Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

АСПЕКТЫ БЕЗОПАСНОГО ПРИМЕНЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ АВЕРМЕКТИНОВ У СОБАК И КОШЕК

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "АСПЕКТЫ БЕЗОПАСНОГО ПРИМЕНЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ АВЕРМЕКТИНОВ У СОБАК И КОШЕК"

Н« правах рукописи

КОЛЕСНИКОВА Наталья Александровна

Аспекты безопасного применения препаратов на основе авермектннов у собак н кошек

Специальвость 03.00.19-паразитология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2006

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте гельминтологии им. К.И.Скрябина (ВИПИС)

Научный руководитель: доктор биологических наук

Новик Тамаре Самуиловна.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Малахова Екатерина Ивановна,

доктор биологических наук, профессор Дорожкяи Василий Иванович.

Ведущая организация: Федеральное Государственное Учреждение «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВПНКИ»).

Зашита состоится « ^ » марта 2006 г. в ^ часов на заседании диссертационного совета Д 006.011.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте гельминтологии им. К.И.Скрябнна (ВИГИС). Адрес: 117218, г. Москва, Б. Черемушкинская ул., д. 28.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИГИС. Автореферат разослан «/% ^Эеф&ЯУ 2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Бережко В.К.

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Паразитарные заболевания собак и кошек имеют повсеместное и широкое распространение среди данных видов животных. В свете современных представлений паразитарные заболевания существенно ухудшают общее состояние здоровья, обостряют течение хронических заболеваний, снижают иммунитет и даже могут привести к гибели животных, особенно в раннем возрасте. Кроме того, некоторые инвазии являются опасными для человека, и больные животные, находясь в непосредственной близости, представляют реальную угрозу для его здоровья. Обработка животных антипаразитарными препаратами является основным лечебным и профилактическим мероприятием при инвазиях домашних животных.

Лекарственные средства, действующим веществом которых являются авермектины, широко и успешно используются на самых различных видах сельскохозяйственных животных, и во многих ситуациях им трудно найти достойную альтернативу. В течение многих лет собаки и кошки оставались теми винами животных, для которых применение авермектннов полностью исключалось, во всяком случае, официально.

Желание применять препараты на основе авермектннов для чувствительных видов животных, у собак и кошек, вполне понятно. Препараты, в отличие от многих имеющихся на рынке средств, проявляют высокую эффективность при наиболее распространенных паразитарных заболеваниях собак и кошек, одновременно обеспечивая лечебное и профилактическое действие против многих паразитов. К этому следует добавить, что они эффективны в небольших дозах.

Исходя из вышеуказанного, остается насущной проблемой создание препарата на основе авермектннов, в котором бы сочеталась высокая эффективность против наиболее распространенных паразитов собак и кошек и хорошая их переносимость у данных видов животных.

Решение данной проблемы и явилось предметом наших собственных исследований.

Цель н задачи исследований. Целью исследований было создание и оценка эффективности и безопасности нового противопаразитарного препарата аверсеета-3 (такое название получил препарат производства НБЦ «Фармбиомед») (действующее вещество аверсектнн СО в различных лекарственных формах у собак и кошек.

Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие конкретные задачи:

1. Провести скрининг и отбор действующего вещества для будущего препарата на моделях лабораторных животных по критериям токсичности и эффективности.

2. Оценить переносимость аверсектагЗ-в-аида н^кшюнного-растаора, свечей и наружного средства у здоровых и больнМ ййьрЬ^шек. I

3. Изучить некоторые фармакокинЛШШй-^¿РЩВ^новы^ лекарственных форм у собак. Ч^ имени ^Г. '„„„.-„„н

Фонд научайй литературы

^ - л

4. Дополнить характеристику аверсеюа-З данными о его влиянии на фагоцитоз у собак.

5. Оценить эффективность аверсекта-З при наиболее распространенных паразитарных заболеваниях собак и кошек.

Научная новизна работы. Впервые на лабораторных моделях отобрано фармакологически активное вещество из группы авермектинов, проявляющее значительно меньшую токсичность для чувствительных видов животных при наличии высокой нематодоцндной активности (90-100%); проведена объективная оценка переносимости аверсекта-З в виде инъекционного раствора, свечей и наружного средства у здоровых и зараженных паразитами собак и кошек; установлены особенности всасывания и выделения аверсек-тина С| после введения аверсекта-З в виде инъекций и свечей; выявлено положительное влияние аверсектииа Cj на фагоцитоз; установлена высокая эффективность аверсекта-З (на уровне 100%) при наиболее распространенных паразитарных заболеваниях собак и кошек.

Практическая ценность работы. Результаты проведенных исследований использованы в материалах для регистрации аверсекта-З {проекте инструкции для применения, заявке на регистрацию), а также заявке на патент «Проти вопаразитарное средство».

Апробация работы. Результаты исследований были доложены н обсуждены:

- на научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 2005 год);

- на заседаниях Ученого совета ВНГИС 2003-2005 гг.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 2 печатные работы, 1 работа принята к печати.

Основные положения, выносимые на защиту

• Отбор действующего вещества для нового проти вопаразитарно го препарата (аверсекта-З) на модели общетоксического действия (на мышах) и токсичности для новорожденных животных (на крысах) с учетом антгель-минтного действия против Aspicularis tetraptera.

• Переносимость аверсекта-З у собак и кошек.

• Динамика всасывания и распределения аверсектина Cj после его введения в составе инъекционного раствора или свечей.

• Влияние аверсекта-З на фагоцитоз.

• Эффективность аверсекга-3 против нематод и эктопаразитов у собак и кошек.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 128 страницах компьютерного текста. Состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Список литературы включает 139 источников, в том числе 39 отечественных и 100 иностранных. Работа иллюстрирована 19 таблицами и 12 рисунками.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Представлен обзор литературы ло препаратам из различных химических групп, использовавшихся ранее и применяющихся в настоящее время для лечения паразитарных заболеваний собак и кошек. Приведен анализ данных по эффективности, переносимости и фармакокинетике лекарственных средств на основе авермектинов и мильбемицинов у собак и кошек.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 3,1. Материалы и методы

Работа выполнена в 2003-2005 гг. во Всероссийском институте гельминтологии имени К.И.Скрябина, НБЦ «Фармбиомед», виварии ВИГИС и ГНЦА, ветеринарных клиниках Москвы и Московской области.

