Вирулентность, антигенность и иммуногенность вируса ящура, репрдуцированного в культурах клеток и в организме животных при промышленном производстве вакцин

Кулагина, Алевтина Георгиевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Вирулентность, антигенность и иммуногенность вируса ящура, репрдуцированного в культурах клеток и в организме животных при промышленном производстве вакцин
ВАК РФ 03.01.06, Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

Автореферат диссертации по теме "Вирулентность, антигенность и иммуногенность вируса ящура, репрдуцированного в культурах клеток и в организме животных при промышленном производстве вакцин"

ВИРУЛЕНТНОСТЬ, АНТИГЕННОСТЬ И ИММУНОГЕННОСТЬ ВИРУСА ЯЩУРА, РЕПРОДУЦИРОВАННОГО В КУЛЬТУРАХ КЛЕТОК И В ОРГАНИЗМЕ ЖИВОТНЫХ ПРИ ПРОМЫШЛЕННОМ ПРОИЗВОДСТВЕ

ВАКЦИН

03.01.06 «Биотехнология (в том числе бионанотсхнологии)»

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

ии34Э3267

Щелково - 2010

003493267

Работа выполнена в ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» и ФГУП «Щёлковский биокомбинат»

Научный руководитель:

доктор биологических наук

Грииь Светлана Анатольевна

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор, лауреат Государственной премии СССР,

Ведущее учреждение - ФГУ «Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных»

Защита состоится 26 марта 2010 года в 10 часов на заседании диссертационного совета по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук Д 006.069.01 во Всероссийском научно-исследовательском и технологическом институте биологической промышленности по адресу: 141142, Московская область, Щелковский район, поселок Биокомбината, дом 17, ВНИТИБП; E-mail:vnitibp@mail.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИТИБП.

Автореферат разослан 25 февраля 2010 года

Заслуженный ветеринарный врач РФ

Скичко Николай Данилович

доктор ветеринарных наук

Соболев Виктор Васильевич

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук Ю.Д. Фролов

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Ящур - остро протекающая

высококонтагиозная вирусная болезнь домашних и диких парнокопытных животных, характеризующаяся лихорадкой и афтозными поражениями слизистой оболочки ротовой полости, бесшерстных участков кожи головы, вымени, венчика, межкопытцевой щели и сопровождающаяся нарушением движения; у молодых животных поражением миокарда и скелетных мышц (А.Н. Бурдов, А.И. Дудников, П.В. Малярец, 1990, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьев, Е.А. Непоклонов, Е.С. Воронин, 2006).

Проблемы профилактики и борьбы с ящуром животных, снижения ущерба от его эпизсотий, способных вызывать чрезвычайные ситуации в животноводстве с тяжелыми социально-экономическими последствиями, актуальны для многих государств мира, в том числе и для России.

В разработку средств и методов борьбы с ящуром большой вклад внесли сотрудники ВНИИЗЖ, ВИИТИБГ1, ФГУП «Щёлковский биокомбинат» (А.И. Дудников, В.М. Захаров, В.В. Борисов, A.M. Рахманов, А.И. Собко,

A.A. Сюсюкин, Е.Л. Салажов, А.З. Равилов, В.П. Онуфриев, A.A. Гусев,

B.В. Михалишин, КН. Груздев, В.В. Соболев, А.Я. Самуйленко, В.И. Еремец, Н.Д. Скичко, Н.И. Зенов).

Эпизоотическая ситуация по ящуру в мире продолжает оставаться довольно напряженной. Россия с 1989 года благополучна по ящуру. Однако в 1991, 1993, 1995, 2000, 2005 годы регистрировали по 1, а в 2006 - 2 неблагополучных пункта - результат заноса вируса ящура из-за рубежа. В 2000 году ящур в России был обусловлен паназиатским штаммом тип О, который являлся антигенно измененным по сравнения с ранее выделенными и используемыми при производстве противоящурных вакцин. В 2005 году -эпизоотия ящура типа Азия-1 в Китае, занос его в Монголию и Россию (Амурская область, Хабаровский и Приморский край). 2006 - два очага ящура типа Азия-1 на границе с Китаем возникли в России (в Читинской и Амурской областях). В 2007 году 1 очаг в Западноказахстанской области, граничащей с

Россией. В 2009 году - очаг в Китае, но за счет проведенных мер в Забайкальской области распространения вспышки в Россию не произошло (В.М. Захаров, Д.Г. Мусиев 2005, А.И. Дудников, 2006, КН. Груздев, В.М. Захаров, A.M. Рахманов, 2006 В.В. Борисов, A.M. Рахманов, 2009).

По южным границам РФ создана буферная зона, где ежегодно вакцинируют восприимчивое поголовье. В Московской и Владимирской облаегях также вакцинируют животных, так как на территории этих областей располагаются научно-исследовательские и биологические предприятия, работающие с вирусом ящура (A.A. Гусев, В.М. Захаров, А.И. Дудников, 1987).

На ФГУП «Щёлковский биокомбинат» с 1976 года ведется производство вакцин против ящура, сырьем для которых служил эпителий языка крупного рогатого скота. В 1990-е годы произошло уменьшение поголовья скота, разрыв экономических и политических солзсн wi.iiv регионами, ислсдст""£ чего получение эпителиального сырья было затруднено, в связи с чем промышленное получение сырья переведено на метод суспензионного культивирования вируса в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 (В.И. Еремец, Н.Д. Скичко, Н.И. Зенов, 1999). Однако в научной литературе отсутствуют сравнительные данные об антигенности и иммуногенности вируса ящура, выращенного в различных культурах клеток.

Для дальнейшего повышения эффективности промышленного производства противоящурных вакцин необходимо внести изменения в технологию с учетом использования ранее накопленного опыта и аналитического научно-исследовательского материала (В.В. Соболев, 1981, А.Я. Самуйленко, 1982, В.И. Еремец, 1989, Н.Д. Скичко, 1990 и др.).

Цель и задачи исследований. Цель настоящей работы исследовать показатели вирулентности, антигенности, иммуногенности вируса ящура, репродуцированного в культурах клеток и в организме животных при промышленном производстве вакцин.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

1. Изучить вирулентность вируса ящура при пассировании в культуре клеток почек свиньи;

2. Изучить вирулентность вируса ящура на морских свинках;

3. Изучить антигенность вируса ящура, репродуцированного в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота и перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02;

4. Изучить иммуногенность противоящурной вакцины, полученной из вируса, репродуцированного в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота и перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02;

5. Оценить показатель иммуногенности вакцины в зависимости от вирулентности вируса ящура.

6. Разработать промышленную технологическую документацию производства.

Научная новизна. Впервые изучена в сравнительном аспекте антигенность, вирулентность и иммуногенность вируса ящура тип А и тип О, полученного при промышленном культивировании в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота и в перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02.

Впервые в условиях производства проведены исследования биологических показателей вируса ящура тип О) (1734/Приморский/2000).

Впервые получены данные по изменению вирулентности и иммуногенности вируса при непрерывном пассировании в организме животных (ЦПД клеток с 48-66 часов до 4-х часов к 100-му пассажу и накопление в сыворотке крови с 10г ТЦД 50/мл до 108 и существенному при этом снижению показателя иммуногенности вакцины с 60 до 0 ИмД50), которые могут быть использованы при прогнозировании эпизоотической ситуации и эффективности вакцин в XXI веке.

Практическая значимость. Результаты проведенных исследований позволяют эффективно использовать накопленный опыт и разработать технологическую документацию промышленного изготовления вакцин против

ящура с учетом требований GMP, позволяющую выпускать безопасную продукцию со стабильными показателями качества.

Апробация полученных результатов. Основные положения диссертации доложены: на международной научно-практической конференции, посвященной 40-летию Всероссийского научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности 9-10 декабря 2009 года.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 118 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения и список литературы. Работа иллюстрирована 7 таблицами и 4рисунками. Список литературы содержит 291 источник, в том числе 150 иностранных.

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 1.1 Материалы и методы

Исследования проводились в условиях противоящурного производства ФГУП «Щелковский биокомбинат» и Всероссийского научно-исследовательского технологического института биологической промышленности (ВНТИБП).

2.1.1 Штаммы. В работе использовали производственный культуральный и контрольный вирус ящура тип Агг(А СССР 550/65), тип Oi (1734/Приморский/2000)

2.1.2 Культуры клеток. Производственная перевиваемая линия клеток ВНК-21/13-02; первично-трипсинизированная культура клеток почек свиньи (СП); эксплантаты эпителия языка крупного рогатого скота.

2.13 Животные. Использовали животных: поросят серонегативных, не имеющих титра к вирусу ящура - 5 голов; крупный рогатый скот не моложе 18 мес., не менее 250 кг, доставленный из благополучнных по ящуру зон страны, где в течение последних 2 лет не проводилась вакцинация скота против ящура -85 голов; морских свинок, 4-5 мес., весом 450-500г - 250 голов.

2.1.4 Антигоны вируса ящура. В качестве антигенов использовали: вирус ящура, выращенный в монослое почек свиньи (СП); вирус ящура, выращенный по методу Френкеля в промышленных реакторах в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота; вирус ящура, выращенный суспензионным способом в перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02

Антигенность вируса определяли в реакции связывания комплимента (РСК) с помощью аппарата «Техникон», содержание Нб^компонеита определяли с помощью прибора «Увикорд», ТЦД5(/мл - в реакции нейтрализации (РН). ИД50 вычисляли по методу Кербера.

Авирулентность и иммуногенную активность испытывали на крупном рогатом скоте, ИмД50 рассчитывали по методу Кербера.

2.1.5 Нормативная документация. ГОСТ Р 52249-2004 «Правила производства и контроля качества лекарственных средств», ОСТ 10083-95 «Продукция агробиологической промышленности. Технологические регламенты производства. Содержание, порядок разработки, построения, согласования и утверждения», ГОСТ Р ИСО 9001-2008 «Системы менеджмента качества. Требования».

2.1.6 Статистическую обработку цифровых данных проводили в соответствии с методами, описанными в работах П. И. Ашмарина и др. (1962), Н. А. Плахинского (1970), Е. В. Гублера (1978). При оценке достоверности различий используется параметрический критерий I Стьюдента и непараметрический критерий И Вилкоксона - Манна - Уитни Причем, разницу считали достоверной, если значение ^ (вычисленное) превышало стандартное значение критерия Стьюдента - 1р (^ > ^ при р < 0,05.

2.2 Результаты исследований

2.2.1 Изменение показателя инфекционной активности вируса ящура при адаптации к культуре клеток почки свиньи

Для изучения инфекционной активности вируса ящура при адаптации к культуре клеток в качестве вируссодержащего материала использовали культуральную жидкость, полученную при выращивании вируса ящура тип О

1734 в монослое клеток путем прямых пассажей. Использовали однослойную культуру клеток СП с хорошим сплошным монослоем, выращенную в пробирках. Культуру заражали, внося по 1 мл вируса, полученного в предыдущем пассаже. Одновременно ставили контроль на культуре ткани с поддерживающей средой.

На вторые сутки производили первый учет результатов титрования. Каждую пробирку просматривали под малым увеличением (7x10) микроскопа и определяли ЦПД вируса (условно в крестах). Окончательный учет результатов производили через 72 часа после заражения культуры. Одновременно просматривали и контрольные пробирки, так как результаты титрования являются достоверными при сохранении монослоя в контроле.

В результате проведенной работы выявлено, что дегенерация монослоя, начиная с первого по восьмой пассаж, происходила в течение 60±5 ч; с восьмого по тридцатый пассаж - 44±12 ч; с тридцатого по шестидесятый пассаж - 23±7 ч; с шестидесятого по сотый пассаж - 6±2 ч.

Рис. 1. Оценка времени наступления цитопатогенного действия вируса ящура тип О1734 на монослой культуре клеток СП в процессе непрерывного пассирования.

Таким образом, при изучении показателя инфекционной активности вируса ящура (тин О1734), полученного путем непрерывного пассированием на монослойной культуре клеток СП, установлено, что скорость разрушения монослоя клеток существенно возрастала от 48-66 ч (первый - тридцатый пассаж) до 4-6 ч к сотому пассажу.

