Биологические свойства эпизоотических штаммов вируса ящура типов А, О и Азия-1, выделенных в Республике Таджикистан в период с 2006 по 2012 гг.

Косумбеков, Маъруф Имомёрбекович

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Биологические свойства эпизоотических штаммов вируса ящура типов А, О и Азия-1, выделенных в Республике Таджикистан в период с 2006 по 2012 гг.
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Биологические свойства эпизоотических штаммов вируса ящура типов А, О и Азия-1, выделенных в Республике Таджикистан в период с 2006 по 2012 гг."

На правах рукописи

КОСУМБЕКОВ Маъруф Имомёрбековин

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ЭПИЗООТИЧЕСКИХ ШТАММОВ ВИРУСА ЯЩУРА

ТИПОВ А, О и АЗИЯ-1, ВЫДЕЛЕННЫХ В РЕСПУБЛИКЕ ТАДЖИКИСТАН В ПЕРИОД С 2006

ПО 2012 гг.

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

. 1?, НОЯ 2013

Москва-2013

005541533

Работа выполнена в Научно-производственном предприятии «Биологические препараты» Таджикской академии сельскохозяйственных наук.

Научный руководитель: доктор ветеринарных паук, '

член-корреспондент ТАСХН Аноятбеков Музафарбек

Официальные оппоненты: Захаров Валерий Михайлович - доктор

ветеринарных наук, профессор, ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных», эксперт по ящуру «Всемирной организации здравоохранения животных» (МЭБ).

Юров Константин Павлович - доктор ветеринарных наук, профессор, ГНУ «Всероссийский научно- исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко», лаборатория вирусологии, заведующий.

»едущая организация ГНУ «Всероссийский научно-

исследовательский и технологический институт биологической промышленности» (ВНИТИБП), г. Щелково Московской области

Защи та состоится «Ц» декабря 2013 г. в 12°° часов на заседании диссертационного совета Д.220.042.01 при ФГБОУ ВПО «Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» по адресу: 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, дом 23; тел. (495) 377-93-83

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина».

Автореферат разослан « /Д-» / / 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор

Грязнена Т.Н.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Сегодня с учетом высокой генетической вариабельности вируса ящура на первый план в современной стратегии борьбы с данной инфекцией выдвигается необходимость систематического эпн-зоотологического и серологического мониторинга распространения этого постоянно эволюционирующего возбудителя.

В Республике Таджикистан исследования в этом направлении проводятся уже несколько десятилетий (Кожеватова Н.И. 1957,;Рахманин ГШ. 1971, Носов И.И. 1972, Шадибаева Р.Х. 1977, Диев В.И. 1999, Мусиев Д.Г. 2005).

Одна из последних работ в этом направлении выполнена в кандидатской диссертации Муминова Д. М. (2005), где автором обобщены материалы по изучению биологических свойств штаммов вируса ящура типа О и Азия-1, циркулировавших в Таджикистане в период 2001-2004 гг.

Высокая генетическая вариабельность вируса ящура требует периодического лабораторного контроля его свойств.

Кроме того, постоянная угроза заноса новых, антигенно измененных штаммов вируса ящура в страну усиливает вероятность больших экономических потерь л делает актуальным проведение целого ряда профилактических мероприятий: систематические мониторинговые исследования, оперативное выделение эпизоотических штаммов вируса, их детальное изучение, и в первую очередь, степени их соответствия производственным штаммам, используемым для изготовления диагностикумов и про-тивоящурных вакцин.

Изложенное выше обуславливает необходимость и актуальность изучения биологических свойств эпизоотических штаммов вируса ящура, выделенных в Республике Таджикистан в последние десятилетия; их сопоставление с ранее выделенными штаммами; проведении постоянного мониторинга за этой инфекцией.

Цель и задачи исследований. Основной целью реферируемой диссертации является детальное изучение биологических свойств эпизоотических штаммов вируса ящура типа А, О и Азия-1, выделенных в Республике Таджикистан в 2006-2012 гг.

Для достижения поставленной цели в работе определены следующие конкретные задачи:

- изучение биологических свойств штаммов вируса ящура типа А, О и

Азия-1, выделенных на территории Республики Таджикистан в 2006-2012

- изучение антигенного родства штаммов, выделенных на территории Республики Таджикистан в 2006-2012 гг. с помощью РСК, ИФА и РМН; ¡...;.изучение; степеней генетического родства между штаммами вируса ящура, выделенных на территории Республики Таджикистан в 2006-2012 гг. вПЦР; ,

- определение уровней, постинфекционных антител у КРС и коз с помощью реакции ЗАВС-ЕЫ8Д.

■ Научная новизна. Научная новизна работы сострит в том, что в результате^ исследований проведены:

- изучение биологических свойств трех штаммов вируса ящура (А, О, Азия-1), выделенных на территории Республики Таджикистан в 2006 -2012гг.; . ■ ,, ...

. • : - изучение, антигенного, родствз,штаммов вируса ящура с помощью серологических реакций;:

- показаны , антигенные взаимосвязи между производственными и эпизоотическими штаммами вируса ящура типа А, О и Азия-1;

^ изучение, степеней генетического родства штаммов вируса ящура, выделенных на территории Республики Таджикистан в 2006-2012 гг.;

.т рпределение:оптимальных вариантов постановки ИФА при выявлении и идентификации штаммов вируса ящура;......

- выявление уровней,антител к неструктурным белкам вируса ящура в различных категориях хозяйств, у. крупного рогатого скота и коз в Таджикистане. ... . .

Практическая ценность работы. Полученные научные данные позволили значительно скорректировать объёмы проводимых в республике противояшурных мероприятий и использование ее результатов на практике. ,,■ . .-.. ■ •

Изученные . штаммы вируса ящура А/Таджикистан/06, 0/Таджикистан/2011 и Азия-1 Яаджики стан/20.11 послужат основой для изготовления соответствующих вакцин. . . . г ., ,... , . , ...

... Личный вклад соискателя. Экспериментальные данные получены автором,: самостоятельно. Теоретическое, обоснование экспериментов, анализ и обработка полученных данных проведены при непосредственном участии автора. Результаты рабрт;ц опубликованы и апробированы в производственных условиях. , . ,

, Автор выражает нскрещшж) благодарность сотрудникам лаборатории

«Диагностики ящура» НПП «Биологические препараты» и сотрудникам лаборатории «Ящура и везикулярных болезней» и «Диагностики особо опасных болезней животных» ФГБУ «ВНИИЗЖ» за практическую помощь и ценные советы при выполнении работ и оформлений диссертации, а также соавторам научных статей.

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 6 работ, в том числе 3 - в изданиях, рекомендованных BÄK РФ для публикаций материалов кандидатской диссертации.

