Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Аспекты безопасного применения препаратов на основе авермектинов у собак и кошек

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Аспекты безопасного применения препаратов на основе авермектинов у собак и кошек"

На правах

КОЛЕСНИКОВА Наталья Александровна

Аспекты безопасного применения препаратов на основе авермектинов у собак и кошек

Специальность 03.00.19-паразитология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва -2006

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте

гельминтологии им. К.И.Скрябина (ВИГИС)

Научный руководитель: доктор биологических наук

Новик Тамара Самуиловна.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Ведущая организация: Федеральное Государственное Учреждение «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ»),

Защита состоится « » марта 2006 г. в 44- часов на заседании диссертационного совета Д 006.011.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте гельминтологии им. К.И.Скрябина (ВИГИС). Адрес: 117218, г. Москва, Б. Черемушкинская ул., д. 28.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИГИС. Автореферат разослан « 2006 г.

Малахова Екатерина Ивановна,

1»

доктор биологических наук, профессор Дорожкин Василий Иванович.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Бережко В.К.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Паразитарные заболевания собак и кошек имеют повсеместное и широкое распространение среди данных видов животных. В свете современных представлений паразитарные заболевания существенно ухудшают общее состояние здоровья, обостряют течение хронических заболеваний, снижают иммунитет и даже могут привести к гибели животных, особенно в раннем возрасте. Кроме того, некоторые инвазии являются опасными для человека, и больные животные, находясь в непосредственной близости, представляют реальную угрозу для его здоровья. Обработка животных антипаразитарными препаратами является основным лечебным и профилактическим мероприятием при инвазиях домашних животных.

Лекарственные средства, действующим веществом которых являются авермектины, широко и успешно используются на самых различных видах сельскохозяйственных животных, и во многих ситуациях им трудно найти достойную альтернативу. В течение многих лет собаки и кошки оставались теми видами животных, для которых применение авермектинов полностью исключалось, во всяком случае, официально.

Желание применять препараты на основе авермектинов для чувствительных видов животных, у собак и кошек, вполне понятно. Препараты, в отличие от многих имеющихся на рынке средств, проявляют высокую эффективность при наиболее распространенных паразитарных заболеваниях собак и кошек, одновременно обеспечивая лечебное и профилактическое действие против многих паразитов. К этому следует добавить, что они эффективны в небольших дозах.

Исходя из вышеуказанного, остается насущной проблемой создание препарата на основе авермектинов, в котором бы сочеталась высокая эффективность против наиболее распространенных паразитов собак и кошек и хорошая их переносимость у данных видов животных.

Решение данной проблемы и явилось предметом наших собственных исследований.

Цель и задачи исследований. Целью исследований было создание и оценка эффективности и безопасности нового противопаразитарного препарата аверсекта-3 (такое название получил препарат производства НБЦ «Фармбиомед») (действующее вещество аверсектин С,) в различных лекарственных формах у собак и кошек.

Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие конкретные задачи:

1. Провести скрининг и отбор действующего вещества для будущего препарата на моделях лабораторных животных по критериям токсичности и эффективности.

2. Оценить переносимость аверсекта-3 в виде инъекционного раствора, свечей и наружного средства у здоровых и больных собак и кошек.

3. Изучить некоторые фармакокинетические параметры новых лекар-

ственных форм у собак.

4. Дополнить характеристику аверсекта-3 данными о его влиянии на фагоцитоз у собак.

5. Оценить эффективность аверсекта-3 при наиболее распространенных паразитарных заболеваниях собак и кошек.

Научная новизна работы. Впервые на лабораторных моделях отобрано фармакологически активное вещество из группы авермектинов, проявляющее значительно меньшую токсичность для чувствительных видов животных при наличии высокой нематодоцидной активности (90-100%); проведена объективная оценка переносимости аверсекта-3 в виде инъекционного раствора, свечей и наружного средства у здоровых и зараженных паразитами собак и кошек; установлены особенности всасывания и выделения аверсек-тина С| после введения аверсекта-3 в виде инъекций и свечей; выявлено положительное влияние аверсектина С] на фагоцитоз; установлена высокая эффективность аверсекта-3 (на уровне 100%) при наиболее распространенных паразитарных заболеваниях собак и кошек.

Практическая денность работы. Результаты проведенных исследований использованы в материалах для регистрации аверсекта-3 (проекте инструкции для применения, заявке на регистрацию), а также заявке на патент «Противопаразитарное средство».

Апробация работы. Результаты исследований были доложены и обсуждены:

- на научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 2005 год);

- на заседаниях Ученого совета ВИГИС 2003-2005 гг.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 2 печатные работы, 1 работа принята к печати.

Основные положения, выносимые на защиту

• Отбор действующего вещества для нового противопаразитарного препарата (аверсекта-3) на модели общетоксического действия (на мышах) и токсичности для новорожденных животных (на крысах) с учетом антгель-минтного действия против Aspicularis tetraptera.

• Переносимость аверсекта-3 у собак и кошек.

• Динамика всасывания и распределения аверсектина С| после его введения в составе инъекционного раствора или свечей.

• Влияние аверсекта-3 на фагоцитоз.

• Эффективность аверсекта-3 против нематод и эктопаразитов у собак и кошек.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 128 страницах компьютерного текста. Состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Список литературы включает 139 источников, в том числе 39 отечественных и 100 иностранных. Работа иллюстрирована 19 таблицами и 12 рисунками.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Представлен обзор литературы по препаратам из различных химических 1рупп, использовавшихся ранее и применяющихся в настоящее время для лечения паразитарных заболеваний собак и кошек. Приведен анализ данных по эффективности, переносимости и фармакокинетике лекарственных средств на основе авермектинов и мильбемицинов у собак и кошек.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 3.1. Материалы и методы

Работа выполнена в 2003-2005 гг. во Всероссийском институте гельминтологии имени К.И.Скрябина, НБЦ «Фармбиомед», виварии ВИГИС и ГНЦА, ветеринарных клиниках Москвы и Московской области.

Общий ход исследований представлен на схеме.

3.1.1. Образцы потенциального действующего вещества. В нашем распоряжении было пять образцов аверсектина Сь авермектинового комплекса особого состава, производства НБЦ «Фармбиомед» с различным содержанием компонентов:

1 образец - А2 > В2 (В, - 9,1%);

2 образец - В2 > А2 (В, - 8,4%);

3 образец - А2 * В2 (В, - 11,4%);

4 образец - А( + А2 (соответственно 38% и 62%);

5 образец - А1 + А2 (соответственно 3,2% и 96,8%).

При различном содержании А2- и В2-компонентов уровень В1 во всех случаях был низким (в пределах от 0 до 11,4%).

3.1.2. Опыты по оценке переносимости пяти образцов аверсектина С/ на мышах. Переносимость вышеуказанных образцов аверсектина С| оценивали на мышах-самцах массой 22-25 г; в каждую группу входило по 6 животных.

Общая схема исследований

Каждый из пяти образцов вводили в дозе 0,5 мг/кг по действующему веществу (ДВ) подкожно в виде инъекционного раствора, накожно (в обоих случаях на формообразующей смеси) и ректально в форме свечей. При накожном введении за сутки до аппликации у мышей в области спины выстригали шерстный покров (2x2 см) и затем наносили тестируемый образец в указанной дозе.

Переносимость оценивали по общему состоянию животных, проявлению симптомов интоксикации, включая характерные для авермектинов, видимым физиологическим функциям и гибели; при инъекционном введении, кроме того, оценивалась местная реакция в месте введения.

3.1.3. Оценка нематодоцидных свойств пяти образцов аверсектина С, на модели. Нематодоцидную активность оценивали на модели нематодо-зов A. tetraptera на мышах (Астафьев Б.А., 1996).

Каждый из пяти образцов вводили мышам в дозах 0,2 мг/кг и 0,5 мг/кг по ДВ (по 6 голов в каждой группе), зараженным A. tetraptera. Мышам контрольных групп вводили соответствующий носитель для препаратов.

Препараты вводили подкожно, накожно и ректально в составе свечей. Эффективность испытуемых соединений оценивали на 3-5-7 дни после введения по количеству гельминтов, содержащихся в толстом отделе кишечника (слепой кишке).

3.1.4. Оценка токсичности выбранного действующего вещества (аверсектина Cj, 1 образца) для новорожденных крысят. Опыты по определению токсичности аверсектина Ci (образец 1; А2 > В2, В, - 9,1%) для новорожденных крысят проводили в сравнении с аверсектином С и ивермекти-ном по двум различным схемам.

В первом случае аверсектин С|, аверсектин С и ивермектин вводили подкожно крысам-самкам в форме раствора на формообразующей смеси в дозах 0,2; 0,5; 1 и 10 мг/кг по ДВ. Крысята отдельно препаратов не получали.

Во втором случае, напротив, крысы-самки препаратов не получали, а аверсектин С,, аверсектин С и ивермектин вводили крысятам различного возраста (1; 5 и 10-11 дней) подкожно в виде раствора на формообразующей смеси в дозах I и 1,5 мг/кг по ДВ.

В основе при оценке влияния препаратов на эмбриональное развитие крыс использовали общепринятые методы (Дыбан А.Н., Баранов B.C., Акимова И.М., 1970).

Во всех случаях определяли показатель смертности (%) в течение 7 и 21 суток. По ряду интегральных и специфических показателей оценивали рост и развитие выживших крысят.

3.1.5. Определение параметров острой токсичности аверсектина С1 (действующего вещества) и аверсекта-3 на его основе. Изучение острой токсичности аверсектина Ci (действующего вещества) и аверсекта-3 при введении в желудок проводили на белых крысах и мышах.

Крысам-самцам массой 220-250 г аверсектин С) вводили однократно через рот в дозах 70; 100; 130; 160; 190 и 220 мг/кг в форме водной суспензии на Твине-80 с помощью желудочного зонда.

Мышам-самцам 22-25 г аверсектин Ci вводили однократно через рот в дозах 33; 50; 90 и 110 мг/кг в форме водной суспензии на Твине-80 с помощью желудочного зонда.

Крысам-самцам массой 230-260 г аверсект-3 вводили в виде раствора на формообразующей смеси однократно в дозах 5000; 7500; 11000; 13000 и 15000 мг/кг с помощью желудочного зонда.

Мышам-самцам массой 23-25 г аверсект-3 вводили однократно в дозах 1500; 2500; 5000; 7500; 10000 и 20000 мг/кг с помощью желудочного зонда.

Была также определена острая токсичность аверсекта-3 при подкожном пути введения. Крысам-самцам массой 220-250 г аверсект-3 вводили однократно подкожно в область спины в дозах 5000; 7500; 11000; 13000 и 15000 мг/кг.

На каждый вариант опыта использовали по 6 животных.

В течение 30 суток после введения препаратов вели наблюдение за состоянием, внешним видом и поведением крыс и мышей.

Определение параметров острой накожной токсичности аверсектина Ci и аверсекта-3 провели на белых беспородных крысах-самцах массой 250280 г. За сутки до нанесения препарата вогнутыми ножницами выстригали шерстный покров с участка кожи площадью 6x6 см в области спины.

Аверсектин Ci наносили на кожу в форме водной суспензии на Твине-80 в следующих дозах: 400; 800; 1200 и 1400 мг/кг.

Аверсект-3 наносили на кожу в форме раствора на формообразующей смеси в следующих дозах: 1000; 2000 и 4000 мг/кг.

На каждую дозу препарата использовали по 6 крыс.

В течение 30 суток после начала опыта вели наблюдение за внешним видом, состоянием и поведением крыс. Отмечали начало, характер и продолжительность проявления признаков токсикоза, а также падеж животных.

Во всех случаях параметры острой токсичности определяли по Литч-филду и Уилкоксону (Беленький M.JL, 1963).

3.1.6. Схемы опытов по изучению переносимости аверсекта-3 у собак и кошек. Первоначально переносимость инъекционной формы аверсекта-3 (1% раствор) при подкожном введении оценивали на трех группах условно здоровых собак из 5 животных каждая. 1 группе животных препарат вводили подкожно, однократно в дозе 0,2 мг/кг, 2 группе животных - в дозе 0,5 мг/кг (в 2,5 раза повышенной терапевтической дозе) и 3 группе - в дозе 1 мг/кг массы тела (в 5 раз повышенной терапевтической дозе). Собакам 4 группы вводили формообразующую смесь (контроль). Собаки были различных пород в возрасте от 1 до 7 лет.

В течение первых суток и вплоть до 10 суток оценивали общее состояние и поведение животных, видимые физиологические функции. Оценивали местную реакцию. Через 1; 5 и 10 суток после введения препарата у животных отбирали пробы крови с и без коагулянта. В первом случае определяли гематологические показатели, имеющие наиболее важное клиническое значение (на анализаторе «Гемаскрин», Италия), во втором - наиболее информа-

тивные биохимические показатели (на биохимическом анализаторе «ELAN-ANALYZER» 4145, Eppendorf, Германия).

Затем переносимость аверсекта-3 была оценена на немецких овчарках, зараженных Toxocara canis (питомник транспортной милиции, г. Икша). Собак разделяли на 2 группы. Первой группе собак (3 головы) препарат вводили инъекционно в форме 1% раствора в дозе 0,2 мг/кг по ДВ (0,2 мл на 10 кг массы тела). Второй группе собак (3 головы) препарат вводили в составе свечей в дозе 0,5 мг/кг по ДВ. Пробы крови отбирали до введения (контроль), на 1 и 5 сутки после введения. Определяли наиболее информативные гематологические и биохимические показатели.

Продолжением работы в данном направлении было проведение многочисленных опытов по определению переносимости аверсекта-3 у собак различных пород и возрастов, содержащихся в питомниках Москвы и Московской области, а также пришедших на прием в ветеринарную клинику. Во всех случаях препарат вводили подкожно, однократно в виде 0,1; 0,2; 0,5 и 1% раствора в дозе 0,2 мг/кг по ДВ; ректально в составе свечей в дозе 0,5 мг/кг по ДВ и в виде 1% раствора наружно. В течение 1 суток и вплоть до 10 суток оценивали общее состояние и поведение животных, видимые физиологические функции, а также реакцию кожи в месте введения.

Опыты по оценке переносимости аверсекта-3 на условно здоровых кошках в форме инъекций и в составе свечей проводили аналогично подобным исследованиям на собаках. В опыте участвовало 2 группы кошек по 3 животных в каждой в возрасте от 1 до 3 лет. Препарат вводили подкожно, однократно в виде 0,2% раствора из расчета 0,1 мл/кг (0,2 мг/кг по ДВ) и ректально в дозе 0,5 мг/кг по ДВ.

Опыт по оценке переносимости аверсекта-3 в виде инъекций и примененного наружно провели на кошках, зараженных отодектозом (Otodectes су-notis). В первом случае препарат вводили подкожно, двукратно, с интервалом 7 дней, в дозе 0,2 мг/кг по ДВ в форме 0,2 % раствора; во втором случае препарат наносили наружно непосредственно в ушную раковину с помощью ватного тампона в форме 1% раствора, двукратно с интервалом 7 дней.

3.1.7. Определение всасывания и выделения аверсектина Ci (действующего вещества) после введения аверсекта-3 у собак Опыт по определению всасывания и выделения аверсектина С| при введении аверсекта-3 в виде инъекций и свечей провели на двух группах собак по 3 головы в каждой.

Первой группе препарат вводили в виде 1% инъекционного раствора подкожно, однократно в дозе 0,2 мг/кг по ДВ. Второй группе препарат вводили в виде свечей в дозе 0,5 мг/кг по ДВ. На 1 и 5 сутки отбирали пробы крови. Содержание авермектинов в сыворотке крови определяли жидкостной хроматографией высокого давления с флуоресцентным детектированием (чувствительность метода 0,004 мг/кг).

3.1.8. Оценка фагоцитарной активности крови у собак после введения аверсекта-3. Изучение влияния аверсекта-3 на фагоцитарную функцию крови у собак провели в питомнике «Бакароро энд Итубори» на 16 собаках породы американский стаффордширский терьер в возрасте от 2 до 8 лет. Со-

баки были произвольно распределены на 2 группы по 8 голов в каждой. Первой группе собак аверсект-3 вводили в дозе 0,1 мг/кг по ДВ однократно, подкожно; вторая группа собак получала препарат в дозе 0,2 мг/кг по ДВ однократно, подкожно, т.е. в терапевтической дозе. Для определения иммунологических параметров отбирали пробы крови из поверхностной вены предплечья на 0; 1 и 3 сутки после введения препарата. Пробы крови, отобранные до введения (0 сутки), служили контролем.

В пробах крови определяли число лейкоцитов (х 109/л) и лейкоцитарную формулу.

Функциональный статус нейтрофилов оценивали по их фагоцитарной и оксидазной активности с использованием взвеси убитых Staphylococcus aureus. При этом определяли % фагоцитоза (количество фагоцитирующих нейтрофилов) и фагоцитарный индекс (число микробных клеток, поглощенных одним нейтрофилом).

Оксидазную активность (активность миелопироксидазы) определяли спектрофотометрически («Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ», 2005).

3.1.9. Схемы опытов по оценке противопаразитарной эффективности аверсекта-3 у собак и кошек. Опыты по определению эффективности аверсекта-3 в инъекционной форме, в составе свечей и в виде наружного средства при различных паразитарных заболеваниях собак и кошек проводили в питомниках Москвы и Московской области, ветеринарных клиниках.

Для определения нематодоцидной активности препарата в питомниках и клиниках по результатам копроскопии отбирали спонтанно инвазирован-ных Toxocara canis собак.

Препарат вводили однократно, подкожно в виде 0,1; 0,2; 0,5 и 1% раствора во всех случаях в дозе 0,2 мг/кг по ДВ или в виде свечей ректально в дозе 0,5 мг/кг по ДВ.

Учет результатов лечения проводили трехкратной копроскопией.

Инсектицидную активность (блохи, власоеды) препарата оценивали визуальным обследованием шерсти и кожных покровов до и после применения препарата. Препарат вводили однократно, подкожно в дозе 0,2 мг/кг по ДВ.

Для определения эффективности при отодектозе использовали микроскопические методы исследования.

При отодектозе препарат вводили в первом случае подкожно, двукратно, в дозе 0,2 мг/кг по ДВ с интервалом в 7 дней, во втором случае препарат наносили накожно в виде 1% раствора непосредственно в ушную раковину.

Микроскопическому исследованию, как в первом, так и во втором случае, подвергались мазки из ушной раковины до обработки и через 10 дней после второй обработки.

3.1.10. Статистическую обработку полученных данных проводили по Стьюденту-Фишеру с использованием t-критерия.

3.2. Результаты исследований

3.2.1. Скрининг пяти образцов аверсектина С/ по критерию общетоксического действия на мышах в сравнении с аверсектином С и ивер-мектином. Использование мышей для первичного отбора действующего вещества считаем правомочным в силу того, что высокая чувствительность к авермектинам первых и проявление к ним побочных эффектов у собак и кошек сходна и является результатом интенсивного проникновения через гема-то-энцефалический барьер.

Преимущества в переносимости всех пяти образцов на основе аверсектина С] по сравнению с аверсектином С и ивермектином имели место при всех использованных путях введения. В частности, при подкожном введении композиций на основе аверсектина С) признаки интоксикации проявлялись только у части мышей, входивших в опыт. Причем, в основном картина отравления в данном случае сводилась к незначительному угнетению, которое проходило в течение нескольких минут и сменялось полным восстановлением животных. Гибель мышей, которым вводили композиции на основе аверсектина Сь не превышала 10%. В противоположность этому, введение аверсектина С и ивермектина приводило к очень быстрому появлению выраженных признаков интоксикации (потеря двигательной активности, судороги, истечения из носовой полости) и гибели соответственно 80% (при введении аверсектина С) и 50% (при введении ивермектина^мышей.

При накожном и ректальном путях введеяия композиций на основе аверсектина С1 признаки интоксикации и падеж животных отсутствовали. При введении аверсектина С и ивермектина гибель мышей не наблюдали, но у животных в течение первых суток имела место характерная картина интоксикации (угнетение, адинамия и т.п.).

Следует отметить, что все пять образцов аверсектина С| между собой практически не различались по переносимости у мышей.

Исходя из этого, принимая во внимание только параметры токсичности, каждый из пяти тестированных образцов аверсектина С] мог быть взят в качестве действующего вещества для будущего противопаразитарного препарата.

3.2.2. Нематодоцидная активность пяти образцов аверсектина С/

на мышах в сравнении с аверсектином С и ивермектином. При подкожном введении композиций на основе аверсектина С, в дозе 0,2 мг/кг по ДВ наибольшую эффективность проявили образцы 1 и 2 (100%), в то время наименьшую - образец 4 (60%). Уместным будет отметить, что образцы 1 и 2 были одинаково эффективны с используемыми в данном случае в качестве положительного контроля аверсектином С и ивермектином (100%).

При накожном и ректальном применении пяти вариантов аверсектина С] в дозе 0,2 мг/кг по ДВ эффективность была очень низкой и не превышала 10% . Исходя из этого, препараты при данных путях введения испытывали в большей дозе, т.е. 0,5 мг/кг по ДВ.

При накожном нанесении в дозе 0,5 мг/кг по ДВ высокую эффективность на уровне 87-90% проявили образцы 1-4, образец 5 аверсектина С] был

менее эффективен (57%); эффективность препаратов сравнения находилась в пределах 85-90%.

При ректальном введении в дозе 0,5 мг/кг по ДВ в составе свечей препараты, подвергшиеся скринингу, также обеспечивали высокую эффективность в пределах 94-99%; исключением в данном случае был образец 3 авер-сектина С] (72%).

С учетом незначительного содержания авермектина В] (считается наиболее эффективным в отношении противопаразитарного действия) в образцах 1-3 и его отсутствия в образцах 4 и 5 можно сделать вывод о чувствительности А. 1е1гар1ега к авермектанам В2; А] и А2.

Однако при окончательном выборе действующего вещества будущего препарата нам необходимо было учесть следующее. Все пять образцов аверсектина С| были получены в лабораторных условиях. Возможности лабораторного регламента не всегда совпадают с полупроизводственными и более всего производственными условиями. Иными словами, получение действующего вещества должно быть рациональным, экономичным и технологически выдержанным.

Таким образом, с учетом этих обстоятельств мы остановились на образце 1 аверсектина С), в котором содержание А2 > В2, и все дальнейшие исследования были посвящены данному аверсекгиновому комплексу и препарату на его основе - аверсеюу-З.

3.23. Опыты по определению токсичности аверсектина С/ для новорожденных крысят. При введении аверсектина С] крысам-самкам в четырех тестированных дозах, а именно 0,2; 0,5; 1 и 10 мг/кг по ДВ, когда крысята получали препарат опосредованно через молоко матери, гибель плодов не наблюдали. Крысята активно сосали молоко (судили по нахождению молока в желудке), и их развитие протекало без каких-либо отрицательных отклонений. В частности, масса тела у крысят, которым вводили аверсектин С] в дозах 0,2; 0,5; 1 и 10 мг/кг на 21 сутки соответственно составила 27,72±1,85; 28,35±1,52; 26,72±2,80 и 29,30±1,17 против 28,46±0,72 г в контроле (Р > 0,05). Кроме того, в подтверждение того, что опытные крысята не отставали в развитии от контрольных животных, свидетельствуют практически аналогичные значения специфических показателей, а именно сроки отлипания ушных раковин, опушения и прозрения.

При введении аверсектина С (первого препарата сравнения) крысам-самкам в дозе 0,2 мг/кг показатели эмбрионального развития опытных крысят находились в пределах нормы.

Однако при увеличении дозы аверсектина С до 0,5; 1 и 10 мг/кг по ДВ последовательно возрастала гибель плодов. Так, если при введении препарата в дозе 0,5 мг/кг гибель составляла 30,76%, то уже в дозах 1 и 10 мг/кг данный показатель равнялся соответственно 85,71 и 100%. Масса тела оставшихся в живых плодов была достоверно ниже по сравнению с контролем и группой крысят, матери которых получали аверсектин С).

При введении ивермектина (второго препарата сравнения) крысам-самкам в двух низших дозах (0,2 и 0,5 мг/кг по ДВ) препарат не вызывал отрицательных изменений интегральных (прирост массы тела) и специфиче-

ских показателей развития крысят. Однако при дальнейшем увеличении дозы до 1 и 10 мг/кг ивермектин оказывал явное, токсическое действие на потомство, опосредованное через молоко. В частности, табель крысят в течение 21 суток повышалась соответственно до 18,18% и 42, 85% против отсутствия падежа в контрольной группе. Одновременно с этим, у оставшихся в живых потомков достоверно снижалась масса тела к 21 суткам жизни (соответственно она составляла 21,87±0,32 и 20,72±0,58 против 28,46±0,72 г в контроле (Р < 0,05)).

При введении аверсектина Сь аверсектина С и ивермектина самим крысятам в возрасте 1 суток (1,5 мг/кг по ДВ) гибель потомства наблюдали во всех опытных группах. Однако данный показатель при введении аверсектина С] составлял в первые 7 суток 26,00±2,48%, в то время как в течение 21 суток пало 65,72±3,18% новорожденных крысят. Значительно большую гибель плодов в данном случае наблюдали при введении аверсектина С и ивермектина. Так, в течение уже первых 7 суток после введения аверсектина С пало 65,56±3,17%; после введения ивермектина за это же время пало 60,48±2,72% крысят. Через 21 сутки все подопытные крысята в этих двух группах пали.

Аверсектин С) и ивермектин тестировали на 5-дневных крысятах. При введении двух препаратов в дозе 1,0 мг/кг по ДВ гибель плодов отсутствовала. Однако примерно через 15 минут после введения крысятам ивермектина у животных наблюдали выраженные признаки интоксикации, которые проявлялись в виде угнетения, отсутствия подвижности и т.п. Вышеуказанные симптомы полностью исчезали примерно через 0,5-1 часа, и состояние крысят восстанавливалось практически до нормы. При введении аверсектина С) крысятам этого возраста интоксикация отсутствовала.

При увеличении дозы аверсектина Сь аверсектина С и ивермектина до 1,5 мг/кг по ДВ отмечали 100% гибель потомства во всех опытных группах.

В третьем варианте данной схемы испытаний все три препарата вводили более старшим 10-11-дневным крысятам; при этом использовали одну дозу 1,5 мг/кг по ДВ. При введении аверсектина С] гибель плодов отсутствовала; в этом случае не наблюдали и признаков интоксикации. В то же время при введении аверсектина С в течение 21 суток пало 77,48-80,72% крысят; при тестировании ивермектина пало 50,46-55,87% потомков.

Во всех случаях гибель контрольных крысят отсутствовала.

Совершенно очевидно, что аверсектин С| является менее токсичным для новорожденных крысят по сравнению с аверсектином С и ивермектином.

3.2.4. Параметры острого токсического действия аверсектина С1 и аверсекта-3 при различных путях введения. По результатам опытов, согласно классификации опасности веществ по степени воздействия на организм (ГОСТ 12.1.007-76) аверсектин С) относится к 2 классу опасности: Ш50 для белых крыс и мышей соответственно 139 (116,9-4-161,1) и 81 (64,1+97,9) мг/кг; аверсект-3 относится к 4 классу опасности: 1Ю50 для белых крыс и мышей соответственно 11900 (10300-5-13750) и 8500 (5900-5-11100) мг/кг.

LDjo аверсекта-3 при подкожном введении равняется 12600 (11000+13500) мг/кг.

Согласно классификации опасности веществ по степени воздействия на организм при нанесении на кожу (ГОСТ 12.1.007-76) аверсектин С* относится к 3 классу опасности: LD50= 860 (572+1050) мг/кг; аверсект-3 относится к 4 классу опасности: LD50 > 4000 мг/кг.

3.2.5. Оценка переносимости инъекционного аверсекта-3 на условно здоровых собаках. При введении препарата собакам в дозах 0,2; 0,5 и 1 мг/кг по ДВ ни в одной испытуемой группе, включая животных, которым аверсект-3 вводили в самой высокой дозе (в 5-кратной терапевтической дозе), не наблюдали признаков интоксикации.

Отсутствовала местная реакция при подкожном введении аверсекта-3, т.е. не отмечали припухлости, болезненности, покраснения и т.д. в месте введения препарата.

Аверсект-3 не привел к достоверным изменениям тестированных гематологических и биохимических показателей у собак при введении препарата в трех дозах, включая даже самую высокую, 1 мг/кг (таблицы 3.2.5.1. и 3.2.5.2.).

В данном случае следует особо подчеркнуть, что отсутствовали изменения показателей, характеризующих функциональное состояние печени (активность ACT и АЛТ, уровень билирубина) и почек (концентрация креати-нина).

3.2.6. Оценка переносимости аверсекта-3 в виде инъекционного раствора и в составе свечей на собаках, зараженных Т. cams. У немецких овчарок, которым вводили подкожно 1% аверсект-3 в дозе 0,2 мл/10 кг массы тела (0,2 мг/кг по ДВ), а также у собак, которым вводили ректально свечи в дозе 0,5 мг/кг по ДВ, отсутствовали признаки интоксикации, в том числе, характерные для отравления авермектинами.

Местной реакции при подкожном введении 1% аверсекта-3 не отмечали.

Гематологические и биохимические показатели не претерпевали достоверных изменений, за исключением тенденции к снижению эозинофилов; данный факт мы связываем с проявлением антгельминтного действия препа- *

рата у зараженных собак.

3.2.7. Переносимость аверсекта-3 в виде инъекционного раствора, свечей и наружного средства у собак различных пород и возрастов. В целом аверсект-3 в виде инъекционного раствора, свечей и наружного средства испытан на 202 взрослых собаках 21 породы, обладающих различной чувствительностью вообще к лекарственным препаратам, включая таковые и на основе авермектинов (таблица 3.2.7).

Кроме того, с учетом особой чувствительности молодых животных к авермектинам аверсект-3 в виде инъекций и свечей испытан на 155 щенках 11 пород в возрасте от 3 недель до 1 года (таблица 3.2.7.).

Таблица 3.2.5.1.

Влияние введения аверсекта-3 в трех дозах подкожно, однократно на гематологические показатели у собак (п = 5; Р > 0,05)

Показатель/ Врема после введения (сутки) 1 группа 2 группа 3 группа 4 группа (конт| рольная)

1 5 10 1 5 10 1 5 10 1 5 10

Эритроциты (10 /я) 7,10*0,82 8,62*0,92 9,82*0,34 9,10*1,00 7,52*2,56 8,50*1,52 7,60*0,56 8,12*0,82 8,48*1,05 8,50*0,92 7,96*2,00 8,92*1,82

Гемоглобин ([/л) 16,70*1,50 16,50*0,82 15,80*0,70 15,60*0,80 14,70*2,50 15,80*0,92 16,20*1,80 15,80*1,50 16,70*0,82 15,70*2,50 16,80*1,50 17,10*2$)

Тромбоциты (Ю'/л) 370*82 410*110 370*56 280*82 340*56 272*56 320*72 280*58 380*96 370*82 380*53 390*62

Лейкоциты (Ю9/л) 11,86±0,56 12,62*0,92 10,51*2,85 12,80*0,52 13,80*1,52 12,76*0,92 13,86*1,12 13,70*1,15 12,11*1,15 12,56*0,92 11,86*2,50 13,72*1,92

Морфология кгюви Лимфоциты (%) 21,50*3,86 22,95*4,80 25,80*3,70 22,93*5,60 25,60*3,80 25,37*1,80 22,35*2,80 22,60*1,70 21,94*5,20 22,70*1,80 22,80*2,50 23,50*2,50

Сегментоядер-ные (%) 60,70±5,80 60,13*5,50 57,42*4,60 61,30*7,30 59,20*3,70 58,70*2,80 61,80*9,10 61,65*9,20 62,70*5,80 61,80*5,60 60,80*7,20 61,14*4,80

Палочкоадерные (%) 3,22±0,5б 2,72*1,72 3,02*0,50 3,11*0,56 3,06*0,72 2,95*0,82 3,09*1,82 3,11*0,92 3,02*0,86 3,09*1,56 3,00*0,92 3,11*0,92

Моноциты (%) 9,06*1,05 8,90*2,58 8,56*2,55 8,10*1,82 7,28±1,82 7,86*0,92 7,91*1,15 8,12*3,15 8,02*3,52 8^6*2,50 9,12*1,28 8,13*1,82

Эозинофилы (%) 5,52±0,82 5,30*0,95 5,20*0,52 4,56*1,00 4,86*2,86 5,12*1,28 4,85*2,50 4,52*2,82 4,32*1,15 4,15*1,56 43*0,92 4,12*1,00

Таблица 3.2.5.2.

Влияние введения аверсекта-3 в трех дозах подкожно, однократно на биохимические показатели у собак (п - 5; Р > 0,05)

Показатель/ Время после введения (сутки) 1 группа 2 групп» 3 группа 4 группа(контрольная)

1 5 10 1 5 10 1 5 10 1 5 10

Общий белок (г/л) 62,3±5,8 56,744,8 57,8±3,2 63,547,1 62,8±3,8 58,9±5,6 65,743,8 58,^:5,2 63,542,8 61,042,5 59,841,8 63,543,5

Альбумины (г/л) 25,642,7 22,845,7 21,843,3 22,742,8 25,641,9 22,845,8 21,643,6 23,8±4,5 25,743,8 28,8±6,5 25,743,6 24,844,2

Холестерин (ммоль/л) 3,80*0,92 4,8041,10 3,70±0,82 3,7141,15 2,8640,96 3,2641,18 4,1241,50 3,9241,25 3,8141,00 3,9641,86 4,1141,92 3,7541,25

Креаггинин (ммоль/л) 10,8042,50 9,7040,96 9,8041.15 9,5641,00 10,5240,92 9,8641,15 10,5041,85 9,8841,80 9,7041,75 9,5642,58 10,1141,82 9,8641,58

Билирубин общий (мкмоль/л) 2,0040,92 1,92±0,56 2,10±0,82 2,1540,92 1,86±0,75 2,1541,15 2,1541,12 1,8640,92 2,5840,92 1,9841,15 2,1540,92 2,0640,58

Билирубин прямой (мкмопь/л) 1,15±0,52 0,92±0,32 0,7240,24 0,9840,38 0,8640,52 0,9940,32 1,0040,28 0,9740,32 0,9840,28 1,1040,58 0,9940,27 1,1240,58

Асгиртатами-жлренсфераза (Е/л) 15,742,8 16,243,2 17,643,8 17,242,5 16,8413 18,941,8 18,741,5 19,542,5 21,643,8 18,442,5 15,743,8 15,944,7

Апанинами-нопренсфереза т 17,841,8 18,643,1 15,842,8 16,341,7 16,842,5 18,641,6 18,2+2,5 19,643,7 15,842,5 18,742,6 19,741,8 16,841,7

_ Таблица 3.2.7

Форма аверсекта-3 Порода Количество

Взрослые собаки от 1 года до 15 лет

в виде инъекционного американский стаффордширский терьер 101

раствора (0,5 и 1%) среднеазиатская овчарка 15

южно-русская овчарка 14

карликовый пинчер 13

кавказская овчарка 11

беспородные 11

шар-пей 8

Лабрадор ретривер 3

бульмастиф 2

пти барбансон 2

Норфолк терьер 2

черный терьер 2

китайская хохлатая 2

брюссельский грифон 2

мопс 2

пудель 1

такса 1

болонка 1

ка-де-бо 1

ротвейлер 1

немецкая овчарка 1

в виде свечей немецкая овчарка 3

наружно в виде 1% Лабрадор ретривер 2

раствора среднеазиатская овчарка 1

Щенки (от 21 дня до 1 года)

в виде инъекционного американский стаффордширский терьер 75

раствора (0,1 и 0,2%) среднеазиатская овчарка 15

миттельшнауцер 10

черный терьер б

китайская хохлатая 6

карликовый пинчер 5

брюссельский грифон 5

шар-пей 4

южно-русская овчарка 4

немецкая овчарка 3

в виде свечей уэст-уайленд-уайт-терьер 2

китайская хохлатая 4

миттельшнауцер 6

американский стаффордширский терьер 10

Общее состояние взрослых и молодых животных, их поведение, прием корма оставались без изменений в течение всего периода наблюдений (в каждом случае 10-14 суток). Во всех случаях отсутствовали признаки интоксикации. При применении аверсекта-3 в виде инъекций при тщательном осмотре места введения не было обнаружено болезненности, отечности, покраснения или иных признаков, свидетельствующих о местном раздражающем действии препарата.

Таким образом, аверсект-3 хорошо переносится взрослыми собаками и щенками различных пород.

3.2.8. Переносимость аверсекта-3 в виде инъекций и свечей у условно здоровых кошек. При введении 0,2% аверсекта-3 условно здоровым кошкам в дозе 0,2 мг/кг по ДВ (инъекции) и 0,5 мг/кг по ДВ (свечи) общее состояние животных и поведенческие реакции оставались без изменений в течение всего периода наблюдения (до 14 суток). Объективная клиническая оценка переносимости препарата не выявила достоверных изменений гематологических и биохимических показателей.

При подкожной инъекции препарата отсутствовала припухлость, болезненность, покраснение и другие признаки, которые свидетельствовали бы о наличии местно-раздражающего действия.

3.2.9. Переносимость аверсекта-3 в виде инъекций и раствора для наружного применения у кошек, зараженных отодектозом. Опыты проводили на кошках с установленным диагнозом: отодектоз (О. супойэ).

3 беспородным кошкам препарат вводили двукратно с интервалом 7 суток инъекционно в виде 0,2% раствора (0,2 мг/кг по ДВ); 4 другим кошкам аверсект-3 применяли только наружно в виде 1% раствора двукратно с интервалом 7 суток.

Во всех случаях аверсект-3, использованный уже в качестве лечебного средства, хорошо переносился животными.

3.2.10. Всасывание и выделение аверсектина С; у собак при введении аверсекта-3 в виде инъекций и свечей. При подкожном введении аверсекта-3 в дозе 0,2 мг/кг по ДВ в сыворотке крови имело место более высокое содержание его основных компонентов В2а + А2а в первые сутки по сравнению с ректальным введением в дозе 0,5 мг/кг по ДВ. В частности, концентрация авермектинов В2а + А2а при использовании инъекции и свечей составила соответственно 16,44±3,28 и 7,92±2,56 мг/л. Однако через 5 суток после введения аверсекта-3 в составе свечей уровень авермектинов А^ + В^ в сыворотке крови был выше (0,45±0,10 мг/л) по сравнению с таковым при парентеральном назначении препарата (0,18±0,05 мг/л).

3.2.11. Влияние аверсекта-3 на фагоцитарную функцию крови. Аверсект-3 при введении собакам в дозе 0,1 и 0,2 мг/кг (по ДВ) достоверно не изменял число фагоцитирующих клеток и фагоцитарный индекс, т.е. число поглощенных микробных клеток; иными словами препарат не оказал влияния на поглотительную активность макрофагов.

Однако препарат приводил к достоверному повышению активности миелопероксидазы на следующие сутки после введения аверсекта-3. Так, при введении препарата в дозе 0,1 мг/кг спонтанная активность фермента возрастала с 1776 до 3132 у.е. (р < 0,05). В случае индуцированной активности достоверное увеличение этого показателя имело место при обеих дозах. Так, при введении в дозе 0,1 мг/кг индуцированная активность повышалась с 1776 до 2953 у.е., а в дозе 0,2 мг/кг - с 1901 до 2541 у.е. (р < 0,05).

Усиление кислородеависимой спонтанной и индуцированной активности данного фермента, по сути дела, означает усиление его переваривающих свойств, что в конечном итоге будет приводить к повышению завершенности фагоцитоза в целом.

3.2.12. Противопаразшпарная эффективность аверсекта-3 у собак и кошек. На 207 спонтанно инвазированных собаках и 7 кошках была оценена эффективность препарата в отношении токсокар, возбудителя отодектоза, блох, власоедов.

Данные по эффективности суммированы в таблице 3.2.12.

Аверсект-3 в виде различных лекарственных форм (инъекций, свечей, наружного средства) проявил себя высокоэффективным препаратом против эндо- и эктопаразитов собак и кошек.

Таблица 3.2.12.

Инвазия Вид и кол-во животных Форма яверсектя-3, путь введении Доза, кратность Эффективность (%)

токсокароз (Т. сашз) взрослые собаки и щенки (196) 0,1% инъекционный раствор 0,2% инъекционный раствор 0,5% инъекционный раствор 1% инъекционный раствор (подкожно) 0,2 мл/кг 0,1 мл/кг 0,4 мл/10 га- ОД мл/10 кг (во всех случаях ОД мг/кг по ДВ, однократно) 100

свечи для ректального введения с различным содержанием ДВ, рассчитанного на массу животного (одна свеча на 1,5,10,40 кг) по одной свече на животное (0,5 мг/кг по ДВ, однократно)

взрослые собаки (3) 1% раствор в качестве наружного средства двукратно с интервалом 7 дней 100

отодектоз (О. супойв) кошки 0,2% инъекционный раствор (подкожно) 0,1 мл/кг (0,2 мг/кг по ДВ), двукратно с интервалом 7 дней 100

(7) 1% раствор в качестве наружного средства двукратно с интервалом 7 дней

блохи, власоеды взрослые собаки («) 1 % инъекционный раствор (подкожно) 0,2 мл/10 юг (ОД мг/кг по ДВ), однократно 100

Заключение

Таким образом, в результате проведенных нами исследований с использованием различных методологий изыскано оригинальное фармакологически активное вещество аверсектин Сь обладающее меньшей токсичностью

на моделях (общетоксическое действие на мышах и токсичность для новорожденных крысят) и одновременно высокой антгельминтной эффективностью на зараженных А. 1е1гар1ега мышах. Препарат, созданный на его основе, авер-сект-3, в различных лекарственных формах хорошо переносится собаками и кошками различных пород и возрастов, проявляет высокую противопарази-тарную эффективность при некоторых наиболее распространенных инвазиях домашних животных.

Выводы

1. Пять образцов аверсектина С] с различным содержанием А- и В-авермектинов проявили значительно меньшую токсичность у чувствительных к данным соединениям мышей по сравнению с аверсектином С и ивер-мектином при различных путях введения.

2. Аверсектин С) (образцы 1-5) при подкожном, накожном и ректальном введении в дозах 0,2 и 0,5 мг/кг по ДВ мышам, зараженным А. 1е1гар1ега, проявил выраженное нематодоцидное действие (ЭЭ = 57-100%).

3. При введении аверсектина С1 (образец 1; А2 > В2, В1 - 9,1%) крысам-самкам в дозах 0,2-10 мг/кг по ДВ гибель крысят отсутствовала; аверсектин С и ивермектин были токсичнее при введении в аналогичных дозах и привели к гибели в зависимости от дозы соответственно 85,71-100% и 18,18-42,85% крысят.

Аверсектин С1 в дозах 1 и 1,5 мг/кг проявлял меньшую токсичность по сравнению с аверсектином С и ивермектином при введении 1-; 5- и 10-11-дневным крысятам.

4.1ЛЭ50 аверсектина С1 для белых беспородных крыс и мышей составляет соответственно 139 (116,9+161,1) и 81 (64,1-5-97,9) мг/кг при введении в желудок (2 класс опасности, ГОСТ 12.1.007-76). ЬО50 при нанесении на кожу равно 860 (572-8-1050) мг/кг (3 класс опасности, ГОСТ 12.1.007-76).

5. ЫЭзо аверсекта-3 для белых беспородных крыс и мышей составляет соответственно 11900 (10300+13750) и 8500 (5900+11100) мг/кг при введении в желудок (4 класс опасности, ГОСТ 12.1.007-76); 1ЛЭ5о при нанесении на кожу > 4000 мг/кг (4 класс опасности, ГОСТ 12.1.007-76); ¿О50 аверсекта-3 для белых беспородных крыс при подкожном введении равно 12600 (11000+13500) мг/кг.

6. Введение инъекционного аверсекта-3 в дозах 0,2; 0,5 и 1 мг/кг по ДВ условно здоровым собакам не оказало отрицательного влияния на общее состояние собак, их поведенческие реакции, а также биохимические и гематологические показатели.

7. Аверсект-3 в виде подкожной инъекции и свечей хорошо переносится собаками, зараженными Т. саше.

8. При введении аверсекта-3 в виде инъекционного раствора и свечей 202 взрослым собакам 21 породы (в возрасте от 1 года до 15 лет) и 155 щенкам 11 пород (в возрасте от 3 недель до 1 года) в терапевтических дозах соответственно 0,2 и 0,5 мг/кг по ДВ отсутствовали побочные эффекты общего и местного характера.

9. Отмечена хорошая переносимость аверсекта-3 в виде инъекций, свечей и наружного средства у условно здоровых и больных отодектозом кошек в терапевтических дозах.

10. При подкожном введении аверсекта-3 в дозе 0,2 мг/кг по ДВ имело место более высокое содержание основных компонентов В2а + А2а в первые сутки по сравнению с ректальным введением в дозе 0,5 мг/кг по ДВ; через 5 суток после введения концентрация В2а + А2а была выше при введении препарата в виде свечей.

11. При инъекционном подкожном введении собакам аверсект-3 в дозах 0,1 и 0,2 мг/кг по ДВ приводил к стимуляции стадии переваривания фагоцитоза (повышал активность миелопероксидазы нейтрофилов).

12. Аверсект-3 на 207 собаках различных возрастов проявил высокую эффективность (100%) против токсакар, возбудителя отодектоза, блох, вла-соедов при введении в виде инъекционного раствора и свечей (соответственно в дозах 0,2 и 0,5 мг/кг по ДВ) или наружного средства; аверсект-3 при инъекционном (0,2 мг/кг по ДВ) и наружном применении оказал высокое лечебное действие при отодекгозе кошек.

Практические предложения

Результаты проведенных исследований использованы в материалах для регистрации аверсекта-3 (проект инструкции, заявке на регистрацию), а также заявке на патент «Противопаразитарное средство».

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Колесникова Н.А., Дриняев В.А. Скрининг субстанций на основе авермектиновых комплексов на лабораторных животных с целью разработки противопаразитарных препаратов для собак и кошек//Материалы докладов научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». -М., 2005. -Выпуск 6. -С. 169-174.

2. Колесникова Н.А., Кругляк Е.Б., Авчук C.B., Тер-Симонян В.Г. Особенности динамики содержания аверсектина С) и его отдельных компонентов в плазме крови собак при подкожном и ректальном введении//Мате-риалы докладов научных конференций «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». -М., 2005. -Выпуск 6. -С. 174-177.

3. Колесникова Н.А. Сравнительное изучение токсичности некоторых авермектинов для новорожденных крысят//Труды Всероссийского института гельминтологии им. К.И.Скрябина. -2006.

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 13.02.06 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,31 Печать авторефератов (095) 730-47-74,778-45-60

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Колесникова, Наталья Александровна

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1. Препараты из различных химических групп для лечения наиболее распространенных паразитарных заболеваний собак и кошек.

1.2. Противопаразитарная эффективность, переносимость и фармакокинетика препаратов на основе авермектинов и мильбемицинов у собак и кошек.

1.2.1. Эффективность против эндо- и эктопаразитов собак и кошек.

1.2.2. Переносимость авермектинов у собак и кошек.

1.2.3. Фармакокинетика авермектинов у собак и кошек.

2. Собственные исследования.

2.1. Материалы и методы.

2.1.1. Образцы потенциально действующего вещества.

2.1.2. Опыты по оценке переносимости пяти образцов аверсектина С] на мышах.

2.1.3. Оценка нематодоцидных свойств пяти образцов аверсектина С1 на модели.

2.1.4. Оценка токсичности выбранного действующего вещества (аверсектина Сь 1 образца) для новорожденных крысят.

2.1.5. Определение параметров острой токсичности аверсектина С1 (действующего вещества) и аверсектана его основе.

2.1.6. Схемы опытов по изучению переносимости аверсектау собак и кошек.

2.1.7. Определение всасывания и выделения аверсектина С] (действующего вещества) после введения аверсекта-3 у собак.

2.1.8. Оценка фагоцитарной активности крови у собак после введения аверсекта-3.

2.1.9. Схемы опытов по оценке противопаразитарной эффективности аверсекта-3 у собак и кошек.

2.1.10. Статистическая обработка.

2.2. Результаты исследований.

2.2.1. Краткая характеристика использованных образцов аверсектина С1.

2.2.2. Скрининг пяти образцов аверсектина С1 по критерию общетоксического действия на мышах в сравнении с аверсектином С и ивермектином.

2.2.3. Нематодоцидная активность пяти образцов аверсектина С] на мышах, зараженных А. 1е1:гар1ега, в сравнении с аверсектином С и ивермектином.

2.2.4. Опыты по определению токсичности аверсектина С| для новорожденных крыс.

2.2.5. Параметры острого токсического действия аверсектина С1 и аверсекта-3 на его основе при различных путях введения.

2.2.6. Оценка переносимости аверсекта-3 в виде инъекционного раствора, в составе свечей и наружного средства у собак и кошек.

2.2.6.1. Оценка переносимости инъекционного аверсектана условно здоровых собаках.

2.2.6.2. Оценка переносимости аверсекта-3 в виде инъекционного раствора и свечей на собаках, зараженных Т. сашэ.

2.2.6.3. Переносимость аверсекта-3 в виде инъекционного раствора, свечей и наружного средства у собак различных пород и возрастов.

2.2.6.4. Переносимость аверсекта-3 в виде инъекций и свечей у условно здоровых кошек.

2.2.6.5. Переносимость аверсекта-3 в виде инъекций и раствора для наружного применения у кошек, зараженных отодектозом.

2.2.7. Особенности всасывания и выделения аверсектина С1 и его отдельных компонентов у собак при введении аверсекта-3 в виде инъекций и свечей.

2.2.8. Изучение влияния аверсекта-3 на фагоцитарную функцию крови у собак.

2.2.9. Противопаразитарная эффективность аверсекта-3 в виде инъекционного раствора, свечей и раствора для наружного применения у собак и кошек.

Обсуждение.

Выводы.

Практические предложения.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Аспекты безопасного применения препаратов на основе авермектинов у собак и кошек"

Актуальность проблемы. Паразитарные заболевания собак и кошек имеют повсеместное и широкое распространение среди данных видо,з животных. В свете современных представлений паразитарные заболевания существенно ухудшают общее состояние здоровья, обостряют течение хронических заболеваний, снижают иммунитет и даже могут привести к гибели животных, особенно в раннем возрасте. Кроме того, некоторые инвазии являются опасными для человека, и больные животные, находясь в непосредственной близости, представляют реальную угрозу для его здоровья (Архипов И.А. и др., 2001). Обработка животных антипаразитарными препаратами является основным лечебным и профилактическим мероприятием при инвазиях домашних животных.

Лекарственные средства, действующим веществом которых являются авермектины, широко и успешно используются на самых различных видах сельскохозяйственных животных, и во многих ситуациях им трудно найти достойную альтернативу. В течение многих лет собаки и кошки оставались теми видами животных, для которых применение авермектинов полностью исключалось, во всяком случае, официально.

Желание применять препараты на основе авермектинов для чувствительных видов животных вполне понятно. Препараты, в отличие от многих имеющихся на рынке средств, проявляют высокую эффективность при наиболее распространенных паразитарных заболеваниях собак и кошек, одновременно обеспечивая лечебное и профилактическое действие против многих паразитов. К этому следует добавить, что они эффективны в небольших дозах.

Исходя из вышеуказанного, остается насущной проблемой создание препарата на основе авермектинов, в котором бы сочеталась высокая эффективность против наиболее распространенных паразитов собак и кошек и хорошая их переносимость у данных видов животных.

Решение данной проблемы и явилось предметом наших собственных исследований.

Цель и задачи исследований. Целью исследований было создание и оценка эффективности и безопасности нового противопаразитарного препарата аверсекта-3 (такое название получил препарат производства НБЦ «Фармбиомед») (действующее вещество аверсектин СО в различных лекарственных формах у собак и кошек.

Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие конкретные задачи:

1. Провести скрининг и отбор действующего вещества для будущего препарата на моделях лабораторных животных по критериям токсичности и эффективности.

2. Оценить переносимость аверсекта-3 в виде инъекционного раствора, свечей и наружного средства у здоровых и больных собак и кошек.

3. Изучить некоторые фармакокинетические параметры новых лекарственных форм у собак.

4. Дополнить характеристику аверсекта-3 данными о его влиянии на фагоцитоз у собак.

5. Оценить эффективность аверсекта-3 при наиболее распространенных паразитарных заболеваниях собак и кошек.

Научная новизна работы. Впервые на лабораторных моделях отобрано фармакологически активное вещество из группы авермектинов, проявляющее значительно меньшую токсичность для чувствительных видов животных при наличии высокой нематодоцидной активности (90-100%); проведена объективная оценка переносимости аверсекта-3 в виде инъекционного раствора, свечей и наружного средства у здоровых и зараженных паразитами собак и кошек; установлены особенности всасывания и выделения аверсек-тина С] после введения аверсекта-3 в виде инъекций и свечей; выявлено положительное влияние аверсектина С[ на фагоцитоз; установлена высокая эффективность аверсекта-3 (на уровне 100%) при наиболее распространенных паразитарных заболеваниях собак и кошек.

Практическая ценность работы. Результаты проведенных исследований использованы в материалах для регистрации аверсекта-3 (проекте инструкции для применения, заявке на регистрацию), а также заявке на патент «Противопаразитарное средство».

Апробация работы. Результаты исследований были доложены и обсуждены:

- на научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 2005 год);

- на заседаниях Ученого совета ВИГИС 2003-2005 гг.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 2 печатные работы, 1 работа принята к печати.

Основные положения, выносимые на защиту

• Отбор действующего вещества для нового противопаразитарного препарата (аверсекта-3) на модели общетоксического действия (на мышах) и токсичности для новорожденных животных (на крысах) с учетом антгель-минтного действия против Азр1си1ап81е1хар1ега.

• Переносимость аверсекта-3 у собак и кошек.

• Динамика всасывания и распределения аверсектина С] после его введения в составе инъекционного раствора или свечей.

• Влияние аверсекта-3 на фагоцитоз.

• Эффективность аверсекта-3 против нематод и эктопаразитов у собак и кошек.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 128 страницах компьютерного текста. Состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Список литературы включает 139 источников, в том числе 39 отечественных и 100 иностранных. Работа иллюстрирована 19 таблицами и 12 рисунками.

Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Колесникова, Наталья Александровна

Выводы

1. Пять образцов аверсектина С] с различным содержанием А- и В-авермектинов проявили значительно меньшую токсичность у чувствительных к данным соединениям мышей по сравнению с аверсектином С и ивер-мектином при различных путях введения.

2. Аверсектин С] (образцы 1-5) при подкожном, накожном и ректальном введении в дозах 0,2 и 0,5 мг/кг по ДВ мышам, зараженным А. 1е1гар1ега, проявил выраженное нематодоцидное действие (ЭЭ = 57-100%).

3. При введении аверсектина С] (образец 1; А2 > В2, В1 - 9,1%) крысам-самкам в дозах 0,2-10 мг/кг по ДВ гибель крысят отсутствовала; аверсектин С и ивермектин были токсичнее при введении в аналогичных дозах и привели к гибели в зависимости от дозы соответственно 85,71-100% и 18,18-42,85% крысят.

Аверсектин С1 в дозах 1 и 1,5 мг/кг проявлял меньшую токсичность по сравнению с аверсектином С и ивермектином при введении 1-; 5- и 10-11-дневным крысятам.

4.1Л35о аверсектина С1 для белых крыс и мышей составляет соответственно 139 (116,9Н61,1) и 81 (64,1ч-97,9) мг/кг при введении в желудок (3 класс опасности, ГОСТ 12.1.007-76). 1Л35о при нанесении на кожу равно 860 (572-И050) мг/кг (3 класс опасности, ГОСТ 12.1.007-76).

5. 1Л35о аверсекта-3 для белых крыс и мышей составляет соответственно 11900 (10300-И3750) и 8500 (5900Н1100) мг/кг при введении в желудок

4 класс опасности, ГОСТ 12.1.007-76); LD50 при нанесении на кожу > 4000 мг/кг (4 класс опасности, ГОСТ 12.1.007-76); LD50 аверсекта-3 для белых крыс при подкожном введении равно 12600 (11000-7-13500) мг/кг.

6. Введение инъекционного аверсекта-3 в дозах 0,2; 0,5 и 1 мг/кг по ДВ условно здоровым собакам не оказало отрицательного влияния на общее состояние собак, их поведенческие реакции, а также биохимические и гематологические показатели.

7. Аверсект-3 в виде подкожной инъекции и свечей хорошо переносится собаками, зараженными T. canis.

8. При введении аверсекта-3 в виде инъекционного раствора и свечей 202 взрослым собакам 21 породы (в возрасте от 1 года до 15 лет) и 155 щенкам 11 пород (в возрасте от 3 недель до 1 года) в терапевтических дозах соответственно 0,2 и 0,5 мг/кг по ДВ отсутствовали побочные эффекты общего и местного характера.

9. Отмечена хорошая переносимость аверсекта-3 в виде инъекций, свечей и наружного средства у условно здоровых и больных отодектозом кошек в терапевтических дозах.

10. При подкожном введении аверсекта-3 в дозе 0,2 мг/кг по ДВ имело место более высокое содержание основных компонентов В2а + А2а в первые сутки по сравнению с ректальным введением в дозе 0,5 мг/кг по ДВ; через 5 суток после введения концентрация Вга + А2а была выше при введении препарата в виде свечей.

11. При инъекционном подкожном введении собакам аверсект-3 в дозах 0,1 и 0,2 мг/кг по ДВ приводил к стимуляции стадии переваривания фагоцитоза (повышал активность миелопероксидазы нейтрофилов).

12. Аверсект-3 на 207 собаках различных возрастов проявил высокую эффективность (100%) против токсакар, возбудителя отодектоза, блох, вла-соедов при введении в виде инъекционного раствора и свечей (соответственно в дозах 0,2 и 0,5 мг/кг по ДВ) или наружного средства; аверсект-3 при инъекционном (0,2 мг/кг по ДВ) и наружном применении оказал высокое лечебное действие при отодектозе кошек.

Практические предложения

Результаты проведенных исследований использованы в материалах для регистрации аверсекта-3 (проект инструкции, заявке на регистрацию), а также заявке на патент «Противопаразитарное средство».

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Колесникова, Наталья Александровна, Москва

1. Адамец Г.Д. Фтористый и кремнефтористый натрий как антгельмин-тики при аскаридозе собак//Сборник трудов харьковского ветеринарного института. 1952. - Т. XXI. - С. 384-390.

2. Архипов И.А., Борзунов E.H. АПИ-САН АОО. Эффективность ди-рофена при гельм. кошек (комплексы)//Материалы Международной межвузовской конференции. 2001. - С. 23-24.

3. Архипов И.А., Борзунов E.H., Шайкин В.И. Зоопаразитозы, передаваемые человеку от собак и кошек//Материалы IX Московской международной ветеринарной конференции. 2001. - С. 230-231.

4. Астафьев Б.А., Яроцкий JI.C., Лебедева М.Н. Экспериментальные модели паразитов в биологии и медицине//М. «Наука». - 1989. - С. 278.

5. Бекиров Р.Э., Джумаев З.Д., Пулатов Г.С. Новые антгельминтики против цестодозов плотоядных//Труды Узбекской НИИ животноводства. -1984.-Т. 36.-С. 13-16.

6. Беленький M.JL Элементы количественной оценки фармакологического эффекта//Госмедиздат. JL, -1963.

7. Белоусов М.Н. Использование празиквантела в новых лекарственных формах пролонгированного действия при цестодозах собак//Бюллетень Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени института гельминтологии им. К.И.Скрябина. 1985. - Т. 40.

8. Бондарева В.И., Диков Г.И. Значение тыквенных семян для дегельминтизации собак, от которых эти паразиты передаются овцам//0 борьбе с ценурозом и эхинококкозом овец. Социальное животноводство Казахстана. -1953.-№7.-С. 35-37.

9. Буткус И.Ю. Сравнительная оценка антгельминтных свойств кислорода при токсакорозе серебристо-черных лисиц/AActa parasitol. Lithuanica. 1957. - Т. 2. - № 2. - С. 61-64.

10. Василевич Ф.И. Демодекоз крупного рогатого скота и собак (эпизоотология, патогенез, совершенствование мер борьбы и профилакти-ки)//Автореферат дисс. д. вет. наук. М. - 1998. - С. 49.

11. Дыбан А.П., Баранов B.C., Акимова И.М. Основные методические подходы к тестированию тератогенной активности химических веществ// Арх. Анатом. Гистол. Эмбрилл. 1970. - Т. 59. - № 10. - С. 89-100.

12. Зыкин JLA., Сутягин B.C., Угрин И.Н. О применении пиперазин-адипината для дегельминтизации плотоядных животных при аскардозах//Ве-теринария. 1964. -№ 8. - С. 53.

13. Карамышева E.H. Лечение параскаридоза жеребят и аскаридоза собак пижмой//Ветеринария. 1956. - № 2. - С. 29-30.

14. Кармалиев P.C., Айтуганов Б.Е., Ярлыгасимов A.C. Эхинококкоз сельскохозяйственных животных Западно-Казахстанской области//Вете-ринария. 2003. - № 6. - С. 26-28.

15. Клочков С.Д. Основные гельминтозы городской популяции собак, их санитарно-эпидемиологическое значение и меры борьбы с ними//Автореф. канд. ветер, наук. Саратов. - 1995. - С. 18.

16. Кравченко И.А. Сравнительная эффективность лекарственных форм аверсектина С при ктеноцефалезе собак и кошек//Паразитология приоритеты и перспективы развития. - Новосибирск. - 2002. - С. 56-58.

17. Кротенков В.П., Архипов И.А. Эффективность дуотина против не-матодозов и демодекоза собак//Бюл. Всероссийского института гельминтологии. 1996. - Вып. 56. - С. 8.

18. Мальцева И.В. Эффективность препарата дронтала плюс в отношении нематод и цестод//Девятый Московский Международный ветеринарный конгресс. М. - 2001. - С. 226-227.

19. Назаров Т.С. и др. Антгельминтное действие серы при аскаридозе и унцинариозе собак//Ветеринария. 1951. - № 4. - С. 30.

20. Новик Т.С., Бару Р.В., Рябова В.А. Острая токсичность аверсектина С при различных путях и формах введения//Экспериментальная и клиническая фармакология. 2001. - Т. 64. - № 2. - С. 64-66.

21. Новик Т.С., Рябова В.А., Литвин A.A. и др. Фармакокинетика аверсектина С при введении в форме таблеток авертин//Ветеринария. 2001. - № 4. -С. 41-43.

22. Плохинский H.A. Руководство по биометрии для зоотехников//- М. 1969.

23. Пустова И.Ф. Испытание противоцистодного действия карбохо-лина и акрихина//Труды НИИ животноводства и ветеринарии. Сталин-бад. - 1957. - Т. 1.-С. 168-173.

24. Радун Ф.Л. Вопросы эпизоотологии и профилактики токсокароза собак, песцов и серебристо-черных лисиц в условиях Московской области/Рукопись дис. канд. вет. наук. М. - 1973. - С. 173.

25. Рамазанов В.Т. Влияние фенасала на жизнеспособность яиц цепня пизиформного//Паразитозы с.-х. животных Казахстана и меры их предупреждения. Алма-Ата. - 1983. - С. 90-93.

26. Рамазанов В.Т. Соли кадмия как антгельминтики при цестодозах собак//Вестник сельскохозяйственной науки. Алма-Ата. - 1964. - № 6. - С. 77-83.

27. Сивков Г.С., Яковлева В.В., Чашкова И.А. и др. Влияние ивомека и фармацина на показатели иммунного ответа у животных//Ветеринария. 1998. -№ 5. - С. 29-31.

28. Сидорова С.Г. Антгельминтные свойства перекиси водорода и перекиси магния//Тез. докл. научн. конф. по фармакологии, MB А. М.: Кузьминки. - 1957. - С. 45-47.

29. Смирнов П.Н., Апалькин В.А. и др. Влияние цидектина, ивомека и аверсекта на иммунную систему//Ветеринария. 1995. - № 9. - С. 49-51.

30. Стерлина Т.С., Дриняев В.А., Кругляк Е.Б., Новик Т.С., Иванова В.М., Мосин В.А. Оценка возможного иммунотропного действия аверсекти-на С//Токсикологический вестник. Март-апрель, 2001. - № 2. - С. 28-32.

31. Тареева А.И., Доморадская И.М. Противоглистное действие дитра-зина//Мед. Паразитология и паразитарные болезни. 1951. - Т. 20. - № 2.-С. 125-127.

