J., Jacobs E. Phase variation of the multiple banded protein in Ureaplasma urealyticum and Ureaplasma parvum // Int. J. Med. Microbiol. 2003. - Vol. 293. -N2 - 3. - P. 203 - 211.

133. Muhlradt P. Immunomodulation by mycoplasmas: artifacts, facts and active molecules // Molecular Biology and Pathogenicity of Mycoplasmas / Eds. Razin Sh., Herrmann R. NY, 2002. P. 445 - 472.

134. Naessens A. Les infections a Ureaplasma urealyticum // Microbiologic. Acta. Urol. Belg. 1993. - Vol. 61. - N1-2. - P. 153 - 156.

135. Nicolson G., Haier J., Nicolson N. Chronic bacterial co-infections in fatiguing and chronic fatigue syndrome patients subsequently diagnosed with diseases // Intern. Confer., Ferrare. -2007. P. 20 - 21.

136. Nyvold C., Birkelund S., Christiansen G. The Mycoplasma hominis PI20 membrane protein contains a 216 amino acid hypervariable domain that is recognized by the human humoral immune response // Microbiology. 1997. - Vol. 143. - N2. - P. 675 - 688.

137. Ollikainen J. Perinatal Ureaplasma urealyticum infection the need for hospital treatment during the first year of life in preterm infants // Pediatric Pulmonology. 2000. - Vol. 30. - P. 402 - 405.

138. Peltier M., Freeman A., Mu H., Cole B. Characterization of the macrophage-stimulating activity from Ureaplasma urealyticum // Am. J. Reprod. Immunol. 2007. - Vol. 57. - N3. - P. 186 - 192.

139. Phillips D. Detection of Mycoplasma contamination of cell cultures by electron microscopy // Mycoplasma infection of cell cultures. New York.- 1978. P. 105.

140. Pich O., Burgos R., Ferrer-Navarro M., Querol E. Mycoplasma genitalium mg 200 and mg 386 genes are involved in gliding motility but not in cytadherence // Mol. Microbiol. 2006. - Vol. 60. - N6. - P. 1509 -1519.

141. Pollack J. Carbohydrate metabolism and energy conservation // Mycoplasmas: molecular biology and pathogenesis / Eds. Maniloff J. et al.- Washington. 1992. - P. 181 - 200.

142. Qi H., Liu X., Gu M. Chlamydia trachomatis and Ureaplasma urealyticum infection in patients with tubal pregnancy // Chung Hua Fu Chan Ко Tsa Chin. 1997. - Vol. 32. - N2. - P. 93 - 96.

143. Razin Sh., Yogev D., Naot Y. Molecular biology and pathogenicity of mycoplasmas // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1998. - V.62. - N4. - P. -1156- 1194.

144. Razin Sh. Comparative genomics of mycoplasmas // Wien Klin. Wochenschr. 1997. - Vol. 109. -N14-15. - P. 551 - 556.

145. Razin Sh. DNA probes and PCR in diagnosis of Mycoplasma infections // Mol. Cel. Probes. 1994. - Vol. 8. - N6. - P. 497 - 511.

146. Razin Sh. Physiology of Mycoplasmas // Adv. Microbiol. Physiol. -1973.-N10.-P. 1-80.

147. Razin Sh., Freundt E. The Mollicutes, Mycoplasmatales and Mycoplasmatacae // Bergey's manual of systematic bacteriology / Eds. Krieg N., Holt J. Baltimore, London. - 1985. - Vol. 1. - P. 740 - 793.

148. Robertson J., Stemke G., Davis J. et. Al. Proposal of Ureaplasma parvum sp. Nov. and emended description of Ureaplasma urealyticum // Int. J. Syst. Evol. 2002. - Vo. 52. - P. 587 - 597.

149. Romano N. Role of Ureaplasma in human infections pathology // Minerva. Med. 1987. - Vol. 78. - N3. - P. 159 - 163.

150. Ruifu Y., Minli Z., Guo Z., Wang X. Biovar diversity is reflected by variations of genes encoding urease of Ureaplasma urealyticum // Microbiol. Immunol. 1997. - Vol. 41. - P. 625-627.

151. Sacht G., Marten A., Deiters U. Activation of nuclear factor-kappa В in macrophages by mycoplasmal lipopeptides // Eur. J. Immunol. 1998. -Vol. 28. - N12. - P. 4207 - 4212.

152. Scott K., Manunta M., Germain C. et al. Qualitatively distinct patterns of cytokines are released by human dendritic cells in response to different pathogens // Immunology. 2005. - Vol. 116. - N2. - P. 245 - 254.

153. Shang XJ, Huang YF, Xiong CL et al. Ureaplasma urealyticum infection and apoptosis of spermatogenic cells // Asian J. Androl. 1999. -Vol. 1.-N3.-P. 127- 129.