2.2.2 Сравнительная оценка антигенной активности вируса ящура, репродуцированного в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота и перевиваемой культуры клеток ВНК-21/13-02

Проведены исследования антигенной активности вируса ящура, репродуцированного в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота в сравнении с аналогичным вирусом, выращенном в культуре клеток ВНК-21/13-02. Материалом служили вакцинные производственные штаммы вируса ящура, тип 01734 и Ä22/550- Антигенность вируса определяли в реакции связывания комплимента (РСК) с помощью аппарата «Техникон», содержание 146s-компонента определяли с помощью прибора «Увикорд», ТЦД50/мл — в реакции нейтрализации (РН).

Антигенность вируса ящура, выраженная в комплементсвязывающей тип А, репродуцированного в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота, в РСК в нативной пробе выявлялась в титре 217±40,6 (п=4); тип О -233±39,0 (п=8). Антигенность вируса ящура тип А, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02 - 227±39 (п=10); тип О -218±21 (п=4).

Таблица 1

Сравнительная оценка комплементсвязывающей активности вируса ящура типов А и О, репродуцированного на эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота и в перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02. (п=5)

Титр комплементсвязывающей

Тип вируса ящура активности

Культуры клеток В нативной пробе В пробе, обработанной фреоном

А Э.Э.Я.К.Р.С. 217±40 170±37

ВНК-21/13-02 227±30 181±32

О Э.Э.Я.К.Р.С. 233±39 189±38

ВНК-21/13-02 218±21 168±20

Содержание 146'ч-компонента в пробах вируса ящура, репродуцированного в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота, тип А, выявлялась в количестве 1,49±0,3 мкг/мл (п=4), тип О - 1,6±0,4 мкг/'мл (п=8). Содержание 1468-компонента в пробах вируса Я1цура, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02, тип А — 1,5±0,4 мкг/мл (¡1=10), тип О - 1,4±0,3 мкг/мл (п=4).

Таблица 2

Сравнительная оценка содержания 146е компонента вируса ящура типов А н О, репродуцированного в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота и в перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02. (п=5)

Тип вируса ящура Культуры клеток Общ. белок, мкг/мл 146х, мкг/мл

А Э.Э.Я.К.Р.С. 0,7±0,11 1,49±0,3

ВНК-21/13-02 0,8±0,12 1,5±0,4

О Э.Э.Я.К.Р.С. 0,7±0,1 1,6±0,4

ВНК-21/13-02 0,7±0,1 1,4±0,3

Показатели ТЦД5о/мл в пробах вируса ящура, репродуцированного в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота, тип А, выявлялась в

титре 8,83±0,2 (п=4), тип О - 9,20и ±0,44 (п=8). Показатели 1ДЦ50/мл в пробах вируса ящура, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02, тип А - 8,46±0,62 (п=10), тип О - 7,78±0,7 (п=4).

Показатель рН во всех пробах стабильно определялся в пределах 7,5 ± 0,2 (табл.3).

Таблица 3

Сравнительная оценка инфекционной активности вируса ящура типов А и О, репродуцированного в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота и в перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02. (п=5)

Тип вируса ящура Культуры клеток рН Количество белка, мкг/мл ТЦД50/МЛ

А Э.Э.Я.К.Р.С. 7,2±0,1 0,7±0,11 8,4±0,1

ВНК-21/13-02 7,2±0,1 0,8±0,12 8,5±0,11

О Э.Э.Я.К.Р.С. 7,2+0,1 0,7±0,1 8,2±0,12

ВНК-21/13-02 7,3±0,2 0,7±0,1 7,8±0,1

Как видно из данных приведенных в таблицах: комплементсвязывающая активность вируса ящура, тип А, выявленная в РСК на аппарате «Техникон» в нативной пробе, репродуцированного в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота, была незначительно ниже, чем вируса этого типа, репродуцированного перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02; антигенность вируса ящура, тип О, выявленная в РСК на аппарате «Техникон» в нативной пробе, репродуцированного в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота, была незначительно выше, чем вируса этого типа, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02. Содержание 1463-компонента в пробах вируса ящура, тип А, репродуцированного в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота, было незначительно ниже, чем вируса этого типа, репродуцированного в

перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02. Содержание 1468-компонента в пробах вируса ящура, тип О, репродуцированного в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота, было незначительно выше, чем вируса этого типа, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02. Показатели ТЩ^(/мл в пробах вируса ящура обоих типов, репродуцированных на разных культурах клеток, существенно не различались.

Математическая обработка полученных результатов показала незначительные отлития.

2.2.3 Сравнительная оценка иммуногенной активности вакцин, изготовленных из инактивированного вируса ящура, репродуцированного в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота и перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02

Параллельно был:: изготовлены сакцкпы прстпг; ящура ;;з инактивированного вируса, полученного при репродукции в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота и перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02, и проведено исследование их иммуногенной активности.

Вакцины готовились с использованием стандартного гидроокись алюминиевого адъюванта с сапонином и отличались способом получения вируса.

Материалом служили вакцинные производственные штаммы вируса ящура 0)734 и А22/550. репродуцированные в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота и перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02. Изготовление вакцин проводили согласно промышленному регламенту. Авирулентность и иммуногенную активность испытывали на крупном рогатом скоте. ИмД50 рассчитывали по методу Кербера.

Для определения авирулентности вакцины использовали клинически здоровый крупный рогатый скот (КРС) не ниже средней упитанности, в возрасте не моложе 18 месяцев, массой не менее 250 кг, поступивший из благополучных по ящуру зон страны, где иммунизация против ящура не проводилась в течение последних двух лет. У животных определяли

содержание вируснейтрализующих антител в сыворотках крови в реакции нейтрализации. Постановку и учёт реакции проводили в соответствии с «Методическим указаниями по постановке реакции нейтрализации для определения иммунного статуса животного при ящуре», утвержденным ГУВ МСХ СССР 26.12.83 115-6а.

Использовали среднюю пробу вакцины. Содержимое трех флаконов тщательно перемешивали, а затем отбирали по 50 см3 препарата в стерильный флакон. Общую пробу использовали для испытания. При испытании на авирулентность препарат инъецировали каждому из трех животных интрадермолипгвально в количестве 2,0 см3 (по 0,1 см3 в 20 точек), и одновременно подкожно в область средней трети шеи вводили по 6,0 см3 вакцины. Наблюдение за животными вели в течение 6 суток.

В течение указанного срока у животных ежедневно измеряли температуру тела. Повышение температуры тела через 12-24 часа до 40-41°С, было обусловлено присутствием сапонина и геля гидроокиси алюминия в вакцине.

Вакцину считали авирулентной, если у животных, которым была введена вакцина, в период наблюдения не появились клинические признаки ящура, а при пагологоанатомическом исследовании не обнаружено изменений, характерных для ящура.

Иммуногенную активность проверяли на крупном рогатом скоте количественным методом с определением ИмД50 КРС и параллельно определяли титр вируснейтрализующих антител в сыворотках крови вакцинированных животных в реакции нейтрализации (РН) на культуре клеток почки свиньи (СП).

Для определения иммуногенности моновалентной вакцины использовали 17 голов крупного рогатого скота, из которых 2 головы являлись контрольными. Вакцину вводили подкожно в область средней трети шеи в цельном виде.

Через 19-21 сут. после вакцинации у вакцинированных животных брали кровь для определения уровня вируснейтрализующих антител и заражали контрольным вирусом ящура интрадермолингвально в дозе 104 ЩЬо/мл. За подопытными животными вели наблюдение в течение 5 сут. В этот период у животных один раз в сутки измеряли температуру тела. Через 5 сут после заражения всех животных убили и провели патологоанатомический осмотр. Контрольные животные ■ болели генерализованной формой ящура. Все вторичные афты отбирали для определения типа вируса в РСК.

Защищенными считали животных без ящурных поражений на конечностях. Первичные афты не учитывали. Иммуногенную активность (ИмДзо в см3)' вычисляли методом Кербера. В результате проведенных исследований получены следующие данные (см. табл. 4).

Таблица 4

Сравнительная оценка гуморального иммунитета у крупного рогатого скота, вакцинированного биопрепаратом из вируса ящура типов А и О, репродуцированного в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота и в перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02, по показателям вируснейтрализующей активности.

Тип вируса ящура Культуры клеток ВНА ОБ) п

А... ...,, Э.Э.Я.К.Р.С. 1,7± 0,15 4

ВНК-21/13-02 1,6 ±0,10 10

О Э.Э.Я.К.Р.С. 1,71 ±0,10 8

ВНК-21/13-02 1,7 ± 0,18 4

В РН иммуногенная активность вируса ящура, репродуцированного в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота, тип А, выявлялась в титре 1,75±0,12 (п=4), тип 0-1,72±0,15 (п=8). Иммуногенная активность вируса ящура, репродуцированного перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02 тип А -1,73±0,16 (п=10), тип О - 1,71±0,13 (п=4).

Таблица 5

Сравнительная оценка общей активности вакцинированного крупного рогатого скота биопрепаратом из вируса ящура тип А и О, репродуцированного в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота и в перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02

Тип вируса Культуры Количество п

ящура клеток ИмД5о/СМ3

А Э.Э.Я.К.Р.С. 21 ±1 4

ВНК-21/13-02 22 ±2 10

О Э.Э.Я.К.Р.С. 24 ±1 8

ВНК-21/13-02 23 ±1 4

Количество ИмД50 вируса ящура, репродуцированного в. эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота, тип А, было равно 21 ± 1 в см3 (п=4); тип О - 24±1 в см3 (п=8). Количество ИмД50 вируса ящура, репродуцированного перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02 тип А-22±2 в см3 (п=10); тип О-23±1 в см3 (п=4).

Все испытуемые препараты были безвредны и авирулентны. Как показали результаты исследований иммуногенной активности вируса ящура показатели тип А и О, репродуцированного в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота и в перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02, выявленная в РН, практически не отличались.

Аналогичные результаты получены при определении ИмДз0.

2.2.4 Изменение показателя иммуногенной активности вакцины в зависимости от вирулентности контрольного вируса ящура На примере вируса ящура ■ изучено влияние непрерывных пассажей вируса на его вирулентность и устойчивость вакцинированных животных к возбудителю разной степени вирулентности.

При контроле иммуногенности вакцины против ящура на животных используется стандартная инфекционная активность вируса - 104 ИД50 в объеме 0,1 мл.

Рис. 2. Схема изучения иммуногениой активности вакцины в зависимости от вирулентности контрольного вируса ящура

тцд„

"ПППП гНН

тЦДя

Вирус ящура тип

О,™

ТЦЦ»

До 100-го пассажа

ИмД„

А /\ /\

ИЛ ИмД!0

Д" ИДм ИМД5„ ИД;о

В работе использовали питательную среду Эрла с гидролизатом лактальбумина без сыворотки с рН 7,1 -7,3; пробирки со сплошным монослоем клеток почек свиней (ПС); вакцину против ящура серийного производства; вирус ящура, тип О1734; беспородных 4-5-месячных морских свинок массой тела 450-500г (клинически здоровые самцы и небеременные самки).

Вакцину разводили буферным раствором с рН 8,5 непосредственно перед введением. Для определения иммуногенности моновалентной вакцины использовали 40 животных, из которых 8 являлись контрольными. Вакцину вводили в объеме 2 см3 в область правого и левого бедра по 1 см3. Не вакцинированные группы морских свинок использовали для контрольного заражения соответствующим типом вируса ящура.

За животными наблюдали 10 дней. Спустя 10 дней всех привитых и не привитых морских свинок заражали адаптированным к ним вирусом ящура, аналогичным производственному. Предварительно вирус адаптировали до 100-го пассажа к данным животным. Суспензию вируса вводили морским свинкам внутрикожно в, плантарную поверхность правой задней лапки, в 4-5 точек 104 ИД50 в объеме 0,1 мл.