32. Тищенко В.В. Эффективность дронцита при экспериментальном эхинококкозе, мультицептозе и гидатигенном тениозе у собак//Бюллетень Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени института гельминтологии им. К.И. Скрябина. 1983. - Вып. 34. - С. 62-63.

33. Хитенкова Л.П. Антгельминтное действие пиперазина сульфата при токсокарозе и токсаскаридозе пушных зверей//Труды МВА. 1961. - Т. 32. -С. 151-154.

34. Шайкин В.И., Климок М.А. Гепатотоксичность баймека//Проблема адаптации с/х животных. Новосибирск. - 1997. - С. 171-172.

35. Шинкаренко А.Н. Гельминтофауна и меры борьбы с основными па-разитозами собак в Волгограде//Автореф. дис. канд. вет. наук. Иваново.-1999.-С. 16.

36. Albers-Schönberg G. et al. Avermectins, a new family of potent anthelmintic agents: structure determination//Abstract of 18th Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 1978.

37. Anderson D.L., Robertson E!.L. Activity of ivermectin against canine intestinal helmints//Am. J. Vet. Res. 1982. -V. 43. -№ 9. - P. 1681-1683.

38. Alvinerie ML, Sutra J.F., Badri M. et al. Determination of moxidectin in plasma by high-performance liquid chromatography with automated solid-phase extraction and fluorescence detection/AI. Chrom. B. Biomed. Appl. 1995. - V. 674.-P. 119-124.

39. Barragry T.B. A review of the pharmacology and clinical uses of ivermectin //Can. Vet. J. 1987. -V. 28. -№ 8. - P. 512-517.

40. Benchaoui H.A., Clemence R.G., Clements P.J.M. et al. Efficacy and safety of selamectin against fleas on dogs and cats presented as veterinary patients in Europe//Vet. Parasitology. 2000. - V. 91. - P. 223-232.

41. Bennett D.G. Clinical pharmacology of ivermectin//!. Am. Vet. Med. Assos.- 1986.-V. 189.-№ 1.-P. 100-103.

42. Berninghius H. Ivermectin-intoxication bei einem collie//Practische Tierazztliche. 1986. - V. 5. - P. 575.

43. Bishop B.F., Bruce C.I., Evans N.A. et al. Selamectin: a novel broad-spectrum endoctocide for dogs and cats//Vet. Parasitology. 2000. - V. 91. - P. 163-176.

44. Blagburn B.L., Hendrix C.M., Lindsay D.S. et al. Anthelmintic efficacy of ivermectin in naturally parasitized cats//Am. J. Vet. Res. 1987. - V. 48. - № 4.- P. 670-672.

45. Blair L.S., Campbell W.C. Efficacy of avermectin Bja against microfilariae of Dirofilaria immitis//Am. J. Vet. Res. 1979. - V. 40. - № 7. - P. 1031-1032.

46. Blair L.S., Campbell W.C. Efficacy of ivermectin against Dirofilaria immitis in dogs//J. Helminthol. 1978. - V. 52. - № 9. - P. 308-310. .

47. Blair L.S., Campbell W.C. Efficacy of ivermectin against Dirofilaria immitis larvae in dogs 31, 60 and 90 days after infection//Am. J. Vet. Res. 1980.- V. 41. -№ 2. P. 2108.

48. Blair L.S., Malatesta P.F., Ewanciw D.V. Dose response study of ivermectin against Dirofilaria immitis microfilariae in dogs with naturally acquired infections//Am. J. Vet. Res. - 1983. - V. 44. - P. 475-477.

49. Blair L.S., Williams E., Ewanciw D.V. Efficacy of ivermectin against third-stage Dirofilaria immitis larvae in ferrets and dogs//Res. Vet. Sci. 1982. - V. 33.-P. 386-387.

50. Boy M.G., Six R.H., Thomas C.A. et al. Efficacy and safety of selamec-tin against fleas and heartworms in dogs and cats presented as veterinary patients in North America//Vet. Parasitology. 2000. - V. 91. - P. 233-250.

51. Bogan J.A., Duncan J.L. Anthelmintics for dogs, cats and horses//Brit. Veter. J. 1984. - T. 140. - № 4. - P. 361-367.

52. Calvert C.A. Ivermectin for treatment of internal parasitism and heart-worms in dogs//Mod. Vet. Pract. 1985. - V. 66. - P. 307-308.

53. Campbell W.C., Benz G.W. Ivermectin: a review of efficacy and safety//J. Vet. Pharmacol. Ther. 1984. - V. 7. - P. 1-16.

54. Campbell W.C., Blair L.S. Efficacy of avermectins against Dirofilaria immitis in dogs//J. Helminthology. 1978. - V. 52. - № 4. - P. 308-310.

55. Campbell W.C. et al. Ivermectin: a potent new antiparasitic agent//Sci-ence. 1983. - V. 221. - P. 823-828.

56. Campbell W.C., Fisher M.H., Stapley E.O. et al. Ivermectin a potent new antiparasitic agent//Science. 1983. - V. 221. - P. 823-828.

57. Clemence R.G., Sarasola P., Genchi C. et al. Efficacy of selamectin in the prevention of adult heartworm (Dirofilaria immitis) infection in dogs in northern Italy//Vet. Parasitology. 2000. - V. 91. - P. 251-258.

58. Daurio C.P., Cheung E.N., Jeffcoat A.R. et al. Biovailability of ivermectin administrated orally to dogs//Vet. Res. Comm. 1992. - V. 16. - P. 125-130.

59. Daurio C.P., Gilman M.R., Pulliam J.D. Reproductive evaluation of male beagles and the safety of ivermectin//Am. J. Vet. Res. 1987. - V. 48. - № 1, 2. -P. 1755-1760.

60. DeMontigny P., Shim J.S.K., Pivnichny J.V. Liquid chromatographic determination of ivermectin with rtifluoro-acetic anhydride and N-methylimidazole as the derivatization reagent//J. Pharm. Biomed. Anal. 1990. - V. 8. - P. 507511.

61. Dennis V.A., Klei T.R., Miller M.A. et al. Immune response of pony during repeated infections of Strongylus vulgaris and regular ivermectin treat-ments//Vet. Parasitology. 1992. - V. 42. - P. 83-99.

62. Dwight G.B. Clinical pharmacology of ivermectin//.!AVMA. 1986. -V. 189.-№ l.-P. 100-104.

63. Easby S.M., Ivermectin in the dog//Vet. Rec. 1984. - V. 115. - P. 45.

64. Egerton J.R., Eaiy C.H., Suhayda D. Dose titration stadies of ivermectin against experimental Ancylostoma caninum and Uncinaria stenocephala infec-tions//Am. J. Vet. Res. - 1985. - V. 46. - P. 1057-1059.

65. Evinger J.V., Kazacos K.R., Cantwell H.D. Ivermectin for treatment of nasal capillariusis in a dog//J. Am. Vet. Med. Assoc. 1985. - V. 186. - P, 174175.

66. Fisher V.H., Mrozik H. Chemistry//In.: Campbell W.C., ed. Ivermectin and abamectin. New York: Springer-Verlag. 1989. - P. 1-24.

67. Flajs V.C., Grabnar I. Ivermectin pharmacokinetics//Slov. Vet. Res.- 2002. V. 39. - № 3/4. - P. 167-178.

68. Frische H., Hunt L. Suspected ivermectin toxicity in kittens//Can. Vet. J.- 1991. -V. 32. P. 245.

69. Gram D. Treatment of ear mites (otodectes cynotis) in cats: comparison of subcutaneous and topical ivermectin//Proc. A. 1991. - P. 26-27.

70. Hopkins T.J., Hedeman P.M. Die nematodozide und cestozide Wi:<sam-keit einer Tabletten for muliering mit Febantel, Pyrantelembonat und Praziguantel bei Hunden//Veter. Med. Nachr. 1988. T. 59. -№ 1. - P. 71-75.

71. Hopkins T.J., Marcella K.L., Strecker A.E. Ivermectin toxicosis in a dog//J. Am. Vet. Med. Assoc. 1990. - V. - 197. - № 1. - P. 93-94.

72. Houston D.M., Parent J., Matushek K. Ivermectin toxicosis in a dog// J. Am. Vet. Med. Assoc. 1987. - V. - 191. - № ip. 78-80.

73. Ishihara K. et al. Clinical application of milbemycin D 10: distubution of milbemycin in tissues of collies, shelties and Japanese mongrel dogs//Proc. 104 Congr. Jpn. Vet. Sei. Sappora, Japan. 1987. - P. 229-230.

74. Jackson R.F., Seymour W.G. Efficacy of avermectins against microfilariae of Dirofilaria immitis//Proc. Of Heartworms Symp. 1981. - № 7. - P. 131136.

75. Jacob T.A., Buhs R.P., Carlin J.R. et al. The metabolism and tissue residue profiles in ivermectin//Recent developments in the control of animal parasites.- 1983.-P. 56-97.

76. Jernigan A.D., McTier T.L., Chieffo C. et al. Efficacy of selamectin against experimentally induced tick (Rhipicephalus sanquineus and Dermacentor variabilis) infestations on dogs//Vet. Parasitology. 2000. - V. 91. - P. 359-375.

77. Jerram P.J.S. Adverse reaction to ivermectin in a rough-coated collie// New Zeal. Vet. J. 1985. - V. 33. - P. 216.

78. Kitagawa H., Sasaki J., Ishihara K. Canine dirofilarial hemoglobinuri induced by milbemycin D administration//Jpn. J. Vet. Sei. 1986. - V. 48. - № 3. -P. 517-522.

79. Kojima K., Yamamoto K., Nakanishi Y. Determination of 22, 23-dihudroavermectin Bia in dog plasma using solid-phase extraction and high-perfomance liquid chromatography//!. Chromatogr. Biomed Appl. 1987. - V. 413.-P. 326-331.

80. Krautmann M.J., Novotny M.J., de Keulenaer K. et al. Safety of se-lamectin in cats//Vet. Parasitology. 2000. - V. 91. - P. 393-403.

81. Kurokawa K., Tagawa M., Ejima H. et al. A clinical experiment with milbemycin D for prevention of Dirofilaria imitis infection//J. Jpn. Vet. Med. Assoc. 1985. - V. 38. - P. 98-102.

82. Lammie P.J., Hightower A.W., Richards F.O. et al. Alterations in filarial antigen-specific immunologic reactivity following treatment with ivermectin and diethylcarbamazine//Am. J. Trop. Med. Hug. 1992. - V. 49. - P. 1-23.

83. Lankas G.R., Gordon L.R., Toxicology//In.: Campbell W.C., ed. Ivermectin and abamectin. New York: Springer-Verlag. 1989. - P. 89-111.

84. Levis D.T., Merchant S.R., Neer T.M. Ivermectin toxicosis in a kitten// J. Am. Vet. Med. Ass. 1994. - V. 205. - № 4. - P. 584-586.

85. Lindemann B.A., McCall J.W. Microfilaricidal activity of ivermectin against Dipetalonema reconditum//J. Vet. Pharmacol. Ther. 1983. - V. 6. - № 4. -P. 75-76.

86. Lo P.-K.A., Fink D.W., Williams J.B. et al. Pharmacokinetic studies of ivermectin: effects of formulation//Vet. Res. Commun. 1985. - V. 9. - P. 251268.

87. Lovell R.A. Ivermectin and piperazine toxicoses in dogs and cats//Toxi-cology of selected Pesticides, drugs and Chemicals. 1990. - V. 20. - № 2. - P. 453-467.

88. McKellar Q.A., Benchaoui H.A. Avermectins and milbemycins//J. Vet. Pharmac. Therap. 1996. -V. 19. - P. 331-351.

89. McManus E.C., Pulliam J.D. Aistopathologic features of canine heart-worm microfilarial infection after treatment with ivermectin//Am. J. Vet. Res. 1984.-V.45.-P. 91-97.

90. McTier T.L., Jernigan A.D., Rowan T.G. et al. Dose selection of se-lamectin for efficacy against adult flies (Ctenocephalides felis felis) on dogs and cats//Vet. Parasitol.-2000.- V. 91.-P. 177-185.

91. McTier T.L., Jones R.L., Holbert M.S. et al. Efficacy of selamectin against adult flea infestations (Ctenocephalides felis felis and Ctenocephalides felis felis and Ctenocephalides canis) on dogs and cats//Vet. Parasitology. — 2000. V. 91. -P. 187-199.

92. McTier T.L., Shanks D.J., Jernigan A.D. et al. Evaluation of the effects of selamectin against adult and immature stages of fleas (Ctenocephalides felis felis) on dogs and cats//Vet. Parasitology. 2000. - V. 91. - P. 201-212.

93. McTier T.L., Shanks D.J., Watson P. et al. Preventions of experimentally induced heartworm (Dirofilaria immitis) infections in dogs and cats with a single topical application of selamectin//Vet. Parasitology. 2000. - V. 91. - P. 259-268.

94. McTier T.L., Shanks D.J., Wreen J.A. et al. Efficacy of selamectin against experimentally induced and naturally acquired infections of Toxocara cati and Ancylostoma tubaeforme in cats//Vet. Parasitology. 2000. - V. 91. - P. 311319.

95. McTier T.L, Siedek E.M., Clemence R.G. Efficacy of selamectin against experimentally induced and naturally acquired ascarid (Toxocara canis and Toxocara leonine) infections in dog//Vet. Parasitology. 2000. - V. 91. - P. 333-345.

96. Novotny M.J., Krautmann M.J., Ehrhart J. et al. Safety of selamectin in dogs//Vet. Parasitology. 2000. - V. 91. - P. 377-391.

97. Paul A J., Tranquilli W.J., Seward R.L. et al. Clinical observations in collies given ivermectin orally//Am. J. Vet. Res. 1987. - V. 48. - № 4. - P. 684685.

98. Preston J.M. Adverse reactions to unapproved applications (letter)//Vet. Ree. 1983.-V. 112.-P. 286.

99. Pulliam J.D., Seward R.L., Henry R.T. et al. Investigating ivermectin toxicity in collies//Vet. Med. 1985. - V. 80. - P. 33-40.

100. Rischke H., Hunt L. Suspected ivermectin toxicity in kittens//Can. Vet. J. 1991.-V. 32.-P. 245.

101. Ritzhaupt L.K., Rowan T.G., Jones P.L. Evaluation of efficacy of selamectin, fibronil and imidacloprid against Ctenjcephalides felis in dogs//J. Am. Vet. Med. Assoc. -2000. -V. 217. -№ 11.-P. 1669-1671.

102. Rohers S.P., Evans D.V. Binding characteristics of ivermectin in plasma from collie dogs//Vet. Res. Commun. 1990. - V. 14. - № 2. - P. 157165.

103. Rowley J. Ivermectin toxicity in two kittens//Compan. Anim. Pract. 1988.-№ 2.-P. 31-32.

104. Sakamoto T., Seki I., Kikuchi K. et al. Anthelmintic effect of milbemy-cin D on parasites in dogs//J. Fac. Agr. 1984. - V. 17. - P. 69-81.

105. Sarasola P., Jernigan A.D., Walker D.K. et al. Pharmacokinetics of se-lamectin following intravenous, oral and topical administration in cats and dogs//J. Vet. Pharmacol. Ther. 2002. - V. 25. - № 4. - P. 265-272.

106. Sasaki J., Kitawgawa H., Ishihara K. et al. Milbemicin D concentrations in tissues after oral administration in collies, sheltiers and Japanese mongrel dogs//Jpn. J. Vet. Sci. 1988. - V. 50. - № 6. - P. 1177-1183.

107. Sasaki J., Kitagawa H., Kajita et al. Clinical application of milbemycin D as a prophylactic agent against Dirofilaria immitis infection in dogs: Reaction in unifected and infected dogs//Jpn. J. Vet. Sci. 1986. - V. 48. P. 579-586.

108. Sasaki J., Kitagawa H., Mi»rase S. et al. Susceptibility of rought-coated collies to milbemycin oxime//Jpn. J. Vet. Sci. 1990. - V. 52. - № 6. - P. 12691271.

109. Sasaki J., Kitawgawa H., Okachi H. et al. Clinical application of milbemicin D as a prophylactic agent against Dirofilaria immitis infection in dogs: reactions in uninfected and infected dogs//Jpn. J. Vet. Sci. 1986. - V. 48. - № 3. -P. 579-586.

110. Scheidt V.J., Medleau L., Seward R.L. et al. An evaluation of ivermectin in the treatment of sarcoptic mange in dogs//Am. J. Vet. Res. 1984. - V. 45.-P. 1201-1202.

111. Schneck G. Use of ivermectin against ear mites in cats//Vet. Rec. 1988.-V. 123.-P. 599.

112. Schnieder T. et al. Investigations into the efficacy of doramectin on reactivated somatic larvae of Ancylostoma caninum ercolani 1859 in pregnant bitches// J. Vet. Med. Bio. 1994. - V. 41. - № 9. - P. 603-607.

113. Schults Key H., Soboslay P.T., Hoffman W.H. Ivermectin facilitated immunity//Parasitology Today. 1992. -№ 8. - P. 152-153.

114. Seward R.L. Reaction in dogs given ivermectin//JAVMA. 1983. -V. 183. -№ 5. - P. 493.

115. Shanks DJ., McTier T.L., Behan S. et al. The efficacy of selamectin in the treatment of naturally acquired infestations of Sarcoptes scabiei on dogs//Vet. Parasitology. 2000. - V. 91. - P. 269-281.

116. Shanks DJ, McTier T.L., Rowan T.G. et al. The efficacy of selamectin in the treatment of naturally acquired aural infestations of Otodectes cynotis on dogs and cats/A/"et. Parasitology. 2000. - V. 91. - P. 283-290.

117. Shanks D.J, Rowan T.G., Jones R.L. et al. Efficacy of selamectin in the treatment and prevention of flea (Ctenocephalides felis felis) infestations on dogs and cats housed in simulated home environments/^/et. Parasitology. 2000. - V. 91.-P. 213-222.

118. Shiramizu K., Abu M. Efficacy of milbemycin D against Dirofilaria immitis in dogs//J. Jpn. Vet. Med. Assoc. 1985. - V. 38. - P. 353-356.

119. Sivine F., Plume C., Ansay M. Picrotoxin, antidote to ivermectin in dogs//Vet. Ree. 1985. - V. 16. - P. - 195-196.

120. Six R.H., Clemence R.G., Thomas C.A. et al. Efficacy and safety of selamectin against Sarcoptes scabiei on dogs and Otodectes Cynotis on dogs and cats presenteted as veterinary patients//Vet. Parasitology. 2000. - V. 91. - P. 291309.

121. Six R.H., Sture G.H., Thomas C.A. et al. Efficacy and safety of selamectin against gastrointestinal nematodes in cats as veterinary patients//Vet. Parasitology. 2000. - V. 91. - P. 321-331

122. Sklavounos C., Dmers M., Lukaszewicks J. et al. Photoisomerization of aromatic doramectin derivaties//J. Agric. Food Chem. 1994. - V. 42. - P. 12281237.

123. Sotiraki S., Himonas C., Debouck P. et al. Efficacy and safety of selamectin of flea infestation in dogs//J. Hellenic Vet. Med. Sos. 2002. V. 53. - № l.-P. 78-85.

124. Stone M., Meyer O., Shnieder T. Zur Wirkung von Ivermectin auf reaktivierte somatische Larven von Ancylostoma caninum Ercolani 1859 in der graden Hundin//J. Vet. Med. B. 1989. -V. 36. -P. 271-278.

125. Suderman M.T., Craig T.M. Efficacy of ivermectin against Dirofilaria immitis microfilaria in naturally infected dogs//Am. J. Vet. Res. 1984. - V. 45. -P. 1201-1202.

126. Sutra J.-F., Cadierguis M.-C., Dupuy J. et al. Determinations of selamectin in dog plasma by high performance liquid chromatography with automated solid phase extraction and fluorescence detection//Vet. Res. 2001. - V. 32. -№ 5. - P. 455-461.

127. Sutra J.-F., Chartier C., Galtier P. et al. Determination of eprinomectin in plasma by high-performance liquid chromatography with automated solid-phase extraction and fluorescence detection//Analyst. 1998. - V. 123. - P. 1525-1527.

128. Tagawa M., Takigama A., Ejima H. et al. Efficacy of milbemicin D against intestinal helmints of dogs//Bull. Nippon. Vet. Zootech. 1984. - № 33. -P. 97-99.

129. Tagawa M., Takiyama A., Ejima H. et al. Prophylactic efficacy of milbemicin D against Dirofilaria immitis infected dogs//Jpn. J. Vet. Sci. 1985. - V. 47.-№5.-P. 787-790.

130. Tranquilli W.J., Paul A.J., Seward R.L. et al. Response to physostig-mine administration in collie dogs exhibiting ivermectin toxicosis//J. Vet. Pharmacol. Ther. 1987.-V. 10.-P. 96-100.

131. Tranquilli W.J., Paul A.J., Seward R.L. Ivermectin plasma concentrations in collies sensitive to ivermectin- induced toxicosis//Am. J. Vet. Res. -1989. V. 50. - № 5. - P. 769-770.

132. Yazwinski T.A., Pote L., Tilley W. et al. Efficacy of ivermectin against Sarcoptes scabiei and Otodectes cynotis infestations of dogs//Vet. Med. Small Animal Clin. 1981. - V. 76. - P. 1749-1751.

133. Yazwinski T.A., Tilley W., Greenway T. Efficacy of ivermectin in the treatment of artificially induced canine, mixed, gastrointestinal helminthiasis//Vet. Med. Small Anim. Clin. 1982. - V. 77. - P. 225-226.