Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Экологические аспекты применения ивомека, дуотина и фармацина в ветеринарии

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Экологические аспекты применения ивомека, дуотина и фармацина в ветеринарии"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЕЛЬМИНТОЛОГИИ имени академика К.И.СКРЯБИНА

На правах рукописи

Русаков Сергей Вячеславович

ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПРИМЕНЕНИЯ ИВОМЕКА, ДУОТИНА И ФАРМАЦИНА В ВЕТЕРИНАРИИ

Специальность 03.00.19 ~ паразитология, гельминтология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 1997

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте гельминтологии имени К.И.СКРЯБИНА (ВЙГИС)

Научный руководитель: доктор биологических наук,

Новик Т.С.

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, Архипов И.А. кандидат биологических наук, доцент Кручина С.Н.

Ведущая организация - Всероссийский государственный научно-

исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ)

Защита диссертации состоится " // " ¿¿юН<-@ 1997 г.

в Щ часов на заседании диссертационного совета Д—020.04.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте гельминтологии им. К.И.Скрябина (ВИГИС).

Адрес: 117259, Москва, Б.Черемушкинская ул., д.28 С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИГИС.

Автореферат разослан" ¡У " 1/ий.& 1997 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Бережко В.К.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. В связи с широкой химизацией и интенсификацией всех сфер хозяйственной деятельности человека, в том числе и сельского хозяйства, проблема охраны окружающей средь! приобретает особую важность.

Ветеринарные препараты, масштабы применения которых постоянно возрастают во всем мире, можно также рассматривать в качестве потенциальных источников загрязнения окружающей среды. Выделяясь из организма сельскохозяйственных животных в виде исходных соединений или их метаболитов, они могут длительно накапливаться и мигрировать по пищевым цепочкам и в результате явиться причиной нежелательных экологических эффектов в природной среде. Оценить при этом возможный характер и направленность последних, их потенциальный и реальный риск - важная и необходимая задача научных исследований,

Авермектины были открыты сравнительно недавно - в конце 70-х годов. В химическом отношении они представляют собой макроциклические лактоны и являются продуктами жизнедеятельности почвенных грибов Streptomyces avermitiiis. Высокая биологическая активность против целого ряда беспозвоночных явилась основой для создания высокоэффективных антипаразитарных биологических препаратов нового поколения для ветеринарии. Ассортимент подобных лекарственных средств на мировом рынке довольно широк. Учитывая информацию различного плана о терапевтической активности, спектре действия, масштабах и перспективе применения, особенно в России, для наших собственных исследований мы выбрали три хорошо известных ветеринарных препарата; ивомек (ивермектин), дуотин (абамектин) ("Merk Sharp & Dohms", США) и одну из первых отечественных композиций подобного плана - фармации (аверсектин С) ("Фармбиомед", Россия). Несмотря на то что экологические последствия применения ивомека и дуотина в ветеринарии в той или иной степени оценены, уровень и полнота подобных исследований могут быть значительно расширены, а данные - детализированы, особенно с учетом специфических условий нашей страны. Что касается фармацина, то в отношении поставленных научных целей

он является вообще малоизученным препаратом. Сравнительный характер исследований придает особый смысл, показывая преимущества и недостатки каждого препарата.

Цель и задачи работы. Основной целью настоящих исследований явилось изучение ряда экологических вопросов, связанных с применением трех антипаразитарных препаратов на основе авермектинов: ивомека, дуотина и фармацина. Их физико-химические свойства, незначительная терапевтическая доза (0,2 -0,3 мг/кг живой массы) и высокая активность по отношению к беспозвоночным наложили свою специфику на постановку и проведение исследований.

Конкретно были поставлены следующие задачи:

разработать высокочувствительный метод анализа ивермектина, абамектина и аверсектина С в почве, фекалиях и растениях на основе жидкостной хроматографии высокого давления;

- оценить их стабильность в почве и фекалиях, а также способность к миграции в первой;

- изучить распределение трех авермектинов в системе "почва -растение";

- изучить влияние ивермектина, абамектина и аверсектина С на некоторых представителей почвенной фауны и копробионтов.

Научная новизна работы. Разработан метод анализа ивермектина, абамектина и аверсектина С в объектах окружающей среды с использованием жидкостной хроматографии высокого давления с УФ- и флуоресцентным детектированием.

В сравнительном аспекте в идентичных условиях изучены основные закономерности поведения ивермектина, абамектина и аверсектина С в почве, фекалиях животных и растениях. Впервые в подобном плане детально изучены и дана соответствующая индивидуальная характеристика всех составляющих компонентов вышеуказанных препаратов: В-^НгВО; Вг; А1 и А2. Проведен анализ зависимости скорости разложения тестируемых соединений, их мобильности в почве от химического строения и компонентного состава. Оценено влияние трех препаратов на жизнедеятельность червей МсосМиэ са1дтозиз и некоторых летающих копрофагов навоза крупного рогатого скота.

Практическая ценность работы. Разработанный метод анализа авермектинов можно использовать в санитарно-ветеринарных лабораториях для контроля за их остаточным содержанием в объектах окружающей среды. Детальная оценка ивомека, дуотина и фармацина в плане возможности их

длительного накопления и миграции в почве, попадания в грунтовые воды, стабильности в фекалиях животных, а также токсического влияния на некоторые биообъекты внешней среды в значительной мере расширяет и обогащает общую характеристику широко применяемых в ветеринарии данных лечебных средств. По всем вышеуказанным вопросам оценен реальный риск, что позволяет обоснованно оценить перспективу применения авермектинов на практике. Сравнительный характер проведенных исследований позволяет выявить общие, положительные и отрицательные стороны всех и каждого из препаратов и в определенной степени повлиять на практический выбор ветеринарных врачей.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и одобрены на отчетных научных конференциях сотрудников Всероссийского института гельминтологии им. «.И.Скрябина (Москва, 1995, 1996); XXI чтениях памяти академика К.И.Скрябина (декабрь 1996, Москва) и Объединенной сессии Координационного совета по ветеринарной гельминтологии Центрального совета общества гельминтологов России и секции "Инвазионные болезни животных" РАСХН.

Публикации: По теме диссертационной работы опубликовано две статьи.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Разработка высокочувствительного метода анализа трех авермектинов ка основе жидкостной хроматографии высокого давления с УФ- и флуоресцентным детектированием.

2. Основные закономерности поведения ивермектина, абамектина и аверсектина С и их отдельных составляющих компонентов в почве, фекалиях животных и растениях.

3. Влияние авермектинов на доадевых червей Nicodrilus calginosus и мух в навозе крупного рогатого скота.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 205' страницах машинописного текста. Содержит /6 таблиц и ¡l( рисунков. Состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований с выводами, обсуждения, общих выводов и практических предложений. Список литературы включает .ISÚ источников, из них £6 отечественных и /03 иностранных авторов.