Через 24 ч после инфицирования у морских свинок брали кровь для определения титра вируса. На каждое его разведение использовали по 6 пробирок с культурой клеток, в которые вносили по 1 мл разведенного вируса. Окончательный учет результатов производили через 72 часа после заражения культуры.

Результаты первый раз проверяли через 5 дней, второй - спустя 7 дней. Учет результатов заражения проводили через 3, 5 и 7 суток и оценивали по генерализации ящурного процесса на передних и одной задней лапках. Генерализацией считали образование вторичных афт хотя бы на одной лапке, в которую не вводили вирус.

Иммуногенную активность ИмД50 МС и ИД50 вычисляли по методу Кербера. ,

Инфекционная активность ИД5о/0,1 мл афтозного вируса морских свинок, определенная на морских свинках составляла на 8-м пассаже 105 ИД5о/0,1 мл, на 30-м -107 ИД5о/0,1 мл и на 100-м - Ю10 ИД50/0,1 мл. 1 -

Таблица б

Титрование афтозного вируса ящура морских свинок разных пассажей на этих животных

№ пассажа вируса ящура на м/свинках Титр инфекционной активности на морских свинках, 1я Количество животных

8 5 40

■......зо ............ ....... .............. 7..... 40

100 10 40

Иммуногенная активность, выраженная количеством ИмД50, составляла на 8-м пассаже 64 ИмДго/мл, на 30-м - 8 ИмД^/мл и на 100-м - 0 ИмД50/мл (см. таблицу 7).

Таблица 7

Иммуногенная активность вакцины при заражении вирусом разного

пассажа

Пассаж вируса Разведение вакцины ИмД50/мл

1/4 1/16 1/64 1/256 контроль

8 0/8 0/8 4/8 8/8 8/8 64

30 0/8 ,. 4/8 8/8 8/8 8/8 8

100 8/8 8/8 8/8 8/8 8/8 0

Примечание: в числителе количество заболевших, в знаменателе - общее количество животных.

Инфекционная активность афтозного вируса ящура при непрерывном пассировании на морских свинках составляла на 8-м пассаже (4 титрования) ТЦЦ50/МЛ равнялось 2±0,1 на 30-м (3 титрования) - 4±0,1 ^ и на 100-м (3 титрования) - 8±0,2

Рис. 3 Инфекционная активность афтозного вируса ящура при непрерывном пассировании на морских свинках по результатам его титрования на культуре клеток СП

ТЦД50/МЛ

8 30 100

Таким образом, инфекционная активность ИДл/ОД мл афтозного вируса морских свинок, определенная на морских свинках возрастает с 105 на 8-м пассаже до Ю10 на 100-м пассаже.

Иммуногенная активность ИмД50 одной и той же серии вакцины уменьшалась с 64 до 0 при заражении вирусом большего пассажа.

Инфекционная активность сыворотки крови морских свинок через 24 ч после инфицирования при одинаковой заражающей дозе вируса (104 ИД50/ОЛ мл) существенно возрастала с увеличением числа его пассажей с 2±0,1 на 8-м пассаже до 8±0,2 ^ на 100-м пассаже. Данные результаты свидетельствуют о повышении вирулентности вируса ящура тип 01734 при непрерывном пассировании его на морских свинках.

По прогнозам социологов населения планеты к 2050 году может удвоиться и достигнуть 10 млрд. человек (П.Н. Харченко, 2009), а к концу XXI века - более 15 млрд. (рис.2).

Рис. 4 Динамика роста численности населения земли (млрд. человек)

По идее должно увеличиться и количество продовольствия, включая продукцию животного происхождения. При этом «полезные» земли для содержания скота будут уменьшаться за счет увеличения площадей, используемых для жизнедеятельности человека, и уменьшения общей площади земли (потепление на планете, таяние ледников). Будет возрастать и концентрация животных на единице площади. Какие изменения в это время могут произойти в эпизоотической цепи? В связи с существенным изменением скорости контакта между макро- (животные и человек) и микроорганизмами (бактерии, вирусы) будут меняться и свойства последних.

Учитывая статистический прогноз, на примере вируса ящура изучено влияние непрерывных пассажей вируса на его вирулентность и устойчивость вакцинированных животных к возбудителю разной степени вирулентности.

Исходя из порученных данных, можно предположить, что в будущем в эпизоотической цепи значительно повысится вирулентность микроорганизмов. Естественно возрастет и скорость передачи инфекционного начала за счет увеличения концентрации макроорганизмов и интенсивность передвижения человека, перевозки животных и других предметов. В этом случае прервать эпизоотию за счет вакцинации чувствительных животных будег намного сложнее. Необходима большая научно-исследовательская работа для изучения всех звеньев эпизоотической цепи, создания высокоэффективных вакцин с использованием новейших достижений молекулярной биологии в вопросах патогенеза, иммуногенеза, биологических свойств микроорганизмов, инфекционных болезней.

2.2.5 Разработка технологической документации производства противоящурной вакцины

Руководством ФГУП «Щелковский биокомбинат» в 2006 году принято решение о разработке, внедрении и сертификации интегрированной системы менеджмента качества (СМК) предприятия соответствующей требованиям национальных стандартов Российской Федерации ГОСТ Р ИСО 9001 и ГОСТ Р 52249, которая должна обеспечивать распределение ответственности за

качество на всех участников процесса создания товара, поскольку в процессах разработки, производства и реализации продукции задействованы все подразделения предприятия.

В соответствии с принятым решением разработана технологическая документация производства противоящурной вакцины, наличие которой позволяет выпускать безопасную продукцию со стабильными показателями качества.

Основные этапы работы:

1. Назначение руководителя задания на создание системы документирования технологического процесса производства

2. Создание команды разработчиков технологической документации

<ТД).

3. Разработка задания (рабочей программы) на создание системы ТД.

4. Анализ и оценка фактического состояния действующей на предприятии ТД.

5. Корректировка задания на разработку системы ТД по результатам оценки фактического состояния действующей ТД.

6. Анализ фактического состояния технологического процесса.

7. Разработка технологического регламента и недостающей документации.

8. Создание и внедрение системы управления ТД.

В рамках проведения анализа фактического состояния документации было выяснено, как в действительности используются документы, являются ли они действующими и полезными, или разработаны формально и производственной практикой не востребованы. По результатам анализа был составлен окончательный перечень документов, подлежащих разработке, определены разработчики и сроки завершения работы.

Разработка технологической документации на производство противоящурной вакцины проводилась в два этапа и была проведена в установленные сроки.

На первом этапе было разработано, согласовано и утверждено 96 СОП (Стандартная Операционная Процедура), описывающих все основные стадии технологического процесса изготовления готового продукта.

СОПы по контрольным процедурам определяют порядок проведения контролей, начиная от входного контроля сырья, заканчивая выпускным контролем готового продукта. СОПы по вспомогательным процедурам включают в себя инструкции по подготовке к работе производственных помещений, мойке рук, переодеванию персонала, приготовлению дезинфицирующих растворов, мойке флаконов, пробок, стеклопосуды, оборудования, подготовке производственной одежды и т.д. Также были разработаны СОПы по технике безопасности, обучению персонала, по обслуживанию и эксплуатации оборудования, общеадминистративные документы, регламентирующие соблюдение Правил ОМР на производстве.

Основные требования к входному сырью, вспомогательным и упаковочным материалам, технологическому оборудованию, полупродуктам сформулированы в 79 спецификациях.

Второй этап - включал в себя разработку, согласование и утверждение Промышленного регламента производства противоящурной вакцины в соответствии с требованиями ОСТ 10083-95 «Продукция агробиологической промышленности. Технологические регламенты производства. Содержание, порядок разработки, построения, согласования и утверждения».

Промышленный регламент включает в себя характеристику конечной продукции; технологическую и аппаратурную схемы производства; характеристику производственных штаммов микроорганизмов, сырья, материалов и полупродуктов; изложение технологического процесса; материального потока; описание стадий переработки и обезвреживания отходов; перечень контрольных точек производства; основные положения техники безопасности, пожарной безопасности и производственной санитарии, охраны окружающей среды; перечень производственных инструкций;, технико-экономические нормативы; информационные материалы.

Описание стадий подготовительных и вспомогательных работ, основных технологических процессов, переработки и обезвреживания отходов и т.д. включают в себя ссылки на утвержденные СОПы. Промышленный регламент иллюстрирован 9 технологическими схемами отдельных стадий, 44 таблицами, аппаратурная схема производства дана в Приложениях.

Таким образом, при производстве противоящурной вакцины обеспечено соблюдение одного из основных принципов обеспечения качества (Правил вМР). Правильно составленная документация является важной частью системы обеспечения качества. Четкое оформление документации позволяет предотвратить ошибки, возможные при устном общении, и проследить все этапы производства конкретной серии продукции.

3 ВЫВОДЫ

1. При сравнительной оценке антигенной активности вируса ящура, тип А и тип О, репродуцированных в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота и перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02, существенных отличий не установлено (при критерии достоверности разницы 1р больше критерия Стьюдента, вероятность р<0,05).

2. При сравнительной оценке иммуногенной активности вируса ящура (тип А и О), репродуцированных в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота и перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02, полученные показатели существенно не отличаются (р<0,05)

3. Непрерывное пассирование вируса ящура в культуре клеток СП приводит к существенному уменьшению времени разрушения монослоя с 60 до 4-х часов к 100-му пассажу.

4. Непрерывное пассирование вируса ящура в организме морских свинок увеличивает его накопление в сыворотке крови животных с 102 до 108 ТЦД50/МЛ к 100-му пассажу.

5. Показатель иммуногенности ИмД^о одной и той же серии вакцины уменьшался при заражении вакцинированных морских свинок контрольным

вирусом ящура возрастающего пассажа с 60 ИмДзо/мл до 0 ИмД5()/мл к 100-му пассажу.

6. При оценке иммуногенности противоящурных вакцин на морских свинках необходимо учитывать вирулентность используемого для заражения вирулентного вируса.

7. Непрерывное пассирование вируса ящура в восприимчивых организмах приводит к повышению его вирулентности и снижению эффективности вакцинации существующим биопрепаратом.

8. Повышение вирулентности вируса ящура при непрерывном пассировании и снижении показателя иммуногенности при его использовании с учетом динамики увеличения численности населения Земли и соответственно животных, а также научно-технического прогресса, в конечном итоге приведет к увеличению вероятности непрерывных пассажей вирусов. Бее эти данные можно использовать для эпизоотического прогноза.

9. Разработана технологическая документация производства с учетом изменений технологии, обеспечивающая выполнение основного принципа Правил вМР, гарантирующая выпуск продукции, соответствующей нормативной документации.

4 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1 Полученные данные по антигенности вируса и иммуногенности вакцины использовались для внесения изменений в технологию промышленного изготовления противоящурных вакцин при суспензионном культивировании вируса ящура в культуре клеток ВНК-21.

2 Проведенные исследования могут служить основанием для расширения научных исследований по воздействию на все стадии эпизоотической цепи для достижения в будущем благополучия по инфекционным болезням в XXI веке.

3 Разработана и утверждена технологическая документация производства противоящурных вакцин на ФГУГ1 «Щелковский биокомбинат», соответствующая национальным стандартам Российской Федерации.

5. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. А.Г. Кулагина, С.А. Грннь, И.Л. Беро, Л.К. Киш, А.Я. Самуйленко. Изменение показателя инфекционной активности вируса ящура при адаптации к культуре клеток почки свиньи. II Материалы междунар. научно-практ.конф. ВНИТИБП - Щелково, 2009 - с. 157-158.

2. А.Г. Кулагина, С.А. Гринь, И.Л. Беро, Л.К. Киш, А.Я. Самуйленко. Изменение показателя иммуногениой активности вакцины в зависимости от вирулентности контрольного вируса ящура. // Материалы междунар. научно-практ.конф. ВНИТИБП - Щелково, 2009 - с. 158-161.

3. А. Г. Кулагина. Сравнительная оценка антигенной активности вируса ящура, репродуцированного на эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота и ВНК-21/13-02. II Материалы междунар. научно-практ.конф. ВНИТИБП - Щелково, 2009 - с. 161-163.