Общий ход исследований представлен на схеме.

3.1.1. Образцы потен цштъного действующего вещества. В нашем распоряжении было пять образцов аверсектина С|, авермектинового комплекса особого состава, производства НБЦ «Фармбномед» с различным содержанием компонентов:

1 образец - Аг > В2 (В^ - 9,1 %);

2 образец-В2> АгШ, - 8,4%);

3 образец— Аг « В2 (В) - 11,4%);

4 образец - А) + Аг (соответственно 38% и 62%);

5 образец - А| + Аг (соответственно 3,2% н 96,8%).

При различном содержании А2- и Вг-компонектов уровень В> во всех случаях был низким (в пределах от 0 до 11,4%).

3.1.2. Опыты по оценке переносимости пяти образцов аверсектина С1 на мышах. Переносимость вышеуказанных образцов аверсектина С< оценивали на мышах-самцах массой 22-25 п в каждую группу входило по б животных.

б

Общая схема исследований

А вер сект и и С<

(потенциальное действующее вещество)

] образец 2 образец 3 образец 4 образец

бразец

Оценка 5 образцов аверсектиня С| на переносимость на мышах

Оценка 5 образцов аверсектиня С| на немато-доцидную активность на мышах, зараженных Лф1си1аН5 (с№ар!ега

Аверсектпк С,

1 образец (А2 > В2;В1 - 9,1%)

I

Дополнительные испытания аверссктнпа С| (1 образца) в отношении токсичности на новорожденных крысятах

I

Определение токсикологических параметров действующего вещества, яеерсектняя С| (1 образца), и препарата на его основе, аверсекта-3

Оценка протиьопаразитарной эффективности аверсектя-3 в различных лекарственных формах у собак и кошек

Каждый из пяти образцов вводили в дозе 0,5 мг/кг по действующему веществу (ДВ) подкожно б виде инъекционного раствора, накожно (а обоих случаях на формообразующей смеси) и ректально в форме свечей. При накожном введени» за сутки до аппликации у мышей в области спины выстригали шерстный покров (2x2 см) и затем накосили тестируемый образец в указанной дозе.

Переносимость оценивали по общему состоянию животных, проявлению симптомов интоксикации, включая характерные для авермектинов, видимым физиологическим функциям и гибели; при инъекционном введении, кроме того, оценивалась местная реакция в месте введения.

3. 1.3. Оценка нематодоцидних свойств пяти образцов аверсектина Cj на модели, Нематодоцидную активность оценивали на модели нематода-зов A. tetraptera на мышах (Астафьев Б.А., 1996).

Каждый из пяти образцов вводили мышам в дозах 0,2 мг/кг и 0,5 мг/кг по ДВ (по б голов в каждой группе), зараженным A. tetraptera. Мышам контрольных групп вводили соответствующий носитель для препаратов.

Препараты вводили подкожно, накожно и ректально в составе свечей. Эффективность испытуемых соединений оценивали на 3-5-7 дни после введения по количеству гельминтов, содержащихся в толстом отделе кишечника (слепой кишке).

3.1.4. Оценка токсичности выбранного действующего вещества (аверсектина С„ 1 образца) для новорожденных крысят. Опыты по определению токсичности аверсектина С| (образец 1; Aj > Bi, В) - 9,1%) для новорожденных крысят проводили в сравнении с аверсектином С и ивермекти-ном по двум различным схемам.

В первом случае аверсектин С), аверсектин С и ивермектин вводили подкожно крысам-самкам в форме раствора иа формообразующей смеси в дозах 0,2; 0,5; 1 и 10 мг/кг по ДВ. Крысята отдельно препаратов не получали.

Во втором случае, напротив, крысы-самки препаратов не получали, а аверсектин С!( аверсектин С и ивермектин вводили крысятам различного возраста (1; 5 и 10-11 дней) подкожно в виде раствора на формообразующей смеси в дозах 1 и 1,5 мг/кг по ДВ.

В основе при оценке влияния препаратов иа эмбриональное развитие крыс использовали общепринятые методы (Дыбан А.Н., Баранов B.C., Акимова И.М.,1970).

Во всех случаях определяли показатель смертности (%) в течение 7 и 21 суток. По ряду интегральных и специфических показателей оценивали рост и развитие выживших крысят.

3.1.5. Определение параметров острой токсичности аверсектина С| (действующего вещества) и аверсекта-3 на его основе. Изучение острой токсичности аверсектина Ci (действующего вещества) и аверсекта-3 при введении в желудок проводили иа белых крысах и мышах.

Крысам-самцам массой 220-250 г аверсектин С| вводили однократно через рот в дозах 70; 100; 130; 160; 190 и 220 мг/кг в форме водной суспензии на Твине-80 с помощью желудочного зонда.

Мышам-самцам 22-25 г аверсектин С| вводили однократно через рот в дозах 33; 50; 90 и 110 мг/кг в форме водной суспензии на Твине-80 с помощью желудочного зонда.

Крысам-самцам массой 230-260 г аверсект-3 вводили в виде раствора на формообразующей смеси однократно в дозах 5000; 7500; 11000; 13000 и 15000 мг/кг с помощью желудочного зонда.

Мышам-самцам массой 23-25 г аверсект-3 вводили однократно в дозах 1500; 2500; 5000; 7500; 10000 и 20000 мг/кг с помощью желудочного зонда.

Была также определена острая токсичность аверсекта-3 при подкожном пути введения. Крысам-самцам массой 220-250 г аверсект-3 вводил» однократно подкожно в область спины в дозах 5000; 7500; 11000; 13000 и 15000 мг/кг.

На каждый вариант опыта использовали по б животных.

В течение 30 суток после введения препаратов вели наблюдение за состоянием, внешним видом и поведением крыс и мышей.

Определение параметров острой накожной токсичности аверсектина С| и аверсекта-3 провели на белых беспородных крысах-самцах массой 250280 г. За сутки до нанесения препарата вогнутыми ножницами выстригали шерстный покров с участка хожи площадью бхб см в области спины.