2. Собственные исследования

2.1. Материалы и методы

Настоящую работу выполнили в лаборатории биохимии и биотехнологии ВИГИС, подсобном хозяйстве "Курилово" и агрофирме "Нива" (бывший совхоз им. Дзержинского).

Исходя из поставленных задач, исследования проводили с тремя широко известными антипаразитарными препаратами ветеринарного назначения: ивомеком ("Merk Sharp & Dohme", США); дуотином ("Merk Sharp & Dohme", США) и фармацином ("Фармбиомед", Россия). Все три композиции представляют собой 1% растворы для подкожного введения на органических растворителях с добавлением полимеров.

Для целого ряда наших исследований необходимо было работать с активным началом вышеуказанных препаратов: ивермектином (ивомек), абамектином (дуотин) и аверсектином С (фармации). Их выделение из соответствующих лекарственных форм проводили по следующей схеме: после разбавления водой экстракция хлороформом, упаривание растворителя; в случае ивермектина и аверсектина С сухой остаток растворяли в метаноле, а при выделении абамектина - в ацетоне с последующим осаждением водой. После фильтрации осадок тщательно высушивали.

2.1.1. Методы анализа авермектинов

Для анализа ивермектина, абамектина и аверсектина (в почве, фекалиях, растительных объектах) разработали метод на основе жидкостной хроматографии высокого давления с двумя вариантами детектирования: УФ- и флуоресцентным.

В качестве аналогов использовали имеющиеся в литературе методы определения авермектинов.

Из целого ряда органических растворителей (хлороформ, метанол, ацетон и другие) для экстракции авермектинов из проб был выбран этилацетат.

Для очистки экстрактов использовали комбинацию двух способов: перераспределение между двумя несмешивающимися жидкостями в системе ацетонитрил - гексан и твердофазную очистку на концентрирующих патронах Диапак-С-16 и Диапак- Амин ("БиоХимМак", Россия). Последний метод особенно эффективен при анализе авермектинов, а отечественные патроны не уступают зарубежным.

Для каждого из трех авермектинов были детально отработаны

условия хроматографирования и качественного анализа при использовании УФ- и флуоресцентного детектора.

2.1.2. Методы и схемы опытов по оценке стабильности ивермектина, абамектина и аверсектина С в почве и фекалиях

2.1.2.1. Первый опыт провели в лабораторных условиях. Приготовили метанольные растворы ивермектина (1083 мкг/мл) и аверсектина С (1000 мкг/мл), а также хлороформный - абамектина (1000 мкг/мл).

В бюксы, емкостью 50 мл, внесли навески просеянной подзолистой почвы массой 2г, а затем по 1 мл приготовленного раствора каждого из авермектинов и тщательно перемешали. С помощью струи холодного воздуха растворитель полностью удаляли из проб.

Далее, пробы для каждого из препаратов в течение 21 суток выдерживали при четырех вариантах условий:

1) влажность 20%, температура +20"С;

2) влажность 50%, температура +20~С;

3) влажность 20%, температура +40ЭС;

4) влажность 50%, температура +40' С.

Для создания влажной среды в бюксы вносили по 2 мл воды до полного влагонасыщения.

Через 3; 7 и 21 сутки после закладки опыта для каждого препарата и варианта экспозиции отбирали по два параллельных бкжса, а пробы лочвы анализировали на содержание ивермектина, абамектина и аверсектина С. Определение микроколичеств препаратов проводили ЖХВД сУФ-детектированием.

2.1.2.2. Следующим этапом работы было изучение процессов деградации и транслокации ивермектина , абамектина и аверсектина С на почвенных колонках. Использовали метод В.А.НаНеу е1 а1. (1989) в нашей модификации.

Готовили этанольные растворы ивермектина и аверсектина С и хлороформный - абамектина с концентрацией 4,15 мг в 1 мл. На навески овечьих фекалий массой 25 г, предварительно растертые в ступке, наносили по 10 мл каждого из авермектинов. С помощью струи холодного воздуха полностью удаляли растворитель, и образец фекалий массой 2 г равномерно наносили на поверхность почвенных колонок. В свою очередь, колонки представляли собой пластиковые сосуды высотой 25 см и диаметром 10 см. Высота почвенного столба равнялась 20 см. Для обеспечения свободного

просачивания воды сквозь почвенный столб в донной части пластиковых сосудов имелись мелкие дренажные отверстия, прикрытые 2-сантиметровым слоем гравия. Поверхность почвы в колонках после нанесения навески фекалий увлажняли 20 мл дистиллированной воды для более полного соприкосновения частиц фекалий и почвы. Для каждого препарата имелись 2 параллельных колонки: их помещали во внешнюю среду. Подобные опыты проводили летом и зимой. На 0-й день (закладка опыта), а также через 7; 14; 21; 28 и 45 суток из каждой колонки брали пробы почвы на глубине 1; 5; 10; 15 и 20 см от поверхности почвенного столба.

Отобранные образцы почвы анализировали разработанным методом анализа на основе ЖХВД с флуоресцентным детектированием.

На протяжении всего опыта в летнее и зимнее время ежедневно фиксировали температуру и влажность воздуха.

2.1.2.3. Провели опыт по изучению разложения ивермектина, абамектина и аверсектина С в фекалиях овец и почве в производственных условиях. Эксперименты поставили в подсобном хозяйстве "Курилово".

С этой целью сформировали 4 группы овец по 2 животных в каждой:

I группа - животных обработали 1% ивомеком, подкожно, в дозе 0,2 мг на кг массы тела.

II группа - животных обработали 1% дуотином, подкожно, в дозе 0,2 мг на кг массы тела.

III группа - животных обработали 1% фармацином, подкожно, в дозе 0,2 мг на кг массы тела.

IV группа - контрольная. Животные препаратов не получали.

V овец трех подопытных групп отбирали пробы фекалий до введения препаратов, а также спустя 1; 5; 14 и 28 суток.

С целью изучения деградации препаратов в фекалиях и почве во внешней среде образцы фекалий, взятые от овец через 5 суток после обработки животных ивомеком, дуотином и фармацином, помещали на поверхность почвы огороженного участка. Через 5; 14; 28; 40 и 60 суток после закладки опыта отбирали пробы поверхностного слоя (смесь фекалий и почвы) и почвы на глубине 5 см. По аналогичной схеме отбирали и помещали на почву фекапии от контрольных овец.

Во всех случаях пробы фекалий и почвы анализировали на содержание ивермектина , абамектина и аверсектина С

разработанным методом на основе ЖХВД с флуоресцентным детектированием.