4. А. Г. Кулагина. Сравнительная оценка иммуногениой активности вируса ящура, репродуцированного на эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота и ВНК-21/13-02. // Материалы междунар. научно-практ.конф. ВНИТИБП - Щелково, 2009 - с. 163-165.

5. С.А. Гринь, И.Л. Беро, H.A. Бондарева, А.Г. Кулагина, А.Я. Самуйленко, Л.К. Киш, F..E. Пурто. Прогноз эпизоотической ситуации и эффективности вакцин в XXI веке. // Ветеринария - № 12,2009 — с.6-7.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кулагина, Алевтина Георгиевна

1 Введение

1.1 Актуальность темы

1.2 Цель и задачи исследований

1.3 Научная новизна

1.4 Практическая ценность

1.5 Апробация полученных результатов

1.6 Публикации

1.7 Объем и структура диссертации

2 Обзор литературы

2.1 Историческая справка

2.2 Специфическая профилактика ящура

2.3 Способы получения вирусного сырья при производстве 13 противоящурных вакцин

2.4 Методы оценки противоящурных препаратов

2.5 Разработка технологической документации на 38 предприятиях биологической промышленности

3 Собственные исследования

3.1 Материалы и методы

3.2 Результаты исследований

3.2.1 Изменение показателя инфекционной активности 53 вируса ящура при адаптации к культуре клеток почки свиньи

3.2.2 Сравнительная оценка антигенной активности 56 вируса ящура, репродуцированного в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота и перевиваемой культуры клеток ВНК-21/13

3.2.3 Сравнительная оценка иммуногенной активности вакцин, изготовленных из инактивированного вируса ящура, репродуцированного в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота и перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13

3.2.4 Изменение показателя иммуногенной активности 70 вакцины в зависимости от вирулентности контрольного вируса ящура

3.2.5 Разработка технологической документации 76 производства противоящурной вакцины

Введение Диссертация по биологии, на тему "Вирулентность, антигенность и иммуногенность вируса ящура, репрдуцированного в культурах клеток и в организме животных при промышленном производстве вакцин"

1.1 Актуальность темы Ящур - остро протекающая высококонтагиозная вирусная болезнь домашних и диких парнокопытных животных, характеризующаяся лихорадкой и афтозными поражениями слизистой оболочки ротовой полости, бесшерстных участков кожи головы, вымени, венчика, межкопытцевой щели и сопровождающаяся нарушением движения; у молодых животных поражением миокарда и скелетных мышц [7, 45].

Проблемы профилактики и борьбы с ящуром животных, снижения ущерба от его эпизоотий, способных вызывать чрезвычайные ситуации в животноводстве с тяжелыми социально-экономическими последствиями, актуальны для многих государств мира, в том числе и для России.

В разработку средств и методов борьбы с ящуром большой вклад внесли сотрудники ВНИИЗЖ, ВНИТИБП, ФГУП «Щёлковский биокомбинат» (А.И. Дудников, В.М. Захаров, В.В. Борисов, A.M. Рахманов, А.И. Собко, А.А. Сюсюкин, E.JI. Салажов, А.З. Равилов, В.П. Онуфриев, А.А. Гусев, В.В. Михалишин, К.Н. Груздев, В.В. Соболев, А .Я. Самуйленко, В.И. Еремец, Н.Д. Скичко, Н.И. Зенов).

Чтобы сохранить благополучие страны, создана буферная зона по южным границам РФ, где ежегодно вакцинируют восприимчивое поголовье. Кроме этого, вакцинируют животных в Московской и Владимирской областях, так как на территории этих областей располагаются научно-исследовательские и биологические предприятия, работающие с вирусом ящура [20].

На ФГУП «Щёлковский биокомбинат» с 1976 года ведется производство вакцин против ящура, сырьем для которых служил эпителий языка крупного рогатого скота. В 1990-е годы произошло уменьшение поголовья скота, разрыв экономических и политических связей между регионами, вследствие чего получение эпителиального сырья было затруднено, в связи с чем промышленное получение сырья переведено на метод суспензионного культивирования вируса в первично-перевиваемой культуре клеток ВНК-21 [34]. Однако в научной литературе отсутствуют сравнительные данные об антигенности и иммуногенности вируса ящура, выращенного в различных культурах клеток.

Для дальнейшего повышения эффективности промышленного производства противоящурных вакцин по новой технологии и использования при этом ранее накопленного опыта и аналитического научно-исследовательского материала (В.В. Соболев, 1981, А .Я. Самуйленко, 1982, В.И. Еремец, 1989, Н.Д. Скичко, 1990 и др.) необходимы сравнительная оценка основных показателей качества биопрепарата [33, 94, 116, 118].

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)", Кулагина, Алевтина Георгиевна

5 ВЫВОДЫ

1. При сравнительной оценке антигенной активности вируса ящура, тип А и тип О, репродуцированных в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скота и перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-02, существенных отличий не установлено (при критерии достоверности разницы tp больше критерия Стьюдента, вероятность р<0,05).

4. Непрерывное пассирование вируса ящура в организме морских свинок увеличивает его накопление в сыворотке крови животных с 102 до 108 ТЦД50/мл к 100-му пассажу.

5. Показатель иммуногенности ИмД50 одной и той же серии вакцины уменьшался при заражении вакцинированных морских свинок контрольным вирусом ящура возрастающего пассажа с 60 ИмД50/мл до 0 ИмД50/мл к 100-му пассажу.

8. Повышение вирулентности вируса ящура при непрерывном пассировании и снижении показателя иммуногенности при его использовании с учетом динамики увеличения численности населения Земли и соответственно животных, а также научно-технического прогресса, в конечном итоге приведет к увеличению вероятности непрерывных пассажей вирусов. Все эти данные можно использовать для эпизоотического прогноза.

9. Разработана технологическая документация производства с учетом изменений технологии, обеспечивающая выполнение основного принципа Правил GMP, гарантирующая выпуск продукции, соответствующей нормативной документации.

6 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

3 Разработана и утверждена технологическая документация производства противоящурных вакцин на ФГУП «Щелковский биокомбинат», соответствующая национальным стандартам Российской Федерации.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Кулагина, Алевтина Георгиевна, Щелково

1. Ашмарин И.П., Воробьев T.JL Статистические методы в микробиологических исследованиях Л.: Медгиз, 1962 - 180 с.

2. Базылев П.М. К вопросу серологической диагностики типовых вариантов вируса ящура. //Ветеринария, 1958 № 10 - с. 87-88.

3. Беспалов И.М., Каничева Л.С. Изучение реактогенных свойств противоящурных вакцин с применением некоторых серологических реакций. //Материалы Всесоюзн.конф. по вопр.вет вирусол. М., 1964 - с. 112-114.

4. Бойко А.А. Сравнительная оценка иммуногенных свойств противоящурных вакцин // Тр. ВГНКИ. 1961 - Т.9 - С. 39-42.

5. Бойко А.А., Кирилов Л.В., Козловский Г.А. Количественные методы контроля биологических препаратов //Тр. ВГНКИ. 1974 - Т. 20- С. 3-20.

6. Борисов В.В., Рахманов A.M. Вакцинопрофилактика ящура животных в России. // Материалы междунар.научно-практ.конф. Щелково, 2009-с. 165-171.

7. Бурдов А.Н., Дудников А.И., Малярец П.В. Ящур. М., 1990320с.

8. Вирус и вирусные вакцины/ В.А. Сергеев, Е.А. Непоклонов, Т.И. Алипер М: Библионика, 2007. - 524 с.

9. Воинов С.И. О типах ящурного вируса и особенностях эпизоотии ящура. Автореф.дисс.канд.вет.наук. М., 1949.

10. Воинов С.И., Карпович М.В. Типовые стандартные антигены, полученные из тканей крольчат, для определения типов вируса ящура в РСК. // Тезисы докладов научн. конф. ГНКИ. М., 1962 с.21-22.

11. ПВыдрин В.Н., Щевцов Н.А., Мищенко В.А. Эрозионно-язвенные поражения в ротовой полости КРС // Ветеринария. 2002 - № 8 - С. 9-10.12ГОСТ 253 84-82. Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики ящура. М.: Изд-во стандартов, 1982 - 8с.

12. ГОСТ Р 521537-2006 Производство лекарственных средств. Система обеспечения качества. Общие требования.

13. ГОСТ Р 52249-2004 «Правила производства и контроля качества лекарственных средств».

14. Дудников А.И. Определение типовых и вариантных свойств вируса ящура посредством РСК и РДП. Автореф.дисс.канд.вет.наук. Харьков, 1964.

15. Дудников А.И. Противояшурный поствакцинальный иммунитет // Мат. междунар. научно-практ.конф. М., 2006 - с.469-475

16. Дудников А.И., Мищенко В.А., Захаров В.М. Перспективы противоящурной защиты высокопродуктивных животных // Современная ветеринарная защита коров высокопродуктивных пород. Воронеж, 2005 - С. 2022.

17. Дудников А.И., Пронин И.А. Определение иммуногенности ГОА-формолвакцины из лапинизированного вируса ящура на белых мышах //Ящур: матер, науч. конф. / ВНИЯИ. Владимир, 1968 - С. 69-71.

18. Еремец В.И., Самуйленко А.Я., Еремец Н.К. Совершенствование технологических процессов при производстве противовирусных препаратовна модели противоящурных вакцин. // Материалы междунар.научно-практ.конф. Щелково, 2009 - с. 151-157.

19. Еремец В.И., Самуйленко АЛ., Салажов Е.Л., Крутиков Б.А., Албулов А.И., Скичко Н.Д. Совершенствование технологии и методов контроля при изготовлении противоящурных вакцин // Науковий висник НАУ. Кшв, 2001 - Т. 36 - С. 260-263.

20. Еремец .И., Скичко Н.Д., Зенов Н.И. Входной контроль эксплантантов эпителия языка крупного рогатого скота при изготовлении противоящурных вакцин. //Тез.докл.конф. Покров, 1999 — с.22.

21. Животная клетка в культуре (Методы и применение в биотехнологии)/ Под общ. ред. Л.П. Дьяконова М.: Изд. «Спутннк+», 2009. - 656 с.

22. Захаров В.М., Рахманов А.М. Разработка программы по борьбе с ящуром в странах СНГ // Актуальн. пробл. инфекц. патологии животных:матер. Междунар. конф., посвященной 45-летию ФГУ «ВНИИЗЖ». -Владимир, 2003-С. 14-18.

23. Захаров, В. М. Ящур: Новые концепции борьбы и профилактики // Актуальн. пробл. инфекц. патологии животных: матер. Междунар. конф., посвященной 45-летию ФГУ «ВНИИЗЖ» Владимир, 2003 - С. 11-14.

24. Иммунология / Под ред. Е.С. Воронина — М.,2002 — 408 с.44Инфекционная патология животных в 2-х т. / Под. ред. А.Я.

25. Самуйленко, Б.В. Соловьева, Е.А. Непоклонов, Е.С. Воронина. М.: Академкнига, 2006.

26. Инфекционные болезни животных /под ред. А.А. Сидорчука М., «Колос», 2007. - 671 с.

27. Карпович М.В. Получение типоспецифических ящурных сывороток и антигенов от кроликов для определения типов вируса ящура в РСК. Автореф.дисс.канд.вет.наук М., 1964

28. Киндяков В.И. , Филиппович С.М. Опыт усовершенствования методов типизации вируса ящура. // Труды Казах. НИВИ, 1961 т. 10 - с. 4750

29. Киндяков В.И., Доронин Н.Н., Зотова А.А. Опыт иммунизации морских свинок вакциной против ящура. //Труды Казах. НИВИ, 1969 т. 2 -с. 253-255.

30. Киндяков В.И., Зотова А.А. Активная иммунизация морских свинок против ящура хлороформвакциной. //Труды Казах. НИВИ, 1969 т. 2 -с. 255-261.