Апробация работы. Основные положения работы доложены и обсуждены на заседаниях Учёного совета Научно-производственного предприятия «Биологические препараты» ТАСХН в 2002-2013 гг.; научных конференциях (г. Шираз, 2008; Стамбул, 2009; Баку, 2013; 'Ашхабад, 2013; Харьков, 2013 г.), на совещании представителей ветеринарных служб стран СНГ, во ВНИИЗЖ (Владимир, 2013 г.).

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов, методы, результатов собственных исследований, обсуждений, выводов, списка использованной литературы, практические предложения и приложения. Общий объем диссертации составляет 130 страниц компьютерного набора. Список литературы включает 171 источник, из них 72 работы иностранных авторов. Диссертация содержит 16 таблиц и 24 рисунка. В приложении к диссертации имеется 3 документа, подтверждающих результаты' исследований и их внедрение.

Основные положения, выносимые на защиту.

- результаты изучения биологических свойств эпЙзобтИческйх штаммов вируса ящура типа А, О и Азия-1; ■"" '•'■'''

- результаты комплексного изучения антигенного родства между штаммами вируса ящура типа Ä, О и Азия-1; ' 1 -

- результаты серологических исследований по выявлению антйтеЛ к неструктурным белкам вируса ящура у крупного рогатого скота и коз в различных хозяйствах Таджикистана.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Материалы и методы

2.1.1. Вирусный материал. В работе использовали вирусный Материал (афты), полученный от КРС из ящурных1 очагов Таджикистана. Афты отмывали физиологическим раствором от различного рода'загрязйе-

ния и помещали в стерильные флаконы с консервирующей жидкостью (смесь фосфатно-буферного раствора с рН-7,6, с равным объемом химически чистого нейтрального глицерина).

2.1.2. Культуры клеток и питательная среда. Для решения поставленных задач использовали перевиваемые линии культур клеток ПСГК-30. и II3-RS-2, атакже первично-трипсинизированную культуру клеток почки поросят (СП) с формированным плотным монослоем без признаков контаминации и деструкции клеток.

! В работе но культивированию культур клеток и вируса ящура ис-.иользовали следующую питательную среду ИГЛА, 199 ПСС, ПСП, а также гидролизат лактальбумина (ГЛА) на растворе Эрла или Хенкса.

2.2. Методы исследования

2.2.1. Серологические реакции.

а) Реакция связывания комплемента. При выполнении данной работы идентификацию штаммов вируса ящура, определение комплемента связь1ваю1цейактивности испецифичности полученных антигенов и сывороток проводились путем постановки РСК в соответствии с ГОСТ 253554 «Методы лабораторной диагностики ящура».

... Изучение антигенного родства методом РСК выполнялись согласно .^Методическим, указаниям, по выявлению и идентификации штаммов вируса ящура», утвержденным Департаментом ветеринарии МСХ РФ 10.11.2002 г.

б) Реакция микронейтрализации. Реакцию ставили на планшетах фирмы «Costare микрометодом, согласно «Методическим указаниям по выявлению ,и идентификации штаммов вируса ящура», утвержденным Департаментом ветеринарии МСХ РФ 10.11.2002 г. и согласно «Методическим указаниям по определению антигенного соответствия между производственными штаммами вируса ящура и эпизоотическими в РМН, утвержденной диреетором ФГБУ «ВНИШЖ» 08.02.2008 г.

в) Иммуноферментный анализ. Титры специфических противоя-щурных антител в сыворотках крови животных определяли в непрямом жидкофазном блокирующем варианте ИФА в соответствие с инструкцией по применению «Набора для определения противоящурных антител в сыворотках крови животных в ИФА».

г) НДР и нуклеотидное секвенирование. Выявление вируса ящура проводились с использованием полимеразной цепной реакций после обратной транскрипции РНК вируса ящура. ПЦР выполняли в соответствии

с «Методическими указаниями по индикации генома и штаммовой дифференциации вируса ящура методом нолимеразной цепной реакции и ёе-квенированием гена УР1», утвержденными Департаментом ветеринарии МСХ РФ 21.02.1997 г.

2.2.2. Статистическая обработка результатов.

Статистическую обработку результатов проводили ио методу Стью-дента. Среднее значение, среднеквадратичные ошибки вычислялись по известным формулам. Средняя ошибка каждого опыта при постановке ИФА составляла не более 0,43 При постановке РСК она составляла 0,11-0,30

Диагностическая ценность полненных результатов исследований рассчитывали по формулам, изложенным в работе «Быстрые методы статистической обработки и планирование экспериментов» И.ГТ. Ашмарйна и др.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Анализ эпизоотической ситуации по ящуру в Республике Таджикистан за 2001-2012 гг.

Ящур в Таджикистане имеет давнюю историю. Так, по данным Министерства сельского хозяйства Республики Таджикистан еще в советские времена Таджикистан был самой неблагополучной республикой по ящуру, где с 1954 г. по 1991 г. были зарегистрированы 3152 неблагополучных пунктов.

При распределении вспышек болезни за 2001-2012 гг. по месяцам, выявлены два пика вспышек, которые ежегодно приходятся на май и октябрь. Болезнь наблюдается повсеместно, однако чаще в Центральном Таджикистане - 61% (РРП) и в Хатлонской области - 30% от общего ко-: личества идентифицированных вспышек.

Из 64 вспышек ящура 2001-2012 гг. в РСК в 11 случаях идентифицирован вирус ящура типа-А, в 31-типа О и в 22-типа Азия-1. При этом вируса типа О выявлялся практически ежегодно, а тип Азия-1 в основном, в 2003 и 2011 гг.

Необходимо отметить, что в 2004-2012 годы в республике все вспышки ящура наблюдались в зонах вакцинации трехвалентной вакциной (А, О, Азия-1). Болезнь в основном протекала в слабой форме, и животные бтйоейтельно' быстро выздоравливали. По-видимому^ это связано

с несоответствием антигенных свойств полевого штамма вируса ящура такой вакциной. В республике после вспышки ящура типа Азия-1 в 2003 году и до настоящего времени используется трехвалентная противоя-щурная вакцина.

3.2. Культивирование вируса ящура типа А/Таджикистан/06 в

клеточных культурах.

На первом этапе работы патологический материал, доставленный из первичного очага инфекции, в виде афт с языка крупного рогатого скота был типирован с помощью ЙФ'А. Результаты типирования полевых афтозных материалов были подтверждены методом полимеразной цепной реакции специалистами лаборатории диагностики особо опасных болезней животных ФГБУ «ВНИИЗЖ» (зав. лабораторией к.б.н. А.В. Щербаков), где также была выявлена РНК вируса ящура типа

А/Таджикистан/06.

Вирусовыделение из проб патологического материала и изучение репродуктивных свойств вируса проводились на первично трипсинизиро-ванной культуре клеток СП и перевиваемых культурах клеток свиного происхождения ПСГК-30 и 1ВК8-2. Полученные результаты представлены в табл. 1.