2.1.3. Постановка опыта по изучению распределения ивермектина, абамектина и аверсектина С в системе "почва-растения",

Подзолистую почву, отобранную из пахотного слоя просеяли через сито, тщательно перемешали и увлажнили.

10 опытных и 2 контрольных вегетационных сосуда заполнили подготовленной почвой примерно по 4 кг з кавдый. До момента посева семян сосуды накрыли полиэтиленовой пленкой.

В качестве тест-растения выбрали пшеницу как одну из культур, обладающих наибольшей поглощающей способностью. Перед посевом сомена замочили и прорастили на фильтровальной бумаге. 8 каждый вегетационный сосуд высевали по 20 пророщенных семян на глубину 1,5 см.

Сразу же после посева по поверхности почвы равномерно распределили фекалии овец (по 2 г) с предварительно нанесенными ивермектином, абамектином и аверсектином С (в каждом случае в отдельности). Концентрация препаратов в фекалиях составила 1,66 мг/г.

На протяжении всего опыта растения регулярно поливали.

Через 7; 21 и 28 суток после закладки опыта для каждого из трех авермектинов отбирали зеленую наземную часть растений, корни, а также почву. Пробы почвы также брали на 0-й день, т.е. сразу же после распределения фекалий по поверхности.

Образцы всех отобранных объектов анализировали на содержание ивермектина, абамектина и аверсектина С разработанным методом на основе ЖХВД с флуоресцентным детектированием.

2.1.4. Методы изучения влияния ивермектина, абамектина и аверсектина С на некоторые биообъекты

2.1.4.1. Острую токсичность ивермектина, аверсектина и абамектина для дождевых червей Ыюос^из са1дто5иэ оценивали по методу, описанному В.А.НаПеу е{ а!.(1939) в нашей модификации.

Ивермектин и аверсектин растворяли в этаноле, а абамектин -в хлороформе и наносили на 10 г кварцевого песка: растворители полностью испаряли и песок тщательно перемешивали с 990 г почвы, включающей 5 г овечьего навоза. Полученную массу переносили в пластмассовые контейнеры и добавляли примерно 200 мл воды.

Ивермектин. аверсектин и абамектин испытывали соответственно в концентрациях: 50, 100, 200 и 1000; 25, 50, 100,200 и 390; 25, 50, 100, 200 и 250 мг/кг почвы.

В опыте имелось три контроля. Первый и второй - на растворители (в почву вносили 10 г песка, на который предварительно наносили этанол и хлороформ без препаратов); третий - был "чистым" контролем, т.е. без растворителей и препаратов.

В каждый опытный и контрольный контейнер вносили по 10 червей.

Контейнеры содержали при 20°С при естественном освещении.

Через 7, 14 и 28 суток регистрировали гибель червей, оценивали их подвижность, реакцию на раздражители, определяли массу червей.

Значение LC50 вычисляли по методу Кербера.

2.1.4.2. На агрофирме "Нива" проведен производственный опыт по оценке влияния ивермектина, абамектина и аверсектина С на копрофагов в навозе крупного рогатого скота.

С этой целью сформировали 4 группы телят по 2 головы в каждой со средней живой массой 150 кг.

I фуппа - животных обработали 1% ивомеком, в терапевтической дозе 1 мл/50 кг массы тела, подкожно;

II группа - животных обработали 1% дуотином, в терапевтической дозе 1 мл/50 кг массы тела, подкожно;

III группа - животных обработали 1% фармацином, в терапевтической дозе 1 мл/50 кг массы тела, подкожно;

IV группа - контрольная, без введения препарата.

До введения препаратов, а также через 1; 6; 14 и 28 суток после обработки животных отбирали пробы фекалий и анализировали разработанным методом на основе ЖХВД с флуоресцентным детектированием на содержание одного из трех изучаемых авермектинов соответственно номеру группы.

Пробы навоза, отобранные через 6 и 14 суток после введения препаратов, поместили на дерновую прослойку в пластиковые тазы. В течение последующих 5 суток проводили дозированную подсадку летающих насекомых на поверхность лепешек, после чего их закрыли плотной капроновой тканью.

В течение последующих трех месяцев проводили сбор коллекций взрослых особей насекомых из каждого таза.

Подсчитывали их количество и дифференцировали по семействам

и родам.

2.1.5. Статистическую обработку данных, полученных во всех видах исследований, проводили по методу Фишера-Стьюдента с использованием { - критерия (Н.А.Плохинский, 1969) и по методу К.Н.МОНег (1960).

2.2.Результаты исследований и обсуждение

2.2.1. Разработка метода определения авермектинов в почве на основе жидкостной хроматографии высокого давления

Анализ авермектинов в объектах окружающей среды ввиду их малых "рабочих" доз и концентраций представляет весьма сложную аналитическую задачу.

Высокая чувствительность (2-4 нг/г) достигается при определении соединений этого класса ЖХВД с флуоресцентным детектированием после проведения соответствующей дериватизации. При этом дериватизации подвергаются только В-компоненты. С учетом подобной характеристики метод прежде всего пригоден для количественного анапиза этих соединений в пробах различного происхождения. Это отвечало целям и задачам наших собственных исследований. Действительно, достоверность получаемых результатов при изучении стабильности, миграции и деградации авермектинов в объектах окружающей среды в конечном итоге определяется порогом чувствительности применяемого метода анализа.

Однако для его постановки требуется редкое оборудование и дорогостоящие дефицитные реактивы, и он выполним далеко не в каждой лаборатории.

Между тем, более доступная ЖХВД с УФ-детектированием хотя и уступает вышеупомянутому методу по чувствительности, может быть пригодней для проведения целого ряда количественных и качественных аналитических исследований по авермектинам. В последнем случае она незаменима.

Имея возможность применить оба метода анапиза, выбор каждого из них основывали в зависимости от конкретных целей и условий того или иного опыта.

Целый ряд стадий имеющихся в литературе методик, которые использовали в качестве основы, мы не только серьезно модифицировали, но и применили в собственном оригинальном варианте.

В итоге, метод основан на извлечении препаратов из анализируемых проб объектов окружающей среды этилацетатом, очистке экстракта в системе ацетонитрил-гексан, а также патронах "Диапак-С-16" и "Диапак-Амин" с последующим анализом жидкостной хроматографией высокого давления (ЖХВД) с УФ- или, после дериватизации, флуоресцентным детектированием. Степень извлечения - 83,3%. Чувствительность метода с УФ-детектированием - 0,5 мг/кг; с флуоресцентным детектированием -0,004 мг/кг.

2.2.2. Изучение деградации ивермектина, абамектина и аверсектина С в почве и фекалиях

Целью исследований, результаты которых представлены в настоящем разделе, явилась сравнительная оценка устойчивости ивермектина, абамектина и аверсектина С в почве и фекалиях.