Аверсектин С< наносили на кожу в форме водной суспензии на Твине-80 в следующих дозах: 400; 800; 1200 и 1400 мг/кг.

Аверсект-3 наносили на кожу в форме раствора на формообразующей смеси в следующих дозах: 1000; 2000 и 4000 мг/кг.

На каждую дозу препарата использовали по б крыс.

В течение 30 суток после начала опыта вели наблюдение за внешним видом, состоянием и поведением крыс. Отмечали начало, характер и продолжительность проявления признаков токсикоза, а также падеж животных.

Во всех случаях параметры острой токсичности определяли по Литч-филду и Уилкоксону (Беленький МЛ., 1963).

3.1.6. Схемы опитое по изучению переносимости аверсекта-3 у собак и кошек Первоначально переносимость инъекционной формы аверсекта-3 (1% раствор) при подкожном введении оценивали на трех группах условно здоровых собак из 5 животных каждая. 1 группе животных препарат вводили подкожно, однократно в дозе 0,2 мг/кг, 2 группе животных - в дозе 0,5 мг/кг (в 2,5 раза повышенной терапевтической дозе) и 3 группе — в дозе 1 мг/кг массы тела (в 5 раз повышенной терапевтической дозе). Собакам 4 группы вводили формообразующую смесь (контроль). Собаки были различных пород в возрасте от 1 до 7 лет.

В течение первых суток и вплоть до 10 суток оценивали общее состояние и поведение животных, видимые физиологические функции. Оценивали местную реакцию. Через 1; 5 и 10 суток после введения препарата у животных отбирали пробы крови с и без коагулянта. В первом случае определяли гематологические показатели, имеющие наиболее важное клиническое значение (на анализаторе «Гемаскрин», Италия), во втором — наиболее информа-

тивные биохимические показатели (на биохимическом анализаторе «ELAN-ANALYZER» 4145, Eppendorf, Германия).

Затем переносимость аверсекта-3 была оценена на немецких овчарках, зараженных Toxocara canis (питомник транспортной милиции, г. Икша). Собак разделяли на 2 группы. Первой группе собак (3 головы) препарат вводили инъекционно в форме 1% раствора в дозе 0,2 мг/кг по ДВ (0,2 мл на 10 кг массы тела). Второй группе собак (3 головы) препарат вводили в составе свечей в дозе 0,5 мг/кг по ДВ. Пробы крови отбирали до введения (контроль), на 1 и 5 сутки после введения. Определяли наиболее информативные гематологические и биохимические показатели.

Продолжением работы в данном направлении было проведение многочисленных опытов по определению переносимости аверсекта-3 у собак различных пород и возрастов, содержащихся в питомниках Москвы и Московской области, а также пришедших на прием в ветеринарную клинику. Во всех случаях препарат вводили подкожно, однократно в виде 0,1; 0,2; 0,5 и 1 % раствора в дозе 0,2 мг/кг по ДВ; ректально в составе свечей в дозе 0,5 мг/кг по ДВ и в виде 1% раствора наружно. В течение 1 суток и вплоть до 10 суток оценивали общее состояние и поведение животных, видимые физиологические функции, а также реакцию кожи в месте введения.

Опыты по оценке переносимости аверсекта-3 на условно здоровых кошках в форме инъекций и в составе свечей проводили аналогично подобным исследованиям на собаках. В опыте участвовало 2 группы кошек по 3 животных в каждой в возрасте от 1 до 3 лет. Препарат вводили подкожно, однократно в виде 0,2% раствора из расчета 0,1 мл/кг (ОД мг/кг по ДВ) и ректально в дозе 0,5 мг/кг по ДВ.

Опыт по оценке переносимости аверсекта-3 в виде инъекций и примененного наружно провели на кошках, зараженных отодектозом (Otodectes су-notis). В первом случае препарат вводили подкожно, двукратно, с интервалом 7 дней, в дозе 0,2 мг/кг по ДВ в форме 0,2 % раствора; во втором случае препарат наносили наружно непосредственно в ушную раковину с помощью ватного тампона в форме 1% раствора, двукратно с интервалом 7 дней.

3.1.7. Определение всасывания и выделения аеерсектина Сг (действующего вещества) после введения аверсекта-3 у собак. Опыт по определению всасывания и выделения аверсектина С| при введении аверсекта-3 в виде инъекций и свечей провели на двух группах собак по 3 головы в каждой.

Первой группе препарат вводили в виде 1% инъекционного раствора подкожно, однократно в дозе ОД мг/кг по ДВ. Второй группе препарат вводили в виде свечей в дозе 0,5 мг/кг по ДВ. На 1 и 5 сутки отбирали пробы крови. Содержание авермектинов в сыворотке крови определяли жидкостной хроматографией высокого давления с флуоресцентным детектированием (чувствительность метода 0,004 мг/кг).

3.1.8. Оценка фагоцитарной активности крови у собак после введения аверсекта-3, Изучение влияния аверсекта-3 на фагоцитарную функцию крови у собак провели в питомнике «Бакароро энд Итубори» на 16 собаках породы американский стаффордш ирский терьер в возрасте от 2 до 8 лет. Со-

баки были произвольно распределены на 2 группы по 8 голов в каждой. Первой группе собак аверсект-3 вводили в дозе 0,1 мг/кг по ДВ однократно, подкожно; вторая группа собак получала препарат в дозе 0,2 мг/кг по ДВ однократно, подкожно, т.е. в терапевтической дозе. Для определения иммунологических параметров отбирали пробы крови из поверхностной вены предплечья на О; 1 и 3 сутки после введения препарата. Пробы крови, отобранные до введения (0 сутки), служили контролем.

В пробах крови определяли число лейкоцитов (х Ю^/л) и лейкоцитарную формулу.

Функциональный статус нейтрофилов оценивали по их фагоцитарной и оксидазной активности с использованием взвеси убитых Staphylococcus aureus. При этом определяли % фагоцитоза (количество фагоцитирующих нейтрофилов) и фагоцитарный индекс (число микробных клеток, поглощенных одним нейтрофилом).

Оксидазную активность (активность миелопироксидазы) определяли спектрофотометрически («Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ», 2005).