31. Козловский Г.А., Мурашкин В.И., Кулешов А.Г., Сорвачев Е.В. Методы количественной оценки иммуногенной активности противоящурных вакцин на крупном рогатом скоте и лабораторных животных. // Мат.научн.конф.ГНКИ, 1967 с.ЗО.

32. Корниевская Г.П., Курченко Ф.П. Простой метод стандартизации суспензий эритроцитов барана для РСК при ящуре. // Вопр.вет.вирусол. М., 1966 - с.629.

33. Коропов В.П., Дудников А.И. Иммуногенность противоящурной ГОА-формолвакцины из лапинизированного вируса, очищенного различными способами. // Тем.сб.научн.раб. Владимир, 1974 - с.38-39.

34. Котова М.В., Татаренко Р.К., Мамков Н.С., Холин Ю.А., Пономарев А.П. Физические и биохимические свойства вируса ящура и его компонентов. Акт. вопр.вет.вирусол.конф. Владимир, 1976 - ч.1 - с. 23.

35. Кравец Н.К., Зырянова Н.И., Сюсюкин, Букин A.JI. Чувствительность к вирусу ящура культур клеток почек и щитовидной железы телят и поросят при длительном культивировании. // Т.С. Н.Р. ящур -Владимир, 1974 т.П.

36. Критерии включения болезней в список МЭБ// МЭБ. Санитарный кодекс наземных животных. 17-е изд. — Paris, 2008 — т.1 — с. 4-7.

37. Кудрявцева Г.А., Сюсюкина М.С., Сюсюкин А.А. Размножениевируса в суспензии клеток почки животных в зависимости от их жизнеспособности. // Мат.научн.конф. ВНИЯИ Владимир, 1968.

38. Кумасов И.С., Глушко Б.А., Семенова Г.Н., Завьялова Г.Ц., Юдина Н.С., Зырянова Н.Н., Сюсюкин А.А., Цветкова Н.Е., Сюсюкина М.С. Культивирование клеток ВНК-21, клон 13 в аппаратах различной емкости. // Мат.научн.конф. ВНИЯИ Владимир, 1968 - с.3-4.

39. Лебедев А.И. Изучение некоторых свойств вируса ящура типа САТ-1. // Труды ВИЭВ М., 1967 - т.88 - с. 258-269.

40. Леньков В.И. Получение противоящурной сыворотки лошадей-Автореф.дисс.канд.вет.наук Алма-Ата, 1950.

41. Лихачев В.И., Бойко А.А., Воинов С.И. Усовершенствование противоящурной вакцины из афтозного вируса. // Труды ТНКИ — 1961 т. 9 -с. 43-49.

42. Лихачев В.И., Воинов С.И., Блехерман В.Е.,Безверкий Г.С., Перминов Г.А., Шевырев Н.С., Днепров С.Р. Усовершенствование метода измельчения вируссодержащей ткани. // Вопр. вет. вирусол. М., 1964 - т.1 -с. 88-91.

43. Лихачев Н. В. Совершенствовать контроль качества и стандартизации вирусных препаратов // Тр. ВГНКИ. 1980 - Т. 29 - С. 5-13.

44. Маслова Н.С. Изучение диагностических препаратов из культуралного вируса ящура. Автореф.дисс.канд.вет.наук Владимир, 1970.

45. Мустофаев Г.А., Козловский Г.А., Сер-Од, Сеньков С.Д. Изучение иммунобиологических свойств штаммов вируса ящура, полученных из Монгольской Народной республики. //Труды ГНКИ М., 1966 -т. 13 - с. 140.

46. Нестерова Ю.С., Собко А. И., Павлова М.А., Маслова Н.С. Изучение комплементсвязывающей антигенов и антител при ящуре, вызванная вирусом штамма Азия-1. // Акт.вопр.вет.вирусол. М., 1965 - ч. 1 -с. 64-65.

47. Ногина В.Т. Получение типоспецифических ящурных сывороток от взрослых кроликов. // Ветеринария, 1962 № 8 - с. 69-72.

48. Ногина В.Т. Типирование вируса ящура с сыворотками переболевшего крупного рогатого скота. // Ветеринария, 1957 № 4, с. 50.

49. Ногина В.Т. Типирование вируса ящура с сыворотками переболевших животных. // Сб.научн.тр. Новосиб. НИВС 1958 - т.1 - с. 217221.

50. Олейник Н.К., Дудников А.И. Изготовление концентрированных антигенов для реакции связывания комплемента вируса ящура,адаптированного к организму новорожденных животных. // Вести с.-г.науки -1968-в. 12 с.102-106.

51. Олейник Н.К., Дудников А.И. Получение специфических комплементсвязывающих сывороток при ящуре. // Научн.тр. УНИЭВ 1963 -т.29-с. 71.

52. Онуфриев В.П. Экпериментальные исследования по иммунологии ящура. // Автореф.дисс.канд.вет.наук — 1969.

53. Онуфриев В.П., Глушко В.А., Коневатова Н.И., Муравьев В.К. Превентивные свойства сыворотки переболевших и вакцинированных животных как тест при оценке противоящурного иммунитета. // Мат. Всесоюзн. Конф. по вопр.вет.вирусол. — 1964 с. 120.

54. Онуфриев В.П., Дудников А.И., Швецов Ю.Ф., Захаров В.М., Семенцов А.Е. Иммунологическая реакция у морских свинок на последовательное введение ящурных антигенов различных типов. // Акт.вопр.вет.вирусол. М., 1965 - Ч. 2 - с. 11.

55. Онуфриев В.П., Швецов Ю.Ф., Дудников А.И., Малярец П.В., Пронин И. А., Захаров В.М. Определение иммуногенных свойств противоящурной вакцины на мышах. // Тем.сб.раб.по пробл.ящура -Владимир, 1970 т. 1 - с. 208-215.

56. Онуфриев В.П., Швецов Ю.Ф., Никитина Р.А. Изучении иммуногенных свойств вируса ящура и противоящурных вакцин на взрослых белых мышах // Ветеринария, 1965 № 5- с.34-36.

57. OCT 10083-95 Стандарт отрасли. Продукция агробиологической промышленности. Технологические регламенты производства. Содержание, порядок разработки, построения, согласования и утверждения.

58. Петренко В.Г., Андреев Е.В., Сайко О.О., Онуфриев В.П., Ротов В.И., Чечеткина Н.П. Изучение иммуногенных свойств противоящурных вакцин на лабораторных животных. // Научн.тр.УНИИЭВ — 1961 т. 27 - вып. 1 - с. 25-38.

59. Плахинский Н.А. Биометрия. М., 1972.

60. Поляков Ю.В. Экспериментальное обоснование промышленной технологии концентрированной вакцины из вируса яшура варианта А22 , выращенного в эксплантантах эпителия языка крупного рогатого скот^. Автореф.дисс.канд.вет.наук М., 1974.

61. Равилов А.З. Изучение вирулентных, комплементсвязывающих свойств вируса ящура и динамики содержания комплементсвязывающих антител в сыворотках крови белых крыс после введения ящурного антигена. // Ученые записки, КГВИ Казань, 1968 - с. 1-102.

62. Равилов А.З. Экспериментальные материалы по изысканию специфических антигенов и сывороток для типизации вируса ящура реакцией связывания комплемента. Автореф.дисс.канд.вет.наук Казань, 1968.

63. Ратнер JI.C. Экспериментальные данные по активной иммунизации при ящуре. // Сов.вет. — 1937 № 8 - с. 34-37.

64. Ратнер JI.C., Грибанов В.И., Соколова Е.А., Бобырь А .Я. Результаты испытания противоящурной вакцины ВИЭВ из вируса, адаптированного на кроликах. // Ветеринария, 1955 № 1.

65. Резепов Ф.Ф., Воробьев А.А. Принципы стандартизации биологических препаратов // Методические указания по лабораторной оценки качества бактериальных и вирусных препаратов. М., 1972 - С. 26-39.

66. Родионов В.И. Количественные методы изучения антигенных свойств эпизоотических штаммов вируса ящура. Автореф.дисс.канд.вет.наук, Владимир, 1970

67. Сакварелидзе В.Э. Получение ящурного антигена и его практическое значение. // Сов.вет. — 1933 № 1-е. 14-17.

68. Салажов, E.JL, Сандомирский А.М. Оценка методов контроля иммуногенности вакцин // Разработка методов проверки биологических свойств производственных штаммов микроорганизмов и диагностических препаратов: сб. науч. тр. / ВГНКИ М., 1983 - С. 88-91.

69. Салажов E.JI. Влияние титра ящурных антигенов и сывороток на результаты исследований методом РСК. // Тр. ГНКИ — 1966 т. 13-е. 132139.

70. Салажов Е.Л., Загороднов М.В., Жаров А.И., Шевырев Н.С., Хорьков И.А. Динамика развития вирулентного и комплементсвязывающего антигена в процессе культивирования вируса ящура. // Акт.вопр.вет.вирусол. -М., 1964-ч. 1-е. 227-232.

71. Самуйленко А.Я. Оценка активности вируса ящура при промышленном производстве инактивированных вакцин. Автореф. дисс. канд. вет. наук: М, 1978. 15 с.

72. Самуйленко А.Я., Казаков М.А. Влияние вирулентности вируса ящура, используемого для контрольного заражения, на показатели иммуногенной активности вакцин. // Передовой научно-производств. опыт в биопромышленности № 6, 1983.

73. Сергеев В.А. Размножение вирусов животных в культуре ткани. // Мат.Всесоюзн.конф.по вопр.вет.вирусол. М., 1965 - ч. 2 - с. 54-56.

74. Сергеев В.А. Размножение вирусов животных в культуре ткани. Автореф.дисс.канд.вет.наук М., 1967.

75. Сергеев В.А., Казанцева Н.В., Авилов B.C. Культивирование вируса ящура на переживающем эпителии и использование этого метода для массового производства противоящурной вакцины ВИЭВ. // Тр.ВИЭВ 1965 - т. 29 - с.93.

76. Сергеев В.А., Курченко Ф.П., Мельник В.И., Трубицын Б.И. Определение иммуногенности противоящурных вакцин на белых мышах. // Мат.Всесоюзн.конф.по вопр.вет.вирусол. М., 1965 - ч. 2 - с. 27-28.

77. Сергеев В.А., Федорова Т.Л. Сравнительная оценка методов титрации вируса ящура. // Ветеринария, 1962 № 8 - с. 67-69.

78. Сергеев В.А., Хилинская В.П. Влияние трипсинизации на рост клеток и размножение вируса. // Акт.вопр.вет.вирусол. М., 1967 - т. 2 - вып. 1 - с. 26-36.

79. Слепов А.А. Изучение постинфекционного и поствакцинального иммунитета при ящуре методом серонейтрализации. // Мат.Всесоюзн.конф.по вопр.вет.вирусол. М., 1964 - с. 118-119.

80. Слепов А.А. Материалы по изучению поствакцинального иммунитета при ящуре. Автореф.дисс.канд.вет.наук М., 1964.

81. Слепов А.А. Накопление нейтрализующих антител в крови вакцинированных против ящура морских свинок. // Сб.научн.раб.Курской обл. 1967 - вып. 4 - с.29.

82. Слепов А.А. Определение титравируснейтрализующих антител у переболевших ящуром морских свинок. // Ветеринария, 1964 № 2 - с. 19.

83. Собко А.И., Коропов В.Н., Онуфриев в.П., Прохоров В.Н., Павлова М.А. Идентификация эпизоотических штаммов вируса ящура варианта Аи. // Ветеринария, 1967 № 1 - с. 29-31.

84. Собко А.И., Нестерова Ю.Ф., Павлова М.А., Кипицина Г.Д., Маслова Н.С. Опыт изготовления и контроля вариантных сывороток вируса ящура тип А. // Акт.вопр.вет.вирусол. М., 1967 - т. 11 - с. 65-66.

85. Собко А.И., Прохоров В.Н., Соколов JI.H., Кошецян Э.Г. Антигенные свойства вируса ящура концентрированного полиэтиленгликолем. // Ветеринария, 1973 № 5 - с. 67-68.