Основное выделение авермектинов у сельскохозяйственных животных происходит с фекалиями, а значит в экологическом плане именно они представляют основной и реальный источник загрязнения окружающей среды. Если следовать далее, то при выпасе скота первым и наиболее вероятным объектом для проникновения авермектинов является почва. Исходя из этого, изучению устойчивости препаратов в почве и фекалиях мы придавали большое значение. Данному вопросу было посвящено три больших опыта.

2.2.2.1. Изучение стабильности ивермектина, абамектина и аверсектина С в почве в лабораторных условиях

Целью настоящих опытов было получение предварительных данных по стабильности ивермектина, абамектина и аверсектина С в почве в лабораторных условиях при различной температуре и влажности. Для анализа соединений использовали ЖХВД с УФ-детектированием.

Прежде всего следует отметить, что все три препарата интенсивно разлагались в пробах почвы. Так, в течение первых 3 суток после закладки опыта концентрация ивермеюина, абамектина и аверсектина С уменьшилась от 79,2 до 94,5% в зависимости от конкретного соединения и условий проведения опыта. За весь 21-дневный опытный период этот показатель для всех авермектинов практически приближался к 100%.

Температура и влажность были критическими факторами и определяли поведение препаратов в почве. Увеличение температуры от +20° до +40°С, а влажности от 20% до 50%

приводило к более интенсивному разложению изучаемых авермектинов. Причем, в основном влияние этих факторов имело место в первые 3 и уже менее в последующие 7 суток после закладки опыта и практически сглаживалось к его концу. В частности, при +40°С ( и высоком содержании влаги) ивермектин, абамектин и аверсектин С разложились в первые 3 суток соответственно на 88,8; 89,0 и 94,7% против 79,9; 79,2 и 86,1% (р < 0,05) в варианте с относительно сухой почвой и +20°С.

Однако VI при таком интенсивном процессе разложения изучаемые препараты и составляющие их компоненты имели свои особенности. В целом в порядке увеличения скорости деградации препараты можно было расположить следующим образом: на первом - мало различавшиеся ивермектин и абамектин, на втором -аверсектин С.

Скорость разложения фракции В1 в аверсектине С в сухой почве даже при температуре +40°С была примерно одинаковой с абамектином (В,), но при повышении влажности данная

аверсектиновая фракция разлагалась.

Независимо от условий проведения опыта компоненты А в азерсектиче С разлагались значительно быстрее, чем В. Причем в течение первых 3 суток А1а деградировал на 100%, а А2а - на 92.594,9%. При 20% влажности почвы В2а разлагался несколько быстрее, чем В,, причем повышение Г ускоряло этот процесс.

И еще один интересный момент : деградация ивермектина в стерильной почве шла примерно в 2 раза медленнее, что с очевидностью свидетельствует о роли микроорганизмов в этом процессе.

Таким образом, при инкубации ивермектина, абамектина и аверсектина С в образцах почвы в лабораторных условиях при различной температуре и влажности все три препарата разлагаются более чем на 90% в течение 21 суток. Температура и влажность

почвы определяют скорость разложения авермектинов. По интенсивности деградации из первое место выступает аверсектин С, абамектин и ивермектин несколько уступают ему.

2.2.2.2. Изучение процессов деградации и транслокации авермектинов в почве в натурных условиях в летнее и зимнее время

Исследования провели в июне-августе и декабре-январе, т.е. в два сезона года, резко различающихся по своим погодным условиям. Средняя температура летом и зимой в период

постановки опытов находилась в пределах от +15° до +27°С летом, от -22° до -6°С зимой; влажность составила летом 65%, зимой -45%. Подобные показатели характерны для средней полосы России.

Перед анализом полученных результатов необходимо отметить, что изменения концентрации препаратов в поверхностном слое были результатом не только их деградации, но и идущего одновременно процесса миграции в низлежащие слои почвы.

В порядке интенсивности снижения уровня авермектинов в поверхностном слое анализируемые соединения можно расположить следующим образом: аверсектин С - абамектин -ивермектин.

Подобная закономерность имела место как летом, так и зимой. Так, в течение 28 летних суток концентрация аверсектина С, абамектина и ивермекгина снизилась по сравнению с первоначальной соответственно на 82,0; 64,7 и 45,3%, в то время как зимой - на 76,7; 64,8 и 41,2% (р ^ 0,05).

В зимнем опыте имела место несколько замедленная динамика изменения общего уровня препаратов в поверхностном слое по сравнению с летом. Однако эти различия наблюдались в основном в первые 7-14 суток опыта и не были статистически достоверными (р>0,05).

Все три препарата мигрировали с поверхностного слоя на глубину не более, чем 5 см. Однако и в количественном отношении процесс миграции в значительной мере уступал деградации. Так, общий максимальный уровень абамектина в 5-сантиметровом слое зимой и летом составил 14,43 и 17,95%, а соответствующие показатели для аверсектина С и ивермектина равнялись 10,89 и 13,51; 6,66 и 3,87%.

Максимально резкие изменения концентрации всех трех препаратов имели место в поверхностном слое колонок. Учитывая незначительный процент транслокации изучаемых соединений в низлежащие слои почвенной колонки в целом, мы связываем этот факт, главным образом, с более интенсивным воздействием различных физико-химических факторов на поверхность почвы: УФ-свет (фотодеградация), воздействие широкого диапазона суточных температур и т. п.

Представляет большой интерес проанализировать поведение отдельных составляющих компонентов трех авермектинов.

Уровень компонентов В1а и В1в, входящих в состав аверсектина С и абамектина, снижался значительно быстрее, чем соответствующих им восстановленных аналогов Н2В1а и Н2В1в. Например, концентрация В1а абамектина и аверсектина С в поверхностном слое в зимнее и летнее время уменьшилась соответственно на 66,2 и 65,7; 78,6 и 76,2%, в то время как аналогичные показатели для Н,В1а ивермектина составили только 42,4 и 46,8% (р < 0,05). Вероятно, восстановление двойной связи в положении -22=23- молекулы ивермектина приводит к снижению реакционной способности и, как следствие, интенсивности деградации, а также полярных свойств, а значит и мобильности.

Компоненты В1з и Н2В-|а имели тенденцию к более быстрому распаду по сравнению с Вчв и Н2В1в , однако различия не носили статистически значимый характер.