J. /. 9. Схемы опытов по оценке противопаразитарной эффективности а«ерсекта-3 у собак и кошек. Опыты по определению эффективности аверсекта-3 в инъекционной форме, в составе свечей и в виде наружного средства при различных паразитарных заболеваниях собак и кошек проводили в питомниках Москвы и Московской области, ветеринарных клиниках.

Для определения нематодоцидной активности препарата в питомниках и клиниках по результатам копроскопии отбирали спонтанно инвазированных Toxoeara canis собак.

Препарат вводили однократно, подкожно в виде 0,1; ОД; 0,5 и 1% раствора во всех случаях в дозе 0,2 мг/кг по ДВ или в виде свечей ректально в дозе 0,5 мг/кг по ДВ.

Учет результатов лечения проводили трехкратной копроскопией.

Инсектицидную активность (блохи, власоеды) препарата оценивали визуальным обследованием шерсти и кожных покровов до и после применения препарата. Препарат вводили однократно, подкожно в дозе 0,2 мг/кг по ДВ.

Для определения эффективности при отодектозе использовали микроскопические методы исследования.

При отодектозе препарат вводили в первом случае подкожно, двукратно, в дозе ОД мг/кг по ДВ с интервалом в 7 дней, во втором случае препарат наносили накожно в виде 1% раствора непосредственно в ушную раковину.

Микроскопическому исследованию, как в первом, так и во втором случае, подвергались мазки из ушной раковины до обработки и через 10 дней после второй обработки.

3.1. /0. Статистическую обработку полученных данных проводили по Стьюдеиту-Фишеру с использованием t-критерия.

3.2. Результаты исследований

3.2.1. Скрининг пяти образцов аверсектина С, по критерию обще• токсического действия на мышах в сравнении с аверсектином С и ивер-мектином. Использование мышей для первичного отбора действующего вещества считаем правомочным в силу того, что высокая чувствительность к авермектинам первых и проявление к ним побочных эффектов у собак и кошек сходна и является результатом интенсивного проникновения через гема-тоонцефалический барьер.

Преимущества в переносимости всех югги образцов на основе аверсек-тина С1 по сравнению с аверсектином С и ивермектином имели место при всех использованных путях введения. В частности, при подкожном введении композиций на основе аверсектина С| признаки интоксикации проявлялись только у части мышей, входивших в опыт. Причем, в основном картина отравления в данном случае сводилась к незначительному угнетению, которое проходило в течение нескольких минут и сменялось полным восстановлением животных. Гибель мышей, которым вводили композиции на основе аверсектина С|, не превышала 10%. В противоположность этому, введение аверсектина С и ивермектина приводило к очень быстрому появлению выраженных признаков интоксикации (потеря двигательной активности, судороги, истечения из носовой полости) и гибели соответственно 80% (при введении аверсектина С) и 50% (при введении ивермектина) мышей.

При накожном и ректальном путях введения композиций на основе аверсектина С« признаки интоксикации и падеж животных отсутствовали. При введении аверсектина С и ивермектина гибель мышей не наблюдали, но у животных в течение первых суток имела место характерная картина интоксикации (угнетение, адинамия и т.п.).

Следует отметить, что все пять образцов аверсектина С| между собой практически не различались по переносимости у мышей.

Исходя из этого, принимая во внимание только параметры токсичности, каждый из пяти тестированных образцов аверсектина С, мог быть взят в качестве действующего вещества для будущего противопаразитарного препарата.

3.2.2. Нематодоцидная активность пяти образцов аверсектина С/ на мышах в сравнении с аверсектином С и ивермектином. При подкожном введении композиций на основе аверсектина С) в дозе ОД мг/кг по ДВ наибольшую эффективность проявили образцы 1 и 2 (100%), в то время наименьшую - образец 4 (60%). Уместным будет отметить, что образцы 1 и 2 были одинаково эффективны с используемыми в данном случае в качестве положительного контроля аверсектином С и ивермектином (100%).

При накожном н ректальном применении пяти вариантов аверсектина С1 в дозе 0,2 мг/кг по ДВ эффективность была очень низкой и не превышала 10%. Исходя из этого, препараты при данных путях введения испытывали в большей дозе, т.е. 0,5 мг/кг по ДВ.

При накожном нанесении в дозе 0,5 мг/кг по ДВ высокую эффективность на уровне 87-90% проявили образцы 1-4, образец 5 аверсектина С| был

менее эффективен (57%); эффективность препаратов сравнения находилась в пределах 85-90%.

При ректальном введении в дозе 0,5 мг/кг по ДВ в составе свечей препараты, подвергшиеся скринингу, также обеспечивали высокую эффективность в пределах 94-99%; исключением в данном случае был образец 3 авер-ссктина С| (72%).

С учетом незначительного содержания авермектина В| (считается наиболее эффективным в отношении противопаразитарного действия) в образцах 1-3 и его отсутствия в образцах 4 и 5 можно сделать вывод о чувствительности А. 1еагар4ега к авермектинам В?; Ад и Аз.

Однако при окончательном выборе действующего вещества будущего препарата нам необходимо было учесть следующее. Все пять образцов аверсектина С) были получены в лабораторных условиях. Возможности лабораторного регламента не всегда совпадают с полупроизводственными и более всего производственными условиями. Иными словами, получение действующего вещества должно быть рациональным, экономичным н технологически выдержанным.

Таким образом, с учетом этих обстоятельств мы остановились на образце 1 аверсектина Сь в кагором содержание Аз > Вг, и все дальнейшие исследования были посвящены данному аверсектиновому комплексу и препарату на его основе - аверсе кту-3.

3.2.3. Опыты по определению токсичности аверсектина С/ для новорожденных крысят. При введении аверсектина С| крысам-самкам в четырех тестированных дозах, а именно ОД; 0,5; 1 и 10 мг/кг по ДВ, когда крысята получали препарат опосредованно через молоко матери, гибель плодов не наблюдали. Крысята активно сосали молоко (судили по нахождению молока в желудке), и их развитие протекало без каких-либо отрицательных отклонений. В частности, масса тела у крысят, которым вводили аверсектин С| в дозах 0,2; 0,5; 1 и 10 мг/кг на 21 сутки соответственно составила 27,72±1,85; 28,35± 1,52; 26,72±2,80 и 29,30±1,17 против 28,4б±0,72 г в контроле (Р > 0,05). Кроме того, в подтверждение того, что опытные крысята не отставали в развитии от контрольных животных, свидетельствуют практически аналогичные значения специфических показателей, а именно сроки отлипания ушных раковин, опушения н прозрения.