Та%идаI. Изучение репродукции в культурах клеток изолята вируса ящура типа А/Таджикистан/06

. Система репродукции вируса ящура Время проявления биологической активности ЦПД (час) Количество адаптационных пассажей. Характеристика адаптированного материала

активность в РОС Титр инфекционное™ в ^ ТЦД 5о/мл

СП , 21 3. ■ 1:4 5,33 ±0,12

ПСГК-30 20 3 1:4 5,25 і 0,25

IВ-11.8-2 25 3 1:8 5,66 ±0,20

Результаты исследований показали, что изолят вируса ящура типа А/Таджикистан/06, адаптировелся на 3-4 пассаже ко всем используемым культурам клеток (ПСКГ-30, СП и ЩгК8-2), вызывая ЦГІД в течение 2025 часов после заражениями вжапливался.р титтом^инфекционнои щ-

тивности от 5,25, до 5,66' 1§ТЦД5о/мл. При этом; наибольшее накопление общего вирусного белка, 1468, 1465+755 компонентов происходила в перевиваемой линии культуры клеток 1В-И5-2; 1 г • ■ и <

3.3. Изучение антигенного родства штамма А/Таджикисган/06 методом РСК. ■ "'"

Для изучения и определения антигенного родства штамма вируса ящура А/Таджикистан/06 в РСК были получены антигены и гиперим-мунпые сыворотки морских свинок.

Антигены получали культивированием вируса ящура в монослой-ной культуре клеток ПСГК-30 и 113-1*5-2. ! '

Культуральны^ГкошхентрированпыГганТиген (100-400 раз) после инактивации и добавления масляного адъюва'нта Использовали в дальнейшем для гипернммунизацнй морских свинок с целью получения гипериммунных сывороток. Предельный титр гинсриммушюи штаммоспе-цифической сыворотки составлял 1:40 - 1:80. >

Результаты, полученные При определении антигенного родства эпизоотического изоляТа вируса ящура типа А/Таджикистан/06 производственным штаммам А2УУ°550 Азербайджан/64, А22Ирак/24/64 и А/Турция/06, а так же эпизоотическому изоляту А/Ираи/05 в РСК; •

Согласно ВгоокяЬу 1.В., штаммы, имеющие Степень родства (11%) 70% и более, относится к одному подтипу. 32-70% - к разным подтипам, 10-32% - к сильно отличающимся подтипам, и менее 10%-к разным тинам. Следовательно, Из рёзультатов проведенных исследований по определению антигенного родства вируса ящура Типа А/Таджикистан/06, представленных в таблице 2 можно сделать вывод, что изолят А/Таджикистан/06 антигённо близкородственен изоляту А Иран/05, поскольку антигенное родство составило 70%, но сильно отличался от производственных штаммов вируса' ящура А22№550 Азербайджан/64 и А/Турция/06, степень родства с которыми составляла: 13% и 10%, соответственно! При изучении антигенного родства '¿ производственным штаммом 'А22Йрак/24/64 было установлено, что в даннбмЧйуиаеГёнтйГен-ное сходство составило 32%. Следовательно, данные штаммы могли быть отнесены к разным подтипам.

3.4. Изучение антигенного родства штамма А/Таджикистан/06 в

рмн ' . ; ...................

Нами был проведен ряд опытов по определению антигенного род-

сгва штамма вируса ящура А/Таджикистан/06 с производственными штаммами типа А, используемыми в настоящее время для производства вакцинных и диагностических препаратов в РМН.

Для этого на базе лаборатории биотехнологии ФГБУ «ВНИИЗЖ» были получены сыворотки крови КРС А22№550, А22Ирак/24/64, А/Турция/06, А/Иран/97 однократно иммунизированного моновалентными вакцинами, которые использовались в качестве референтных. Кровь для получения референтных сывороток отбирали на 21-35 сутки после вакцинации. Титр каждой пробы сыворотки крови определяли в реакции микронейтрализации с производственным гомологичным штаммом вируса ящура. Сыворотки крови с титром противоящурных антител не ниже 1:45 объединяли в серии (пулы) и титровали повторно. Непосредственно перед постановкой реакции пулы референтных сывороток крови разводили поддерживающей средой Игла в соотношении 1:4 и инактивировали на водяной бане в течение 45 мин при температуре 56°С для устранения

действия неспецифических ингибиторов.

в первой . серии опытов изолята вируса ящура типа А/Таджикистан/Об исследовали на антигенное соответствие производственному штамму А22№550 (определение г,) микрометодом в РМН, с использованием КК 1В-Я8-2 с 3-мя сериями сывороток крови КРС, полученными на 35 день после иммунизации моновалентной инактивирован-ной сорбированной вакциной из штамма вируса ящура типа А22Х°550 в обычном и удвоенном объеме (серия 1-й 2) и эмульсионной вакциной (серия 3). Титры вируснейтрализующих противоящурных антител в сыворотках крови определяли в РМН Против 100 тцд50 гомологичного вируса.. Сыворотки крови иммунных животных, имевшие, титры вируснейтрализующих антител не ниже 1:64 объединяли в серии, расфасовывали, и, хранили при -20°С и в дальнейшем использовали для определения одностороннего антигенного соответствия в РМН (табл. 2).

Таблица 2. Результаты изучения в РМН антигенного соответствия изолята вируса А/Таджикистан/Об производственному штамму вируса ящура Аи №550 (п=3)

Полевой изолят сыворотка крови вакцинированного КРС, г 1

серия 1 серия 2 серия 3

А/Таджикистан/06 0,17 0,19 0,28

Установлено, что полевой изолят, принадлежащий к линии А/Иран/05, антигенно отличается от производственного штамма вируса ящура типа А^ №550. Поскольку при Г|>0,3 полевой изолят и производственный штамм являются близкородственными, вакцина из производственного штамма будет защищать от эпизоотического вируса. При Гі<0,3 - полевой изолят отличается от производственного штамма, вакцина из данного штамма не способна защищать животное от циркулирующего вируса.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что вакцина из данного штамма не будет защищать животных от вируса, циркулирующего в Таджикистане, так как все показатели г і были <0,3.

Так же было изучено соответствие (г1) изолята А/Таджикистан/06 сывороткам крупного рогатого скота, иммунизированных моновалентными вакцинами, изготовленных из производственных штаммов А22№550, А22Ирак/24/64, А/Иран/97 и изолята А/Турция/06, которые относятся к разным генетическим линиям вируса ящура (табл.3).

Таблица 3. Результаты определения в РМН антигенного соответствия (г1) изолята вируса ящура типа А/Таджикистаи/06 производственный штаммам типа А

Изолят Сыворотки ГІ . ,

А22№550 А22Ирак/24/64 А/Турция/06 А/Иран/97

А/Таджикистан/Об. 0,19 0,17 0,125 0,35

Из данных приставленных в таблице 3 видно, что изолят вируса ящура типа А/Таджикистан/06 не является антигенно родственным производственным штаммом вируса ящура типа А22№550, А22Ирак/24/64 и вирусу ящура типа А/Турция/06, поскольку полученный в РМН показатель г, был менее 0,3. Однако было установлено, что данный изолят имеет антигенное родство , с производственным штаммом А/Иран/97 (г,= 0,35).

3.5. Изучение антигенного родства штамма А/Таджикистан/06 в ИФА.

Для антигенного соответствия штамма А/Таджикистан/06, сыворотки получали путем иммунизации КРС моновалентной вакциной при-

готовленной из производственного штамма А22№550, и последующим взятием сывороток Крови на 21 день после иммунизации, затем каждой группе сыворотку объединяли в пул для нивелирования индивидуальных различий: В пулы1 вводили сыворотки, имеющие приблизительно одинаковое титры антитёл. Сыворотки были исследованы с помощью ИФА. В реакций использовали инактивированный концентрированный антиген штампа А/1эджйкистан/06.

Предварительно антиген был оттитрован в диагностической системе А (набор Для ЬПредйїеніїЯ противбящурных антител, Пербрайт, Ан-

С.ыворотки исследовались с помощью жидкофазногб блокирующего варианта ЙФА. Результаты показали, что штамм А/Таджикистан/06 отличается от штамма А22№550. Их антигенное родство г1 было равно 0,'25 в ЙФА для "штамма А/Таджикистан/06, что по критериям Т.Я. Оое1 свидетельствует о значительном отличии эпизоотического изолята от вакцинного штамма А22№550 и вакцина с антигенами А22№550 не защитит животных от полевого изолята вируса ящура А/Гаджикистан/06.

При изучений в РМН антигенного соответствия изолята А/Таджикйстан?Об' другим штаммам установлено, что он значительно отличается от вакцинных штаммов А22№550 Азербайджан/64, А22Ирак/24/64,- вируса ящура АЛурция/06, также принадлежащего к группе А/Иран/05 (показатель г! был менее 0,3), однако антигенно родственен производственному штамму. А/Иран/97,(г1-0,35).

При исследовании изолята в.ПЦР с последующим секвенированием было изучено его филогенетическое взаимоотношение с другими вирусами типа А.

Филогенетический ; анализ изолята вируса ящура типа АЛ аджикистан/06 показал, что он относится к генетической группе вируса ящура А/Иран/05 топотипа Азия.

3.6. Биологические особенности эпизоотического штамма

0/Таджикистан/2011

Вирусовыделение из пробы патологического материала проводили на перевиваемых культурах клеток (КК) ПСГК-30 и 1В-Я8-2,№олят в 1 пассаже вызывал ЦПД в КК ПСГК-30 в первые сутки после заражения. Полное ЦПД наблюдали через 45-47 ч,- после инокуляции-вируса. При последующих пассажах, в той же культуре клеток, вирус вызывал полное

ЦПД в течение 18-20 ч после заражения. В 4 пассаже вирус накапливался в титрах 5,75 и 6,5 .^ ТЦЦм/мл при титровании в первично трипсинизи-рованной культуре клеток СП и 5,0 и 4,75 ^ ТЦД«0/5оМкл при титровании микрометодом в 96-луночных планшетах в КК1В-118-2.

При проведении 1 пассажа в КК 1В-118-2 полное ЦПД наблюдали через 47 ч после инокуляции изолята. При дальнейших пассажах вирус вызывал ЦПД в КК 1В-Я8-2 в течение 18-28ч после инокуляции, и к 3 пассажу имел титры инфекционной активности при титровании в КК СП 6,25 и 6,5 ТЦД50/мл. При титровании микрометодом в КК Ш-118-2 титр вируса достигал 4,85 и 5,15 ^ ТЦД5олоМКЛ.

В РМН установлено антигенное соответствие штамма типа О, используемый для изготовления . вакцин (табл.4), Щтамм 0/Таджикистан/2011 имел близкое антигенное родство со штаммами 0| Маниса и О/ПанАзия-2, но антигенно отличался от штамма 0/Приморский/2000 (Россия/2000).

Таблица 4. Результаты определения в РМН антигенного соответствия (г,) изолята вируса ящура типа 0/Таджикистан/2011 производственным штаммам типа О

Изолят СыВОрОТКИ, Г)

Oi Маниса 0/Приморский/2000 О/ПанАзия-2

О/Таджикистан/2 011 0,77 0.21 0,76

Примечание: - при значении гi>0,3 полевой изолят и производственный штамм являются близкородственными, и вакцина из производственного штамма будет защищать от эпизоотического вируса;

- при значении ri<0,3 полевой изолят отличается от производственного штамма, и вакцина из данного штамма не защищает от эпизоотического вируса.

При исследовании изолята в ПЦР с последующим секвенированием изучено его филогенетическое взаимоотношение. Установлено, что эпизоотический штамм 0/Таджикистан/2011, принадлежит к генетической линий вируса ящура О/ПанАзия-2, топотипа Средний Восток - Южная Азия (ME-SA). Изолят отличается по генетическим свойствам от вакцинных штаммов OiMaHHca и 0/Приморский/2000, но в генетическом отношении близок вакцинному вирусу О/ПанАзия-2;

3.7. Биологические особенности эпизоотического штамма Азия-1/Таджикистан/2011.

Данный изолят вируса был адаптирован к культурам клеток СП, ПСГК-30 и 1ВК8-2. Вирус вызывал 100% ЦПД через 48-24 ч во всех использованных культурах клеток, начиная с 1 пассажа, и имел титр ин-фекционйой активности в 6,5-7,0^ ТЦДзо/мл.

Результаты изучения в РМН антигенного соответствия изолята производственному штамму вируса ящура Азия-1/Шамир 3/89 приведены в таблице 5. Из данных представленных в таблице следует, что штаммы имеют существенные антигенные отличия, следовательно, вакцина из антигена вируса ящура Азия-1/Шамир 3/89 не защитит животных от циркулирующего в 2011 г. в Республике Таджикистан вируса ящура типаАзия-1. -"

Таблица 5. Результаты изучения в РМН антигенного соответствия изолнта вируса ящура Азия-1/Таджикистан/2011 производственному • -й'>. штамму Азин-1/Шамир 3/89

Изолят '" Сыворотка производственного штамма, г і

Азии-1/Шамир 3/89

Азия-1 /Та джикистан7201Г 0,22

При исследовании изолята в ПЦР с последующим секвенированием изучено филогенетическое взаимоотношение штамма Азия-1/Таджикистан/2011 и Азии-1/Шамир 3/89 установлено, что изолят вируса ящура Азия-1/Таджикистан/2011 не соответствует производственному штамму Азии-1/Шамир 3/89.

3.8. Серологические исследования по выявлению антител к неструктурным белкам вируса ящура у крупного рогатого скота и коз в Республике Таджикистан

Для выявления антител к неструктурным белкам вируса ящура, позволяющих отличить инфицированных животных от вакцинированных, использовали серологический тест, так называемый ЗАВС-ЕЫБА. Исследования проводились по всей территории республики. По методу

случайной выборки были отобраны 109 эпизоотологических единиц, в том числе 80 кишлаков, 16 племенных и 13 молочных ферм по всей территории республики*', v ; ; ¿>r : = f h i

В результате исследований бяло установлено, что от 60 до 94% кишлаков были поражены вирусом ящура в период с сентября по декабрь 2010 года. Наибольший уровень неблагополучия наблюдался в Хатлон-ской области, наименьший в ГБАО. В среднем, в указанный период более 80% кишлаков были поражены вирусом ящура.

Уровень антител к неструктурным белкам вируса ящура в племен-, ных и молочных хозяйствах, также был высоким (табл.6). Из 31 племенного хозяйства и ферм республики, для исследования были отобраны 16, из которых в 13-ти (81%) была обнаружена циркуляция вируса ящура с помощью ЗАВС-ELISAj Среди 13-ти отобранных по принципу случайной выборки из 133 молочных хозяйств антитела к 3ABC ацтигенам вируса ящура выявлены в 8 (61%). ;.

Таблица 6. Результаты ЗАВС теста на обнаружения антител к вирусу

ящура в хозяйствах

ТИП ХОЗЯЙСТВА ХОЗЯЙСТВА

Количество Исследовано Заражено % "

ПЛЕМЕННЫЕ 31 16 13 81

МОЛОЧНЫЕ 133 13 8 61

Таким образом, серологические исследования на ящур с помощью выявления антител к неструктурным белкам вируса показали, что инфекция имеет широкое распространение в хозяйствах всех категорий, а эпизоотии протекают с высокой интенсивностью, как среди крупного рогатого скота, так и среди коз. Это указывает на то, что стратегия вакцино-профилактики болезни, использовавшаяся на тот момент в Республике Таджикистан, было малоэффективной и являлось одной из предпосылок к развитию эндемичности заболевания,

В многопрофильных животноводческих хозяйствах, при недостаточности вакцины в первую очередь было необходимо вакцинировать крупный рогатый скот, как биологически более чувствительный вид и более предрасположенный к вирусоносительству.

4. ВЫВОДЫ

1. Проведенный анализ эпизоотической ситуации по ящуру в Республике Таджикистан периода 1991-2012 гг. свидетельствует о длительном^ неблаМЙлучии страны по этой болезни. Вспышки ящура регистрировались е^Шдно и были обусловлены вирусом ящура типов А, О и Дзия-1. Из 64 вспышек ящура 20Ó1-2012 гг. в РСК в 11 случаях идентифицирован вирус ящура типа-А, в 31- тип О и в 22-Азия-1. При этом тип О вируса ¿¿[¡явйялся практически ежегодно, а тип Азия-1 - в основном, в 2005 году. Болезнь чаще наблюдалась в Центральном Таджикистане -71% (РРП) и в Хатлонской области - 20% от общего количества идентифицированных вспышек. Необходимо отметить, что начиная с 2005 года вспышки ящура, наблюдались в стадах и отарах, где проводилась профилактическая вакцинация животных трёхвалентной вакциной, содержащей антигены вирусов типа А, О и Азия-1, что говорит о'несоответствии'по-.

левых штаумрц.производственным. .

2. Вспышки ящура в Таджикистане наблюдались ежегодно с пиком в майе и октябре. Данное эпизоотологическое явление, приходиться на ве-сешшГ иосённШГ период миграции овец и коз на сезонные пастбища. Постоянная миграция мелкого рогатого скота, по-видимому, является одним из основных факторов распространения и эндемичности ящура.

3. Филогенетический анализ изолята вируса ящура АЯаджикйстан/2006 показал; что он относится к генетической группе вируса^щура А/Иран/0.5 топотипа Азия.

4. При ..изучении в РМН антигенного соответствия изолята АЛ аджик>;с'тан/200б другим штаммам установлено, что он значительно отличаете* ¿ от ! вакцинных' штаммов А22№550 Азербайджан/64, Л22Ирак/24/б4, вируса, ящура АЛГурция/06, также принадлежащего к группе А/Ир^/05 (показатель г, был менее 0,3), однако антигенно род-ственец производственному штамму А/Иран/97 (ri=0,35).

5. Установлено, что эпизоотический штамм О/ Таджикистан/2011, выделенный в Таджикабадском районе, принадлежит к генетической линии вируса„ящуря. 0-ПанАзиЯг2, топотипа Средний Восток - Южная Азия (ME-SA). Изолят отличается по антигенным свойствам (П<0,3) вакцинных штаммов О, Маниса и .0/Россия/2000, а также штамма 0/Таджикистан/2001, но антигенно близок вакцинному вирусу О-ПаиАзия-2.

6. Установлено, что изолят вируса ящура Азия-1/Таджикистан/2011 не соответствует производственному штаммам Азии-1/Шамир 3/89, и, Азия-1 №48, следовательно, вакцина на основе данного штамма не защитит животных от заражения эпизоотическим штаммом,- Азия-1/Таджикистан/2011. Штамм Азия-1/Таджикистан/2011 значительно о тличается, также от штамма Азия-1/Таджикистан/2004.1; < ■ ; . ъ »; ;, ^

7. Все выделенные вирусы при сопоставлении с базой данных Нер-брайта не являются чем-то оригинальным, а полностью Соответствовали штаммам, циркулировавшим на период выделения в Азиатском регионе. Эти данные свидетельствуют о заносном характере г случаев ящура в республике.

8. В реакции ЗАВС-БЫвА антитела к неструктурным белкам вируса ящура выявлены в 94% кишлаков от числа охваченных исследованиями в Хатлонской области, в 85% кишлаков - в РРП, в 84% - в Согдийской области и в 60% - от исследованных кишлаков ГБАО. Уровень инфицированное™ животных в кишлаках составлял, соответственно: 44%, 43%, 36% и 11% от числа исследованных. В 81% племенных и 61% молочных фермах крупного рогатого скота были выявлены антитела к неструктурным белкам вируса ящура, в которых соответственно: у 49% и 19% от всех обследованных животных были выявлены такие антитела. В 60% исследованных кишлаках РРП у коз выявлены антитела к НС белкам. Уровень антител к неструктурным белкам у животных при этом составил 29,2%..

9. Высокий процент инфицированности коз в Таджикистане свидетельствовал о существенном эпизоотологическом значении этого вида животного при ящуре. Серологические исследования на выявление антител к неструктурным белкам вируса показали широкое распространение ящура во всех категориях хозяйств с высокой интенсивностью как Ьреди крупного рогатого скота так и среди коз. Это указывало на то, что стратегия вакцинопрофилактики болезни, использовавшаяся на тот момент ь Республике Таджикистан, являлась малоэффективной и служила одним из причин развития эндемичности заболевания.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

По результатам исследований была разработана и составлена нормативно-техническая документация:

- «Инструкция; о мероприятиях но борьбе с ящуром животных» (2008

^, - «Рекомендация по .отбору и .хранение: патологического материала ДЛЯ исследования ящура ЖИВОТНЫХ» (2010 г); ■ •>, , : -Г; : , Г ■1 -'«Инструкция к лабораторным исследованиям ящура в иммунофер-

ментном анализе» (2010 г). ,,

Изученные штаммы , вируса ящура А/Таджикистан/06, 0/Таджнкистан/2011 и Азия-1 Таджикистан/201,1 депонированы в коллекцию микроорганизмов = ФГБУ : «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» и рекомендованы для изготовления вакцины против указанных ТИПОВ яшура. •■'■'• ' •■ ' ' - '„.¡г:-! т-щ •■■•■С. г^Ш!!":;';

'! Разработанные мероприятия по эпизоотологическому^анализу и диагностике ящура внедрены п практику ветеринарной службы Таджикиста-

на.

6 список опубликованных работ по теме .-/..wyi диссертации

1 Эпизоотическая ситуация по трансграничным болезням животных в Таджикистане / Джумаев ШЛІ., Бобоев Г.Ю., Косумбеков М.И. и др. И ж. Ветеринария: изд-во. «Эчод».- Душанбе.- 2005,- № 4.- С. 15-18.

,2. Изучение изолятов вируса ящура типов А, О, Азия-1 выделенных в 2002-2003гг. в Республике Таджикистан '/' СР. Кременчугская, A.B. Щербаков, М.И. Косумбеков и др. //Российский ветеринарный журнал,

изд-во «КолосР>-Москва.-2008.-№ 3.-С. 18-21.

3. Хусусиятхои иммунобиологии вируси вабои сумдарди хаивонот намуди «А»-и дар Точикистон ошкор карда шуда / Косумбеков М.И., Аноятбеков М.А., Вискова Т.К. и др. // Гузоришхои Академияи илмхои кишоварзии Точикистон. нащриёти ООО «Эр-граф»-Душанбе.-20И.-

4 Серологические исследования ящура в Таджикистане /Косумбеков М.И., Мурватуллоев С.А., Аноятбеков М- и др. // Межведомственном научном тематическом сборнике «Ветеринарная медицина». иЗДійо>ТОВ«НТМТ>ь Харьков,- 2012. № 96,,-,С. 31-32.

5 Биологические особенности изолята вируса ящура тица ^выделенного в Таджикистане /М.И. Косумбеков, М.А. Аноятбеков, С.А.

Мурватуллоев и др. // Доклады Таджикской академии сельскохозяйственных наук, изд-во ООО «Эр-граф»-Душанбе.-2013. №3. - С.60-62.

6. Филогенетический анализ изолята вируса ящура / Аноятбеков М., Мурватуллоев С.А., Косумбеков М. и др. // «Основные напровления совершенствования ветеринарных услуг в эпоху могущества и сча-стья»./Материалы Международной научной конференции, изд-во «Ои111^упуп»-Ашхабад-2013 .-С. 165-166.

Сдано в печать 8.11.2013 т. Разрешено в печать 9.11.2013 і Формат 60ч84 '/,6. Гарнитура Литературная. Объем 1,5 п Бумага офсетная. Печать офсетная. Тираж 130 экз. Заказ №23/13.

Издательство «Истеъдод». 734025, г. Душанбе, проспект Рудаки, 36. Тел.: 221-95-43. E-mail: istedod2010@mail.ru

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Косумбеков, Маъруф Имомёрбекович, Москва

Научно-производственное предприятие «Биологические препараты» Таджикской Академии сельскохозяйственных

наук

КОСУМБЕКОВ Маъруф Имомёрбекович

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ЭПИЗООТИЧЕСКИХ ШТАММОВ ВИРУСА ЯЩУРА ТИПОВ А, О И АЗИЯ-1, ВЫДЕЛЕННЫХ В РЕСПУБЛИКЕ ТАДЖИКИСТАН В ПЕРИОД С 2006 ПО 2012 ГГ.

06.02.02 -ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени кандидата биологических наук

04201450377

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, член-корреспондент ТАСХН Аноятбеков Музафарбек

МОСКВА-2013

-2-

ОГЛАВЛЕНИЕ

1. Введение......................................................................... 5

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ....................................................... 9

2.1. Ящур как мировая проблема в инфекционной патологии животных..................................................................................... 9

2.2. Современная эпизоотическая ситуация по ящуру

в Дальне - Восточном и Центрально-Азиатском регионах.................... 14

2.3. Биологические особенности вируса ящура......................................... 21

2.4. Методы изучения биологических свойств вируса ящура и противоящурных антител к нему................................................................ 25

2.5. Меры борьбы и профилактика ящура....................................... 41

2.6. Заключение по обзору литературы.1.^........................................ 45

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ......................................... 47

3.1. Материалы и методы......................................................... 47

3.1.1. Материалы..................................................................... 47

3.1.1.1. Вирусный материал.......................................................... 47

3.1.1.2. Подопытные животные...........:........................................ 47

3.1.1.3. Культуры клеток и питательные среды................................. 48

3.1.1.4. Сыворотки крови............................................................ 48

3.1.1.5. Оборудование, химические реактивы, растворы..................... 48

3.2. Методы исследования...............г......'.................................. 50

3.2.1. Выделение вируса ящура.................................................... 50

3.2.2. Культивирование вируса ящура в клеточных культурах............. 50

3.2.3. Серологические реакции .................................................... 51

3.2.4. Титрование вируса ящура ................................................. 54

3.2.5. Статистическая обработка результатов.................................. 54

4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ ................... 55

4.1. Анализ эпизоотической ситуации по ящуру в Республике Таджикистан в 2001-2012 гг.......................................................................... 55

4.2. Изучение биологических свойств эпизоотических штаммов, выделенных в Таджикистане......................................................................... 64

4.2.1. Типирование и выявление вируса ящура из патологического материала с помощью ИФА........................................................ 64

4.2.2. Изучение биологических свойств штамма вируса ящура типа А/Таджикистан/06/Нурабад......................................................... 65

4.2.2.1. Культивирование вируса ящура типа А/Таджикистан/06/Нурабад

в клеточных культурах.......................................................... 65

4.2.2.2. Изучение антигенного родства штамма А/Таджикистан/06/Нурабад методом РСК......................................................................... 67

4.2.2.3. Изучение антигенного родства штамма А/Таджикистан/06/Нурабад в РМН................................................................................... 69

4.2.2.4. Изучение антигенного родства штамма А/Таджикистан/06/Нурабад в ИФА................................................................................... 71

4.2.2.5. Филогенетический анализ изолята вируса ящура типа А/Таджикистан/06/Нурабад........................................................ 73

4.2.3. Биологические особенности эпизоотического штамма 0/Таджикистан/Т52/2011.............................................................................. 74

4.2.4. Биологические особенности эпизоотического штамма

Азия 1/Таджикистан/2011/Шурабад....................................................... 77

4.3. Серологические исследования по выявлению антител к неструктурным белкам вируса ящура у крупного рогатого скота и коз в Республике Таджикистан............................................................................. 80

5. ОБСУЖДЕНИЕ.................................................................... 85

6. ВЫВОДЫ........................................................................... 101

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ......................................... 104

8. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ........................................................ 105

9. ПРИЛОЖЕНИЯ.................................................................. 127

I !0<

Список сокращений

АЭЭИ - аминоэтилэтиленимин;

ГД 50/мл - генерализованная доза для морских свинок;

ГЛА - гидролизат лактальбумина;

ГБАО - Горно-Бадахшанская автономная область;

ИД50 - доза вируса, вызывающая заболевание ящуром у 50%

зараженных животных;

ИФА - иммуноферментный анализ;

КББ - карбонат-бикарбонатный буфер;

КК - культура клеток;

КРС - крупный рогатый скот;

MPC - мелкий рогатый скот;

МСХ - министерства сельскохозяйство;

МЭБ - международной эпизоотический бюро;

ПСГК-30 - перевиваемая линия культуры клеток почки сибирского

горного козерога;

ПЦР - полимеразная цепная реакция; ; ,

РМН - реакция микронейтрализации;

РН - реакция нейтрализации;

РСК - реакция связывания комплемента;

РРП - районы республиканского подчинения;

СП - первичная культура клеток свиной почки;

ТЦД50/мл - 50% тканевая цитопатическая доза вируса;

ТАСХН - Таджикская академия сельскохозяйственных наук; j

ФБР - фосфатно-буферный раствор; ЦПД - цитопатическое действие вируса, на клетку; IB-RS - перевиваемая культура клеток почки свиней; 3 ABC - неструктурные белки вируса ящура;

FAO - продовольственная и сельскохозяйственная организация ООН.

1. ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В Республике Таджикистан исследования по изучению биологических и антигенных свойств вируса ящура проводятся уже несколько десятилетий (Кожеватова Н.И. 1957, Рахманин П.П. 1971, Носов И.И. 1972, Шадибаева Р.Х. 1977,'Диев В.И. 1999, Мусиев Д.Г. 2005). Одна из последних работ в этом плане выполнена Муминовым Д.М., в кандидатской диссертации которого обобщены материалы по изучению биологических свойств штаммов вируса ящура типов О и Азия-1, циркулировавших в Таджикистане в период 2001-2004 гг. [54].

Однако, принимая во внимание существующую постоянную угрозу заноса новых антигенно измененных штаммов ящура в страну, в особенности в регионы граничащие с Афганистаном, Республикой Кыргызстан и Китаем, возможность при этом больших экономических потерь, представлялось актуальным продолжение систематических мониторинговых исследований в нашей стране по оперативному выделению эпизоотических изолятов вируса, их изучению, и в первую очередь степени их соответствия производственным штаммам, используемым для изготовления диагностикумов и противоящурных вакцин.

Систематическое изучение эпизоотических штаммов необходимо не только для классификации вирусов, что имеет важное теоретическое значение, но и в плане сравнительного исследования антигенных свойств

/Г

эпизоотических и производственных штаммов, из которых готовятся противоящурные и диагностические препараты.

Ящур — особо опасная, карантинная вирусная болезнь сельскохозяйственных и диких парнокопытных животных, опасность которой обусловлена высокой кон^гагиозностью, изменчивостью и генетическим разнообразием возбудителя, множественностью путей передачи инфекции, узкой специфичностью приобретенного иммунитета у

животных, ограничивающегося рамками определенного серотипа (Нес^ег 1981).

Возбудитель ящура, относящийся к роду афтовирусов, семейства пикорнавирусов, является пантропным возбудителем, размножающимся во многих органах и тканях восприимчивых животных [23, 31].

Вирус ящура характеризуется высокой вариабельностью (7 типов -А, О, С, Азия-1, Сат-1, Сат-2, Сат-3 с множеством их антигенных вариантов). Характерной особенностью возбудителя ящура является почти абсолютная специфичность для парнокопытных животных. К ящуру

"г

чувствительны более 105 видов парнокопытных и мозоленогих животных, относящихся к 33 семействам и 14 отрядам [68, 98].

Экономический ущерб животноводству многих стран мира от ящура

громаден. Так, при эпизоотии ящура типа О на Тайване в 1997г. пало и

было уничтожено свыше 4 млн. свиней, а общий экономический ущерб государства составил около 10 млрд. долларов. В 2001г. в Великобритании возникло 2030 ящурных очагов, вызванных заносом вируса типа О. При этом было убито и утилизировано более 4 млн. животных с причинением

ущерба около 12 млрд. долларов. ,

„ £

Ящур представляет собой мировую проблему, к которой приковано внимание как ветеринарных служб многих государств мира и международных организаций (МЭБ, ФАО, ЕС, их комиссий и комитетов), так и государственных деятелей, СМИ и широкой общественности [32].

С учетом высокой генетическрй^вариабельности вируса на первый план в современной стратегии борьбы с болезнью выдвигается необходимость.,систематического эпизоотологического и серологического мониторинга распространения этого постоянно эволюционизирующего возбудителя [17]. ,

Все выше изложенное свидетельствует о необходимости и

актуальности изучения биологических свойств эпизоотических штаммов

вируса ящура, выделенных в Республике Таджикистан в последнее

ьа

десятилетие, сопоставление их с ранее выделенными штаммами, проведение постоянного мониторинга за этой болезни.

Цель и задачи исследований. Главной целью наших исследований было изучение биологических свойств эпизоотических штаммов вируса

ящура типов-А, О и Азия-1, выделенных в Республике Таджикистан в

йй/й'

2006-2012 гг.

Для достижения поставленных целей необходимо было решить следующие задачи:

- изучить биологические свойства штаммов вируса ящура А, О и Азия-1, выделенных на территории Республики Таджикистан в 2006-2012 гг;

- изучить' антигенное родство штаммов выделенных на территории Республики Таджикистан в 2006-2012 гг. с помощью РСК, ИФА и РМН;

- изучить степень генетическогр|родства штаммов вирусов ящура, выделенных на территории Республики Таджикистан в 2006-2012 гг. в ПЦР;

Научная новизна. Научная новизна состоит в том, что в результате проведенных исследований: . у , ,

- изучены биологические свойства трех штаммов вируса ящура (А, О и Азия-1) выделенных на территории Республики Таджикистан в 2006 и 2012 г;

- изучено антигенное родство штаммов вируса ящура с помощью серологических реакций;

- показаны антигенные взаимоотношения между производственными и эпизоотическими штаммами вируса ящура типов А, О и Азия-1;

- изучена степень генетического родства штаммов вирусов ящура, выделенных на территории Республики Таджикистан в 2006-2012 гг. в ПЦР;

- определены оптимальные варианты постановки ИФА при выявлении и идентификации штаммов вируса ящура;

-8- выявлен уровень антител к неструктурным белкам вируса ящура в различных категориях хозяйств у крупного рогатого скота и коз в Таджикистане. '

Практическая ценность работы. Изученные штаммы вируса ящура А/Таджикистан/06, 0/Таджикистан/Т52/2011 и Азия-1/Таджикистан/2011 депонированы в коллекцию микроорганизмов ФГБУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств

для животных и кормов» и рекомендованы для изготовления вакцины против указанных типов ящура.

По результатам исследований разработана и составлена нормативно-техническая документация:

- «Инструкция о мероприятиях по борьбе с ящуром животных». (2008 г.);

- «Рекомендация по отбору и хранение патологического материала для исследования ящура животных» (Тавсия оид ба тарзи интихоб ва нигохдории маводхои амрози барои ташхиси вабои сумдарди хайвонот) (2010 г.);

«Инструкция к лабораторным , исследованиям ящура в

иммуноферментном анализе» (Дастур оид ба ташхиси озмоишгохии вабои сумдарди хайвонот бо усули тахлили иммуноферменти) (2010 г.). Основные положения, выносимые на защиту:

- биологические свойства эпизоотических штаммов вируса ящура

типаА, О и Азия-1; }

- результаты комплексного изучения антигенного родства штаммов вируса ящура А, О и Азия-1;

- результаты серологического исследования по выявлению антител к неструктурным белкам вируса ящура в различных категориях хозяйств у крупного рогатого скота и коз в Таджикистане;

•Л11

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 работ, в том числе 3 работа в издании, рекомендованной ВАК РФ для публикации материалов кандидатской диссертации.

Апробация работы. Основные положения работы были доложены и обсуждены на заседаниях Учёного совета Научно-производственного предприятия «Биологические препараты» ТАСХН в 2002-2013 гг., научных конференциях (Шираз 2008; г. Стамбуле, 2009.; г. Баку, 2013 г.; Ашкабад, 2013 г.; г. Харькове, 2013 г.), на совещании представителей ветеринарных служба стран СНГ, проходившем во ВНИИЗЖ (Владимир, 2013 г.).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 130 страницах, включает: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, список использованноц, литературы, практические предложения и приложения. Список литературы включает 171 источников, из них 72 источника иностранных авторов. Работа иллюстрирована 16 таблицами 24 рисунками. В приложении к диссертации имеется 3 документа, подтверждающих результаты исследований и их внедрения.

-V

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Ящур как мировая »¡-^ проблема в инфекционной патологии животных

Ящур - самая инфекционная болезнь домашнего скота, и эпидемия, часто появляющиеся в одной части области, приводят к региональным пандемиям разрушительного последствия. Ящур известен как одна из самых опасных болезней домашних 'и диких парнокопытных животных, наносящих значительный урон животноводству во многих странах мира, в связи, с чем пре'дставляет мировую проблему [7, 112, 129].

Более 100 стран все еще эндемичны по ящуру или поражаются спорадически (рис. 1).

Endemic

intermediate, sporadic

Free with vaccination

□ Countries with multiples zones: FMD-free. free with vaccination or not free

^J Free. Virus present in game parks Free

kWRLFMD-

Рис.1. Ситуация по ящуру в мире по данным Всемирной справочной лаборатории по ящуру (Глобальная конференция по

ящуру, Таиланд, июнь 2012 г.)

Как видно из рисунка 1, эндемичными по ящуру в настоящее время являются большая часть стран Африки, Ближнего Востока, Центральной и Юго - Восточной Азии, в том числе и Республика Таджикистан с соседними пограничными странами.

По официальным данным 80-й Генеральной сессии Всемирной Организации Здравоохранения Животных (МЭБ, май 2012 г.) из 178 стран мира, входящих в МЭБ, только 65 стран свободны от ящура без вакцинации, в их число из стран СНГ входят Беларусь, Украина, европейские страны, в том числе страны Прибалтики. Уругвай, единственный в мире, имеет статус страны, свободной от ящура с

Л'

вакцинацией. Десять стран имеют свободные зоны от ящура с вакцинацией, в том числе Р. Молдова, а четыре - имеют свободные зоны от ящура без вакцинации (Аргентина, Бразилия, Боливия, Колумбия). В трех странах проводятся подготовительные мероприятия, связанные с получением официального статуса страны по ящуру, в частности, программа борьбы с ящуром в стране проходит в МЭБ процедуру валидации (признания) [9, 20, 123, 163],ь

Как и прежде ящур был широко распространен на Ближнем Востоке, в Центральной Азии, Индии, являющимся резервуаром вируса ящура типов А, О и Азия-1, а также в странах Центральной и Южной Африки -резервуарах вируса типов SAT 1, 2, 3. Азия продолжает оставаться главным источником вспышек ящура, поражающих страны Ближнего Востока, и составляющих угрозу для Европы.

В 2008 г. ФАО и МЭБ официально провозгласили новую концепцию борьбы с ящуром, согласно которой в мире существует семь главных пулов (экосистем) распространения вируса ящура (рис. 2) [100]:

1- Китай и страны Юго-Восточной Азии,

2 - Индия,

3 - Страны Ближнего Востока' й Центральной Азии (Евразийский

регион),

4-6 - государства Африки и

7- страны Южной Америки.

Для каждого из пулов характерен свой собственный набор циркулирующих возбудителей ящура.

Рис.2. Экосистемы (пулы) распространения ящура в мире.

Для 3-го пула, куда относится и Республика Таджикистан, как видно из рис. 2, характерно циркуляция вируса ящура типов А, О и Азия-1.

Глобальной стратегией ФАО/МЭБ по борьбе с ящуром предусматривается, что каждая страна в своем стремлении к обеспечению стабильного благополучия по ящуру без применения противоящурных вакцин, неминуемо должна пройти ряд последовательных этапов, характеристика которых дана на рис.3.

К начальному, или нулевому этапу Генеральной стратегии, отнесены страны с эндемичным характером ситуации по ящуру. К первому и второму из страны осуществляющие планомерные противоящурные мероприятия, но, где ситуация пока не взята под строгий контроль. Республика Таджикистан в 2011 году на Стамбульском заседании РАО/ЕиРМО было отнесен к 1 этапу Генеральной стратегии поэтапной борьбы с ящуром рис. 3 [27, 130].

ЭТАП

Страна, свободная от ящура БЕЗ вакцинации

ЭТАП

Обращение за

получением

официального

статуса (ВООЗЖ):

"страна, свободная

от ящура

БЕЗ вакцинации"

С 4 на 5 Обращение за получением официального статуса (ВООЗЖ): "страна, свободная от ящура ПОСЛЕ вакцинации"

ЭТАП