В то же время авермектины В1а (Н2В1в) обладали большей мобильностью по сравнению с В^ (Н2В1а). Так, например, 23,8 и 26,4% от исходной концентрации В,0, входящего в состав абамектина, оказалось на глубине 5 см, против 13,1 и 15,8% для В1а (р < 0,05); эти же показатели для В.в в аверсектине С равнялись 19,71 и 26,6%, в то время как для компонента В,а сни не превышали 10%. Аналогичная закономерность характерна для Н2В1в и Н2В!а: если зимой компонент Н2В1в проник в 5-сантиметровый слой на 12,1%. а летом на 12,32%, то Н2В1а мигрировал с поверхностного слоя не более чем на 7%. Мобильность В1ч может быть сравнима с таковой для В2з, входящего в состав аверсектина С. Так, зимой и летом последний мигрировал соответственно на 22,2 и 24,7%.

Кроме того, обе восстановленные фракции Н2В1э и Н?В1в значительно уступали по своей мобильности фракциям В1а и В1в у абамектина и аверсектина С.

Сравним степень деградации двух одинаковых компонентов В,., и В,3, но входящих в состав авермектина С и абамектина.

В частности, уровень В1а из абамектина зимой и летом снизился соответственно на 66,2 и 65,7%, а входящего в состав аверсектина С уже на 78,6 и 76,2%(р < 0,05). Примерно подобная закономерность характерна и для компонента В1в. Концентрация последнего в абамектине в поверхностном слое зимой и летом снизилась соответственно на 59,3 и 61,8%, а в аверсектине С - на 66,4 и 82,7% (р < 0,05). Налицо влияние фракционного состава препарата на его стабильность в почве.

Через 45 суток после закладки опыта ни один из препаратов не обнаружен как в поверхностном, так и в 5-сантиметровом слое.

Таким образом, детально изучены процессы деградации и миграции аверсактина С, абамектина и ивермектина, а также их отдельных компонентов на почвенных колонках. Основная часть препаратов разлагается в течение 28 суток, через 45 суток ни один из препаратов не обнаружен как в поверхностном , так и в 5-сантиметровом слое. В порядке интенсивности снижения концентрации авермектины можно расположить следующим образом: аверсектин С > абамектин > ивермектин. Все три соединения мигрируют с поверхностного слоя на глубину не более 5 см, что исключает их попадание в грунтовые воды. Отмечены существенные различия в деградации и транслокации отдельных составляющих компонентов препаратов.

2.2.2.3. Изучение стабильности трех авермектинов в почве и фекалиях овец в производственных условиях

Настоящий опыт был завершающим в исследовании стабильности трех авермектинов в почве и фекалиях и был проведен в производственных условиях на овцах.

Начальным моментом исследований было изучение динамики выделения ивермектина, абамектина и аверсектина С с фекалиями у овец после подкожного введения им лекарственных форм (соответственно ивомека, дуотина и фармацина) в терапевтической дозе. Все три препарата обнаруживали в фекалиях овец в течение 14 суток. Максимум выделения приходился на 5 сутки. На данный период времени уровень ивермектина, абамектина и аверсектина С составил соответственно 73,09±16,2; 106,45+24,80 и 63,55+15,10 нг/г.

Пробы фекалий, отобранные через 5 суток после введения препаратов, поместили на огороженный участок, имитируя тем самым загрязнение пастбища.

Все три исследуемых препарата обнаруживали в течение 14 суток после закладки опыта и только в поверхностном слое почвы. Результаты анализа проб почвы на глубине 5 см для всех трех авермектинов оказались отрицательными. Концентрация ивермектина на 14 сутки была наиболее высокой из трех анализируемых препаратов и равнялась 8,36+0,40 нг/г, в то время как уровень абамектина и аверсектина С был практически одинаковым на этот срок и составил соответственно 3,86±0,52 и 4,84+0,38 нг/г (р < 0,05).

Таким образом, после подкожного введения ивомека, дуотина и фармацина овцам препараты обнаруживаются в фекалиях в основном в течение 14 суток. Именно в течение этого периода времени они представляют собой реальный источник загрязнения окружающей среды.

Спустя 28 суток препараты не обнаружили в смешанных пробах почвы и фекалий поверхностного слоя.

Подробный анализ результатов каждого из трех опытов, посвящениых изучению деградации звермектннов представлен в соответствующих разделах. Отметим некоторые общие и существенные моменты.

В частности, при сравнении стабильности трех авермектинов в образцах почвы в лабораторных условиях и на колонках в первом случае можно было отметить более высокую скорость разложения (более 90% в течение 21 суток). На наш взгляд, более динамичный распад в данном случае обусловлен постоянством критических факторов в течение всего опыта: температуры и влажности. Бюксы находились в контролируемых условиях, в то время как колонки - во внешней среде, с резко меняющимися показателями температуры и влажности почвы и воздуха. Естественно, что последний вариант более приближен к реальным условиям.

Однако во многом результаты двух этих опытов совпадали и отражали общие тенденции. В частности, было установлено, что деградация аверсектина С происходила быстрее по сравнению с абамектином и ивермектином. То же самое можно сказать о фракции В-[ в аверсектине С по сравнению с таковой, входящей в состав абамектина. По-видимому, система из 8 авермектиновых компонентов является менее стабильной по сравнению с В, и особенно Н2В1. При аналогичной антипаразитарной активности, а также с учетом более дешевого способа производства (отсутствие очистки от других компонентов или стадии восстановления при получении ивермектина) подобная более высокая экологическая безопасность во внешней среде имеет безусловные преимущества.

Наконец, несколько слов о последнем производственном опыте.

Ввиду изначально очень низких концентраций ивермектина, абамектина и аверсектина С в экскретах овец с последующим "разбавлением" во внешней среде, даже несмотря на использование высокочувствительного метода анализа, мы не ожидали в данном случае получить детальные информативные данные, как, например, в опыте с почвенными колонками. Однако мы получили подтверждение результатам модельных опытов.

Действительно, в поверхностном слое смеси почвы с фекалиями все три препарата обнаруживали в течение 14 летних суток. Причем, динамика снижения концентрации ивермектина была более замедленной по сравнению с абамектином и особенно аверсектином С.

Каков же основной механизм разложения авермектинов в почве? В опыте с почвенными колонками нами отмечен один интересный момент: снижение концентрации всех трех препаратов на поверхности почвенной колонки происходило значительно быстрее по сравнению с 5-сантиметровым слоем.

Химическая природа авермектинов такова, что на поверхностях различного рода (почве, воде, растениях) они подвергаются интенсивной фотодеградации (В.А.На11еу а!., 1989 а; Р.б.ШЫосй е! а1., 1989; 16. МсСоппеП е1 а1., 1989 и другие) с образованием дельта-8,9- изомеров. В более глубоких слоях почвы соединения разлагаются главным образом в результате воздействия аэробных бактерий с образованием целого ряда продуктов, среди которых основными являются 8-а-гидрокси,производные и соответствующие альдегиды (О.Ь.ВиП е1 а1., 1984; РХ.ВиН е{ а!., 1985). В этом, вероятно, и заключается причина различий в динамике распада на поверхности и в 5-сантиметровом слое. Кстати, в лабораторном опыте после стерилизации почвы разложение ивермектина шло примерно в 2 раза медленнее, а по данным Р.6. \iVislocki е1 а1. (1989) деградация этого препарата в стерильной почве вообще не имела места.

2.2.3. Изучение распределения ивермектина, абамектина и аверсектина С в системе "почва - растения"

При попадании фекалий, содержащих микроколичества авермектинов, в почву нельзя исключить вероятность проникновения последних через корни в наземную часть растений. С целью исследовать эту возможность нами были поставлены специальные опыты.

В качестве тест-культуры использовали пшеницу, обладающую большой поглощающей способностью.

При анализе корней, отобранных в три срока вегетации, ивермектин, абамектин и аверсектин С были обнаружены только на 7 сутки после посева семян. Причем, уровень всех трех препаратов был ниже предела чувствительности метода (т.е. < 0,004 мг/кг). Были обнаружены следовые количества всех В-составляющих компонентов: для ивермектина - Н2В1а и Н2В1в; абамектина - В» и В1в и аверсектина С - В1а, В^ и В2а.

Следует отметить, что на данный срок исследований (7суток) уровень препаратов в почве, хотя и был значительно ниже по сравнению с началом опыта, но все-таки оставался еще довольно высоким: для ивермеетина, абамектина и аверсектина С соответственно 1260,0±24,6; 933,3 ±15,4 и 868,0 ± 41,2 нг/г. В связи с этим можно предположить, что присутствие трех авермектинов в корнях пшеницы не было результатом их всасывания, а явилось результатом механического загрязнения микрочастицами почвы, от которых практически невозможно избавиться даже при самой тщательной очистке. Это положение подтверждает тот факт, что в зеленой наземной части растений ивермектин, абамектин и аверсектин С не были обнаружены во все периоды отбора проб, то есть с 7 по 28 сутки. Данные дают основу для важных в экологическом плане выводов. Даже при относительно высоком уровне в почве, авермектины практически не всасываются, т.е. не обладают системным распространением и, как итог, не загрязняют наземную часть растений. При этом исключается дальнейшее распространение препаратов этого ряда по пищевым цепочкам во время выпаса скота на пастбище или при внесении в почву навоза в качестве удобрения.

Сопоставим результаты настоящего опыта с данными, полученными на почвенных колонках (раздел 2.2.2.2). Несмотря на некоторые особенности, ивермектин, абамектин и аверсектин С мигрировали с поверхностного слоя колонок на глубину не более 5 см. При высоком содержании в почве препараты не проникали в растения. Оба этих факта со всей очевидностью свидетельствуют об отсутствии вертикальной миграции как вниз, так и вверх. При интенсивном распаде этих соединений в почве - это, безусловно, положительная характеристика, которая, прежде всего, является результатом высокого сродства к органике, сорбции препаратов на частичках почвы и практически отсутствием растворимости в воде.

Отсюда вытекает еще один важный и интересный вывод. Выше мы уже говорили о том, что распад авермектинов в почве происходит в результате фотодеградации и под действием аэробных бактерий. При слабой способности к миграции основная часть авермектинов после выделения с экскретами из организма животных, по-видимому, в большей степени будет разлагаться по первому механизму, скорость которого значительно выше по сравнению с микробным распадом.

Основной целью описанных в настоящем разделе исследований было изучение распределения авермектинов в системе "почва - растения". Однако представляет интерес

проанализировать поведение изучаемых препаратов в почве, которая в данном случае представляла парниковый вариант с высоким содержанием органических веществ. В течение 28 суток концентрация ивермектина, абамектина и аверсектина С в целом снизилась соответственно на 60,2; 70,0 и 82,5%.

Что касается отдельных составляющих компонентов, то Н2В1а и Н2В1а в ивермектине разлагались примерно одинаково и оба уступали своим невосстановленным аналогам В1в и В^- В целом за 28 суток процент разложения В^ и В1в в аверсектине С был выше по сравнению с этими же фракциями в абамектине. Скорость разложения В2а, входящего в состав аверсектина С, не уступала таковой для В1а.

В цепом, отмеченные в данном опыте наблюдения совладают с приведенными в разделе 2.2.2., несмотря на то, что состав и свойства почвы значительно различались между собой. Это позволяет сделать предположение о том, что целый ряд важных выводов в отношении характерных особенностей поведения ивермектина, абамектина и аверсектина С в почве можно распространить на многие ее типы.

2.2.4. Влияние ивермектина, абамектина и аверсектина С на некоторые биообъекты

Вторая часть нашей работы была посвящена "чистой" экологии. Этот раздел исследований приобретает особую важность, если учесть тот факт, что авермектины способны действовать губительно на многих беспозвоночных в очень маленьких дозах и концентрациях. Как правило, такая высокая биологическая активность сопряжена с возможным риском нежелательного вредного воздействия микроколичеств препаратов на биообъекты окружающей среды, которые не являются мишенью для целенаправленных мероприятий. С учетом их разнообразия, различий в среде обитания и чувствительности к авермектинам эта проблема сама по себе очень широка.

Исходя из масштабов распространения, возможного непосредственного контакта с остаточными количествами авермектинов, а также экологического и хозяйственного значения, для наших собственных исследований мы выбрали два тест-объекта: дождевых червей и копрофагов.

Исследования различались по своей методологической основе, но имели одинаковую цель: установить степень токсичности трех производных на вышеуказанные объекты.

2.2.4.1. Исследование острой токсичности ивермектина, абамектина и аверсектима С для дождевых червей Nïcodrilus calginosus

LC5Q ивермектина, аверсектина С и абамектина соответственно равнялась 503; 185 и 103 мг/кг почвы.

Порог острого действия для этих препаратов, расположенных в той же последовательности, составил соответственно 50; 25 и 10 мг/кг, a LC1Qo ~ соответственно 985; 350 и 235 мг/кг почвы.

Таким образом, s порядке возрастания токсических свойств три тестируемых препарата можно расположить следующим образом: ивермектин, аверсектин С и абамеюгин.

В трех контрольных группах гибели червей не наблюдали.

Уже в первый интервал эксперимента, т.е. спустя 7 суток после применения всех трех препаратов, у червей отмечали угнетение, они были малоподвижны, слабо реагировали на укол иглой. Через 14 и 28 суток после начала опыта вышеописанные признаки токсикоза не только сохранялись, но и нарастали. Имело место снижение массы червей. В частности, при воздействии ивермектина и абамектина она уменьшилась более, чем на 30%, а аверсектикз С - примерно на 40% по сравнению с начальными показателями. В течение всего опытного периода общее состояние, поведение и масса контрольных червей не претерпели изменений.

Однотипные вышеописанные признаки токсикоза для всех трэх производных авермектинов свидетельствуют об их нейротоксическом действии. Хорошо известно, что препараты данного ряда стимулируют пресинаптическую секрецию нейромедиатора торможения - 7-аминомасляной кислоты, что в конечном итоге приводит к нарушению нейромышечной передачи.

Дождевые черви, несомненно, входят в обширный круг беспозвоночных, чувствительных к воздействию авермектинов. Установленное нами значение LC50 ивермектина (503 мг/кг почвы) для дождевых червей Nicodrilus calginosus несколько выше, чем таковое для Elsenia foetida - 315 мг/кг почвы (B.A.Halley et al.. 1989 в), что, по-видимому, является следствием более высокой чувствительности последних.

В наших исследованиях выявлена четкая зависимость токсического действия авермектинов для дождевых червей от химического строения первых.

В частности, абамектин, представляющий собой смесь В1а и В1в, наиболее токсичен. Восстановление этих фракций (Н2В{а и Н2В1в ), т.е. получение ивермектина, приводит к значительному

снижению токсичности для данного вида организмов. Несколько уступает абамектину по токсичности аверсектин, состоящий из 6 природных фракций:А1а, А^, В1а, В2а, В1в, В2в.

В данном же случае причиной снижения токсичности, по-видимому, является меньшее содержание наиболее активных фракций В1а и В1в .

Однако насколько действительно авермектины представляют опасность для дождевых червей в реальных условиях? При попадании фекалий овец в почву, даже на момент максимального выделения из организма, концентрация ивермектина, абамектина и аверсектина С соответственно составляет 0,073; 0,106 и 0,063 мг/кг, затем она динамично снижается. В навозе крупного рогатого скота уровень ивермектина, абамектина и аверсектина С через 6 суток после введения их лекарственных форм в терапевтической дозе равняется соответственно 0,207; 0,110 и 0,259 мг/кг. Во всех случаях реальная концентрация препаратов на 2-3 порядка ниже порога острого действия, что практически исключает возможность проявления отрицательного действия. Не случайно K.Wall, L.Strong (1987) не установили снижения количества и времени появления дождевых червей в навозе бычков, которым был введен ивермектин в терапевтической дозе. Аналогичный вывод сделал ФАВолков (1996) в отношении дождевых червей Eisenia foetida, L.rubellus, E.rosea.

Следует также отметить еще один факт. После выделения из организма животных по мере распада неизмененных молекул авермектинов во внешней среде начинает возрастать концентрация продуктов их деградации, которые в 10-160 раз менее токсичны по сравнению с исходными соединениями (P.G.Wislocki et al., 1989).

2.2.4.2. Оценка влияния ивермектина, абамектина и аверсектина С на копрофильных мух.

Еще одним интересным фрагментом наших исследований было изучение влияния трех авермектинов на развитие копрофильных мух в навозе крупного рогатого скота после однократного подкожного введения телятам соответствующих лекарственных форм в терапевтической дозе - 0,2 мг/кг.

Выбор срока отбора навозных лепешек для вышеуказанных исследований основывался на данных по выделению препаратов у телят после обработки. Динамика выделения ивермектина, абамектина и аверсектина С довольно сходна и имеет примерно одинаковые закономерности. Максимальная концентрация В, в фекалиях установлена через 6 суток после введения препаратов и для ивермектина, абамектина и аверсектина С соответственно

составила 207,20; 110,18 и 259,25 нг/г. Через 14 суток во всех случаях мы обнаружили уже только следы препаратов.

Для оценки влияния трех авермектинов на развитие мух-копрофагов отобрали образцы навозных лепешек через 6 и 14 суток после введения препаратов.

Все три соединения резко уменьшали общее количество имаго ко профильных мух. Естественно, что для 6-суточных проб с высоким содержанием микроколичеств авермектинов эта тенденция бмлз более выражена. Так. по данным на этст срок общее количество насекомых после введения ивермектина, абамектина и аверсектина С уменьшилось по сравнению с контролем на 74,72; 71,88 и 66,75%. Через 14 суток эти показатели для ивермектина, абамектина и аверсектина С составили уже соответственно 65,51; 57,72 и 25,09%. Помимо снижения общего количества имаго копрофильных мух, мы отметили сдвиг сроков их развития примерно на 1-2 недели.

Таким образом, по ингибирующей активности, в порядке убывания, препараты можно расположить следующим образом: ивермектин, абэмектин и аверсектин С.

Большой интерес представляют данные по индивидуальной чувствительности к изучаемым авермектинам у копрофагоз, относящимся к различным родам и семействам.

В контрольной коллекции 70,5% представляли собой род Соргоюа зрр., 23% - род 1.ер1осега врр. и 5,6% - представители семейства Зерэ^ае.

Наиболее чувствительными ко всем трем препаратам были копрофильные мухи семейства вер-з^ае: авермектины приводили почти к 100% угнетению их развития.

Мухи, относящиеся к родам Соргоюа зрр. и 1ер{осега зрр, в целом были более резистентны к воздействию авермектинов, однако они в большей мере различались в отношении того или иного препарата. В частности, ивермектин практически одинаково зоздействовал на развитие мух-копрофагов Соргоюа эрр. и 1_ерюсега врр. Чувствительность копрофильных мух Соргоюа зрр. к ивермектину и абамектину была примерно одинаковой, в то время как к аверсектину С она была значительно ниже. В навозных лепешках, отобранных через 6 и 14 суток после введения препаратов телятам, развитие мух Соргоюа зрр. ингибировалось соответственно на 77,20 и 87,50%) - для абамектина, против 57,29 и 14,89% - для аверсектина С. Именно за счет того, что мухи Соргоюа эрр. обладали наиболее низкой чувствительностью к аверсектину С и одновременно являлись наиболее многочисленной группой

насекомых в данном опыте, ингибирующее действие аверсектина С в целом было наименьшим из трех изучаемых авермектинов. В отношении 1_ерК)сега врр. наименее токсичным был абамектин.

Таким образом, мы установили значительное ингибирующее действие ивермектина, абамектина и аверсектина С на личиночные стадии копрофильных мух родов Сорго1са врр., 1_ориэсега Брр. и сем. Sepsidae. Препараты различались по степени этого эффекта. В целом наибольшей активностью обладал ивермектин, в то время как аверсектин С - наименьшей. Подобные различия могут быть следствием,по крайней мере,трех факторов: 1) при близкой общей концентрации трех препаратов наиболее токсичные компоненты В1а и В1в после введения фармацина находятся в меньшем количестве, поскольку их содержание в самом аверсектине С не превышает 40%; 2) наличие более высокой чувствительности у копрофагов к НгВ} компонентам и 3) более интенсивный распад аверсектина С и в меньшей степени абамектина во внешней среде, о чем указывают результаты наших собственных исследований.

Полученные нами данные, безусловно, следует учитывать при планировании схем, доз и кратностей обработки скота препаратами на основе авермектинов. Установленные различия в ингибирующей активности ивомека, дуотина и фармацина могут повлиять на их выбор. Однако в целом отрицательное воздействие соединений этого ряда на копробионтов не должно рассматриваться в качестве препятствия для применения. Для этого вывода имеется основа. Прежде всего, необходимо учитывать особенности поведения авермектинов во внешней среде: быстрый распад и отсутствие тенденции к накоплению. Следует также иметь ввиду, что наиболее интенсивное угнетение развития личинок в навозе крупного рогатого скота имеет место в основном в начальные сроки после введения препаратов.

К сказанному следует добавить мнение других авторов: 1) авермектинами обрабатывают не всех животных одновременно и 2) постоянно имеет место интенсивная миграция насекомых (Р.АЯопсаШ, 1989).

Заключая настоящий раздел, мы считаем, что многие рассуждения и выводы относительно реальной доступности авермектинов, а значит, и возможности проявления токсического действия в той или иной степени справедливы для многих биообъектов, а не только изученных нами.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Разработан метод анализа микроколичеств ивермектина, абамектина и аверсектина С в почве, фекалиях и растениях на основе жидкостной хроматографии высокого давления. Препарат экстрагируют из проб зтипацетатом; зкстраеты очищают в системе ацетонитрил-гексан и на концентрирующих патронах Диапак-С-16 и Диапак-Амин. После разделения на аналитических колонках Силасорб С1г и Диасорб-130-C анализ проводят двояко: с УФ- или, после дериважзации, флуоресцентным детектированием. Полнота извлечения - 83,3%; чувствительность с УФ- и флуоресцентным детектированием соответственно 0,5 и 0,004 мг/кг.

2. При инкубации ивермектина, абамектина и аверсектина С в образцах подзолистой почвы в лабораторных условиях при различной температуре и влажности все три препарата разлагались более, чем на 90% в течение 21 суток. Температура, влажность, микроорганизмы были критическими факторами и определяли скорость разложения авермектинов. По интенсивности деградации на первое место выступает аверсектин С, абамектин и изермектин уступают ему. Компоненты А в авэрсектине С разлагались быстрее, чем В.

3. Основная часть аверсектина С, абамектина и ивермектина разлагалась в течение 28 суток на почвенных колонках в летних и зимних условиях; через 45 суток ни один из препаратов не обнаружен. Аверсектин С разлагался быстрее по сравнению с абамектинсм и ивермектином.

4. Отмечены существенные различия в скорости деградации отдельных составляющих компонентов изучаемых препаратов. Восстановление двойной связи в положении - 22=23 - приводит к повышению стабильности компонентов H2Bia и H2Bi по сравнению с Bia и В1в. Входящие в состав аверсектина С и абамектина авермектины В1а и Bi3 в первом случае деградировали более интенсивно.

5. В вегетационных сосудах, а богатой органическими веществами почве, в течение 28 суток концентрация ивермектина. абамектина и аверсектина С снизилась соответственно на 60,2; 70,0 и 82,5%.

Компоненты Н2В1а и Н2В1в в ивермектине разлагались примерно одинаково и оба уступали своим невосстановленным аналогам Bia и В1в. В течение 28 суток процент разложения В1а и Bia в аверсектине С был выше по сравнению с этими же фракциями в

абамектине. Скорость разложения В2а, входящего в состав аверсектина с, не уступала таковой для В1а.

6. Все три препарата мигрировали, с поверхностного слоя на глубину не более 5 см, зимой несколько медленнее, нем летом. Компоненты Н2В1в и В1в по своей мобильности превосходят Н2В1а и В1а; в количественном отношении процесс миграции В2а в аверсектине С сравним с таковым для В1в.

Опасность загрязнения грунтовых вод практически исключается.

7. После подкожного введения ивомека, дуотина и фармацина овцам в дозе 0,2 мг/кг препараты обнаруживают в фекалиях в течение 14 суток. В течение 2 недель после попадания в почву уровень препаратов в поверхностном слое постепенно снижается и не превышает 10 нг/г; наиболее высокий - отмечен для ивермектина. Спустя 28 суток препараты не обнаруживают в смешанных пробах почвы и фекалий.

8. При выращивании пшеницы на почве, содержащей микроколичества ивермектина, абамектина и аверсектина С, препараты обнаружены только в корневой системе на уровне следовых количеств (< 0,004 мг/кг) на 7 сутки опыта. В зеленой массе растений авермектины не обнаружили, что указывает на отсутствие их системного распространения.

9. LC5o ивермектина, аверсектина С и абамектина для дождевых червей Nicodrilus caiginosus соответственно равняется 503; 185 и 103 мг/кг почвы.

При воздействии авермектинов у дождевых червей отмечали угнетение, резкое снижение подвижности и реактивности, уменьшение массы тела. Признаки токсикоза свидетельствуют об их нейротоксическом действии.

10. Ивермектин, абамекгин и аверсектин С оказывали ингибирующее действие на развитие мух-копрофагов рода Coproica spp., Leptocera spp. и сем. Sepsidae в навозе крупного рогатого скота. Через 6 суток после введения ивермектина, абамектина и аверсектина С общее количество развившихся имаго копрофильных мух уменьшилось соответственно на 74,72; 71,88 и 66,75%; через 14 суток аналогичные показатели составили 65,51; 57,72 и 25,09%.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Методы анализа ивермектина, абамектина и аверсектина С можно использовать в ветеринарных и санитарно-гигиенических лабораториях для определения микроколичеств вышеуказанных

препаратов (Утверждены Ученым советом ВИГИС мая 1997

года).

2. Данные по влиянию авермектинов на объекты окружающей

среды рекомендуем использовать при составлении нормативных документов, регламентирующих их применение в сельском

хозяйстве (наставлений, методических указаний, рекомендаций и т.п.).

3. Полученные данные по оценке влияния трех препаратов на

основе аперглектиноБ рекомендуется использовать в лекциях по вопросам ветеринарии и экологии.

1.Русаков C.B. Исследование острой токсичности ивермектина, аверсектина и абамектина для дождевых червей Nicodrilus ca!ginosus//5ion. ВИГИС - 1996,- Вып.56 - С.54-57.

2.Русаков C.B. Методические указания по определению ивермектина. абамектина и аверсекгина С в почве жидкостной хроматографией высокого давления (ЖХВД) с УФ-детектнрованием/'/Бюл. ВИГИС - 1996.-Вып.56,- С.58-61.

СПИСОК РАБОТ, опубликованных по теме диссертации

7