154. Shi J., Yang Z., Wang M. Screening of an antigen target for immunocontraceptives from cross-reactive antigens between human sperm and Ureaplasma urealyticum // Infect. Immun. 2007. - Vol. 75. - N4. -P. 2004-2011.

155. Shimizu Т., Kida Y., Kuwano K. A dipalmitoylated lipoprotein from Mycoplasma pneumoniae activates NF-гЛЗ through TLR1, TLR2, and TLR6 // J. Immunol. 2005. - Vol. 175. - P. 4641-4646.

156. Shimizu Т., Kida Y., Kuwano K. Lipid-associated membrane proteins of Mycoplasma fermentans and M. penetrans activate human immunodeficiency virus long-terminal repeats through Toll-like receptors // Immunology. 2004. - Vol. 113. - N1. - P. 121 - 129.

157. Shimizu Т., Kida Y., Kuwano K. Triacylated lipoproteins derived from Mycoplasma pneumoniae activate nuclear factor-kappaB through toll-like receptors 1 and 2 // Immunology. 2007. - Vol. 121. - N4. - P. 473 - 483.

158. Shwartz M., Hooton T. Etiology of nongonococcal nonchlamydial urethritis // Dermatol. Clin. 1998. - Vol. 16. - N4. - P. 727 - 733.

159. SmarsonM., Boonlayangoor S., Lierdt C. Detection of Mycoplasma hominis septicemia by radiometric blood culture // J. Clin. Microbiol. -1985. Vol. 21. - N3. - P. 298 - 301.

160. Smith P. Heterogenecity of mycoplasmal lipids // J. Infect. Dis. 1973. -Vol. 127.-P. 8-12.

161. Smith P., Mayberry-Corson K., Langworthy T. et al Lipopolysaccharides of Mycoplasma // Colloq. Inst. Natl. Sante Reach. Med. 1973. - Vol. 33. - P. 63 - 67.

162. Spooner R., Russell W., Thirkell D. Characterization of the immunoglobulin A protease of Ureaplasma urealyticum // Infect. Immun. 1992. - Vol. 60. - N6. - P. 2544 - 2546.

163. Stemke G., Robertson J. Comparison of two methods for enumeration of mycoplasmas // J. Clin. Microbiol. 1982. - Vol. 16. - N5. - P. 959 -961.

164. Sugimura K., Ohno Т., Kimura Y. et al. Arginine deiminase gene of an AIDS-associated mycoplasma, Mycoplasma incognitus // Microbiol. Immunol. 1992. - Vol. 36.- P. 667 - 670.

165. Svenstrup H., Fedder J., Abraham-Peskir J. et al. Mycoplasma genitalium attaches to human spermatozoa // Hum. Reprod. 2003. - Vol. 18.-N10.-P. 2103 -2109.

166. Swenson C., Toth A., O'Leary W. Ureaplasma urealyticum and human infertility: the effect of antibiotic therapy on semen quality // Fertil. Steril. 1979. - Vol. 31. - N6. - P. 660 - 665.

167. Tait J., Peddie В., Bailey R. et al. Urethral syndrome (abacterial cystitis) search for a pathogen // Brit. J. Urol. - 1985. - N57. - P. 552556.

168. Takamizawa S., Okazaki Т., Machida T. A study of Ureaplasma urealyticum pathogenicity in human genitourinary tract // Kansen-shogaku Zasshi. 1991. - Vol. 65. - N10. - P. 1355 - 1360.

169. Taylor Robinson D. Mycoplasmas and human infections // Int. Conf. on Chlamidia and Mycoplasma human inf, Ferrara. - 2007. - P. 26 - 30.

170. Taylor Robinson D., Csonka, G. et al. Human intra-urethral inoculation of ureaplasmas // J.Med. - 1977. - N46. - 309 - 326.

171. Taylor Robinson D., Purcell R. at al. Urethral infection of chimpanzes by ureaplasma urealyticum // J. Med. Microbiol. - 1978. - N11. - P. 197 -201.

172. Taylor Robinson, D., Csonka, G., et al. Human intra-urethral inoculation of ureaplasmas // J. Med. - 1977. - N46. - P. 309 - 326.

173. Taylor-Robinson D. Evaluation of the role of Ureaplasma urealyticum in infertility // Pediatr. Infect. Dis. 1986. - Vol. 5 (6 Suppl). - P. 262 -265.

174. Taylor-Robinson D. Mycoplasma and mixed infections of the human male urogenital tract and their possible complications // The mycoplasmas / Eds. Razin Sh., Barile M. Orlando. - 1985. - Vol. 4. - P. 28 - 68.

175. Taylor-Robinson D., Furr P. Genital mycoplasma infections // Wien Klin. Wochenschr. 1997. - Vol. 109. - N14 - 15. - P. 578 - 583.

176. Taylor-Robinson D., Furr P. Update on sexually transmitted mycoplasmas //Lancet. 1998. - Vol. 351. - P. 12 - 15.

177. Taylor-Robinson D., Webster A., Furr P., Asherson G. Prolonged persistence of Mycoplasma pneumoniae in a patient with hypogammaglobulinaemia // J. Infect. 1980. - Vol. 2. - N2. - P. 171 -175.

178. Teng L., Zheng X., Glass J. et al. Ureaplasma urealyticum biovar specificity and diversity areencoded in multiple banded antigen gene // J. Clin. Microbiol. - 1994. - Vol. 32. - P. 1464 - 1469.

179. Toth A., Swenson C., O'Leary W. Light microscopy as an aid in predicting ureaplasma infection in human semen // Fertil. Steril. 1978. -Vol. 30.-N5.-P. 586-591.

180. Towbin H., Staehelin Т., Gordon J. Electrophoretic transfer or proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1979. - Vol. 76. - P. 4350 -4354.

181. Tryon V., Baseman J. Pathogenic determinants and mechanisms // Mycoplasmas: molecular biology and pathogenesis / Eds. Maniloff J. et al. Washington. - 1992. - P. 457 - 472.

182. Tsai S., Wear DJ., Shih JW., Lo SC. Mycoplasmas and oncogenesis: persistent infection and multistage malignant transformation // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. - Vol. 92. - N22. - P. 10197 - 10201.

183. Tully J., Taylor-Robinson D., Rose D. et al. Urogenital challenge of primate species with Micoplasma genitalium and characteristics of infection induced in chimpanzees // J. Infect. Dis. 1986.' - Vol. 153. -P. 1046- 1054.

184. Ward P. Neutrophil chemotactic factors and related clinical disorders // Arthritis Rheum. 1970. - Vol. 13. -N2. - P. 181 - 186.

185. Washburn L., Cole В., Gelman M., Ward J. Chronic arthritis of rabbits induced by mycoplasmas. I. Clinical, microbiologic and histologic features // Arthritis Rheum. 1980. - Vol. 23. - P. 825 - 836.

186. Washburn L., Cole В., Ward J. Chronic arthritis of rabbits induced by mycoplasmas. II. Antibody response and the deposition of immune complexes // Arthritis Rheum. 1980. - Vol. 23. - N7. - P. 837 - 845.

187. Washburn L., Cole В., Ward J. Chronic arthritis of rabbits induced by mycoplasmas. III. Induction with nonviable Mycoplasma arthritidis antigens // Arthritis Rheum. 1982. - Vol. 25. - N8. - P. 937 - 946.

188. Weber R., Osborn M., The reliability of molecular weight determination by dodecyl sulfate poly aery 1 amide gel electrophoresis // J. Biol. Chem. Bethesda. - 1969. - Vol. 244. - P. 4406 - 4412.

189. Weiner J., Lummermann C., Ueberle В., Herrmann R. Transcriptomeiand proteomy analyses of Mollicutes // Molecular biology and Pathogenity of Mycoplasma / Eds. Razin Sh., Herrmann R. NY. 2002. - P. 279 -302.

190. Wise K. Adaptive surface variation in Mycoplasma // Trends Microbiol. 1993. -Vol. 1. -N2. -P. 59-63.

191. Witt A., Berger A., Gruber C. et al. IL-8 concentrations in maternal serum, amniotic fluid and cord blood in relation to different pathogens within the amniotic cavity // J. Perinat. Med. 2005. - Vol. 33. - N1. - P. 22 - 26.

192. Zhang Q., Wise K. Coupled phase-variable expression and epitope masking of selective surface lipoproteins increase surface phenotypic diversity in Mycoplasma hominis // Infect. Immun. 2001. - Vol. 69. -N8. - P. 5177 - 5181.

193. Zhang Q., Wise K. Localized reversible frameshift mutation in an adhesin gene confers a phase-variable adherence phenotype in Mycoplasma// Mol. Microbiol. 1997. - Vol. 25. -N5. - P. 859 - 869.

194. Zhang Q., Wise K. Molecular basis of size and antigenic variation of a Mycoplasma hominis adhesion encoded by divergent vaa genes // Infect. Immun. 1996. - Vol. 64. - N7. - P. 2737 -2744.

195. Zhang S., Wear D., Lo S. Mycoplasmal infections alter gene expression in cultured human prostatic and cervical epithelial cells // FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2000. - Vol. 27. N1. - P. 43 - 50.

196. Zhang Sh., Lo SC. Effect of mycoplasmas on apoptosis of 32D cells is species-dependent // Current Microbiol. 2007. - Vol. 54. - N5. - P. 388 -395.

Информация о работе

Балабанов, Денис Николаевич
кандидата медицинских наук
Москва, 2009
ВАК 03.00.07

Диссертация

Антигенемия при урогенитальных микоплазменных инфекциях - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы