Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биохимическое обоснование по применению аверсектина С в ветеринарии

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Биохимическое обоснование по применению аверсектина С в ветеринарии"

ргб Ой

миш^сТгаодв^^ъского ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ I «• М*РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ МОСКОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ н БИОТЕХНОЛОГИИ им. К.И. СКРЯБИНА

на правах рукописи

Кобзева Вера Константиновна БИОХИМИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПО ПРИМЕНЕНИЮ АВЕРСЕКТИНА С В ВЕТЕРИНАРИИ.

03.00.04 - Биохимия

03.00.19 - Паразитология, гельминтология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 1997

Работа выполнена в Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина.

Научные руководители:

Заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор Малахов А.Г.

кандидат ветеринарных наук, доцент Василевич Ф.И.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Ермаков В.В.

Ведущая организация:

доктор биологических наук, профессор Гробов О.Ф.

Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов

Зашита состоится "¿Я-^ -л' 1998 г. в -У/7 часов на заседании диссертационного совета Д 120.36.05 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук в Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина ( 109472, Москва, ул. Академика Скрябина, 23. Тел. 377-93-83 ).

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке МГАВМиБ им.К.И. Скрябина.

Автореферат разослан " 1998 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Сафонов Н.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность работы. Лечение арахно- энтомозов домашних и сельско-хозяйственных животных продолжает оставаться насущной проблемой ветеринарии и нуждается в совершенствовании. В силу своей уникальной антипаразитарной активности авермектины весьма перспективны. Высокая биологическая активность против целого ряда беспозвоночных явилась основой для создания за рубежом высокоэффективных антипаразитарных биологических препаратов нового поколения.

В зависимости от производителя используется различная технология получения подобных продуктов и их фракционный состав ( ивомек, ивомек"+", дуотин, экволан). В НПО "Фармбиомед" на основе культуры БП-ерЮтусез ауегткШв создали отечественные препараты для борьбы с эндопаразитами животных на основе аверсектина С : аверсект-2 /аверсект, фармации/ (инъекционная форма), аверсектиновая мазь (накожная форма) и универм (пероральная форма).

Действующие вещества (ДВ) ивомека - ивермектин, а аверсекта-2, аверсектиновой мази, универма - аверсектин С. Ивермектин и аверсек-тин С представляют собой продукт жизнедеятельности почвенного микроорганизма Б^ер^ипусез ауепшйНз. Разница между ними заключается в том, что ивермектин является полусинтетическим производным авер-мектина, а аверсектин С представляет собой композицию всех природных авермектинов.

В многочисленных терапевтических исследованиях аверсект, аверсектиновая мазь, универм показали высокую терапевтическую эффективность. Но распределение в организме и влияние на биохимические показатели сыворотки крови животных действующего вещества (аверсектина С), в зависимости от формы введения не изучено, что определило цель нашей работы.

Цель и задачи исследований. Основной целью настоящих исследований явилось изучение распределения в организме и локализации аверсектина С, используемого при изготовлении трех противопарази-тарных препаратов, и изучение влияния этих препаратов на биохимические показатели сыворотки крови.

Конкретно были поставлены следующие задачи:

• изучить остаточные количества аверсектина С при использовании трех препаративных форм, изготовленных на его основе, то есть распределение аверсектина С в органах и тканях опытных животных:

• изучить динамику изменения концентрации аверсектина С при разных путях введения лекарственных форм аверсектина С в организме животных.

• изучить влияние однократного применения разных форм введения аверсектина С на биохимические показатели сыворотки крови.

• изучить влияние двукратного применения разных форм введения аверсектина С на биохимические показатели сыворотки крови.

Научная новизна работы. Научная новизна работы состоит в том, что в результате проведенных исследований впервые:

• получены данные о влиянии отечественного авермектинового комплекса - аверсектина С-на биохимические показатели сыворотки крови: а-амилазу, холестерин, креатинин, глюкозу, аланинаминотрансферазу, аспартатаминотрансферазу, у-глутамилтрансферазу, лактатдегидрогена-зу, мочевину, мочевую кислоту.

• изучена динамика изменения концентрации аверсектина С при разных путях введения лекарственных форм аверсектина С. После однократного применения аверсектина С его максимальный уровень установлен в органах и тканях с 1-х по 3-е сутки. Наибольшая концентрация аверсектина С обнаружена: в печени, жире (аверсект), в печени, жире (универм), в печени, жире (мазь).

Теоретическое и практическое значение работы. Впервые получены данные о влиянии отечественного авермектинового комплекса - аверсектина С на биохимические показатели сыворотки крови: а- амилазу, холестерин, креатинин, глюкозу, аланинаминотрансферазу, аспартатаминотрансферазу, у- глутамилтрансферазу, лактатде-гидрогеназу, мочевину, мочевую кислоту. Впервые изучена динамика изменения концентрации аверсектина С при разных путях введения лекарственных форм аверсектина С.

Полученные данные дают представление о фармакокинетике и фар-макодинамике трех препаративных форм, изготовленных на основе аверсектина С, а-также о влиянии этих препаратов на функциональное состояние поджелудочной железы, печени и почек.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на совместном научном совещании сотрудников кафедр: биологической и органической химии, паразитологии, патологической анатомии и физиологии, фармакологии Московской Государственной Академии Ветеринарной Медицины и Биотехнологии им. К.И. Скрябина. ; ' 1

Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано две статьи.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Остаточные количества аверсектина С, используемого при изготовлении трех препаративных форм на его основе.

2. Динамика изменения концентрации аверсектина С при разных путях введения лекарственных форм аверсектина С в органах и тканях животных.

3. Влияние разных форм аверсектина С на биохимические показатели сыворотки крови.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 112 страницах машинописного текста. Содержит 9 таблиц и 34 рисунка. Состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и приложения.' Список литературы включает 198 источников, из них 72 отечественных и 126 иностранных авторов.

Собственные исследования.

Материалы и методы исследования.

Работа была выполнена на кафедре биологической и органической химии, совместно с НПО «Фармбиомед».

В работе использовали 3 лекарственных (¡юрмы, разработанные в НПО «Фармбиомед», на основе аверсектина С: аверсект (инъекционная форма), универм(пероральная форма) и мазь аверсектиновая (накожная форма).

С целью изучения остаточных количеств трех препаративных форм, изготовленных на, основе аверсектина С, было проведено 2 серии опытов. Параллельно у животных брали кровь для проведения биохимических исследований.

Исследования проводили на кроликах в вивариях МГАВМиБ и ГНЦА. Животные были подобраны по методу аналогов с учетом возраста и массы тела.

Первую серию опытов провели в виварии Московской Государственной Академии Ветеринарной Медицины и биотехнологии имени К .И. Скрябина. По методу аналогов сформировали 2 группы кроликов: первая группа - контрольная, вторая - опытная. Для изучения препарата на основе аверсектина С кроликам опытной группе однократно вводили аверсект (0,02 мл/ кг),затем проводили убой животных по определенной схеме на 1,3,5,7,9,14 и 21-е сутки с предварительным взятием крови. Вторую серию опытов проводили в виварии Государственного Научного Центра по Антибиотикам (ГНЦА). Были сформированы 3 группы животных по методу аналогов. Первая группа - контрольные животные, вторая и третья - опытные. Животным 2 группы однократно наносили мазь аверсекгиновую на предварительно выстриженный участок кожи площадью 6 на 6 см2 в области спины в дозе 0,4 г/см2(терапевтическая доза ). Животным 3 группы перорально задавался универм в дозе 0,2 мг/кг. Во второй серии опытов изучали остаточные количества мази аверсектиновой и универма, а также изучалось их влияние на функциональное состояние печени, почек, поджелудочной железы. Дополнительно были проведены исследования по изучению влияния двукратного применения мази аверсектиновой, аверсекта и универма на биохимические показатели сыворотки крови кроликов. Кровь для исследований

брали из ушной вены натощак, перед убоем. Во всех группах кровь брали до начала исследований, затем по схеме опыта.

Для определения остаточного количества аверсектина С у животных при убое брали следующие органы: мышцы, печень, сердце, легкие, почки, мозг, тонкий отдел кишечника, внутренний жир, кожа, кал.

Определение остаточных количеств аверсектина С проводили в НПО «Фармбиомед» и в лаборатории кафедры радиобиологии МГ'АВМиБ. Биохимические исследования были выполнены на кафедре органической и биологической химии МГАВМиБ.

Определение остаточных количеств аверсектина С проводили ВЭЖХ-флуоресцентным методом.

Материалом для биохимических исследований служила сыворотка крови кроликов. Определение а-амилазы проводили унифицированным аминокластическим методом (метод Каравея), холестерина - энзимати-ческим методом, креатинина - методом Поппера, глюкозы - орто-толуидиновым методом, аминотрансфсраз - по оптимизированному оптическому тесту, у - глутамилтрансферазы - калориметрическим методом, лактатдегидрогеназы - унифицированным методом по реакции с 2,4-динитрофенилгидразином (Севела-Товарека), мочевины - уреазным методом по реакции с фенол-гипохлоритом, мочевой кислоты - унифицированным методом по реакции с фосфорновольфрамовым реактивом.

Результаты исследований.

Результаты определения остаточных количеств аверсектина С

и биохимических показателей сыворотки крови кроликов после введения однократной инъекции аверсекта - 2.

Через 1 сутки после однократного введения аверсекта-2 максимальная концентрация препарата установлена в печени - 67,4; минимальная в мозге и кале (7,37 и 7,36 нг/г соответственно)..

Через 3 суток после введения аверсекта динамика изменений концентрации аверсектина С была различной в зависимости от анализируемого органа. Максимальная концентрация была в жировой ткани - 268,14 нг/г, в мышцах, печени, сердце, почках, мозге, тонком отделе кишечника содержание аверсектина С уменьшалось, а в остальных органах - увеличилось. Через 5 суток содержание аверсектина С в кале достигло максимальной концентрации - 928,5 нг/г, в печени, сердце, легких, почках наблюдалась тенденция к уменьшению аверсектина С.

В дальнейшие сроки исследований (7, 9,14 сугки)имело место динамичное снижение концентрации во всех органах, отобранных для анализа.

Результаты исследования биохимического состава сыворотки крови кроликов при однократном введении аверсекта-2 представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Изменение биохимических показателей сыворотки крови кроликов при однократном введении авсрсекта-2.( п=5, р > 0,05 )

Биохимич. Показатели сыв.крови Опытные животные Время исследований, сутки контрол. Животные

1 3 5 7 14 21

а-амилаза, МЕ/л 701,33+ 2,60 697,80+ 8,70 699,661 7,73 702,33+ 3,07 697,33.1 3,07 700,33 +5,40 704,00 +7,78

АсАТ, МЕ/л 17,32± 1,38 17,96± 1,07 18,13+ 1,70 18,33+ 7,14 18,010 17,831 0,17 18,33+ 1,95

АлАТ, МЕ/л 13,03± 0,87 13,50± 0,40 13,631 0,37 13,751 0,25 13,531 0,47 13,40± 0,60 13,781 0,48

ГТТ, МЕ/л 8,33± 0,76 8,66+ 0,85 8,33+ 0,94 8,33+: 0,86 8,661 . 0,85 9,0± 0 9,0± 0,75

лдг, МЕ/л 348,66 ±22,64 350,66 +15,44 346,33 ±11,04 349,66 +8,31 350,33 ±12,24 352,33 ±10,24 350,0 113,23

холестерин, ммоль/л 1,65± 0,05 1,64+ 0,05 1,691 0,11 1,65+ 0,05 1,64+ 0,05 93.701 3,53 1,64+ 0,05 1,89± 0,29

креатинин, мкмоль/л 92,821 1,77 94.591 2,65 93,70+ 4,42 92.821 1,77 95,47+ 5,30 96,351 7,07

отохоза, ммоль/л б,07± 1,25 б,57± 0,21 6,61± 0,07 6.661 0,15 6,66+ 0,08 6,60+ 0,24 6,69± 1,26

мочевина, ммоль/л 4,25± 0,13 4,22± 0,13 4,33+ 0,22 3,99+ 0,01 4,27+ 0,13 4,22± 0,09 4,16+ 0,08

мочевая к-та, мхмоль/л 41,04± 0,59 42,23± 1,19 39,26± 0,59 40,44+ 0,59 38,661 0,59 39,85+ 0,59 44,621 2,97

Содержание а - амилазы у контрольных животных составило 704,0 ± 7,78 МЕ/л. В опытной группе содержание а-амилазы было в пределах физиологической нормы. О норме активности а-амилазы в сыворотке крови судили по здоровым животным-аналогам.

Наиболее широко при диагностике функционального состояния печени применяется определение АсАТ и АлАТ, а также соотношение активности АсАТ/АлАТ (коэффициент де Ритиса ), который в норме составляет 1,33. В опытной группе коэффициент дс Ритиса в течении всего опыта был равен 1,33. В опытной группе изменения активности у-глутамилтрансферазы и лактатдегидрогеназы по сравнению с контрольной группой недостоверны.

Содержание холестерина у контрольных животных составило 1,89±0,29 ммоль/л. После однократного введения аверсекта колебания содержания холестерина было в пределах физиологической нормы.

Содержание креатинина у контрольных животных составило 9б,35±7,07 мкмоль/л. В опытной группе содержание креатинина было в норме.

Содержание глюкозы, мочевой кислоты, мочевины после введения аверсекта в течении всего опыта было в пределах физиологической нормы.

В нашем опыте различие между опытной и контрольной группами не достоверно ( Р>0,05 ), что позволяет сделать вывод, что различий действительно нет.

Результаты определения остаточных количеств аверсектина С и биохимических показателей сыворотки крови кроликов после однократного нанесения мази аверсектиновой.

Через сутки после применения аверсектиновой мази максимальная концентрация препарата установлена в кале - 1150 нг/г, минимальная в мозге - 3,08 нг/г.

Через 3 суток после однократного нанесения мази динамика изменения концентрации аверсектина С была различной в зависимости от анализируемого органа. Так, в печени, сердце, легких, мозге и мышечной ткани содержание препарата осталось примерно на том же уровне, что и в 1-е сутки. Однако в жировой ткани, коже, кале и тонком отделе кишечника концентрация аверсектина С резко снизилась.

Через 5 суток можно было заметить, что уровень препарата снизился практически во всех органах и тканях кроликов.

На 21-е сутки аверсектин С не установили ни в одном из органов кроликов.

Результаты исследования биохимического состава сыворотки крови кроликов после однократного нанесения мази аверсектиновой представлены в таблице 2.

Таблица 2.

Биохимические показатели сыворотки крови кроликов после

Биохимия. Опытные животные , контр

показатели Время проведения исследования, сутки

сыв. крови 1 3 5 7 14 21 живот ные

сх-амилаза 699,30 696,60 698,60 700,3 699,66 701,3 704,0

МЕ/л ±5,40 ±13,80 ±5.40 ±1,95 ±7,50 ±2,60 ±7,78

АсАТ, МЕ/л 19,0 17,50 17.66 18,0 18,20 18,20 18,33+

±1,80 ±1.78 +1,50 +1,40 +1,47 ±1,10 1,95

АлАТ, МЕ/л 14,20 13,12 13,30 13,55 13,60 13,60 13,78±

±2,45 ±3,50 ±1,06 ±1,42 ±1,70 ±0,6 0,48

ПТ,МЕ/л 8,33± 8,66+ 9,0+ ■'■'■• 8,66+ 8,0+ 8,33+ 9,0+

1,20 0,98 0 2,04 0,76 0,76 0,75

ЛДГ, МЕ/л 350,66 355,33 349,66 355,0 349,66 347,0 350,0±

±13,24 ±22,66 ±8,31 +21,04 ±12,11 ±15,44 13,23

холестерин ммоль/л 1,57± 0,03 1,57± 0,07 1,56±0,09 1,64±0,03 1,6Э± 0,05 1,62±0,03 1,891 0,29

креатинин, мкмоль/л 91,05± 0,88 90,17± 0,88 91,94± 0,88 95,48± 1,77 94,59± 0,88 94,59± 0,88 96,35± 7,07

ппохоза, ммоль/л 6,69 ±0,83 6,57 ±0,64 6,46 ±0,54 6,79 ±0,41 6,51 ±0,75 6,62 ±0,92 6,69± 1,26

мочевина, ммоль/л 4,22 ±0,23 3,99 ±0,25 4,16 ±0,14 4,21 ±0,21 4,22 ±0,33 4,15 ±0,17 4,1б± 0,08

мочевая 39,26+ 40,45± 40,44± 39,85+ 41,64+ 41,04± 44,62+

х-та, мкмоль/л 1,78 1,19 1,78 1,19 0,59 2,38 2,97

В опытной группе после однократного нанесения аверсектиновой мази содержание а-амилазы, колебания активности АсАТ и АлАТ было в пределах физиологической нормы. Коэффициент де Ритиса в течении

всего опыта был равен 1,33. В опытной группе изменение активности у-глутамилтрансферазы и лактатдегидрогеназы, содержание глюкозы, креатинина, мочевины и мочевой кислоты после однократного нанесения аверсектиновой мази в течении всего опыта было также в пределах физиологической нормы.

Результаты определения остаточных количеств аверсектина С и биохимических показателей сыворотки крови кроликов после однократного применения универма.

Через сутки после применения универма максимальная концентрация аверсектина С определена в кале -1241,05 нг/г; в жировой ткани - 67,6 нг/г, в мозговой ткани - 16,5 нг/г, минимальная в тонком отделе кишечника - 6,90 нг/г.

Через 3 суток после применения универма в мышечной ткани, печени, сердце, легких, почках, мозге, жировой ткани, коже и кале концентрация аверсектина С снизилась на 50 %.

Через 7 суток после применения универма концентрация аверсектина С составила: в печени - 3,83 нг/г; в мозговой ткани - 0,72 нг/г; во внутреннем жире - 26,8 нг/г, в фекалиях - 52,54 нг/г.

В дальнейшие сроки исследований имело место динамичное снижение концентрации препарата во всех органах, отобранных для анализа.

На 21 сутки аверсектин С не определили ни в одном из органов кроликов.

Результаты исследования биохимического состава сыворотки крови кроликов при однократном применении универма представлены в таблице 3.

Таблица 3.

Биохимические показатели сыворотки крови кроликов при

однократном применении универма ( п~5 , Р >0,05 ).

Ьиохимич показат. Опытные животные Время исследования, сутки Контр, живот-

сыв.кроии ] 3 5 7 14 21 ные

а-амилаза МЕ/п 700,66 ±5,08 696,60 ±5,54 698,50 ±7,07 699,33 ±12,56 703,66 ±2,98 701,33 ±7,75 704,0 ±7,73

АсАТ, 17,32± 17,9б± 17,89+ 18,25+ 18,20+ 18,33±1 18,33±1

МЕ/л 2,07 1,50 2,54 1,88 0,98 ,25 ,95

АлАТ, 1Э,0Э± 13,50+ 13,47+ 13,72+ 13.70+ 13.80+. 13,78+

МЕ/л 1,97 0,68 0,56 1,20 0,69 1,55 0,48

ГГТ, МЕ/л 8,66 ±0,95 9,50 ±0,85 8,33 ±0,85 8,66 ~~1 ±0,47 9,0. ~1 +0,75 8,33 ±0,86 9,0 ±0,75

лдг, МЕ/л 350,0 ±15,44 348,33 ±23,46 346,66 ±7,78 349,66 ±18,56 347,33 ±12£4 350,33 ±8,56 350,0 ±13,23

холестерин ммоль/п 1,65 ±0,21 1,71 ±0,32 1,65 ±0,18 1,68 ±0,19 1,74 ±0,27 1,65 ±0,06 1,89* 0,29

креатиннн мкмоль/л 93,71± 3,54 94,59± 4,42 92,82± 1,77 95,47± 0,88 96,36± 1,77 93,71± 2,65 96,35± 7,07

гтохоза, ммоль/л 6,09 ±1,23 6,57 ±0,38 6,46 ±0,87 6,79 ±0,42 6,62 ±1,0 6,61 ±0,13 б,69± 1,26

мочевина, ммоль/л 4,27 ±0,13 4,33 +0,19 4,22 ±0,08 4,41 ±0,25 4,22 ±0,13 4,22 ±0,13 4,1б± 0,08

мочевая кислота, мкмоль/л 40,44± 0,59 41,04± 0,59 42,83± 1,19 39,85± 0,59 39,26± 0,59 41,64± 0,59 44,62± 2,97

В опытной группе содержание а-амилазы, активность АсАТ и АлАТ, а также и коэффициент де Ригиса и активность у - ГГТ и ЛДГ в течении всего опыта были в пределах физиологической нормы.

После однократного применения универма содержание холестерина и креатинина, глюкозы, мочевины и мочевой кислоты в сыворотке крови кроликов было в норме.

Различие между опытной и контрольной группой не достоверно (Р > 0,05).

Влияние инъекционной формы аверсектчна С - аверсекта-2 на биохимические показатели сыворотки крови кроликов при двукратном введении. Результаты исследования биохимического состава сыворотки крови кроликов при двукратном введении аверсекта-2 представлены в таблице 4.

Таблица 4.

Биохимические показатели сыворотки крови кроликов

Биохимич. Опытные животные когор

показатели Время проведения исследований сутки жив.

а-амшта, 699,3+ 701,33+ 595,33 604,66 697,0± 696,66 704,0

МЕ/л 7,50 2,60 +13,04 ±15,50 12,30 ±7,73 ±7,78

АсАТ, МЕ/л 20,66± 17,33± 17,60+ 18,0± 17,90± 18,0± 18,33±

1,80 0,90 1,50 1,40 1,95 1,60

АлАТ, МЕ/л 19,33± 15,90± 13,40± 13,60± 13,45± 13,50± 13,78±

3,50* 0,60 0,48 0,70 0,48 0,40 0,48

ГГТ, МЕ/л 8,0± 8,0± 8,33+ 8,66+ 8,6б± 9,0± 9,0+

0,76 0 1,20 0,76 2,04 0 0,75

ЛДГ, МЕ/л 348,ЗЭ± 355,0 337,66 346,66 349,66 347,0 350,0

28,42 ±21,04 ±22,60 ±12,10 ±6,31 ±15,44 ±13,23

холестерин 1,64±0,05 1,69± 1,61± 0,09 1,64± 1,78± 1,65± 1,89±

ммоль/л 0,13 0,07 0,18 0,05 0,29

креагигои 92,82± 92,82+ 58,35+ 79,56+ 93,71+ 95,47± 96,35±

мкмоль/л 1,77 0,88 4,42" 5,30 3,54 5,30 7,07

глюкоза б,49± 6,07± 6,51 6,62 6,68 6,61 6,69±

ммоль/л 0,72 1,25 ±0,26 +0,85 ±0,72 ±0,21 1,26

мочевина 4,38 4,22 4,41 4,27 4,43 4,22 4,16±

ммоль/л ±0,38 ±0,32 +0,24 ±0,13 ±0,29 +0,56 0,08

мочевая 39,26 39,85 40,45 41,64 41,05 41,04 44,62±

к-та, мкмоль/л ±0,59 ±1,18 ±1,78 ±1,18 ±1,78 ±1,18 2,97

*- Различие достоверно Р< 0,05.

Содержание а - амилазы у контрольных животных составило 704,0 ± 7,78 МЕ/л, у животных подопытной группы наблюдали снижение активности а- амилазы на 5-й и 7-й дни, которая нормализовалась достаточно быстро - на 14-й день (696,0±12,30 МЕ/л).В опытной группе наблюдали понижение коэффициента де Ритиса до 1,06-1,31, к 7 дню это соотношение полностью восстанавливалось.

В опытной группе изменения активности у-глутамилгрансферазы и лактатдегидрогеназы по сравнению с контрольной группой недостоверно.

Содержание холестерина у контрольных животных составило 1,89±0,29 ммоль/л. После двукратного введения аверсекта колебания содержания холестерина было в пределах физиологической нормы.

Содержание креатинина у контрольных животных составило 96,35±7,07 мкмоль/л. В опытной группе на 5 и 7-й дни наблюдали понижение содержания креатинина (58,35±4,42 и 79,56±5,30 ммоль/л соответственно). Но понижение креатинина не имеет клинического значения.

Содержание глюкозы, мочевой кислоты и мочевины у опытных кроликов было в пределах физиологической нормы.

В конце опыта (на 21-е сутки) различие между опытными и контрольной группами не достоверно ( Р>0,05 ).

Влияние накожной формы аверсектина С - мази аверсектиновой на биохимические показатели сыворотки крови кроликов при двукратном нанесении.

Результаты исследования биохимического состава сыворотки крови кроликов при двукратном применении аверсектиновой мази представлены в таблице 5.

Таблица 5.

Биохимические показатели сыворотки крови кроликов после двукратного применения аверсектиновой мази ( Н;Р>_0,05}.

Биохимии. Опытные животные Ко!пр.

показат. Время исследования, сутки

сыв.крови 1 3 5 7 14 21 животн

а-амияаза 696,0± 696,66115, 570,66 595,0 697,0 695,66 704,0

МЕ/л 15,80 80 ±13,70 ±15,50 ±2,39 ±5,87 ±7,73

АсАТ, 19,67-1 17,0± 18,101 18,40± 17,901 18,0± 18,33±

МЕ/л 2,63 1,80 1,30 3,90 2,45 2,60 1,95

АлАТ, 17,30 15,60 13,60 13,83 13,45 13,80 13,78

МЕ/л ±3,76 ±2,63 11,80 .1:1.69 ±1,40 ±0,48 ±0,45

ГГТ, 8,33± 8,661 9,0± 8,0.+ 8,33± 8,66± 9,0±

МЕ/л 0,76 1,40 0,87 0,76 1,20 1,25 0,75

лдг, . 348,66 350,66 346,33 349,66 350,33 352.33 350,0

МЕ/л ±22,64 ±15,44 ±11,04 ±8,31 ±12,24 ±10,24 ±13,23

холестерин 1,52± 1,45± 1,48± 1,49± 1,541 1,62± 1,89±

ммоль/л 0,18 0,14 0,07 0,06 0,21 0,29 0,29

креаткнин 91,06± 55,69± 91,06± 90,171 96,36± 94,59± 96,35±

мкмоль/л 0,88 7,96 0,88 2,65 5,31 7,96 7,07

гшохоза, 6,92 6.49 6,56 6,62 6,59 6,62 6,6 9±

ммоль/л ±1,0 ±0,49 ±0,72 ±0,15 ±0,77 ±0,85 1,2 6

мочевина, 4,38± 4,16± 4Д5± 4,44± . 4,22± 4Д2± 4,16±

ммопь/л 0,38 0,08 0,13 0,24 0,13 0,29 0,08

мочевая 36,29± 39Д6± 1,18 40,45± 38,071 39,85± 41,04± 44,62±

кислота. 0,59 1,18 1,78 1,18 1,78 2,97

мкмоль/л 1 ...... 1

Содержание а-амилазы у контрольных животных составило 704,0±7,78 МЕ/л, у животных опытной фуппы наблюдали снижение активности а-амилазы на 5-й и 7-й дни ( 570,0±13,7 и 595,0±15,50 МЕ/л

соответственно ), но уже к 14 дню активность а-амилазы нормализовалась - 697,0+2,39 МЕ/л. На 1-е и 3-й сутки исследования наблюдали незначительное повышение АсА'Г и АлАТ, а также наблюдали понижение коэффициента де Ритиса до 1,08-1,13, но уже на 5-е сутки активность АсАТ и АлАТ и коэффициент де Ритиса восстанавливались.

В опытной группе изменение активности у-глутамилтрансферазы и лактатдегидрогеназы было в пределах физиологической нормы.

После двукратного нанесения аверсектиновой мази на 1,3,5 и 7-й дни наблюдали понижение содержание холестерина в сыворотке крови. Но на 14-й день содержание холестерина составило 1,54±0,21 ммоль/л, что соответствует нижней границе физиологической нормы ( 1,54 -2,07 ммоль/л).

В опытной группе на 3-й день отмечали снижали содержания креати-нина -1,48±0,07. На 5-е сутки содержание креатинина нормализовалось.

Содержание глюкозы, мочевины и мочевой кислоты после двукратного нанесения аверсектиновой мази в течении всего опыта было в пределах физиологической нормы. В конце опыта (на 21-е сутки) различие между опытными и контрольной группами не достоверно ( Р>0,05 ).

Влияние пероральной формы аверсектина С-универма на биохимические показатели сыворотки крови кроликов при двукратном применении.

Результаты исследования биохимического состава сыворотки крови кроликов при двукратном применении универма представлены в таблице б.

Таблица 6.

Биохимические показатели сыворотки крови кроликов при двукратном _применении универма ( п=5, Р > 0,05 ).__

Биохимич показат. Опытные животные Время исследования, сутки Komp. живот-

сыв.крови 1 3 15 7 14 21 ные

а-амилаза МЕ/л 699,66 +5,67 701,33 ±2,60 606,66 ±14,67 698,66 ±10,56 701,66 ±3,70 700,33 ±6,80 704,0 ±7,78

АсАТ, МЕ/л 19,33 ±2,15 18,33 ±1,50 18,10 ±1,66 18,0 ±1,40 18,66 ±1,25 18,33 ±0,87 18,33 ±1,95

АлАТ, МЕ/л 17,89 +1,78 14,33 ±0,54 13,60 ±0,40; 13,53 ±0,75 14,03 ±2,25 13,78 ±1,15 13,78 ±0,48

ггт, МЕ/л 8,33 ±0,78 8,66 ±0,54 9,0 ±0,25 8,66 ±0,78 9,0 ±0,25 8,66 ±0,78 9,0 ±0,75

лдг, МЕ/л 350,0 ±12,24 348,66 ±6,78 349,0 ±5,54 351,33 " ±7,87 351,0 ±4,75 350,66 ±15,78 350,0 ±13,23

холестерин 1,68 1,69 1,67 1,65 1,71 1,65 1,89+

миоль/л ±0,11 ±0,20 ±0,27 ±0,05 ±0,15 +0,31 0,29

креатинин 92,82 95,47 91,94 93,71 95,47 93,71 Г96,35±

мкмоль/л ±1,77 ±0,88 ±1.77 ±2,65 ±3,S4 ±2,65 7,07

глюкоза, 6,92 6,61 6,68 6,73 6,09 6,62 6,69±

миоль/л ±0,69 ±0,14 ±0,58 ±0,86 ±0,72 ±0,15 1,26

мочевина, 4,16 4,22 4,27 4,16 4,22 4,27 4,1б±

ммоль/л ±0,25 ±0,13 ±0,13 10,29 ±0,25 +0,08 0,08

мочевая 40,45 39,85 38,66 41,04 38,66 41,64 44,62±

х-та, ±0,59 ±1,78 ±4,16 ±1,7« ±3,78 ±1,19 2,97

мхмоль/л

У подопытных животных на 5-е сутки наблюдали снижение активности а-амилазы ( 606,6б±14,67 МЕ/л ), но на 7-е сутки активность а-амилазы уже нормализовалась ( 698,6б±10,56 МЕ/л).

В опытной группе на 1-е сутки наблюдали незначительное повышение АсАТ ( 19,33±2,15 МЕ/л ) по сравнению с контрольной группой ( 18,33± 1,95 МЕ/л ), на 1-е и 3-й сутки наблюдали повышение активности АлАТ ( 7,89 ±1,78 и 14,33±0,54 МЕ/л соответственно ), также наблюдали понижение коэффициента де Ритиса на 1-е и 3-й сутки до 1,08-1,27. Но уже на 5-е сутки этот коэффициент восстанавливался почти до нормы. Активность у - ГГТ и ЛДГ в опытной группе была в норме. После двукратного применения универма содержание холестерина и креатинина в сыворотке крови кроликов было в норме.

Содержание глюкозы, мочевины и мочевой кислоты в опытной группе было в норме.

В конце опыта, на 21-е сутки различие между опытными и контрольной группой не достоверно (Р > 0,05).

Выводы.

1. Способ применения авермектинов влияет на скорость выведения действующего вещества из организма. При пероралыюм применении универма концентрация аверсектина С в органах и тканях в исследуемые сроки была значительно ниже, чем при наружном применении аверсек-тиновой мази и подкожных инъекциях аверсекта.

2. После однократного применения разных форм аверсектина С его концентрация в органах, тканях и фекалиях достигает максимального уровня ( 268,14-1241,05 нг/г) с первых по третьи сутки.

3. При всех способах введения аверсектина С отмечено накопление препарата в жировой ткани (67,6 - 268,14 нг/г), печени (17,10-67,4 нг/г), минимальная концентрация аверсектина С установлена в мозговой ткани ( 0,72-16,5 нг/г).

4. При введении трех препаративных форм в дозе 0,2 мг/кг, изготовленных на основе аверсектина, на 21-е сутки авсрсектин С во всех органах и

тканях не обнаружен. На основании этого рекомендовано проводить убой животных и использовать мясо и органы в пищу через 21-й сутки после лечения.

5. При однократном применении аверсекта, аперсектиновой мази и универма наиболее важные показатели для функциональной диагностики печени: аспаргатаминотрансфераза, аланинаминотрансфераза, соотношение активности АсАТ/АлАТ, у - глутамилтрансферазы, лактатде-гидрогеназы были в пределах нормы.

6. При двукратном введении трех препаративных форм на основе авер-сектина С установлено:

а) уменьшение активности а-амилазы на 5-7 сутки (аверсект, мазь) и на 5-й день (универм). Активность а-амилазы нормализовалась на 14-е сутки (мазь, аверсект) и 7-е сутки (универм).

б) при инъекционном и пероральном введении понижение содержания холестерина и креатинина, но на 14-й день эти показатели были в пределах физиологической нормы.

в) уменьшение соотношения АсАТ/АлАт до:

• 1,06-1,31(аверсект),

• 1,08-1,13 (мазь),

• 1,08-1,27 (универм),

Но уже на 5-е сутки этот коэффициент восстанавливался.

7. Однократное инъекционное введение аверсекта, нанесение аверсек-тиновой мази, пероральное введение универма не оказывает влияния на биохимические показатели сыворотки крови кроликов, а при двукратном введении этих препаративных форм биохимические показатели сыворотки крови восстанавливаются на 5-14 сутки.

8.Все вышеизложенное послужило основанием для регистрации трех лекарственных форм в Департаменте Ветеринарии.

Сведения о практическом использовании результатов исследования.

1. Данные по остаточным количествам аверсектина С были использованы в Департаменте ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации при регистрации наставления по применению аверсекта-2 (фармацина) при паразитарных болезнях животных № 13-4-2/956 от 21.05.1997, при регистрации временного наставления по применению универма № 13-4-2/360 от 04.07.1995, при регистрации наставления по применению мази аверсектиновой № 13-42/901 от 01.04.97.

2. Результаты исследования, касающихся определения биохимических показателей сыворотки крови контрольных кроликов, внедрены в прак-

тику учебного процесса на кафедре органической и биологической химии МГАВМиБ по теме: "Биохимия крови".

. Рекомендации по использованию научных выводов.

1. Данные по биохимическим исследованиям трех препаративных форм, изготовленных на основе аверсектина С, позволяют рекомендовать их для лечения кроликов.

2. Полученные данные по остаточным количествам аверсектина С в органах и тканях кроликов, позволили рекомендовать сроки убоя этих животных после лечения для употребления в пин{у.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1.Кобзева В.К. Влияние инъекционной формы аверсекта-2 (фармацина) и аверсектиновой мази на биохимические показатели сыворотки крови кроликов / Московская государственная академия встс-

. ринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина,- Москва, 1997,- 7 е.- Деп. в ВИНИТИ № 3128 - В 97.

2. Определение остаточных количеств аверсектина С в тканях и органах кроликов после нанесения аверсектиновой мази и после перорального применения универма./ Кобзева В.К., Головкина Л.П., Волкова Г.П., Березкина C.B., Остапчук С.; Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина,- Москва, 1997,- 7 е.- Деп. в ВИНИТИ № 3129 - В 97.

Размножено в Типографии "РОТЭКС" 100 экз. Заказ №. Н.. Цена договорная.