86. Собко А.И., Соколов Л.П., Кошецян Э.Г., Кочергина М.Ф. Серологический метод оценки напряженности противоящурного иммунитета. // Тез.докл. IV Всесоюзн.научн.конф. по веет.вирусол. -Владимир, 1976 с. 16-17.

87. Собко А.И., Хухоров В.М., Овчаренко Н.В., Прохоров В.Н. Сравнительное изучение двух режимов инактивации комплементсвязывающего антигена из лапинизированного вируса ящура. // Ящур 1970 - т. 1 - с. 342-350.

88. Соболев В.В., Самуйленко А.Я., Маковьяк К. Напряженность и длительность иммунитета, вызванного противоящурной вакциной, изготовленной в СССР. // Мат. XVI конф.пост.комиссии по ящуру МЭБ. -Париж, 1981.

89. Соловьев П.А. К вопросу о типовой специфичности ящурного антигена. // Сов.ветеринария 1934 - № 2 - с. 86-87.

90. Сюрин В.Н., Самуйленко АЛ, Соловьев Б. В, Фомина Н.В. Вирусные болезни животных М.: ВНИТИБП, 1998 - 928 с.

91. Сюсюкин А.А., Кравец Н.К., Калугина Т.Е., Жучков М.И. Культивирование вируса ящура в клетках почек ягнят и его иммуногенность. // Ветеринария, 1972 № 4 - с. 36-38.

92. Сюсюкин А.А., Кравец Н.К., Сюсюкина М.С., Цветкова Н.Е., Маслова Н.С. Изучение антигенности вируса ящура, выращенного в клетках ВНК-21 (клон 13/2). //Акт.вопр.вет.вирусол. М., 1967 ч. 1 - с. 35-36.

93. Сюсюкин А.А., Кравец Н.К., Цветкова Н.Е., Завьялова Г.Н. Выращивание вируса ящура комбинированным способом в клетках ВНК-21 и его иммунобилогические свойства. // Мат.научн.конф. Владимир, 1968 - с. 15-17.

94. Сюсюкин А.А., Кравец Н.К., Цветкова Н.Е., Павлов В.Е. Иммуногенные свойства опытной вакцины против ящура. // Ветеринария, 197 № 5 - с. 40-42.

95. Сюсюкин А.А., Сергеев В.А., Груздев А.И., Рытов В.Н. Аппараты для выращивания вируса ящура во вращающихся сосудах. // Ящур, тем.сб. -1970 т. 1 - с. 30-33.

96. Сюсюкин А.А., Сероджев А.Т., Малышева К.И. Накопление вируса ящура в культурах первичных, диплоидных и перевиваемых клеток почек ягнят при разных методах выращивания. // С.-х.биологич. 1975 - т. 10 - № 5 - с. 689-693.

97. Сюсюкин А.А., Сюсюкина М.С., Демьянова М.В., Кугмасов И.С., Семенова Ф.Ф. Изучение некоторых условий, влияющих на размножениевируса ящура в суспензии клеток ВНК-21. // Мат.научн.конф. Владимир, 1963 - с. 19-20.

98. Сюсюкин А.А., Сюсюкина М.С., Кравец Н.К., Цветкова Н.Е., Калугина Т.Е. Выращивание вируса Oi в клеточных культурах и изучение его иммунобиологических свойств. // Ящур, мат.научн.конф. Владимир, 1970 -с. 11-12.

99. Сюсюкин А.А., Сюсюкина М.С., Цветкова Н.Е., Гринева Е.А., Жучков М.И., Захаров В.М., Ефимов Н.И. Некоторые свойства вируса ящура в зависимости от системы культивирования. // ТСИР ящур Владимир, 1974 т. 2 - с. 63-68.

100. Филиппович С.М. Применение РСК для типизации вируса ящура. // Тр. Казахской НИИВ 1957 - т. 8 - с. 85-88.

101. Филиппович С.М., Савин В.К. Опыт получения типовых и вариантных сывороток и антигенов для РСК при ящуре. // Вопр.проф.и искорен.ящура Новосибирск, 1966 - с.257-262.

102. Фомина М.С. Антигенные свойства штаммов вируса ящура тип О. Автореф.дисс.канд.вет.наук — 1967.

103. Фомина М.С., Дрягалин Н.Н., Шажко Ж.А., Онуфриев В.П., Ботаненко Г.А. Антигенные свойства вируса ящура тип С. // Ящур, мат.научн.конф.ВНИЯИ 1970 - с. 24-25.

104. Фомина М.С., Коропов В.Н. Получение штаммоспецифических сывороток и антигенов для идентификации эпизоотических штаммов вируса ящура типов О и А. // Мат.конф.мол.уч.ВНИИВВиМ 1967 - с. 37-38.

105. Хазинов Н.З., Гриценко А.И., Базанова JI.A. Отчет о командировке советских специалистов в Англию с целью изучения методов идентификации, выделения и биохимического анализа вируса ящура 1976.

106. Чудин О.В., Шубина Е.А., Бобровская И.В. Опыт внедрения системы мененджмента качества на ФГУП «Щелковский биокомбинат», сертификации СМК и работы по улучшению ее функционирования. // Материалы междунар.научно-практ.конф. Щелково, 2009 - с. 95-102.

107. Шажко Ж.А. Изучение вируснейтрализующих свойств сывороток животных, привитых вакциной варианта Аи. // Бюлл.научн.-техн.инф., ВИЭВ -1967.

108. Шажко Ж.А. Сравнительное изучение методов постановки РН. // Бюлл.научн.-техн.инф., ВИЭВ 1967.

109. Шажко Ж.А.Реакция нейтрализации на культуре перевиваемых клеток и ее использование для изучение иммунитета при ящуре. Автореф.дисс.канд.вет.наук 1967.

110. Швецов Ю.Ф., Собко А.И., Шажко Ж.А., Швецова Р.В., Сюсюкина Н.С., Шажко Л.Ф. Модификация РСК при определении типа вируса ящура. // Ветеринария, 1979 № 4 - с. 116-117.

111. Швецов Ю.Ф., Сюсюкина М.С., Фомина М.С., Цветкова Н.Е., Шажко Л.Ф. Изучение комплементсвязывающих свойств культурального вируса ящура. //Ящур, мат.научн.конф.ВНИЯИ 1968 - с. 38-40.

112. Шевырев Н. С. Введение в ветеринарную иммунологию //-Курск, 1999-249 с.

113. Allende R. М., Mendes da Silva R.M., Comparsi D J. South American standarts for foot-and-mouth disease vaccine quality // FMD: Control Strategies Int. Symp, Proc, Lyons, 2002. Paris, 2003 - p. 331-336.

114. Asceii A. Uber die neiostagminreaktion bei MKS. // Z.Inf.Paras.Hyg. -1910-№8-p. 308.

115. Bachrach H. L., Boer C. J. The multiplication of FMD virus in tripsinised calf kidney and tongue cells and ins use as immunizing and complement fixing antigens. // J. immunol. 1961 - 86-p. 282.

116. Bachrach H. L., Polatnick J. Report of the Meeting of the Reseach group of the Standing Technical Committee at the plum Island Disease Laboratory. Lang. Island New York, USA, 1967/

117. Bachrach H. L., Trautman R., Breese S.S. Chemical and physical properties et virtually pure FND virus. // Amer. J. Vet. Res. 1964 - 25 - № 105 -p. 333-342.

118. Bachrach H.L., Hess W.R., Callis C.K. Foot-and-mouth disease virus: Ite growth and cytopathogenecity in tissue culture. // Sei. 1955 - № 22 — 3185p. 1269-1270.

119. Barei S. Sul potere antigene dialcuni ceppi varianti dell tire A del virus aftose. // Areh. Vet. Ital. 1953 - 4 - № 5 p. 423.

120. Bedson S.R., Maitland H.B., Burbury V.M. The comparioon of strain of virus from seeden vith the strains 2GE and Walle a by immunity testain guinea pigs. // Progr.Rep.Et.Mth.Dis.Res.Com. 1927 - № 2 - p. 98.

121. Bekkum J.G. Neutralisierende antistoffen in Seravan tegen Mond-en Klausees geente Runderen. // Thes.univ.Utrecht Wageningen 1959 - p. 175.

122. Bradish C.J., Brooksby J.B., Complement fixation studies of the specificity of the interactions between complements of the virus system of FMD and antibodies. // J.Cen.Microbiol. 1960 - № 22 - 2 - p. 405-415.

123. Bradish C.J., Brooksby J.B., Dillon J.F., Worambuena M. Ultracentrifiigal studies of the infective and complement-fixing componets in the virus system of FND. // Proc. Proy. Soc. 1952 - № 140 - p. 107-127.

124. Bradish C.J., Brooksby J.B., Tsubahara K.S. The complement-fixation test of complements of the virus system of FMD and antibodies. // J.Cen.Microbiol. 1960 - № 22 - 2 - p. 392.

125. Bradish C.J., Lacuelin О., Farley I., Helen E.,Ferrier N. Studies on the Nature of the neutralization reaction and the competition for neutralizing antibody between componente of the virus system FMD. // Virology — 1962 № 18 - 3 - p. 378-400.

126. Brooksby J.B. The antibodies in FMD. // A.R.C. Rept. Series 1949 -Ris. Nojestys Stationery Office - № 1 - p. 85-87.

127. Brooksby J.B. The technique of complement fixation in FMD researcg. // A.R.C. Rept. Series 1952 - № 12 - p. 30.

128. Brooksby J.B., Variants and immunity: difinitions for serological investigations. Int. Symp. FMD, Lyon, 1967.

129. Brooksby J.B., Wardle N. L. Titration of the virus of FMD in culture. // J. hyg. comb. 1954 - № 52 - 1 - p. 87-99.

130. Brooksby J.B.,Relationship between the viral components and immunizations. // Rep.mtg.Eeurop.Comm. Control FMD. Ancara, 1970 -p. 1819.

131. Brown F., Cartwright B.B. Purification of the virus of FMD by fluorocarbon treatment and its dissociation from neutralizing antibody. // I.Immunol. 1960 - № 85 - p. 309-313.

132. Brown F., Crick I. Application of agar-gel diffusion analysis to study of the antigenic structure of inactivated vaccines prepared from the virus of FMD. // I.Immunol. 1959 - № 82 - p. 444-447.

133. Brown F., Crick I. Application of agar-gel precipition test to the study of the virus of FMD. // Virology 1958 - № 5- p.133-144.

134. Capatick P. В., Telling R. C., Chapman W. G., Steart D. L. Growth of cloned strain of hamser kidney cells in suspended culture and their susceptibility to the virus of FMD. // Nature 1965 - № 195 - p. 1163.

135. Cartwrignt S. F., Pay T.W., Henderson W. H. Multiplication of the virus of FMD in culture. // J.Cen.Mirobiol. 1957 - № 16 - p. 730.

136. Cinca A.T. The Reaction of complement fixation in FMD as means of identifying the different types of vims. // I. Hyg. Camb. 1929 - № 28 - 4 - p. 325-339.

137. Cowan К. M. An immunochemical approach to FMD virus vaccine potency evaluation. // in Report Mtg.Res. Group FAO. Ankara, 1971 - p. 20-31.

138. Cowan К. M., Fhner G.C. Immunochemical studies of FMD. VIII Detection and quantitation of antibodies by radical immunodiffusion. // The J. of Immunology 1970 - v. 105 - № 3 - p. 557-566.

139. Cunha R. C. Demonstration of immune response to FMD vaccine in young adult mice. // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1960 - № 103 - 4 - p. 700-703.

140. Cunha R. C. Tpreuve de protrction par le vaccine anti-apheteux ches les jeunes scuries adultes. // Bull. Off. Intern, Epis. 1960 - № 53 - p.676-678.

141. Cunha R. C., Batptista I., Serran V., Torturella I. El use de los ratones Lactontes en la evaluecionde los anticuepos contre el virus de la fiovra aftosa у la significacion immunologica. // Gac.Vet. Buenos-Aires, 1957 - № 19/1101 - p. 243-267.