При введении аверсектина С (первого препарата сравнения) крысам-самкам в дозе 0,2 мг/кг показатели эмбрионального развития опытных крысят находились в пределах нормы.

Однако при увеличении дозы аверсектина С до 0,5; 1 и 10 мг/кг по ДВ последовательно возрастала гибель плодов. Так, если при введении препарата в дозе 0,5 мг/кг гибель составляла 30,76%, то уже в дозах 1 и 10 мг/кг данный показатель равнялся соответственно 85,71 и 100%. Масса тела оставшихся в живых плодов была достоверно ниже по сравнению с контролем и группой крысят, матери которых получали аверсектин Сд.

При введении ивермектина (второго препарата сравнения) крысам-самкам в двух низших дозах (0,2 и 0,5 мг/кг по ДВ) препарат не вызывал отрицательных изменений интегральных (прирост массы тела) и специфиче-

ских показателей развития крысят. Однако при дальнейшем увеличении дозы до 1 и 10 мг/кг ивермектин оказывал явное, токсическое действие на потомство, опосредованное через молоко. В частности, гибель крысят в течение 21 суток повышалась соответственно до 18,18% и 42, 85% против отсутствия падежа в контрольной группе. Одновременно с этим, у оставшихся в живых потомков достоверно снижалась масса тела к 21 суткам жизни (соответственно она составляла 21,87±0,32 и 20,72±0,58 против 28,46±0,72 г в контроле (Р £ 0,05)).

При введении аверсектина С), аверсектина С и ивермектина самим крысятам в возрасте 1 суток (1,5 мг/кг по ДВ) гибель потомства наблюдали во всех опытных группах. Однако данный показатель при введении аверсектина С1 составлял в первые 7 суток 2б,00±2,48%, в то время как в течение 21 суток пало 65,72±3,18% новорожденных крысят. Значительно большую гибель плодов в данном случае наблюдали при введении аверсектина С и ивермектина. Так, в течение уже первых 7 суток после введения аверсектина С пало 65,56±3,17%; после введения ивермектина за это же время пало б0,48±2,72% крысят. Через 21 сутки все подопытные крысята в этих двух группах пали.

Аверсектин С) и ивермектин тестировали на 5-дневных крысятах. При введении двух препаратов в дозе 1,0 мг/кг по ДВ гибель плодов отсутствовала. Однако примерно через 15 минут после введения крысятам ивермектина у животных наблюдали выраженные признаки интоксикации, которые проявлялись в виде угнетения, отсутствия подвижности и т.п. Вышеуказанные симптомы полностью исчезали примерно через 0,5-1 часа, и состояние крысят восстанавливалось практически до нормы. При введении аверсектина С) крысятам этого возраста интоксикация отсутствовала.

При увеличении дозы аверсектина Сь аверсектина С и ивермектина до 1,5 мг/кг по ДВ отмечали 100% гибель потомства во всех опытных группах.

В третьем варианте данной схемы испытаний все три препарата вводили более старшим 10-11-дневным крысятам; при этом использовали одну дозу 1,5 мг/кг по ДВ. При введении аверсектина С) гибель плодов отсутствовала; в этом случае не наблюдали и признаков интоксикации. В то же время при введении аверсектина С в течение 21 суток пало 77,48-80,72% крысят; при тестировании ивермектина пало 50,46-55,87% потомков.

Во всех случаях гибель контрольных крысят отсутствовала.

Совершенно очевидно, что аверсектин С< является менее токсичным для новорожденных крысят по сравнению с аверсектнном С и ивермектином.

3.2.4. Параметры острого токсического действия аверсектина С» и аверсекта-3 при различных путях введения. По результатам опытов, согласно классификации опасности веществ по степени воздействия на организм (ГОСТ 12.1.007-76) аверсектин С| относится к 2 классу опасности: ЬО» для белых крыс и мышей соответственно 139 (116,9+161,1) и 81 (64,1+97,9) мг/кг, аверсект-3 относится к 4 классу опасности: для белых крыс и мышей соответственно 11900 (10300+13750) и 8500 (5900+11100) мг/кг.

LDjo аверсекта-3 при подкожном введении равняется 12600 (11000+13500) мг/кг.

Согласно классификации опасности веществ по степени воздействия на организм при нанесении на кожу (ГОСТ 12.1.007-76) аверсектин Ci относится к 3 классу опасности: LDjo= 860 (572+1050) мг/кг; аверсект-3 относится к 4 классу опасности: LDjo > 4000 мг/кг.

3.2.5. Оценка переносимости инъекционного аверсеюпа-3 на условно здоровых собаках. При введении препарата собакам в дозах 0,2; 0,5 и 1 мг/кг по ДВ ни в одной испытуемой группе, включая животных, которым аверсект-3 вводили в самой высокой дозе (в 5-кратной терапевтической дозе), не наблюдали признаков интоксикации.

Отсутствовала местная реакция при подкожном введении аверсекта-3, т.е. не отмечали припухлости, болезненности, покраснения и т.д. в месте введения препарата.

Аверсект-3 не привел к достоверным изменениям тестированных гематологических и биохимических показателей у собак при введении препарата в трех дозах, включая даже самую высокую, 1 мг/кг (таблицы 3.2.5.1. и 3.2.5.2.).

В данном случае следует особо подчеркнуть, что отсутствовали изменения показателей, характеризующих функциональное состояние печени (активность ACT и АЛТ, уровень билирубина) и почек (концентрация креатн-нина).

3.2.6. Оценка переносимости аверсекта-3 е виде инъекционного раствора и в составе свечей на собаках, зараженных T. canis. У немецких овчарок, которым вводили подкожно 1% аверсект-3 в дозе 0,2 мл/10 кг массы тела (0,2 мг/кг по ДВ), а также у собак, которым вводили ректально свечи в дозе 0,5 мг/кг по ДВ, отсутствовали признаки интоксикации, в том числе, характерные для отравления авермектинамн.

Местной реакции при подкожном введении 1% аверсекта-3 не отмечали.

Гематологические и биохимические показатели не претерпевали достоверных изменений, за исключением тенденции к снижению эозинофилов; данный факт мы связываем с проявлением антгельмннтного действия препарата у зараженных собак.

3.2.7. Переносимость аверсекта-3 в виде инъекционного раствора, свечей и наружного средства у собак различных пород и возрастов. В целом аверсект-3 в виде инъекционного раствора, свечей и наружного средства испытан на 202 взрослых собаках 21 породы, обладающих различной чувствительностью вообще к лекарственным препаратам, включая таковые и на основе авермекгинов (таблица 3.2.7).

Кроме того, с учетом особой чувствительности молодых животных к авермектинам аверсект-3 в виде инъекций и свечей испытан на 155 щенках 11 пород в возрасте от 3 недель до 1 года (таблица 3.2.7.).

Та&пща $.2.5.].

Влияние введения аверсекта-3 в трех дозах подкожно, однократно на гематологические показатели у собак (п - 5; Р > 0,05)

Показатель/ Врмм после мелсям 1ти) 1 группа 2 группа 3 группа 4 группа (коит| дольная)

1 5 10 1 5 10 1 5 10 I 5 10

Эрипюшпы (10 /л) 7,10*0,82 8,62±0,92 9,82±034 9,10±1.00 732*236 830*132 7,60Ю,56 8,1210,82 8,4811,05 8,5010,92 7,9612,00 8,92*1,82

Гемоглобин (г/л) 16,70а МО 1630*0,82 15,80*0,70 »,70*230 15,8<Ь0,92 1«0±1,80 15ДО1130 1б,70Ю,82 15,701230 16,80*1,50 17,1012,80

Троыбошпы (10%) 370*82 410*110 370*56 280*82 340*56 272156 320172 280*58 380196 370*82 380153 390162

ЛеЙхошпы (10%) 11,86*0,56 12д62±0,92 1031*2,85 12,80*0,32 13,801132 12,7610,92 13,86*1,12 13,70*1,15 12,11*1,15 1236*0,92 11,86*230 13,72±1,92

МтЬтмкрпвн Лямфошпы (%) 2130±3,86 22,95±4,80 25.80t3.70 22,93*5,60 25,60*3,80 2537±130 22,35*2,80 22#>*1,70 21,94*5,20 22,70±1,80 22,8012,50 23301230

Сяжнтшдер-ньк (%) 60,70±5,80 60,13±5,» 57,42*4,60 6130±730 59,20±3,70 58,7042,80 61,8019,10 61,6519,20 62,70*5,80 61,8(И5,60 60,80±7Д1 61,14*4,80

Шлочкошерные (%> 2,72*1,72 3,02±030 3,11*036 3,06±0,72 2,95*0,82 3,091 Ш 3,11±0,92 3,02*0,86 3,09*1,56 3,00±0,92 3,1110,92

Моноциты (%) 9,06±Ш 836±235 «,№1,82 738±1,82 7,8б±0,92 7,91±1,15 8,1213,15 8,0213,52 8^61230 9,1211,23 8,13± 1,82

Ээтинофилы (%) 5,30*0,95 436*1,00 4,8612,86 5,12±1,28 4,85*230 4,52±2,82 432±1,15 4,15*13« 4,28*0,92 4,12*1,00

Тайща 3.2,5.1

Влияние введения авсрсекта-3 в трех дозах подкожно, однократно на биохимические показатели у собак (п = 5; Р > 0,05)

Показатель/ Время после введения (сутки) 1 группа 2 группа 3 группе 4 группа (контрольная)

1 5 10 1 $ 10 1 5 10 1 5 10

Общий белок Ш 62,3*5,8 56,7*4,8 57,8*3.2 63,5*7,1 62,8*3,8 58,9*5,6 65,7*3,8 58,915^ 63,5*2,8 61,0*2,5 59,8*1,8 634*34

Альбумины (г/л) 25,6±2,7 22,8*5,7 21,8*3,3 22,7*2,8 25,6*1,9 22,8±5,8 21,6*3,6 23,8*4,5 25,7*3,8 28,8*6^ 25,7*3,6 24,8*4,2

Холестерин (ммппь/д) Э,80±0,92 3,70*0,82 3,71±1,15 2.86*0,96 3,26*1,18 4,12*140 3,92*1,25 3,81*1,00 3,9б±1,86 4,11*1,92 3,75*1,25

Креатишш (ммаль/л) 10,80*240 9,70*0,96 9,80*1,15 9,56*1,00 1042*0,92 9,Яб±1,15 1040*1,85 9,88*1,80 9,70*1,75 9,56*2^8 10,11±1,82 9,86*148

Билирубин общий (мкмоль/л) 2,№0,92 1,92±046 2,10*0,82 2,1510,92 1,86*0,75 2,15*1,15 2,15*1.12 1,86*0,92 2,58*0,92 1,98*1,15 2,15*0,92 2.06*0,58

Билирубин прямой ^мкмоль/л) 1,15*042 0,92*0,32 0,72*0,24 0,98*0,38 0,86±0,52 0,99±0,32 1,0040,28 0,97*0,32 0,98±0,28 1,10*048 0,99*0,27 1,12*048

Астиритами-нотрансфераи <т 15,7*2,8 16,2*3,2 17,6*3,8 17,2*24 16,8*1,8 18,9±1,8 18,7±и 19,5*24 21,6*3,8 18,4*2,5 15,7*3,8 15,9*4,7

Алшошами-нотрансфераза т 17,8*1,8 18,6*3,1 15,8*2,8 16,8*2,5 18,6±1,6 18^+24 19,6*3,7 15,8*2,5 18,7*2,6 19,7*1,8 16,8*1,7

_ Таблица 3.2.7

Форма «версекта-Л Порода Количество

Взрослые собаки от 1 года до ¡5 лет

в виде инъекционного американский стаффордширский терьер 101

раствора (0,5 и 1%) среднеазиатская овчарка 15

южно-русская овчарка 14

карликовый пинчер 13

кавказская овчарка И

беспородные И

шар-лей 8

Лабрадор ретривер 3

булъмастнф 2

пти барбансон 2

норфолк терьер 2

черный терьер 2

китайская хохлатая 2

брюссельский (рифов 2

.мопс ' 2

пудель I

такса 1

болонка 1

ка-де-бо I

ротвейлер 1

немецкая овчарка 1

в виде свечей немецкая овчарка 3

наружно в виде I % Лабрадор ретривер 2

раствора среднеазиатская овчарка 1

Щенки (от 21 дня до 1 года)

в виде инъекционного американский стаффордширский терьер 75

раствора (0,1 и 0,2%) среднеазиатская овчарка 15

миттелыинауцер 10

черный терьер 6

китайская хохлатая 6

карликовый пинчер 5

брюссельский грифон 5

шар-лей 4

южно-русская овчарка 4

немецкая овчарка 3

в виде свечей уэст-уайленд-уайт-терьср 2

китайская хохлатая 4

мтггтельш науцер 6

американский стаффордширский терьер 10

Общее состояние взрослых и молодых животных, их поведение, прием корма оставались без изменений в течение всего периода наблюдений (в каждом случае 10-14 суток). Во всех случаях отсутствовали признаки интоксикации. При применении аверсекта-3 в виде инъекций при тщательном осмотре места введения не было обнаружено болезненности, отечности, покраснения или иных признаков, свидетельствующих о местном раздражающем действии препарата.

Таким образом, аверсект-3 хорошо переносится взрослыми собаками и щенками различных пород.

3.2.8. Переносимость аверсекта-З в виде инъекций и свечей у условно здоровых кошек. При введении 0Д% аверсекта-З условно здоровым кошкам в дозе 0,2 мг/кг по ДВ (инъекции) и 0,5 мг/кг по ДВ (свечи) общее состояние животных и поведенческие реакции оставались без изменений в течение всего периода наблюдения (до 14 суток). Объективная клиническая оценка переносимости препарата не выявила достоверных изменений гематологических и биохимических показателей.

При подкожной инъекции препарата отсутствовала припухлость, болезненность, покраснение и другие признаки, которые свидетельствовали бы о наличии местно-раздражающего действия.

3.2.9. Переносимость аверсекта-З « виде инъекций и раствора для наружного применения у кошек, зараженных отодектозом. Опыты проводили на кошках с установленным диагнозом: отодектоз (О. супоиэ).

3 беспородным кошкам препарат вводили двукратно с интервалом 7 суток инъекционно в виде 0,2% раствора (ОД мг/кг по ДВ); 4 другим кошкам аверсект-3 применяли только наружно в виде \% раствора двукратно с интервалом 7 суток.

Во всех случаях аверсект-3, использованный уже в качестве лечебного средства, хорошо переносился животными.

3*2.10. Всасывание и выделение аверсектина С; у собак при введении аверсекта-З в виде инъекций и свечей. При подкожном введении аверсекта-3 в дозе 0,2 мг/кг по ДВ в сыворотке крови имело место более высокое содержание его основных компонентов В2а + Л^ в первые сутки по сравнению с ректальным введением в дозе 0,5 мг/кг по ДВ, В частности, концентрация авермектннов Вг, + Аг, при использовании инъекции и свечей составила соответственно 1б,44±3,28 и 7,92±2,56 мг/л. Однако через 5 суток после введения аверсекта-З в составе свечей уровень авермектинов А^ + Вг. в сыворотке крови был выше (0,45±0,10 мг/л) по сравнению с таковым при парентеральном назначении препарата (0,18±0,05 мг/л).

3.2.11. Влияние аверсекта-З на фагоцитарную функцию крови. Авер-сскт-3 при введении собакам в дозе 0,1 и ОД мг/кг (по ДВ) достоверно не изменял число фагоцитирующих клеток и фагоцитарный индекс, т.е. число поглощенных микробных клеток; иными словами препарат не оказал влияния на поглотительную активность макрофагов.

Однако препарат приводил к достоверному повышению активности миелопероксидазы на следующие сутки после введения аверсекта-З. Так, при введении препарата в дозе 0,1 мг/кг спонтанная активность фермента возрастала с 1776 до 3132 у.е. (р < 0,05). В случае индуцированной активности достоверное увеличение этого показателя имело место при обеих дозах. Так, при введении в дозе 0,1 мг/кг индуцированная активность повышалась с 1776 до 2953 у.е., а в дозе ОД мг/кг-с 1901 до 2541 у.е. (р < 0,05).

Усиление кислородзависимой спонтанной и индуцированной активности данного фермента, по сути дела, означает усиление его переваривающих свойств, что в конечном итоге будет приводить к повышению завершенности фагоцитоза в целом.

3.2.12. Протиеопаразшпарная эффективность аверсекта-3 у собак и кошек. На 207 спонтанно иивазированных собаках и 7 кошках была оценена эффективность препарата в отношении токсокар, возбудителя отодектоэа, блох, власоедов.

Данные по эффективности суммированы в таблице 3.2.12.

Аверсект-3 в виде различных лекарственных форм (инъекций, свечей, наружного средства) проявил себя высокоэффективным препаратом против эндо- н эктопаразитов собак и кошек.

Таблица 12,12.

Инвазия Вид я . кол-во ¡тавотных Форма амрмкп-З, путь введения Дом, кратность Эффективность (%)

токсокароз (Т.саш5> взрослые собаки я щенки (196) 0,1% инъекционный раствор 0,2% инъекционный раствор 0,5% инъекционный раствор 1% инъекционный раствор (подкожно) 0,2 млУит 0,1 мл/кг 0,4 мл/10 кг ОД мл/10 кг (во всех случаях 0,2 мг/кг по ДВ, однократно) 100

свечи для ректального введения с различным содержанием ДВ, рассчитанного на массу животного (одна свеча на!,5,10?40кг) по одной свече на животное (0,5 мг/кг по ДВ, однократно)

отодектоз (О, супомз) взрослые собаки (3) 1% раствор в качестве наружного средства двукратно с интервалом 7 дней 100

кошки (7) 0,2% инъекционный раствор (подкожно) 0,1 мя/кг (0,2 мг/кг по ДВ), двукратно с интервалом 7 дней 100

1% раствор в качестве наружного средства двукратно с актер валом 7 дней

блохи, власоеды взрослые собаки (8) 1% инъекционный раствор (подкожно) 0,2 ыл/10 кг (0,2 мг/кг по ДВ), однократно 100

Заключение

Таким образом, в результате проведенных нами исследований с использованием различных методологий изыскано оригинальное фармакологически активное вещество аверсектин С], обладающее меньшей токсичностью

на моделях (общетоксическое действие на мышах и токсичность .для новорожденных крысят) и одновременно высокой антгельминтноЙ эффективностью на зараженных А. 1е:гар1ега мышах. Препарат, созданный на его основе, аверсе кт-3, в различных лекарственных формах хорошо переносится собаками и кошками различных пород и возрастов, проявляет высокую противопарази-тарную эффективность при некоторых наиболее распространенных инвазиях домашних животных.

Выводы

1. Пять образцов аверсектняа С| с различным содержанием А- и В-авермектинов проявили значительно меньшую токсичность у чувствительных к данным соединениям мышей по сравнению с аверсектином С и ивер-мектином при различных путях введения.

2. Аверсектин С] (образцы 1-5) при подхожном, накожном и ректальном введении в дозах 0,2 и 0,5 мг/кг по ДВ мышам, зараженным А. гейгар1ега, проявил выраженное нематодоцидное действие (ЭЭ = 57-100%).

3. При введении аверсектина С1 (образец 1; А2 > В2, В, - 9,1%) крысам-самкам в дозах 0,2-10 мг/кг по ДВ гибель крысят отсутствовала; аверсектин С и ивермектнн были токсичнее при введении в аналогичных дозах и привели к гибели в зависимости от дозы соответственно 85,71-100% и 18,18-42,85% крысят.

Аверсектин С| в дозах 1 и 1,5 мг/кг проявлял меньшую токсичность по сравнению с аверсектином С и ивермектином при введении 1-; 5- и 10-11-дневным крысятам.

4. 1ЛЬМ аверсектина С| для белых беспородных крыс и мышей составляет соответственно 139 (116,9+161,1) и 81 (64,1+97,9) мг/кг при введении в желудок (2 класс опасности, ГОСТ 12.1.007-76). 1ЛЭ30 при нанесении на кожу равно 860 (572+1050) мг/кт (3 класс опасности, ГОСТ 12.1.007-76).

5. ЬОзд аверсекта-3 для белых беспородных крыс и мышей составляет соответственно 11900 (10300+13750) и 8500 (5900*11100) мг/кг при введении в желудок (4 класс опасности, ГОСТ 12.1.007-76); ЬО» при нанесении на кожу > 4000 мг/кг (4 класс опасности, ГОСТ 12.1,007-76); Шм аверсекта-3 для белых беспородных крыс при подкожном введении равно 12600 (11000+13500) мг/кг.

6. Введение инъекционного аверсекта-3 в дозах 0,2; 0,5 и 1 мг/кг по ДВ условно здоровым собакам не оказало отрицательного влияния на общее состояние собак, их поведенческие реакции, а также биохимические и гематологические показатели.

7. Аверсект-3 в виде подкожной инъекции и свечей хорошо переносится собаками, зараженными Т, саш&.

8. При введении аверсекта-3 в виде инъекционного раствора и свечей 202 взрослым собакам 21 породы (в возрасте от 1 года до 15 лет) и 155 шейкам 11 пород (в возрасте от 3 недель до 1 года) в терапевтических дозах соответственно 0,2 и 0,5 мг/кг по ДВ отсутствовали побочные эффекты общего и местного характера.

9, Отмечена хорошая переносимость аверсекта-З в виде инъекций, свечей и наружного средства у условно здоровых и больных отодектозом кошек в терапевтических дозах.

] 0. При подкожном введении аверсекта-З в дозе 0,2 мг/кг по ДВ имело место более высокое содержание основных компонентов В2, + Ai, в первые сутки по сравнению с ректальным введением в дозе 0,5 мг/кг по ДВ; через 5 суток после введения концентрация В2. + А^ была выше при введении препарата в виде свечей.

11. При инъекционном подкожном введении собакам аверсект-3 в дозах 0,1 н 0,2 мг/кг по ДВ приводил к стимуляции стадии переваривания фагоцитоза (повышал активность миелопероксидазы нейтрофилов).

12. Аверсект-3 на 207 собаках различных возрастов проявил высокую эффективность (100%) против токсакар, возбудителя отодектоза, блох, вла-соедов при введении в виде инъекционного раствора и свечей (соответственно в дозах 0,2 и 0,5 мг/кг по ДВ) или наружного средства; аверсект-З при инъекционном (0,2 мг/кг по ДВ) и наружном применении оказал высокое лечебное действие при отодектозе кошек.

Практические предложения

Результаты проведенных исследований использованы в материалах для регистрации аверсекта-З (проект инструкции, заявке на регистрацию), а также заявке на патент «Противопаразитарное средство».

Слисок работ, опубликованных по теме диссертации

1. Колесникова Н.А., Дриняев В.А. Скрининг субстанций на основе авермектиновых комплексов на лабораторных животных с целью разработки проггивопаразитарных препаратов для собак и кошек//Материалы докладов научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». -М., 2005. -Выпуск 6. -С. 169-174.

2. Колесникова Н.А., Кругляк Е.Б., Авчук C.B., Тер-Симонян В.Г. Особенности динамики содержания аверсектина Ci и его отдельных компонентов в плазме крови собак при подкожном и ректальном введеиии//Мате-риалы докладов научных конференций «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». —М„ 2005.-Выпуск 6.-С. 174-177.

3. Колесникова Н.А. Сравнительное изучение токсичности некоторых авермектииов для новорожденных крысят//Труды Всероссийского института гельминтологии им. К.И .Скрябина. -2006.

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД№ 1-00007 ог 25.09.2000г. Подписано в печать 13.02.06 Тираж 100 экз. Усл. пл. 1,31 Печать авторефератов (095) 730-47-74, 778-45-60