142. Davie J. A complement fixation technologue for the quantitative measurement of antigenic differences between strain of the virus FMD. // J.Hyg.Camb. 1964 - № 62 - 4 - p. 401-411.

143. Davie J., Sally P. Antigenic differences between strains on FMD virus of type SAT-1. //J. Hyg. 1963 - № 2 - p. 217-230.

144. Dinter E., Wesalen T. Etude sur la product et le controle du vaccine anti-aphteux prepare selon la technique de cultures de tissue. // Bull. Off. Intern. Epis. 1958 - № 59 - p. 87-90.

145. Doel T. R. Natural and vaccine induced immunity to foot-and-mouth disease: the prospects for improved vaccines // Rev. Sci. Tech. Off. Inter. Epiz. - 1996 -Vol. 15 - № 3 - p. 883-911.

146. Fayet M. T. Concentration du virus de la fievre aphteuse par lepolyethyleneglycol. // Ann. Inst. Pasteur 1970 - № 121 - 1 - p. 356-366.

147. Fayet M. Т., Fargeaud D., Louisat P., Stellmann C., Roumiantseff M. Measure physico-chimique des particules 140 S du virus de la fievre aphteiuse. // Ann. Inst. Pasteur 1971 - № 121 - 1 - p. 107-118.

148. Fayet M. Т., Roumiantseff M., Dubouclard C., Fontaine J. Utilisation d'un fluorocarbone comme metode d'etude du virus de la fievre aphteuse. // Ann.Inst.Pasteur 1965 - № 109 - p. 652-662.

149. Fayet M. Т., Roumiantseff M., Fargeaud D. Analyse par centrifugation sonale en gradient de saccharose des particules virales continues dans une prepararation du virus de la fievre aphteuse. // Rev. Immunol. 1969 - № 33 - 6 - p.335-344.

150. Fayet M.T. Concentration du virus de la fievre aphteuse par le polyethyleneglycol. // Ann.Inst.Pasteur 1970 - 118 - p. 356-366.

151. Fayet M.T., Fargeaud D., Louisat P., Stellmann C., Roumiantzeff M. Measure physico-chimique des particules 140S du virus de la fievre aphteuse. // Ann.Inst.Pasteur 1971 - v 121 -№ 1 - p. 107-118.

152. Ferris N.P., Bulut A.N., Rendle T. A solid-phase competition EL ISA for measuring antibody to foot-and-mouth disease virus // Session Res. Group. Europ. Comm. for Control of FMD, Bulgaria 5-8 Sept. 2000 Rome, 2000 -p. 197207.

153. Fogeldby E., Jacobsen H. Experiences faites avec la metode Frenkel.// Bull. Off Intern. Epiz. 1952 - 37 -p. 473

154. Foot-and-mouth disease: control strategies: proc. int. symp. France, Lyon, 2002. - Paris etc.: Elsevier, 2003 - 390 p.

155. Foot-and-mouth disease: procedings. France, Strasboorg, 2003 - 1071. P

156. Frenkel H.S. Histoloqie Changeam explanted bovine epithelial tonque infected witch the virus of FMD. // Amer .J. Vet.Res. 1949 - № 35 - p. 142-145.

157. Frenkel H.S. Innocuity and potency testing of FMD vaccine in the Netherlands. // Europ.Comm.Control. FWD Lelystad Netherlands 22-24 oct.1974. Rome FAO- 1975-p.81.

158. Frenkel H.S. Research on FMD. II The cultivation of the vims in explantations of the tongue epithelium of bovine animals. // Amer.J. Vet.Boz (G) Se Cral (M) vaccine anti-aphteux concentres. 1950 - № 11 - p. 371-373.

159. Frenkel H.S. Research on FMD. Ill The cultivation of the virus on a practical scale in explantations of bovine tongue epithelium. // Amer.J. Vet.Res. -1951 -№39-p. 187-190.

160. Frenkel H.S. Research on Foot-and-Mouth Disease III The cultivation of the virus on a practical scale in explantations of bovine tongue epithelium. Amer.J.vet. Boz.(G) Se Oral (M) vaccine anti-aphteux concentres. 1950 - 11 - p. 371.

161. Frenkel H.S., Ribelin W.E. Cultivation of FMD virus in explanted epithelium of the bovine tongue. IX growth characteristics of the virus in large seale tissue cultures. // J.Vet.Res. 1956 - 17 - p. 40-44.

162. Frenkel H.S.Histologie Changesm explanted bovine epithelial tongue tissue infected with the virus of Foot-and-Mouth Disease. // Amer.J.Vet.Res. -1949 35 -p.142-145.

163. Frenkel H.S.Recherches sur la Fievre Aphteuse La culture du virus sur une echelle pratique 5 par explantation d'epithelium lingual de bovin. // Bull.Off.Int.Epiz. 1953 - 39 - p. 91-97.

164. Frenkel H.S.Research on Foot-and-Mouth Disease II The cultivation of the virus in explantations of tongue epithelium of bovine animals. // Amer.J.vet.Boz.(G) Se Oral (M) vaccine anti-aphteux concentres. 1950 - 11 - p. 371.

165. Galea M. La reaction de fixation complement dans la fievre aphteuse. // Arch.noum.Phat Exp.Microbiol. 1935 - 8 - p. 78.

166. Garcia Mata E., Pizzi I., Aramburu H. Contrioncion al studio de los anticuerpos immunuzated de la flevreaftosa por medio de la rata у el.ration lactantes. // Gac.Vet.Buenos-Aires 1952 - 14 - p.79-86.

167. Gayot G., Dhennin L., Dhennin L. Loi dose-effet de l'antigene antiaphteux sur souris consanguine. // C.r.seanc Acad.scien. 1964 — 258 — p. 2236-2239.

168. Gayot G., Dhennin L., Dhennin L. Utilization d'une souche aphteuse murinisee pour la determination du potential antigenique du vaccine anti-aphteux inactive. // Bull.Off.bitern.Epiz. 1964 - 61 - p. 1079-1089.

169. Gins H.A., Fortner J. Experimentelle MKS-Infektion und Immunitat bei Mecrschweinchen auf dem Filterung und Inftwege. // Zbl.Hyg. 1926 - 103 -p. 699.

170. Grawes I.H. The differentiation of subtypes (variants) of FMD-virus by serological methods. 1 .Complement fixation test. // Amer.J.Vet.Res. — 1960 21 -83-p. 687-690.

171. Grubman M. J. Development of novel strategies to control foot-and-mouth disease: marker vaccines and antivirals // Biologicals. 2005 - Vol. 33 - № 4.-p. 227-234.

172. Heining N., Rohrer H. Uber Untersuchungen an atypischen MKS Epizootie stammen des Jahres 1959. Ber IX Conference de la commission permanente de la fievre aphteuse de L.O.I.E. Paris 3-5 Mai 1 1960. // Bull.Off.Intern;Epiz. 1960 - 53 - p.885.

173. Henderson W.H. The quantitative Study of FMD-virus // Hep.Ber,Agric.Hes conncil. London, 8.HM - 1949 - p. 50.

174. Henderson W.H. The use of virus culture in foot-and-mouth disease research. // Proc.XV Intern.Vet Congr. Stockholm, 1953 - Part 1 - p. 191.

175. International conference on the control of infection animal disease by vaccination: programme and abstracts book. Buenos Aires, 2004 - 102 p.

176. Kepatik P.B., Sellers R.F., Dorin L., Stuart K. The neutralization of the virus of FMD by Immuniserium. // Archiv fur die gesamte Virus. -Vorschung, 1960 9 - p. 5.

177. Korn G., Truszczynsky M. Nachweis Komplementbinden der Antikorpernach Marucci in der seren experimentell MKS-durchseuchter Rinderund Schweine sowie hyperimmunisierter und vakzinierter Rinder. // Arch.Exp.et.Med. 1959 - v. 13-p. 103-115.

178. Krag P., Schmidt S. Komplementbindung bei Maul-und-Klauenseuche Infektionen. // Z.immun.Forch.Exp.Ther. 1937 - 91 - 1-p. 409-412.

179. Kubin G. Report on innocuity and test foot-and-mouth disease vaccines in Austria. // Europ.comm.control FMD Lelystad Netherlands 22-24 oct.1974 Rome FAO 1975 - p. 77-79.

180. Liebermann H., Gralheer H. Certaines proprietes physiques du virus aphteux purifie. // Acta virol. 1968 - 12 - 2-p. 181-182.

181. LofflerF., Frosch P. Summarischer Bericht uber der Ergebnisse der Untersuchungen zur Erforschung der Maul und Klauenseuche // ZentBl Bact. Harasitkunde I. 1897 - № 22 - p.257-259.

182. Lucam F., Fedida M., Dannacher G. Le controle officiel frmujais des vaccins anti-aphteux. //Bull.Off.Intern.Kriz. 1966 - 65-p. 385-418.

183. Lucam F., Fedida M., Dannacher G. Mesure de l'imminute anti-aphteuse du boeuf par epreuve sur le cobaye. // Rev.Med.Vet. — 1964 v 27 - № 4— p. 225-245.

184. Lucam F., Fedida M., Dannacher G. Methodes et bilan de quinze annees du controle officiel d'efficacite des vaccins anti-aphteuxproduits en France. //Arch.Exp.Veterinarmed 1970 - 24-p. 141-157.

185. Mackay D. K. J., Forsyth M. A., Davies P. R. Differentiating infection from vaccination in foot-and-mouth disease a panel of recombinant non-structural protein in ELISA // Vaccine. 1998 - Vol. 16 - p. 446-459.

186. Mackowiak C. Types, sous-types et variants du virus aphteux. Etude des variantes. 18 Congres Mond.Vet., Paris., 1967.

187. Mackowiak С. Types, sub-types and Variants of the FMD-virus: Study of variante. // Res.Symposium Lyone,14 July 1967 - IV - p. 94-102.

188. Mackowiak C., Lang R. Emplio des culture de tissue dans le titrage du virus aphteux et la recherche des anticorps. // Bull.Off.Int.Epiz. 1958 - 49 - 1-2 -p. 99-105.

189. Mackowiak C., Lang R., Fontaine J., Camand R., Petermann H. Relation entre d'anticorps neutralisantes et protection des animaux apres vaccination anti-aphteuse. // Inst.Pasteur 1962 - 103 - 2 - p. 252-261.

190. Mackowiak C., Lang R., Petermann H., Roumiantzeff M., Fontaine J., Stellmann C. Controle quantitative du vaccine anti-aphteux. Titrage des anticorpd neutralisants chez les cobayes vaccines. // Rev.Med.Vet. 1965 - vl6 - p. 497507.

191. Macpherson J., Stoker M. Syrian hamster fibroblast cell line BHK — 21 and its derivaties. //Nature 1964 - 203 - p. 1355-1357.

192. Martin R.L., Ames B.N. A method for determining the sedimentation behavior of enzymes: application to protein miztures. // J.Biol.Chem. 1961 - 236 -p. 1372-1379.

193. Marucci A.A. Detection of foot-and-mouth disease antibody vaccinated cattle by direct complement fixation. // Amer.,J.Vet.,Res. 1958 -19 -73-p. 979-984.

194. Marucci А.А. Direct compliment fixation for detection of foot-and-mouth disease antibody insarum from experimentally infected cattle. // Amer.,J.Vet.,Res. 1957 - 18 - p. 785-791.

195. Mayer M.M., Osier A.G., Bier O.G., Heidelberger M. Quantitative studies of complement fixation. 1. Method. // J.Immunol. — 1948 59 - p. 195206.

196. Mayer M.M., Osier A.G., Bier O.G., Heidelberger M. The activating effect Mg and other cations of the hemolytic function of complement. // J.Exp.Med. 1964 - 84 - p. 535-548.

197. Meignier B. Culture de cellules sur microporteus en vue de la production industrielie du vims aphteux. // Bulletin de L'Office Inter, des Epizootics 1979 - 91 (1—2) - p. 29-41.

198. Mensen K. Zur frage der serologischen Methoden bei MKS. // Munch tierarzt.schr. 1924 - 75-p. 1001.

199. Mowat G.N. Foot-and-mouth disease vaccine tests at A.V.R. // J.Perbright.Europ.comm.control FMD Lelystad Netherlands 22-24 oct. 1974 -Rome FAO 1975 p.68-71.

200. Muntin N., Dohotaru V., Bercan A. On the comparative of culture. Value vims and the natural vims FMD vaccines. // Arch.Vet. 1970 - 6 - p. 3-9.

201. Nagel H.C. Das Verhalten des MKS-Virus in neugeborenen laboratoriumatieren. // Zbl.Bakt.l Orig. 1952 - 159 - 1-2 - p. 40-46.

202. Nottebohm A., Gaggero A., Gemes., Cunha G. Examin antigenique d'un vaccin antiaphteux inactive (type "A" Vall6e), prepare aves du vims cultive sur des cellules BHK 21. // Bull.Off.Intern.Epiz. 1961 - p. 919-933.

203. Osier A.G., Strauss J.H. Diagnostic complement-fixation 2.Application to the serodiagnosis of Syphilis. // Amer.J.Symph.Con.and vener. Disease-1952-36-2-p. 154-162.

204. Osier A.G., Strauss J.H., Mayer M.M. Diagnostic complement-fixation l.A.Method.// Amer.J.Symph.Con.and vener. Disease 1952 - 36 - 2 - p. 140-153.

205. Patty R.E., Bachrach H.L., Hess W.R. Growth of FMD virus in bovine kigney cell suspension. // Amer.Vet.Res. 1960 - 21 - p. 144.

206. Patty R.E., Cattral G.E., Gailiunas P. Comparative Assay of FMD-Virus in cattie Mice and cell Culture. // Bull.Off.Intern.Epiz. 1965 - 63 - 9-10 -p. 1559-1606.

207. Patty R.M., Nareross N.L. Production of Foot-and-Mouth Disease virus with high complement-fining antigenicity. // Amer.J.Vet.Res. — 1961 — 22 — 89-p. 775-779.

208. Pay T. W. F., Hingley P. J. Foot and mouth disease vaccine potency tests in cattle: the interrelationship of antigen dose, serum neutralizing antibody response and protection from challenge // Vaccine. 1992. - Vol. 10 - Issue 10 - p. 699.

209. Randrup A. Ultracentrifugation of the virus of FMD. 1 .Experiments for the determination of the sedimentation constant of the virus. // Acta pathol.microbiol.Scand. 1931 - p. 385-401.

210. Rivenson S. Adjuvant properties of aluminum hydroxide, carboxymethyl-cellulose and saponin in the production of antibodies to foot-and-mouth disease virus in guinea pigs. // Gac.Vet. 1958 - 20 - p. 209-219.

211. Roumiantzeff M. Amelioration de la automatique Technicon de fixation du complement dite de dilution exponentielle. // Ann.Biol.clin. 1969 -27-№ 1-2-p. 11-20.

212. Roumiantzeff M. Automatisation de la reaction de fixation du complement. Application en virologie. Reunion Association Franchise. Veterinairie Microbiologistes et specialistes des maldies infectieuses. Alfort,mai 1966.

213. Roumiantzeff M., Fontaine J., Dubouclard C. Evaluation du pouvoir immunogene du virus aphteux par mesure du pouvoir fixant le complement apres traitement par un fluorocarbone. // C.R.Acad.Sci. Paris, 1965 - 261 - p.598-601.

214. Roumiantzeff M., Stellmann C. Emploi de methodes automatiques de fixation du complement pour le titrage des antigenes viraux et des serumscorrespondants. Simposium Technicon, Europeen Automatisation en chimie analytique. Paris. 2-4 novembre 1966.

215. Roumiantzeff M., Stellmann C., Dubouclard. Technique de fixation quantitative du complement appliquee a l'etudes du virus de la fievre aphteuse. Bull.Soc.Sci.Vet.Lyon,1965,3,243,257-267.

216. Schjerming, Thiesen K. Studier over Komplementbinding en forbedret kvantitativ komplementbindingsteknik ved.diagnocticering of aphtae epizooticae -Kobenhavn 1964.

217. Schmid G. Ueber das Maul-und Klauenseuche — Virus und die Virus // Vakzinen. Schweizer Archiv f. Tierieilkunde 1940 - LXXXII, 4 - p. 133 -147.

218. Schneider B. Antigendifferenzen zwischen zwei A5 Stammen des MKS-virus. // Bull.Off.Int.Epiz. - 1960 - 53 - p. 859.

219. Schwartz D. M6thodes statistiques a l'usage des medecins et des biologistes. // Edit.Med.Flammarion -1963 p. 290.

220. Seller R., Burt L., Gumming A., Steward D.The behavior of Strains of the virus of FMD in pig, celf, os and lanb kidrey tissue cultures. // Arch.ges Virusforsch 1959 - 9 - 5 - p. 637-646.

221. Sergueiev V.A., Driagaline N.N., Cnoufriev V.P., Sielsieukine A.A. Stude des variantes modifiees du virus aphteux. // В OIE 1969 - 71 - 1-2 - p.155-165.

222. Shvetcov V.F., Gool A.C., Komar S. Comparative studies en the sensitivity fixation test commonly used for typing of foot-and-mouth disease virus. // Indian.Vet.,J. 1969 - 46 - 5 - p. 359-367.

223. Silberstein E., Kaplan J., Taboga 0. Foot-and-mouth disease virus infected but not vaccinated cattle develop antibodies against recombinant 3 AB 1 non-structural protein // Arch. Virol. 1997 - Vol. 142 - p. 795-805.

224. Skinner H.H. One week old mice as test animal in FMD research. Proc.XV // Int.Vet.Congr. 1953,Stokholm - part I - 1 - p. 195-199.

225. Skinner H.H. Propagation des souches du virus aphteux sur les sourie blanches non sevrees. // Bull.Off.Int.Epiz. 1952,37,691.

226. Skinner H.H. Propagation of strains of FMD-Virus in unweaned white mice. // Proc.Roy.Soc.Med. — 1951 -44- 15 p. 1041-1044.

227. Skinner H.H., Henderson W.M., Brooksby J.B. Use of unweaned white mice in FMD research. Nature, 1952 169 - p. 796-799.

228. Stellmann C., Terre J., Goll Controle d'activit6 du vaccin antiaphteux sur bovins. XIV Conference O.I.E.,mars,1975.

229. Strohmaier K., Mussgay M. Bestimmung der Sediments konstant eines infektiosen Prinzips mit Nuklein Saure-chargkter aus dem Virus des Maul-und-Klauenseuche mit Hilfe der Gradienten Zentrifugation. // Naturforsch. 1959 -146-35-p. 171-178.

230. Strohmaier K., Mussgay M. Density-gradient centrifugation with infections ribonucleic acid of foot-and-mouth disease virus. // Science 1959 — 130-p. 217.

231. Studievic S.C. Automatisation des reactions de fixation du complement. These Doctorat de Pharmacie de l'Universite de Paris,25 juin 1965.

232. Telling R.C. Foot-and-mouth disease vaccine. // Process Biochemistry 1969-4-p. 49-52.

233. Telling R.C.,Redlett P.J. Submerged culture of BHK 21 cells up to pilot plant scale. Europ.comm.control FMD.Breseia 24-25 September 1969, FAO, 8.

234. Terre J., Stellmann C., Brun A., Favre H., Fontaine J. Controle d'activite du vaccin antiaphteux sur bovins. II Propositions de methodes A virus constant. XIV Conference O.I.E.,mars 1975.

235. Traub E., Ehafii A., Kesting F., Ewalbsson B. Serological variation of FAMD virus in Iran (1936-1966). // Bull.Off.Int.Epiz.- 1966 65 - 11-12 - p. 2035-2050.

236. Traub E., Mohlmann H. Typenbestimmung bei MKS mit Hilfe der komplementbindungsprobe. // Zbl.Bakt.,l.,Orig. 1943 - 150 - 6 -p. 289-310.

237. Traub E., Mohlmann H. Untersuchungen iiber immunologische varianten der Typen A und В des MKS-virus. // Berl.und Miinch.tieraztl.Wschr. -1949-1 -p. 1-5.

238. Trautman R., Breese S. Isodensity ultracentrifugation of Foot-and-mouth disease virus in cesium Chloride // J.gen. Microbiol — 1962 — 27 p. 231239.

239. Trautman R., Breese S., Bachrach H. Preparative ultracentrifugation of Foot-and-mouth disease virus through immuneible fluid interfaces into a cesium chloride density gradient. // J.gen. Microbiol 1962 - 27 - p. 231-239.

240. Trautman R., Savan M., Breese S. Partition by zone ultracentrifugation of the two complement-fixing particles in the foot-and-mouth disease virus system. // I.of Am.Chem.Soc. 1959 - 81 - p.4040-4044.

241. Trautwein K., Reppin K. Uber die Variability des Maul-und-Klauenseuche-Virus. //1 Mitt.Z.Immun-forasch 1932 p. 73.

242. Ubertini В., Nardelli D., Dal Piato A., Panins G., Santero G. Subtype variation of FMD virusand vaccination. // Wien,Tierarztl.Mschr. — 1964 51 // J.gen. Microbiol - 1962 - 27 - p. 231-239.

243. Ubertini В., Nardelli L., Panina G., Lodetti. Some notes on techniques of foot-and-mouth disease virus production used in Brescia. //

244. Europ.Comm.Control FMD, Long Island, 26-29.IX -67.Rome FAO,1968 p.29-40.

245. Vargues R. Etudes sur la cinetiques des reactions de fixation du complement. // Ann Inst.Pasteur 1965 - 108 // J.gen. Microbiol - 1962 - 27 - p. 231-239.

246. Vargues R. The use of the autoanalyzer for the automatic titration of antigenic preparations means of complement-fixation. // Reprinten from Annals of the York Academy of sciences 1965 - v. 130, "r" - p. 819-826

247. Vargues R., Ayeva R. Courbes cinetiques automatiques (autoanalyseur Technicon) de la fixation du complement sur divers complexes «antigene-anticorps». // C.R.Soc.Biol. 1958 - p.1401,1964.

248. Vargues R., Ayeva R. Utilisation de l'Auto Analyseur Technicon pour Г etude de la cinetique de la reaction de fixation du complement. // C.R.Soc.Biol. -1957-p. 872.

249. Vargues R., Gonthier F. Obtention automatique des courbes de titrage du complement. Etude critique de 1'equation de Von Krogh. // Ann Inst.Pasteur -1965-108-p. 526.

250. Vargues R., Studievic C., Audurier A. Le dosage des antocorps fixant le complement. Comparaison entre les techniquesmanuelles et les techniques automatiques. // Ann.Inst.Pasteur 1966 — 110 - p. 237.

251. Verge J., Lonis, Dhennin L., Oss C. The presence of complement deviating antibodies in the sera of cattle and sheep. // Methods of typing and cultiv.of FMD,OFEC Paris,1957 p. 31.

252. Wadsworth A., Maltaner F., Maltaner E. Quantitative studies the complement fixation reaction with syphilitic serum and tissue Extract: technic of the practical quantitative test. // J.Immunol. 1938 - 35 -p. 217.

253. Waldmann O., Kobe K., Pyl G. L'immunisation active du bovin contre la fievre aphteuse par le vaccin formole. // Bull.Off.Intern.Epizootie 1937 -v 13-№9-10-p. 825-844.

254. Waldmaun О., Kobe К. Die active immunisierung des Rindes gegen Maul und Klauenseuche // Berl. Munchen. Tierarztl. Wschr. - 1938 - Bd. 45 - p. 685-688.

255. Wittmann G., Mayr A. Ein Beitrag zum Problem der variantendiagnose beil MKS-Virus des Typens O. // Mhefte Tierheilkd 1962 — 14 -2-p. 51.

Информация о работе

Кулагина, Алевтина Георгиевна
кандидата биологических наук
Щелково, 2010
ВАК 03.01.06

Диссертация

Вирулентность, антигенность и иммуногенность вируса ящура, репрдуцированного в культурах клеток и в организме животных при промышленном производстве вакцин - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы